專利名稱：加帽生物假體組織以減少鈣化的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請(qǐng)總體涉及用于處理生物假體組織的方法、材料和減少植入后鈣化的設(shè)備， 以及減少植入后鈣化的方法，特別是用于心瓣膜中使用的生物假體組織。
背景技術(shù)：
當(dāng)出現(xiàn)天然的心瓣膜變窄時(shí)——通常被稱為狹窄，或當(dāng)天然的瓣膜滲漏或回流 時(shí)——例如當(dāng)小葉鈣化時(shí)，表明可以進(jìn)行心瓣膜置換。在一種治療方案中，天然的瓣膜可 以被切除并用生物或機(jī)械瓣膜替換。某些醫(yī)學(xué)狀況可能要求移植或縫合組織小片(tissue patch)以修補(bǔ)生理畸形。這些包括但不限于疝修補(bǔ)、血管創(chuàng)傷、先天性心臟缺陷修補(bǔ)和重建 以及膀胱壁修補(bǔ)。組織型或“生物假體”瓣膜具有由基底結(jié)構(gòu)支持的柔韌組織小葉，小葉通過彼此對(duì) 著合緊以確保單向的血流，伸出進(jìn)入流動(dòng)流中并起到很像天然的人心瓣膜的那些小葉的作 用。在組織型瓣膜中，整個(gè)的異種移植瓣膜(例如，豬)或多個(gè)異種移植小葉(例如，?；?馬心包)典型地提供流體閉合表面(fluid occluding surfaces) 0也提出合成的組織小 葉。一個(gè)或多個(gè)柔韌小葉安裝在外周支持結(jié)構(gòu)里面，例如，如在可從加利福尼亞州Irvine 的 Edwards Lifesciences 獲得的 CARPENTIER-EDWARDS 豬心瓣膜和 PERIM0UNT 心包心瓣膜 中所看見的?？芍踩氲纳锝M織可以由人體組織形成，所述人體組織通過冷凍(即，低溫保存) 同種移植組織進(jìn)行保存；或者由動(dòng)物組織形成，所述動(dòng)物組織通過化學(xué)固定(即，鞣制)異 種移植組織進(jìn)行保存。用作生物假體的生物組織類型包括心臟瓣膜、血管、皮膚、硬腦膜、心 包、小腸粘膜下層(“SIS組織”)、韌帶和腱。這些生物組織典型地包含充當(dāng)所述組織的支 持構(gòu)架的結(jié)締組織蛋白(即，膠原和彈性蛋白)。每種生物組織的柔韌性或剛性很大程度上 由該組織中存在的膠原和彈性蛋白的相對(duì)量和/或其結(jié)締組織構(gòu)架的物理結(jié)構(gòu)和構(gòu)造來 決定。膠原是大多數(shù)組織中存在的最豐富的結(jié)締組織蛋白。每個(gè)膠原分子由以卷曲螺旋構(gòu) 造纏繞在一起的三(3)個(gè)多肽鏈形成。用于化學(xué)固定生物組織的技術(shù)典型 地包括將該生物組織暴露于一種或多種化學(xué) 固定劑(即，鞣劑)，所述化學(xué)固定劑在給定的膠原分子內(nèi)的多肽鏈之間形成交聯(lián)(即，分子 內(nèi)交聯(lián))，或者在相鄰膠原分子之間形成交聯(lián)(即，分子間交聯(lián))。已經(jīng)用于交聯(lián)白纖維組 織的化學(xué)固定劑的例子包括甲醛、戊二醛、二醛淀粉、1，6_己二異氰酸酯和某些聚環(huán)氧化 合物。與許多生物假體材料植入相關(guān)的一個(gè)問題是這些材料中的結(jié)締組織蛋白(即，膠 原和彈性蛋白)在植入到體內(nèi)后可以變成鈣化的。這種鈣化可導(dǎo)致該生物假體發(fā)生不期望 的硬化或降解。對(duì)白纖維組織的這種損傷導(dǎo)致瓣膜故障。
在可用的各種化學(xué)固定劑中，戊二醛(也簡單地稱為“戊二醛(glut)”)自從在 1968年由Dr. Alain Carpentier發(fā)現(xiàn)它具有抗免疫和抗降解效果以來已經(jīng)得到了最廣泛 白勺應(yīng)用。#JAL Carpentier, A. ,J. Thorac. Cardiovascular Surgery, 58 467-69 (1969) 另 夕卜，戊二醛是最常見的滅菌劑之一。戊二醛因此被用作許多商業(yè)可得的生物假體產(chǎn)品的優(yōu) 選的固定劑和滅菌劑，例如在可從加利福尼亞州Irvine的EdwardsLifesciences獲得的生 物假體心瓣膜中。戊二醛在組織內(nèi)產(chǎn)生可以導(dǎo)致體內(nèi)鈣化的潛在的鈣結(jié)合位點(diǎn)，如殘留的 醛、酸、希夫堿等等。這些基團(tuán)可以有助于鈣化，除非經(jīng)過加帽減輕。減輕這種鈣化在貯藏 期間是特別重要的，特別當(dāng)組織沒有被貯藏在水溶液中時(shí)。
已經(jīng)提出減輕戊二醛固定的生物假體的體內(nèi)鈣化或用其它方法改進(jìn)戊 二醛固定方法的各種技術(shù)。包括其中的是在美國專利4，729，139(Nashef)；美國 專利 4, 885, 005 (Nashef 等)；美國專利 4，648，881 (Carpentier 等)；美國專利 5, 002, 566 (Carpentier) ；EP103947 (Pollock 等)；美國專利 5，476，516 (Seufter 等)；和 美國專利5，215，541 (Nashef等)中所描述的方法。美國專利5，862，806 (Cheung)中的技 術(shù)包括在應(yīng)用有機(jī)溶劑中的化學(xué)還原劑例如氰基硼氫化鈉或硼氫化鈉之前，使用有機(jī)溶液 (即，乙醇，但沒有甘油)對(duì)戊二醛處理的組織進(jìn)行脫水。這種方法僅包括加入還原劑而沒 有任何加帽劑如蛋白質(zhì)、胺或者氨基酸。在美國專利6，471，723和美國專利4，786，287中 公開的鈣化減輕技術(shù)包括加入各種胺以使戊二醛固定組織中的醛基團(tuán)解毒。這些化學(xué)品不 是永久地連接到組織(例如，通過添加還原劑)，并且因此隨著時(shí)間將擴(kuò)散出組織，其顯著 地降低這些處理的鈣減輕效果。