專(zhuān)利名稱(chēng)：丹參素、三七皂苷r1,及其配伍對(duì)微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病的預(yù)防和治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥產(chǎn)品丹參素、三七皂苷R1，及其配伍的新用途，特別涉及丹參素、 三七皂苷R1，及其配伍對(duì)微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病的預(yù)防和治療作用。
背景技術(shù)：
缺血再灌注損傷是介入療法、外科手術(shù)、溶栓后出現(xiàn)損傷的主要病理基礎(chǔ)。缺血再 灌注后白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附、肥大細(xì)胞脫顆粒是血管損傷的主要病理環(huán)節(jié)。微循環(huán)是包括細(xì)動(dòng)脈、毛細(xì)血管、細(xì)靜脈在內(nèi)的血管床，占體內(nèi)血管的90%，是維 持新陳代謝的重要部分。高脂血癥、高血壓、感染、精神刺激、跌打損傷、手術(shù)、介入治療等 都可以引起微循環(huán)障礙。微循環(huán)障礙包括血管徑變化、過(guò)氧化物產(chǎn)生、血管內(nèi)皮粘附因子 ICAM-1、白細(xì)胞粘附因子⑶lib/⑶18表達(dá)、白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附、血漿白蛋白外漏、 血管外肥大細(xì)胞脫顆粒釋放TNF- α、組織胺、5羥色胺、炎性因子等血管活性物質(zhì)、以及形 成血拴、出血等多環(huán)節(jié)變化的復(fù)雜過(guò)程。肥大細(xì)胞脫顆粒是一型變態(tài)反應(yīng)的主要病理環(huán)節(jié)，是花粉病，皮膚病，哮喘，腹瀉 的主要病理基礎(chǔ)。丹參素DLA(3.4-dihydroxyphenyllactic acid，DLA)、三七皂苷 RKnotoginsenoside Rl)是復(fù)方丹參滴丸(Cardiotonic Pills*, CP)中丹參和三七的主要 活性成分之一。我們的研究已經(jīng)證明了復(fù)方丹參滴丸對(duì)I/R(isChemia and reperfusion, I/R)引起的大鼠心臟、肝臟、腸系膜微循環(huán)障礙有改善作用，證明了丹參和三七的主要組分 丹參總酚酸和三七總皂苷對(duì)I/R大鼠腸系膜微循環(huán)障礙有改善作用。但是，尚不清楚作為 CP中丹參和三七的主要活性成分之一的DLA和Rl改善了微循環(huán)障礙的哪些環(huán)節(jié)，兩者的不 同比例配伍是否有協(xié)同作用，為此，本研究用動(dòng)態(tài)、可視化方法解析DLA和R1，及其配伍對(duì) I/R引起的大鼠微循環(huán)腸系膜微循環(huán)障礙的改善作用環(huán)節(jié)。本發(fā)明經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)丹參素、三七皂苷R1，及其配伍可以改善缺血再灌注引起的 腸系膜微循環(huán)障礙，從而達(dá)到治療和/或預(yù)防微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病的作用，并提供一種 中藥藥物制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)中藥產(chǎn)品丹參素、三七皂苷R1，及其配伍的新用途，特別涉及丹參素、 三七皂苷R1，及其配伍對(duì)缺血再灌注引起的腸系膜微循環(huán)障礙的預(yù)防和治療改善作用。從 而將其應(yīng)用于治療和/或預(yù)防微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病，如、高脂血癥、高血壓、感染、精神 刺激、跌打損傷、花粉病，皮膚病，哮喘，腹瀉、手術(shù)或介入治療等引發(fā)的微循環(huán)障礙。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，丹參素、三七皂苷R1，及其配伍預(yù)給藥和后給藥可以抑制再灌注后腸 系膜細(xì)靜脈內(nèi)白細(xì)胞的滾動(dòng)和粘附，抑制肥大細(xì)胞脫顆粒。本發(fā)明所述丹參素是中藥丹參中的一種成分，可以從市場(chǎng)上買(mǎi)到，也可以根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備，三七皂苷Rl是中藥三七中的一種成分，可以從市場(chǎng)上買(mǎi)到，也可以根據(jù)現(xiàn)有 技術(shù)制備，均屬于現(xiàn)有技術(shù)。本發(fā)明使用的丹參素、三七皂苷R1，是符合藥用標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)品，優(yōu) 選純度> 50%，更優(yōu)選純度> 90%，最優(yōu)選純度> 98%。