專利名稱：：艾迪制劑在制備治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種艾迪制劑的新應(yīng)用，具體是涉及一種艾迪制劑在制備治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：隨著時(shí)代的發(fā)展，我國將逐步進(jìn)入老齡社會(huì)，同時(shí)伴隨著一個(gè)不可忽視的問題一一以震顫、僵直、行動(dòng)遲緩為主要癥狀的神經(jīng)系統(tǒng)慢性進(jìn)行性疾病和一種持續(xù)性高級(jí)神經(jīng)功能活動(dòng)障礙性疾病正嚴(yán)重威脅著人類的健康。其中最具代表性的病癥帕金森氏病和老年癡呆癥的發(fā)病率在逐年增高。帕金森氏病和老年癡呆癥同屬神經(jīng)退行性疾病。神經(jīng)退行性疾病(Neurodegenerativedisease)是一種大腦和脊髓的細(xì)胞神經(jīng)元喪失的疾病狀態(tài)。大腦和脊髓由神經(jīng)元組成，神經(jīng)元有不同的功能，如控制運(yùn)動(dòng)，處理感覺信息，并做出決策。大腦和脊髓的細(xì)胞一般是不會(huì)再生的，所以過度的損害可能是毀滅性的，不可逆轉(zhuǎn)的。神經(jīng)退行性疾病是由神經(jīng)元或其髓鞘的喪失所致，隨著時(shí)間的推移而惡化，以導(dǎo)致功能障礙。神經(jīng)退行性疾按表型分為兩組一類影響運(yùn)動(dòng)，如小腦性共濟(jì)失調(diào)；一類影響記憶以及相關(guān)的癡呆癥。帕金森氏病又稱震顫麻痹，是中老年人最常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變中腦部位"黑質(zhì)"中的細(xì)胞發(fā)生病理性改變后，多巴胺的合成減少，抑制乙酰膽堿的功能降低，則乙酰膽堿的興奮作用相對增強(qiáng)。兩者失衡的結(jié)果便出現(xiàn)了"震顫麻痹"。帕金森氏病是我國高發(fā)病率的致死致殘性疾病，目前資料顯示，帕金森氏病發(fā)病人群中男性稍高于女性，迄今為止對本病的治療均為對癥治療，尚無根治方法可以使變性的神經(jīng)細(xì)胞恢復(fù)。帕金森氏病的臨床表現(xiàn)為1、運(yùn)動(dòng)障礙。可以概括為運(yùn)動(dòng)不能進(jìn)^f亍隨意運(yùn)動(dòng)啟動(dòng)困難。運(yùn)動(dòng)減少自發(fā)、自動(dòng)運(yùn)動(dòng)減少，運(yùn)動(dòng)幅度減少。運(yùn)動(dòng)徐緩隨意運(yùn)動(dòng)執(zhí)行緩慢?；颊哌\(yùn)動(dòng)遲緩，隨意動(dòng)作減少，尤其是開始活動(dòng)時(shí)表現(xiàn)動(dòng)作困難吃力、援慢。做重復(fù)動(dòng)作時(shí)，幅度和速度均逐漸減弱。有的患者書寫時(shí)，字越寫越小，稱為"小寫癥"。有些會(huì)出現(xiàn)語言困難，聲音變小，音域變窄。吞咽困難，進(jìn)食飲水時(shí)可出現(xiàn)嗆咳。有的患者起身時(shí)全身不動(dòng)，持續(xù)數(shù)秒至數(shù)十分鐘，叫做"凍結(jié)發(fā)作"。2、震顫。表現(xiàn)為緩慢節(jié)律性震顫，往往是從一側(cè)手指開始，波及整個(gè)上肢、下肢、下頜、口唇和頭部。典型的震顫表現(xiàn)為靜止性震顫，就是指病人在靜止的狀況下，出現(xiàn)不自主的顫抖。主要累及上肢，兩手像搓丸子那樣顫動(dòng)著，有時(shí)下肢也有震顫。個(gè)別患者可累及下頜、唇、舌和頸部等。每秒鐘46次震顫，幅度不定，精神緊張時(shí)會(huì)力口劇。不少患者還伴有5~8次/秒的體位性震顫。部分患者沒有震顫，尤其是發(fā)病年齡在70歲以上者。3、強(qiáng)直。就是肌肉僵直，致使四肢、頸部、面部的肌肉發(fā)硬，肢體活動(dòng)時(shí)有費(fèi)力、沉重和無力感，可出現(xiàn)面部表情僵硬和眨眼動(dòng)作減少，造成"面具臉"，身體向前彎曲，走路、轉(zhuǎn)頸和轉(zhuǎn)身動(dòng)作特別緩慢、困難。行走時(shí)上肢協(xié)同擺動(dòng)動(dòng)作消失，步幅縮短，結(jié)合屈曲體態(tài)，可使患者以碎步、前沖動(dòng)作行走，我們把它稱為"慌張步態(tài)"。隨著病情的發(fā)展，穿衣、洗臉、刷牙等日常生活活動(dòng)都出現(xiàn)困難。另外，有的患者還可出現(xiàn)植物神經(jīng)功能紊亂，如油脂臉、多汗、垂涎、大小便困難和直立性低血壓，也可出現(xiàn)憂郁和癡呆的癥狀。