在美國專利5，476，516中的技術(shù)包括加入多羥基化合物 (如，甘油)和醇到生物假體組織中單獨(dú)地作為鈣化減輕處理，但是沒有提出任何氧化減輕 (即，加帽)策略。美國專利6，509，145和美國專利7，078，163提出用于鈣化減輕目的的 生物假體組織的氧化。美國專利6，630，001和美國專利6，277，555討論使用甘油保存和凍 干組織，但是沒有討論防止氧化的化學(xué)方法。美國專利6，352，708包括新鮮的、“非固定的” 組織的甘油保存以及用甘油和肝素的處理，但是沒有包括防止氧化或用甘油干燥步驟減少 鈣化的化學(xué)處理的組合。最近，通過在戊二醛中高溫固定組織的鈣減輕的新技術(shù)在美國專利 6，561，970 (Carpentier 等)中描述，其與在美國專利 5，931，969 (Carpentier 等)中 的相對(duì)組織/流體運(yùn)動(dòng)結(jié)合。包括調(diào)整戊二醛固定溶液的PH的另一種技術(shù)在美國專 利 6,878，168 (Carpentier 等)中公開。Edwards Lifesciences XenoLogiX 組織處 理消除多至98%的磷脂，力圖減少鈣結(jié)合位點(diǎn)。在也來自于Edwards Lifesciences的 Carpentier-Edwards ThermaFix 高級(jí)心瓣膜組織方法中，同時(shí)使用熱和化學(xué)處理以除去 不穩(wěn)定戊二醛分子，因此減少了鈣結(jié)合位點(diǎn)，相對(duì)于只有戊二醛的對(duì)照，其導(dǎo)致鈣攝入顯著 減少。生物假體瓣膜一般貯存在戊二醛或甲醛溶液中，在植入之前，必須漂洗。戊二醛由 于其滅菌劑的性而被廣泛地用作為貯存溶液，但是已知其有助于鈣化。最小化最終產(chǎn)品中 的戊二醛含量的策略已經(jīng)表明減輕體內(nèi)鈣化。研究顯示沒有戊二醛的貯存溶液與具有戊二 醛的貯存溶液相比，減少了體內(nèi)鈣化(Mirzaie等，Ann Thorac Cardiovasc Surg200713 102)。避免戊二醛作為貯存溶液的一種這樣的策略是在甘油/乙醇混合物中使生物假體組織脫水、用環(huán)氧丙烷消毒、和包裝最終產(chǎn)品為“干的”。這種方法避免了戊二醛作為滅菌劑和貯存溶液的潛在的毒性和鈣化作用。已經(jīng)有多種方法提議使用甘油、醇類和它們的組 合物作為戊二醛后處理的方法，使得生成的組織處于干燥”狀態(tài)，而不是帶有過量戊二醛的 濕狀態(tài)。這些方法避免使用含水的液體醛、或液體滅菌劑作為組織和設(shè)備的貯存溶液?；?于甘油的方法可以用于如下實(shí)例中描述的這種貯存。心瓣膜組織在甘油中的貯存由Parker 等(Thorax 197833:638)描述，但是沒有包括任何鈣化減輕技術(shù)和沒有描述任何益處。同 樣，美國專利6，534，004(Chen等)描述在多元醇如甘油中貯存生物假體組織。然而，這些 中沒有一個(gè)提出減輕組織的潛在氧化。在其中使組織在乙醇/甘油溶液中脫水的方法中，組織可以通過環(huán)氧乙烷、Y照 射、或電子束輻射滅菌。環(huán)氧乙烷滅菌需要使組織暴露于將在組織中產(chǎn)生氧化損傷的高溫 和水蒸氣(Olde Damink, LH.等· JBiomed Mater Res 199529 :149)。已知 γ 照射在膠原 底物中生成顯著數(shù)量的活性氧化種類，其使得膠原纖絲的骨架裂開和破壞(Ohan，MP等.J Biomed Mater Res A 200367:1188)。這種損傷將導(dǎo)致組織中的機(jī)械和生物化學(xué)功能性減 少。電子束輻射也將斷開膠原骨架和導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)和反應(yīng)性退化(Grant，RA等.J Cell Sci 19707:387)。在滅菌和/或貯存期間來自氧化的損傷將促進(jìn)瓣膜退化和結(jié)構(gòu)故障。美 國專利6，605，667討論加入各種抗氧化穩(wěn)定劑到可聚合的粘合劑中，但是沒有涉及在貯存 期間通過離子輻射或氧化而減輕對(duì)生物假體組織的損傷。雖然這些基于甘油的方法作為在含水的、液體型溶液中貯存的替代方案是有用 的，但是它們沒有解決這樣的事實(shí)處理后官能團(tuán)(即，醛)可隨著時(shí)間氧化，并且因此增加 鈣化的可能性。本發(fā)明描述加帽方法，使得氧化和其它變化隨貯存時(shí)間被顯著地減少。現(xiàn) 有技術(shù)沒有解決在貯藏期間脫水的生物假體組織內(nèi)的變化，所述變化作為體外空氣氧化或 體內(nèi)氧化的結(jié)果出現(xiàn)。在戊二醛固定的組織中的高醛含量非常易于氧化，其導(dǎo)致鈣化和組 織故障。因此，本發(fā)明教導(dǎo)改進(jìn)的可植入組織設(shè)備的組織處理方法。本發(fā)明解決脫水組織內(nèi)的某些有害的變化，所述有害的變化可作為來自貯存和處 理期間的滅菌、空氣暴露的氧化、或來自體內(nèi)氧化的氧化的結(jié)果出現(xiàn)。戊二醛中的生物假 體組織的貯存提供一些抗氧化作用并幫助阻止組織中醛官能的氧化，其可能促進(jìn)增加的鈣 化。在組織被脫水和在空氣中貯存的方法中，組織沒有被保護(hù)免受氧化，并且將導(dǎo)致來自活 性氧化種類的生物化學(xué)損傷。生成的氧化生物標(biāo)志如羧酸可能促進(jìn)鈣結(jié)合并且由于鈣化而 發(fā)生生物假體的失敗。組織中醛基團(tuán)的永久加帽(還原胺化)將防止組織的顯著氧化并導(dǎo) 致該材料的使用壽命更長。本發(fā)明包括醛(和其它種類)的化學(xué)加帽或組織的其它方式地 抑制，以防止脫水組織中的氧化。本發(fā)明也描述加入化學(xué)品(例如，抗氧化劑)到脫水溶液(乙醇/甘油)中，以阻 止在滅菌(環(huán)氧乙烷、Y照射、電子束輻射等)和貯存期間的組織氧化。脫水的生物假體 組織在滅菌和貯存期間特別易于氧化?，F(xiàn)有技術(shù)沒有討論化學(xué)阻止這種類型的生物假體材 料的這種損傷。發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)目的是提供減輕生物假體植入組織中鈣化的方法，包括a)用加帽 劑處理生物假體植入組織，所述加帽劑與所述組織上的官能團(tuán)反應(yīng)，和b)用非水溶液使所 述加帽的組織脫水。
