專利名稱：一種治療骨性關(guān)節(jié)炎的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，具體涉及一種由治療有效量的原
料藥硫酸軟骨素和青藤堿或其可藥用鹽制成的藥物組合物，屬于藥物制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
骨性關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis, OA)是以關(guān)節(jié)軟骨退變和關(guān)節(jié)周圍形成骨質(zhì)增生為病 理特征，主要表現(xiàn)在軟骨膠原纖維斷裂、關(guān)節(jié)基質(zhì)崩解、軟骨細(xì)胞明顯減少等關(guān)節(jié)軟骨 蝕損改變，是影響人類健康最常見的關(guān)節(jié)疾患之一。骨關(guān)節(jié)炎患者常見于中老年人的慢 性退行性骨關(guān)節(jié)病，隨桌我國(guó)人口的老齡化，OA的患病率也程逐年上升的趨勢(shì)。
青藤堿是從植物青風(fēng)藤sinomenium acutum Rehd.Et Wils中提取的單體生物堿， 臨床多用其鹽酸鹽，具有明顯抗炎、抗免疫、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、降血壓、促組胺釋放、抗心 心律失常等藥理作用。青藤堿多用于各種類型的風(fēng)濕疾病的治療，如對(duì)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的 治療具有較好的療效。國(guó)內(nèi)已有正清風(fēng)痛寧片、鹽酸青藤堿片、鹽酸青藤堿注射液、青 藤堿緩釋制劑等用于臨床，這些制劑治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等各種風(fēng)濕病及心律失常取得 了明顯療效。李國(guó)棟等(李國(guó)棟，李家邦，等.青藤堿治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎100例臨床研 究.中國(guó)中醫(yī)急癥[J].2007， 16(4): 416-421)在用青藤堿治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者時(shí)，其 總有效率可以達(dá)到93%，療效非常顯著。然后，青藤堿很少用于治療骨性關(guān)節(jié)炎患者， 在這用于治療骨性關(guān)節(jié)炎的相關(guān)藥理藥效研究也很少。楊惠琴等(楊惠琴、陳禮榮.青 藤堿對(duì)膝骨骨性關(guān)節(jié)炎兔關(guān)節(jié)液及血清白細(xì)胞介素IP含量的影響.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào) [J].200S， 6(12): 1275-1279)在用青藤堿治療兔膝骨性關(guān)節(jié)炎時(shí)發(fā)現(xiàn)，青藤堿可以減少兔 關(guān)節(jié)液及血清中的白細(xì)胞介素1P的含量，從而緩解關(guān)節(jié)病變的發(fā)生，但在對(duì)其軟骨損 傷情況是發(fā)現(xiàn)，經(jīng)注射青藤堿治療5周后，其關(guān)節(jié)軟骨仍呈現(xiàn)中度糜爛，軟骨蒼白且較 軟，對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎兔的軟骨損傷修復(fù)不太理想。 硫酸軟骨素(chondroitin sulfate CS)是一類硫酸化的糖胺聚糖，其分子結(jié)構(gòu)主要 由D-葡萄糖醛酸與2-乙酰氨基-2-脫氧-硫酸-D-半乳糖組成。根據(jù)硫酸基在N-乙酰 基-D-氨基半乳糖上的位置可分為硫酸軟骨素A、硫酸軟骨素C等，商品CS是從豬、牛 和雞等軟骨提取的，相對(duì)分子質(zhì)量在10X103 50X1()3之間。在歐美日等國(guó)，CS主要作 為保健食品或藥品，用于防治冠心病、心絞痛、心肌梗死、關(guān)節(jié)炎等疾病。