老年癡呆癥，又稱、阿爾茨海,默病(Alzheimer'sdisease,AD)是發(fā)生在老年期及老年前期的一種原發(fā)性退行性腦病，指的是一種持續(xù)性高級(jí)神經(jīng)功能活動(dòng)障礙，即在沒有意識(shí)障礙的狀態(tài)下，記憶、思維、分析判斷、視空間辨認(rèn)、情緒等方面的障礙。其特征性病理變化為大腦皮層萎縮，并伴有(3-淀粉樣蛋白(P-amyloid,(3-AP)沉積，神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillarytangles,NFT),大量記憶性神經(jīng)元凄i目減少，以及老年斑(senileplaque，SP)的形成。目前尚無特效治療或逆轉(zhuǎn)疾病進(jìn)展的治療藥物。老年癡呆患者的日常生活能力下降，他們不認(rèn)識(shí)配偶、子女，穿衣、吃飯、大小便均不能自理；有的還有幻聽幻覺，給自己和周圍的人帶來無盡的痛苦和煩惱。老年癡呆病人的平均生存期為5.5年，老年癡呆癥繼心血管病、腦血管病和癌癥之后，成了老人健康的"第四大殺手"。老年癡呆的癥狀表現(xiàn)為1.記憶障礙。老年性癡呆發(fā)病最初的癥狀是記憶障礙，主要表現(xiàn)為近期記憶的健忘。而對過去的、曾有深刻印象的事件即所謂遠(yuǎn)期記憶保持較好。但是，隨著疾病發(fā)展，遠(yuǎn)期記憶也會(huì)喪失，會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)構(gòu)、虛構(gòu)及妄想。記憶障礙最嚴(yán)重時(shí)，表現(xiàn)為不認(rèn)識(shí)自已的親人，甚至自已都不認(rèn)識(shí)。2.對時(shí)間和地點(diǎn)的定向力逐漸喪失。3.計(jì)算能力障礙。輕者計(jì)算速度明顯變慢，嚴(yán)重時(shí)連簡單的加減計(jì)算也無法進(jìn)行，甚至安全喪失數(shù)的概念。4.理解力和判斷力下降。表現(xiàn)為對周圍的事物不能正確的理解，直接影響對事物的推理和判斷，因此不能正確地處理問題。5.語言障礙。輕者說話啰嗦內(nèi)容重復(fù)、雜亂無章，重者答非所問，內(nèi)容聞?lì)}千里，令人無法理解，或經(jīng)常自言自語，內(nèi)容支離破碎，或緘默少語，喪失閱讀能力。6.思維情感障礙。思維呈常出現(xiàn)片斷性，同時(shí)伴有情感遲鈍，對人淡漠，逐漸發(fā)展為完全茫然而無表情，或小兒樣欣快癥狀很突出。有的則出現(xiàn)幻覺，有的出現(xiàn)片斷妄想。7.個(gè)性和人格改變。多數(shù)表現(xiàn)為自私、主觀，或急躁易怒、不理智，或焦慮、多疑。還有一部分人表現(xiàn)為性;格孤僻，與發(fā)病前相比判若兩人。8.行為障礙。早期表現(xiàn)為以遺忘為主的行為障礙，中期多表現(xiàn)為與思維判斷障礙和個(gè)性人格改變相關(guān)的行為異常。9.行動(dòng)障礙。動(dòng)作遲緩，走路不穩(wěn)，偏癱，甚至臥床不起，大小便失治療腫瘤的中藥注射制劑及其制作方法"的發(fā)明專利和專利申請?zhí)枮镃N200510003151.3、名稱為"一種治療腫瘤的中藥制劑的制備方法"的發(fā)明專利中公開了用人參、斑蝥、黃芪和刺五加制備的艾迪制劑及其制備方法。雖然之前的研究表明艾迪制劑可以用于制備治療腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等多種病癥的藥物，但未見利用艾迪制劑對神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面的治療作用的專利文獻(xiàn)和研究報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種艾迪制劑在制備治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的又一目的是提供一種艾迪制劑在制備神經(jīng)退行性疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的另一目的是提供一種艾迪制劑在制備治療神經(jīng)細(xì)胞缺失疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的再一目的是提供一種艾迪制劑在制備治療帕金森氏病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的再一目的是提供一種艾迪制劑在制備治療老年癡呆癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的艾迪制劑由人參、斑蝥、黃芪和刺五加組成。