專利名稱：一種中藥組合物在制備減少腎臟水通道蛋白2表達(dá)的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物的新用途，具體地，涉及一種中藥組合物在制備減少 腎臟水通道蛋白2表達(dá)的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
慢性心力衰竭(CHF)的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)由諸多神經(jīng)體液因素參與的過(guò)程，過(guò)度 的神經(jīng)體液激活，引起體液潴留等病理生理表現(xiàn)。已有證據(jù)表明，由精氨酸加壓素(AVP)調(diào) 節(jié)的腎臟水通道蛋白2(AQP2)增加集合管對(duì)水的重吸收，對(duì)CHF時(shí)水潴留起著重要的作用。中醫(yī)絡(luò)病理論認(rèn)為，心氣虛乏、運(yùn)血無(wú)力是充血性心衰發(fā)生的中醫(yī)病機(jī)之本；絡(luò)脈 瘀阻是發(fā)病的中心環(huán)節(jié)，津液不循脈絡(luò)運(yùn)行，滲出脈外而為水濕之邪發(fā)為水腫，瘀血水飲阻 滯絡(luò)脈，日久結(jié)聚成形導(dǎo)致心絡(luò)絡(luò)息成積是其發(fā)展加重的結(jié)果。與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)提出的神經(jīng)內(nèi) 分泌系統(tǒng)過(guò)度激活引起血流動(dòng)力學(xué)改變，導(dǎo)致心肌重塑，進(jìn)而出現(xiàn)慢性心力衰竭的基本機(jī) 制相一致。因此，當(dāng)代預(yù)防治療慢性心力衰竭的關(guān)鍵，已經(jīng)從過(guò)去的改善臨床癥狀，轉(zhuǎn)變?yōu)?阻斷神經(jīng)一內(nèi)分泌的過(guò)度激活，抑制心肌重塑本發(fā)明是在中國(guó)專利ZL 02146573. 8的基礎(chǔ)上進(jìn)行的改進(jìn)發(fā)明，在此全文引用該 專利文件記載的內(nèi)容。中國(guó)專利ZL 02146573. 8未記載該中藥組合物在制備減少腎臟水通 道蛋白2表達(dá)的藥物中的應(yīng)用；

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種中藥組合物在制備減少腎臟水通道蛋白2表達(dá)的藥物中 的應(yīng)用；本發(fā)明還提供了該中藥組合物在制備改善心臟功能藥物中的應(yīng)用；本發(fā)明中藥組合物的有效成分主要包括黃芪、附子、丹參及藶葶子等祖國(guó)傳統(tǒng)中 藥材，以益氣溫陽(yáng)藥為治絡(luò)強(qiáng)心之本，輔以活血通絡(luò)藥，使氣旺血行絡(luò)通，阻斷血瘀絡(luò)阻的 病理中心環(huán)節(jié)，兼用利水消腫藥以治其標(biāo)，可以有效減少腎臟水通道蛋白2的表達(dá)，并且有 效改善心臟功能。本發(fā)明中藥組合物中，作為活性組分的原料藥的拉丁名及其加工方法來(lái)自《中藥 大辭典》(1977年7月，第一版，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社)和《中國(guó)藥典》(2005年版，化學(xué)工業(yè) 出版社)。所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成黃芪150-450份、附子40-120份、人參或黨參75_225份、丹參75-225份、葶藶子 50-150份、香加皮或南五加皮60-180份、澤瀉75-225份、玉竹25-75份、桂枝30-90份、紅 花30-90份、陳皮25-75份；優(yōu)選地，所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成黃芪450份、附子112. 5份、人參或黨參225份、丹參225份、葶藶子150份、香加
4皮或南五加皮180份、澤瀉225份、玉竹75份、桂枝90份、紅花90份、陳皮75份；或黃芪250份、附子112. 5份、人參或黨參200份、丹參120份、葶藶子135份、香加 皮或南五加皮150份、澤瀉200份、玉竹60份、桂枝75份、紅花75份、陳皮60份。本發(fā)明還提供了所述中藥組合物的活性成分由下列步驟制成1)將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參或黨參、香加皮或南五加皮加7-9倍量70%乙醇提 取，濾過(guò)，濃縮提取液至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1. 25-1. 30的清膏；2)用水提取桂枝、陳皮的揮發(fā)油，得揮發(fā)油A、水溶液B、藥渣C ；3)加6-10倍量水煎煮附子、丹參、玉竹、紅花2次，每次2小時(shí)，將所得水溶液濾 過(guò)，得濾液D ；4)將桂枝、陳皮提揮發(fā)油后的水溶液B濾過(guò)，收集得水溶液濾液E，再加水煎煮藥 渣C，濾過(guò)得濾液F;5)合并濾液D、濾液E、濾液F，濃縮至相對(duì)密度為1.25-1. 