本發(fā)明所述的藥物，是用上述丹參素、三七皂苷R1，及其配伍作為藥物活性成分制 備成的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物，根據(jù)需要可以含有藥物可接受的載體，其中丹參素、三七皂 苷R1，及其配伍作為藥物活性成分，其在制劑中所占重量百分比可以是0. 1-99.9%，其余 為藥物可接受的載體。本發(fā)明的藥物組合物，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形式是 指制劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑每袋，注射劑的每支寸。以上所述配伍是丹參素，三七皂苷Rl兩者的組合，其重量比例為1-4 4-1，優(yōu)選 1-2 2-1，最優(yōu)選 1 1。本發(fā)明的藥物組合物可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、 薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸 劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴 劑、貼劑。本發(fā)明的藥物組合物，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充 劑、稀釋劑、壓片劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑和濕潤(rùn)劑，必要時(shí)可對(duì)片劑進(jìn)行包衣。適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類(lèi)似的填充劑。適宜的崩解劑包 括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤(rùn)滑劑包括，例如硬 脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤(rùn)劑包括十二烷基硫酸鈉?？赏ㄟ^(guò)混合，填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進(jìn)行反復(fù)混合可使活 性物質(zhì)分布在整個(gè)使用大量填充劑的那些組合物中。口服液體制劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑， 或者可以是一種在使用前可用水或其它適宜的載體復(fù)配的干燥產(chǎn)品。這種液體制劑可含 有常規(guī)的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基 纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉 伯膠；非水性載體(它們可以包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性 酯、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對(duì)羥基苯甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需 要，可含有常規(guī)的香味劑或著色劑。對(duì)于注射劑，制備的液體單位劑型含有本發(fā)明的活性物質(zhì)和無(wú)菌載體。根據(jù)載體 和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的制備通常是通過(guò)將活性物質(zhì)溶解在一種載 體中，在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過(guò)濾消毒，然后密封。輔料例如一種局部麻醉 齊U、防腐劑和緩沖劑也可以溶解在這種載體中。為了提高其穩(wěn)定性，可在裝入小瓶以后將這 種組合物冰凍，并在真空下將水除去。本發(fā)明的藥物組合物，在制備成藥劑時(shí)可選擇性的加入適合的藥物可接受的載 體，所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽 酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA 二鈉、EDTA鈣鈉，一價(jià)堿金屬的碳酸鹽、醋 酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、4麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及 其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性 劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、磷脂類(lèi)材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。本發(fā)明的藥物制劑組合物在使用時(shí)根據(jù)病人的情況確定用法用量。