專利名稱：敬釗纓毛蜘蛛毒素提取物敬釗毒素-v在制備戒毒藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多肽活性物質(zhì)在醫(yī)用配制品中的用途，尤其是敬釗纓毛蜘
蛛毒素提取物一敬釗毒素一v在制備戒毒藥物中的用途。
背景技術(shù)：
中國專利文獻cn1872878 (zl 200610031864.5)公開了從敬釗纓毛蜘蛛粗 毒中提取分離出新型神經(jīng)毒素一敬釗毒素一v (以下簡寫為jztx-v)的方法。 jztx- v是一種新型哺乳動物神經(jīng)毒素，其化學結(jié)構(gòu)為由29個氨基酸殘基以特 定的順序組成的多肽，含有三對鏈內(nèi)二硫鍵，其化學結(jié)構(gòu)如下式
j-S-S-j
nh2-y-c-q-k:-w-m-w-t-c-d-s-k:-r-a-c-c:-e:-g-l-r-c-k:-l-w-c-r-k-i-i-nh2
1-s-s-
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供敬釗纓毛蜘蛛毒素提取物一jztx-v在制備戒毒藥 物中的應(yīng)用，這種毒素能夠明顯減輕嗎啡成癮小鼠的戒斷癥狀，另外，此毒素 還具有良好的鎮(zhèn)痛效果且無類似阿片類藥物成癮等毒副作用，安全窗口大。
本發(fā)明所指的jztx-v的化學結(jié)構(gòu)式如附圖1所示，其中y為酪氨酸，c為 半胱氨酸，Q為谷氨酸，K為賴氨酸，W為色氨酸，M為甲硫氨酸，T為蘇氨 酸，D為天門冬氨酸，S為絲氨酸，R為精氨酸，A為丙氨酸，E為谷氨酸，G 為甘氨酸，l為亮氨酸，i為異亮氨酸。jztx-v可作為單一有效活性組份用于 制備戒除阿片成癮的藥物。
阿片成癮是指反復多次使用阿片類藥物后，可形成精神依賴性和軀體依賴 性，急性停藥后會產(chǎn)生一系列的戒斷癥狀群，停用藥物后相當長的一段時間內(nèi) 存在稽延性戒斷癥狀和藥物渴求，是一種慢性復發(fā)性腦病。目前，戒毒藥物主 要有幾類，阿片受體激動劑，如美沙酮，實為阿片類藥物替代療法；非阿片受體激動劑，如可樂定，緩解戒斷癥狀；阿片受體拮抗劑，如納曲酮，用于脫毒 后防止復吸；中藥類戒毒藥。但是這些藥物雖然對阿片成癮戒斷有不同的治療 作用，但本身都有一定程度的副作用，戒毒效果不很理想。
JZTX- V可與特異性分布于外周神經(jīng)元上的河豚毒素不敏感型鈉離子通道 亞型(Navl.8、 Navl.9)以及河豚毒素敏感型鈉離子通道亞型Navl.7結(jié)合，抑 制相關(guān)的電壓門控鈉離子通道電流而阻斷神經(jīng)信號的傳導。JZTX-V具有明顯的 抑制嗎啡成癮小鼠的戒斷反應(yīng)的作用，且沒有明顯的毒副作用。這已經(jīng)被JZTX-V的藥理、藥效實驗所證實。


圖1是ZJTX-V的化學結(jié)構(gòu)。
圖2是JZTX-V對6天嗎啡成癮小鼠跳躍次數(shù)的影響。
圖3是JZTX-V對6天嗎啡成癮小鼠體重丟失的影響。
圖4是JZTX-V對一次注射嗎啡成癮小鼠跳躍次數(shù)影響。
圖5是JZTX-V對一次注射嗎啡成癮小鼠體重丟失的影響。
圖6是腦室注射JZTX-V對6天嗎啡成癮小鼠跳躍次數(shù)的影響。
圖7是腦室注射JZTX-V對6天嗎啡成癮小鼠體重丟失的影響。
為了更好的理解和更充分的公開本發(fā)明，下面將結(jié)合附圖與動物藥理實驗
對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
本發(fā)明將通過兩種嗎啡成癮小鼠模型以及皮下注射與腦室注射兩種用藥途
