專(zhuān)利名稱(chēng)：一種南方紅豆杉葉片的提取物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物有效成分及提取技術(shù)，具體涉及一種南方紅豆杉葉片的提取物及
制備方法。
背景技術(shù)：
從紅豆杉屬(ge皿s Taxus)植物中分離獲得的紫杉醇是第一種有效的天然抗癌藥 物，紫杉醇已廣泛用于各類(lèi)腫瘤的臨床治療，并越來(lái)越多地受到世界各國(guó)的重視。紅豆杉藥 療成份中除含有紫杉醇外，還含有一類(lèi)具有重要藥理活性的物質(zhì)紫杉黃酮。黃酮類(lèi)化合物 (Flavonoids)又稱(chēng)生物類(lèi)黃酮(bioflavonoids)是一類(lèi)低分子植物次生代謝物，廣泛分布 于蔬菜、水果和藥用植物中。這類(lèi)化合物有共同的母核C6-C3-Ce結(jié)構(gòu)，目前已從植物材料中 分離得到了幾百種黃酮類(lèi)化合物，而且新的化合物還在不斷地被發(fā)現(xiàn)。按照取代基及其位 置不同，可將其分為I苷元-芹菜素(Apigenin)為主體、II苷元-木犀草素(Luteolin)為 主體、III苷元-山奈酚(Kaempferol)為主體、IV苷元-槲皮素(Quercetin)為主體、V柚 皮素(Naringin)為主體等的雙氫黃酮苷類(lèi)(Bi-hydroflavonoids)化合物
<formula>formula see original document page 3</formula> 黃酮類(lèi)物質(zhì)的主要藥理學(xué)作用為對(duì)心臟血管的作用、抗炎及抗免疫作用、抗微生 物作用、對(duì)消化性潰瘍的作用和抗腫瘤作用。抗腫瘤作用研究發(fā)現(xiàn)，黃酮類(lèi)化合物是通過(guò)促 進(jìn)腫瘤壞死因子、抑制致癌劑及抗氧化等多種途徑發(fā)揮療效的。目前從紅豆杉中提取的紫 杉黃酮及提取方法還未見(jiàn)專(zhuān)利和文獻(xiàn)報(bào)道。
植物有效成分提取技術(shù)已有近5000年的歷史，傳統(tǒng)提取方法按照提取過(guò)程對(duì)能量需求方式的不同可以分為兩大類(lèi)。 一類(lèi)是加熱提取法，主要有煎煮提取法、回流提取法和 索氏提取法等不同方式；另一類(lèi)是浸泡提取法，主要有浸漬提取法和滲漉提取法兩種。傳統(tǒng) 提取方法存在著提取時(shí)間長(zhǎng)、工藝繁復(fù)、效率低、工業(yè)污染大和對(duì)目標(biāo)化合物提取無(wú)選擇性 等缺陷。近年來(lái)用超聲波輔助提取植物有效成分重要的核心技術(shù)手段，超聲波輔助提取技 術(shù)是利用超聲振動(dòng)增加溶劑進(jìn)入植物細(xì)胞的滲透性，強(qiáng)化被提取物在兩相介質(zhì)之間的傳質(zhì) 速率。超聲波振動(dòng)還能產(chǎn)生空化氣泡，氣泡劇烈運(yùn)動(dòng)對(duì)細(xì)胞形成強(qiáng)大的剪切力，特別是氣泡 崩潰時(shí)形成局部沖擊波和高速射流作用，能使植物細(xì)胞破裂，加速細(xì)胞內(nèi)容物的釋放；超聲 波萃取可在較低溫度范圍內(nèi)進(jìn)行，也能有效防止植物中目的成分降解，對(duì)萃取物具有高的 選擇性，提取時(shí)間短，萃取物純度和萃取率均較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種具有改善心微循環(huán)，抗心律失常，降低心
肌氧耗等，對(duì)心血管系統(tǒng)疾病的治療和保健作用的南方紅豆杉葉片的提取物。 本發(fā)明還提供了該提取物的制備方法。 本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為一種南方紅豆杉葉片的提取物，
該提取物為淡黃色粉末，該粉末中含有重量含量為65 70%的紫杉黃酮，所述紫杉黃酮包