硫酸軟骨素 作為軟骨基質(zhì)成分之一，認(rèn)為給予外源性軟骨成分硫酸軟骨素，不但可以直接補(bǔ)充軟骨 基質(zhì)成分，減輕軟骨降解，并可通過反饋機(jī)制促進(jìn)軟骨細(xì)胞代謝活性，恢復(fù)軟骨細(xì)胞基 質(zhì)分泌功能，還能夠抑制關(guān)節(jié)內(nèi)多種膠原酶活性，對(duì)軟骨其保護(hù)作用，在狗創(chuàng)傷性關(guān)節(jié) 炎研究中發(fā)現(xiàn)，關(guān)節(jié)內(nèi)注射硫酸軟骨素可抑制軟骨降解，明顯降低軟骨中膠原酶活性， 促進(jìn)軟骨基質(zhì)的修復(fù)，效果慢，但復(fù)發(fā)率較低，對(duì)軟骨損傷的修復(fù)較好。
在研究中，我們發(fā)現(xiàn)，將青藤堿與硫酸軟骨素組合制成復(fù)方制劑，將其用于骨 關(guān)節(jié)炎的治療，對(duì)骨關(guān)節(jié)炎軟骨損傷的修復(fù)效果要強(qiáng)于任何單一成分，可起到協(xié)同增強(qiáng) 對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的治療作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種由硫酸軟骨素和青藤堿或其可藥用鹽組成的復(fù)方制 劑，本發(fā)明研究人員經(jīng)動(dòng)物藥理研究發(fā)現(xiàn)，青藤堿與硫酸軟骨素合用，對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎的 治療可起到更好的效果，甚至可逆轉(zhuǎn)受損軟骨。 本發(fā)明復(fù)方制劑主要由原料藥硫酸軟骨素及青藤堿或其可藥用鹽制成，二者重
量配比為硫酸軟骨素青藤堿或其可藥用鹽為8 : i-i : i。 本發(fā)明中，原料藥硫酸軟骨素與青藤堿或其可藥用鹽的重量比優(yōu)選為
4:i-i: i。 本發(fā)明中，所用的原料藥青藤堿的可藥用鹽可以是其藥學(xué)上可接受的有機(jī)或無
機(jī)酸鹽，比如鹽酸鹽、硫酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽等，優(yōu)選為鹽酸鹽，具體 為鹽酸青藤堿。 本發(fā)明中，除含有原料藥硫酸軟骨素和青藤堿或其可藥用鹽外，還可以含有其
它一些各種劑型適合的制藥輔料，比如可以含有填充劑、稀釋劑、崩解劑、黏合劑、抗 氧劑、緩釋基質(zhì)等的一種或多種，根據(jù)制成制劑目的的不同配以布不同輔料組合，以制 成合格的劑型。 本發(fā)明合適組合物合適的制劑單元形式，可以是口服固體制劑或注射用給藥制
劑。口服固體制劑可以是片劑、膠囊劑、滴丸劑、顆粒劑中的任意一種。注射用給藥制 劑可以小水針劑、粉針劑、輸液中的任意一種。 本發(fā)明的制劑單元形式，優(yōu)選為注射制劑，更優(yōu)選為注射用小水針或粉針劑。
具體實(shí)施例 制備實(shí)施例 實(shí)施例1 硫酸軟骨素青藤堿片 處方(IOOO片處方量) 硫酸軟骨素400g，青藤堿50g，乳糖140g，聚維酮10g，硬脂酸鎂2g， 50%的乙 醇，適量。 將硫酸軟骨素、青藤堿、乳糖分別粉碎成細(xì)粉，混合均勻，聚維酮溶解于乙醇 中，作為粘合劑，噴灑到已混好的細(xì)粉中，制軟材、制粒，6(TC干燥，整粒，加入硬脂 酸鎂，壓制成1000片，即得。
實(shí)施例2 硫酸軟骨素青藤堿膠囊(1000個(gè)膠囊處方) 硫酸軟骨素300g，青藤堿50g，淀粉50g，聚維酮10g， 50%乙醇適量 分別將硫酸軟骨素、青藤堿、淀粉粉碎過篩，混合均勻，以聚維酮的乙醇液為
粘合劑制軟材，制粒，6(TC干燥，整粒，將干燥整好的顆粒裝入1000個(gè)膠囊囊殼中，即得。 實(shí)施例3 硫酸軟骨素青藤堿膠囊包衣片(1000片處方)
硫酸軟骨素350g，青藤堿50g，微晶纖維素50g，聚維酮10g，硬脂酸鎂5g，糖 衣粉40g， 50%的乙醇，適量。 將硫酸軟骨素、青藤堿、微晶纖維素分別粉碎成細(xì)粉，混合均勻，聚維酮溶解 于乙醇中，作為粘合劑，噴灑到已混好的細(xì)粉中，制軟材、制粒，6(TC干燥，整粒，加 入硬脂酸鎂，壓制成1000片，備用；糖衣粉分散于50%的乙醇中，將壓制好的片置包衣
