專利名稱：使用肉毒毒素的骨縫線給藥技術(shù)的制作方法
使用肉毒毒素的骨縫線給藥技術(shù)交叉引用本申請要求享有2008年4月3日提交的序列號為12/062，372的美國非臨時申請 的優(yōu)先權(quán)，該專利申請以引用方式全文納入本說明書。
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及一種利用患者特異性界標(biāo)(landmark)來治療頭部疼痛如頭痛的新方 法。一方面，本發(fā)明涉及向遭受頭痛的患者給予梭菌毒素，如肉毒神經(jīng)毒素，其中肉毒毒素 的給藥部位基于患者頭骨至少一條骨縫線且在其附近。各種頭部疼痛病癥一如頭痛一的病理生理學(xué)在不斷地被探究著。頭痛是頭部 的疼痛，部位如頭皮、面部、前額或頸部，并且可被分作原發(fā)性頭痛和繼發(fā)性頭痛。原發(fā)性頭 痛是一種非其他病癥引起的頭痛。相反，繼發(fā)性頭痛則是由于一種疾病或病狀，如不健康、 感染、損傷、中風(fēng)或其他異常引起。因此，繼發(fā)性頭痛與其根源性原發(fā)障礙有關(guān)，該根源性原 發(fā)障礙會引起頭痛作為其癥狀。頭痛又被分類為各種頭痛類型，例如，緊張性頭痛(tension headache)、頸源 性頭痛(cervicogenic headache)、竇性頭痛(sinus headache)、叢集性頭痛(cluster headache)、1 頭 _ (migraine headache)、f曼 t生τ t生頭 _ (chronic progressive headache) ^0 (hormone headache)。緊張性頭痛是常見的一類原發(fā)性頭痛。緊張性頭痛的患者經(jīng)常聲稱在前額或頭頸 后部或者在這兩個區(qū)域都感到疼痛。他們將其疼痛描述為緊繃的感覺，好像他們的頭被鉗 住或好像有人沿著他們頭的外圍緊勒一條帶子。抱怨緊張性頭痛的人一般在肩部或頸部感 到疼痛。有些人會出現(xiàn)混合性頭痛綜合癥，也就是緊張性頭痛和偏頭痛的結(jié)合。有些頭痛是繼發(fā)性頭痛。例如，頸源性頭痛是由頸部問題(例如由長時間的單一 姿勢、關(guān)節(jié)炎、上部脊椎損傷或頸椎疾病引起的頸部肌肉的異常)引起的頭痛。通常情況 下，頸源性頭痛的患者在χ-射線或磁共振頸部成像檢查中未顯示出明顯病理性結(jié)果，這使 得他們疼痛的源頭或原因變得更不清楚。有人設(shè)想該疼痛可能是來自于頸椎上部的各種結(jié) 構(gòu)。也有理論認(rèn)為，疼痛的產(chǎn)生——無論是原發(fā)性還是繼發(fā)性——可能與頸部肌肉有關(guān)。在 具體的病例中，疼痛可能被報(bào)道為單側(cè)的，并可能伴隨著頸部活動范圍受限。頸源性頭痛的 一個顯著標(biāo)志是這種頭痛可由于對枕骨部(頭的后部)肌肉或頸部進(jìn)行觸診或?qū)ζ涫憾?引發(fā)。因此，在一些情形中，特定的頸部運(yùn)動或?qū)㈩^置于某個位置能促使頸源性頭痛發(fā)生。竇性頭痛引起頭和面部前面疼痛，它是由位于臉頰、鼻和眼后部的各竇道的炎癥 引起的。與竇性頭痛相關(guān)的疼痛往往在患者向前彎曲(也就是，直立時面向地板運(yùn)動)時 以及從睡眠中醒來時變得嚴(yán)重。一般在頭面部疼痛同時還報(bào)告有后鼻滴流、喉嚨痛和流涕。慢性進(jìn)行性頭痛(也稱作牽引性或炎癥性頭痛)是隨時間日益嚴(yán)重和頻繁發(fā)作的 頭痛。作為最不尋常的頭痛類型中的一種，慢性進(jìn)行性頭痛被認(rèn)為是腦或頭骨的不明疾病 或障礙導(dǎo)致的結(jié)果。激素頭痛是女性特有的與月經(jīng)期、孕期和絕經(jīng)期激素水平改變有關(guān)的頭痛。此外，對一些女性而言，由于使用避孕藥或注射合成孕酮而引起的化學(xué)誘導(dǎo)的激素水平改變也能 引發(fā)頭痛。叢集性頭痛是一種影響頭部一側(cè)(單側(cè))并且還可能涉及眼睛流淚和鼻塞的頭 痛。叢集性頭痛會在幾個星期內(nèi)每天約同一時間反復(fù)發(fā)作，然后不再出現(xiàn)。有假設(shè)稱，叢集 性頭痛可能與身體組織突然釋放組胺或5-羥色胺有關(guān)。其癥狀可包括眼睛下方或周圍腫脹--通常發(fā)生在頭痛側(cè)，伴有過量的淚水以及頭痛側(cè)的眼睛發(fā)紅。叢集性頭痛患者也可出現(xiàn)鼻漏或鼻充血(通常只發(fā)生于與頭痛側(cè)相同的鼻子一側(cè))。叢集性頭痛的疼痛被描 述為特征性地出現(xiàn)在頭一側(cè)的穩(wěn)定、劇烈或灼燒樣疼痛，這種疼痛發(fā)作之后很快惡化，在10 分鐘之內(nèi)達(dá)到頂峰并最長持續(xù)約2小時。偏頭痛經(jīng)常伴隨頭部某一區(qū)域的劇烈的脈動性或搏動性疼痛。有些人的偏頭痛伴 隨對光和聲音極度敏感、惡心和嘔吐。對特定的患者，偏頭痛的發(fā)作可預(yù)知，因?yàn)槠^痛發(fā) 生之前有些“預(yù)兆”，確切地說是閃光似的視覺干擾、手臂或腿有麻刺感或暫時失明。偏頭痛 會極其痛苦，可能使患者在幾小時甚至幾天內(nèi)都無法從事正常活動。偏頭痛可分為慢性或 陣發(fā)性偏頭痛。慢性偏頭痛患者在超過3個月的時間內(nèi)每月遭受15天或者更多天的偏頭 痛。陣發(fā)性偏頭痛患者每月偏頭痛少于15天。在某些病例中，陣發(fā)性偏頭痛發(fā)生頻率增至 每天或幾近每天，但常常沒有偏頭痛的常見特征——如惡心或?qū)饷舾小纱诵纬杀环Q 為轉(zhuǎn)換型偏頭痛或演化型偏頭痛的偏頭痛。偏頭痛的治療可包括使用抗抑郁藥、抗癲癇發(fā) 作藥物或心血管藥物，但使用這些治療方法絲毫不能夠確保患者完全康復(fù)。不同的誘發(fā)因 素都可引起偏頭痛的發(fā)作，這取決于不同的患者。示例性的誘發(fā)因素包括缺乏食物或睡眠、 暴露于光下或(女性)激素失調(diào)。已知焦慮、壓力或壓力后的放松，天氣、季節(jié)、海拔、氣壓 或時區(qū)(時差)變化都能引發(fā)偏頭痛。在很多情況下，在治療偏頭痛或叢集性頭痛時使用曲坦類藥物(基于色胺的 藥)作為中斷病程的藥物，也就是說，一旦患者感到頭痛將要來臨，立刻給予患者曲坦類藥 物。曲坦類藥物盡管在治療特定的個體頭痛發(fā)作時有效，但其既不能預(yù)防也不能治愈頭 痛。常用于處方的曲坦類藥物包括舒馬曲坦(sumatriptan (IMITREX，IMIGRAN))、那拉曲坦 (naratriptan(AMERGE, NARAMIG))和佐米曲坦(zolmitriptan(ZOMIG))。還公開有其他治療頭痛的方法，例如，利用梭菌毒素。當(dāng)前肉毒毒素在偏頭痛治療 中的使用涉及對面部和頭部淺表肌肉和皮下組織的注射。梭菌屬根據(jù)形態(tài)學(xué)和功能分為127以上個種。肉毒桿菌(Clostridium botulinum)是一種革蘭氏陽性厭氧細(xì)菌，它能產(chǎn)生一種強(qiáng)效多肽神經(jīng)毒素——肉毒毒素， 該毒素在人和動物中可導(dǎo)致一種神經(jīng)性麻痹疾病，該疾病被稱為肉毒中毒。肉毒桿菌的孢 子存在于土壤中，并且可生長于家庭式罐頭工廠未嚴(yán)格消毒并密封的食物容器中，這是許 多肉毒中毒病例的原因。肉毒中毒作用一般在食用了被肉毒桿菌培養(yǎng)物或孢子感染的食物 后18到36小時表現(xiàn)出來。肉毒毒素似乎可以不衰減地穿過腸被覆層并且攻擊周圍運(yùn)動神 經(jīng)元。肉毒毒素中毒癥狀可由行走、吞咽和說話困難一直發(fā)展到呼吸肌麻痹和死亡。小鼠的LD5tl為約50皮克市售的A型肉毒毒素(一種純化的神經(jīng)毒素復(fù)合物，可購 自加利福尼亞州歐文市的阿勒根公司，商標(biāo)為BOTOX. ,規(guī)格是100單位小瓶)(也就是，1 單位)。1單位BOTOX 包含約50皮克(約56埃摩爾)的A型肉毒毒素復(fù)合物。值得注意 的是，以摩爾計(jì)，A型肉毒毒素的致死性為白喉的致死性的約18億倍，氰化鈉的致死性的約6億倍，眼鏡蛇毒的致死性的約3000萬倍，霍亂的致死性的約1200萬倍(Singh，Critical Aspects of Bacteria/Protein Toxins,pages 63-84(chapter 4)of Natural Toxins II, edited by B. R. Singh et al. ,Plenum Press,New York(1976)(其中所稱的0. 3ng的A型肉 毒毒素LD5tl等同于1單位被修正，因?yàn)槭聦?shí)上約0. 05ng的BOTOX 等同于1單位))。1單 位(U)肉毒毒素被定義為通過腹膜內(nèi)途徑注射至重量為18到20克/每只的Swiss Webster 雌鼠后得到的LD5(i。已表征了 7種免疫學(xué)上不同的肉毒神經(jīng)毒素，分別為肉毒神經(jīng)毒素血清型A、B、 C1, D、Ε、F和G，每種均可以通過用類型特異性抗體進(jìn)行中和來識別。肉毒神經(jīng)毒素的不同 血清型在它們所侵染的不同動物種類中，引起的麻痹的嚴(yán)重程度和持續(xù)時間不同。例如，通 過測量大鼠的麻痹率，測得A型肉毒毒素比B型肉毒毒素的效力強(qiáng)500倍。此外，測得B型 肉毒毒素在劑量為480U/kg時對靈長類無毒，該劑量是靈長類的A型肉毒毒素LD5tl的12倍 (Moyer E et al. ， Botulinum Toxin Type 8 !Experimental and Clinical Experience, beginning chapter 6，pages 71-85 of" Therapy With Botulinum Toxin, 〃 edited by Jankovic, J. et al. (1994)，Marcel Dekker，Inc) 0在本領(lǐng)域中已知可按如下劑量安全高 效地向人給予B型肉毒毒素15000單位或更多，甚至最高達(dá)25000單位且最長至56個月 重復(fù)給藥(Kumar R and Seeberger LC, “ Long-term safety, efficacy, and dosing of botulinum toxin type B(MY0BL0C ) in cervical dystonia(CD) and other movement disorders" , Mov Disord 2002 ; 17 (Suppl 5) :S292_S293)。肉毒毒素似乎能以高親和力 與膽堿能運(yùn)動神經(jīng)元結(jié)合，被易位進(jìn)入神經(jīng)元并阻斷乙酰膽堿的釋放。額外的攝取除通過 吞噬作用和胞飲作用發(fā)生外還可通過低親和力受體進(jìn)行。不考慮血清型，毒素中毒的分子機(jī)制看起來是相似的，涉及至少3個步驟或階段。 該過程的第一步中，所述毒素通過重鏈(H鏈)和細(xì)胞表面受體間的特異相互作用與靶神經(jīng) 元的突觸前膜結(jié)合；每種肉毒毒素類型和破傷風(fēng)毒素的細(xì)胞表面受體被認(rèn)為是不同的。H 鏈的羧基端區(qū)段(He)似乎對將毒素靶向至細(xì)胞表面很重要。