本發(fā)明所述的治療用途是通過(guò)以下實(shí)驗(yàn)證明的材料和方法1 試藥DLA(丹參素)、Rl (三七皂苷Rl)由昆明風(fēng)山漸醫(yī)藥研究有限公司提供。甲苯胺 藍(lán)、二氫羅達(dá)明以及FITC標(biāo)記的白蛋白均購(gòu)于Sigma公司。2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物200-250g的雄性wistar大鼠由日本琦玉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物被置于常規(guī)飼 養(yǎng)環(huán)境(溫度M±l°c，濕度50士5%，交替照明12小時(shí))。動(dòng)物的處理按照慶應(yīng)義塾大學(xué) 醫(yī)學(xué)部規(guī)定的動(dòng)物處理和倫理方針進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)前禁食給水12小時(shí)。3. I/R模型的建立及給藥I/R組按30mg/kg體重的用量，用sodium pentobarbital施腹腔注射進(jìn)行麻醉。 在大鼠的右側(cè)頸靜脈插入3號(hào)聚乙烯靜脈注射管，并留置。沿腹正中線(xiàn)切開(kāi)20-30mm，輕柔 地將近回盲部的回腸取出腹外，展開(kāi)至有載玻片的觀察臺(tái)上。用37 °C的Krebs-Ringer緩 沖液連續(xù)地在展開(kāi)的腸系膜上滴加。腸系膜微循環(huán)動(dòng)態(tài)用置于37°C恒溫箱的倒立生物顯 微鏡(Diaphot TMD-2S，Nikon,東京)，在12V，IOOff的白光條件下觀察。在20倍物鏡頭下 選擇觀察部位，用有時(shí)間顯示的錄像系統(tǒng)，將觀察內(nèi)容用S-VHS錄像帶紀(jì)錄保存。選擇的觀 察部位為直徑在25-35um之間的細(xì)靜脈非分枝部(長(zhǎng)度在200μπι以上)的微循環(huán)血管床。 在缺血20分鐘前經(jīng)頸靜脈按5mg/kg/h的給藥量連續(xù)靜滴入生理鹽水至觀察結(jié)束。用聚乙 烯管結(jié)扎觀察部環(huán)流的前腸系膜動(dòng)靜脈10分鐘，再解除結(jié)扎，將時(shí)間調(diào)至0處，連續(xù)觀察同 一視野的微循環(huán)動(dòng)態(tài)60分鐘。假手術(shù)(Sham)組同I/R大鼠麻醉開(kāi)腹，取腸系膜觀察，不作I/R處理，經(jīng)頸靜脈 按5mg/kg/h的給藥量連續(xù)靜滴入生理鹽水至觀察結(jié)束。DLA預(yù)給藥(DLA+I/R)組在缺血20分鐘前經(jīng)頸靜脈按5mg/kg/h的給藥量連續(xù) 靜滴入DLA至觀察結(jié)束。Rl預(yù)給藥(R1+I/R)組在缺血20分鐘前經(jīng)頸靜脈按5mg/kg/h的給藥量連續(xù)靜 滴入Rl至觀察結(jié)束。DR (4 1)預(yù)給藥(DR (4 1)+I/R)組在缺血20分鐘前經(jīng)頸靜脈按5mg/kg/h的 給藥量，將DLA和Rl按4 1的比例配伍，連續(xù)靜滴注至觀察結(jié)束。DR (1 1)預(yù)給藥(DR(1 1)+I/R)組在缺血20分鐘前經(jīng)頸靜脈按5mg/kg/h的 給藥量，將DLA和Rl按1 1的比例配伍，連續(xù)靜滴注至觀察結(jié)束。DR (1 4)預(yù)給藥(DR (1 4)+I/R)組在缺血20分鐘前經(jīng)頸靜脈按5mg/kg/h的 給藥量，將DLA和Rl按1 4的比例配伍，連續(xù)靜滴注至觀察結(jié)束。DLA后給藥(I/R+DLA)組在I/R10分鐘后經(jīng)頸靜脈按5mg/kg/h的給藥量連續(xù)靜 滴入DLA至觀察結(jié)束。Rl后給藥(I/R+R1)組在缺血20分鐘前經(jīng)頸靜脈按5mg/kg/h的給藥量連續(xù)靜滴入Rl至觀察結(jié)束。DR (4 1)后給藥(I/R+DR(4 1))組在缺血20分鐘前經(jīng)頸靜脈按5mg/kg/h的 給藥量，將DLA和Rl按4 1的比例配伍，連續(xù)靜滴注至觀察結(jié)束。DR(1 1)后給藥(I/R+DR(1 1))組在缺血20分鐘前經(jīng)頸靜脈按5mg/kg/h的 給藥量，將DLA和Rl按1 1的比例配伍，連續(xù)靜滴注至觀察結(jié)束。DR (1 4)后給藥(I/R+DR(1 4))組在缺血20分鐘前經(jīng)頸靜脈按5mg/kg/h的 給藥量，將DLA和Rl按1 4的比例配伍，連續(xù)靜滴注至觀察結(jié)束。其中，每組取6只大鼠，用于觀察細(xì)靜脈血管徑、白細(xì)胞滾動(dòng)、黏附、游出、細(xì)靜脈 血管壁DHR熒光強(qiáng)度。另取6只大鼠觀察血漿白蛋白漏出和肥大細(xì)胞脫顆粒。3.微循環(huán)動(dòng)態(tài)的觀察微循環(huán)動(dòng)態(tài)用連接于倒立生物顯微鏡的CXD攝像系統(tǒng)(CC-090，F(xiàn)lovel，東京)和 SIT螢光攝影機(jī)(C-M00-08、濱松7才卜二夕7、濱松)連續(xù)紀(jì)錄。