專(zhuān)利名稱(chēng)：：醋制柴胡溶劑提取物在制備降膽固醇藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體說(shuō)，涉及醋制柴胡溶劑提取物在制備降膽固醇藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：柴胡為傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狹葉柴胡BupleurumscorzonerifoliumWild.的干燥根，味苦，微寒，歸肝、膽經(jīng)，具有疏散退熱，舒肝、升陽(yáng)的作用，在本草中被列為上品。歷代本草和現(xiàn)代中醫(yī)的肝病用藥中多以柴胡為君藥。但柴胡的不同炮制品治療病癥側(cè)重點(diǎn)不一，在用于治療肝病時(shí)，常用其醋制品，與柴胡生品多用于解表退熱相比，醋制品能緩和升散之性，有助于引藥入肝，增強(qiáng)疏肝止痛的作用，適用于肝郁氣滯的脅痛、腹痛及月經(jīng)不調(diào)等證。醋制柴胡的制備方法依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2005版附錄IID醋炙法，即取柴胡凈藥材，加醋拌勻，悶透，置鍋內(nèi)，炒至規(guī)定的程度時(shí)，取出，放涼。中國(guó)專(zhuān)利200710039351.3公開(kāi)了一種醋制柴胡活性部位傳統(tǒng)的提取方法如下醋制柴胡用醇滲漉，將醇蒸干，得流浸膏；將所得流浸膏用乙醇或水稀釋成懸濁液，所述懸濁液依次分別用有機(jī)溶劑石油醚、氯仿和乙酸乙酯提取，將乙酸乙酯層蒸干，得到柴胡乙酸乙酯提取物；或所述懸濁液依次分別用有機(jī)溶劑石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇提取，將正丁醇層蒸干，得到柴胡正丁醇提取物。如此提取得到的醋制柴胡提取物被證實(shí)具有一定的分泌膽汁的效果。空軍桂林醫(yī)院的李煥堂等人發(fā)表的論文《柴胡注射液降血脂效果初步觀察》一文中公開(kāi)了柴胡注射液具有降低血清甘油三酯的效果，但對(duì)降低膽固醇的作用則未能支持。因此，迄今為止尚未有文獻(xiàn)披露醋制柴胡溶劑提取物在降膽固醇方面的作用。
發(fā)明內(nèi)容為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明人改良了傳統(tǒng)的醋制柴胡活性部位的提取方法，得到了在降膽固醇方面有明顯作用的醋制柴胡提取物。本發(fā)明的目的是提供醋制柴胡溶劑提取物在制備降膽固醇藥物中的應(yīng)用，所述溶劑為水、乙醇、甲醇或其混合物。醇提后樹(shù)脂法或水提醇沉法一般用于精制提取物。一般步驟為醇提取或水提醇沉后的溶液，濃縮，得到一定密度的濃縮夜，經(jīng)大孔樹(shù)脂柱層析，用水和不同濃度的乙醇依次洗脫，最終得到提取物。所用醇一般為甲醇、乙醇、異丙醇或其混合物，并根據(jù)提取物的性質(zhì)選用合適的樹(shù)脂。本發(fā)明的醇提后樹(shù)脂法的具體操作步驟如下醋制柴胡用50%-100%濃度的甲醇或乙醇溶液加熱回流提取，提取液合并濃縮至低濃度，濃縮液用大孔樹(shù)脂柱層析，用水和不同濃度的乙醇依次洗脫，得醋制柴胡溶劑提取物。其中，將加熱回流提取得到的提取液濃縮至濃度為20-40%，優(yōu)選將提取液濃縮至濃度為30%。所述大孔樹(shù)脂為非極性大孔吸附樹(shù)脂，優(yōu)選為860021型。所述不同濃度的乙醇優(yōu)選為30-95%的乙醇，更優(yōu)選為30%、50%、70%或95%的乙醇。本發(fā)明的水提醇沉法的具體操作步驟如下醋制柴胡用水加熱提取，提取液合并濃縮至低密度，加乙醇使產(chǎn)生沉淀，并使混合液濃縮至高濃度，充分超聲后靜置，得醋制柴胡提取物。其中，優(yōu)選將用水加熱提取后的提取液合并濃縮至密度為1.1-1.2；加乙醇使產(chǎn)生沉淀，其中乙醇的濃度為70%-100%；混合液濃縮至濃度為60-80%，優(yōu)選為70%。上述步驟得到的醋制柴胡提取物可以進(jìn)一步精制再次過(guò)濾所得醋制柴胡提取物，濃縮濾液，濃縮液上大孔樹(shù)脂，用水和不同濃度的乙醇依次洗脫，得精制醋制柴胡溶劑提取物。其中，所述大孔樹(shù)脂為非極性大孔吸附樹(shù)脂，優(yōu)選為860021型。所述不同濃度的乙醇優(yōu)選為30-95%的乙醇，更優(yōu)選為30%、50%、70%或95%的乙醇。本發(fā)明從醋制柴胡中獲得提取物的方法簡(jiǎn)單易行，并且該提取物在降膽固醇方面有明顯作用。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1醋制柴胡lOOOg，用8倍量75%乙醇溶液加熱回流提取數(shù)次2次，提取液合并濃縮至30%濃度，濃縮液上大孔樹(shù)脂，依次用水洗液、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇和95%乙醇洗脫，分別得到30%乙醇洗脫液(4號(hào)提取物)、50%乙醇洗脫液(3號(hào)提取物)、70%乙醇洗脫液(2號(hào)提取物)、95%乙醇洗脫液(1號(hào)提取物)。