專(zhuān)利名稱(chēng)：：豬鏈球菌耐藥抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種耐藥抑制劑，尤其涉及連翹提取物的新用途，本發(fā)明還涉及由連翹提取物和阿莫西林組成的復(fù)方藥物以及它們?cè)谝种曝i鏈球菌耐藥林中的用途，屬于豬鏈球菌的防制領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：豬鏈球菌(Str印tococcus.suis)屬條件致病菌，在健康動(dòng)物鼻腔、扁桃體、上呼吸道和支氣管均有本菌存在，一定條件下，可引起腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎以及敗血癥等多種疾病類(lèi)型，嚴(yán)重者可使動(dòng)物突然死亡。豬鏈球菌病是多年來(lái)一直困擾養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要傳染病之一。根據(jù)莢膜多糖抗原的差異，可將豬鏈球菌分為35個(gè)血清型，即1-34以及1/2型，而2型豬鏈球菌是近年來(lái)引起獸醫(yī)工作者關(guān)注的人畜共患病病原。我國(guó)于1990年在廣東省首次發(fā)現(xiàn)類(lèi)似此血清型的鏈球菌存在。1998、1999、2005年先后3次從暴發(fā)急性敗血癥死亡的豬中分離到此菌。由于該菌在自然界分布廣泛，抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，血清型眾多，所以用疫苗控制該病效果不理想，現(xiàn)在臨床上普遍應(yīng)用大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)和氟喹諾酮類(lèi)等藥物進(jìn)行預(yù)防和治療。隨著大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)和氟全諾酮類(lèi)等藥物的廣泛應(yīng)用，豬鏈球菌對(duì)其耐藥性也逐漸增多。丹麥Danish獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室從1995-1996年間共分離豬鏈球菌265林，其中9.7%血清2型菌沖朱對(duì)林可霉素耐藥，12.9%對(duì)螺旋霉素耐藥，56.8°/。血清型對(duì)林可霉素及螺旋霉素產(chǎn)生耐藥性。1967-1981年Aarestr叩等在丹麥分離的2型豬鏈球菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物均敏感，而從1992-1997年分離的菌林，20.4%的菌林對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物產(chǎn)生了耐藥性，據(jù)分析這與在過(guò)去15年中養(yǎng)豬業(yè)中大量應(yīng)用泰樂(lè)菌素有關(guān)。2004年王麗平等采用瓊脂兩倍稀釋法和改良的雙紙片法，測(cè)定出獸醫(yī)臨床分離的40林豬鏈球菌對(duì)部分大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素、克林霉素、林可霉素、青霉素的體外最小抑菌濃度及紅霉素耐藥菌的耐藥表型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，豬鏈球菌對(duì)紅霉素、羅紅霉素、泰樂(lè)菌素及替米考星的耐藥率分別達(dá)72.5%、67.5%、72.5%和62.5%,對(duì)林可霉素和克林霉素的耐藥率高達(dá)65.0%和62.5%,對(duì)青霉素耐藥率為40.0%,青霉素耐藥菌林對(duì)其他藥物的交叉耐藥率顯著地高于青霉素敏感林。BinChang等分析1996-2006年間的七例豬鏈球菌的耐藥性狀況，發(fā)現(xiàn)所有菌抹對(duì)環(huán)丙沙星都敏感。