30清膏，攪拌中加入乙 醇，至醇濃度70%，靜置，濾過(guò)，濾液濃縮至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1. 25-1. 30清膏G ；6)步驟1)所得清膏、揮發(fā)油A和步驟5)所得清膏G構(gòu)成中藥組合物的活性成分。本發(fā)明中藥組合物還可以按常規(guī)的制劑工藝，例如，范碧亭《中藥藥劑學(xué)》(上海科 學(xué)出版社1997年12月第1版)記載的制備工藝，制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，例如 膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑等。為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時(shí)加入藥學(xué)可接受的輔料，如范碧亭 《中藥藥劑學(xué)》(上?？茖W(xué)出版社1997年12月第1版)中各劑型記載的輔料，例如填充劑、 崩解劑、潤(rùn)滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質(zhì)等。填充劑包括淀粉、預(yù)膠 化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶 纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等； 潤(rùn)滑劑包括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括聚乙烯吡咯烷 酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、 羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑 包括甜味劑及各種香精；防腐劑包括尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯 扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質(zhì)包括PEG6000，PEG4000，蟲(chóng)蠟等。本發(fā)明還提供了該中藥組合物膠囊劑的制備方法(1)將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參或黨參、香加皮或南五加皮按照比例量稱取，加8 倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓回 收乙醇，濃縮至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1.25-1.30的清膏，備用；(2)按照比例稱取桂枝、陳皮，蒸餾提取揮發(fā)油，提油后的水溶液濾過(guò)，備用，殘?jiān)?再加8倍量水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合并水煎液，備用；(3)按比例量稱取附子、丹參、玉竹、紅花，加水9倍量煎煮2次，每次2小時(shí)，合并 提取液，濾過(guò)，與步驟(2)中桂枝、陳皮水煎液合并，濃縮至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1. 25-1. 30 清膏，攪拌中加入乙醇，至醇濃度70%，4°C以下靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，濃 縮至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1. 25-1. 30清膏，與步驟(1)的醇提清膏混合，65-70°C烘干；(4)將步驟(3)所得干膏粉碎成100目粉，加適量70%乙醇制粒，噴入步驟⑵所得桂枝、陳皮揮發(fā)油，混勻，裝膠囊，即得。本發(fā)明中藥組合物的用量，按活性組分原料藥總重量計(jì)，為4-20克/日，可每日服 用一次，優(yōu)選為分2-4次服用，還優(yōu)選為6-12克/日，分2-4次服用，更優(yōu)選為7. 59克/日， 分3次服用。實(shí)驗(yàn)例為闡明本發(fā)明中藥組合物減少腎臟水通道蛋白2表達(dá)的活性，用按實(shí)施例1方法 所制得的藥物(以下稱本發(fā)明藥物)進(jìn)行了下列試驗(yàn)。