主要是含有從人參、斑蝥、黃^和刺五加中提取出的具有藥用價(jià)值的提取物作為有效成分。按照重量份計(jì)算，本發(fā)明所述艾迪制劑是由中藥原料人參25-100份、斑蝥O.5-5份、黃芪50-200份和刺五加100-20(H分經(jīng)提取制備而成。優(yōu)選的配比為人參30-70份、斑蝥l-2份、黃芪75-125份、刺五加125-175份。最優(yōu)選的配比為人參50份、斑蝥1.5份、黃芪100份、刺五加150份。在應(yīng)用時(shí)，本發(fā)明的藥物可以根據(jù)需要加入一種或多種藥學(xué)上可以接受的載體，如稀釋劑、填充劑、粘合劑、賦形劑、崩解劑、表面活性劑、吸收促進(jìn)劑和潤滑劑等。前述的艾迪制劑優(yōu)選以注射劑、片劑、丸劑、月交嚢劑、顆粒劑、乳劑、溶液或懸浮劑的形式使用，更優(yōu)選為注射劑。上述劑型均可按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。前述的艾迪制劑的給藥途徑為口服、經(jīng)皮、靜脈或肌肉注射。本發(fā)明艾迪制劑的制備方法中，其有效成分提取物可以按照專利號(hào)為CN03117114.1的方法進(jìn)行提耳又，也可以按照專利號(hào)為CN200510003151.3中的方法進(jìn)行提取，還可以用常^見的方法進(jìn)行提取。本發(fā)明所述的艾迪制劑，其有效成分人參為五加科植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根，味甘、孩t苦，」微溫，具有大補(bǔ)元?dú)?，補(bǔ)脾益肺，生津益血，安神增智的功效；斑蝥為芫青科昆蟲南方大斑蝥MylabrisphalerataPallas或黃黑小斑蝥MylabriscichoriiLinnaeus的千燥體，性辛、熱，有大毒，具有破血消瘦、攻毒蝕齊的作用；黃芙為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembra腦eus(Fisch.)Bge.var.mongholocus(Bge.)或膜莢黃芪的干燥才艮，具有補(bǔ)氣固表、利尿托毒、排膿、斂瘡生肌的功效；刺五加為五加科植物刺五力口Acanthopanaxsenticosus(Rupr.etMaxim.)Harms的干燥才艮及才艮莖或莖，具有益氣健脾、補(bǔ)腎安神的作用。四者合用具有清熱解毒、消瘀散結(jié)的作用，在臨床上主要用于原發(fā)性肝癌、肺癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科惡性腫瘤的治療等。其中艾迪注射液收載于衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)20冊。艾迪制劑的活性成分為人參、斑蝥、黃芪和刺五加，人參可用于元?dú)馓撁撟C、肺脾心腎氣虛證、熱病氣虛津傷口渴及消渴證；斑蝥可用于積年頑癬、癥瘕腫塊、惡瘡死肌等；黃芪可用于氣虛乏力、食少便溏、中氣下陷、表虛自汗；刺五加可用于脾腎陽虛、體虛乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多夢等。上述四種藥物具有補(bǔ)中益氣、生津養(yǎng)血的功效，可以促進(jìn)機(jī)體生長，有抗氧化、增強(qiáng)免疫的作用。因此，艾迪制劑應(yīng)用與神經(jīng)系統(tǒng)疾病應(yīng)具有一定的療凌文。本申i青人進(jìn)一步的試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，艾迪制劑確可用于制備治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物，特別是用于制備治療帕金森氏病和老年癡呆癥的藥物。具體實(shí)施方式為了更進(jìn)一步闡述本發(fā)明并便于技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明，以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明艾迪制劑組成及制備方法，以及艾迪制劑在治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的實(shí)驗(yàn)性研究。需要說明的是以下實(shí)施例僅為闡釋本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例l:艾迪制劑的一種配方及其制備原料人參500g、斑蟊15g、黃芙1000g、刺五加1500g。