專利名稱：一種三萜化合物及其藥物組合物與治療腫瘤的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一個新的三萜類化合物及其在制備防治腫瘤疾病藥物中的應(yīng)用，具體 涉及一個羊毛留烷型四環(huán)三萜類新化合物、及其制備方法和抗腫瘤的作用，并包括含該化 合物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
目前全世界每年死于癌癥者700萬以上，現(xiàn)在癌癥患者約3700萬，我國每年新發(fā) 病100萬人，死亡80萬人，在很多國家，目前癌癥居死亡原因首位或第二位。其中，消化系統(tǒng) 的三大惡性腫瘤胃癌、肝癌、結(jié)腸癌更是以其發(fā)病率、死亡率高，轉(zhuǎn)移迅速，愈后差的特點， 嚴(yán)重威脅著人類的健康。阿里紅(FomesofficinaliWill.ex Fr.)Ames)是苦白蹄的干燥 菌瘤，具有溫肺化痰、降氣、活血消腫、利尿的作用。主要含有三萜酸類、脂肪酸類、留醇類及 微量元素等成分，其中三萜類成分復(fù)雜，質(zhì)量不易控制。阿里紅中三萜酸類成份有齒孔酸、 去氫齒孔酮酸、3-酮基-去氫硫色多孔菌酸、硫色多孔菌酸、fomelactoneB, Versisponic acid D、去氫齒孔酸、阿里紅酸Α、阿里紅酸G。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是從阿里紅藥材中開發(fā)具有抗腫瘤作用的活性單體化 合物，特別是用于治療肝癌、胃癌、直腸癌等實體瘤方面。為解決上述問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案。本發(fā)明提供了阿里紅活性單體3〃 β，4〃 α-二甲基-2〃(R)，3 〃(S)， 4" (S)-四氫呋喃-5〃 -酮-2〃 -螺-23-5' β-甲基-5' (S)-六氫氧雜|并[3 ‘，4' 13，17]-3 α-羥基-甾-8烯(Fomefficinol B)，及其制備方法和在制備防治腫瘤疾病藥物 中的應(yīng)用，特別是在治療肝癌、胃癌、直腸癌等實體瘤方面的應(yīng)用。同時，本發(fā)明還提供了含有Fomefficinol B防治腫瘤疾病的藥物組合物；及藥物 組合物給藥途徑及制備方法。如式 I 所示的 FomefTicinol B。 式I化合物在制備防治腫瘤疾病藥物中的應(yīng)用，尤其是式I化合物在制備防治消 化系統(tǒng)腫瘤藥物中的應(yīng)用，優(yōu)選式I化合物在制備防治肝癌、結(jié)腸癌、直腸癌藥物中的應(yīng)
用。
含有式1化合物的藥物組合物，其特征在于由有效量的式I化合物和藥學(xué)上可接 受的輔料組成；所述藥物可通過口服、舌下、經(jīng)皮、肌肉或皮下、皮膚粘膜、尿道、陰道或靜脈 途徑給藥；所述藥物以口服劑、注射劑及局部給藥制劑形式存在；所述口服劑包括膠囊劑、 口服液、口嚼劑、丸劑、片劑、顆粒劑；所述注射劑包括注射液、注射用凍干粉針劑型；局部 給藥制劑包括霜劑、軟膏劑、貼劑、噴霧劑。本發(fā)明人通過系列實驗證實了 Fomefficinol B具有防治腫瘤疾病的作用，尤其是 防治肝癌、結(jié)腸癌、直腸癌等作用顯著。本發(fā)明人采用了體外細(xì)胞實驗證實，F(xiàn)omefficinol B能抑制多種腫瘤細(xì)胞的生 長，尤其能有效的抑制H印G2細(xì)胞、胃癌BGC-823細(xì)胞、結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞的生長，其抑制各 細(xì)胞生長的半數(shù)有效劑量IC5Q平均值分別為(0. 0375 士0. 002)mg/ml、(0. 030 士0. 002) mg/ ml、(0. 028 + 0. 002)mg/mlo本實驗結(jié)果表明Fomefficinol B可以用于制備抗腫瘤尤其是防治肝癌、結(jié)腸癌、 直腸癌等藥物。在制備防治肝癌、結(jié)腸癌、直腸癌等腫瘤疾病藥物時可以單獨使用，也可與 其他三萜類化合物的藥物組合物的形式使用。本發(fā)明還提供了以Fomefficinol B為活性成分用于防治腫瘤疾病的藥物組合物 及其藥物劑型。本發(fā)明提供的藥物組合物可按本領(lǐng)域內(nèi)已知方法制備，并可通過口服、舌 下、經(jīng)皮、肌肉或皮下、皮膚粘膜、尿道、陰道或靜脈等途徑給藥。本發(fā)明提供的藥物組合物 的劑型可按本領(lǐng)域已知方法制備，即以上述有效量的Fomefficinol B為有效活性成分，并 包括了藥劑學(xué)上可接受的其他輔料組分，其中所述的Fomefficinol B含量可以為 99.99%。