1、材料和方法1.1主要試劑和儀器呋塞米片由上海萬(wàn)安特公司生產(chǎn)，批號(hào)0200456 ;Trizol (Invitrogen Life Technologies公司)；cDNA合成試劑盒(Gene Copoeia公司)；小動(dòng)物呼吸機(jī)(第二軍醫(yī) 大學(xué)DW-2000型)；冰點(diǎn)滲透壓儀(美國(guó)Advanced Instruments公司)；熒光定量PCR儀 (BI0-RAD公司)；彩色Doppler超聲顯像儀(Acuson公司)；精密電子天平(TA1003)；顯微 照相攝像(OLYMPUS BX51) ；VersioM. O圖像分析系統(tǒng)(美國(guó)Kodak公司)；低溫超速離心機(jī) (Sigma)；超純水裝置(MilliQ) ；MPA-V型多道生物信號(hào)分析系統(tǒng)(第二軍醫(yī)大學(xué))；電泳儀 (BIO-RAD)；冰凍切片機(jī)(Sandon)；酶標(biāo)儀(BioTek，ELX800)；全自動(dòng)生化分析儀(OLYMPUS AU640)；兔抗大鼠多克隆抗體(購(gòu)自Santa Cruz公司)；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗(羊 抗兔IgG，購(gòu)自武漢博士德公司)；羊抗兔熒光抗體IgG(北京中杉生物)；本發(fā)明藥物粉碎 藥粉(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))。1. 2 方法1.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制作和分組雄性SD大鼠180 220g(由南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，采用左 冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致急性心肌梗死(AMI)后心力衰竭大鼠模型，在鹽酸戊巴比妥鈉(35mg. kg—1) 腹腔麻醉下，經(jīng)口氣管插管，接小動(dòng)物呼吸機(jī)，潮氣量2-3ml，吸呼比1 2，呼吸頻率60次 /分。沿左胸骨第4 5肋間開(kāi)胸。暴露心臟并打開(kāi)心包，在左心耳和右心室流出道之間 以6. O無(wú)創(chuàng)絲線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，肉眼觀察前降支供血區(qū)變蒼白，心電圖導(dǎo)聯(lián)ST段 弓背向上抬高，提示AMI手術(shù)成功，然后擠壓胸腔以排出空氣并逐層關(guān)閉胸腔，術(shù)后經(jīng)腹腔 注射慶大霉素2. 4X IO4U. Kg"1, cf1，共3日，預(yù)防感染。AMI術(shù)后4周存活51只，將這些大鼠隨機(jī)分為慢性心力衰竭組(n = 10只，簡(jiǎn)稱為 C組)，本發(fā)明藥物高、中、低劑量治療組(η = 11，11，10只，分別簡(jiǎn)稱為Ql、Q2和Q3組)，呋 塞米治療組(η = 9，只簡(jiǎn)稱為F組)，假手術(shù)組(η= 10只，簡(jiǎn)稱為S組)為僅穿線而未行冠 狀動(dòng)脈結(jié)扎大鼠，各組大鼠經(jīng)苦味酸標(biāo)記，置于代謝籠飼養(yǎng)，待適應(yīng)3日后，開(kāi)始藥物灌胃， 本發(fā)明藥物粉0.3、0.6、1.28溶于2!111去離子水中灌胃，呋塞米組藥物劑量為41^. kg—1，假手 術(shù)組、慢性心衰組大鼠給予生理鹽水2ml灌胃，收集大鼠24小時(shí)尿液并記錄尿量，大鼠灌胃 4周后，稱量大鼠體重，行超聲心動(dòng)圖和血液動(dòng)力學(xué)檢查，然后處死大鼠，采集血液和組織標(biāo) 本。1. 2. 2尿液收集和尿滲量的測(cè)定記錄大鼠代謝籠內(nèi)24h尿量，所收集尿液在4°C條件，3000r/min離心lOmin，去除 細(xì)胞殘骸和食物殘?jiān)?，然后用冰點(diǎn)抑制法測(cè)定尿滲量。
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1.2.3 超聲心動(dòng)圖檢查用彩色Doppler超聲顯像儀，M型曲線在左室短軸乳頭肌水平測(cè)量，測(cè)定大鼠舒張 期左室前壁厚度(AWTd)、后壁厚度(PWTd)、左室舒張末內(nèi)徑(LVEDd)及收縮末內(nèi)徑(LVESd) 等指標(biāo)，計(jì)算出射血分?jǐn)?shù)(EF)、短軸收縮率(FS)等數(shù)值，以連續(xù)3個(gè)心動(dòng)周期測(cè)量值的平均 值作為最后的檢測(cè)數(shù)據(jù)，用MO盤(pán)儲(chǔ)存資料，專人分析。1. 2. 