2001年在波蘭分離到的鏈球菌對(duì)環(huán)丙沙星、奈啶酸、恩諾沙星的敏感率均為100°/。，對(duì)培氟沙星和恩諾沙星的敏感率分別為75.0%和83.3°/。。2005年從西班牙分離到151抹豬鏈球菌，其中98.0°/的菌林都對(duì)恩諾沙星敏感。Jose等分析了2003-2006年分離到的992林豬鏈球菌中對(duì)壹諾酮類(lèi)藥物的耐藥性，發(fā)現(xiàn)1.2°/。的菌抹對(duì)此類(lèi)藥物耐藥。2006年從歐洲各國(guó)分離到的384林豬鏈球菌對(duì)恩諾沙星的敏感率為100°/。。我國(guó)2001-2003年間在河南六個(gè)地區(qū)分離到的50林豬鏈球菌中，對(duì)環(huán)丙沙星敏感率為95.0%,對(duì)恩諾沙星敏感率為50.0°/。。M03年從浙江省一豬場(chǎng)分離到的71抹豬鏈球菌中對(duì)環(huán)丙沙星耐藥率為28.0%，對(duì)恩諾沙星耐藥率為31.0%。2003-2004年間/人河南分離的22才朱豬l連球菌，43.0%對(duì)環(huán)丙沙星耐藥，50.0%對(duì)氧氟沙星耐藥。2004年在長(zhǎng)春分離的豬鏈球菌對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥率為82.0%,2004到2005年在廣西分離到的32抹豬鏈球菌對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥率為49.0%,對(duì)恩諾沙星的耐藥率為57.0%。王麗平等分析全國(guó)不同地區(qū)的豬鏈球菌對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥性狀況時(shí)，發(fā)現(xiàn)氧氟沙星對(duì)豬源鏈球菌呈現(xiàn)較好的抗菌活性，其敏感率達(dá)63.11%,其次為環(huán)丙沙星，敏感率為53.18%,而恩諾沙星、培氟沙星和諾氟沙星的效果較差，敏感率分別為41.15%、21.15%和34.14%。2006年在湖南分離到的13抹豬鏈球菌中對(duì)環(huán)丙沙星的壽文感率為30.8%,對(duì)左氧氟沙星、諾氟沙星、氧氟沙星的^:感率均為38.4%。同年從浙江一屠宰場(chǎng)分離到的義烏、蕭山和河南各地的38抹豬鏈球菌中對(duì)環(huán)丙沙星和氧氟沙星的敏感率為15.7%,對(duì)恩諾沙星的敏感率為10.5%,對(duì)諾氟沙星的敏感率為31.6%。本課題從2005-2006年在東北地區(qū)共分離到114抹豬鏈球菌，經(jīng)過(guò)藥敏試驗(yàn)檢測(cè)，其中對(duì)環(huán)丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星的敏感率分別為40.0%、34.0%、39.0%,敏感菌抹大多集中在遼寧省鞍山、臺(tái)安等地。國(guó)內(nèi)外調(diào)查表明，豬鏈球菌對(duì)四環(huán)素類(lèi)藥物表現(xiàn)出極高的耐藥性，耐藥率達(dá)95.oy。以上。在藥物選擇性的壓力下，耐藥菌株不斷出現(xiàn)，耐藥現(xiàn)狀不斷惡化，影響了抗菌藥物的有效應(yīng)用。為此，世界各國(guó)科研工作者均在考慮如何解決細(xì)菌耐藥性的問(wèn)題，試圖遏制豬鏈球菌不斷耐藥的趨勢(shì)。而中草藥具有來(lái)源廣泛，價(jià)格便宜，毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性的優(yōu)點(diǎn)，用于畜禽疾病的防治。