在第二步中，所述毒素穿越中 毒細(xì)胞的質(zhì)膜。所述毒素首先通過受體介導(dǎo)的胞吞作用被細(xì)胞吞噬，然后形成包含所述毒 素的內(nèi)體。所述毒素隨后離開內(nèi)體進(jìn)入細(xì)胞的胞質(zhì)中。這一步被認(rèn)為是由H鏈的氨基端區(qū) 段(Hn)介導(dǎo)的，H1^l發(fā)毒素響應(yīng)于5. 5或更低的pH發(fā)生構(gòu)象變化。已知內(nèi)體具有能夠降低 內(nèi)體內(nèi)PH的質(zhì)子泵。構(gòu)象變化使毒素的疏水殘基暴露，這使得毒素可將自身嵌入內(nèi)體膜。 所述毒素(或至少是輕鏈)接著易位穿過內(nèi)體膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。所述肉毒毒素活性機(jī)制的最后一個步驟似乎涉及連接重鏈(H鏈)和輕鏈(L鏈) 的二硫鍵的還原。肉毒毒素和破傷風(fēng)毒素的全部毒性包含在全毒素的L鏈中；L鏈?zhǔn)且环N鋅 (Zn2+)內(nèi)肽酶，它能選擇性地裂解對于識別含有神經(jīng)遞質(zhì)的囊泡、將該囊泡錨定(docking) 于質(zhì)膜的細(xì)胞質(zhì)一面、以及囊泡與細(xì)胞質(zhì)膜的融合而言所必需的蛋白質(zhì)。破傷風(fēng)神經(jīng)毒素、 B型、D型、F型和G型肉毒毒素可導(dǎo)致一種突觸小體膜蛋白即突觸小泡蛋白(也稱作囊泡 相關(guān)膜蛋白(VAMP)))的降解。大部分存在于突觸囊泡的細(xì)胞質(zhì)側(cè)表面的VAMP都會由于如 上述任何一種裂解事件而被移除。肉毒毒素血清型A型和E型可裂解SNAP-25。最初認(rèn)為 肉毒毒素血清型C1裂解突觸融合蛋白，但后來發(fā)現(xiàn)它裂解突觸融合蛋白和SNAP-25。每種 肉毒毒素特異地切割不同的鍵；但除了 B型肉毒毒素(和破傷風(fēng)毒素)，它們切割的是相同 的鍵。這些裂解作用中的每一種都能阻斷囊泡-膜錨定，從而阻止囊泡內(nèi)容物出胞。
肉毒毒素已經(jīng)在臨床上用于治療以骨骼肌活動亢進(jìn)(也就是運(yùn)動失調(diào))為特征 的神經(jīng)肌肉障礙。在大約20年前，1989年時，美國食品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)了一種A型 肉毒毒素復(fù)合物用于治療瞼痙攣(bl印harospasm)、斜視(strabismus)和偏側(cè)面肌痙攣 (hemifacial spasm)。隨后FDA還批準(zhǔn)了一種A型肉毒毒素用于治療頸肌張力障礙和眉間 皺紋，一種B型肉毒毒素用于治療頸肌張力障礙。與A型肉毒毒素相比，非A型肉毒毒素血 清型似乎效能更低和/或活性持續(xù)時間更短。周圍肌內(nèi)注射A型肉毒毒素的臨床效果一般 在注射1星期內(nèi)顯現(xiàn)。單次肌內(nèi)注射A型肉毒毒素所達(dá)到的癥狀減輕的一般持續(xù)時間為平 均約3個月，但也有報(bào)道稱有顯著更長持續(xù)時間的治療活性。盡管所有的肉毒毒素血清型都能似乎抑制神經(jīng)肌肉接頭處的神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿 的釋放，但它們是通過影響不同的神經(jīng)分泌蛋白和/或在不同的位點(diǎn)裂解這些蛋白起作用 的。例如，A型和E型肉毒毒素都裂解2 道爾頓(kD)的突觸小體相關(guān)蛋白(SNAP-25)，但 是它們靶向于該蛋白內(nèi)的不同氨基酸序列。B、D、F和G型肉毒毒素都能作用于囊泡相關(guān)蛋 白(VAMP，也稱作突觸小泡蛋白)，但每種血清型在不同的位點(diǎn)裂解所述蛋白質(zhì)。最后，(；型 肉毒毒素已被證明既能裂解SNAP-25又能裂解突觸融合蛋白。作用機(jī)制的這些不同可能影 響各種肉毒毒素血清型的相對效能和/或作用時長。很明顯，肉毒毒素的酶底物可存在于 多種不同細(xì)胞類型中。參見,例如Biochem J 1 ；339(pt 1) 159-65. 1999，和 MovDisord， 10 (3) 376 1995 (胰腺胰島B細(xì)胞至少包含SNAP-25和突觸小泡蛋白)。對所有七種已知的肉毒毒素血清型而言，肉毒毒素蛋白質(zhì)分子的分子量為約 150kD。值得注意的是，肉毒毒素是由梭菌以復(fù)合物形式釋放，該復(fù)合物包含所述150kD肉 毒毒素蛋白質(zhì)分子和相關(guān)非毒素蛋白。因此，由梭菌產(chǎn)生的A型肉毒毒素復(fù)合物可以是 900kD、500kD和300kD的形式。B型和C1型肉毒毒素似乎只以700kD或500kD復(fù)合物的形 式產(chǎn)生。D型肉毒毒素以300kD和500kD兩種復(fù)合物的形式產(chǎn)生。最后，E型和F型肉毒毒 素只以約300kD復(fù)合物的形式產(chǎn)生。所述復(fù)合物(即分子量大于約150kD)被認(rèn)為包含非毒 素的血凝素蛋白和非毒素且無毒性的非血凝素蛋白。這兩種非毒素蛋白(連同肉毒毒素分 子一起組成相應(yīng)的神經(jīng)毒素復(fù)合物)的作用可能是提供抵御肉毒毒素分子變性的穩(wěn)定性， 并在毒素被攝取后抵御消化酸。此外，大的(分子量大于150kD)肉毒毒素復(fù)合物可能導(dǎo)致 肉毒毒素以較低擴(kuò)散速率離開肉毒毒素復(fù)合物的肌內(nèi)注射位點(diǎn)。體外研究表明肉毒毒素抑制鉀陽離子誘導(dǎo)的乙酰膽堿和去甲腎上腺素從腦干組 織的原代細(xì)胞培養(yǎng)物中的釋放。此外，已有報(bào)道稱肉毒毒素抑制甘氨酸和谷氨酸從脊髓 神經(jīng)元的原代培養(yǎng)物中誘發(fā)性釋放，在腦突觸小體制備物中肉毒毒素抑制乙酰膽堿、多巴 胺、去甲腎上腺素中的每種神經(jīng)遞質(zhì)釋放(Habermann E.，et al.，Tetanus Toxin and Botulinum A and C Neurotoxins Inhibit Noradrenaline Release From Cultured Mouse Brain J Neurochem 51(2) ；522-527 :1988))、CGRP、P 物質(zhì)和谷氨酸(Sanchez-Prieto， J. , et al. , Botulinum Toxin A Blocks Glutamate Exocytosis From Guinea Pig Cerebral Cortical Synaptosomes, Eur J. Biochem 165 ;675_681 :1897)。因此，當(dāng)使用 適當(dāng)濃度時，肉毒毒素能夠阻斷大部分神經(jīng)遞質(zhì)的刺激誘發(fā)性釋放。參見，例如=Pearce, L. B.，Pharmacologic Ch aracterization of Botulinum Toxin For Basic Science and Medicine，Toxicon 35(9) ；1 373-1 412 at 1393 ；Bigalke H.，et al.，Botulinum A Neurotoxin Inhibits Non-Cholinergic Synaptic Transmission in Mouse Spinal CordNeurons in Culture，Brain Research 360 ；318—324 :1985 ；Habermann Ε.，Inhibition by Tetanus and Botulinum A Toxin of the release of[3H] Noradrenaline and [3H] GABA From Rat Brain Homogenate, Experientia 44 ；224-226 :1988, Bigalke H. ， et al. ， Tetanus Toxin and Botulinum A Toxin Inhibit Release and Uptake of Various Transmitters，as Studied with Particulate Preparations From Rat Brain and Spinal Cord，Naunyn-Schmiedeberg' s Arch Pharmacol 31 6 ；244-251 :1981,以及；Jankovic J. et al.，Therapy With Botulinum Toxin, Marcel Dekker, Inc.，(1994)，page 5。A型肉毒毒素可經(jīng)在發(fā)酵罐中建立并培養(yǎng)肉毒桿菌培養(yǎng)物、然后依照已知方法收 集并純化發(fā)酵混合物而得到。所有的肉毒毒素血清型最初合成得到的形式都是無活性單鏈 蛋白質(zhì)，所述無活性單鏈蛋白質(zhì)必須經(jīng)蛋白酶作用被切割或形成缺口從而變?yōu)榫哂猩窠?jīng)活 性。能制備A型和G型肉毒毒素的菌株具有內(nèi)源蛋白酶，因此血清型A和G可從細(xì)菌培養(yǎng) 物中主要以活性形式回收。相反，肉毒毒素血清型Cp D和E是由非蛋白水解菌株合成的， 因此通常從培養(yǎng)物中回收時無活性。血清型B和F，蛋白水解菌株和非蛋白水解菌株都可產(chǎn) 生，因此在回收時可以是活性或非活性形式。然而，即使是產(chǎn)生例如B型肉毒毒素血清型的 蛋白水解菌株，它也僅僅是裂解所合成的毒素的一部分。有缺口分子和無缺口分子的準(zhǔn)確 比例取決于培養(yǎng)物孵育的時長和溫度。因此，肉毒毒素——例如B型肉毒毒素——的任何制 劑中都有一定比例可能無活性，這可以解釋B型肉毒毒素與A型肉毒毒素相比效能顯著更 低的原因(以及解釋了為何B型肉毒毒素一般以幾千單位常規(guī)使用，這一點(diǎn)是本領(lǐng)域公知 的，參見，例如“Long-term safety, efficacy, and dosing of botulinum toxin type B(MY0BL0C ) in cervical dystonia(CD)and other movement disorders" Kumar R and Seeberger LC. Mov Disord 2002 ; 17 (Suppl 5) :S292_S293)。無活性肉毒毒素分子在臨床 制劑中的出現(xiàn)將增加所述制劑的蛋白總載荷，這也意味著抗原性增加，但是并不能增強(qiáng)其 臨床效能。此外，已知在肌肉注射后B型肉毒毒素的活性持續(xù)時間較短且與同劑量的A型 肉毒毒素相比效能也較低。高質(zhì)量的A型肉毒毒素晶體可由肉毒桿菌Hall A菌株產(chǎn)生，并具有以下特征每 毫克大于3X 107U、A260A278小于0. 60以及凝膠電泳時有獨(dú)特條帶圖案。已知的Schantz 法能夠用于制取A型肉毒毒素晶體，如在khantz，E.J.