實(shí)施例2醋制柴胡500g，用水加熱至微沸提取2次，提取液合并濃縮至密度為1.1，加3倍量95%乙醇使產(chǎn)生沉淀，并使最終混合液濃度至70%左右，充分超聲靜置一段時(shí)間，過(guò)濾，分為沉淀(5號(hào)提取物)和濾液(6號(hào)提取物)。實(shí)施例3醋制柴胡500g，用水加熱至微沸提取2次，提取液合并濃縮至密度為1.1，加3倍量95%乙醇使產(chǎn)生沉淀，并使最終混合液濃度至70%左右，充分超聲靜置一段時(shí)間，過(guò)濾，分為沉淀和濾液，濾液濃縮加適量水產(chǎn)生沉淀，過(guò)濾，分為沉淀和濾液，濾液濃縮，上大孔樹(shù)月旨，依次用水和70%乙醇洗脫，得到水洗液和70%乙醇洗脫液(7號(hào)提取物)。實(shí)施例1中所用的醋制柴胡為上海雷允上中藥飲片廠生產(chǎn)；批號(hào)批3；生產(chǎn)日期2006·12.7；實(shí)施例2、3中所用的醋制柴胡為上海雷允上中藥飲片廠生產(chǎn)；批號(hào)批2；生產(chǎn)日期2006·12.7；以上實(shí)施例中所用的大孔樹(shù)脂為山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司樹(shù)脂分廠生產(chǎn)的860021型；以上實(shí)施例中所用的超聲為昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)的KQ2200型超聲波清洗器。藥效學(xué)結(jié)果試驗(yàn)例1本發(fā)明所得醋制柴胡提取物對(duì)膽汁膽固醇的影響1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，$，250克左右。2.實(shí)驗(yàn)劑量每個(gè)樣品設(shè)高、低二個(gè)劑量組，低劑量組300mg/kg；高劑量組lg/kg。3.實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法參考《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)(第二版)》472-474頁(yè)大鼠隨機(jī)分組，分為空白對(duì)照組，1-6號(hào)6個(gè)樣品，12個(gè)組，每組6個(gè)大鼠。大鼠經(jīng)腹腔注射3%速可眠麻醉，麻醉后打開(kāi)腹腔，分離膽總管，用自制塑料細(xì)管引出膽汁。每個(gè)大鼠在收集膽汁30分鐘后(0-30分鐘)，用9號(hào)針將不同批號(hào)、劑量藥物分別注入胃中。按給藥前0-30分鐘，30-60分鐘，60-90分鐘，90-120分鐘，120-150分鐘，5個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集膽汁，統(tǒng)計(jì)分泌數(shù)量，分析膽汁中膽固醇的含量。本實(shí)驗(yàn)分幾天完成，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有一些劑量組大鼠發(fā)生死亡。結(jié)果見(jiàn)下表1。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>與對(duì)照組比較*P<0.05；**P<0.01與同組給藥前比較:#P<0.05；##P<0.01結(jié)論由表1可知，1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)、5號(hào)、6號(hào)樣品與對(duì)照組比較，均有降低膽固醇的作用；4號(hào)樣品與對(duì)照組比較有降低膽固醇的作用且有顯著差異，與同組不同劑量比較，顯示一定的劑量效應(yīng)。本發(fā)明所得醋制柴胡提取物均有降低膽汁膽固醇的作用，并且4號(hào)樣品活性顯著。試驗(yàn)例2本發(fā)明所得醋制柴胡提取物對(duì)膽汁膽固醇的影響1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，$，250克左右。2.實(shí)驗(yàn)劑量每個(gè)樣品高、低二個(gè)劑量組，低劑量組50mg/kg；高劑量組300mg/kg。陽(yáng)性藥高、低二個(gè)劑量組，低劑量組50mg/kg；高劑量組l50mg/kg。3.實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法參考《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)(第二版)》472-474頁(yè)。陽(yáng)性藥(熊去氧膽酸)的使用參照《藥理學(xué)(第三版)竺心影主編》255頁(yè)的熊去氧膽酸的藥理作用。大鼠隨機(jī)分組，分為空白對(duì)照組，陽(yáng)性藥(熊去氧膽酸)，4、6號(hào)樣品。大鼠經(jīng)腹腔注射3%速可眠麻醉，麻醉后打開(kāi)腹腔，分離膽總管，用自制塑料細(xì)管引出膽汁。每個(gè)大鼠在收集膽汁30分鐘后(0-30分鐘)，用9號(hào)針將不同批號(hào)、劑量藥物分別注入胃中。