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一是將連翹提取物應(yīng)用于抑制豬鏈球菌耐藥抹；本發(fā)明的目的之二是提供一種用于抑制豬鏈球菌耐藥抹的復(fù)方藥物；本發(fā)明的上述目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明首先選取桂枝、紫蘇、荊芥、防風(fēng)、羌活、白芷、薄荷、牛蒡子、桑葉、菊花、柴胡、升麻、知母、蘆根、梔子、決明子、黃芩、連翹、黃柏、龍膽草、苦參、白鮮皮、雙花、中藥1、蒲公英、穿心蓮、大青葉、板藍(lán)根、貫眾、魚(yú)腥草、山豆根、玄參、牡丹皮、紫草、大黃、茵陳、小薊、地榆、白茅根、艾葉、川芎、桔梗、百部、紫苑、五味子、烏梅、訶子、石榴皮、五倍子、吳茱萸等50味中藥的水提物和乙醇提取物，采用紙片擴(kuò)散法和微量稀釋法，分別測(cè)定了上述50味中藥的7K提物和乙醇提取物對(duì)5抹豬鏈球菌臨床分離耐藥林的體外抗菌活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，50種中藥中，連翹提取物對(duì)豬鏈球菌臨床分離耐藥林有較好的抑制作用，其余49種中藥的提取物對(duì)豬鏈球菌臨床分離耐藥抹均無(wú)抑制作用。所述的連翹提取物可以是水提取物或乙醇提取物，其中，所述的乙醇提取物可以是10-95%乙醇提取物，優(yōu)選為75%乙醇提取物。本發(fā)明進(jìn)一步連翹提取物中的活性成分連翹酯苷、連翹苷和盧丁分別分離出來(lái)，并分別測(cè)定了這些活性成分對(duì)豬鏈球菌的抑菌活性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，連翹酯苷為連翹提取物中的抑制豬鏈球菌的主要活性成分。本發(fā)明將連翹提取物分別與P-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物中的頭孢噻肟鈉、頭孢瘙呋鈉、阿莫西林、青霉素鉀、頭孢拉定、氨節(jié)西林鈉、頭孢唑啉鈉和頭孢曲松鈉聯(lián)合使用，分別測(cè)定了它們的體外或體外的抑制豬鏈球菌的活性；試驗(yàn)結(jié)果表明，連翹提取物和阿莫西林聯(lián)合使用時(shí)，對(duì)于豬鏈球菌的抑制活性呈顯著的協(xié)同增效功效。其中，為了達(dá)到更好的抑菌功效，優(yōu)選的，將連翹提取物和阿莫西林按照4:1的重量比例進(jìn)行配伍；所述的連翹提取物可以是水提取物或乙醇提取物，其中，所述的乙醇提取物可以是10-95%乙醇提取物，優(yōu)選為75%乙醇提取物。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例5一、材料與方法1.1材料1.1.1菌林與病料質(zhì)控菌抹金黃色葡萄球菌ATCC29213購(gòu)于中國(guó)獸藥監(jiān)察所。病料系2006~2007年分別從東北三省各豬場(chǎng)通過(guò)滅菌棉拭子采集的豬鼻腔分泌物。編號(hào)為l-2、15、36b、36c、SS2。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室藥敏結(jié)果，均為耐藥才朱，其耐藥譜見(jiàn)表l。表l5株豬鏈球菌臨床分離耐藥株對(duì)9種抗菌藥物的耐藥情況<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注R耐藥1.1.2試劑及4義器腦心浸液培養(yǎng)基、瓊脂、生理鹽水、溫箱、電子天平、震蕩培養(yǎng)箱、冰箱、電爐子、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、涂布棒、移液槍、Tip頭、酒精燈、試管、平皿。1.1.3藥物桂枝、紫蘇、荊芥、防風(fēng)、羌活、白芷、薄荷、牛蒡子、桑葉、菊花、柴胡、升麻、知母、,根、梔子、決明子、黃芩、連翹、黃柏、龍膽草、苦參、白鮮皮、雙花、中藥l、蒲公英、穿心蓮、大青葉、板藍(lán)根、貫眾、魚(yú)腥草、山豆根、玄參、牡丹皮、紫草、大黃、茵陳、小薊、地榆、白茅根、艾葉、川芎、桔梗、百部、紫苑、五味子、烏梅、訶子、石榴皮、五倍子、吳茱萸。購(gòu)自哈爾濱世一堂。