血管經(jīng)的測(cè)定在回放的⑶錄像上，用Image-Pro Plus 5. 0軟件在缺血前，再灌 注開(kāi)始時(shí)ι分、10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘時(shí)，取大鼠腸系膜細(xì)靜脈 血管徑3個(gè)部位測(cè)定，取其平均值[]。沿細(xì)靜脈滾動(dòng)白細(xì)胞的計(jì)數(shù)在回放的圖像上，在缺血前，再灌注開(kāi)始時(shí)1分、10 分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘時(shí)，計(jì)數(shù)10秒種內(nèi)，在200微米細(xì)靜脈內(nèi)滾 動(dòng)的白細(xì)胞個(gè)數(shù)。粘附于細(xì)靜脈管壁的白細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)在回放的圖像上，在缺血前，再灌注開(kāi)始時(shí)1 分、10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘時(shí)，計(jì)數(shù)在細(xì)靜脈管壁的同一部位停 留30秒以上的白細(xì)胞(粘附白細(xì)胞)，計(jì)算100 μ m長(zhǎng)細(xì)靜脈上粘附的白細(xì)胞數(shù)。細(xì)靜脈管壁DHR熒光強(qiáng)度測(cè)定在所觀察的大鼠腸系膜表面連續(xù)滴加感受過(guò)氧化 氫的熒光探針DHR(IOuM)。用倒置熒光顯微鏡觀察(DM-IRB，Leica, Germany)，455nm激發(fā) 光，汞燈作為發(fā)射光源(100W)。用⑶錄像機(jī)記錄各組缺血前，再灌注開(kāi)始時(shí)1分、10分鐘、 20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘時(shí)的圖像，用Image-Pro Plus 5. 0軟件測(cè)定細(xì) 靜脈管壁及血管外間質(zhì)的熒光強(qiáng)度。用缺血前細(xì)靜脈管壁與血管外間質(zhì)的差為基礎(chǔ)值，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)數(shù)值與基礎(chǔ)值的比值，用以表示大鼠腸系膜細(xì)靜脈管壁DHR熒光強(qiáng)度的變化率 []。細(xì)靜脈白蛋白滲出的測(cè)定每組另取6只大鼠，沿頸靜脈緩慢推注FITC-標(biāo)記的 牛血清白蛋白(50mg/kg)，基礎(chǔ)觀察10分鐘后，用倒置熒光顯微鏡觀察(DM-IRB，Leica, Germany)，455nm激發(fā)光，汞燈作為發(fā)射光源(100W)。用⑶錄像機(jī)連續(xù)記錄各組在缺血前， 再灌注開(kāi)始時(shí)1分、10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘時(shí)細(xì)靜脈血管內(nèi)和 相鄰的血管外間質(zhì)的FITC熒光圖像。用Image-Pro Plus 5. 0軟件測(cè)定細(xì)靜脈血管內(nèi)和相 鄰的血管外間質(zhì)的FITC熒光強(qiáng)度，用缺血前的細(xì)靜脈管壁與血管外間質(zhì)的FITC熒光的比 為基礎(chǔ)值。計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)數(shù)值與基礎(chǔ)值的比值，用以表示大鼠腸系膜細(xì)靜脈白蛋白滲出的 變化率?？梢杂霉奖硎綬t = Pt/Po其中，Rt表示在某時(shí)間點(diǎn)的FITC熒光強(qiáng)度比值；Pt 表示在該時(shí)間點(diǎn)血管壁與血管外熒光強(qiáng)度比值；Po表示0分鐘時(shí)血管壁與血管外熒光強(qiáng)度 比值。肥大細(xì)胞脫顆粒率在再灌注60分后，將0. l%toluidine blue滴加在觀察部位，用CCD攝像機(jī)紀(jì)錄。用20倍的對(duì)物鏡計(jì)數(shù)5個(gè)視野的脫顆粒和未脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)，計(jì) 算脫顆粒的肥大細(xì)胞占計(jì)數(shù)的整個(gè)肥大細(xì)胞數(shù)的百分比，為肥大細(xì)胞脫顆粒率。4.統(tǒng)計(jì)處理各測(cè)定值用one-way analysis of variance (ANOVA)處理，各組經(jīng)時(shí)變化用T檢 驗(yàn)，各組間比較用F檢驗(yàn)。各測(cè)定值用均值士標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P < 0. 05為有顯著意義。