制備方法取斑蝥藥材，粉碎，用400ml100%乙醇加熱回流提取5次，提耳又時(shí)間分別為2h、lh、0.5h、0.5h、0.5h，濾過，藥渣備用，提耳又液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至pH8-9，減壓回收乙醇，濾過，加水稀釋至1000ml,用12%鹽酸溶液調(diào)至pH6-7，靜置，冷藏，離心濾過，上清液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至pH8-9，備用；取人參切片，用480ml60%乙醇加熱回流提取3h，濾過，藥渣備用，提取液減壓回收乙醇，濃縮液加水至體積為150ml，上大孔吸附樹脂，加水洗脫5倍柱體積，再用80%乙醇5倍柱體積洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，濾過，備用；取黃芪、刺五加藥材，與人參、斑螯藥渣合并，加24960ml水煎煮5次，提取時(shí)間分別為3h、2h、lh、0.5h、0.5h，合并煎液，濾過，濃縮至體積為1560ml，過濾，上清液加乙醇，使含醇量達(dá)到60%,用7%氫氧化鈉溶液調(diào)pH7，冷藏，過濾，上清液再加乙醇，4吏含醇量達(dá)到60%,冷藏，過濾，回收乙醇，加水至1200ml,用12%鹽酸溶液調(diào)pH4~5，加入0.3%活性炭煮沸脫色40min,離心過濾；上清液與人參、斑蝥提取液合并，加注射用水至10000ml,調(diào)節(jié)藥液PH值為3,過濾，灌封、滅菌，即得艾迪注射制劑1000支，本品劑量為10ml/支，每支含斑蝥素(C:。H1204)為0.008~0.030mg。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)符合衛(wèi)生部藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)^L定和中國藥典2005版。實(shí)施例2:艾迪制劑抗帕金森病黑質(zhì)細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)性研究本實(shí)驗(yàn)采用6-OHDA毀損SD大鼠中腦黑質(zhì)，并同時(shí)注射艾迪注射液，應(yīng)用TH免疫組化和Tunel法，^見察艾迪注射液對黑質(zhì)神經(jīng)元的作用。1、材料及試劑l.l試驗(yàn)藥物艾迪注射液，10ml/支，按上述方法制備；6-羥基多巴胺("OHDASigma公司產(chǎn)品)；阿樸嗎啡(APOSigma/〉司產(chǎn)品)；凋亡檢測試劑盒(武漢博士德公司)。1.2試一驗(yàn)動(dòng)物健康SD大鼠，雌雄均可，體重250-300g。1.3儀器II型腦立體定位儀(上海江灣儀器廠)。2、實(shí)驗(yàn)方法2.l分組與給藥成年健康SD大鼠100只，分為5組，每組20只。即模型組；艾迪實(shí)驗(yàn)組(內(nèi)含低、中、高3個(gè)用藥劑量組)；正常對照組。模型組SD大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉(40mg.kg—1)，借助腦立體定位儀，向左側(cè)黑質(zhì)區(qū)域(SNC)和腹側(cè)被蓋區(qū)(VTA)各注射3jlil的6-0陽(3pgM廣)及3ju1生理鹽水，注射位點(diǎn)為SNC:AP:-4.8mm,ML:-1.7mm,DV:8.3mm(含顱骨厚度0.5mm)，VTA:AP:-4.8mm,ML:1.Omm,DV:8.3mm(含顱骨厚度0.5mm)。艾迪實(shí)驗(yàn)組注射3ju1的6-0HDA以及3jLil艾迪注射液(艾迪低劑量組5mg.kg—1;中劑量組10mg.kg—1;高劑量組20mgkg-1),注射區(qū)域位點(diǎn)同模型組。正常對照組注射6jul生理鹽水，注射區(qū)域、位點(diǎn)同模型組。2.2旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)5組SD大鼠按2.l給藥后第2周起每周給大鼠腹腔內(nèi)注射一次阿樸嗎啡(O.25mgkg_1，Sigma)連續(xù)3周，以誘發(fā)動(dòng)物向右側(cè)旋轉(zhuǎn)，動(dòng)物旋轉(zhuǎn)時(shí)身體偏向右側(cè)，并向右側(cè)旋轉(zhuǎn)，注藥后20min不旋轉(zhuǎn)者不再計(jì)數(shù)。2.沐材給藥后2天(每組取5只SD大鼠)、給藥后第4周(每組取15只SD大鼠)各取材1次，分別進(jìn)行Tunel和TH檢測。