4血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)測(cè)定戊巴比妥鈉(30mg. kg—1)腹腔麻醉下，鈍性分離大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈，聚乙烯導(dǎo)管系 統(tǒng)充滿0.3%肝素生理鹽水以抗凝血，將導(dǎo)管插入頸動(dòng)脈、升主動(dòng)脈，穩(wěn)定IOmin后，應(yīng)用多 道生理儀記錄平均動(dòng)脈壓(MBP)，然后繼續(xù)送入導(dǎo)管，直至出現(xiàn)左心室壓力曲線后，保持血 流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定15min時(shí)，分別記錄左室收縮末壓(LVESP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓 最大上升速率(+dp/dtmax)、左室內(nèi)壓最大下降速率(-dp/dtmax)等指標(biāo)，取3次測(cè)定結(jié)果 的平均值作為實(shí)驗(yàn)值，所有電信號(hào)均用計(jì)算機(jī)軟件分析處理。1.2.5免疫熒光大鼠腎臟髓質(zhì)標(biāo)本快速冷凍后，經(jīng)恒溫冷凍切片，片厚3 μ m。冷凍切片在空氣中 自然干燥，加入含30mg/L Triton X-IOO的PBS室溫放置30min，經(jīng)兔抗大鼠AQP2 (稀釋度 為1 200)4°C孵育12h后，用FITC標(biāo)記的山羊抗兔(稀釋度為1 200) IgG抗血清室溫 避光孵育2h。最后用甘油與PBS(1 1)的混合液封片。每步驟后均用O.Olmol/L PBS(pH 7.4)充分洗滌。自然風(fēng)干后，熒光顯微鏡下觀察。1. 2. 6實(shí)時(shí)熒光定量法(qPCR)檢測(cè)大鼠腎臟髓質(zhì)AQP2mRNA表達(dá)用Trizol 抽提的大鼠腎臟組織總 RNA 1 μ g,按照 First Strand cDNA Synthesis Kit的操作流程用Olig0(KT)18進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄獲得單鏈cDNA。同時(shí)定量PCR的引物設(shè)計(jì)參考基 因在NCBI標(biāo)準(zhǔn)序列，利用Primer Premier 5進(jìn)行跨內(nèi)含子設(shè)計(jì)，其中Aqp2 (ΝΜ_012909. 2) 上游弓丨物5， -ggttgctccatgaatccag-3，，下游弓丨物5， -ggttgctccatgaatccag-3，； 內(nèi)參照 GAPDH(ΝΜ_017008. 3)上游引物:5，-ggaccaggttgtctcctgtg-3，，下游引物 5’ -tgtaggccatgaggtccac-3’。整個(gè)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)在iQ5 熒光定量PCR儀 (BIO-RAD)上完成，反應(yīng)體系為20μ 1，包含上下游引物各0.4yM，2XAllinone Q-PCR Mix(GeneCopoeia) 10 μ 1，模板 cDNA 0. 5 μ 1。PCR 循環(huán)條件設(shè)置為 95°C預(yù)變性 10min，95°C 變性10s，57°C退火20s，72°C延伸15s并讀熒光，共40個(gè)循環(huán)，每個(gè)基因做3個(gè)復(fù)管，PCR 產(chǎn)物的特異性通過(guò)融解曲線分析確認(rèn)。所得到的原始數(shù)據(jù)經(jīng)內(nèi)對(duì)照GAPDH歸一化處理后用 Δ Δ Ct法進(jìn)行Aqp2和NKCC2的表達(dá)量分析。1. 2. 7 Western blot檢測(cè)大鼠腎臟髓質(zhì)AQP2蛋白的表達(dá)取腎臟髓質(zhì)100mg，剪碎后加入1. 5ml含蛋白酶抑制劑的細(xì)胞裂解液(50mmol/L Tris-HCl, ρΗ7· 4，lOmmol/LEDTA, ρΗ7· 2，去氧膽酸鈉，0. 6mmol/LPMSF, 4 μ mol/L 亮抑制 肽，100kU/L抑肽酶)，冰上裂解腎臟髓質(zhì)lOmin，10000r/min低溫離心15min，取上清裝入 EP管中，總蛋白含量用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。取蛋白質(zhì)樣品每份10μ1，加等量樣本處理液， 100°C煮沸5min，10% SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，將蛋白轉(zhuǎn)到硝酸纖維膜上，然后用含5% 脫脂牛奶的TBS-T封閉2h，加入兔抗鼠AQP2多克隆抗體(1 500)孵育，4°C過(guò)夜，洗膜液 洗滌劑5min，共3次，加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記羊抗兔IgG (1 5000)孵育lh，洗膜 液洗5min，共3次，然后顯影并壓片曝光，結(jié)果用圖像分析系統(tǒng)測(cè)定蛋白質(zhì)條帶相對(duì)吸光度比值(A)/3-actin比值。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(χ士s)表示，應(yīng)用SPSS 11. 5軟件包行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析， 組間比較采用方差分析。P < 0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P <0.01為差異有非常顯著意 義。2 結(jié)果2. 1各組大鼠心臟功能的變化(見(jiàn)表1和表2)表1各組大鼠心臟超聲心動(dòng)圖變化(χ士S)