按給藥前0-30分鐘，30-60分鐘，60-90分鐘，90-120分鐘，120-150分鐘，5個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集膽汁，統(tǒng)計(jì)分泌數(shù)量，分析膽汁中膽固醇的含量。結(jié)果見(jiàn)下表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與0-30分比較*P<0.05；**P<0.05。結(jié)論由表2可知，4號(hào)、7號(hào)樣品與對(duì)照組比較有降低膽固醇的作用且有顯著差異，與陽(yáng)性藥比較，顯示一定的藥理活性的優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明4號(hào)、7號(hào)醋制柴胡提取物的進(jìn)一步篩選顯示其均有很好的藥理活性，降低膽汁膽固醇的作用非常顯著。權(quán)利要求醋制柴胡溶劑提取物在制備降膽固醇藥物中的應(yīng)用，所述溶劑為水、乙醇、甲醇或其混合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述醋制柴胡溶劑提取物按以下步驟制備醋制柴胡用50%-100%濃度的甲醇或乙醇溶液加熱回流提取，提取液合并濃縮至低濃度，濃縮液上大孔樹(shù)脂，用水和不同濃度的乙醇依次洗脫，得醋制柴胡溶劑提取物。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述低濃度為20-40%。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述低濃度為30%。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述大孔樹(shù)脂為非極性大孔吸附樹(shù)脂。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述大孔樹(shù)脂為860021型。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述不同濃度的乙醇為30-95%的乙醇。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述不同濃度的乙醇為30%、50%、70%或95%的乙醇。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述醋制柴胡溶劑提取物按以下步驟制備醋制柴胡用水加熱提取，提取液合并濃縮至低密度，加乙醇使產(chǎn)生沉淀，并使混合液濃縮至高濃度，充分超聲后靜置，得醋制柴胡溶劑提取物。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述低密度為1.1-1.2。11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述乙醇的濃度為70%-100%。12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述高濃度為60-80%。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其特征在于，所述高濃度為70%。14.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，進(jìn)一步過(guò)濾所述醋制柴胡提取物，濃縮濾液，濃縮液上大孔樹(shù)脂，用水和不同濃度的乙醇依次洗脫，得精制醋制柴胡提取物。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的應(yīng)用，其特征在于，所述大孔樹(shù)脂為非極性大孔吸附樹(shù)脂。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，其特征在于，所述大孔樹(shù)脂為860021型。17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的應(yīng)用，其特征在于，所述不同濃度的乙醇為30-95%的乙醇。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的應(yīng)用，其特征在于，所述不同濃度的乙醇為30%、50%、70%或95%的乙醇。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了醋制柴胡溶劑提取物在制備降膽固醇藥物中的應(yīng)用，所述溶劑為水、乙醇、甲醇或其混合物。所述醋制柴胡溶劑提取物可進(jìn)一步由醇提后樹(shù)脂法或水提醇沉法精制。由本發(fā)明得到的醋制柴胡提取物在降膽固醇方面有明顯作用。文檔編號(hào)A61P3/06GK101810654SQ20091004659公開(kāi)日2010年8月25日申請(qǐng)日期2009年2月24日優(yōu)先權(quán)日2009年2月24日發(fā)明者吳彤,周海鳳,李志敏,李燕,楊方,沈龍海,陳述增申請(qǐng)人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院