，et al, Properties and use of Botulinum toxin and Other Microbial Neurotoxins in Medicine, Microbiol Rev. 56 ； 80-99 :1992中所述。通常A型肉毒毒素復(fù)合物可從在適當(dāng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)的A型肉毒桿菌 的厭氧發(fā)酵物中分離和純化。在分離出無毒素蛋白后，可用已知的方法獲取純的肉毒毒素， 例如，分子量約為150kD、比效能為l-2Xl(fLD5QU/mg或更高的純化A型肉毒毒素；分子量約 為156kD、比效能為1-2 X 108LD5QU/mg或更高的純化B型肉毒毒素；以及分子量約為155kD、 比效能為1-2 X IO7LD5tlUAig或更高的純化F型肉毒毒素。肉毒毒素和/或肉毒毒素復(fù)合物可從下列公司或機(jī)構(gòu)獲取美國加利福利 亞州的坎貝爾市的 List Biological Laboratories, Inc.公司；英國的 the Centre for Applied Microbiology and Research (Porton Down) ；Wako (Osaka, Japan), Metabiologics (Madison, Wisconsin)禾口 Sigma Chemicals (St Louis, Missouri)。也可以 用純?nèi)舛径舅刂苽湟罁?jù)本申請公開內(nèi)容使用的藥物組合物?！銓γ付?，肉毒毒素(它是細(xì)胞內(nèi)的肽酶)的生物活性取決于，至少部分取決于它們的三維構(gòu)象。因此，A型肉毒毒素在下列情況下被解毒加熱、各種化學(xué)物質(zhì)、表面拉 伸和表面干燥。此外，已知將用公知的培養(yǎng)、發(fā)酵和純化方法制取的毒素復(fù)合物稀釋至藥 物組合物制劑可用的相當(dāng)?shù)偷亩舅貪舛葧r會導(dǎo)致毒素的迅速解毒，除非有合適的穩(wěn)定劑存 在。將毒素從毫克量稀釋至每毫升溶液含有納克量存在很大的困難，因?yàn)樵谌绱舜蠓♂?下會迅速喪失特異性毒性。由于毒素可能在含毒素的藥物組合物制成后的數(shù)月或數(shù)年后使 用，可用穩(wěn)定劑如白蛋白和明膠穩(wěn)定毒素。一種市售的含肉毒毒素的藥物組合物以商標(biāo)BOTOX. (可從加利福尼亞州歐文市 的阿勒根公司獲取)出售。BOTOX: 由純化的A型肉毒毒素復(fù)合物、白蛋白和氯化鈉組成， 以無菌真空干燥的形式包裝。A型肉毒毒素從肉毒桿菌Hall菌株的培養(yǎng)物中制取，所述菌 株培養(yǎng)于含有N-Z胺和酵母提取物的培養(yǎng)基中。A型肉毒毒素復(fù)合物是用一系列酸沉淀過 程從培養(yǎng)物溶液純化的，得到由活性高分子量毒素蛋白和一種相關(guān)的血凝素蛋白組成的晶 體復(fù)合物。將所述晶體復(fù)合物重溶于一種含有鹽水和白蛋白的溶液中，無菌過濾(0.2微 米)，然后真空干燥。將真空干燥后的產(chǎn)品于_5°C或更低溫度下儲存在冰箱中。在肌內(nèi)注 射前，可用無菌無防腐劑的鹽水將BOTOX 重溶。每小瓶BOTOX⑧含有無菌真空干燥形式 的約100UA型肉毒毒素純化神經(jīng)毒素復(fù)合物、0. 5毫克人血清白蛋白和0. 9毫克氯化鈉，并 且不含防腐劑。為將真空干燥的BOTOX重溶，使用無菌無防腐劑的生理鹽水(0. 9%氯化鈉注射 液)，用適當(dāng)尺寸的注射器抽取適當(dāng)量的稀釋液。由于BOTOX . 會因起泡或類似的劇烈攪 動而變性，要將稀釋液輕輕地注入小瓶。出于無菌的原因，BOTOX . 優(yōu)選在小瓶從冰箱中取 出并進(jìn)行重溶后的四小時內(nèi)給藥。在這四個小時中，重溶的BOTOX⑧可以在冰箱中于約2 °C 到約8°C下儲存。有報(bào)道稱冷藏的重溶BOTOX 的效能可保持至少約2周(Neurology，48 249-53，1997)。有報(bào)道稱A型肉毒毒素已在如下臨床環(huán)境下使用(1)每次肌內(nèi)注射(多處肌肉)約75-125U的BOTOX 用于治療頸肌張力障礙；(2)每次肌內(nèi)注射5-10U的BOTOX 用于治療眉間皺紋(抬頭紋(brow furrows)) (5單位肌內(nèi)注射至降眉間肌，10單位肌內(nèi)注射至皺眉肌)；(3)約30-80U的BOTOX 通過括約肌內(nèi)注射到恥骨直腸肌來治療便秘；(4)通過上眼的瞼側(cè)瞼板前的眼輪匝肌注射和下眼瞼的側(cè)瞼板前的眼輪匝肌注 射，每次肌內(nèi)注射約1-5U BOTOX 來治療瞼痙攣；(5)在眼外肌肌內(nèi)注射約1-5U的BOTOX ,用于治療斜視，注射量根據(jù)待注射的肌 肉大小以及想要達(dá)到的肌肉麻痹程度(例如，所需的屈光度矯正量)而變化；(6)通過對上肢5處不同的屈肌進(jìn)行BOTOX 肌內(nèi)注射來治療中風(fēng)后的上肢痙攣， 所述5處屈肌如下(a)指深屈肌(flexor digitorum profundus) :7. 5U 到 30U(b)指淺屈肌(flexor digitorum sublimus) :7. 5U 到 30U(c)尺側(cè)腕屈肌(flexor carpi ulnaris) :10U 到 40U(d)橈側(cè)腕屈肌(flexor carpi radialis) :15U to 60U(e)肱二頭肌(biceps brachii) :50U 到 200U。所示五種肌肉的每一種都在同一治療期注射，因此在每個治療期患者通過肌內(nèi)注 射使上肢屈肌肌肉接受90U到360U BOTOX ；
(7)為治療偏頭痛，在顱骨膜(pericranial)(向眉間肌、額肌和顳肌對稱注射)注 射25U的BOTOX 作為偏頭痛的一種預(yù)防性治療，與載體相比已顯示出顯著的好處，這可以 通過測量25U注射之后的三個月中偏頭痛頻率、最大嚴(yán)重程度、伴隨的嘔吐和急性藥物使 用的下降程度而測出。已知A型肉毒毒素效能最長可達(dá)12個月(European J. Neurology 6 (Supp 4) Slll-S1150:1999)，并且當(dāng)用于治療腺體(如治療多汗)時，在一些情況下效能可長達(dá)27 個月，參見，例如Bushara K. ,Botulinum toxin and rhinorrhea,Otolaryngol Head Neck Surg 1996 ；114(3) :507，和 The Laryngoscope 109 :1344-1346 :1999。然而，通常肌內(nèi)注射 BOTOX 的效能一般持續(xù)時間約為3到4個月。使用A型肉毒毒素治療各種臨床疾病的成功已引起對其他肉毒毒素血清型 的關(guān)注。兩種市售的人用A型肉毒毒素制劑是可購于加利福尼亞州歐文市的阿勒根 公司的BOTOX: 和可購于英國波頓唐的博福益普生(Beaufour Ipsen, Porton Down, England)的DYSP0RT⑧。B型肉毒毒素制劑(MY0BL0C )可購于加利福尼亞州舊金山的 SoIsticePharmaceuticalsο肉毒毒素已被提議用于或已被用于治療中耳炎(美國專利5，766，605)、內(nèi)耳疾病 (美國專禾U 6，265，379 ；6, 358，926))、緊張性頭痛(美國專利 6，458，365 和 6，776，992)、 偏頭痛(美國專利5，714，468)、竇性頭痛(美國專利6，838，434)、術(shù)后疼痛和內(nèi)臟痛(美 國專利6，464，986)、頭發(fā)生長和頭發(fā)維持(美國專利6，299，893)、銀屑病和皮炎(美國專 利5，670，484)、肌肉損傷(美國專利6，423，319)、各種癌癥(美國專利6，139，845)、平滑 肌疾病(美國專利5，437，291)和神經(jīng)源性炎癥(美國專利6，063，768)。已知控釋毒素植 入(參見，例如美國專利6，306，423和6，312，708)可作為肉毒毒素經(jīng)皮給藥方式(美國 專利申請10/194，805)。2005年8月M日提交的序列號為11/211,311的美國專利申請 公布文本No. 2007/0048334A1公開了通過對患者的頭、頸和肩部肌肉給藥將一種肉毒毒素 用于改善胃排空和/或治療胃食管反流病(GERD)。已知肉毒毒素可用來削弱口腔咀嚼肌 或咬肌，因此可治療自身造成的傷口及其所致的潰瘍(Payne Μ.，et al, Botulinum toxin as a novel treatment for self mutilation in Lesch-Nyhan syndrome, Ann Neurol 2002 September ；52(3Supp 1) :S157)。2004 年 1 月 18 日提交的序列號為 11/039,506 的 美國專利申請公布文本No. 20050191321A1公開了通過梭菌毒素的局部給藥來治療藥物濫 用疾病(MOD)。2005年12月觀日提交的序列號為11/319，880的美國專利申請公開文本 No. 20060104995A1公開了將肉毒毒素用于頭部。2004年10月12日提交的序列號為10/964，898的美國專利申請公布文本 No. 20050147626A1公開了通過向三岔感覺神經(jīng)或其附近區(qū)域進(jìn)行周圍給予肉毒毒素來 治療或預(yù)防一種神經(jīng)疾病和/或一種神經(jīng)精神疾病。2005年12月7日提交的序列號為 11/296,079的美國專利申請公布文本No. 20060171963A1公開了一種用于減輕與偏頭痛、 三叉神經(jīng)自主性頭痛和由血管疾病引起的頭痛相關(guān)的疼痛的方法，該方法是通過向神經(jīng)末 梢周圍給予治療有效量的突觸前神經(jīng)毒素來實(shí)現(xiàn)的，所述神經(jīng)末梢選自三叉神經(jīng)末梢、枕 部神經(jīng)末梢和鼻副交感神經(jīng)末梢。此外，肉毒毒素可能具有減輕大鼠福爾馬林模型中誘導(dǎo)性炎性疼痛的作用(Aoki K.，et al，Mechanisms of the antinociceptive effect of subcutaneous BOTOX (D10Inhibition of peripheral and central nociceptive processing, Cephalalgia 2003 Sep;23(7) :649) 0此外，有報(bào)道稱肉毒毒素神經(jīng)阻斷可引起表皮厚度減小(Li Y, et al. ， Sensory and motor denervation influences epidermal thickness in rat foot glabrous skin, Exp Neurol 1997 ; 147 :452-462 (參見 459 頁))。最后，已知可對足部給予 肉毒毒素來治療足部過量出汗(Katsambas A.，et al.，Cutaneous diseases of the foot Unapproved treatments，Clin Dermatol 2002 Nov-Dec ；20 (6) :689-699 ；Sevim，S.