1.2方法1.2.1中藥水提取物的制備精密稱(chēng)取每味中藥各15.OOg,加8倍量蒸餾水煎制沸騰，改為文火煎lh,期間始終保持8倍量水，用4層絹布過(guò)濾后取藥液；濾渣再加6倍量蒸餾水按上述方法進(jìn)行操作后過(guò)濾，合并兩次過(guò)濾藥液，用文火濃縮至15ml，使其濃度為lg/ml。1.2.2中藥75%乙醇提^4勿的制備精密稱(chēng)取每味中藥各15.OOg,力口10倍量75%乙醇，超聲30min，用4層絹布過(guò)濾后取藥液；濾渣再加8倍量75°/。乙醇，超聲15min,過(guò)濾，合并兩次過(guò)濾藥液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(50°C)回收醇，將剩余液體用水浴鍋(6(TC)蒸發(fā)水份，殘?jiān)脮醮既芙?，再用蒸餾水調(diào)節(jié)使其濃度為lg/ml。1.2.3抗耐藥菌中藥的篩選1.2.3.1紙片擴(kuò)散法藥敏片的制備選用新華濾紙l號(hào)，用打孔器制成6.OO腿的小圓紙片，高壓滅菌后放入藥液中浸泡l2h,真空干燥，裝入滅菌青霉素瓶中，4'C水箱備用。菌液的制備取臨床分離耐藥抹凍存菌抹接種至腦心浸液瓊脂平板，37'C孵育過(guò)夜。取單個(gè)菌落接種于腦心浸液培養(yǎng)基中，37。C過(guò)夜培養(yǎng)。比濁法將菌液濃度先調(diào)整為O.5麥?zhǔn)瞎軕乙?1.5xl08cfu/ml),然后用腦心浸液培養(yǎng)基稀釋為約5x105cfu/ml。取l.5xl()5cfu/ml菌液100ijL接種于腦心浸液瓊脂平板上，用涂布棒均勻涂開(kāi)。將含有不同藥物的藥敏片貼于平板上。于37。C培養(yǎng)48后，取出觀察，測(cè)量抑菌圈直徑。1.2.3.2體外最小抑菌濃度(MIC)測(cè)定選擇對(duì)豬鏈球菌臨床分離耐藥株的抑菌圈直徑>10mm的中藥水提取物，采用試管二倍稀釋法(黃青云.畜牧微生物學(xué)[M].中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社)測(cè)定其對(duì)豬鏈球菌臨床分離耐藥抹的MIC。先將中藥水提取物用蒸餾7jc做1:IO倍稀釋?zhuān)旱闹苽渫埰瑪U(kuò)散法，分別取11支滅菌試管，加入調(diào)制好的被測(cè)菌種懸液各2mL,在第1管加入2mL濃度為0.lg/mL的藥液，按照倍比稀釋的方法使l10管藥物依次成1:2,1:4,…1:1024濃度梯度，第11管作無(wú)藥生長(zhǎng)對(duì)照，于37。C培養(yǎng)16-18h觀察結(jié)果，以無(wú)菌生長(zhǎng)的最低稀釋度為MIC。再將對(duì)豬鏈球菌臨床分離耐藥抹的抑菌圈直徑>1Omm的中藥乙醇提取物以同法測(cè)定MIC值。由于國(guó)內(nèi)尚無(wú)統(tǒng)一的中藥抑菌效果的MIC標(biāo)準(zhǔn)，參考劉忠儀的文章(劉忠儀，張國(guó)威，何云志.解脲支原體中藥藥敏試驗(yàn)[J].中華皮膚科雜志，1996,29(5):349.),MIC<7.82mg/ml,為高度敏感，介于7.82mg/ml~250mg/ml,為中度敏感，>250mg/ml,為不敏感。1.2.4復(fù)方藥物配方的確定1.2.4.1體外復(fù)方藥物配方的確定連翹提取物分別與(3-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物中頭孢塞將鈉、頭孢塞呋鈉、阿莫西林、青霉素鉀、頭孢拉定、氨千西林鈉、頭孢唑啉鈉和頭孢曲松鈉對(duì)17抹豬鏈球菌(分別為1—2、卜17、59a、B9、T9、15、1—4、D6、42a、C2、36b、2—22、49a、36c、1-13、64a、D9)進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(劑量比暫定為4:1)，具體方法見(jiàn)1.2.3.1紙片擴(kuò)散法。1.2.4.2體內(nèi)復(fù)方藥物配方的確定利用15號(hào)豬鏈球菌在昆明鼠體內(nèi)進(jìn)行病理模型的復(fù)制，其對(duì)昆明鼠的LD50為9.61x108cfu/Ml。