括下述5種成份3-0-蘆丁 -槲皮素、3-0-蘆丁 -山奈酚、3-0-蘆丁 -楊梅酮、7-0-葡萄
糖_山奈酚和7-0-葡萄糖-槲皮素，所述紫杉黃酮中上述5種成分的總重量含量為40
60%，該提取物以新鮮的南方紅豆葉片為原料，經(jīng)過(guò)烘干、粉碎過(guò)篩、浸入乙醇溶劑、攪拌下
超聲提取、提取液減壓濃縮去醇、氯仿萃取脫脂、水相濃縮干燥步驟制得。 紫杉黃酮含量檢測(cè)方法為根據(jù)Al3+_蘆丁二元絡(luò)合物熒光光度法分析，激發(fā)光譜
帶寬3nm，激發(fā)波長(zhǎng)A ex436nm，發(fā)射光譜帶寬5nm， A em483nm，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液熒光強(qiáng)度對(duì)相應(yīng)
濃度作圖定量。 3-0-蘆丁 -槲皮素、3-0_蘆丁 -山奈酚、3-0_蘆丁 -楊梅酮、7-0_葡萄糖-山奈
酚和7-0-葡萄糖-槲皮素5種成份的總含量的測(cè)定方法采用高效液相色譜法分析，色譜柱
為Varian，Microsorb-MV100C18，檢測(cè)波長(zhǎng)360nm，流動(dòng)相為甲醇/水二 55 : 45，磷酸調(diào)pH
=2. 5 ;柱溫為25tV流速為1. Oml/min，進(jìn)樣量為10 yl，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)外標(biāo)法定量。 該提取物為心血管系統(tǒng)藥物或保健食品的有效組成成份，即可以為心血管系統(tǒng)藥
物的顆粒劑、片劑、膠囊、滴丸、軟膠囊或針劑的有效成份，也可以為心血管系統(tǒng)保健食品的
有效成份。 —種南方紅豆杉葉片的提取物的制備方法，包括下述步驟
1、將新鮮南方紅豆杉葉片，在溫度為55 65t:條件下烘干20 30小時(shí)；
2、將上述烘干的南方紅豆杉葉片粉碎成能通過(guò)0. 45 ii m篩的為提取材料，稱(chēng)重；
3、將上述提取材料裝入超聲萃取釜中，再加入濃度為40 60%的乙醇，提取材料 與乙醇的重量體積比(Kg/L)為1 : 15 17 ; 4、接著在溫度為35 55t:條件下，邊攪拌邊用它激式超聲發(fā)聲和徑向振動(dòng)柱狀 換能器超聲提取20 30分鐘，超聲提取方式為每次超聲3分鐘和間隔2分鐘超聲一次，超 聲波功率為IOOW，超聲頻率為30-70kHz，超聲提取完成后過(guò)濾得到提取液；它激式超聲發(fā) 聲和徑向振動(dòng)柱狀換能器為現(xiàn)有技術(shù)，其結(jié)構(gòu)和工作原理在此不作介紹；
5、在上述提取液先減壓濃縮去醇相，再將去醇相后的溶液用3倍體積的氯仿萃取 脫脂，脫脂完畢水相濃縮干燥，得到含有紫杉黃酮的南方紅豆杉葉片的提取物。減壓濃縮去 醇、氯仿萃取脫脂、濃縮干燥都是本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)，在此不詳述。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于一種南方紅豆杉葉片的提取物，該提取物為 淡黃色粉末，該粉末中含有重量含量為65 70 %的紫杉黃酮，紫杉黃酮包括下述5種成份 3-0-蘆丁 -槲皮素、3-0-蘆丁 -山奈酚、3-0-蘆丁 _楊梅酮、7-0-葡萄糖-山奈酚和7-0-葡 萄糖-槲皮素，紫杉黃酮中上述5種成分的總重量含量為40 60%，該提取物以新鮮的南 方紅豆葉片為原料，經(jīng)過(guò)烘干、粉碎過(guò)篩、浸入乙醇溶劑、攪拌下超聲提取、提取液減壓濃縮 去醇、氯仿萃取脫脂、水相濃縮干燥步驟制得；該提取物可以抗血小板聚集和抗體外血栓形 成，有活血化瘀改善心臟微循環(huán)的作用，也有抗心律失常，降低心肌氧耗的作用，同時(shí)能減 慢心率、降低血壓、減少冠脈阻力等作用，有利于心絞痛的緩解。因此本發(fā)明是一種具有改 善心微循環(huán)，抗心律失常，降低心肌氧耗等，對(duì)心血管系統(tǒng)疾病的治療和保健作用的南方紅 豆杉葉片的提取物。本發(fā)明的制備方法具有無(wú)需高溫，能耗低，提取時(shí)間短，雜質(zhì)少，提取率 較高的優(yōu)點(diǎn)，葉片中紫杉黃酮的提取率達(dá)到98. 76%。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
