專利名稱：：一種奧拉西坦脂質體注射劑的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種奧拉西坦脂質體注射劑，屬于醫(yī)藥
技術領域：
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背景技術：
：奧拉西坦，化學名稱為4-羥基-2-氧代-l-吡咯烷乙酰胺，分子式CA。N^3分子量158.16，為吡拉西坦的類似物，可改善老年性癡呆和記憶障礙癥患者的記憶和學習功能。機理研究結果提示，奧拉西坦可促進磷酰膽堿和磷酰乙醇胺合成，提高大腦中ATP/ADP的比值，使大腦中蛋白質和核酸的合成增加。奧拉西坦注射液于1987年12月首次在意大利上市，目前國外已廣泛應用于臨床，在我國隨著人口老年化趨勢的不斷加快，市場對本品的需求明顯加大。專利文獻CN1424034A公開了一種奧拉西坦注射液制劑的制備方法及制品，以葡萄糖或氯化鈉為等滲調節(jié)劑，按注射液的常規(guī)生產(chǎn)工藝制備奧拉西坦注射液，該制品長期放置顏色加深，而且pH值變化較大。專利文獻CN1287788C公開了一種奧拉西坦凍干粉針劑的制備方法及制品，以山梨醇或枸櫞酸或枸櫞酸鈉或乳糖酸或乳糖酸鈉為賦形劑，常規(guī)方法冷凍干燥制得，該制品成形性差，復溶很慢。專利文獻CN101152175A公開了一種奧拉西坦納米粒和藥用輔料制成的奧拉西坦制劑，該專利所用輔料很難購買，而且副作用較大，制備工藝也很復雜。脂質體研究是當前一個十分活躍的領域，脂質體最早是指天然脂類化合物懸浮在水中形成的具有雙層封閉結構的泡囊，現(xiàn)在也可以由人工合成的磷脂化合物來制備。20世紀60年代末Rahman等人首先將脂質體作為藥物載體應用，近年來，隨著生物技術的不斷進展，脂質體制備工藝逐步完善，脂質體作用機制進一步闡明，加之脂質體適合體內降解、無毒性和無免疫原性，特別是大量試驗數(shù)據(jù)證明脂質體作為藥物載體可以提高藥物治療指數(shù)、降低藥物毒性和減少藥物副作用，并減少藥物劑量等優(yōu)點。然而脂質體普遍存在容易聚集、融合，導致包封藥物泄漏，因此在工業(yè)上制備符合穩(wěn)定性要求的藥物脂質體實非易事，制藥領域具有一般經(jīng)驗的技術人員清楚地知道在制備藥物脂質體方面面臨各種困難，所有這些絕非簡單的理論可以預期解決的，需要克服許多難題。因此需要想方設法地優(yōu)化脂質體處方，以獲得穩(wěn)定性優(yōu)良的脂質體?！N穩(wěn)定性好、制備簡單、毒副作用小的奧拉西坦注射劑成為當今臨床需要的理想制劑。
發(fā)明內容本發(fā)明人經(jīng)過長期認真地研究，經(jīng)過大量的篩選實驗，發(fā)現(xiàn)將靶向給藥系統(tǒng)的一種新劑型脂質體應用于奧拉西坦注射劑中，具有穩(wěn)定性好、毒副作用小、制備簡單的優(yōu)點，適合于臨床需要，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明的目的在于提供一種奧拉西坦脂質體注射劑，包含如下重量份組分奧拉西坦1份磷脂3-18份4上述所述的制備方法中，有機溶劑選自乙醇、甲醇、丙酮、異丙醇、叔丁醇、正丁醇、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一種或幾種，優(yōu)選為體積比為4:l的丙酮和甲醇的混合溶劑。有機溶劑的量根據(jù)加入的磷脂、膽固醇和吐溫80的量進行選擇，以完全溶解上述成分為最低量的要求，優(yōu)選是基于三者總重量計的1:5-9(g/ml)體積的有機溶劑。上述所述的制備方法中，步驟(2)中攪拌時間為30-60min，轉速為400_800r/min，采用組織搗碎機高速勻質乳化20-40min，轉速為15000r/min;微孔濾膜的孔徑為0.3-0.8iim，優(yōu)選為0.45iim。上述所述的制備方法中，步驟(3)溶解奧拉西坦的水的量為能夠使奧拉西坦完全溶解即可，優(yōu)選于基于奧拉西坦重量計的1:5-10重量的水。