本發(fā)明的藥物制劑包括口服劑和非腸道給藥制劑，其中口服劑包括膠囊劑、口服 液、口嚼劑、丸劑、片劑、顆粒劑等，非腸道給藥制劑包括注射液劑型及注射用凍干粉針劑型 等。本發(fā)明的藥物制劑還包括局部給藥制劑，如霜劑、軟膏劑、貼劑、噴霧劑等。本發(fā)明所述 的劑型并不限于此。在制備口服制劑時選用的輔料可以是淀粉、糊精或環(huán)糊精、蔗糖、硬脂酸鹽等常規(guī)充填劑。在制備凍干粉針劑可以通過無菌噴霧干燥、低溫真空干燥、冷凍干燥等方法制備。各制劑的后期制備工藝及設(shè)備均屬制藥領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，本發(fā)明對此不作限定，故在此不 予詳述。


圖1、本發(fā)明化合物的質(zhì)譜圖2、本發(fā)明化合物的HNMR譜圖3、本發(fā)明化合物的HMBC譜圖4、本發(fā)明化合物的HMQC譜圖5、本發(fā)明化合物的碳譜
具體實施例方式實施例1 :Fomefficinol B的制備方法將阿里紅藥材5kg采用95%乙醇提取，濃縮提取液，得浸膏2.5kg，用丙酮溶解浸 膏，加3kg(100-200目)硅膠拌樣，將樣品裝柱后，依次用30L石油醚、40L 二氯甲烷、40L乙 酸乙酯、30L丙酮洗脫，將二氯甲烷洗脫液濃縮的到的375g浸膏，與等量的硅膠拌樣，Ikg硅 膠干法裝柱，用氯仿丙酮(1 0,10 1,3 1)梯度洗脫，收集10 1洗脫的流份反復(fù) 用硅膠柱進(jìn)行細(xì)分，用氯仿甲醇(30 1)重結(jié)晶后，得化合物晶體(42mg)。通過核磁共振技術(shù)及質(zhì)譜技術(shù)解析化合物結(jié)構(gòu)，譜圖見附圖1-5。 化學(xué)名稱為3 〃 β，4 〃 α - 二甲基-2 〃 (R)，3 〃 (S)，4 〃 (S)-四氫呋
喃-5〃 -酮-2〃 -螺-23-5' β-甲基-5' (S)-六氫氧雜；^ 并[3 ‘，4' :13，17]-3α-羥
基-留-8烯。熔點194-196°C。為白色不定型粉末，溶解性易溶于氯仿，可溶于甲醇，丙 酮，乙酸乙酯。薄層鑒別時，采用硅膠板，展開溶劑為石油醚乙酸乙酯(10 1),Rf = 0.5, 遇濃硫酸加熱后，顯紫色。實施例2 =Fomefficinol B片劑的制備Rf = 0. 5,遇濃硫酸加熱后，顯紫色。實施例2 =Fomefficinol B片劑的制備取Fomefficinol B20g，研磨粉碎，過80目篩。加過80目篩的微晶纖維素20g混合均勻后，加入2 %的羥丙甲纖維素作為粘合劑進(jìn)行制軟材，制粒干燥整粒，加入4%的崩 解劑羧甲基淀粉鈉和潤滑劑0. 5%硬脂酸鎂與細(xì)粉混合均勻整粒，混勻，壓片，即得。每片含 Fomefficinol BO. 03g?？诜o藥，每日3次，每次1片。實施例3 :Fomefficinol B凍干粉針劑的制備取Fomefficinol B20g，加入2. 3 %的甘露醇為支架劑，加入注射用水至1800ml 攪拌溶解后，加入總配置量2. 0%。活性炭，攪拌半小時，過濾，定容至2000ml，繼以0. 45 u m, 0. 22um微孔濾膜分級過濾，濾液以每瓶2ml定量分裝于西林瓶中，冷凍干燥，回充氮氣，加 塞，軋蓋，包裝，即得。每支凍干粉針劑含量有Fomefficinol B0. 02g，每天注射給藥1次，每 次1支。為了便于理解Fomefficinol B防治腫瘤疾病的效果，本發(fā)明進(jìn)行了如下藥效學(xué)實驗實驗例1 :Fomefficinol B體外對結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8的影響用含10% FBS的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液將Fomefficinol B (所用樣品可采用實施例1的 制備方法制備，或采用其它制備方法制備)稀釋成不同濃度，加入接種有結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8 的96孔板中，每孔200 iU，每組設(shè)5個復(fù)孔，平行設(shè)置細(xì)胞對照組。置于37°C，5% C02培 養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每日觀察細(xì)胞狀態(tài)。藥物作用72小時后，取出96孔板，吸去各孔內(nèi)培養(yǎng)液，并 加入0. 5mg/ml的MTT溶液200 yl，平行設(shè)置空白對照組，置于37°C，5% C02培養(yǎng)箱中繼續(xù) 培養(yǎng)4小時后取出，吸出各孔內(nèi)的MTT溶液，分別加入DMS0溶液200 u 1，室溫放置10分鐘， 充分震蕩60秒后，于96孔板酶標(biāo)檢測儀上測定570nm處的0D值，計算各個濃度組藥物對 細(xì)胞的生長抑制率和IC5(I，共進(jìn)行兩批實驗。