鍋中，將糖衣粉緩慢噴灑于片劑表面進(jìn)行包衣，即得糖衣片。
實(shí)施例4 硫酸軟骨素青藤堿崩解片(1000片處方) 硫酸軟骨素350g，青藤堿50g，微晶纖維素50g，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮100g，聚 維酮10g，微粉硅膠5g， 50%的乙醇，適量。 將硫酸軟骨素、青藤堿、微晶纖維素分別粉碎成細(xì)粉，混合均勻，聚維酮溶解 于乙醇中，作為粘合劑，噴灑到已混好的細(xì)粉中，制軟材、制粒，6(TC干燥，整粒，將 整好的干顆粒與交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮混合均勻，再加入微粉硅膠，混勻，壓制成IOOO 片，即得崩解片。
實(shí)施例5 硫酸軟骨素鹽酸青藤堿小水針劑(1000個(gè)小水針處方)
硫酸軟骨素20g，鹽酸青藤堿10g，注射用水，適量 將硫酸軟骨素、鹽酸青藤堿溶于適量注射用水中，超聲、攪拌使其完全溶解， 加入5g注射用活性炭，6(TC水浴中保持30min， 0.22um的微孔濾膜過濾，再用截留分子 量為8萬的超濾膜超濾，補(bǔ)足注射用水至2000ml，分裝于5ml的安瓿中，每支裝2ml，封
口，滅菌即得小水針劑。
實(shí)施例6 硫酸軟骨素鹽酸青藤堿小水針劑(1000個(gè)小水針處方)
硫酸軟骨素20g，鹽酸青藤堿20g，注射用水適量
制備工藝同實(shí)施例5。
實(shí)施例7 硫酸軟骨素鹽酸青藤堿粉針劑1000個(gè)小水針處方) 硫酸軟骨素20g，鹽酸青藤堿5，甘露醇75g，注射用水適量將硫酸軟骨素、鹽 酸青藤堿、甘露醇溶解于適量的注射用水中，超聲、攪拌使其完全溶解，加入5g注射用 活性炭，6(TC水浴中保持30min，趁熱于0.22um的微孔濾膜過濾，再用截留分子量為8萬 的超濾膜超濾，補(bǔ)足注射用水至2000ml，分裝于10ml西林瓶中，每支裝2ml，冷凍干燥 中凍干，即得粉針。 為更進(jìn)一步說明本發(fā)明的有益效果，以下從藥理藥效具體實(shí)施方式
來說明本發(fā) 明。 本發(fā)明組合物注射制劑(實(shí)施例5)對(duì)兔骨關(guān)節(jié)炎的治療作用 動(dòng)物健康成年新西蘭兔(購(gòu)于沈陽醫(yī)學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心)雌雄不限，體重 2.5-3.0kg，共45只，隨機(jī)編號(hào)為1-45。
關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射藥物 硫酸軟骨素注射液(吉林省輝南長(zhǎng)龍生化藥業(yè)股份有限公司)，2.2mg/kg/次，每只注射給藥0.3ml 鹽酸青藤堿注射液(湖南正清制藥集團(tuán)股份有限公司)，2.8mg/kg/次，每只注射 給藥0.3ml(硫酸軟骨素+鹽酸青藤堿)注射液，分為三個(gè)劑量組分別為低(1.0+0.5)mg/kg、 中(2.0+1.0)mg/kg、高(4.0+2.0)mg/kg劑量組，每只注射給藥0.3ml。 建立兔關(guān)節(jié)炎模型全部動(dòng)物均在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的無菌條件下手術(shù)，每只兔兩側(cè) 關(guān)節(jié)施行手術(shù)，術(shù)前常規(guī)去毛、備皮、消毒及鋪巾，以20mg/kg耳靜脈注射3X戊巴比妥 鈉麻醉動(dòng)物，在髕腱內(nèi)側(cè)作一長(zhǎng)約2cm的直切口，依次切開皮膚、皮下組織、筋膜等， 縱行切開關(guān)節(jié)囊，在直視下切斷內(nèi)側(cè)副韌帶，前、后交叉韌帶，由此引起的膝關(guān)節(jié)不穩(wěn) 定在手術(shù)臺(tái)上以側(cè)方應(yīng)力試驗(yàn)和抽屜試驗(yàn)證實(shí)，同時(shí)切除內(nèi)側(cè)半月板，關(guān)節(jié)腔一慶大霉 素生理鹽水沖洗干凈后，逐層縫合關(guān)節(jié)囊和傷口。