，et al. ，Botulinum toxin-Α therapy for palmar and plantar hyperhidrosis,Acta Neurol BeIg 2002 Dec;102(4) :167-70)(Suputtitada, A. , Local botulinum toxintype A injections in the treatment of spastic toes，Am J Phys Med Rehabil 2002 Oct ；81 (10) :770-5)、特發(fā)性足尖步行(idiopathic toe walking) (Tacks, L，et al.， Idiopathic toe walking :Treatment with botulinum toxin A injection,Dev Med Child Neurol 2002 ；44(Suppl 91) :6)，和足部肌張力障礙(Rogers J.，et al.，Injections of botulinum toxin A in foot dystonia,Neurology 1993 Apr ；43(4Suppl 2))。破傷風(fēng)毒素 及其衍生物(即含有非天然靶向部分)、片段、雜合體和嵌合體也可具有治療效用。破傷風(fēng) 毒素有很多與肉毒毒素類似之處。另外，破傷風(fēng)毒素和肉毒毒素是由梭菌屬的近緣種(分 別為破傷風(fēng)梭菌(Clostridium tetani)和肉毒桿菌)產(chǎn)生的多肽。此外，破傷風(fēng)毒素和肉毒毒素都是由輕鏈(分子量約50kD)和重鏈(分子量約 IOOkD)經(jīng)單個二硫鍵共價(jià)結(jié)合構(gòu)成的雙鏈蛋白質(zhì)。因此，破傷風(fēng)毒素和七種肉毒毒素(未 復(fù)合的)的每一種的分子量都是約150kD。而且，破傷風(fēng)毒素和肉毒毒素的輕鏈都具有表現(xiàn) 出細(xì)胞內(nèi)生物(蛋白酶)活性的結(jié)構(gòu)域，而重鏈則含有受體結(jié)合(免疫原性)結(jié)構(gòu)域和細(xì) 胞膜易位結(jié)構(gòu)域。此外，破傷風(fēng)毒素和肉毒毒素都表現(xiàn)出對突觸前膽堿能神經(jīng)元表面的神經(jīng)節(jié)苷脂 受體具有高的特異親和力。受體介導(dǎo)的周圍膽堿能神經(jīng)元對破傷風(fēng)毒素的胞吞作用可導(dǎo)致 逆向軸突輸送、對抑制性神經(jīng)遞質(zhì)從中樞突觸釋放的阻斷和痙攣性麻痹。相反，受體介導(dǎo)的 周圍膽堿能神經(jīng)元對肉毒毒素的胞吞作用可導(dǎo)致程度非常小的逆向軸突輸送(如果有)， 從中毒的周圍運(yùn)動神經(jīng)元的乙酰膽堿出胞作用的抑制以及遲緩性麻痹。最后，破傷風(fēng)毒素和肉毒毒素在生物合成和分子建構(gòu)兩方面都很類似。破傷風(fēng)毒 素和A型肉毒毒素的蛋白序列之間總共有34% —致，一些功能結(jié)構(gòu)域的序列一致性則高達(dá) ^lJ62% (Binz T. et al. ,The Complete Sequence of Botulinum Neurotoxin Type A and Comparison with Other Clostridial Neurotoxins, J Biological Chemistry 265(16)； 9153-9158 :1990)。乙酰膽堿通常哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)的每種神經(jīng)元類型僅釋放單一的一類小分子神經(jīng)遞質(zhì)。神 經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿是由腦的很多區(qū)域的神經(jīng)元分泌的，但是具體來說是由如下部分分泌運(yùn) 動皮層的大椎體細(xì)胞、基底神經(jīng)節(jié)的一些不同神經(jīng)元、支配骨骼肌的運(yùn)動神經(jīng)元、自主神經(jīng) 系統(tǒng)(交感和副交感神經(jīng)系統(tǒng))的節(jié)前神經(jīng)元、副交感神經(jīng)系統(tǒng)的節(jié)后神經(jīng)元和交感神經(jīng) 系統(tǒng)的一些節(jié)后神經(jīng)元。基本上，只有連接汗腺、立毛肌(piloerector muscle)和小部分 血管的節(jié)后交感神經(jīng)纖維是膽堿能的，因?yàn)榻桓猩窠?jīng)系統(tǒng)的大部分節(jié)后神經(jīng)元分泌神經(jīng)遞 質(zhì)去甲腎上腺素。在大部分情況下，乙酰膽堿具有興奮作用。但是，已知乙酰膽堿對一些周圍副交感神經(jīng)末梢是有抑制作用的，例如通過迷走神經(jīng)抑制心率。自主神經(jīng)系統(tǒng)的傳出信號是通過交感神經(jīng)系統(tǒng)或副交感神經(jīng)系統(tǒng)傳向身體的。交 感神經(jīng)系統(tǒng)的節(jié)前神經(jīng)元由位于脊髓中間外側(cè)角(intermediolateral horn)的神經(jīng)節(jié)前 交感神經(jīng)神經(jīng)元胞體延伸出來。所述神經(jīng)節(jié)前交感神經(jīng)纖維從細(xì)胞體延伸出來，與位于脊 椎旁交感神經(jīng)節(jié)或椎前神經(jīng)節(jié)的節(jié)后神經(jīng)元形成突觸。因?yàn)榻桓泻透苯桓猩窠?jīng)系統(tǒng)的神經(jīng) 節(jié)前神經(jīng)元都是膽堿能的，將乙酰膽堿施用給神經(jīng)節(jié)將使交感和副交感節(jié)后神經(jīng)元興奮。乙酰膽堿能激活兩種受體毒蕈堿受體和煙堿受體。由副交感神經(jīng)系統(tǒng)的節(jié)后神 經(jīng)元激發(fā)的所有效應(yīng)細(xì)胞都有毒蕈堿受體，交感神經(jīng)系統(tǒng)的節(jié)后膽堿能神經(jīng)元激發(fā)的效應(yīng) 細(xì)胞也有。交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)的神經(jīng)節(jié)前和節(jié)后神經(jīng)元之間的突觸中有煙堿受體。神 經(jīng)肌肉接頭處的骨骼肌纖維的很多膜中也有煙堿受體。當(dāng)小而透亮的細(xì)胞內(nèi)囊泡與突觸前神經(jīng)元細(xì)胞膜融合時，乙酰膽堿就從膽堿能神 經(jīng)元中釋放。很多種非神經(jīng)元分泌細(xì)胞——例如，腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞(還有PC12細(xì)胞系)和 胰島細(xì)胞——從大的致密核心小泡中分別釋放兒茶酚胺和甲狀旁腺激素。PC12細(xì)胞系是大 鼠嗜絡(luò)細(xì)胞瘤細(xì)胞的克隆，其在交感腎上腺發(fā)育研究中廣泛用作組織培養(yǎng)模型。在體外，通 過滲透處理(如通過電穿孔)或通過將肉毒毒素直接注入去除神經(jīng)支配的細(xì)胞，肉毒毒素 抑制所述兩類化合物從所述兩類細(xì)胞中釋放。還已知肉毒毒素可阻斷神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸從皮 層突觸小體細(xì)胞培養(yǎng)物中釋放。因此，需要一種利用患者特異性界標(biāo)來治療頭部疼痛——如頭痛——的患者特異 性技術(shù)。在一個具體的方面，本發(fā)明涉及向遭受頭痛的疼痛/頭痛的患者給予肉毒神經(jīng)毒 素，其中肉毒毒素的給藥部位是基于患者頭骨的至少一條骨縫線且在其附近，以此來減輕/ 治療患者的頭痛的疼痛/頭痛。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了一種用于治療頭痛的新的、集中性的患者特異性方法一方面，公開了一種治療遭受頭痛的患者的方法，所述方法包括向患者頭骨的至 少一條骨縫線附近的神經(jīng)給予梭菌毒素的步驟，由此減輕頭痛的至少一種癥狀。所述方法 可以包括確定至少一條骨縫線的位置的步驟。可依據(jù)本發(fā)明公開內(nèi)容治療的頭痛類型包括 但不局限于例如，竇性頭痛、緊張性頭痛、偏頭痛、叢集性頭痛和頸源性頭痛。在具體的實(shí) 例中，所治療的偏頭痛可以是陣發(fā)性偏頭痛或慢性偏頭痛。所述的至少一條骨縫線可以是 主治醫(yī)師認(rèn)為適于給予神經(jīng)毒素的任意一條骨縫線，可以是但不限于例如，額縫(frontal suture)、麟縫(squamous suture)、枕乳突縫(occipitomastoid suture)、冠狀縫(coronal suture)、人字縫(lambdoid suture)和矢狀縫(sagittal suture)，但不局限于此。在某些實(shí)施方案中，所述的梭菌毒素是肉毒毒素，例如選自A、B、Q、D、E、F和G肉 毒毒素的肉毒毒素。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，所述肉毒毒素是A型肉毒毒素和/或B型肉在某些實(shí)例中，治療有需要的患者的頭痛的方法包括如下步驟確定與患者頭痛 相關(guān)的頭部疼痛的部位，并確定患者的與頭痛部位最接近的至少一條骨縫線的位置。在確 定與頭部疼痛部位最接近的所述至少一條骨縫線的位置后，向患者給予梭菌神經(jīng)毒素，例 如，以一種連續(xù)不斷的方式，在所述的至少一條骨縫線沿線附近基本上疊加地給藥。如上所述，梭菌神經(jīng)毒素可以是選自如下的肉毒毒素A、B、C1, D、Ε、F和G型肉毒毒素。在具體的實(shí)施方案中，給藥步驟包括如下步驟將含有肉毒毒素——如A型或B型 肉毒毒素——的注射器的針刺入到，例如一個刺入點(diǎn)中，以及將針沿所述至少一條骨縫線 定位，以便A型肉毒毒素沿著所述至少一條骨縫線線性給藥?？勺鳛樗鲋辽僖粭l骨縫線 的示例性骨縫為例如，額逢、鱗縫、冠狀縫、人字縫、枕乳突縫和矢狀縫，但不局限于此。在具 體情況下，還可進(jìn)行又一步驟利用相同的刺入點(diǎn)，將針重新定位，以使肉毒毒素沿第二條 骨縫線線性分布。在某些實(shí)施方案中，減輕頭痛的方法可包括向有需要的患者皮下給予A型肉毒毒 素，其中將所述的A型肉毒毒素給予至患者的一條骨縫線附近，而該給藥能夠在7天內(nèi)減輕 頭痛。在某些實(shí)施例中，頭痛的減輕維持約2到約6個月甚至更長時間。梭菌神經(jīng)毒素局部給藥量可為約10 _3單位/kg患者體重到約35單位/kg患 者體重。優(yōu)選地，所述神經(jīng)毒素的局部給藥量為約10 _2u/kg到約25U/kg患者體重。U” 是“單位”的縮寫。更優(yōu)選地，所述神經(jīng)毒素的給藥量是約10 —I/kg到約15U/kg。