另一個(gè)目的是提供抗鈣化組織，包括a)已經(jīng)用加帽劑處理的生物假體植入組 織，所述加帽劑與所述組織上的官能團(tuán)反應(yīng)，和b)用非水溶液脫水。本發(fā)明的性質(zhì)和益處的進(jìn)一步理解在以下描述和所附權(quán)利要求中說明，特別是當(dāng) 與附圖結(jié)合考慮時(shí)，在所述附圖中，相同的部分具有相同的指代數(shù)字。附圖簡述

圖1為顯示在數(shù)種不同的化學(xué)處理后，牛心包組織中的醛和酸含量的圖；圖2為將體內(nèi)組織鈣含量與三種不同方式處理的組織的相應(yīng)酸和醛含量關(guān)聯(lián)起 來的圖；圖3為圖解各種組織處理的酸和醛含量的圖；圖4是顯示通過加帽、還原和干燥(GLX方法)的鈣化減少的圖；圖5是顯示通過加帽、還原和干燥(GLX方法)的鈣化變異性降低的圖；圖6是顯示在80天的實(shí)時(shí)貯存期后，通過加帽、還原和干燥(GLX方法)的鈣化減 少的圖；圖7是35天兔肌內(nèi)研究的箱線圖；圖8是35天兔肌內(nèi)研究、短期貯存期和鈣化的箱線圖。優(yōu)選的實(shí)施方式描述本發(fā)明提供改進(jìn)的生物假體組織處理方法，其通過在脫水步驟之前封閉游離醛基 團(tuán)和/或加入化學(xué)劑以防止滅菌期間的氧化損傷，大大降低植入后鈣化的可能性?！吧锛?體組織”包括但不限于在生物假體心瓣膜中通常使用的牛心包和豬組織，以及血管、皮膚、 硬腦膜、心包、小腸粘膜下層(“SIS組織”)、組織心瓣膜、韌帶和腱。本申請(qǐng)中的“植入物” 不僅指包括經(jīng)導(dǎo)管心瓣膜在內(nèi)的心瓣膜，而且指血管假體和移植物、組織移植物、骨移植物 和眼眶植入物覆蓋物(orbital implantwraps)以及其它?！吧锛袤w心瓣膜”指至少部分地由生物假體組織制成的全裝配假體瓣膜。在 所謂的“無支架(stentless) ”生物假體瓣膜中使用一些完整豬瓣膜，在所謂的“無支架 (stentless)，，生物假體瓣膜中如果任何合成材料被加入用于支持或固定的目的，其存在是 非常少的。“支架式(stented) ”生物假體瓣膜典型地具有用于小葉的一些合成(例如，聚 合物或金屬)支持，其可以是完整的豬異種移植小葉或分開的牛心包小葉。本文考慮的心 瓣膜包括手術(shù)心瓣膜、切頂心瓣膜(transapical heartvalves)、經(jīng)骨動(dòng)脈心瓣膜和其它類 型的心瓣膜?，F(xiàn)有技術(shù)的組織處理方法針對(duì)交聯(lián)、微生物和在“靜態(tài)”裝置中的組織的其它方 面，并且典型地包括使組織浸入在戊二醛、吐溫(聚氧乙烯20失水山梨糖醇單油酸酯)、乙 醇、甲醛和其它物質(zhì)中，以減輕植入后的鈣化。一些現(xiàn)有技術(shù)方法包括加入各種化學(xué)品，以 便通過使用金屬離子(即，Al3+或Fe3+，參見美國專利5，746，775,Levy)或整體封閉劑(bulk blocking agents)(即，2-氨基油酸，參見美國專利4，976，733，Giradot)來降低交聯(lián)組織 的毒性或減輕鈣化。但是這些方法中每一個(gè)僅應(yīng)用于最初處理的組織，而不應(yīng)用于脫水組 織或者組織裝置以防止氧化損傷。現(xiàn)有技術(shù)方法局限于加入化學(xué)或生物制劑到臨時(shí)附著于 組織的交聯(lián)組織，或者它們局限于在沒有加入任何“加帽劑”的情況下單獨(dú)地還原或氧化組 織(參見美國專利5，862，806，Cheung)。與各種現(xiàn)有技術(shù)組織處理不同——在現(xiàn)有技術(shù)中目標(biāo)是固定(也就是交聯(lián)等)組織，本發(fā)明描述了另外的方法，藉此，由現(xiàn)有技術(shù)固定方法形成的酸和其它潛在結(jié)合位點(diǎn)被 “加帽”。它也包括“加帽”由固定組織氧化生成的結(jié)合位點(diǎn)和潛在的結(jié)合位點(diǎn)。用戊二醛、 吐溫(聚氧乙烯20失水山梨糖醇單油酸酯)、乙醇、甲醛和其它物質(zhì)進(jìn)行的組織處理可以提 供有用的組織固定。然而，其也將產(chǎn)生能夠與鈣、磷酸酯、免疫原性因子或其它鈣化前體相 互作用或吸引鈣、磷酸酯、免疫原性因子或其它鈣化前體的結(jié)合位點(diǎn)。例如，在戊二醛固定 組織后，有許多帶負(fù)電荷的羧酸基團(tuán)形成，并且這些基團(tuán)能夠吸引鈣離子(由于它們的負(fù) 電荷并且與帶正電荷離子的靜電相互作用)，導(dǎo)致組織鈣化或不利的細(xì)胞相互作用。已知 羧酸基團(tuán)像在谷氨酸或Y羧基谷氨酸中的那些基團(tuán)結(jié)合鈣原子(Hauschka等PNAS 1975， 72 :3925)。鈣結(jié)合蛋白例如骨涎蛋白含有富羧酸結(jié)構(gòu)域，目的是吸引和結(jié)合鈣，導(dǎo)致羥基磷 灰石形成(鈣化)。在這些蛋白質(zhì)中的酸基團(tuán)的總體水平和位置決定蛋白質(zhì)有效結(jié)合鈣和 形成羥基磷灰石的能力。術(shù)語組織的“酸化潛力(acidpotential)”是指在固定組織內(nèi)通過 氧化、脫水、水合、或類似的方法可以最終形成酸基團(tuán)或“結(jié)合位點(diǎn)”的這些化學(xué)官能團(tuán)的水 平本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這種結(jié)合導(dǎo)致生物假體材料中的顯著的植入后損傷，特別是用 于心瓣膜小葉的組織。