徑，說明JZTX- V的戒毒作用。圖中*表示與模型組相比差異顯著P<0.05，
***表示與模型組相比差異顯著P〈0.001。
具體實施例方式
實施例l:皮下注射JZTX-V (其結(jié)構(gòu)式如圖l所示，下同)對6天嗎啡成 癮小鼠的治療作用
1)實驗用主要原料實驗用JZTX-V是利用多肽合成儀進行芴甲氧羰基固 相化學合成后經(jīng)反相HPLC分離純化而得到，同時通過HPLC和MALDI-TOF 質(zhì)譜儀鑒定，其純度為98%以上；昆明小鼠由軍事醫(yī)學科學院動物房提供，體 重18-22 g之間，生理鹽水與嗎啡均由軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所提供。2) 6天嗎啡成癮小鼠模型的建立連續(xù)6天(3次/天)小鼠皮下注射嗎啡， 每天每次嗎啡注射劑量依次為10、 20、 30、 40、 50、 60 mg/kg。第七天注射一 次(嗎啡濃度70mg/kg )， 5h后腹腔注射6 mg/kg納洛酮催促戒斷癥狀。陰性 對照每天皮下注射生理鹽水(0.2ml/只)，注射時間、次數(shù)、納洛酮催促與模型 組相同。
3) 藥物劑量設(shè)置納絡(luò)酮催促前50min給予皮下注射藥物治療，被試藥物 JZTX- V劑量為25 (ig/kg體重；陽性對照藥物可樂定的劑量為250嗎/kg體重， 陰性對照和嗎啡模型組注射生理鹽水，注射容量同以上測試藥物。
4) 治療效果評價跳躍次數(shù)(注射納洛酮5min后記錄15min內(nèi)老鼠跳躍 的次數(shù))；納洛酮催促前后lh體重丟失。
5) 實驗結(jié)果與分析
① 跳躍次數(shù)
模型組和各給藥組的跳躍次數(shù)均顯著多于對照，且具有統(tǒng)計學意義 (PO.OOl)。與模型組相比，可樂定組和JZTX-V (25|tig/kg)組跳躍次數(shù)顯著減 少(P<0.05)，但可樂定和JZTX-V組間無差別(圖2)。
② 催促前后lh體重丟失
從催促前后lh體重丟失可以看出，模型組體重丟失明顯高于對照，且具有 統(tǒng)計學意義(PO.OOl)，證明模型成功。與模型組相比，可樂定組和JZTX-V(25 )Lig/kg)組體重丟失均顯著降低(P<0.05)，但可樂定和JZTX-V組間無差別(圖 3)。
總之，25pg/kg的JZTX-V表現(xiàn)出與可樂定相當?shù)闹委熜Ч?br> 實施例2:皮下注射JZTX-V對一次注射嗎啡成癮小鼠的治療作用
1) 實驗用主要原料JZTX-V合成見實驗1;SD實驗大鼠由北京大學醫(yī)學
部動物中心提供，體重18-22g之間，生理鹽水與嗎啡均由北京大學醫(yī)學部藥物 依賴所提供。
2) l次嗎啡注射小鼠模型的建立小鼠皮下注射嗎啡，劑量為50mg/kg。 對照注射生理鹽水(0.2ml/只)。4.5h后腹腔注射4mg/kg納洛酮催促戒斷癥狀。
3) 藥物劑量設(shè)置納絡(luò)酮催促前50min給予皮下注射藥物治療，被試藥物 JZTX-V設(shè)置四個劑量組，分別為17.5 mg/kg、 5.0嗎/kg、 1.75嗎/kg和0.5 |xg/kg 體重；對照和嗎啡模型組注射生理鹽水，注射容量同以上測試藥物。
4) 治療效果評價同實驗l。
5) 實驗結(jié)果與分析① 跳躍次數(shù)
模型組和各JZTX-V給藥組的跳躍次數(shù)均顯著多于對照，且具有統(tǒng)計學意義 (PO.Ol)。與模型組相比，JZTX-V的5和1.75pg/kg劑量組跳躍次數(shù)顯著減少， (P<0.05)，但兩個劑量之間無顯著差異。其他兩個17.5和0.5 pg/kg劑量組低于 模型組但差異不顯著(圖4)。