實(shí)施例 將新鮮南方紅豆杉葉片50kg，經(jīng)55 65。C烘干20 30h，粉碎，過(guò)0. 45 y m篩，裝 入超聲萃取釜中，加入40 60%乙醇750 850L，攪拌混合，于35 55。C溫度條件下，邊 氣升式攪拌邊用它激式超聲發(fā)聲和徑向振動(dòng)柱狀換能器超聲提取20 30min，超聲波功率 為IOOW，超聲頻率為33kHz，超聲提取方式為每次超聲3min，每間隔2min超聲一次，經(jīng)總共 4 6次超聲提取后過(guò)濾，得到提取液，提取液先減壓濃縮去醇，再將去醇相后的溶液用3倍 體積的氯仿萃取脫脂，脫脂后干燥得到含有紫杉黃酮的南方紅豆杉葉片的提取物，該提取 物中含有重量含量為65 70%的紫杉黃酮，紫杉黃酮中包括下述5種成份3-0-蘆丁 -槲 皮素、3-0-蘆丁 -山奈酚、3-0-蘆丁 -楊梅酮、7-0-葡萄糖-山奈酚和7-0-葡萄糖-槲皮 素，紫杉黃酮中上述5種成分的總重量含量為40 60%。紫杉黃酮含量采用Al3+-蘆丁二 元絡(luò)合物熒光光度法分析測(cè)得。5種成份的總含量采用高效液相色譜法測(cè)定。該實(shí)施例中 南方紅豆杉葉片中紫杉黃酮提取率可達(dá)98. 76%。
實(shí)驗(yàn)例1 以SD大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，每日予上述實(shí)施例中的提取物4. 4g (生藥)/kg (鼠)為給 藥組，用生理水溶解灌胃給藥，7天后與對(duì)照組(生理鹽水等容量灌胃7天)同時(shí)靜脈取血， 以腺苷二磷酸鈉鹽(ADP)為誘導(dǎo)劑，按Born比濁法測(cè)各組血小板聚集百分率，并同時(shí)取心 臟血，在血栓形成儀上形成血栓，結(jié)果顯示，給藥組與對(duì)照組比較，lmin血小板聚集率有明 顯減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05)，血栓長(zhǎng)度也有明顯縮短(P<0.05)。說(shuō)明提取物 能有效抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集和抗體外血栓形成，有活血化瘀，改善微循環(huán)的作用。
實(shí)驗(yàn)例2 以大白鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，每日予上述實(shí)施例中的提取物4. 4g (生藥)/kg (鼠)為給 藥組，用生理水溶解灌胃給藥，8天后與對(duì)照組(生理鹽水等容量灌胃8天)同時(shí)注射腎上腺素和氯化鈣誘發(fā)心律失常，結(jié)果給藥組與對(duì)照組相比有明顯的拮抗心律失常作用(P < 0. 05)。在對(duì)心功能的影響的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，提取物靜脈注射能顯著拮抗去甲腎上腺素升 高血壓的作用，并對(duì)組織胺引起血壓降低有一定的回升作用，其中對(duì)反映心臟前后負(fù)荷的 LVEDP、BP指標(biāo)均明顯降低，而HR無(wú)明顯變化，這種作用是通過(guò)擴(kuò)張阻力血管和容量血管， 使動(dòng)脈血壓和左室舒張末壓下降，降低心臟的前后負(fù)荷。
