專利名稱：用于在對象中增加對落花生耐受性的免疫治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于在對象中增加對落花生耐受性的新的免疫治療方法。具體來說， 本發(fā)明公開了使用皮膚貼片裝置使對象對落花生逐步脫敏。
背景技術(shù)：
花生過敏癥，在反應(yīng)的持久性和嚴(yán)重性方面，是最常見和嚴(yán)重的對食物的速發(fā)超 敏反應(yīng)之一。事實上，據(jù)估計，這種過敏癥參與了在所有年齡組中大多數(shù)致死和接近致死 的與食物相關(guān)的過敏性反應(yīng)。這種過敏癥的發(fā)病率在過去十年中已經(jīng)加倍，目前，它影響 0.6%到 1.2% 的總?cè)巳?Sicherer 等，2003)。這種過敏癥傾向于在生命的早期出現(xiàn)，只有20%的過敏兒童變得對花生耐受 (Skolnick等，2001)。致敏一般在胃腸道中發(fā)生，但是也可以作為由于吸入性暴露于花生或 交叉反應(yīng)性環(huán)境抗原例如花粉而引起的直接或交叉致敏的結(jié)果而發(fā)生。由花生刺激的過敏反應(yīng)是嚴(yán)格的IgE介導(dǎo)的I型超敏反應(yīng)。IgE-過敏原復(fù)合物引 起肥大細胞受體交聯(lián)，誘導(dǎo)了信號傳導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)，該級聯(lián)反應(yīng)終止于脫粒作用和各種不同 介導(dǎo)物的釋放，所述介導(dǎo)物引起花生超敏反應(yīng)的臨床癥狀。主要的花生過敏原是種子貯藏蛋白。盡管已報道了 9種花生過敏原，即Ara h 1 到 Ara h 9 (Burks 等，1992 ；Burks 等，1991 ；Rabjohn 等，1999 ；Koppelman 等，2005 ；Mittag 等，2004 ;Becker 等，2001 ；Lauer 等，2008)，但 Ara h UAra h 2 和 Ara h 3 被分類為主要 的花生過敏原，因為它們被超過50%的花生過敏患者普遍識別(Koppelman等，2001)。這種過敏癥的預(yù)防性治療由避免組成，這是非常困難的，因為花生在食品工業(yè)中 的使用非常廣泛，并且常常是隱蔽的。目前的藥物療法(抗組胺藥和皮質(zhì)類固醇)可用于 減輕過敏疾病的癥狀，但是不能防止過敏反應(yīng)。免疫治療是唯一可用的、能夠通過降低對過敏原的敏感性來改變過敏疾病的自然 過程的治療方法。對于免疫治療來說，給予一定劑量的過敏原，以便逐步地誘導(dǎo)以對抗原/ 過敏原的耐受性為特征的免疫應(yīng)答，也稱為脫敏作用。這種方法對于具有嚴(yán)重的IgE依賴 性過敏反應(yīng)的患者來說，是特別需要的。盡管免疫治療已經(jīng)在實踐中使用了 90多年，但其作用的準(zhǔn)確機制仍不清楚。在人 類中，它涉及(i)IgG、特別是IgG4的增加，這是一種阻斷性抗體，可以通過抑制炎性介導(dǎo)物 從肥大細胞和嗜堿性細胞的釋放來阻斷IgE介導(dǎo)的機制，(ii)調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)的增 加，導(dǎo)致Th2/Thl分布情況的更好的平衡，以及(iii)產(chǎn)生生產(chǎn)IL-10、也被稱為人類細胞 因子合成抑制因子(CSIF)的T細胞，該因子抵消了肥大細胞的炎性效應(yīng)，并促進IgG4的產(chǎn) 生。到目前為止，免疫療法可以通過皮下、舌下或鼻內(nèi)途徑給藥。皮下免疫療法是變態(tài)反應(yīng)學(xué)家最經(jīng)常使用的療法。然而，這種方法相當(dāng)昂貴，每次 注射需要專業(yè)醫(yī)師。皮下免疫治療的主要缺點是它的過敏性副作用。這些副作用可以是局 部的或系統(tǒng)性的。已經(jīng)證明，使用皮下途徑的落花生過敏免疫治療誘導(dǎo)了高比率的系統(tǒng)性 不良反應(yīng)(高達50% ) (Nelson等，1997和Oppenheimer等，1992)。系統(tǒng)性副反應(yīng)由無意中將過敏原注射到小皮下血管中，或過敏原擴散到皮下血管中所引起。過敏原可以被運輸 到其他器官例如肺或皮膚的遠處位點，它們在那里能夠激起哮喘或蕁麻疹。它們也可能引 起可以導(dǎo)致死亡的過敏性反應(yīng)。因此，具有高過敏性反應(yīng)風(fēng)險的過敏癥，諸如花生過敏癥不 能通過皮下途徑治療。舌下免疫治療已被WHO接受作為皮下途徑的有效替代方案，將被用于所有需要免 疫治療并且不接受過敏原的皮下途徑給藥的患者。但是，舌下免疫治療所需的過敏原劑量 高于皮下免疫治療，并且這種方法有時誘導(dǎo)一些局部不良效應(yīng)，例如口部瘙癢、咽喉刺激、 舌頭或咽喉腫脹。鼻內(nèi)免疫治療是皮下途徑的另一種可替選方案，已被證明對季節(jié)性鼻炎和哮喘的 治療有效(Hufnagl等，2008)。但是，這種途徑通常不被患者很好地耐受，大多數(shù)患者提前 中止了他們的治療(Pajno等，2005)。因此，對于安全、有效、患者耐受性好的用于落花生過敏癥治療的免疫治療，存在