SD大鼠戊巴比妥鈉深度麻醉后開腦，經(jīng)左心室插管至主動(dòng)脈，快速灌注生理鹽水150ml后，用4%多聚甲醛灌注固定，取腦，后固定24h。2.4DNA末端標(biāo)i己法(Tunel)4y。多聚曱醛室溫固定30min;0.3%&02曱醇液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；PBS洗片；0.1%TritonX-100通透2min;滴加Tunel反應(yīng)混合溶液(Sigma公司)37。C孵育60min;加入轉(zhuǎn)化劑-POD37。C30min;MB顯色。2.5酪氨酸羥化酶(TH)染色腦組織石蠟冠狀切片用ABC法進(jìn)行TH單克隆抗體(Sigma公司)免疫細(xì)胞化學(xué)染色KPBS清洗3次,含O.3訂ritonX-100的0.OlmolL_1KPBS孵育30min,KPBS清洗3次，0.3訓(xùn)202曱醇液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，KPBS清洗3次，TH抗體稀釋(稀釋度1:3000)孵育48h(4。C),KPBS清洗3次，二抗稀釋液(稀釋度l:200)孵育4h(常溫下)，KPBS清洗3次，ABC復(fù)合物稀釋液(稀釋度l:200)孵育2h(常溫下)，DAB顯色，計(jì)數(shù)THP日性細(xì)胞數(shù)。2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理每組標(biāo)本連續(xù)冠狀切片并編號(hào)，采用定量病理學(xué)方法分析結(jié)果，每張切片在放大200倍鏡頭下計(jì)數(shù)，所有數(shù)據(jù)均用i士5"表示，對差異顯著性進(jìn)行方差分析，以代O.05為顯著性指標(biāo)。2.7結(jié)果2.7.1TH免疫組化結(jié)果艾迪實(shí)驗(yàn)組TH染色可見黑質(zhì)部位損毀較輕、有較多的殘存TH陽性細(xì)胞，胞漿棕褐色、有多個(gè)突起、纖維致密;6-0HDA模型組TH染色黑質(zhì)大部毀損，幾乎無殘存的TH陽性細(xì)胞；正常對照組TH染色黑質(zhì)未損毀，黑質(zhì)部位可見大量的TH陽性細(xì)胞。2.7.2旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)結(jié)果動(dòng)物術(shù)后第4周進(jìn)行旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在腹腔注射APO后30min內(nèi)艾迪實(shí)驗(yàn)組和6-OHDA模型組大鼠身體均向健側(cè)旋轉(zhuǎn)，蝽曲尾巴變硬上翹。其中艾迪實(shí)驗(yàn)組大鼠旋轉(zhuǎn)次數(shù)平均在198圈/30分；6-OHDA模型組大鼠旋轉(zhuǎn)次數(shù)平均在311圏/30分；兩者存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(代O.05)。2.7.3凋亡檢測術(shù)后第2天檢測黑質(zhì)細(xì)胞凋亡情況，艾迪實(shí)驗(yàn)組黑質(zhì)細(xì)胞凋亡較少，細(xì)胞椋黑色，可見凋亡小體；6-OHDA模型組黑質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)量較多。表l給藥第2天黑質(zhì)細(xì)胞凋亡#:量&±S,/2=5)組另'J黑質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)量艾迪低劑量組5mgkg—1546±67艾迪中劑量組10mgkg-1428±81艾迪高劑量組20mgkg—1529±746-OHDA才莫型組607±92正常對照組53±183、結(jié)論帕金森病(PD)是以黑質(zhì)紋狀體DA能神經(jīng)元缺失為特征的變性疾病，氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)被認(rèn)為是導(dǎo)致PD黑質(zhì)細(xì)胞死亡病理機(jī)制的主要因素。從以上試驗(yàn)結(jié)果可知，艾迪實(shí)驗(yàn)組TH染色結(jié)果黑質(zhì)部位損毀較輕、有較多的殘存TH陽性細(xì)胞；術(shù)后第2天黑質(zhì)細(xì)i包凋亡較少；同時(shí)旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)結(jié)果表明艾迪實(shí)驗(yàn)組和6-OHDA模型組在;f莫型鼠旋轉(zhuǎn)次數(shù)上也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(代O.05)。