實(shí)驗(yàn)例3 以犬為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，予上述實(shí)施例中的提取物4. 4g(生藥)/kg(犬)用生理水溶解 灌胃給藥為給藥組，等容量生理鹽水灌胃為對(duì)照組，灌胃后給藥組與對(duì)照組同時(shí)分離冠狀 動(dòng)脈左旋支以MFV-110型電磁流量計(jì)探頭測(cè)冠脈血流量并計(jì)算冠脈阻力，以Unistat型血 氧計(jì)測(cè)心肌耗氧量。結(jié)果顯示，給藥組5min心肌耗氧量，耗氧指數(shù)明顯降低，給藥后45min 心肌耗氧量下降最顯著，與給藥前及對(duì)照組比皆有顯著性差異(P < 0. 01和(P < 0. 001)， 說(shuō)明提取物對(duì)犬冠脈血流量無(wú)明顯影響。大劑量組有降低冠脈阻力的作用，與給藥前及對(duì) 照組比較皆有顯著性差異(P < 0. 05)，說(shuō)明提取物可降低心肌氧耗，維持心肌對(duì)能量的需 求，由于并不減少冠脈血流量，因此提高了心臟的泵功效率。同時(shí)該藥減慢心率、降低血壓、 減少冠脈阻力等作用，也有利于心絞痛的緩解。
權(quán)利要求
一種南方紅豆杉葉片的提取物，其特征在于該提取物為淡黃色粉末，該粉末中含有重量含量為65～70％的紫杉黃酮，所述紫杉黃酮包括下述5種成份3-O-蘆丁-槲皮素、3-O-蘆丁-山奈酚、3-O-蘆丁-楊梅酮、7-O-葡萄糖-山奈酚和7-O-葡萄糖-槲皮素，所述紫杉黃酮中上述5種成分的總重量含量為40～60％，該提取物以新鮮的南方紅豆葉片為原料，經(jīng)過(guò)烘干、粉碎過(guò)篩、浸入乙醇溶劑、攪拌下超聲提取、提取液減壓濃縮去醇、氯仿萃取脫脂、水相濃縮干燥步驟制得。
2. 權(quán)利要求1所述的一種南方紅豆杉葉片的提取物，其特征在于該提取物為心血管系 統(tǒng)藥物或保健食品的有效組成成份。
3. 權(quán)利要求1所述的一種南方紅豆杉葉片的提取物的制備方法，其特征在于包括下述 步驟1) 將新鮮南方紅豆杉葉片，在溫度為55 65t:條件下烘干20 30小時(shí)；2) 將上述烘干的南方紅豆杉葉片粉碎成能通過(guò)O. 45ym篩的為提取材料，稱(chēng)重；3) 將上述提取材料裝入超聲萃取釜中，再加入濃度為40 60 %的乙醇，提取材料與乙 醇的重量體積比(Kg/L)為1 : 15 17 ;4) 接著在溫度為35 55t:條件下，邊攪拌邊用它激式超聲發(fā)聲和徑向振動(dòng)柱狀換能 器超聲提取20 30分鐘，超聲提取方式為每次超聲3分鐘和間隔2分鐘超聲一次，超聲波 功率為100W，超聲頻率為30-70kHz，超聲提取完成后過(guò)濾得到提取液；5) 在上述提取液先減壓濃縮去醇相，再將去醇相后的溶液用3倍體積的氯仿萃取脫 脂，脫脂完畢水相濃縮干燥，得到含有紫杉黃酮的南方紅豆杉葉片的提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種南方紅豆杉葉片的提取物及制備方法，該提取物為淡黃色粉末，該粉末中含有重量含量為65～70％的紫杉黃酮，紫杉黃酮包括下述5種成分3-O-蘆丁-槲皮素、3-O-蘆丁-山奈酚、3-O-蘆丁-楊梅酮、7-O-葡萄糖-山奈酚和7-O-葡萄糖-槲皮素，紫杉黃酮中上述5種成分的總重量含量為40～60％，該提取物以新鮮的南方紅豆葉片為原料，經(jīng)過(guò)烘干、粉碎過(guò)篩、浸入乙醇溶劑、攪拌下超聲提取、提取液減壓濃縮去醇、氯仿萃取脫脂、水相濃縮干燥的制備方法制得；本發(fā)明是一種具有改善心微循環(huán)，抗心律失常，降低心肌氧耗等，對(duì)心血管系統(tǒng)疾病的治療和保健作用的南方紅豆杉葉片的提取物和能耗低，提取時(shí)間短，雜質(zhì)少，提取率較高的制備方法。
文檔編號(hào)A61P9/10GK101716197SQ20091015703
公開(kāi)日2010年6月2日 申請(qǐng)日期2009年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月30日
發(fā)明者張鶯鶯, 王強(qiáng), 阮曉 申請(qǐng)人:寧波泰康紅豆杉生物工程有限公司