例如，在貯存和脫水或“干燥”組織處理期間出現(xiàn)的氧化損傷可產(chǎn)生 將結(jié)合鈣和導(dǎo)致組織障礙的羧酸基團(tuán)。這種漸進(jìn)的小葉損傷過程可產(chǎn)生為鈣化前體和免疫 原性相關(guān)通路的新結(jié)合位點(diǎn)或潛在結(jié)合位點(diǎn)。本發(fā)明描述在植入組織基生物假體的組織進(jìn) 入體內(nèi)之前，加帽這些新形成的結(jié)合位點(diǎn)的方法。本發(fā)明人也發(fā)現(xiàn)暴露于空氣氧化的生物 假體組織當(dāng)未浸入戊二醛溶液或在滅菌期間時(shí)可能包含更多個(gè)促進(jìn)鈣化和炎癥的酸基團(tuán)。 在干燥貯存時(shí)，脫水組織被滅菌并在沒有戊二醛溶液的保護(hù)作用下被“干燥”貯存。這種新 產(chǎn)品的處理和貯存的方便性由于沒有戊二醛貯存溶液而被大大地促進(jìn)。這種技術(shù)可以通過 用加帽劑處理此類生物假體組織和/或在脫水階段加入化學(xué)保護(hù)劑改進(jìn)。本發(fā)明內(nèi)的一個(gè)化學(xué)目標(biāo)是酸基團(tuán)的永久“加帽”，這將顯著降低它們吸引鈣、磷 酸酯、免疫原性因子或其它基團(tuán)的能力。術(shù)語“加帽”指封閉、去除或改變將會(huì)對(duì)生物假體 性能具有不良作用的官能團(tuán)。例如，加入1-乙基-3_[3-二甲氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽 (EDC)、N-羥基硫代琥珀酰亞胺(硫代-NHS)和乙醇胺將有效地用非反應(yīng)性醇基團(tuán)給酸基 團(tuán)加帽。除了酸結(jié)合位點(diǎn)，用戊二醛或其它含醛物質(zhì)處理的組織也產(chǎn)生具有許多游離醛基 團(tuán)的組織，所述游離醛基團(tuán)引起毒性增加、鈣化更高和參與免疫原性應(yīng)答。這些醛基團(tuán)通過 空氣氧化、體內(nèi)血液氧化、巨噬細(xì)胞氧化和其它類似氧化路徑可以容易地氧化成為羧酸基 團(tuán)。因此，本發(fā)明另外的目標(biāo)包括使為潛在結(jié)合位點(diǎn)的醛基團(tuán)永久加帽，其方式是阻止或減 輕它們轉(zhuǎn)化為酸或其它基團(tuán)的能力并且因此進(jìn)一步減輕身體內(nèi)(體內(nèi))的鈣化潛力。除了 酸和醛，還有其它可能的結(jié)合位點(diǎn)例如免疫原性和抗原因子，使它們加帽被包括在本發(fā)明 的范圍內(nèi)。本發(fā)明的加帽方法包括組織的化學(xué)還原，當(dāng)在加帽劑存在時(shí)應(yīng)用于組織時(shí)，組織 的化學(xué)還原將永久地將加帽劑與目標(biāo)基團(tuán)連接。例如，加入乙醇胺到組織將加帽醛基團(tuán)，同 時(shí)還原劑(例如，硼氫化鈉)還原由醛與乙醇胺的胺基團(tuán)反應(yīng)產(chǎn)生的任何希夫堿。因此，醛 基團(tuán)最終替換為可有利于組織水合、柔韌性和細(xì)胞相互作用的羥基。當(dāng)然，可以使用其它 加帽劑替換乙醇胺以及使用硼氫化鈉之外的其它還原劑，并且這些是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，而且它們被包括在本專利的范圍內(nèi)。另一優(yōu)選的策略是氧化組織醛為酸，然后給酸基團(tuán) 加帽。這可以包括加入1-乙基-3-[3-二甲氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、N-羥基硫 代琥珀酰亞胺(硫代-NHS)和乙醇胺。這種新的“被加帽”基團(tuán)將減少對(duì)鈣、磷酸酯、免疫 原性因子或其它類似物質(zhì)的吸引。在一個(gè)具體實(shí)施方式
中，本發(fā)明提供處理生物假體植入組織以減少體內(nèi)鈣化的方 法，包括至少部分地交聯(lián)生物假體植入組織，然后用醛(或酸)加帽溶液處理所交聯(lián)的組織 以減輕鈣化，并且使組織在乙醇/甘油溶液中脫水。甘油溶液可以包括抗氧化劑處理和可 以包含水溶性蠟。然后使組織干燥并且隨后進(jìn)行最終滅菌(例如，環(huán)氧乙烷、Y照射或電 子束輻射)。以下步驟描述在假體心瓣膜的制造中該方法的實(shí)施。
醛加帽。在瓣膜泄露和流量觀察后，瓣膜在20%乙烷中短暫漂洗以去除粘附到組 織的任何過量的戊二醛。這被認(rèn)為通過保證加帽溶液能夠粘結(jié)到組織上的醛、而不是溶液 中的游離戊二醛而增強(qiáng)加帽工藝。瓣膜然后在室溫下?lián)u動(dòng)下暴露于乙醇胺和硼氫化鈉的加 帽溶液4小時(shí)。從加帽溶液中移走瓣膜，然后在室溫用在最終的生物負(fù)載(bioburden)還 原工藝中使用的相同溶液漂洗幾分鐘，以去除過量的加帽溶液。甘油處理。在瓣膜已經(jīng)通過標(biāo)準(zhǔn)的最終生物負(fù)載還原步驟處理之后，它們?cè)?75wt%甘油和25襯％乙醇的溶液中進(jìn)行甘油處理。瓣膜在該溶液中室溫浸泡1小時(shí)。在該 時(shí)間期間，在心包組織中存在的大部分水分子被甘油替代。瓣膜從溶液中移走并放置在清 潔罩中，以使任何過量溶液從瓣膜中蒸發(fā)或滴完。EO滅菌。脫水瓣膜然后準(zhǔn)備包裝。它們包裝在由硬盒(PETG)與Tyvek蓋組成的 雙層無菌阻隔包裝中。包裝在潔凈室中密封并在100%環(huán)氧乙烷中滅菌。鈣化緩和劑優(yōu)選地包含選自以下的加帽劑胺，氨基酸，氨基磺酸鹽，親水性多官能聚合物，疏水性多官能聚合物，α-二羰基，酰胼類，N, N- 二琥珀酰亞胺基碳酸酯，碳二亞胺，2-氯-1-甲基碘代吡啶(CMPI)，抗生素，細(xì)胞募集劑，血液相容劑，抗炎劑，抗增殖劑，免疫原性抑制劑，還原劑，和單環(huán)氧烷烴、二環(huán)氧烷烴或聚環(huán)氧烷烴。