注與S組比較，a:P<0. 01，b :P<0. 05 ；與C組比較，, 表2各組大鼠血液動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的變化(χ士s)3 :P < 0. 01, d :P < 0. 05 注與S 組比較，a:P<0. 01，b :P < 0. 05 ；與 C 組比較，c :P < 0. 01，d :P < 0. 05。超聲心動(dòng)圖顯示，與S組相比，C組大鼠左心室擴(kuò)大，心室前壁變薄，后壁代償性肥 厚，室壁運(yùn)動(dòng)明顯減弱或消失，收縮功能顯著降低(P <0.01)。經(jīng)本發(fā)明藥物治療4周后， Q1、Q2、Q3組左心室擴(kuò)張都不同程度的減少，LVEF、FS提高。血流動(dòng)力學(xué)結(jié)果也顯示Q1、Q2、 Q3 組 LVEDP 都有顯著降低，士dp/dt 顯著升高(P > 0. 05)；而 F 組 LVEF、FS、LVEDP、士dp/ dt較C組均無(wú)顯著變化(P > 0. 05)。2.2各組大鼠尿量、尿滲量的變化
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C組大鼠尿量較S組顯著降低，尿滲量增加(P <0.01)。本發(fā)明藥物治療后，QU Q2、Q3組大鼠尿量較C組顯著增加，尿滲量顯著減少(P<0.01)；同樣F組大鼠尿量也顯著 增加，尿滲量顯著減少(P < 0. 01)。具體見(jiàn)圖1和圖2。2.3各組大鼠腎臟髓質(zhì)AQP2免疫熒光表達(dá)S組腎臟髓質(zhì)綠色熒光顯示AQP2表達(dá)很少，C組大鼠腎臟髓質(zhì)綠色熒光表達(dá)明顯 增加；Ql、Q2、Q3組較心衰組表達(dá)減少，而F組表達(dá)增加。2. 4各組大鼠腎臟髓質(zhì)AQP2表達(dá)qPCR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)顯示，C組大鼠腎臟AQP2蛋白的表達(dá)較S組顯著增高(P < 0. 01)， 經(jīng)過(guò)本發(fā)明藥物治療后，Q1、Q2、Q3組大鼠腎臟AQP2蛋白的表達(dá)都有顯著降低(P < 0. 01)， 而F組大鼠臟AQP2蛋白的表達(dá)顯著增加(P<0.01)。具體見(jiàn)圖3。3、結(jié)論以上研究中發(fā)現(xiàn)，C組大鼠血漿AVP較S組顯著升高，腎臟髓質(zhì)AQP2 mRNA和蛋白 表達(dá)也顯著增加，同時(shí)C組大鼠尿量減少，尿滲量增加，提示腎臟髓質(zhì)AQP2的表達(dá)上調(diào)，可 能參與了 CHF大鼠水代謝紊亂。經(jīng)過(guò)本發(fā)明藥物大、中、小劑量治療4周后，伴隨各組大鼠 心功能改善，血漿AVP較心衰組顯著降低，同時(shí)大鼠腎臟AQP2蛋白、mRNA表達(dá)也顯著降低， 尿量增加、尿滲量降低，提示本發(fā)明藥物可以改善心臟功能，阻斷神經(jīng)內(nèi)分泌的惡性循環(huán)， 糾正水代謝紊亂。綜上所述，本發(fā)明藥物組合物可以顯著減少腎臟水通道蛋白2的表達(dá)，并且有效 改善心臟功能。


圖1 不同治療藥物對(duì)大鼠尿量的影響；圖2 不同治療藥物對(duì)大鼠尿滲量的影響；圖3 4周后不同治療組大鼠腎臟髓質(zhì)AQP2 mRNA表達(dá)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 本發(fā)明藥物膠囊劑的制備處方黃芪450g 附子112. 5g 人參225g 丹參225g 葶藶子150g香加皮180g 澤瀉225g 紅花90g 玉竹75g 陳皮75g桂枝90g制備方法(1)將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參、香加皮按照上述處方加8倍量(重量比)70%乙 醇回流提取2次，第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，濃縮 至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1. 25-1. 30的清膏，備用；(2)桂枝、陳皮按照比例蒸餾提取揮發(fā)油，提油后的水溶液濾過(guò)，備用，殘?jiān)偌? 倍量水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合并水溶液，備用；(3)附子、丹參、玉竹、紅花加水9倍量(重量比)煎煮2次，每次2小時(shí)，合并提取 液，濾過(guò)，與步驟(2)中桂枝、陳皮水溶液合并，濃縮至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1.25-1. 