專利名稱：十四肽生長抑素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物的制備方法，具體地說，本發(fā)明是一種十四肽生長 抑素的制備方法。
背景技術(shù)：
十四肽生長抑素是有十四個氨基酸殘基組成的、具有生物活性的多 肽氨基酸產(chǎn)品。適用于急性胃潰瘍出血，糜爛和出血性胃炎所致的出血、 嚴(yán)重急性食道靜脈曲張出血、胰膽和胃腸婁及急性胰腺炎的治療以及胰 脈術(shù)后并發(fā)癥的預(yù)防。
十四肽生長抑素具有以下的結(jié)構(gòu)式和結(jié)構(gòu)簡式
i i Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-T/p-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys
中國專利申請第03128951.7號(申請日2003年05月29日，公開 日2004年12月08日)公開了一種生長抑素多肽的合成方法，該合成 方法將Wang樹脂為起始原料，以Fmoc保護(hù)的氨基酸為單體，逐個接 上氨基酸，用切肽試劑(TFA/EDT/H20/TIS)進(jìn)行切肽，加入乙醚沉淀粗
5肽，在pH7.0-10.0，于15-35。C下，通空氣氧化，用C18柱進(jìn)行分離純 化。
但目前尚沒有發(fā)現(xiàn)專門用于提高十四肽生長抑素收率的制備方法 的文獻(xiàn)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種十四肽生長抑素的制備方法。
為了實現(xiàn)上述的發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案 一種十四肽生長抑素的制備方法，采用以下步驟 步驟A.分別制備中間體a、中間體b和中間體C;
Fmoc tBu I I
Boc-Ala-Gly-Cys隱Lys-Asn-OH 中間體a
NH.2
Z-Phe-Phe-Trp-OH 中間體b
tBu tBu Fmoc
I I I
H-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OMe 中間體c
I I tBu tBu
6在中間體a的制備中，采用0(30及3- (二乙氧基磷?；?-1， 2， 3，-苯并三嗪-4-酮作為縮合劑，
在中間體b的制備中，采用DCC作為縮合劑； 步驟B.中間體b，中間體c以疊氮基磷酸二苯脂作為縮合劑進(jìn)行
縮合，得到下述的中間體d:
tBu tBu Pmoc
I I I
Z-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser國Cys-OMe 中間體d
I I tBu tBu
步驟C.中間體&和中間體(1以3- (二乙氧基磷?；?-1， 2， 3， 苯并三嗪_4-酮作為縮合劑進(jìn)行縮合得到十四肽生長抑素。如式1所示,
中間體(a)+中間體(b)-
S---------------------------------------s
H-Ala-Gly-Cys-Lys-Asn—Phe-Phe醒Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH
式1
在本發(fā)明中，具體采用以下方法制備中間體a:采用DMF,DCC及3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3，-苯并三嗪-4-酮作為縮合劑的條件下， 控制反應(yīng)溫度-20 3(TC ，反應(yīng)0.5 8小時。反應(yīng)完成后，加固體NaOH或 10%~30%的液體NaOH進(jìn)行皂化反應(yīng)，得到中間體a。如式2所示。
Fmoc tBu I I
Boc-Ala-Gly-OH + Cys-Lys-Asn-OMe__
I
N.H2
Fmoc t:Bu I I
Boc-Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-OH 中間體a 式2
I
NH2
在本發(fā)明中，具體采用以下方法制備中間體b:采用DCC，乙酸乙
酯或氯甲酸芐脂為溶劑，控制反應(yīng)溫度在0 4(TC，反應(yīng)0.5 8小時，反
應(yīng)完成后，加固體NaOH或10%~30%的液體NaOH進(jìn)行皂化反應(yīng)，得
到中間體b。如式3所示。
Z-Phe-Phe-OH + Trp-OMe------------------..........