圖1表示DLA、R1及其配伍對(duì)I/R后大鼠腸系膜細(xì)靜脈血管經(jīng)的影響本觀察時(shí)間 內(nèi)，I/R組大鼠細(xì)靜脈血管徑?jīng)]有發(fā)生顯著的變化.DLA、Rl及其配伍對(duì)的預(yù)給藥和后給藥 都沒(méi)有引起再灌注后大鼠腸系膜細(xì)靜脈血管徑的顯著變化。圖1表示DLA、R1以及二者配伍對(duì)I/R引發(fā)的大鼠腸系膜細(xì)靜脈管徑的影 響。Sham:假手術(shù)組；I/R I/R組；DLA+I/R DLA前給藥組；R1+I/R Rl前給藥組； DR (4 1)+I/R DLA 與 Rl 4 1 配伍前給藥組；DR (1 1)+I/R DLA 與 Rl 1 1 配伍 前給藥組；DR(1 4)+I/R DLA與Rl 1 4配伍前給藥組；I/R+DLA DLA后給藥組；I/ R+R1 Rl 后給藥組；I/R+DR(4 1) DLA 與 R14 1 配伍后給藥組；I/R+DR(1 1) DLA 與Rl 1 1配伍后給藥組；I/R+DR(1 4) DLA與Rl 1 4配伍后給藥組。結(jié)果以平 均值 士 標(biāo)準(zhǔn)誤表示。*p < 0. . 05vs Sham ;#p < 0. 05vs I/R。圖2表示DLA、Rl以及二者配伍對(duì)I/R引發(fā)的大鼠腸系膜細(xì)靜脈白細(xì)胞滾動(dòng)的影 響。I/R以后沿大鼠腸系膜細(xì)靜脈壁滾動(dòng)白細(xì)胞顯著增多。丹參素的預(yù)投入可以顯著地抑 制I/R引起的白細(xì)胞沿細(xì)靜脈壁的滾動(dòng)。R1、DLA與Rl各種配伍的預(yù)投入和后投入都沒(méi)有 顯著地抑制I/R引起的白細(xì)胞沿細(xì)靜脈壁的滾動(dòng)。圖2表示DLA、Rl以及二者配伍對(duì)I/R引發(fā)的大鼠腸系膜細(xì)靜脈白細(xì)胞滾動(dòng)的 影響。Sham 假手術(shù)組；I/R I/R組；DLA+I/R DLA前給藥組；R1+I/R Rl前給藥 組；DR(4 1)+I/R DLA 與 R14 1 配伍前給藥組；DR(1 1)+I/R DLA 與 Rl 1 1 配伍前給藥組；DR(1 4)+I/R DLA與Rl 1 4配伍前給藥組；I/R+DLA DLA后 給藥組；I/R+R1 Rl后給藥組；I/R+DR(4 1) DLA與Rl 4 1配伍后給藥組；I/ R+DR(1 1) DLA 與 Rl 1 1 配伍后給藥組；I/R+DR(1 4) DLA 與 Rl 1 4 配伍后 給藥組。結(jié)果以平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤表示。*p < 0. . 05vs Sham ;#p < 0. 05vsI/R。圖3表示DLA、Rl以及二者配伍對(duì)I/R引發(fā)的大鼠腸系膜細(xì)靜脈白細(xì)胞粘附的影 響。Siam組在本觀察結(jié)束時(shí)僅有少量的白細(xì)胞粘附于細(xì)靜脈。I/R組大鼠在再灌注早期就 有大量的白細(xì)胞粘附于細(xì)靜脈管壁，隨著再灌注的進(jìn)行，黏附白細(xì)胞逐漸增多。DLA、R1以 及二者配伍的預(yù)投入和后投入都顯著地抑制了 I/R引發(fā)的大鼠腸系膜細(xì)靜脈內(nèi)粘附白細(xì) 胞的增加。圖3表示DLA、Rl以及二者配伍對(duì)I/R引發(fā)的大鼠腸系膜細(xì)靜脈白細(xì)胞粘附的 影響。Sham 假手術(shù)組；I/R I/R組；DLA+I/R DLA前給藥組；R1+I/R Rl前給藥組； DR(4 1)+I/R DLA 與 Rl 4 1 配伍前給藥組；DR(1 1)+I/R DLA 與 Rl 1 1 配伍前給藥組；DR(1 4)+I/R DLA與Rl 1 4配伍前給藥組；I/R+DLA DLA后 給藥組；I/R+R1 Rl后給藥組；I/R+DR(4 1) DLA與Rl 4 1配伍后給藥組；I/ R+DR(1 1) DLA 與 Rl 1 1 配伍后給藥組；I/R+DR(1 4) DLA 與 Rl 1 4 配伍后給藥組。結(jié)果以平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤表示。*p < 0. . 05vs Sham ;#p < 0. 05vs I/R。圖4表示DLA、Rl以及二者配伍對(duì)I/R引發(fā)的大鼠腸系膜細(xì)靜脈白細(xì)胞游出的影 響。Siam組在本觀察結(jié)束時(shí)沒(méi)有觀察到經(jīng)由細(xì)靜脈的白細(xì)胞游出。在再灌注30時(shí)經(jīng)由細(xì) 靜脈游出的白細(xì)胞顯著增加，并持續(xù)增加到本觀察結(jié)束時(shí)候。DLA、R1以及二者配伍的前給 藥和后給藥都顯著地抑制了 I/R后經(jīng)由腸系膜細(xì)靜脈的白細(xì)胞游出。圖4表示DLA、Rl以及二者配伍對(duì)I/R引發(fā)的大鼠腸系膜細(xì)靜脈白細(xì)胞游出的 影響。Sham 假手術(shù)組；I/R I/R組；DLA+I/R DLA前給藥組；R1+I/R Rl前給藥 組；DR(4 1)+I/R DLA 與 R14 1 配伍前給藥組；DR(1 1)+I/R DLA 與 Rl 1 1 配伍前給藥組；DR(1 4)+I/R DLA與Rl 1 4配伍前給藥組；I/R+DLA DLA后 給藥組；I/R+R1 Rl后給藥組；I/R+DR(4 1) DLA與Rl 4 1配伍后給藥組；I/ R+DR(1 1) DLA 與 Rl 1 1 配伍后給藥組；I/R+DR(1 4) DLA 與 Rl 1 4 配伍后 給藥組。