30清膏，攪拌中加入乙醇，至醇濃度70%，4°C以下靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，濃縮 至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1.25-1. 30清膏，與步驟(1)的醇提清膏混合，65-70°C烘干；(4)干膏混合粉碎成100目粉，加70%乙醇適量制粒，噴入桂枝、陳皮揮發(fā)油，混 勻，裝膠囊，制成1000粒，即得。用法用量每次4粒，每日3次，用于治療急性心梗。實(shí)施例2 活性成分的制備處方黃芪450g 附子112. 5g 人參225g 丹參225g 葶藶子150g香加皮180g 澤瀉225g 紅花90g 玉竹75g 陳皮75g桂枝9Og制備方法1)將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參或黨參、香加皮或南五加皮用70%乙醇提取，濾過(guò)， 濃縮提取液至50-70°C相對(duì)密度為1. 25-1. 30的清膏；2)用水提取桂枝、陳皮的揮發(fā)油，得揮發(fā)油A、水溶液B、藥渣C ；3)加水煎煮附子、丹參、玉竹、紅花，將所得水溶液濾過(guò)，得濾液D ；4)將桂枝、陳皮提揮發(fā)油后的水溶液B濾過(guò)，收集得水溶液濾液E，再加水煎煮藥 渣C，濾過(guò)得濾液F;5)合并濾液D、濾液E、濾液F，濃縮至相對(duì)密度為1. 25-1. 30清膏，攪拌中加入乙 醇，至醇濃度60-80%，靜置，濾過(guò)，濾液濃縮至60-70°C相對(duì)密度為1. 25-1. 30清膏G ；6)步驟1)所得清膏、揮發(fā)油A和步驟5)所得清膏G構(gòu)成中藥組合物的活性成分。實(shí)施例3 本發(fā)明藥物片劑的制備處方黃芪150g 附子40g 人參225g 丹參225g 葶藶子50g香加皮180g澤瀉75g 玉竹75g 桂枝30g 紅花90g 陳皮25g制備方法(1)將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參、香加皮按照上述處方加8倍量70%乙醇回流提取 2次，第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減與步驟(1)的醇提清膏混合， 65-70°C烘干；(2)桂枝、陳皮按照處方量蒸餾提取揮發(fā)油，提油后的水溶液濾過(guò)，備用，殘?jiān)偌?8倍量水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合并水煎液，備用；(3)附子、丹參、玉竹、紅花加水9倍量煎煮2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，與 步驟(2)中桂枝、陳皮水煎液合并，濃縮至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1.25-1. 30清膏，攪拌中加 入乙醇，至醇濃度70%，4°C以下靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，濃縮至60°C測(cè)定相 對(duì)密度為1. 25-1. 30清膏，與步驟(1)的醇提清膏混合，65-70°C烘干；(4)按常規(guī)制劑方法制成片劑。實(shí)施例4 本發(fā)明藥物顆粒劑的制備處方黃芪250g 附子112. 5g 黨參200g 丹參120g 葶藶子135g南五加皮150g澤瀉200g 玉竹60g 桂枝75g 紅花75g 陳皮60g 制備方法按常規(guī)制劑方法制成顆粒劑。
權(quán)利要求
一種中藥組合物在制備減少腎臟水通道蛋白2表達(dá)的藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成黃芪150 450份、附子40 120份、人參或黨參75 225份、丹參75 225份、葶藶子50 150份、香加皮或南五加皮60 180份、澤瀉75 225份、玉竹25 75份、桂枝30 90份、紅花30 90份、陳皮25 75份。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成黃芪450份、附子112. 5份、人參或黨參225份、丹參225份、葶藶子150份、香加皮或 南五加皮180份、澤瀉225份、玉竹75份、桂枝90份、紅花90份、陳皮75份。
3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成黃芪150份、附子40份、人參或黨參225份、丹參225份、葶藶子50份、香加皮或南五 加皮180份、澤瀉75份、玉竹75份、桂枝30份、紅花90份、陳皮25份。
4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成黃芪250份、附子112. 5份、人參或黨參200份、丹參120份、葶藶子135份、香加皮或 南五加皮150份、澤瀉200份、玉竹60份、桂枝75份、紅花75份、陳皮60份。