將連翹提取物分別與頭孢噻肟鈉、頭孢噻呋鈉、阿莫西林、青霉素鉀、頭孢拉定、氨千西林鈉、頭孢唑啉鈉和頭孢曲松鈉(劑量比暫定為4:1)制成復(fù)合物。當(dāng)每只小鼠腹腔注射菌液9.61xI08cfu/Ml0.5mL，灌藥7天，每天三次，觀察2周，記錄小鼠的死亡情況。1.2.5連翹中抗豬鏈球菌耐藥菌成分的確定1.2.5.l藥材提取液的制備將連翹粉碎，過(guò)20目篩，稱(chēng)取500g,放入圓底燒瓶，按液料比8:1加入75°/。的乙醇水溶液回流提取兩小時(shí)，提取溫度6(TC。提取液趁熱抽濾，濾去藥渣，濾液收集好靜置。同法連續(xù)回流4次，濾液合并在一起。將靜置的濾液濃縮至濃縮液無(wú)醇味，加入適量蒸餾水溶解，并轉(zhuǎn)移至離心管中，用離心才幾離心，收集上清液。將上清液通過(guò)D101大孔吸附樹(shù)脂，用不同濃度的乙醇梯度洗脫，再把洗脫液分別經(jīng)硅膠柱色譜，然后用氯仿-甲醇梯度洗脫，經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，并對(duì)洗脫液用薄層層析跟蹤檢測(cè)，最后通過(guò)連翹酯香、連翹香標(biāo)準(zhǔn)品作為對(duì)照，確定其成分并收集洗脫液。將收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)減壓濃縮，將分別得到的樣品進(jìn)行薄色色譜。以苯丙酮乙酸乙酉旨曱酸水=20:25:30:3:3作展開(kāi)劑為最佳展開(kāi)條件，5%香草醛濃硫酸作為顯色劑進(jìn)行薄層層析。1.2.5.2連翹中抗豬鏈球菌耐藥菌成分的確定將得到的連翹酯苷、連翹苷分別進(jìn)行對(duì)上述17抹豬鏈球菌耐藥菌進(jìn)行紙片擴(kuò)散試驗(yàn)，具體實(shí)驗(yàn)方法見(jiàn)1.2.3.1紙片擴(kuò)散法。二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論(一)抗耐藥菌中藥的篩選選取桂枝、紫蘇、荊芥、防風(fēng)、羌活、白芷、薄荷、牛蒡子、桑葉、菊花、柴胡、升麻、知母、,根、梔子、決明子、黃芩、連翹、黃柏、龍膽草、苦參、白鮮皮、雙花、中藥1、蒲公英、穿心蓮、大青葉、板藍(lán)根、貫眾、魚(yú)腥草、山豆根、玄參、牡丹皮、紫草、大黃、茵陳、小薊、地榆、白茅根、艾葉、川芎、桔梗、百部、紫苑、五味子、烏梅、訶子、石榴皮、五倍子、吳茱萸50味中藥的水提物和75%乙醇提取物對(duì)5林豬鏈球菌臨床分離耐藥林的體外抗菌活性。對(duì)豬鏈球菌臨床分離耐藥抹分別進(jìn)行紙片擴(kuò)散法和微量稀釋法，目的是通過(guò)對(duì)抗菌效果的比較，篩選出對(duì)耐藥菌抗菌活性好的中草藥。50種中藥中，連翹提取物對(duì)豬鏈球菌臨床分離耐藥林有較好的抑制作用，其余49種中藥的提取物對(duì)豬鏈球菌臨床分離耐藥抹均無(wú)抑制作用，抑菌圏直徑為0。連翹水提取物和75°/。乙醇提取物對(duì)豬鏈球菌臨床分離耐藥抹的抑菌圈直徑見(jiàn)表2。表2中藥水提取物和75%乙醇提取物對(duì)10株豬鏈球菌臨床分離耐藥株的抑菌圈直徑樣液1-21536b36cSS21-1759aB9T915平均值連翹1418202211161517191616.8水提取物連翹1520222213181718201918.475%乙醇提取物其余的0000000000049種中藥水提取物其余的0000000000049種中藥75%乙醇提取物由表2可以看出，連翹提取物對(duì)10抹豬鏈球菌臨床分離耐藥抹的抑菌圈直徑>10mm,連翹水提取物對(duì)10抹豬鏈球菌臨床分離耐藥抹的平均抑菌圈直徑為16.8mm,連翹75°/。乙醇提取物的平均抑菌圈直徑為18.4mm;采用微量稀釋法分別測(cè)定連翹對(duì)1O林豬鏈球菌臨床分離耐藥抹的MIC。由表3可以看出，連翹不同提取物對(duì)10抹豬鏈球菌臨床分離耐藥抹的MIC〈7.82mg/ml，但75%乙醇提取物對(duì)豬鏈球菌臨床分離耐藥林的MIC都較相應(yīng)水提取物的MIC小，為2.3872mg/ml;綜合以上結(jié)果，可以看出，連翹水提取物或乙醇提取物對(duì)于豬鏈球菌有顯著的抑制活性。