② 催促前后lh體重丟失
從催促后lh體重丟失結(jié)果得出，模型組體重丟失明顯高于對照，且具有 統(tǒng)計學意義(PO.05),證明模型成功。與模型組相比，JZTX-V的5、 1.75和 0.5 pg/kg劑量組體重丟失均顯著降低(P<0.05),但三者之間差異不顯著。17.5 pg/kg劑量組低于模型組但差異不顯著(圖5 )。
總之，在低劑量(25 pg/kg)范圍內(nèi)JZTX-V都顯示治療效果，從所設(shè)4 個濃度實驗結(jié)果得出，5和1.75 pg/kg兩劑量治療效果較好，此結(jié)果與JZTX-V 對6天嗎啡成癮小鼠的實驗結(jié)果一致。
實施例3:小鼠腦室注射JZTX- V對6天嗎啡成癮小鼠的治療作用
1) 實驗用主要原料同實驗2。
2) 6天嗎啡成癮小鼠模型的建立同實驗1。
3) 藥物劑量設(shè)置納絡(luò)酮催促前50min給予小鼠右側(cè)腦室注射藥物治療， 被試藥物JZTX-V為0.5 pg/kg體重；對照嗎啡模型組注射生理鹽水，注射容量 同以上測試藥物。
4) 治療效果評價同實驗l。
5) 實驗結(jié)果與分析
① 跳躍次數(shù)
模型組的跳躍次數(shù)均顯著多于對照，且具有統(tǒng)計學意義(PO.OOl)，證明模 型建立方法有效。與模型組比，JZTX-V治療組跳躍次數(shù)顯著減少(P<0.001)， 且與對照相當(圖6)。
② 催促前后lh體重丟失
從催促后lh體重丟失結(jié)果得出，模型組體重丟失明顯高于對照組 (PO.OOl)，證明模型成功。與模型組相比，JZTX-V治療組體重丟失顯著降低 (PO.001)(圖7)。
從實驗2和3結(jié)果看，腦室給藥效果約為實驗2皮下注射的50倍，說明腦 室注射治療JZTX-V直接作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，其戒毒的治療效果更為顯著。
權(quán)利要求
敬釗纓毛蜘蛛毒素提取物—敬釗毒素—V(簡寫為JZTX-V)在制備戒毒藥物中的應(yīng)用，所說的JZTX-V的化學結(jié)構(gòu)式為其中Y為酪氨酸，C為半胱氨酸，Q為谷氨酸，K為賴氨酸，W為色氨酸，M為甲硫氨酸，T為蘇氨酸，D為天門冬氨酸，S為絲氨酸，R為精氨酸，A為丙氨酸，E為谷氨酸，G為甘氨酸，L為亮氨酸，I為異亮氨酸，其特征在于JZTX-V作為單一有效活性組份用于制備戒毒藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種多肽物質(zhì)在醫(yī)用配制品中的用途，尤其是用化學法制備的敬釗纓毛蜘蛛毒素提取物——敬釗毒素-V(簡寫為JZTX-V)在戒毒藥物中的用途。JZTX-V可作為單一有效活性組份用于制備戒毒(阿片類毒品)藥物。由于JZTX-V可以通過與分布于外周神經(jīng)元上的河豚毒素不敏感型鈉離子通道亞型(Nav1.8、Nav1.9)以及河豚毒素敏感型鈉離子通道亞型Nav1.7結(jié)合，抑制相關(guān)的電壓門控鈉離子通道電流而阻斷神經(jīng)信號的傳導，因此具有一定的戒除阿片成癮的作用，且沒有明顯的毒副作用?？捎糜谥苽渲委煱⑵惗酒烦砂a的戒毒藥。
文檔編號A61P25/00GK101543624SQ200910130169
公開日2009年9月30日 申請日期2009年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月20日
發(fā)明者劉中華, 曾雄智, 梁宋平, 鵬 陳 申請人:深圳金蜘蛛生物科技有限公司