從凋亡細(xì)胞減少和TH神經(jīng)元^t量增多可以看出，艾迪確實(shí)具有較強(qiáng)的神經(jīng)保護(hù)作用。另外本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)艾迪不同劑量對于帕金森病DA能神經(jīng)元的保護(hù)作用不同，中劑量的作用較低劑量強(qiáng)，而高劑量的作用并沒有隨劑量提高而加強(qiáng)，結(jié)果提示，艾迪制劑對帕金森病DA能神經(jīng)元的保護(hù)作用與藥物劑量有一定關(guān)系，有待進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)為艾迪制劑應(yīng)用于臨床神經(jīng)退行性疾病的治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，說明艾迪制劑可在帕金森的治療中發(fā)揮作用。實(shí)施例3:艾迪制劑對治療神經(jīng)細(xì)胞缺失的疾病的效果1、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備選用體重300-400g大鼠，殺死部分神經(jīng)元細(xì)月包，制備左側(cè)大腦中帕金森類神經(jīng)性疾病模型。術(shù)前禁食，取右側(cè)臥位。2、動(dòng)物分組治療組將實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段成功制備的大鼠40只，隨機(jī)分為艾迪治療組I和生理鹽水對照治療組II,每組20只，其中艾迪治療組I直接注射艾迪注射液10mg'kg—1，每日一次，連續(xù)注射4周；生理鹽水對照治療組II按相同劑量和周期注射生理鹽水。分別在手術(shù)后第2、6周每組隨機(jī)抽取一半的大鼠處死，取大腦制作冰凍、石蠟切片，用于熒光觀察和免疫組織化學(xué)染色?？瞻讓φ战MIII:取20只健康大鼠，分別在與治療組相同時(shí)間點(diǎn)處死，取腦制作冰凍、石蠟切片，用于熒光觀察和免疫組織化學(xué)染色。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果觸覺刺激實(shí)驗(yàn)中，艾迪治療后2周和6周與治療前比較，觸覺功能明顯好轉(zhuǎn)。艾迪治療組I模型鼠在治療前撕去左側(cè)肢體膠布的能力很差，隨著治療時(shí)間延長，觸覺有所恢復(fù)，能撕去左側(cè)肢體膠布，且比值在增加。結(jié)果見表2。表2觸覺功能評(píng)分結(jié)果組別只數(shù)移植前I207.17±4.05%II204.86±2.56%移植后2周移植后6周23.22±3.26%42.63±5.76%12.83±2.71%18.64±5.65%III209.00±0.009.00±0.009.00±0.004、結(jié)論由以上試驗(yàn)可以看出，本發(fā)明艾迪制劑對于神經(jīng)元細(xì)胞缺失神經(jīng)性疾病是有效的，對于觸覺功能的恢復(fù)起到了積極的作用。故艾迪制劑能夠幫助神經(jīng)細(xì)胞缺失的大鼠恢復(fù)觸覺功能，從而治療神經(jīng)細(xì)胞缺失的疾病。實(shí)施例4:艾迪制劑對老年癡呆模型(AD)大鼠記憶、MAO及GSH-Px活性的影響1、才才并牛和方法1.l實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠，體重250-350g，6月大，貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2用藥及試劑艾迪注射液，按照上述實(shí)驗(yàn)例方法制備；健腦膠嚢，江西廣信藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)Z36020840;D-半乳糖注射液，西安阿爾寶生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)-0637。單胺氧化酶試劑盒，批號(hào)20070912;淀粉樣蛋白試劑盒，批號(hào)20070810;谷胱甘肽過氧化酶試劑盒，批號(hào)20070908;均由南京建成生物工程研究所提供。1.3主要實(shí)驗(yàn)儀器Morris水迷宮(貴陽醫(yī)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室)、電子天平、數(shù)顯恒溫水槽、低速離心機(jī)等。