術(shù)后不固定傷肢，分籠喂養(yǎng)，強(qiáng)迫其 運(yùn)動(dòng)(每天驅(qū)趕其至少運(yùn)動(dòng)30min)，并按每天15mg/kg的劑量肌注慶大霉素，連續(xù)肌注4 天。 術(shù)后4周開始關(guān)節(jié)腔內(nèi)分別注射藥物硫酸軟骨素、鹽酸青藤堿、(硫酸軟骨素+ 鹽酸青藤堿)0.3ml，空白組注射生理鹽水0.3ml，每隔3天注射一次。1-15號(hào)兔的右膝關(guān) 節(jié)注射硫酸軟骨素(B組)、左膝關(guān)節(jié)注射(硫酸軟骨素+鹽酸青藤堿)中劑量組(E組)； 6-30號(hào)兔右膝關(guān)節(jié)注射鹽酸青藤堿(C組)，左膝關(guān)節(jié)注射(硫酸軟骨素+鹽酸青藤堿)高 劑量組(F組)；31-45號(hào)兔右膝關(guān)節(jié)注射生理鹽水(A組)，左膝關(guān)節(jié)注射(硫酸軟骨素+ 鹽酸青藤堿)小劑量組(D組)。 取材與標(biāo)本制備標(biāo)本取材均為雙膝，每組動(dòng)物給藥4周后麻醉，從髕上囊部 位注射入關(guān)節(jié)腔lml無菌PBS，反復(fù)活動(dòng)關(guān)節(jié)后，仔細(xì)抽取灌洗液，做好標(biāo)記后立即置 于-7(TC冰箱中保存?zhèn)溆?，然后空氣栓塞處死?dòng)物，切開關(guān)節(jié)腔，將游離的關(guān)節(jié)和關(guān)節(jié)囊 固定于中性多聚甲醛固定液中。 觀察指標(biāo)標(biāo)本于10%多聚甲醛中固定3天后，流水沖洗12小時(shí)，內(nèi)、外股 骨髁軟骨面用蒸餾水洗凈后，用濾紙輕輕檫干，用毛筆將墨汁刷于軟骨表面，半分鐘后 用蒸餾水將墨汁沖去，將上述過程再重復(fù)一遍，參照Freemont分度法將骨關(guān)節(jié)炎分為三 級(jí)I度，關(guān)節(jié)軟骨表面變得不規(guī)則，淺層軟骨細(xì)胞周圍出現(xiàn)嗜染程度的下降，基質(zhì)染色 不均；II度，關(guān)節(jié)軟骨出現(xiàn)纖維化，部分區(qū)域出現(xiàn)垂直于軟骨表面的裂隙，軟骨細(xì)胞出 現(xiàn)排列不均、聚集的現(xiàn)象III度，關(guān)節(jié)軟骨破裂，基質(zhì)染色不均，軟骨細(xì)胞數(shù)量減少。
— 軟骨損傷的治療作用 具體結(jié)果見表l。表1顯示，治療4周后，陰性對(duì)照組I級(jí)O只，1I只3只， m級(jí)12只，軟骨損傷嚴(yán)重，給予不同治療藥物后(硫酸軟骨素、鹽酸青藤堿及二者合 用)對(duì)兔骨性關(guān)節(jié)炎均能起到一定的治療作用，與陰性對(duì)照組相比治療具有顯著性差異(P <0.01)。然而，將硫酸軟骨素與鹽酸青藤堿組合用于治療骨性關(guān)節(jié)炎，發(fā)現(xiàn)其合用較單 用硫酸軟骨素或鹽酸青藤堿對(duì)軟骨損傷的治療效果更佳，對(duì)骨關(guān)節(jié)炎軟骨的改善作用明 顯好于單用硫酸軟骨素或鹽酸青藤堿，差異具有顯著性(P〈0.05)。合用中劑量組與高劑 量組效果相當(dāng)，改善無顯著性差異。
表1對(duì)軟骨損傷情況的治療作用
6<formula>formula see original document page 7</formula> 二對(duì)關(guān)節(jié)囊中關(guān)節(jié)液IL-113含量的影響 關(guān)節(jié)囊洗液炎性因子檢查采用雙抗夾心ABC-ELISA(酶聯(lián)免疫吸附， enzymelinked immunosorbent assay)方法，每份關(guān)節(jié)囊洗液，分別取10ul進(jìn)行IL-1 P蛋白 表達(dá)分析，應(yīng)用美國(guó)Biosource公司提供的ELISA試劑盒，用抗免IL-1 P單抗包被與酶標(biāo) 板上，標(biāo)準(zhǔn)品中的兔IL-113與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗免IL-ie，形成免疫復(fù)合物 連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記streptavidin與生物素結(jié)合，加入酶底物OPD，出現(xiàn)黃 色，加終止?jié)饬蛩?，顏色變深，?92nm處測(cè)OD值，兔IL-1 P含量與OD值成正比， 通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本兔IL-113濃度。關(guān)節(jié)液中IL-113含量測(cè)定結(jié)果見表2。