作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的奧拉西坦脂質體注射劑的制備方法，包括如下步驟(1)將磷脂、膽固醇和吐溫80溶于基于三者重量計的1:5-9(g/ml)體積的有機溶劑中，混合均勻，于旋轉薄膜蒸發(fā)器上減壓除去有機溶劑，制得磷脂膜；(2)向制得的磷脂膜中加入pH值5.0-6.0的緩沖溶液，振搖，攪拌30-60min，轉速400-800r/min，使磷脂膜完全水化，采用組織搗碎機高速勻質乳化20-40min，轉速為15000r/min，0.45ym微孔濾膜過濾，制得空白脂質體混懸液；(3)將奧拉西坦溶于基于奧拉西坦重量計的1:5-10重量的水中，0.45iim微孔濾膜過濾，濾液加入空白脂質體混懸液中，在50-6(TC溫度下攪拌30-60min，再加入滲透壓調節(jié)劑，攪拌使其溶解，然后冷卻到室溫，制得奧拉西坦脂質體注射劑。在本發(fā)明的奧拉西坦脂質體注射劑的制備方法中，所采用的旋轉薄膜蒸發(fā)器，也稱為刮板薄膜蒸發(fā)器或機械攪拌薄膜蒸發(fā)器，本領域目前已知的這類薄膜蒸發(fā)器都可以用于本發(fā)明，例如可以采用無錫市雪浪發(fā)酵工程設備廠生產(chǎn)的LG2.5型離心式刮板薄膜蒸發(fā)器，也可以采用無錫市軍嶂制藥設備廠生產(chǎn)的LG-4型高效旋轉薄膜蒸發(fā)器等。在本文中，應當理解當多種組分含量為重量份時，并非將每種組分的含量限定完全為某一確定重量份，而應當理解為，這種重量份數(shù)體現(xiàn)的是各組分之間的重量比例關系，比如在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的奧拉西坦脂質體注射劑包含"奧拉西坦1份，磷脂4.8份，膽固醇3.2份，吐溫801.3份......"，應當理解為按照重量計，所述奧拉西坦脂質體注射劑中所包含的奧拉西坦磷脂膽固醇吐溫80=i:4.8:3.2:i.3，所有符合該重量比例關系的技術方案都包括在上述技術方案的范圍內。在本文中，如果沒有特別地說明，含量或用量都以重量份計；如果沒有特別的說明，所采用的裝置、儀器、原料、物質、用量、方法、時間、溫度及其它條件等都為本領域眾所周知的，或者是本領域技術人員根據(jù)本申請的描述結合現(xiàn)有技術可以獲得的。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明提供的奧拉西坦脂質體注射劑及其制備方法，具有意想不到的效果，主要優(yōu)點如下穩(wěn)定性高本發(fā)明奧拉西坦被包裹于脂質體內，該脂質體的配方是經(jīng)過長期研究篩選得到的，其注射劑長期放置后溶液的顏色和PH值均沒有明顯變化，極大提高了穩(wěn)定性；6包封率高本發(fā)明的脂質體制劑的包封率通常為87%_92%，最高可達到96%，顯著地高于按照常規(guī)方法制備的奧拉西坦脂質體注射劑和其他脂質體制劑，長期放置不會發(fā)生滲漏現(xiàn)象，保證了產(chǎn)品質量；副作用小本發(fā)明的藥物載體脂質體體內降解、無毒性和無免疫原性，而且可以提高藥物治療指數(shù)、降低藥物毒性和減少藥物副作用；制備簡單本發(fā)明選用混合有機溶劑，與使用單一有機溶劑相比，溶解性能更好，溶解更快，并且更容易減壓蒸發(fā)除去。具體實施例方式本發(fā)明將采用如下具體實施例進行詳細描述，應當理解，這些實施例僅僅是用于闡述的目的，而并不以任何方式限制本發(fā)明的保護范圍。本領域技術人員在本說明書的教導下，可以在不違背本發(fā)明的精神和主旨下，對本發(fā)明的實施方案作出多種修飾或改變，這些都將包括在本發(fā)明的范圍內。