Z-Phe-Phe-Trp-OH 中間體b
式3
8在本發(fā)明中，具體采用以下方法制備中間體C:采用DMF， DCM 或乙酸乙酯為溶劑，反應(yīng)溫度在0 3(TC，反應(yīng)0.5 8小時，以下述兩種 化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)，得中間體c。如式4所示。
<formula>formula see original document page 9</formula>
在本發(fā)明中，具體采用以下方法制備中間體d:中間體b和中間體 c以疊氮基磷酸二苯脂作為縮合劑；在DMF, DPPA, 二氧六環(huán)和DCM 存在的條件下反應(yīng)，反應(yīng)溫度為-20 40。C之間，反應(yīng)2 40小時，-10 30 。C結(jié)晶，得中間體d。
在上述的步驟C中，中間體3和中間體(1以3- (二乙氧基磷?；? -1， 2， 3，-苯并三嗪-4-酮或疊氮基磷酸二苯脂作為縮合劑，在DMF、 二氧六環(huán)、乙醚、DCM、 DFA、 40%溴化氫乙酸溶液或哌啶存在的條件下，在-20 3(TC反應(yīng)，用雙氧水或空氣氧化，經(jīng)真空干燥除去反應(yīng)體系
中的溶劑，得十四肽生長抑素。疊氮基磷酸二苯脂作為縮合劑時，是把
R-COOH進(jìn)行疊氮化(R-CON3)，然后再進(jìn)行縮合反應(yīng)。
在本發(fā)明所指明的流程中，所使用的保護(hù)基、縮合劑為
Fmoc:芴甲氧羰基，作為氨基酸保護(hù)基，巰基保護(hù)基。
BOC:叔丁氧羰基，作為氨基酸保護(hù)基，羥基保護(hù)基。 Z:芐氧羰基，作為氨基酸保護(hù)基。
OMe:甲酯基團(tuán)，作為羧基保護(hù)基。
DPPA:疊氮基磷酸二苯脂，作為新型縮合劑。
DEPBT: 3- (二乙氧基磷?；?-1， 2, 3，-苯并三嗪-4-酮，作為
新型縮合劑。
在本發(fā)明所指明的流程中，所使用的溶劑或試劑為
DMF: N.N-二甲基甲酰胺；
二氧六環(huán)；
TFA:三氟乙酸；(濃度為0—50%);
DCM: 二氯甲烷；
乙酸乙脂；
哌啶20—607。的DMF溶液。 本發(fā)明具有以下的優(yōu)點
本發(fā)明具有肽鏈接完全、純化簡單易行、收率高、目標(biāo)產(chǎn)物十四肽 生長抑素光學(xué)活性高及化學(xué)純度高的優(yōu)點。目標(biāo)產(chǎn)物十四肽生長抑素收
率為8—10% (按酪氨酸甲酯計)。
具體實施例方式
制備中間體a:采用DMF，DCC及3- (二乙氧基磷?；?-1， 2， 3，
10-苯并三嗪-4-酮作為縮合劑的條件下，控制反應(yīng)溫度25。C，反應(yīng)5小時。 反應(yīng)完成后，加20wt。/。的液體NaOH進(jìn)行皂化反應(yīng)，得到中間體a。
采用DCC，乙酸乙酯或氯甲酸芐脂為溶劑，控制反應(yīng)溫度在20。C， 反應(yīng)5小時，反應(yīng)完成后，加20wtM的液體NaOH進(jìn)行皂化反應(yīng)，得 到中間體b。
采用DMF， DCM或乙酸乙酯為溶劑，反應(yīng)溫度在15°C，反應(yīng)5 小時，以下述兩種化合物做加成反應(yīng)，得中間體c。
Fmoc-Cys-Ome 化合物1
.tBu tBu
I I Z-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OH 化合物2
I I tBu tBu
中間體b和中間體c以疊氮基磷酸二苯脂作為縮合劑，在DMF, DPPA， 二氧六環(huán)和DCM存在的條件下反應(yīng)，反應(yīng)溫度為20°C，反應(yīng) IO小時，-l(TC結(jié)晶，得中間體d。
中間體3和中間體(1以3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3，-苯并三嗪 -4-酮作為縮合劑，在DMF存在的條件下，在2(TC反應(yīng)，用雙氧水氧化， 經(jīng)真空干燥除去反應(yīng)體系中的溶劑，得十四肽生長抑素。