2、實(shí)驗(yàn)方法2.1動(dòng)物分組選取60只SD大鼠給予標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，隨機(jī)分為6組A組為正常對照組、B組為才莫型組、C組為健腦膠嚢組、D組為艾迪小劑量組、E組為艾迪中劑量組、F組為艾迪高劑量組，每組10只，分籠飼養(yǎng)。2.2動(dòng)物模型制備除正常對照組外，其余各組采用每天腹腔注射0.5%D-半乳糖50mg/kg,—日1次，連續(xù)6周。2.3給藥方法造模20天后開始給藥，艾迪小、中、高劑量配置為等體積液體，注射體積均為3ml/只。A、B兩組每日給予等體積3m1/只生理鹽水灌胃一次；C組每日給予健腦膠嚢O.162g/kg(相當(dāng)于臨床用量10倍)灌胃一次；D組每日給予艾迪注射液10ml/kg(IO倍于臨床用量)一次；E組每日艾迪20ml/kg(20倍于臨床用量)一次；F組每日艾迪40ml/kg(40倍于臨床用量)一次；連續(xù)給藥28d。3、觀察指標(biāo)3.1跳臺(tái)試騶r自制跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)箱，箱底鋪有銅柵作為刺激電極，箱內(nèi)右后側(cè)放置一個(gè)橡皮墊作為大鼠逃避電擊的安全區(qū)。先放入大鼠適應(yīng)5min，隨后通入70V,0,5A~0.7A電流，大鼠遭到電擊后正常反應(yīng)是跳上平臺(tái)以躲避傷害性刺激。記錄大鼠從開始通電到完全上臺(tái)所用的時(shí)間。24h后重測驗(yàn)一次以測記憶能力。3.2Morris水迷宮試驗(yàn)在水迷宮的圓形水池邊緣上等距離設(shè)置東西南北4個(gè)標(biāo)記，將水池等分。水池中加入奶粉使水渾濁，不見低于水面的平臺(tái)，每天將大鼠從4個(gè)不同分隔固定入水中各1次，直至找到并站在平臺(tái)上為止，游泳超過60s后人為將大鼠放至平臺(tái)上10s進(jìn)行訓(xùn)練。6天后正式試驗(yàn)，將平臺(tái)位置轉(zhuǎn)移到對面，記錄爬上平臺(tái)潛伏期的時(shí)間。3、3試劑盒的測定于記憶功能測定結(jié)束后第2d處死動(dòng)物，快速取出大鼠腦組織并置于冰生理鹽水中漂洗、除血跡、擦干等處理，稱重后再將腦迅速浸入冷生理鹽水中，用玻璃勻漿器在冰裕中制成10%的組織勻漿，離心lOrriin,取勻漿上清液待用。對腦組織中的MAO、AP、GSH-Px的測定嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，同時(shí)檢測(3-AP含量。4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)以(x土s)表示，以代O.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5、結(jié)果5.l各組大鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)及迷宮實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)、記憶能力的檢測結(jié)果見表3、表4。表3跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)記憶能力的比較(x土》<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注**,<0.01;<0.05表4水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注與正常組相比，*P<0.01;與模型組相比##<0.01;05;治療組間比較，A,<0.01從上述結(jié)果可知，與對照組相比模型組所用時(shí)間明顯增多，學(xué)習(xí)記憶能力有顯著性下降(代O.01),說明模型建立成功；各治療組與模型組相比，所用時(shí)間減少，學(xué)習(xí)能力均有顯著性差異(**,<0.01;*戶<0.05),說明治療有效；各治療組相比，中劑量效果最佳。5.2對AD模型大鼠腦組織MAO、(3-AP、GSH-Px酶含量的影響結(jié)果見表5。表5對AD模型大鼠腦組織MAO、P-AP、GSH-Px酶含量的影響Or土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注與正常組相比，*P<0.01;與才莫型組相比^/7〈0.01;#,<0.05;治療組間比較，<0.01從上表可知對于MAO活性和(3-AP含量，與正常組相比，模型組大鼠腦組織MAO和|3-AP的含量明顯升高(*P<0.01),說明造模成功；與模型組相比，各治療組含量不同程度降低,說明治療有效；各治療組間相比，中劑量組效果最佳(AA,<0.01),且與健腦膠嚢組無差異性；對于GSH-Px活性，與正常組相比，模型組大鼠腦組織GSH-Px含量明顯降低(*P<0.01),造模成功；與模型組相比，各治療組含量不同程度升高，說明治療有效；各治療組間相比，中劑量組效果最佳(AA^<0.01),且與健腦膠嚢組無差異性。