結(jié)果以平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤表示。*p < 0. . 05vs Sham ;#p < 0. 05vs I/R。圖5A表示DLA、R1及其配伍預(yù)投入對(duì)I/R后大鼠腸系膜細(xì)靜脈管壁過(guò)氧化物產(chǎn)生 動(dòng)態(tài)的影響。Siam組在本觀察期間內(nèi)，細(xì)靜脈管壁DHR的熒光強(qiáng)度沒(méi)有顯著的變化。I/R 組在再灌注開(kāi)始后細(xì)靜脈管壁DHR熒光強(qiáng)度開(kāi)始增加，并持續(xù)增加。Rl沒(méi)有顯著地抑制I/ R后大鼠腸系膜細(xì)靜脈管壁過(guò)氧化物的產(chǎn)生。DLA、及各配伍組的預(yù)投入顯著地抑制了 I/R 后大鼠腸系膜細(xì)靜脈管壁過(guò)氧化物的產(chǎn)生。其中，DLA和TPG 1)的作用最強(qiáng)。圖5B表示DLA、R1及其配伍后投入對(duì)I/R后大鼠腸系膜細(xì)靜脈管壁過(guò)氧化物產(chǎn)生 動(dòng)態(tài)的影響。Rl沒(méi)有顯著地抑制I/R后大鼠腸系膜細(xì)靜脈管壁過(guò)氧化物的產(chǎn)生，而DLA、及 各配伍組的預(yù)投入顯著地抑制了 I/R后大鼠腸系膜細(xì)靜脈管壁過(guò)氧化物的產(chǎn)生。圖5表示DLA、Rl以及二者配伍對(duì)I/R引發(fā)的大鼠腸系膜細(xì)靜脈過(guò)氧化物產(chǎn)生 (DHR)的影響。Sham 假手術(shù)組；I/R I/R 組；DLA+I/R DLA 前給藥組；R1+I/R Rl 前 給藥組；DR(4 1)+I/R DLA 與 Rl 4 1 配伍前給藥組；DR(1 1)+I/R DLA 與 Rl 1 1配伍前給藥組；DR(1 4)+I/R DLA與Rl 1 4配伍前給藥組；I/R+DLA DLA 后給藥組；I/R+R1 Rl后給藥組；I/R+DR(4 1) DLA與Rl 4 1配伍后給藥組；I/ R+DR(1 1) DLA 與 Rl 1 1 配伍后給藥組；I/R+DR(1 4) DLA 與 Rl 1 4 配伍后 給藥組。結(jié)果以平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤表示。*p < 0. . 05vs Sham ’#p < 0. 05vsI/R。圖6表示DLA、Rl及其配伍對(duì)I/R后大鼠腸系膜靜脈內(nèi)血漿白蛋白外漏的影響。 Siam組在60分鐘觀察過(guò)程結(jié)束時(shí)，僅有少量的血漿白蛋白經(jīng)由大鼠腸系膜細(xì)靜脈漏出，而 I/R組大鼠在再灌注開(kāi)始后，經(jīng)由大鼠腸系膜細(xì)靜脈漏出的血漿白蛋白就顯著地增加，并隨 著再灌注的持續(xù)進(jìn)一步增強(qiáng)。DR(1 4)的預(yù)投入沒(méi)有顯著地抑制I/R引起的大鼠腸系膜細(xì) 靜脈血漿白蛋白的漏出。而，DLA、R1及DRG 1)、DR(1 1)的預(yù)投入都可顯著地抑制I/ R引起的大鼠腸系膜細(xì)靜脈血漿白蛋白的漏出。在再灌注后給藥時(shí)，DR(1 1)、DR(1 4) 的后給藥都沒(méi)有顯著地抑制I/R引起的大鼠腸系膜細(xì)靜脈血漿白蛋白的漏出，而DLA、R1及 DR(4 1)可以顯著地I/R引起的大鼠腸系膜細(xì)靜脈血漿白蛋白的漏出，其中以DIU4 1) 的改善作用最強(qiáng)。圖6表示DLA、R1以及二者配伍對(duì)I/R引發(fā)的大鼠腸系膜細(xì)靜脈中白蛋白漏 出的影響。Sham 假手術(shù)組；I/R I/R組；DLA+I/R DLA前給藥組；R1+I/R Rl前 給藥組；DR(4 1)+I/R DLA 與 Rl 4 1 配伍前給藥組；DR(1 1)+I/R DLA 與 Rl1 1配伍前給藥組；DR(1 4)+I/R DLA與Rl 1 4配伍前給藥組；I/R+DLA DLA 后給藥組；I/R+R1 Rl后給藥組；I/R+DR(4 1) DLA與Rl 4 1配伍后給藥組；I/ R+DR(1 1) DLA 與 Rl 1 1 配伍后給藥組；I/R+DR(1 4) DLA 與 Rl 1 4 配伍后 給藥組。結(jié)果以平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤表示。*p < 0. . 05vs Sham ’#p < 0. 05vsI/R。圖7表示DLA、Rl及其配伍對(duì)對(duì)I/R后大鼠腸系膜大鼠腸系膜間質(zhì)肥大細(xì)胞脫顆 粒的影響。再灌注60分鐘時(shí)，與Siam組相比，I/R組肥大細(xì)胞脫顆粒率顯著增加，DLA、Rl 及其配伍的與投入都可顯著地抑制I/R引起的大鼠腸系膜間質(zhì)內(nèi)肥大細(xì)胞脫顆粒率的增 加。在再灌注發(fā)生后投予DLA沒(méi)有顯著地抑制肥大細(xì)胞脫顆粒，而Rl、DR配伍對(duì)對(duì)I/R的 各配伍的后投入都可顯著地抑制I/R引起的大鼠腸系膜間質(zhì)內(nèi)肥大細(xì)胞脫顆粒率。