輔你l1検鵬儒船身寸誦先格處方奧拉西坦100g大豆卵磷脂480g膽固醇320g吐溫80130g氯化鈉45g磷酸鹽緩沖溶液4000g制備工藝(1)將480g大豆卵磷脂、320g膽固醇和130g吐溫80溶于5000ml體積比4:1的丙酮和甲醇的混合溶劑中，混合均勻，于旋轉薄膜蒸發(fā)器上減壓除去混合溶劑，制得磷脂膜；(2)向制得的磷脂膜中加入pH值5.0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液4000g，振搖，攪拌30min，轉速800r/min，使磷脂膜完全水化，采用組織搗碎機高速勻質乳化20min，轉速為15000r/min，0.45ym微孔濾膜過濾，制得空白脂質體混懸液；(3)將100g奧拉西坦溶于lOOOg水中，O.45ym微孔濾膜過濾，濾液加入空白脂質體混懸液中，在6(TC溫度下攪拌30min，再加入45g氯化鈉，攪拌使其溶解，然后冷卻到室溫，制得奧拉西坦脂質體注射劑。實施例2奧拉西坦.脂質體灃射劑的制備處方奧拉西坦100g蛋黃卵磷脂350g膽固醇120g吐溫8080g葡萄糖250g枸櫞酸鹽緩沖溶液4200g制備工藝(1)將350g蛋黃卵磷脂、120g膽固醇和80g吐溫80溶于3000ml體積比4:1的丙酮和甲醇的混合溶劑中，混合均勻，于旋轉薄膜蒸發(fā)器上減壓除去混合溶劑，制得磷脂膜；(2)向制得的磷脂膜中加入pH值6.0的枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖溶液4200g，振搖，攪拌60min，轉速400r/min，使磷脂膜完全水化，采用組織搗碎機高速勻質乳化40min，轉速為15000r/min，0.45ym微孔濾膜過濾，制得空白脂質體混懸液；(3)將100g奧拉西坦溶于800g水中，0.45iim微孔濾膜過濾，濾液加入空白脂質體混懸液中，在5(TC溫度下攪拌60min，再加入250g葡萄糖，攪拌使其溶解，然后冷卻到室溫，制得奧拉西坦脂質體注射劑。輔你l3桂鵬儒船身寸誦先格處方奧拉西坦100g氫化蛋黃卵磷脂700g膽固醇500g吐溫80300g甘油500g枸櫞酸鹽緩沖溶液4000g制備工藝(1)將700g氫化蛋黃卵磷脂、500g膽固醇和300g吐溫80溶于12000ml體積比4:1的丙酮和甲醇的混合溶劑中，混合均勻，于旋轉薄膜蒸發(fā)器上減壓除去混合溶劑，制得磷脂膜；(2)向制得的磷脂膜中加入pH值5.5的枸櫞酸_枸櫞酸鈉緩沖溶液4000g，振搖，攪拌40min，轉速600r/min，使磷脂膜完全水化，采用組織搗碎機高速勻質乳化30min，轉速為15000r/min，0.45ym微孔濾膜過濾，制得空白脂質體混懸液；(3)將100g奧拉西坦溶于500g水中，0.45iim微孔濾膜過濾，濾液加入空白脂質體混懸液中，在55t:溫度下攪拌40min，再加入500g甘油，攪拌使其溶解，然后冷卻到室溫，制得奧拉西坦脂質體注射劑。對比例1奧拉西坦.fl旨質體灃射劑的制備處方奧拉西坦100g大豆卵磷脂480g膽固醇320g泊f各沙姆188130g氯化鈉45g磷酸鹽緩沖溶液4000g按照與實施例1相同的方法制備對比例1的奧拉西坦脂質體注射劑，其中用泊洛沙姆188代替吐溫80。對比例2奧拉西坦.fl旨質體灃射劑的制備8處方奧拉西坦100g蛋黃卵磷脂250g膽固醇90g吐溫8040g葡萄糖250g枸櫞酸鹽緩沖溶液4200g按照與實施例2相同的方法制備對比例2的奧拉西坦脂質體注射劑，其中蛋黃卵磷脂、膽固醇和吐溫80的量均在本發(fā)明重量組份范圍的下限之外。i擺列1鄉(xiāng)輔測驚取實施例1-3和對比例1-2制備的脂質體注射劑，采用高效液相色譜法檢測的奧拉西坦的總含量為M。取1.5g葡聚糖凝膠G-50，用p朋.8磷酸鹽緩沖液浸泡溶脹12h以上，裝入層析柱內(200X10mm)，用上述磷酸鹽緩沖液沖洗平衡，取實施例1_3和對比例1_2的樣品1ml，加入層析柱頂部，用磷酸鹽緩沖液50ml洗脫，流速1.lml/min，收集的洗脫液加入破膜劑(乙醇苯甲醇=8:1)50ml，混勻，高效液相色譜法檢測的奧拉西坦的含量M"包封率％=Ml/MX100%。