5.如權(quán)利要求1-4任一所述的應(yīng)用，其中所述中藥組合物的活性成分由如下步驟制得 的有效成分組成1)將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參或黨參、香加皮或南五加皮加7-9倍量70%乙醇提取，濾 過(guò)，濃縮提取液至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1. 25-1. 30的清膏；2)用水提取桂枝、陳皮的揮發(fā)油，得揮發(fā)油A、水溶液B、藥渣C；3)加6-10倍量水煎煮附子、丹參、玉竹、紅花2次，每次2小時(shí)，將所得水溶液濾過(guò)，得 濾液D ；4)將桂枝、陳皮提揮發(fā)油后的水溶液B濾過(guò)，收集得水溶液濾液E，再加水煎煮藥渣C， 濾過(guò)得濾液F;5)合并濾液D、濾液E、濾液F，濃縮至相對(duì)密度為1.25-1.30清膏，攪拌中加入乙醇，至 醇濃度70%，靜置，濾過(guò)，濾液濃縮至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1. 25-1. 30清膏G ；6)步驟1)所得清膏、揮發(fā)油A和步驟5)所得清膏G構(gòu)成中藥組合物的活性成分。
6.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥組合物的制劑劑型為 膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑。
7.如權(quán)利要求5中所述的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥組合物的制劑劑型為膠囊劑、片 劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述藥物膠囊劑的制備方法，其特征在于，它是由以下步驟組成(1)將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參或黨參、香加皮或南五加皮按照比例量稱取加8倍量 70%乙醇回流提取2次，第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓回收乙 醇，濃縮至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1. 25-1. 30的清膏，備用；(2)桂枝、陳皮按照比例蒸餾提取揮發(fā)油，提油后的水溶液濾過(guò)，備用，殘?jiān)偌?倍量 水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合并水煎液，備用；(3)附子、丹參、玉竹、紅花加水9倍量煎煮2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，與步 驟(2)中桂枝、陳皮水煎液合并，濃縮至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1. 25-1. 30的清膏，攪拌中加 入乙醇，至醇濃度70%，4°C以下靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，濃縮至60°C測(cè)定相 對(duì)密度為1. 25-1. 30的清膏，與步驟(1)的醇提清膏混合，65-70°C烘干；(4)將步驟(3)所得干膏粉碎成100目粉，加70%乙醇適量制粒，噴入桂枝、陳皮揮發(fā) 油，混勻，裝膠囊，即得。
9.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，該中藥組合物在制備改善心臟 功能藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種中藥組合物在制備減少腎臟水通道蛋白2表達(dá)的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明中藥組合物由黃芪、人參、丹參等11味中藥組成，以益氣溫陽(yáng)藥為治絡(luò)強(qiáng)心之本，輔以活血通絡(luò)藥，使氣旺血行絡(luò)通，阻斷血瘀絡(luò)阻。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，本發(fā)明中藥組合物可以顯著減少腎臟水通道蛋白2的表達(dá)，改善心臟功能。
文檔編號(hào)A61P9/04GK101919966SQ20091007470
公開(kāi)日2010年12月22日 申請(qǐng)日期2009年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月10日
發(fā)明者安軍永, 李向軍 申請(qǐng)人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司