在本 發(fā)明范圍內(nèi)的一種特別優(yōu)選方法中，所述肉毒神經(jīng)毒素的局部給藥量為約lU/kg到約IOU/ kg。在臨床上，在所述的至少一條骨縫線沿線附近線性地給予IU到3000U的神經(jīng)毒素(如 A型或B型肉毒毒素)來有效地治療頭痛是有利的。在具體實(shí)例中，給予的肉毒毒素量可為 約1單位到約25000單位，這取決于使用的肉毒神經(jīng)毒素的血清型，當(dāng)然，主治醫(yī)師顯然絕 不會考慮將某種血清型的致命劑量(無效實(shí)施方案)作為治療劑量。當(dāng)然，使用的是有益 的非致命的肉毒毒素劑量，所述劑量取決于所使用的神經(jīng)毒素的具體血清型，并且為本領(lǐng) 域普通技術(shù)人員所知(如本領(lǐng)域中證實(shí)的)。在一種具體的方法中，A型肉毒毒素的給藥步驟包括使用穿過頭部皮下組織、頭部 肌肉、腱膜筋膜并且位于患者的所述骨縫線沿線附近的針，然后逐漸沿所述骨縫線抽出針， 同時遞送A型肉毒毒素，從而使A型肉毒毒素沿所述骨縫線(例如，額縫線、鱗縫線、冠狀縫 線、人字縫線和矢狀縫線)線性皮下分布。在某些實(shí)施方案中，使用一個刺入點(diǎn)，沿至少兩 條骨縫線來給予肉毒毒素，例如A型或B型肉毒毒素。在另外的實(shí)施方案中，使用超過一個 刺入點(diǎn)，沿同一條或兩條不同的骨縫線的長度方向上給予肉毒毒素。“肉毒毒素” 一詞是指純的毒素(即分子量約150KD的分子)形式或復(fù)合物(即 分子量為約300到約900KD的含有神經(jīng)毒素分子和一種或多種相關(guān)無毒性分子的復(fù)合物) 形式的肉毒神經(jīng)毒素，且將非神經(jīng)毒素類(如細(xì)胞毒性肉毒毒素C2和Ο)的肉毒毒素排除 在外，但包括重組制備的、雜合的、改造的和嵌合的肉毒毒素?！案脑斓娜舛径舅亍笔侵?，與天 然肉毒毒素相比，至少一個氨基酸被缺失、修飾或替換的肉毒毒素。此外，改造的肉毒毒素 可以是重組生產(chǎn)的神經(jīng)毒素或者重組制備的神經(jīng)毒素的衍生物或片段。改造的肉毒毒素保 持天然肉毒毒素的至少一種生物活性，例如，結(jié)合肉毒毒素受體的能力，或抑制神經(jīng)遞質(zhì)從 神經(jīng)元中釋放的能力。改造的肉毒毒素的一個實(shí)例是具有來自于一種肉毒毒素血清型(例 如血清型A)的輕鏈和來自于另一種不同的肉毒毒素血清型(如血清型B)的重鏈的肉毒毒 素。改造的肉毒毒素的另一個實(shí)例是與一種神經(jīng)遞質(zhì)(例如P物質(zhì))偶聯(lián)的肉毒毒素?！皽p輕”是指頭痛相關(guān)癥狀發(fā)生率的減少。因此，減輕包括頭痛相關(guān)癥狀的一定程 度的減少、顯著減少、幾乎完全減少和完全減少。臨床上，減輕效果可能在對患者給予梭菌 神經(jīng)毒素后約1到約7天內(nèi)都不出現(xiàn)。
，示例性的癥狀會根據(jù)遭受的頭痛類型而不同，例如，一個患有緊張性頭痛的患者 可能會在頭、頭皮或頸部(經(jīng)常與這些區(qū)域中的肌肉緊繃有關(guān))感到疼痛或不適。該患者 會有壓迫樣鈍痛感，并且廣泛存在(整個頭部，不僅在一點(diǎn)或一側(cè))，這種痛感在頭皮、顳颥 和頸后更甚，是一種頭被帶子緊繃或被鉗的感覺。叢集性頭痛的癥狀可影響頭的一側(cè)(單 側(cè))，并可能涉及流淚和鼻塞以及在入睡后開始的2到3小時出現(xiàn)在頭的一側(cè)和/或一側(cè)的 眼及其周圍的、被描述為穩(wěn)定刺痛或灼痛或錐痛的疼痛。對偏頭痛患者而言，示例性的癥狀 可包括惡心、嘔吐和頭部特定區(qū)域的局部疼痛、單眼或雙眼的視覺干擾(先兆)(包括看到Z 字型線、閃光、暫時性盲點(diǎn))、對亮光敏感和視力模糊。偏頭痛的其他癥狀可包括食欲不振、 寒戰(zhàn)、排尿增多、出汗增多、面部腫脹、易怒和疲勞。偏頭痛經(jīng)常被描述為一種始于頭部一側(cè) 并有時波及頭部另一側(cè)的“重?fù)?pounding)”感。某些患者的偏頭痛每次都始于頭的同一 側(cè)，并且可包括眼后或頭頸后的疼痛?！凹s”是指近似或幾乎的意思，并且在本文述及數(shù)值或數(shù)值范圍的上下文中是指所 敘述或要求保護(hù)的數(shù)值或數(shù)值范圍的平均值+/-10%。當(dāng)本文使用“附近”一詞時，意思是指在具體所述部位的1. 5cm處或1. 5cm之內(nèi)， 更優(yōu)選在具體所述部位的Icm處或Icm之內(nèi)，最優(yōu)選在具體所述部位的0. 5cm處或0. 5cm 之內(nèi)，例如，當(dāng)按照本發(fā)明的公開內(nèi)容進(jìn)行肉毒毒素給藥時，將所述肉毒毒素給予至患者的 至少一條骨縫線附近以內(nèi)，也就是說距所述骨縫線1. 5cm處或1. 5cm之內(nèi)，更優(yōu)選Icm處或 Icm之內(nèi)，最優(yōu)選0. 5cm處或0. 5cm之內(nèi)。肉毒神經(jīng)毒素的“治療有效”量是指足以減輕至少一種與頭痛相關(guān)的癥狀達(dá)至少 一周的劑量，更優(yōu)選減輕一個月，最優(yōu)選減輕近4到9個月或更長，并且最長達(dá)5年的劑量。 給藥可以是單一劑量或累積的(連續(xù)給藥)，其可由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。神經(jīng)毒 素，例如肉毒毒素，可連續(xù)遞送(即每月一次，每6個月一次)，這樣就能依據(jù)所治療的頭痛 的嚴(yán)重程度來給予最佳用量的毒素，并維持有益的效果。這樣的劑量安排可由本領(lǐng)域技術(shù) 人員根據(jù)例如患者體型、所選的神經(jīng)毒素、要治療的疾病、疾病的嚴(yán)重程度和其他本領(lǐng)域已 知的變量容易地確定?？衫酶鞣N給藥方法來給予可用于實(shí)施本文公開的方法的組合物。在一個實(shí)例 中，例如，可通過用針皮下注射含有肉毒毒素的組合物來實(shí)現(xiàn)在至少一條骨縫線附近給予 肉毒毒素(如下文的詳細(xì)介紹)。另外一個可用的示例性給藥方法是通過經(jīng)皮途徑，即根 據(jù)本文公開的教導(dǎo)/參數(shù)(利用頭骨骨縫線)不使用針來進(jìn)行肉毒毒素給藥，也就是通過 局部給藥(例如，2002年7月11日提交的序列號為10/194,805的公開的美國專利申請 No. 20040009180A1討論了毒素局部給藥，該申請以引用方式全文納入本說明書)。肉毒毒 素經(jīng)皮給藥作為一種不使用針的給藥方法是本領(lǐng)域已知的，同樣可考慮作為根據(jù)本發(fā)明的 教導(dǎo)使用的給藥方法?！爸委煛笔侵笗簳r或永久地減輕(或消除)頭痛的至少一種癥狀?！盎颊摺笔侵附邮茚t(yī)學(xué)治療或獸醫(yī)治療的人或非人類受試者。因此，正如本文所公 開的，所述化合物可用于治療任何動物如哺乳動物。本文描述的每個特征和兩個或多個這樣的特征的每個組合均包括在本發(fā)明的范 圍之內(nèi)，條件是該組合中包含的各特征之間不存在不相容性。此外，任何特征和特征的組合 可以從本發(fā)明的任一實(shí)施方案中特別地排除。
參閱本說明書附圖可以更好地理解本發(fā)明，所述附圖未按規(guī)定比例繪制，其用于 圖示/舉例說明的目的。


圖1為人類頭骨左側(cè)的側(cè)視圖，示出了組成頭骨的各種骨、示例的針刺點(diǎn)、一支欲 刺入的注射器和示例性的骨骼間界限(骨縫線)；圖2為人類頭骨左側(cè)的側(cè)視圖，示出了沿冠狀縫長度方向插入冠狀縫附近的注射 器和針；圖3為人類頭骨左側(cè)的側(cè)視圖，示出了注射器和針頭被拔出同時按壓活塞，在冠 狀縫沿線附近留下一條給予的肉毒毒素痕跡；圖4為人類頭骨左側(cè)的側(cè)視圖，示出了注射器重新定向，利用圖1-3中示出的同一 個刺入點(diǎn)沿鱗縫線根據(jù)本發(fā)明的公開內(nèi)容給予神經(jīng)毒素；圖5是人類頭骨后部的后視圖，示出了另外一種示例性的針刺入點(diǎn)，以及根據(jù)本 文的教導(dǎo)，沿人字縫沉積神經(jīng)毒素的過程中被給予的神經(jīng)毒素和一支注射器；和圖6是示例性人類頭骨的頂視圖，示出了適用于本文公開的神經(jīng)毒素給藥的多種 骨縫線和針刺入點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式依照本發(fā)明，將肉毒神經(jīng)毒素給予患有頭痛的患者。更具體地，本申請公開的方法 具有給藥集中性(focused)并且具有患者特異性，從而例如使得開業(yè)醫(yī)生可以利用特定定 位和給藥的肉毒毒素來更好地靶向和減輕患者的頭痛。發(fā)明人注意到，在一些情況下，偏頭痛涉及三叉神經(jīng)和枕神經(jīng)在腦膜(meninges) 水平上活性增強(qiáng)。與偏頭痛相關(guān)的疼痛是由這些神經(jīng)末梢敏化導(dǎo)致的，這些神經(jīng)末梢敏化 后可檢測到腦脊液(CSF，即圍繞脊髓起到緩沖作用以保護(hù)腦和脊髓不受損害的澄清液體) 搏動，還能導(dǎo)致腦膜血管的變化，這將促進(jìn)偏頭痛級聯(lián)反應(yīng)。分布于腦膜的神經(jīng)在傳統(tǒng)上被認(rèn)為是顱內(nèi)的。這包括三叉神經(jīng)的第一支的各分支 和高位頸神經(jīng)根。根據(jù)發(fā)明人的神經(jīng)學(xué)實(shí)踐，發(fā)明人認(rèn)為頭痛，例如偏頭痛，例如主要涉及 腦膜傷害性神經(jīng)，并且那些神經(jīng)橫貫頭骨到達(dá)腦膜，最可能的進(jìn)入點(diǎn)是骨縫線，因?yàn)檫@是腦 中骨窗(bony casement)的天然裂縫。此外，三叉神經(jīng)的第一支的顱內(nèi)分支和高位頸神經(jīng)根分布于腦膜但也穿出頭骨分 布于骨膜(覆蓋顱外表面的致密不規(guī)則結(jié)締組織膜的薄層)和頭皮。從頭皮表面至腦膜或 從腦膜至頭皮橫貫頭骨的主要神經(jīng)纖維是無髓鞘C纖維(直徑為約0. 4到約1. 2微米，以 每秒約0. 7到約2. 3米的速度傳遞神經(jīng)脈沖的無髓鞘纖維)。值得注意的是，頭骨神經(jīng)刺入點(diǎn)看起來在與骨縫線(即頭骨骨板匯聚的邊緣)對 應(yīng)的區(qū)域達(dá)到最大程度。因此，本發(fā)明的方法使用肉毒毒素定位給藥，即基于以患者的至少 一條骨縫線的位置作為導(dǎo)向指示肉毒毒素的給藥部位。所述基于骨縫線的給藥技術(shù)容許將 含有如肉毒毒素的藥物遞送至頭骨的骨表面上能接近神經(jīng)末梢的準(zhǔn)確位點(diǎn)。因此，需要以 較低的藥物劑量來治療頭痛，并且要限制潛在的副作用如有害的肌無力。示例性的市售的含有肉毒毒素的組合物包括但不局限于可購于加利福尼亞州歐文市的阿勒根公司的BOTOX (Α型肉毒毒素神經(jīng)毒素復(fù)合物與人血清白蛋白和氯化鈉)， 規(guī)格為每小瓶100單位，為凍干粉形式，使用前用0.9%氯化鈉重溶；可購于英國伯克郡的 益普生有限公司(lpsen Limited, Berkshire, U. K.)