圖7表示DLA、Rl以及二者配伍對(duì)I/R引發(fā)的大鼠腸系膜細(xì)靜脈周?chē)蚀蠹?xì)胞 脫顆粒率的影響。Sham:假手術(shù)組；I/R I/R組；DLA+I/R DLA前給藥組；R1+I/R Rl 前給藥組；DR(4 1)+I/R DLA 與 Rl 4 1 配伍前給藥組；DR(1 1)+I/R DLA 與 Rl 1 1配伍前給藥組；DR(1 4)+I/R DLA與Rl 1 4配伍前給藥組；I/R+DLA DLA 后給藥組；I/R+R1 Rl后給藥組；I/R+DR(4 1) DLA與Rl 4 1配伍后給藥組；I/ R+DR(1 1) DLA 與 Rl 1 1 配伍后給藥組；I/R+DR(1 4) DLA 與 Rl 1 4 配伍后 給藥組。結(jié)果以平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤表示。*p < 0. . 05vs Sham ;#p < 0. 05vsI/R。結(jié)論1. I/R后大鼠腸系膜血管徑?jīng)]有顯著變化，而滾動(dòng)、粘附和游出的白細(xì)胞數(shù)、細(xì)靜 脈血管壁DHR螢光強(qiáng)度、FITC標(biāo)記的血漿白蛋白漏出率、血管外間質(zhì)組織中的肥大細(xì)胞脫 顆粒率顯著增加。2. DLA的前給藥對(duì)I/R后大鼠腸系膜血管徑?jīng)]有顯著影響，在再灌注20分以后抑 制了沿細(xì)靜脈滾動(dòng)的白細(xì)胞，在再灌注30分以后顯著地抑制粘附和游出白細(xì)胞數(shù)的增加， 抑制細(xì)靜脈管壁DHR熒光強(qiáng)度的增加，抑制血漿白蛋白的血管外漏出，抑制肥大細(xì)胞脫顆 粒。而DLA后給藥，除不能顯著地抑制肥大細(xì)胞脫顆粒之外，其他作用與前給藥相同。3. Rl前給藥和后給藥對(duì)I/R后大鼠腸系膜血管徑和細(xì)靜脈滾動(dòng)的白細(xì)胞沒(méi)有顯 著的抑制作用，但是，可以顯著地抑制粘附和游出白細(xì)胞數(shù)的增加，抑制肥大細(xì)胞脫顆粒。 Rl對(duì)I/R引起的大鼠腸系膜細(xì)靜脈管壁DHR熒光強(qiáng)度的增加沒(méi)有抑制作用。4. DR(4 1)、DR(1 1)、DR(1 4))前給藥對(duì)I/R后大鼠腸系膜微循環(huán)障礙的 改善作用與DLA、R1的作用相同，但是，DR(4 1)配伍改善微循環(huán)障礙的作用顯著增強(qiáng)?？傊?，本發(fā)明證明，丹參素、三七皂苷R1，及其配伍可以預(yù)防和治療缺血再灌注引 起的微循環(huán)障礙。從而將其應(yīng)用于治療和/或預(yù)防微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病，如過(guò)敏性疾 病、高脂血癥、高血壓、感染等以及因精神刺激、跌打損傷、花粉病，皮膚病，哮喘，腹瀉、手術(shù) 或介入治療等引發(fā)的微循環(huán)障礙。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不作為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1片劑處方丹參素三七皂苷Rl= 1 1，105g 微晶纖維素55g 微粉硅膠3g硬脂酸鎂1. 5g制法取原、輔料分別過(guò)100目篩；取丹參總酚酸、三七總皂苷1 1、微晶纖維素， 混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過(guò)20目篩制顆粒，60°C干燥，取出，過(guò)30目篩整 粒，加入微粉硅膠及硬脂酸鎂，混勻，壓片，制成1000片，即得。實(shí)施例處方丹參素三七皂苷Rl= 1 485g 硫酸鈣118g 微晶纖維素37g微 粉硅膠2. 4g 硬脂酸鎂1. 2g制法取原、輔料分別過(guò)100目篩；取丹參總酚酸、三七總皂苷1 4、微晶纖維素， 混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過(guò)20目篩制顆粒，60°C干燥，取出，過(guò)30目篩整 粒，加入適量微粉硅膠及硬脂酸鎂，混勻，壓片，制成1000片，即得。實(shí)施例處方丹參素三七皂苷Rl= 4 1133g 硫酸鈣208g 微晶纖維素68g 微粉硅膠5g 硬脂酸鎂2. 5g制法取原、輔料分別過(guò)100目篩；取丹參總酚酸、三七總皂苷4 1、微晶纖維素， 混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過(guò)20目篩制顆粒，60°C干燥，取出，過(guò)30目篩整 粒，加入適量微粉硅膠及硬脂酸鎂，混勻，壓片，制成1000片，即得。實(shí)施例4膠囊取丹參素60g，加入適量淀粉，硬脂酸鎂等輔料，制粒，整粒，裝入1號(hào)膠囊，即得。實(shí)施例5口服液取丹參素8g，加入適量蔗糖，防腐劑，加水到1000ml，分裝成IOml —支，即得口服液。實(shí)施例6顆粒劑取三七皂苷R180g，加入適量糊精、甜菊素，干式制粒，整粒，分裝，即得。實(shí)施例7注射劑三七皂苷R17g加水溶解，另氯化鈉、對(duì)羥基苯甲酸乙酯加熱水溶解，混勻，調(diào)pH 值。注射用水稀釋至1000ml，用中空纖維膜濾過(guò)，灌裝，滅菌，即得。實(shí)施例8，注射劑丹參素三七皂苷Rl = 4 12g加水溶解，另氯化鈉、對(duì)羥基苯甲酸乙酯加熱水 溶解，混勻，調(diào)PH值。注射用水稀釋至1000ml，用中空纖維膜濾過(guò)，灌裝，滅菌，即得。