表2對(duì)OA兔關(guān)節(jié)囊中IL-113含量的影響
與對(duì)照組相比，*P<0.05， **P < 0.01 ;與硫酸軟骨素或鹽酸青藤堿相比，#P < 0.05 從上表結(jié)果可以看出，各治療組對(duì)OA兔關(guān)節(jié)IL-113的含量都有一定的降低作 用，青藤堿對(duì)OA兔關(guān)節(jié)IL-113的降低作用強(qiáng)于硫酸軟骨素。本發(fā)明組合物對(duì)OA兔關(guān) 節(jié)IL-113的降低作用隨劑量的增加而增強(qiáng)，呈劑量依賴關(guān)系，其中小劑量組的效果與元 素按青藤堿相當(dāng)，中劑量組、高劑量組對(duì)OA兔關(guān)節(jié)液IL-113的降低作用與鹽酸青藤堿、 硫酸軟骨素組相比，降低效果更為明顯，差異具有顯著性。
-':.i::.二 d
瑜酸軟,累 2.21
本Sl明低列S組 1+0.5
0.3ml 15 0 3 12
2.2 15 4 9 2
2.8 15 3 7 5
H0.5 15 8 6 1
2+1 15 10 5 0
4+2 15 11 4 0
A B c D E F
權(quán)利要求
一種治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，其特征是主要由治療有效量的原料藥硫酸軟骨素和青藤堿或其可藥用鹽制成。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征是按重量比計(jì)，硫酸軟骨素與青藤堿或其可藥用鹽的比例為8 : i i : i。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征是按重量比計(jì)，硫酸軟骨素與青藤堿或其可藥用鹽的比例為4 : i i : i。
4. 根據(jù)權(quán)利要求i至3中任意一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其特征是所述的青藤堿 的可藥用鹽為其鹽酸鹽。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征是所述的組合物的藥物制劑形式為口服固體制劑或注射制劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征是組合物的制劑形式為注射制劑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征是所述的注射制劑為注射液或粉針。
8. 權(quán)利要求1至3中任意一權(quán)利要求所述藥物組合物在制備具有治療骨關(guān)節(jié)炎藥物中 的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療骨性關(guān)節(jié)炎的組合物，具體由治療有效量的原料藥硫酸軟骨素和青藤堿或其可藥用鹽組成，本發(fā)明藥物組合物可用于治療關(guān)節(jié)炎疾病，尤其是對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎的治療效果更佳，甚至可逆轉(zhuǎn)受損的軟骨。
文檔編號(hào)A61K31/737GK101690728SQ20091018755
公開日2010年4月7日 申請(qǐng)日期2009年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月23日
發(fā)明者關(guān)屹, 閆冬 申請(qǐng)人:沈陽億靈醫(yī)藥科技有限公司;關(guān)屹