的DYSPORT(制劑中含有肉毒桿 菌A型毒素血凝素復(fù)合物與人血清白蛋白和乳糖，以粉末的形式存在，使用前用0. 9%氯化 鈉重溶)，該產(chǎn)品在每種情況下均可以本文所述的BOTOX 量的約3到約4倍量使用；以 及，MY0BL0C (—種含有B型肉毒毒素、人血清白蛋白、琥珀酸鈉和氯化鈉，pH為約5.6 的可注射用溶液，可購于加利福尼州南舊金山的Solstice Neurosciences, Inc.)，該產(chǎn)品 在每種情況下均可以本文所述的BOTOX . 量的約30到約50倍量使用，這一點(diǎn)為本領(lǐng)域已 知。XEOMIN (—種分子量為150kDa的A型肉毒毒素制劑，可購于德國波茨坦的麥?zhǔn)现扑?(Merz Pharmaceuticals))是另外一種可用的神經(jīng)毒素，其在每種情況下均可以本文所述 的BOTOX 量的約1到2倍量使用。通常情況下，需要對患者的頭骨進(jìn)行仔細(xì)的觸診。如下標(biāo)出骨縫線冠狀縫、鱗縫、 矢狀縫和人字縫。沿骨縫線通過滲透作用注射梭菌毒素，如肉毒毒素。在一個給藥方法中， 可使用各種尺寸的針，例如，30號、27號或甚至是25號，長1. 5英寸的針。優(yōu)選地，所選的 針至少1英寸長。所述針經(jīng)頭皮的皮下組織、肌肉和腱膜筋膜插入。所述針不刺穿骨膜，針 可沿目標(biāo)骨縫線以全長插入，然后例如，沿目標(biāo)骨縫線逐漸抽針，抽針的同時按壓注射器的 活塞來遞送肉毒毒素。這種技術(shù)能提供并容許肉毒毒素沿骨縫線基本上線性分布(例如， 參見圖1-3)。優(yōu)選使用濃縮的肉毒毒素溶液，例如，在使用BOTOX (Α型肉毒毒素)時，每100 單位小瓶的BOTOX .加Icc無防腐劑生理鹽水(但每100單位的BOTOX 也可使用2cc和 4cc稀釋液)。在一個實(shí)施方案中，沿著冠狀縫、鱗縫、矢狀縫和人字縫給藥。針的刺入點(diǎn)可 以僅在四處(圖1示例為刺入點(diǎn)22(頭部每側(cè)一個)、圖5中的針刺入點(diǎn)5和圖6中的針刺 入點(diǎn)1)針可沿著骨縫線定向，之后可在每個位置的同一刺入點(diǎn)重新定向。例如，左側(cè)冠狀 縫線和左側(cè)鱗縫線可使用位于左側(cè)冠狀縫和左側(cè)鱗縫接合尖端的同一刺入點(diǎn)進(jìn)行處理。這 種給藥方法被稱為骨縫線給藥技術(shù)。至今這種技術(shù)還未被記載或發(fā)表。參見圖1，圖1描繪了示例性的人類頭骨左側(cè)的側(cè)視圖，示出了組成頭骨的各個骨 板。它們包括額骨4、頂骨14、顳骨20、蝶骨21和枕骨12。這些骨板接合的邊緣通過顱骨 縫連接在一起。這些骨縫主要通過沙比纖維(Siarpey' s fibers)連接，該纖維是由每 塊骨板長出并長入相鄰骨板中。沙比纖維在頭骨中的主要功能是將各顱骨以牢固但可活 動的方式結(jié)合。這些纖維在骨骼承擔(dān)最大分離力的區(qū)域最多，并伴有微動脈或一條或多條 神經(jīng)纖維(Retzlaff，EW ;Mitchell FL, Upledger JE(1982-3). “ Efficacy of Cranial Sacral Manipulation :The Physiological Mechanism of the Cranial Sutures " . J Soc. Osteopaths(12). ISSN 0308-8766)。在圖1中可見各種示例性骨縫線。例如，示出了額骨4和頂骨14接合處的冠狀縫 6、頂骨14和顳骨20接合處的鱗縫16、頂骨14和枕骨12接合處的人字縫10和枕骨和顳 骨乳突部接合處的顱骨縫——枕乳突縫18。這些是根據(jù)本說明書教導(dǎo)使用的示例性骨縫 線，其中，將肉毒毒素給予至位于患者頭骨的至少一條骨縫線附近的神經(jīng)，由此該給藥可減 輕頭痛的至少一個癥狀。正如前文詳述，給藥可基本上沿骨縫線的長度方向，例如，距所述 骨縫線約1. 5cm處或之內(nèi)，更優(yōu)選距所述骨縫線約1. Ocm處或之內(nèi)，最優(yōu)選距所述骨縫線約160. 5cm處或之內(nèi)，所述的骨縫線用作根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行肉毒毒素給藥的導(dǎo)向。各圖中提供/示 出的虛線輪廓表示所示目標(biāo)(例如，針，沿骨縫線給予的毒素)在皮膚表面下方的位置。根據(jù)本發(fā)明的一方面，肉毒神經(jīng)毒素的給藥是通過將合適尺寸的針(例如，27號 針)插入針刺入點(diǎn)——例如圖1中針刺入點(diǎn)22——來實(shí)現(xiàn)的。在這個實(shí)例中，針插入點(diǎn)22 位于冠狀縫6和鱗縫16的接合處。這個位點(diǎn)可通向兩條骨縫線，例如使用針插入點(diǎn)22向 上可沿著冠狀縫6插入，還可沿著鱗縫16插入。在這個實(shí)例中，將注射器(含有肉毒毒素) 的針插入針刺入點(diǎn)22之后，就將其向上沿冠狀縫6以全長(如確實(shí)需要，或少于全長)插 入，在插入結(jié)束后(圖幻，沿冠狀縫6逐步抽針，同時按壓注射器活塞遞送毒素，由此提供沿 冠狀縫6的肉毒毒素線性分布(圖幻。針尖達(dá)到針刺入點(diǎn)22之后(抽針結(jié)束時)，隨即將 針重新定向并沿鱗縫16插入，將針沿鱗縫16再次全長插入(如確實(shí)需要，或少于全長)，接 著同樣在插入結(jié)束后，沿鱗縫16逐步抽針，同時按壓注射器活塞以再一次遞送毒素，從而 使得肉毒毒素沿鱗縫16線性連續(xù)分布(圖4)，因此，僅需一個針刺入點(diǎn)就可到達(dá)一條以上 骨縫線。另一方面，圖5描繪了人類頭骨后面的后視圖(背視圖)，示出了第二個示例性針 刺入點(diǎn)5，該刺入點(diǎn)在矢狀縫8和人字縫10 (形成于頂骨14和枕骨12的邊界處)的接合 處。在某些實(shí)例中，某人可能訴稱一種導(dǎo)致患者感到頭后部疼痛的頭痛，例如偏頭痛。在一 個實(shí)例中，可將肉毒毒素沿患者頭后部存在的特定骨縫線沿線附近給予所述患者。骨縫線 的位置確定可由醫(yī)療人員利用各種方法來完成，所述方法例如但不局限于仔細(xì)的觸診、使 用超聲波、CT熒光法和放射性同位素骨掃描。例如，并且如圖5所示例，包含藥物——如肉毒神經(jīng)毒素——的注射器的針由針 刺入點(diǎn)5插入，然后向下沿人字縫10的左支全長插入，插入結(jié)束后，沿人字縫10的左支逐 步抽針，同時按壓注射器的活塞來遞送肉毒毒素，由此使肉毒毒素沿人字縫10左支線性分 布。沿人字縫10的右支執(zhí)行相同的程序，這樣就實(shí)現(xiàn)了在患者頭后部以倒“V”字的形式給予治療量肉毒毒素。若需要，可仍使用相同的針刺入點(diǎn)5(這樣可將患者的組織創(chuàng)傷減至最小)，沿頭 骨頂部并沿矢狀縫8沿線附近給予治療量的肉毒毒素。如果患者訴稱頭頂部頭痛，可沿矢 狀縫8并在其附近給藥。這里注射器的針插入(或若已用來沿人字縫10給予毒素，則重 新定向)針刺入點(diǎn)5，然后向上/向前朝向患者面部/前部沿矢狀縫8全長插入，插入結(jié)束 后，沿矢狀縫8逐步抽針，同時按壓注射器的活塞來遞送肉毒毒素，由此使得肉毒毒素沿矢 狀縫8線性分布。如果將肉毒毒素給予至人字縫10 (矢狀縫8的左右兩側(cè))的“左支”和 “右支”，則有效量肉毒毒素的給藥可在患者頭后部以略約為倒“Y”字的形式進(jìn)行，如從圖5 中描繪的視圖中所見。在一些實(shí)例中，患者的頭痛可位于其頭部頂端周圍。在這樣的情況下，主治醫(yī)師可 決定沿冠狀縫6和/或矢狀縫8給予治療有效量的肉毒毒素。正如在圖6中描繪(示例性 人頭骨的頂視圖，示出了各種骨縫線)的，這些骨縫在另一個針刺入點(diǎn)1會合，從該刺入點(diǎn) 可到達(dá)頭骨左側(cè)和右側(cè)的冠狀縫6，而矢狀縫8從針刺入點(diǎn)1延伸向針刺入點(diǎn)5。如前文所 述，含有藥物——如肉毒神經(jīng)毒素——的注射器的針可在針刺入點(diǎn)1插入，然后向下并沿頭 骨左側(cè)并在冠狀縫6沿線附近全長(若確實(shí)需要，或少于全長)插入，插入結(jié)束后，沿冠狀 縫6逐步抽針，同時按壓注射器的活塞來遞送肉毒毒素，從而使肉毒毒素沿患者頭骨頂部和左側(cè)在冠狀縫6附近線性分布。使用同一個針刺入點(diǎn)1，將針重新定位，沿患者頭骨的右 側(cè)推進(jìn)，向下沿右側(cè)并在冠狀縫6沿線附近以其全長(若確實(shí)需要，或少于全長)插入。再 次緩慢沿冠狀縫6抽針，同時按壓注射器的活塞來遞送肉毒毒素，由此使肉毒毒素沿患者 頭骨頂部和右側(cè)在冠狀縫6附近線性分布。若需要，可沿患者頭骨頂部中線部分，使用刺入 點(diǎn)1沿矢狀縫8并在其附近，以上述方式給予肉毒毒素，從而使肉毒毒素沿矢狀縫并在其附 近呈線性分布。當(dāng)然，不需要將針刺入點(diǎn)限制在骨縫線的接合處。進(jìn)一步考慮到，在一些實(shí)例中刺 入點(diǎn)可以位于沿一條骨縫線任意部位附近，而不僅僅位于2條或更多條骨縫線接合處。例 如，并且如圖6中示例性的示出，或許患者的頭痛始于頭骨最頂端部分并沿頭部中線蔓延。 在這樣的實(shí)例中，可選擇位于骨縫線如矢狀縫8附近的針刺入點(diǎn)，并且將針從針刺入點(diǎn)17 刺入，由此將針向前沿矢狀縫8推向前額/前面。針可在冠狀縫6和矢狀縫8的接合處(也 就是針刺入點(diǎn)1)停止，或可繼續(xù)推進(jìn)越過針刺入點(diǎn)1進(jìn)入額骨4上方區(qū)域，此處無骨縫線。 沿矢狀縫8逐步抽針，同時按壓注射器的活塞來遞送肉毒毒素，由此使肉毒毒素沿患者頭 骨頂部在矢狀縫8附近線性分布。在一些實(shí)例中，患者可能訴稱頭痛位于前額處。在這類情況中，例如，并且根據(jù)本 說明書的教導(dǎo)，可將肉毒毒素給予患者冠狀縫沿線附近。市售A型肉毒毒素的一個實(shí)例為BOTOX⑧。每小瓶BOTOX 含有100單位肉毒桿 菌A型毒素(純化的)、0.5mg白蛋白(人的)和0.9mg氯化鈉，為無菌真空干燥形式且無 防腐劑。一個單位對應(yīng)于計(jì)算得出的小鼠腹膜內(nèi)注射半數(shù)致死量(LD5tl)。小瓶優(yōu)選在冰箱 中于-20°C儲存，使用前則于_5°C儲存。注射時用0.9%無菌鹽水(無防腐劑)重溶。本發(fā)明范圍內(nèi)的梭菌毒素實(shí)例包括由肉毒桿菌、酪酸梭菌(Clostridium butyricum)和巴氏梭菌(Clostridium beratti)菌種制得的神經(jīng)毒素。此外，本發(fā)明的方 法使用的肉毒毒素可為選自如下的肉毒毒素A型、B型、C1型、D型、E型、F型和G型肉毒 毒素。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，給予患者的肉毒毒素是A型肉毒毒素。之所以A型肉 毒毒素是理想的是因?yàn)樗鼘θ擞泻芨叩男?，容易獲得，并且已知可通過肌內(nèi)注射局部給 藥來治療骨骼肌和平滑肌疾病。本發(fā)明還包括(a)通過細(xì)菌培養(yǎng)、毒素提取、濃縮、保存、凍干和/或重溶來獲取 或加工的梭菌神經(jīng)毒素的應(yīng)用；和/或(b)改造或重組的神經(jīng)毒素的應(yīng)用，所述改造或重 組的神經(jīng)毒素為一個或多個氨基酸或氨基酸序列通過已知的化學(xué)/生物化學(xué)氨基酸修飾 方法或通過使用已知的宿主細(xì)胞/重組載體的重組技術(shù)被有意地缺失、修飾或替換的神經(jīng) 毒素，以及通過上述方法制備的神經(jīng)毒素的衍生物或片段。這些神經(jīng)毒素變體保留了抑制 兩個或更多個神經(jīng)元之間神經(jīng)傳遞的能力，并且這些變體其中的一些與天然的神經(jīng)毒素相 比，可提供更長持續(xù)時間的抑制作用，或者可提供對暴露于神經(jīng)毒素的神經(jīng)元的更強(qiáng)的結(jié) 合特異性。這些神經(jīng)毒素變體可通過如下方式選出使用可鑒別出具有所需的抑制神經(jīng)傳 遞生理效應(yīng)的神經(jīng)毒素的常規(guī)分析法來篩選變體。用于本發(fā)明的肉毒毒素可以凍干、位于真空壓力下的容器中的真空干燥形式或以 穩(wěn)定液體的形式儲存。在凍干之前，肉毒毒素可與藥用賦形劑、穩(wěn)定劑和/或載體(例如白 蛋白)結(jié)合。凍干后的物質(zhì)可以用鹽水或水重溶以形成用于根據(jù)本發(fā)明方法給予患者的、 含有肉毒毒素的溶液或復(fù)合物。