實施例2
制備中間體a:采用DMF,DCC及3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3，-苯并三嗪-4-酮作為縮合劑的條件下，控制反應(yīng)溫度25。C，反應(yīng)2小時。 反應(yīng)完成后，加20wt。/o的液體NaOH進(jìn)行皂化反應(yīng)，得到中間體a。
采用DCC，乙酸乙酯或氯甲酸芐脂為溶劑，控制反應(yīng)溫度在2(TC， 反應(yīng)2小時，反應(yīng)完成后，加20wt。/。的液體NaOH進(jìn)行皂化反應(yīng)，得 到中間體b。
采用DMF， DCM或乙酸乙酯為溶劑，反應(yīng)溫度在3(TC，反應(yīng)0.5 小時，以下述兩種化合物做加成反應(yīng)，得中間體c。
Fmoc-Cys-Ome 化合物1
.tBu tBu
I I Z-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OH 化合物2
I I tBu tBu
中間體b和中間體c以疊氮基磷酸二苯脂作為縮合劑，在DMF, DPPA， 二氧六環(huán)和DCM存在的條件下反應(yīng)，反應(yīng)溫度為20°C,反應(yīng) IO小時，-l(TC結(jié)晶，得中間體d。
中間體3和中間體(1以3- (二乙氧基磷?；?-1， 2， 3，-苯并三嗪 -4-酮作為縮合劑，在DMF存在的條件下，在2(TC反應(yīng)，用雙氧水氧化， 經(jīng)真空干燥除去反應(yīng)體系中的溶劑，得十四肽生長抑素。
實施例3
制備中間體a:采用DMF，DCC及3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3，
12-苯并三嗪-4-酮作為縮合劑的條件下，控制反應(yīng)溫度25。C，反應(yīng)8小時。 反應(yīng)完成后，加20wty。的液體NaOH進(jìn)行皂化反應(yīng)，得到中間體a。
采用DCC，乙酸乙酯或氯甲酸芐脂為溶劑，控制反應(yīng)溫度在2(TC， 反應(yīng)8小時，反應(yīng)完成后，加20wty。的液體NaOH進(jìn)行皂化反應(yīng)，得 到中間體b。
采用DMF, DCM或乙酸乙酯為溶劑，反應(yīng)溫度在0。C，反應(yīng)8小 時，以下述兩種化合物做加成反應(yīng)，得中間體c。
Fmoc-Cys-Ome 化合物1
.tBu tBu
I I Z-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OH 化合物2
I I tBu tBu
中間體b和中間體c以疊氮基磷酸二苯脂作為縮合劑，在DMF， DPPA， 二氧六環(huán)和DCM存在的條件下反應(yīng)，反應(yīng)溫度為30°C,反應(yīng) IO小時，-l(TC結(jié)晶，得中間體d。
中間體￡1和中間體(1以3- (二乙氧基磷?；?-1， 2， 3，-苯并三嗪 _4-酮作為縮合劑，在DMF存在的條件下，在2(TC反應(yīng)，用雙氧水氧化， 經(jīng)真空干燥除去反應(yīng)體系中的溶劑，得十四肽生長抑素。
以上對本發(fā)明所提供的十四肽生長抑素的制備方法進(jìn)行了詳細(xì)介 紹，本文中應(yīng)用了具體個例對本發(fā)明的原理及實施方式進(jìn)行了闡述，以
13上實施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想；同時， 對于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明的思想，在具體實施方式
及應(yīng) 用范圍上均會有改變之處，綜上所述，本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對本發(fā) 明的限制。
權(quán)利要求