表3連翹水提取物和75y。乙醇提取物對(duì)5株豬鏈球菌臨床分離耐藥株的MICCmg/ml)9樣液1-21536b36cSS21-1759aB9T915平均值連翹水6.2503.1253.1253.1253.1253.1253.1253.1253.1253.1253.4375提取物連翹5.1253.1251.5621.5623.1251.5621.5621.5621.5623.1252.387275%乙醇提取物(二)抑制豬鏈球菌的復(fù)方藥物的篩選1、連翹提取物與(3-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物體外抗菌試驗(yàn)選取連翹提取物分別與P-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物中頭孢漆肟鈉、頭孢漆呋鈉、阿莫西林、青霉素鉀、頭孢拉定、氨卡西林鈉、頭孢唑啉鈉和頭孢曲松鈉對(duì)17林豬鏈球菌進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(劑量比暫定為4:1),結(jié)果表明連翹提取物分別與頭孢噻肟鈉、頭孢噻呋鈉、阿莫西林、青霉素鉀、頭孢拉定、氨千西林鈉、頭孢哇啉鈉和頭孢曲松鈉對(duì)174朱豬鏈球菌抑菌圈直徑平均值分別為0mm、22mm、29mm、17咖、16mm、15mm、21mm、18mm。只有阿莫西林和連翹提取物共同使用時(shí)，抑菌圈直徑最大并且差異顯著。2、連翹提取物與|3-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物體內(nèi)抗菌試驗(yàn)利用15號(hào)菌在昆明鼠體內(nèi)進(jìn)行病理模型的復(fù)制，其對(duì)昆明鼠的LD50為9.61xl08cfu/Ml。將連翹提取物分別與頭孢p塞將鈉、頭孢瘞呔鈉、阿莫西林、青霉素鉀、頭孢拉定、氨千西林鈉、頭孢唑啉鈉和頭孢曲松鈉(劑量比暫定為4:1)制成復(fù)合物。當(dāng)每只小鼠腹腔注射菌液9.61x108cfu/Ml0.5mL，灌藥7天，每天三次，觀察2周，記錄小鼠的死亡情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4:表4連翹提取物與P-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的藥效學(xué)比較實(shí)驗(yàn)藥物存活數(shù)存活率平均死亡時(shí)間(h)陽(yáng)性對(duì)照510%(5/10)陰性對(duì)照10100%(10/10)連翹70%(7/10)12頭孢噻JB鈉060%(7/10)9頭孢噻呋鈉670%(7/10)20阿莫西林70%(6/10)24青霉素鉀460%(7/10)18頭孢拉定550%(7/10)18氨芐西林鈉650%(7/10)20頭孢唑啉鈉650%(7/10)20頭孢噻躬鈉-連翹復(fù)方藥物060%(7/10)18頭孢噻呋鈉-連翹復(fù)方藥物770%(7/10)24阿莫西林-連翹復(fù)方藥物8100%(8/10)36青霉素鉀-連翹復(fù)方藥物560%(7/10)24頭孢拉定-連翹復(fù)方藥物550%(7/10)24氨芐西林鈉-連翹復(fù)方藥物660%(7/10)24頭孢唑啉鈉-連翹復(fù)方藥物660%(7/10)24綜合上述2個(gè)實(shí)驗(yàn)，相比于單獨(dú)的抑菌活性，從體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出將連翹提取物和阿莫西林配伍在一起使用時(shí)具有顯著的協(xié)同抑制豬鏈球菌的功效。(三)連翹中抗耐藥菌成分的確定將中藥連翹藥材上清液通過(guò)D101大孔吸附樹(shù)脂，用不同濃度的乙醇梯度洗脫,再把洗脫液分別經(jīng)硅膠柱色譜，然后用氯仿-甲醇梯度洗脫，經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，并對(duì)洗脫液用薄層層析跟蹤^:測(cè)，最后通過(guò)樣品對(duì)照，確定其成分并收集洗脫液。