根據(jù)所公開的本發(fā)明，針對在一條骨縫線沿線附近局部給藥而選定的肉毒毒素量 可根據(jù)例如頭痛的嚴(yán)重程度、所治療的頭痛的類型、所選肉毒毒素的溶解性以及患者的年 齡、性別、體重和健康狀況的標(biāo)準(zhǔn)而改變。確定合適的給藥途徑和劑量的方法一般是由主治 醫(yī)師根據(jù)各個病例來確定。這些確定方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是常規(guī)的(參見，例如， Harrison' s Principles of Internal Medicine (1998), Anthony Fauci 等人編著，第 14 版，由 McGraw Hill 出版)。下列非限制性實(shí)施例為本領(lǐng)域技術(shù)人員提供本發(fā)明范圍內(nèi)的具體的選擇和治療 方法，但并不意在限制本發(fā)明。在下列實(shí)施例中，梭菌神經(jīng)毒素非全身性給藥的各種模式為 患者特異性的，并通過例如注射或經(jīng)皮給藥來實(shí)現(xiàn)。進(jìn)一步考慮了本發(fā)明公開的教導(dǎo)下的 控釋植入物的植入——也就是說在頭痛處或接近該處的至少一條骨縫線的沿線附近和以 內(nèi)——也可以提供有益治療效果。實(shí)施例1一名22歲的女性(職業(yè)為女演員)表現(xiàn)出與偏頭痛一致的頭痛病史。一個月中至 少一半的天數(shù)中她會頭痛。這些疼痛主要在頭的兩側(cè)額-顳區(qū)，枕骨-頂骨區(qū)疼痛的程度較 輕。所述疼痛具有搏動性。頭痛期間這些區(qū)域的頭皮感到觸痛。她的頭痛與明顯的抑郁相 關(guān)。她對多種藥物治療沒有響應(yīng)，包括將肉毒毒素注射至降眉間肌、皺眉肌(corrugator)、 客頁肌(frontalis)、聶頁肌(temporalis)禾口枕肌(occipitalis muscles)。在她簽署同意書后，使用下述注射技術(shù)用肉毒毒素對她進(jìn)行治療。使用A型肉毒毒素(Β0Τ0Χ. )，用無防腐劑的生理鹽水重溶100單位A型肉毒毒 素(B0T0X )，1CC/100單位。準(zhǔn)備2支Icc注射器，每支中有50單位肉毒毒素。觸診并 標(biāo)出骨縫線。分開頭發(fā)用酒精清潔頭皮。使用1.5英寸的27號針，將針沿骨縫線、基本上 平行于頭骨表面插入。第一個注射點(diǎn)在她頭部左側(cè)骨縫尖端，冠狀縫6和鱗縫16在此處會 合(如圖1中以針刺入點(diǎn)22所示例)。將針向上首先沿冠狀縫6插入，然后逐步抽出并同 時按壓活塞，這樣就在她頭部左側(cè)沿冠狀縫6以線性連續(xù)方式遞送了 15單位。然后，使用 同一個刺入點(diǎn)，將針沿鱗縫線16重置方向，用類似方法給予A型肉毒毒素。在她的頭部右 側(cè)用相同的方法重復(fù)上述過程，由此總共給予60單位A型肉毒毒素(BOTOX )。注意不要 刺穿骨膜，這樣被認(rèn)為會引起劇烈頭痛?；颊吣芎芎玫啬褪苌鲜鲞^程，并于6周后復(fù)診。現(xiàn) 在她保持表情肌肉(muscles of expression)的全部活動能力并且可繼續(xù)表演。她的頭痛 在頻率和強(qiáng)度方面都有減輕，她的頭皮觸痛也減輕了。此外，她留意到她的抑郁也減輕了。實(shí)施例2一位37歲的首席財(cái)務(wù)官向他的醫(yī)生訴稱，過去的兩個月中頭痛約每三天折磨一 次他的頭。這名患者稱他在前額和頭后部感覺到疼痛。他將疼痛描述為一種緊繃的感覺，就 好像他的頭被鉗子夾住似的。醫(yī)師決定在患者的冠狀縫6和人字縫10沿線附近給予A型肉 毒毒素(DYSP0RT )。使用A型肉毒毒素(DYSP0RT )，用Iml氯化鈉注射液B. P. (0.9%) 重溶500單位(DYSP0RT )。準(zhǔn)備兩支Icc注射器，每支含有250單位(5ml溶液)A型肉 毒毒素。觸診并繪出頭骨的骨縫線——這里指患者的冠狀縫6和人字縫10。分開頭發(fā)用酒 精清潔頭皮。用1. 5英寸的27號針，將針在針刺入點(diǎn)1 (如圖3所示例)、基本上平行于頭 骨表面插入，并側(cè)向向下沿冠狀縫6，首先沿頭骨左側(cè)然后沿頭骨右側(cè)推進(jìn)。如上文詳述，對 于每種情況(左側(cè)和右側(cè))都逐步抽出針，并同時按壓活塞，這樣就在針刺入點(diǎn)1左右兩側(cè)的每側(cè)冠狀縫6沿線附近以線性連續(xù)方式遞送了 125單位A型肉毒毒素。類似地，繪出患者的人字縫10，分開頭發(fā)，將含有250單位的注射器的針在刺入點(diǎn) 5(圖2所示例的)、基本上平行于頭骨表面向下沿患者頭骨左側(cè)沿人字縫10以全長插入， 然后逐步抽出，并同時按壓活塞，這樣就在左側(cè)人字縫10沿線附近以連續(xù)線性方式遞送了 125單位A型肉毒毒素，然后沿人字縫線10重置針的方向，這次是頭骨右側(cè)，利用同一個針 刺入點(diǎn)5，類似地沿右側(cè)人字縫線10以線性連續(xù)方式遞送125單位A型肉毒毒素。兩個月后患者回到醫(yī)生診室復(fù)診?；颊叻Q自從接受沿其骨縫線的肉毒神經(jīng)毒素給 藥以來，兩個月中他僅僅經(jīng)歷了兩次頭痛，并且這兩次頭痛與他之前經(jīng)歷的頭痛相比時長 變短和強(qiáng)度變?nèi)?。?shí)施例3一名沈歲的酒吧招待向她的醫(yī)生訴稱，在過去4年中每月遭受一次頭痛。盡管她 通常使用各種鎮(zhèn)痛藥(阿司匹林，布洛芬等)，對她來說這樣的方法似乎隨著時間的推移變 得越來越不管用。之前將A型肉毒毒素注射到額肌和顳肌的在先治療并不起作用。在記下 整個患者病史并做了身體檢查后，她的醫(yī)生得出這樣的結(jié)論患者遭受的是激素頭痛，也就 是頭痛似乎隨著她月經(jīng)的到來而同時發(fā)生。通過詢問患者頭痛通常出現(xiàn)的部位，醫(yī)生得知痛處位于她的頭的頂部和兩側(cè)。因 此，醫(yī)生決定根據(jù)本發(fā)明公開內(nèi)容的教導(dǎo)給予肉毒毒素。醫(yī)生在患者矢狀縫線8和鱗縫線 16沿線附近進(jìn)行B型肉毒毒素(MY0BL0C )給藥。繪出患者的矢狀縫線8和鱗縫線16(她 頭部一側(cè)一條)，用外用酒精清潔頭皮。用一支2英寸的27號針，將針在患者頭部左側(cè)的針 刺入點(diǎn)22 (例如)、基本上平行于頭骨表面插入，并向后在鱗縫16沿線附近推進(jìn)，避免刺穿 骨膜。在針幾乎全長插入之后，將其逐步抽出，并同時按壓活塞，這樣就在鱗縫16沿線附近 以線性連續(xù)方式遞送了 500單位B型肉毒毒素。在患者頭部右側(cè)進(jìn)行同樣的給藥，這樣就 在頭骨右側(cè)沿鱗縫16以線性連續(xù)方式遞送了另500單位B型肉毒毒素。類似地，醫(yī)生在矢 狀縫8沿線附近給予1000單位的B型肉毒毒素，方法如下在刺入點(diǎn)17 (在圖3中所示例 的)插入注射器的針，由此將針基本上平行于頭骨表面插入，并向患者的前額/前面推進(jìn)， 并且一旦在針插入大約其全長后，又一次逐步抽出針，并同時按壓活塞，這樣就在矢狀縫8 沿線附近以線性連續(xù)方式遞送了 1000單位B型肉毒毒素。在6個月之后的隨訪中，患者稱 她不再遭受與月經(jīng)期同時出現(xiàn)的激素頭痛。在隨訪之后的兩個月，她回到醫(yī)生的辦公室， 稱與月經(jīng)同時出現(xiàn)的頭痛又出現(xiàn)了，之后對她進(jìn)行了又一輪與之前相同的B型肉毒毒素注 射，這樣的注射又一次減輕并緩解了患者頭痛約六個月。實(shí)施例4一名M歲的家庭婦女向她的醫(yī)生訴說，自從她丈夫退休后她就遭受著叢集性頭 痛的困擾，所述集叢性頭痛伴隨有發(fā)生在其頭部左側(cè)、左耳周圍的強(qiáng)烈脈動性/搏動性疼 痛，以及鼻塞和左眼流淚。決定讓她在頭部左側(cè)鱗縫16沿線附近接受100單位A型肉毒毒 素(BOTOX: ·)。在5ml無防腐劑的鹽水中重溶100單位A型肉毒毒素(BOTOX )。繪出 并標(biāo)記患者左側(cè)鱗縫16，用酒精清潔針刺入點(diǎn)22(圖1所示例)。將含有肉毒毒素A的針 (1. 5英寸，30號)插入針刺入點(diǎn)22，將其定位并向后插入并穿過患者的顱皮下組織、顱肌肉 和腱膜筋膜，基本上平行于頭骨并處于左側(cè)鱗縫16沿線附近。在針以其全長插入后，沿鱗 縫線16逐步抽出針，并同時按壓注射器活塞，從而遞送100單位A型肉毒毒素，這樣就使得肉毒神經(jīng)毒素沿患者左側(cè)鱗縫16以線性連續(xù)方式皮下分布。肉毒毒素給藥后4個月隨訪 時，患者稱自從給予所述神經(jīng)毒素后她不再頭痛，也沒有過多的流淚，她的鼻子也通暢了。實(shí)施例5一名32歲的建筑工人向他的醫(yī)生訴說，自從兩年前工作時摔倒并傷及他的C4-5 椎骨后，他就一直遭受被診斷為頸源性頭痛的頭痛困擾。結(jié)果，患者頸部活動范圍受限，并 且頭痛位于其頭骨后面下方部分。醫(yī)生決定沿患者人字縫10的至少一部分以一個倒“V” 字形并以疊加式地給予100單位A型肉毒毒素(BOTOX )，從患者矢狀縫8和人字縫10在 其頭骨后部會合的尖端處(如圖5所示例的)出發(fā)，向下沿對角地沿人字縫線10推進(jìn)。在 一種洗液載體中重溶100單位A型肉毒毒素(BOTOX )。醫(yī)生繪出患者的人字縫10，相應(yīng) 地分開患者的頭發(fā)，用擦拭涂敷器(swab applicator)向患者頭皮沿人字縫10 (形狀為倒 “V”字形)長度方向局部地施用所述含肉毒毒素的洗液載體。三個月后患者返回，并稱自從沿其骨縫線局部施用肉毒毒素后他只遭受過一次頸 源性頭痛。