表1包封率測定結果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由以上結果可知，按照本發(fā)明的處方及方法制備得到的脂質體注射劑包封率顯著地高于分別與本發(fā)明的組分、用量不同的對比例制得的脂質體包封率，實施例與對比例的包封率存在顯著性差異，本發(fā)明的產(chǎn)品符合生產(chǎn)要求，而對比例制備的產(chǎn)品不符合。試驗例2粒徑的檢測取實施例1-3和對比例1-2制備的脂質體注射劑，采用顯微圖像分析儀測定脂質體的粒徑分布，實施例l-3樣品顯球狀、橢圓狀，粒徑均勻，范圍為120-260nm，對比例1_2樣品形狀不定，雜亂無章，大小不一，粒徑不均勻，范圍>500nm。表2粒徑檢測結果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>試驗例3穩(wěn)定性試驗將以上實施例l-3和對比例l-2制備的樣品與上市的奧拉西坦注射液(廣東世信藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號200811066)和專利文獻CN1424034A制備的樣品在高溫4(TC、相對濕度75%±5%條件下6個月，進行加速試驗考察，結果見表3。表3加速試驗結果時間樣品性狀pH值滲漏率(%)有關物質(%)含量(％)o月實施例1無色澄明液體5.0/0.2299.9實施例2無色澄明液體6.0/0.25100.2實施例3無色澄明液體5.5/0.24100.1對比例1無色澄明液體5.0/0.2699.8對比例2無色澄明液體6.0/0.2499.5120]CN1424034A無色澄明液體5.50.2899.4上市注射液無色澄明液體5.3/0.3399.6實施例1無色澄明液體5,01.80.2299.9實施例2無色澄明液體6.02.20.25100.1實施例3無色澄明液體5.51.50.24100.11月只十比例1無色澄明液體4.85.50.3299.5對比例2無色澄明液體5.76.70.3399.2CN1424034A無色澄明液體5.3/0.3599.0上市注射液無色澄明液體5.0/0.4099.3實施例1無色澄明液體5.02.10.2399.8實施例2無色澄明液體5.92.50.25100.0實施例3無色澄明液體5.41.60.25100.02月對比例1無色澄明液體4.511.40.3699.2對比例2無色澄明液體5.58.10.3799.0CN1424034A無色澄明液體5.0/0.4198.6上市注射〉夜無色澄明液體4.7/0.4899.0實施例1無色澄明液體4.92.70.2399.8實施例2無色澄明液體6.03.10.26100.0實施例3無色澄明液體5.42.10.2799.93月2十比例1無色澄明液體4.315.90.4799.0對比例2無色澄明液體5.312.40.4898.6CN1424034A微黃色澄明液體4.7/0.5698.3上市注射液微黃色澄明液體4.5/0.5798.5實施例1無色澄明液體5.03.00.2499.7實施例2無色澄明液體5.93.40.2799.9實施例3無色澄明液體5.52.60.2899.86月對比例1微黃色澄明液體4.028.70.6198.25于比例2微黃色澄明液體5.021.30.6597.8CN1424034A微黃色澄明液體4.4/0.6997.6上市注射液微黃色澄明液體4.1/0.7197.9由以上結果發(fā)現(xiàn)加速6個月后，對比例1-2、專利文獻CN1424034A和上市注射液制備的樣品性狀顏色發(fā)生變化，pH值下降較大，有關物質明顯升高，含量明顯降低；而本發(fā)明實施例1-3制備的樣品各項檢測指標均沒有明顯的變化。另外，對比例l-2制備的樣品滲漏率逐漸增大，最后達到30%左右，滲漏嚴重；而本發(fā)明實施例1-3制備的樣品滲漏率很低，幾乎沒有滲漏現(xiàn)象。充分說明了本發(fā)明制備的樣品長期貯存質量穩(wěn)定性更好，奧拉西坦、磷脂、膽固醇、和吐溫80的特定比例的組合具有意想不到的效果。i擺列4棘性微異常毒性檢查依據(jù)2005年版藥典附錄XIC異常毒性檢查法，將本發(fā)明實施例1-3制備的樣品用氯化鈉溶液稀釋成一定濃度的供試品溶液，注入符合試驗要求的小鼠體內，結果小鼠在48小時內均沒有死亡現(xiàn)象，說明本品異常毒性符合規(guī)定。