化學(xué)抗氧化劑期望選自水溶性抗氧化劑如抗壞血酸， 脂溶性抗氧化劑如生育酚，糖類如果糖、蔗糖或甘露糖，受阻酚如丁化羥基甲苯(BHT)，受阻胺光穩(wěn)定劑(HALS)如對(duì)苯胺二胺(p-phenylamine diamine)、三甲基二氫喹 啉或烷基化聯(lián)苯胺，亞磷酸酯/亞膦酸酯如三苯膦，
和硫代酸酯如硫代肉桂酸酯。期望以一種以下已選溶液或以下已選溶液的組合來遞送鈣化緩和劑(加帽劑)和 /或化學(xué)氧化保護(hù)劑水溶液例如水緩沖溶液、水、短鏈醇、甘油或增塑劑，有機(jī)溶劑，及有機(jī)緩沖溶液。組織在加帽過程之前優(yōu)選地被完全交聯(lián)。在一種實(shí)施方式中，組織包括在適當(dāng)裝 置中安裝和處理的預(yù)切割的心瓣膜小葉?？蛇x地，組織可以為在適當(dāng)裝置中處理的組織大 片(bulk sheets)0以種類和亞類提供的加帽劑的實(shí)例是胺，烷基胺、氨基醇、乙醇胺；氨基酸，賴氨酸、羥賴氨酸；氨基磺酸鹽，?；撬?、氨基硫酸鹽、葡聚糖硫酸鹽、軟骨素硫酸鹽；親水性多官能聚合物，聚乙烯醇、聚乙烯亞胺；疏水性多官能聚合物，α-二羰基類，甲基乙二醛、3_脫氧葡糖醛酮、乙二醛；酰胼類，己二酸酰胼，N，N- 二琥珀酰亞胺基碳酸酯；碳二亞胺類，1-乙基-3-[3_ 二甲氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、Ν_環(huán)己基-N' _(2_嗎啉 乙基)碳二亞胺(CMC)、1，3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)；2-氯-1-甲基碘代吡啶(CMPI)；抗生素；細(xì)胞募集劑；血液相容劑，
肝素；抗炎劑；抗增殖劑；免疫抑制劑；還原劑，氰基硼氫化鈉、硼氫化鈉、亞硫酸氫鈉+乙酰丙酮、甲酸+甲醛；和單環(huán)氧烷烴、二環(huán)氧烷烴或聚環(huán)氧烷烴。優(yōu)選的加帽劑的作用不僅封閉將吸引鈣、磷酸酯、免疫原性因子、或其它類似物質(zhì)的官能團(tuán)，而且用優(yōu)良的生物功能性(Biologicalfimctionality)代替那些基團(tuán)。術(shù)語“生 物功能性”定義為組織成分對(duì)植入材料的局部生物學(xué)的作用。改進(jìn)的組織處理的生物功能 性可以包括組織總電荷(overall charge)的減少、更好的血液相容性、增加的組織水合、更 好的細(xì)胞相互作用、更好的柔韌性等。例如，用乙醇胺加帽于醛官能將阻止醛基團(tuán)氧化成為 酸并且將其替換為可有益于組織水合、柔韌性和細(xì)胞相互作用的羥基。被加帽的組織的期 望生物功能性將決定使用的加帽化合物的類型。加帽策略也旨在阻止可促進(jìn)不良細(xì)胞反應(yīng)的組織成分的生物功能性。這些目標(biāo)中 的一些包括但不限于a-gal、MHC-l相關(guān)蛋白質(zhì)、HLA抗原等。因此，本發(fā)明也涉及加帽于或 封閉蛋白質(zhì)、糖類、脂類和可有助于細(xì)胞反應(yīng)的其它組織成分。例如，α-gal糖可以通過用 2_氯-1-甲基碘代吡啶(CMPI)和本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的中和羥基的其它物質(zhì)處理進(jìn)行封 閉。另外一個(gè)例子包括可以通過用1-乙基-3_[3-二甲氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽(EDC) 和乙醇胺處理而被加帽或有效中和的MHC-I相關(guān)蛋白質(zhì)。本發(fā)明加帽方法中也包括以與細(xì) 胞和血管殘留物(remnants)相關(guān)的蛋白質(zhì)、糖類或脂類作為目標(biāo)。例如，纖連蛋白可以通 過加入甲基乙二醛到組織而被加帽或封閉。已知這種二羰基結(jié)合蛋白質(zhì)內(nèi)關(guān)鍵的精氨酸官 能并且損害這些蛋白質(zhì)的生物功能性。本發(fā)明的另一方面包括在滅菌后加帽技術(shù)的激活。例如，在Y照射滅菌之前，用 特定的加帽劑(例如葡萄糖和乙醇胺或?；撬?處理組織，在照射后將產(chǎn)生加帽劑的活化。 加入到組織的加帽劑將立刻有效地加帽于組織內(nèi)的目標(biāo)，但是滅菌(也就是，環(huán)氧乙烷、電 子束輻射或Y照射)將產(chǎn)生新的結(jié)合位點(diǎn)，其隨后將被組織內(nèi)殘留的加帽劑加帽。已知膠 原的Y照射裂解骨架內(nèi)的肽鍵并產(chǎn)生可能對(duì)組織有不良作用的新官能團(tuán)。這些新官能團(tuán) 包括在本文所述的目標(biāo)或結(jié)合位點(diǎn)，并可以通過本文列舉的加帽劑加帽或封閉。免疫原性因子定義為引起或參與刺激免疫原性應(yīng)答的任何物質(zhì)。這包括能夠誘導(dǎo) 免疫型應(yīng)答的任何化學(xué)或生物制劑。例如，組織中留下的血管和細(xì)胞膜成分可以引起來自 于體內(nèi)的天然免疫系統(tǒng)的一些類型的免疫原性或抗原應(yīng)答。本發(fā)明包括能夠靜態(tài)或動(dòng)態(tài)地 掩蔽、代替、或封閉組織中這些免疫原性元件的加帽劑。例如，完整的瓣膜被固定，隨后用非 免疫原性或更加血相容的加帽劑例如肝素進(jìn)行加帽，然后脫水和滅菌。這不同于將肝素添 加到固定的組織而沒有任何的瓣膜脫水或沒有考慮處理后氧化條件的現(xiàn)有技術(shù)方法。本發(fā) 明方法可以用去細(xì)胞化(decellularization)方法來補(bǔ)充，以減少免疫或抗原結(jié)合位點(diǎn)和 潛在的結(jié)合位點(diǎn)，并且其也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。