此外，患者注意到，自從施用肉毒毒素后他頸部活動范圍擴(kuò)大，先前的與過度向 左轉(zhuǎn)動頭部時伴隨的頭痛不再出現(xiàn)。肉毒毒素可用任何由主治醫(yī)師決定的合適方法進(jìn)行給藥。本說明書公布的給藥 方法允許向選定的一條或多條目標(biāo)骨縫線局部給予神經(jīng)毒素。給藥方法包括如上文所述 的注射含有神經(jīng)毒素的溶液或組合物，也可以包括在目標(biāo)骨縫線沿線附近內(nèi)植入一個控釋 系統(tǒng)，所述系統(tǒng)可控地釋放神經(jīng)毒素。這種控釋系統(tǒng)可減少重復(fù)注射的需要。肉毒毒素生 物活性在一種組織內(nèi)的擴(kuò)散似乎隨劑量而定，并可分級實(shí)現(xiàn)(Jankovic J.，et al Therapy With Botulinum Toxin, Marcel Dekker, Inc. , (1994)，page 150)。因此,可控制肉毒毒 素的擴(kuò)散來減少可影響患者認(rèn)知能力的潛在不良副作用。例如，可施用所述神經(jīng)毒素以使 得該神經(jīng)毒素主要影響那些被認(rèn)為是參與頭痛和/或炎癥發(fā)生的神經(jīng)系統(tǒng)，而不會對其他 神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生負(fù)面不良作用時?？梢罁?jù)本文提供的教導(dǎo)，通過經(jīng)皮途徑(例如，如本領(lǐng)域所 知，以乳膏、貼劑或洗劑載體形式施用梭菌毒素；參見，例如，2002年7月11日提交的序列 號為10/194，805的美國專利申請公布文本No. 20040009180A1，該申請以引用方式納入本 文)在患者最靠近頭痛部位的至少一條骨縫線的長度或部分長度上局部地給予肉毒毒素。此外，當(dāng)上文述及具體骨縫線時，應(yīng)理解本發(fā)明的教導(dǎo)可用于頭骨的任意 骨縫線，這可由職業(yè)主治醫(yī)師確定。例如，依據(jù)本發(fā)明公開內(nèi)容的教導(dǎo)可利用的示 例性有用骨縫線包括，但不局限于例如，額鼻縫(sutura frontonasal is)、冠狀縫 (sutura coronal is, coronal suture)、客頁上合頁 (sutura frontomaxilaris) > ￠1 客頁 (sutura sphenofrontal is) > ^] M (sutura frontozygomatica) > (sutura sq uamosa,又名 sq uamous suture)、客頁淚縫(sutura frontolacrimalis) > 蝶麟縫 (sutura sphenosquamosa)、人字 (sutura lambdoidea,又名 lambdoid suture)、 頂乳突縫(sutura parietomastoidea)、蝶觀縫(sutura sphenozygomatica)、麟乳 突縫(sutura squamomastoidea)、枕乳突縫(sutura occipitmastoidea)淚頌縫 (sutura lacrimomaxilIaris) > iM M (sutura temporozygomatic^)、| ㈱ (sutura nasomaxillaris)禾口(sutura zygomaticomaxillaris)。通過針進(jìn)行的注射作為一個給藥實(shí)例已被詳述，而通過植入物的肉毒神經(jīng)毒素 的局部給藥可提供局部的高治療水平的毒素。能向靶標(biāo)長期局部遞送梭菌毒素的控釋聚合物允許在所需骨縫線處進(jìn)行有效給藥。一種合適的植入物，如名稱為“神經(jīng)毒素植入物 (Neurotoxin Implant) ”的美國專利No. 6，306, 423容許通過一種控釋聚合物，例如在一條 骨縫線附近，將化學(xué)治療劑導(dǎo)向目標(biāo)組織。使用的植入物聚合物優(yōu)選疏水性聚合物，以保護(hù) 含神經(jīng)毒素的聚合物在將神經(jīng)毒素——此處沿著頭骨的至少一條目標(biāo)骨縫線——釋放到 目標(biāo)組織環(huán)境前免于水誘導(dǎo)的分解作用。本文公布的本發(fā)明治療頭痛的方法有很多優(yōu)點(diǎn)，包括以下1.避免現(xiàn)行與注射技術(shù)有關(guān)的表層結(jié)構(gòu)的溢流。2.使得可以向其中神經(jīng)末梢可接觸的患者頭骨骨表面進(jìn)行患者特異的藥物遞送， 所述藥物例如肉毒神經(jīng)毒素。3. 一般而言，因?yàn)榻o藥是集中性的，所需劑量較少。4.減少了不良副反應(yīng)例如不良肌無力發(fā)生的可能。本文引用的各種出版物、專利和/或參考文獻(xiàn)都以引用方式全文納入本說明書。盡管詳盡描述了本發(fā)明的某些優(yōu)選方法，但也可以有本發(fā)明范圍內(nèi)的其他實(shí)施方 案、形式(versions)和修改方案。例如，各種各樣的神經(jīng)毒素都可有效地用于本發(fā)明的方 法。此外，本發(fā)明包括減輕頭痛的給藥方法，其中兩種或更多種神經(jīng)毒素(例如，兩種或更 多種肉毒毒素)被同時或依次給予至有需要的患者的至少一條骨縫線沿線附近。例如，可 給予A型肉毒毒素(例如，BOTOX )直到喪失臨床應(yīng)答或有中和抗體產(chǎn)生，然后給予所用 BOTOX單位數(shù)的約40到50倍量的B型肉毒毒素(MY0BL0C )。或者，可將任意兩種或更多種肉毒毒素血清型A-G的組合進(jìn)行局部給藥，來控制 所需治療效果的發(fā)作和持續(xù)時間。此外，非神經(jīng)毒素化合物可在神經(jīng)毒素給藥之前、同時或 之后給藥以達(dá)到證實(shí)的輔助效果，例如在所述神經(jīng)毒素——例如肉毒毒素——開始發(fā)揮其 療效之前有加強(qiáng)的或起效更快的去神經(jīng)支配作用。一種肉毒毒素可以單獨(dú)給藥也可以與一 種或多種其他肉毒毒素血清型組合給藥。所述肉毒毒素可以通過重組的方法制取，或者是 一種雜合肉毒毒素。本發(fā)明在其范圍內(nèi)還包括神經(jīng)毒素(例如肉毒毒素)在制備用于治療頭痛患者的 藥物中的用途，包括將梭菌毒素給予位于患者頭骨至少一條骨縫線附近的神經(jīng)這一步驟， 其中該給藥可減輕頭痛的至少一種癥狀。此外，應(yīng)理解并不是目標(biāo)骨縫線的全長都需要施 用肉毒毒素，亦即，給予肉毒毒素的骨縫線的量/長度由主治醫(yī)師根據(jù)各個病例確定。因此，下面權(quán)利要求的精神和范圍不應(yīng)受到上文所述對優(yōu)選實(shí)施方案的描述的限 制。
權(quán)利要求
1.一種治療遭受頭痛的患者的方法，包括向位于患者頭骨的至少一條骨縫線附近的神 經(jīng)給予梭菌毒素的步驟，其中所述給予梭菌毒素減輕頭痛的至少一種癥狀，從而治療所述 遭受頭痛的患者。
2.權(quán)利要求1的方法，還包括確定所述的至少一條骨縫線的位置的步驟。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述頭痛選自竇性頭痛、緊張性頭痛、偏頭痛、叢集性頭痛 和頸源性頭痛。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述的至少一條骨縫線選自額縫、鱗縫、枕乳突縫、冠狀 縫、人字縫和矢狀縫。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述梭菌神經(jīng)毒素是一種肉毒毒素。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述肉毒毒素選自Α、Β、(;、0、Ε、Ρ和G型肉毒毒素。
7.權(quán)利要求5的方法，其中所述肉毒毒素是A型肉毒毒素。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述頭痛是陣發(fā)性偏頭痛或慢性偏頭痛。
9.一種治療有需要的患者的頭痛的方法，包括以下步驟a)確定與患者頭痛相關(guān)的疼痛部位；b)確定患者的至少一條相對于其他骨縫線而言與疼痛部位最接近的骨縫線的位置；和c)對患者給予一種梭菌神經(jīng)毒素，其中所述給藥是在患者至少一條骨縫線沿線附近并 且沿骨縫線長度方向上線性連續(xù)并且基本上疊加地進(jìn)行，從而治療患者的頭痛。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述梭菌神經(jīng)毒素是一種選自如下的肉毒毒素A、B、C1, D、E、F和G型肉毒毒素。
11.權(quán)利要求9的方法，其中梭菌神經(jīng)毒素是A型肉毒毒素。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述給藥步驟包括如下步驟將含有A型肉毒毒素的注 射器的針插入針刺入點(diǎn)，將所述針沿所述至少一條骨縫線定位，以便將A型肉毒毒素沿所 述至少一條骨縫線線性給藥。
13.權(quán)利要求11的方法，其中所述的至少一條骨縫選自額縫、鱗縫、冠狀縫、人字縫、 枕乳突縫和矢狀縫。
14.權(quán)利要求12的方法，還包括在針刺入點(diǎn)將針重新定位以沿第二條骨縫線線性沉積 肉毒毒素的步驟。
15.一種用于減輕頭痛的方法，包括向有需要的患者給予A型肉毒毒素的步驟，其中將 所述A型肉毒毒素給藥至患者的一條骨縫線附近，并且該給藥在七天內(nèi)減輕頭痛，并且頭 痛保持減輕約2到6個月。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述骨縫選自額縫、鱗縫、冠狀縫、人字縫、枕乳突縫和 矢狀縫。
17.權(quán)利要求15的方法，其中A型肉毒毒素的給藥量為約5單位到約4000單位。
18.權(quán)利要求15的方法，其中所述A型肉毒毒素的給藥步驟還包括利用刺穿頭部皮下 組織、頭部肌肉和腱膜筋膜并且位于患者的骨縫線沿線附近的針，以及逐漸沿所述骨縫線 抽出針，同時遞送A型肉毒毒素，從而使所述A型肉毒毒素在骨縫線沿線附近進(jìn)行線性的皮 下連續(xù)分布。
19.權(quán)利要求15的方法，其中將A型肉毒毒素給予至額縫、鱗縫、冠狀縫、人字縫和矢狀縫中的兩種或更多種。
20.權(quán)利要求15的方法，其中通過使用一個針刺入點(diǎn)在至少兩條骨縫線沿線附近給予A型肉毒毒素。
全文摘要
本發(fā)明使用患者特異性界標(biāo)來治療頭痛。一方面，本發(fā)明涉及向遭受頭痛的患者給予梭菌毒素，例如肉毒神經(jīng)毒素，其中肉毒毒素的給藥部位是基于患者頭骨的至少一條骨縫線。
文檔編號A61K38/48GK102056620SQ200980120887
公開日2011年5月11日 申請日期2009年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月3日
發(fā)明者A·M·布盧門菲爾德 申請人:阿勒根公司