熱源檢查依據(jù)2005版藥典附錄XID熱源法進行檢查，結果符合規(guī)定。權利要求一種奧拉西坦脂質體注射劑，其特征在于包含如下重量份組分奧拉西坦1份磷脂3-18份膽固醇1-12份吐溫800.5-7份滲透壓調節(jié)劑0.1-8份緩沖溶液30-50份。2.根據(jù)權利要求1所述的奧拉西坦脂質體注射劑，其特征在于包含如下重量份組分分奧拉西坦磷脂膽固醇吐溫80滲透壓調節(jié)劑緩沖溶液3.根據(jù)權利要求1奧拉西坦磷脂膽固醇吐溫80滲透壓調節(jié)劑緩沖溶液l份3.5-7份1.2-5份0.8-3份0.45-5份40-42份。-2所述的奧拉西坦脂質體注射劑，其特征在于包含如下重3:份組l份4.8份3.2份1.3份0.45份40份。4.根據(jù)權利要求l-3任一項所述的奧拉西坦脂質體注射劑，其特征在于磷脂選自大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、大豆磷脂酰甘油、蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、蛋黃磷脂酰甘油中的一種或幾種。5.根據(jù)權利要求l-4任一項所述的奧拉西坦脂質體注射劑，其特征在于滲透壓調節(jié)劑選自氯化鈉、葡萄糖、甘油、甘露醇、丙二醇、木糖醇、山梨醇中的一種或幾種。6.根據(jù)權利要求l-5任一項所述的奧拉西坦脂質體注射劑，其特征在于緩沖溶液選自磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、枸櫞酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液中的一種或幾種。7.—種制備權利要求l-6任一項所述的奧拉西坦脂質體注射劑的方法，其特征在于包括如下步驟(1)將磷脂、膽固醇和吐溫80溶于有機溶劑中，混合均勻，于旋轉薄膜蒸發(fā)器上減壓除去有機溶劑，制得磷脂膜；(2)向制得的磷脂膜中加入緩沖溶液，振搖，攪拌使磷脂膜完全水化，高速勻質乳化，微孔濾膜過濾，制得空白脂質體混懸液；(3)將奧拉西坦溶于水，微孔濾膜過濾，濾液加入空白脂質體混懸液中，在保溫下攪拌，再加入滲透壓調節(jié)劑，攪拌使其溶解，然后冷卻到室溫，制得奧拉西坦脂質體注射劑。8.根據(jù)權利要求7所述的奧拉西坦脂質體注射劑的制備方法，其特征在于有機溶劑選自乙醇、甲醇、丙酮、異丙醇、叔丁醇、正丁醇、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一種或幾種。9.根據(jù)權利要求78所述的奧拉西坦脂質體注射劑的制備方法，其特征在于步驟(1)中磷脂、膽固醇和吐溫80三者總重量與有機溶劑的比例(重量/體積)為l:5-9(g/ml);步驟(2)中攪拌時間為30-60min，轉速為400-800r/min，采用組織搗碎機高速勻質乳化20-40min，轉速為15000r/min;步驟(3)中，奧拉西坦與水的重量比為1:5_10，微孔濾膜的孔徑為0.3-0.8iim。10.權利要求l-6任一項所述的奧拉西坦脂質體注射劑在制備用于治療腦損傷及引起的神經(jīng)功能缺失、記憶與智能障礙等癥藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明公開了一種奧拉西坦脂質體注射劑，其特征在于包含如下重量份組分1份奧拉西坦、3-18份磷脂、1-12份膽固醇、0.5-7份吐溫80以及適量的滲透壓調節(jié)劑和緩沖溶液。所述奧拉西坦注射劑具有穩(wěn)定性好、包封率高、毒副作用小、制備簡單的優(yōu)點，適合于臨床需要。文檔編號A61P25/28GK101732251SQ20091025641公開日2010年6月16日申請日期2009年12月25日優(yōu)先權日2009年12月25日發(fā)明者楊明貴申請人:海南美蘭史克制藥有限公司