為了更好地理解為本發(fā)明處理技術(shù)基礎(chǔ)的原理，基于實(shí)際試驗(yàn)，提供多個(gè)圖表 (參見附圖)。如上提到的，本發(fā)明一般包括處理組織，使得鈣或磷酸酯結(jié)合位點(diǎn)、或可能引發(fā)鈣化的其它這類位點(diǎn)被封閉。酸結(jié)合位點(diǎn)和組織鈣化之間的相關(guān)性可以被看見(圖2，也 參見Hauschka等PNAS 1975 72 :3925)，并且顯示的是酸模板化(acid templating)指引 多種種類的礦化。因此，在植入時(shí)組織中的游離酸和/或醛的量與這些結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目相 關(guān)，并且因此增加了鈣化的可能性。組織中存在的游離酸和醛的量可以通過已知的方法測(cè) 量，例如，標(biāo)準(zhǔn)的分光光度檢測(cè)。圖1為顯示牛心包組織中的游離醛和游離酸含量一通過前述技術(shù)測(cè)量一的 圖。應(yīng)該理解的是，所有在本文提到的實(shí)驗(yàn)包括戊二醛固定的牛心包組織。研究的組織都 被化學(xué)處理，一種只用戊二醛，而其它兩種利用已經(jīng)被Edwards Lifesciences用來制備商 業(yè)植入用生物假體組織的組織處理。然而，其它交聯(lián)和組織處理方法可以被使用并且在本 發(fā)明的范圍內(nèi)?；瘜W(xué)處理后，測(cè)量組織的醛和酸含量，并且沒有給與組織任何損傷或應(yīng)力。在圖1 的圖右側(cè)，組織樣品只在戊二醛中處理，具體地在0. 625%戊二醛溶液中處理14天的時(shí)間。 總計(jì)10 個(gè)樣品被處理并隨后被測(cè)試。測(cè)量顯示每毫克干重組織有大約40納摩爾醛和大約 17納摩爾酸的平均水平。圖1的圖中間顯示來自于經(jīng)受處理A的總計(jì)10個(gè)組織樣品測(cè)試的結(jié)果，處 理A商業(yè)上被稱為XenoLogiX 組織處理方法，來自于加利福尼亞州Irvine的Edwards Lifesciences0處理A包括首先用戊二醛固定，隨后用包括交聯(lián)劑例如甲醛、表面活性劑例 如吐溫_80(聚氧乙烯失水山梨糖醇單油酸酯)和變性劑例如乙醇在內(nèi)的殺菌劑處理兩次。 經(jīng)受處理A的組織的醛和酸的含量都小于單獨(dú)用戊二醛處理的組織的醛和酸的含量，其中 醛含量減少了大約25%而酸含量減少大約50%。這種減少歸因于酸結(jié)合位點(diǎn)的來源的磷 脂的進(jìn)一步還原以及來自醇和醛基團(tuán)的半縮醛的形成。圖1的左邊顯示來自于經(jīng)受處理B的總計(jì)10個(gè)樣品測(cè)試的結(jié)果，處理B商業(yè)上被 ^^J Carpentier-Edwards ThermaFix ^R^tMjj^, g T Edwards Lifesciences。 ^h 理B與處理A基本相同，外加在固定后和滅菌前的熱處理步驟。受到處理B的組織的醛和 酸的含量都小于單獨(dú)用戊二醛處理的組織的醛和酸的含量，其中醛含量減少了大約33%而 酸含量減少大于50%。另外，相對(duì)于處理A，處理B減少了 10-20%之間的醛和酸含量。圖2為對(duì)圖1中顯示的三種組織處理重復(fù)醛/酸含量測(cè)量結(jié)果的圖，并且從單獨(dú) 研究，也添加了來自于皮下植入兔中的相似組織樣品的鈣攝入的測(cè)量。在植入之前，測(cè)量組 織中的這些酸水平，并且其在體內(nèi)可能增加。圖2顯示在植入組織中發(fā)現(xiàn)的鈣量與來自于 三種組織處理的醛/酸的水平相關(guān)。即，隨著在各種組織樣品中游離醛和游離酸的水平降 低，植入后吸收的鈣量也減少。再次，應(yīng)當(dāng)理解的是許多因素有助于鈣攝入，但是某些鈣和 磷酸酯結(jié)合位點(diǎn)的可用性以及其它因素是將來鈣化的主要指標(biāo)。圖2的圖因此表明降低組 織中醛/酸的水平將減少組織鈣化的傾向。如以上提到的，現(xiàn)在應(yīng)當(dāng)理解的是，組織中醛基團(tuán)氧化成羧酸基團(tuán)產(chǎn)生鈣化的增 力口。這種現(xiàn)象的證據(jù)在圖3的圖中提供。具體地，如以上所解釋，組織中的酸水平與植入后 的鈣化傾向直接相關(guān)。圖3表明在各種組織樣品中的酸水平。組織處理的類型是新鮮的未 處理的組織、戊二醛_固定的組織、XenoLogiX(XLX)、ThermaFix(TFX)、只用甘油和乙醇處 理的ThermaFix組織，以及GLX方法，其包括用戊二醛處理、用乙醇胺加帽同時(shí)用硼氫化鈉 還原、和用甘油和乙醇脫水。
圖4和5是兔肌內(nèi)植入研究的結(jié)果，顯示GLX方法(在本發(fā)明中描述)相對(duì)于現(xiàn) 有技術(shù)(TFX)和相對(duì)于簡單的甘油處理(GLY-處理的)顯著地減少鈣化。這些數(shù)據(jù)也顯示 GLX方法減少鈣化中的變異性。所有的鈣化測(cè)量通過原子吸收光譜測(cè)量并歸一化為凍干組