將收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)減壓濃縮，最后分別得到連翹酯苷、連翹苷、盧丁。將得到的連翹酯苷、連翹苷、盧丁分別進(jìn)行對(duì)上述17抹豬鏈球菌耐藥菌進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，分別進(jìn)行連翹酯苷、連翹苷、盧丁對(duì)上述17林豬鏈球菌耐藥菌抑菌圏的直徑平均為20mra士2.74、0mm、0mm。連翹酯苷對(duì)17抹豬鏈球菌耐藥抹的MIC值平均值為3.125mg/ml。所以得出連翹中抗豬鏈球菌耐藥株的主要成分是連翹酯苷，而連翹武無(wú)抗菌活性，因此把測(cè)定連翹戒的含量作為考察指標(biāo)無(wú)意義，在建立連翹原料藥及制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)應(yīng)選擇具有抗菌活性的成分連翹酯戒作為考察的指標(biāo)。權(quán)利要求1、連翹提取物在制備抑制豬鏈球菌藥物中的用途。2、按照權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述連翹提取物的有效部位是連翹酯苷；其中，所述連翹提取物是連翹水提取物或連翹乙醇提取物。3、按照權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于所述的連翹乙醇提取物是10-95%乙醇提取物。4、按照權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于所述的連翹乙醇提取物為75%乙醇提取物。5、一種抑制豬鏈球菌的復(fù)方藥物，其特征在于包括連翹提取物和阿莫西林組成。6、按照權(quán)利要求5所述的復(fù)方藥物，其特征在于由連翹提取物和阿莫西林按照4:1的重量比例組成。7、按照權(quán)利要求5或6所述的復(fù)方藥物，其特征在于所述連翹提取物的有效部位是連翹酯苷；其中，連翹提取物是連翹7K提取物或連翹乙醇提取物。8、按照權(quán)利要求7所述的復(fù)方藥物，其特征在于所述連翹乙醇提取物是10-95%乙醇4是取物。9、按照權(quán)利要求8所述的復(fù)方藥物，其特征在于所述連翹乙醇提取物是75°/。乙醇提取物。10、一種預(yù)防或治療由豬鏈球菌所導(dǎo)致疾病的藥物組合物，其特征在于由有效量的權(quán)利要求5所述的復(fù)方藥物和藥學(xué)上可接受的賦料或載體所組成。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種豬鏈球菌耐藥抑制劑，屬于豬鏈球菌的防制領(lǐng)域。本發(fā)明分別測(cè)定了50種中藥提取物對(duì)豬鏈球菌的體外和體內(nèi)的抑制活性，最終發(fā)現(xiàn)，連翹提取物對(duì)于豬鏈球菌耐藥株無(wú)論是體外還是體內(nèi)均有顯著的抑制作用，可作為豬鏈球菌耐藥抑制劑使用。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明又發(fā)現(xiàn)，將連翹提取物與阿莫西林聯(lián)合使用時(shí)，該復(fù)方藥物有顯著的協(xié)同抑制豬鏈球菌的功效，可與豬鏈球菌耐藥抑制劑共同應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K36/634GK101612204SQ20091015991公開(kāi)日2009年12月30日申請(qǐng)日期2009年7月21日優(yōu)先權(quán)日2009年7月21日發(fā)明者遜劉,琳崔,李明雁,李艷華,王瑞雪,盛尊來(lái),棟邊,陳儉清申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)