權(quán)利要求
1.丹參素、三七皂苷R1，及其配伍在制備預(yù)防和治療微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病的藥物中 的應(yīng)用。
2.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，其中丹參素的應(yīng)用表現(xiàn)在前給藥對(duì)在再灌注20分 以后抑制了沿細(xì)靜脈滾動(dòng)的白細(xì)胞，在再灌注30分以后顯著地抑制粘附和游出白細(xì)胞數(shù) 的增加，抑制細(xì)靜脈管壁DHR熒光強(qiáng)度的增加，抑制血漿白蛋白的血管外漏出，抑制肥大細(xì) 胞脫顆粒。
3.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，其中丹參素的應(yīng)用表現(xiàn)在后給藥對(duì)在再灌注20分 以后抑制了沿細(xì)靜脈滾動(dòng)的白細(xì)胞，在再灌注30分以后顯著地抑制粘附和游出白細(xì)胞數(shù) 的增加，抑制細(xì)靜脈管壁DHR熒光強(qiáng)度的增加，抑制血漿白蛋白的血管外漏出。
4.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，其中三七皂苷Rl的應(yīng)用表現(xiàn)在前給藥和后給藥可 以顯著地抑制粘附和游出白細(xì)胞數(shù)的增加，抑制肥大細(xì)胞脫顆粒。
5.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，其中所述配伍是丹參素和三七皂苷Rl兩者的組合， 其重量比例為1-4 4-1，優(yōu)選1-2 2-1，最優(yōu)選1 1。
6.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，其中所述丹參總酚酸和三七總皂苷配伍的應(yīng)用表 現(xiàn)在DRG 1)、DR(1 1)、DR(1 4))前給藥對(duì)在再灌注20分以后抑制了沿細(xì)靜脈滾 動(dòng)的白細(xì)胞，在再灌注30分以后顯著地抑制粘附和游出白細(xì)胞數(shù)的增加，抑制細(xì)靜脈管壁 DHR熒光強(qiáng)度的增加，抑制血漿白蛋白的血管外漏出。但是，DR(4 1)配伍改善微循環(huán)障 礙的作用顯著增強(qiáng)。
7.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，其中所述應(yīng)用包括以下疾病，如過(guò)敏性疾病、高脂 血癥、高血壓、感染等以及因精神刺激、跌打損傷、花粉病，皮膚病，哮喘，腹瀉、手術(shù)或介入 治療等引發(fā)的微循環(huán)障礙。
8.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，其中所述的藥物，是用上述丹參素、三七皂苷R1，及 其配伍作為藥物活性成分制備成的藥物組合物。
9.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，其中所述丹參素是中藥丹參中的一種成分，可以從 市場(chǎng)上買(mǎi)到，也可以根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備，三七皂苷Rl是中藥三七中的一種成分，可以從市 場(chǎng)上買(mǎi)到，也可以根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備，均屬于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明使用的丹參素、三七皂苷R1， 是符合藥用標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)品，優(yōu)選純度> 50%，更優(yōu)選純度> 90%，最優(yōu)選純度> 98%。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥產(chǎn)品丹參素、三七皂苷R1，及其配伍的新用途，特別涉及丹參素、三七皂苷R1，及其配伍對(duì)微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病的預(yù)防和治療作用。
文檔編號(hào)A61K31/192GK102048720SQ20091007116
公開(kāi)日2011年5月11日 申請(qǐng)日期2009年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月5日
發(fā)明者劉育英, 孫凱, 張玉, 楊繼英, 王明霞, 郭俊, 韓晶巖 申請(qǐng)人:天津天士力制藥股份有限公司