織的干重量圖6和7圖解在80天的實(shí)時(shí)貯存期后，GLX處理的組織相比TFX或單獨(dú)甘油處理 的組織顯示顯著更少的鈣化。GLX方法也降低了 80天貯存期后的變異性。所有的鈣化測(cè)量 通過原子吸收光譜測(cè)量并歸一化為凍干組織的干重量?；谇笆鰧?shí)驗(yàn)結(jié)果，本發(fā)明人認(rèn)為施加于生物假體組織的脫水組織的氧化損傷極 大促進(jìn)組織鈣化的傾向。具體地，不在戊二醛中貯存的心瓣膜小葉受到顯著的氧化損傷。這 種有害的組織損傷過程可以產(chǎn)生先前沒有檢測(cè)或識(shí)別到的新的結(jié)合位點(diǎn)，作為鈣和磷離子 的潛在附著位點(diǎn)，由此引起鈣化。為了幫助預(yù)防這種植入后損傷-鈣化過程，本發(fā)明涉及通過加帽易于氧化的和增 加鈣化引發(fā)的許多醛來減輕氧化。優(yōu)選的實(shí)施方式包括但不限于1.在包含醛加帽劑的溶液中處理固定的組織瓣膜或組織片。2.實(shí)施方式1，但是其中在加帽過程期間或之后，加入滅菌步驟。3.實(shí)施方式1和2，但是其中處理被搖動(dòng)。4.實(shí)施方式1、2和3，但是其中加帽劑用于其它結(jié)合位點(diǎn)如酸或生物免疫相關(guān)的 位點(diǎn)。5.醛加帽溶液可以包含在pH 7. 4的50mM磷酸鹽緩沖液中的胺(IOmM乙醇胺)和 還原劑(132mM硼氫化鈉)。6.組織或瓣膜然后在甘油溶液中脫水。7.組織或瓣膜然后用環(huán)氧乙烷滅菌。實(shí)施例1-使用乙醇胺和硼氫化鈉的戊二醛固定組織的醛加帽。剛好在熱處理步 驟之后，生物假體組織從0.625%戊二醛中移走，然后在乙醇鹽水(20%/80%)中漂洗2 分鐘。制備1升包含在50mM磷酸鹽緩沖液(pH 7. 3-7. 8)中的IOmM乙醇胺(0. 06% )和 IlOmM硼氫化鈉(0.42%)的加帽溶液。加帽溶液放置在定軌搖床上，然后組織(小葉或瓣膜)放置在該溶液中，使得它們 被完全浸沒。組織與溶液的比例是每IOOml中3個(gè)小葉或每IOOml中一個(gè)瓣膜。容器被部 分地覆蓋，但是不完全密封，因?yàn)榕c水化學(xué)反應(yīng)釋放的氫氣可能使容器爆炸。定軌搖床以 SO-IOOrpm在室溫運(yùn)行4小時(shí)。然后取出組織并在FET溶液(甲醛、乙醇、吐溫-80)中漂洗 3分鐘。實(shí)施例2-心包瓣膜生物假體組織的甘油脫水過程。心包瓣膜通過用鑷子將每個(gè) 瓣膜保持在瓣膜的縫合環(huán)上并將瓣膜放置在甘油/乙醇(75% /25% )混合物中來脫水。含 瓣膜的燒杯放置在50-60RPM之間運(yùn)轉(zhuǎn)的定軌搖床上至少一(1)小時(shí)，但是不超過四(4)小 時(shí)，然后立即處理以去除過量甘油。這通過用鑷子將它們保持在瓣膜的縫合環(huán)上、從甘油/ 乙醇混合物中取出瓣膜并且隨后將其放置在廣口瓶中的吸收毛巾(absorbent towel)上進(jìn) 行。在使其室溫干燥至少5分鐘后，將廣口瓶連接到凍干機(jī)和干燥2個(gè)小時(shí)。瓣膜然后轉(zhuǎn) 移至環(huán)氧乙烷氣體能滲透的包裝中并用環(huán)氧乙烷滅菌。
實(shí)施例3-鈣化減輕-小動(dòng)物模型。為了評(píng)估GLX處理和EO滅菌的心包組織的鈣 化減輕性能，進(jìn)行兩種小動(dòng)物可行性研究。這些研究表明，1)在減輕組織中鈣化發(fā)生方面， GLX優(yōu)于TFX，和2)在減輕鈣化方面，實(shí)時(shí)老化的GLX也優(yōu)于TFX。在兩個(gè)研究中，當(dāng)與TFX 瓣膜比較時(shí)，GLX瓣膜表明鈣化數(shù)據(jù)中減小的變異性。試驗(yàn)方法和每個(gè)結(jié)果在下面總結(jié)。實(shí)施例3A-兔研究#1。在35天大鼠肌內(nèi)研究中環(huán)氧乙烷滅菌對(duì)GLX處理的心包 組織的鈣化潛力。進(jìn)行使用六十(60)只兔的研究，以觀察對(duì)使用100%環(huán)氧乙烷滅菌的GLX 處理的心包鈣化的影響。對(duì)照組是ThermaFix (TFX)處理的牛心包，而試驗(yàn)組是GLX處理的 心包。使用符號(hào)軼和檢驗(yàn)(sign-rank test)，發(fā)現(xiàn)GLX組織當(dāng)與TFX比較時(shí)，有顯著差別 (P = 0.0004)，并且表明相對(duì)于TFX有93%的鈣化減少。GLX數(shù)據(jù)也顯示減少的異常值和 降低的變異性。對(duì)于GLX過程，箱線圖顯示可觀的變異性減小。圖7提供數(shù)據(jù)，其中y-軸 測(cè)量微克鈣/毫克干重量組織。
實(shí)施例3B-兔研究#2。在35天大鼠肌內(nèi)研究中短期貯存期對(duì)GLX處理的心包組 織的鈣化的影響。進(jìn)行使用另外六十(60)只兔的第二項(xiàng)研究，以觀察短期貯存期對(duì)GLX處 理的心包的鈣化的影響。對(duì)照組是ThermaFix (TFX)處理的牛心包，而試驗(yàn)組是GLX處理的 心包。GLX組織樣品被包裝在Tyvek袋中，并經(jīng)100%環(huán)氧乙烷滅菌。在25°C和60%濕度 下，GLX樣品被貯存在受控穩(wěn)態(tài)室中83天的期間。TFX樣品沒有被老化。在該研究中，GLX 處理的組織表現(xiàn)顯著降低的鈣化水平，與TFX相比73% (ρ = 0. 009)，以及減小的異常值和 減少的數(shù)據(jù)變異性。在圖8中提供數(shù)據(jù)，其中y_軸測(cè)量微克鈣/毫克干重量組織。雖然發(fā)明已經(jīng)以其優(yōu)選方式描述，但是應(yīng)該理解的是已經(jīng)使用的語言是描述性的 言語而不是限制性的。因此，在所附權(quán)利要求內(nèi)可以進(jìn)行改變，而不偏離本發(fā)明的真正范 圍。
權(quán)利要求