1. 一種十四肽生長抑素的制備方法，其特征在于，采用以下步驟A. 分別制備中間體a、中間體b和中間體c； 中間體aZ-Phe-Phe-Trp-OH中間體b 中間體c在中間體a的制備中，采用DCC及3-(二乙氧基磷酰基)-1，2，3，-苯并三嗪-4-酮作為縮合劑，在中間體b的制備中，采用DCC作為縮合劑；在中間體c的制備中，采用疊氮基磷酸二苯脂作為縮合劑；B. 中間體b，中間體c以疊氮基磷酸二苯脂作為縮合劑進(jìn)行縮合，得到下述的中間體d中間體dC. 中間體a和中間體d以3-(二乙氧基磷?；?-1，2，3，-苯并三嗪-4-酮作為縮合劑進(jìn)行縮合得到十四肽生長抑素。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的十四肽生長抑素的制備方法，其特征在 于，采用以下方法制備中間體a:采用DMF,DCC及3- (二乙氧基磷酰 基)-l， 2， 3，-苯并三嗪-4-酮作為縮合劑的條件下，控制反應(yīng)溫度-20 30 °C，反應(yīng)0.5 8小時，得到中間體a。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的十四肽生長抑素的制備方法，其特征在 于，采用以下方法制備中間體b:采用DCC，乙酸乙酯或氯甲酸芐脂為 溶劑，控制反應(yīng)溫度在0 4(TC，反應(yīng)0.5 8小時，得到中間體b。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的十四肽生長抑素的制備方法，其特征在 于，采用以下方法制備中間體c:采用DMF， DCM或乙酸乙酯為溶齊iJ， 反應(yīng)溫度在0 30°C，反應(yīng)0.5 8小時，以下述兩種化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)， 得中間體c。Fmoc-Cys-Ome 化合物1<formula>formula see original document page 4</formula>化合物2 。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的十四肽生長抑素的制備方法，其特征在于，采用以下方法制備中間體d:中間體b和中間體C以疊氮基磷酸二苯脂作為縮合劑;在DMF, DPPA, 二氧六環(huán)和DCM存在的條件下反應(yīng)， 反應(yīng)溫度為-20 4(TC之間，反應(yīng)2 40小時，-10~30°0結(jié)晶，得中間體d。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的十四肽生長抑素的制備方法，其特征在 于所述的步驟C中，中間體a和中間體d以3-(二乙氧基磷?；?-l， 2， 3，-苯并三嗪-4-酮或疊氮基磷酸二苯脂作為縮合劑，在DMF、 二氧 六環(huán)、乙醚、DCM、 DFA、 40%溴化氫乙酸溶液或哌啶存在的條件下， 在-20 3(TC反應(yīng)，用雙氧水或空氣氧化，經(jīng)真空干燥除去反應(yīng)體系中的 溶劑，得十四肽生長抑素。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種十四肽生長抑素的制備方法。采用DCC及3-(二乙氧基磷酰基)-1，2，3，-苯并三嗪-4-酮作為縮合劑制備中間體a，采用DCC為縮合劑制備中間體b；中間體b和中間體c以疊氮基磷酸二苯脂作為縮合劑進(jìn)行縮合，得到中間體d；中間體a和中間體d縮合得到十四肽生長抑素。本發(fā)明具有肽鏈接完全、操作條件溫和、純化簡單易行、收率高、目標(biāo)產(chǎn)物十四肽生長抑素光學(xué)活性高及化學(xué)純度高的優(yōu)點。按酪氨酸甲酯計，目標(biāo)產(chǎn)物十四肽生長抑素收率為8～10％。
文檔編號A61P1/18GK101508724SQ20091013120
公開日2009年8月19日 申請日期2009年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月9日
發(fā)明者留 劉, 純 劉, 吳永平, 王思回 申請人:吳永平