第一批實驗中藥物濃度從lmg/ml設(shè)起，依次2 倍比稀釋成 9 個濃度，分別為 1、0. 5,0. 25,0. 125,0. 063,0. 031,0. 016,0. 008,0. 004mg/ml ； 根據(jù)第一批實驗結(jié)果，第二批實驗中將藥物2倍比稀釋成5個濃度，依次為0. 125,0. 063、 0. 031,0. 016,0. 008mg/ml，具體實驗結(jié)果見表 1 表1 Fomefficinol B體外對結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8的影響 注FomefficinolB 毒性結(jié)果，第-批 IC5(1 為(0. 027士0. 002)mg/ml，第二批 IC5(1 為(0.029士0.002)mg/ml?！啊钡诙鷮嶒炛形丛O(shè)該劑量組。藥物抑制細(xì)胞生長的半數(shù)有效劑量IC5Q < 300 u g/ml (摩爾濃度< 200 y M)時，即 具有抗腫瘤活性。本實驗中阿里紅新化合物Fomefficinol B對HCT-8細(xì)胞的IC5(1平均為 (0. 028士0. 002)mg/ml，可知該Fomefficinol B有較好的抗結(jié)腸癌活性。實驗例2 :Fomefficinol B體外對胃癌細(xì)胞BGC-823的影響用含10% FBS的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液將Fomefficinol B稀釋成不同濃度，加入接種 有胃癌細(xì)胞BGC-823的96孔板中，每孔200 iU，每組設(shè)5個復(fù)孔，平行設(shè)置細(xì)胞對照組。置 于37°C，5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每日觀察細(xì)胞狀態(tài)。藥物作用72小時后，取出96孔板，吸去 各孔內(nèi)培養(yǎng)液，并加入0. 5mg/ml的MTT溶液200 u 1，平行設(shè)置空白對照組，置于37°C，5% C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4小時后取出，吸出各孔內(nèi)的MTT溶液，分別加入DMS0溶液200 yl， 室溫放置10分鐘，充分震蕩60秒后，于96孔板酶標(biāo)檢測儀上測定570nm處的0D值，計算 各個濃度組藥物對細(xì)胞的生長抑制率和IC5(I，共進(jìn)行兩批實驗，第一批實驗中藥物濃度從 lmg/ml設(shè)起，依次2倍比稀釋成9個濃度，分別為1,0. 5,0. 25,0. 125,0. 063,0. 031,0. 016、 0. 008,0. 004mg/ml ；根據(jù)第一批實驗結(jié)果，第二批實驗中將藥物2倍比稀釋成5個濃度，依 次為 0. 125,0. 063,0. 031,0. 016,0. 008mg/ml，具體實驗結(jié)果見表 2 表2 Fomefficinol B體外對胃癌細(xì)胞BGC-823的影響 注:FomefficinolB 毒性結(jié)果，第一批 IC50 為(0. 029士0. 002)mg/ml，第二批 IC50 為(0.031 士0.002)mg/ml?！啊钡诙鷮嶒炛形丛O(shè)該劑量組.Fomefficinol B 對 BGC-823 細(xì)胞的 IC50 平均為(0. 030士0. 002)mg/ml，可知其具 有很好的抗胃癌活性。實驗例3 :Fomefficinol B體外對肝癌細(xì)胞H印G2的影響用含10% FBS的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液將Fomefficinol B稀釋成不同濃度，加入接種有肝癌細(xì)胞H印G2的96孔板中，每孔200 μ 1，每組設(shè)5個復(fù)孔，平行設(shè)置細(xì)胞對照組。置于 37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每日觀察細(xì)胞狀態(tài)。藥物作用72小時后，取出96孔板，吸去 各孔內(nèi)培養(yǎng)液，并加入0. 