5.3結(jié)論老年癡呆癥，即阿爾茨海默病(Alzheimer'sDisease，AD)在臨床上首先表現(xiàn)為近期記憶力降低，繼而呈現(xiàn)持續(xù)性智能衰退，其中認(rèn)知功能障礙為其核心癥狀。通過回避性跳臺(tái)和水迷宮試驗(yàn)，以及AD模型大鼠腦組織MAO、P-AP、GSH-Px酶含量的影響4全測，觀察艾迪制劑對擬AD大鼠學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能的影響，結(jié)果表明艾迪制劑可提高AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，并且能夠通過降低AD大鼠腦組織中MAO、P-AP活性，提高GSH-Px活性來治療老年癡呆癥。權(quán)利要求1、一種艾迪制劑在制備神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于該艾迪制劑由25-100重量份的人參，0.5-5重量份的斑蝥，50-200重量份的黃芪及100-200重量份的刺五加提取制備而成，以及該艾迪制劑在制備治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的艾迪制劑在制備神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述艾迪制劑在制備神經(jīng)退行性疾病藥物中的應(yīng)用。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的艾迪制劑在制備神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述艾迪制劑在制備治療神經(jīng)細(xì)胞缺失神經(jīng)性疾病藥物中的應(yīng)用。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的艾迪制劑在制備神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述艾迪制劑在制備治療帕金森氏病藥物中的應(yīng)用。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的艾迪制劑在制備神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述艾迪制劑在制備治療老年癡呆癥藥物中的應(yīng)用。6、根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的艾迪制劑在制備神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于該艾迪制劑由30-70重量份的人參，l-2重量份的斑蝥，75-125重量份的黃芪以及125-175重量份的刺五加提取制備而成。7、根據(jù)權(quán)利要求5所述的艾迪制劑在制備神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于該艾迪制劑由50重量份的人參，1.5重量份的斑蝥，100重量份的黃芪以及150重量份的刺五加提取制備而成。全文摘要本發(fā)明涉及一種艾迪制劑在制備治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的應(yīng)用，尤其是在制備治療神經(jīng)退行性疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的艾迪制劑具有較強(qiáng)的神經(jīng)保護(hù)作用，對觸覺功能的恢復(fù)有積極作用且能提高學(xué)習(xí)記憶功能。為神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供了新的治療途徑并拓展了艾迪制劑的臨床應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K36/185GK101647853SQ200910177229公開日2010年2月17日申請日期2009年9月27日優(yōu)先權(quán)日2009年9月27日發(fā)明者竇啟玲申請人:貴州益佰制藥股份有限公司