在生物假體植入組織中減輕鈣化的方法，包括a)用加帽劑處理生物假體植入組織，所述加帽劑與所述組織上的官能團(tuán)反應(yīng)，和b)用非水溶液使所述組織脫水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述官能團(tuán)是醛基團(tuán)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述官能團(tuán)是羧酸基團(tuán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述加帽劑選自 胺，氨基酸， 氨基磺酸鹽， 親水性多官能聚合物， 疏水性多官能聚合物， α “ 二羰基， 酰胼類，N，N- 二琥珀酰亞胺基碳酸酯， 碳二亞胺，2-氯-1-甲基碘代吡啶(CMPI)，抗生素，細(xì)胞募集劑，血液相容劑，抗炎劑，抗增殖劑，免疫原性抑制劑，短鏈糖類，還原劑，和單環(huán)氧烷烴、二環(huán)氧烷烴或聚環(huán)氧烷烴。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述加帽劑在下述物質(zhì)中被遞送a)水溶液，b) 有機(jī)溶劑，c)無水多元醇溶液；或d)它們的混合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組織包括作為完整瓣膜安裝和處理的預(yù)切割 的心瓣膜小葉。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組織包括組織大片。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述加帽的組織在甘油溶液中脫水。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述加帽的組織在甘油/乙醇溶液中脫水。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述脫水溶液含有水溶性蠟。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述加帽劑可以與所述組織上的鈣、磷酸酯或免 疫原性因子結(jié)合位點(diǎn)反應(yīng)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述加帽劑防止來自自由基或電離輻射的氧化 損傷。
13.生物假體植入組織，包括a)生物假體植入組織，其用加帽劑處理，所述加帽劑與所述組織上的官能團(tuán)反應(yīng)，和b)用非水溶液進(jìn)行脫水。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組織，其中所述官能團(tuán)是醛基團(tuán)。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組織，其中所述官能團(tuán)是羧酸基團(tuán)。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組織，所述加帽劑選自 胺，氨基酸， 氨基磺酸鹽， 親水性多官能聚合物， 疏水性多官能聚合物， α “ 二羰基， 酰胼類，N，N- 二琥珀酰亞胺基碳酸酯， 碳二亞胺，2-氯-1-甲基碘代吡啶(CMPI)，抗生素，細(xì)胞募集劑，血液相容劑，抗炎劑，抗增殖劑，免疫原性抑制劑，短鏈糖類，還原劑，和單環(huán)氧烷烴、二環(huán)氧烷烴或聚環(huán)氧烷烴。
17.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組織，其中所述加帽劑在下述物質(zhì)中被遞送a)水溶液，b) 有機(jī)溶劑，c)無水多元醇溶液；或它們的混合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組織，其包括作為完整瓣膜安裝和處理的預(yù)切割的心瓣膜 小葉。
19.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組織，其包括組織大片。
20.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組織，其中所述加帽的組織在甘油溶液中脫水。
21.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組織，其中所述加帽的組織在甘油/乙醇溶液中脫水。
22.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組織，其中所述脫水溶液含有水溶性蠟。
23.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組織，其中所述加帽劑可以與所述組織上的鈣、磷酸酯或 免疫原性因子結(jié)合位點(diǎn)反應(yīng)。
24.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組織，其中所述加帽劑防止來自自由基或電離輻射的氧化 損傷。
25.生物假體心瓣膜，包括已經(jīng)用加帽劑處理的生物假體植入組織， 其中，所述組織用甘油溶液脫水。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的生物假體心瓣膜，其中所述心瓣膜是經(jīng)皮心瓣膜、切頂心瓣膜、或經(jīng)骨動(dòng)脈心瓣膜
全文摘要
對(duì)植入物中使用的生物假體組織進(jìn)行處理或?qū)ρb配的生物假體心瓣膜進(jìn)行處理，以減少體內(nèi)鈣化。該方法包括應(yīng)用鈣化緩和劑例如加帽劑或抗氧化劑到組織，以特定地抑制組織中的氧化。同時(shí)，該方法可以用于抑制脫水組織中的氧化。加帽劑抑制組織中結(jié)合位點(diǎn)的形成，結(jié)合位點(diǎn)由于氧化而被暴露或生成并且另外在植入后將吸引鈣、磷酸酯、免疫原性因子、或其它鈣化前體。在一種方法中，在裝配生物假體心瓣膜中的組織小葉用醛加帽劑預(yù)處理，然后脫水和滅菌。
文檔編號(hào)A61L27/18GK101965205SQ200880126930
公開日2011年2月2日 申請(qǐng)日期2008年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月21日
發(fā)明者D·多布拉, G·A·懷特, J·A·戴維森, J·S·德芙 申請(qǐng)人:愛德華茲生命科學(xué)公司