5mg/ml的MTT溶液200 μ 1，平行設(shè)置空白對照組，置于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4小時后取出，吸出各孔內(nèi)的MTT溶液，分別加入DMSO溶液200 μ 1， 室溫放置10分鐘，充分震蕩60秒后，于96孔板酶標(biāo)檢測儀上測定570nm處的OD值，計算 各個濃度組藥物對細(xì)胞的生長抑制率和IC5tl，共進(jìn)行兩批實驗，第一批實驗中藥物濃度從 lmg/ml設(shè)起，依次2倍比稀釋成9個濃度，分別為1,0. 5,0. 25,0. 125,0. 063,0. 031,0. 016、 0. 008,0. 004mg/ml ；根據(jù)第一批實驗結(jié)果，第二批實驗中將藥物2倍比稀釋成5個濃度，依 次為 0. 125,0. 063,0. 031,0. 016,0. 008mg/ml，具體實驗結(jié)果見表 3 表3 Fomefficinol B體外對肝癌細(xì)胞H印G2的影響 注=FomefficinolB 毒性結(jié)果，第一批 IC50 為(0. 037士0. 002)mg/ml，第二批 IC50 為(0.038士0.002)mg/ml?！啊钡诙鷮嶒炛形丛O(shè)該劑量組。本實驗中Fomefficinol B 對 H印G2 細(xì)胞的 IC5tl 平均為(0. 0375士0. 002)mg/ml 可見，F(xiàn)omefficinol B有很好的抗肝癌活性。由表1-3的數(shù)據(jù)可知，一定濃度的Fomefficinol B,能明顯的抑制結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT-8、胃癌細(xì)胞BGC-823和肝癌H印G2細(xì)胞的生長，可見Fomeff icinol B抑制大腸腫瘤上 皮細(xì)胞生長的作用明顯，表現(xiàn)了對消化道內(nèi)引發(fā)的腫瘤具有較好的抑制活性。隨著藥物濃 度的增大，抑制作用增強(qiáng)，呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系。并且，其抑制細(xì)胞生長的半數(shù)有效劑量IC5q 遠(yuǎn)小于< 0. 3mg/ml，對正常細(xì)胞的毒性較小。表現(xiàn)Fomefficinol B在防治消化道內(nèi)引發(fā)的 多種腫瘤，尤其結(jié)腸癌、胃癌和肝癌時有效劑量低，作用明顯，毒性低的特點。
權(quán)利要求
如式I所示的3″β，4″α-二甲基-2″(R)，3″(S)，4″(S)-四氫呋喃-5″-酮-2″-螺-23-5′β-甲基-5′(S)-六氫氧雜并[3′，4′13，17]-3α-羥基-甾-8烯化合物。F2009101358408C0000011.tif,F2009101358408C0000012.tif
2.權(quán)利要求1的式I化合物在制備防治腫瘤疾病藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于式I化合物在制備防治消化系統(tǒng)腫瘤藥物 中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，消化系統(tǒng)腫瘤包括肝癌、結(jié)腸癌、直腸癌。
5.含權(quán)利要求1式1化合物的藥物組合物，其特征在于由有效量的式I化合物和藥學(xué) 上可接受的輔料組成。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物可通過口服、舌下、經(jīng)皮、 肌肉或皮下、皮膚粘膜、尿道、陰道或靜脈途徑給藥。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物以口服劑、注射劑及局部給藥制 劑形式存在。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述口服劑包括膠囊劑、口服液、口嚼劑、 丸劑、片劑、顆粒劑；所述注射劑包括注射液、注射用凍干粉針劑型；局部給藥制劑包括霜 劑、軟膏劑、貼劑、噴霧劑。基-留-8烯化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種四環(huán)三萜化合物在制備防治腫瘤疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的試驗證明，該化合物具有顯著防治消化系統(tǒng)腫瘤疾病的作用，尤其具有較好的防治結(jié)腸癌、直腸癌、肝癌等作用。本發(fā)明同時還提供該化合物用于制備防治腫瘤疾病的藥物制劑。
文檔編號A61K31/585GK101875687SQ200910135840
公開日2010年11月3日 申請日期2009年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月29日
發(fā)明者周亞偉 申請人:周亞偉