著需求。發(fā)明簡述本發(fā)明提供了一種針對落花生過敏癥的免疫治療新方法。更具體來說，本發(fā)明第 一次顯示了落花生過敏癥的有效免疫治療可以通過表皮途徑得以實現(xiàn)。本發(fā)明提供了用于在對象中增加對落花生的耐受性的新的免疫治療方法，所述方 法包括利用皮膚貼片裝置，通過表皮途徑向所述對象反復(fù)地給藥一種或多種源自于落花生 的蛋白，所述皮膚貼片裝置含有背襯，所述背襯的外周適合于與皮膚形成氣密腔，其中背襯 在腔內(nèi)其朝向皮膚的側(cè)面上帶有所述一種或多種蛋白，其劑量在貼片裝置施加到皮膚之后 在所述對象中足以誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，所述一種或多種蛋白在貼片裝置施加到皮膚之后從背襯 去除，然后通過表皮途徑投送到對象，所述給藥在反復(fù)進行之后，導(dǎo)致對象中對落花生耐受 性的逐步增加。在第二方面，本發(fā)明涉及皮膚貼片裝置，所述裝置含有背襯，所述背襯的外周適合 于與皮膚形成氣密腔，其中背襯在腔內(nèi)其朝向皮膚的側(cè)面上帶有一種或多種源自于落花生 的蛋白，其劑量在貼片裝置施加到皮膚之后在對象中足以誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，所述一種或多種 源自于落花生的蛋白在貼片裝置施加到皮膚之后從背襯去除，然后通過表皮途徑投送到對象。另一方面，本發(fā)明還涉及皮膚貼片裝置(的使用)，所述裝置含有背襯，所述背襯 的外周適合于與皮膚形成氣密腔，其中背襯在腔內(nèi)其朝向皮膚的側(cè)面上帶有一種或多種源 自于落花生的蛋白，其劑量在貼片裝置施加到皮膚之后在對象中足以誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，所述 一種或多種源自于落花生的蛋白在貼片裝置施加到皮膚之后從背襯去除，然后通過表皮途 徑投送到對象，(用于制造)用于在對象中增加對落花生的耐受性(的組合物)。另一方面，本發(fā)明還涉及貼片試劑盒，所述試劑盒包含多個皮膚貼片裝置，每個所 述裝置包含背襯，所述背襯的外周適合于與皮膚形成氣密腔，其中背襯在腔內(nèi)其朝向皮膚 的側(cè)面上帶有一種或多種源自于落花生的蛋白，其劑量在貼片裝置施加到皮膚之后在對象 中足以誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，所述一種或多種源自于落花生的蛋白在貼片裝置施加到皮膚之后從 背襯去除，然后通過表皮途徑投送到對象。試劑盒的不同貼片可以包含相同或不同量的落 花生過敏原，從而使得有可能在本發(fā)明的免疫治療方法過程中維持或增加/降低過敏原的劑量。本發(fā)明可用于任何對象，特別是任何人類對象，包括兒童和成年人。優(yōu)選情況下， 對象對落花生過敏。附圖簡述Ml是顯示了致敏作用結(jié)束時(第43天)，小鼠血清中特異性IgE、IgGU IgG2a 水平的圖。Ml是顯示了由來自口服PPE敏化的小鼠的重新活化的脾細胞所分泌的細胞因子 的圖。從口服敏化的BALB/c小鼠分離脾細胞，將其用PPE離體重新活化60小時。通過酶 免疫測定法對上清液中的細胞因子進行定量。Sl是顯示了在口服激惹后從敏化和對照小鼠獲得的血漿樣品中組胺水平的圖。 組胺通過競爭性EIA測定。圖4是顯示了在腳墊中花牛蛋白單次激惹后24小時測量到的DTH響應(yīng)的圖，表示 成腳墊腫脹的平均增加量(SEM)。Init.:在注射PPE或PBS之前腳墊的測量。將PBS注射 到右腳墊中，PPE注射到另一個腳墊上。在注射后24小時測量每個腳墊的腫脹。Sl顯示了 PPE劑型的電泳圖樣(以變性和還原條件下)。圖6顯示的圖描沭了在通過表皮涂徑脫敏(EP)或未處理的(NT)對照小鼠和敏化 小鼠中，特異性IgE的濃度。結(jié)果表示成單位為μ g. ml—1的平均值+/-SD。圖7顯示的圖描沭了在通過表皮涂徑脫敏(EP)或未處理的(NT)對照小鼠和敏化 小鼠中，特異性IgG2a的濃度。結(jié)果表示成單位為μ g. ml—1的平均值+/-SD。圖8顯示的圖描述了脫敏組(EP)、未處理小鼠(NT)和對照(C)的IgGl/IgG2a比 率。顯示了脫敏后8周和16周的結(jié)果。圖9顯示的圖描述了口服激惹后，來自通過表皮途徑脫敏(EP)或未處理的(NT) 對照小鼠和敏化小鼠的血漿樣品中組胺的濃度。結(jié)果表示成單位為nM的平均值+/-SD。*p < 0. 05，**p < 0. 001，_p < 0. 001。MM顯示的圖描述了在用PPE劑型處理的(EP)或未處理的(NT)和對照小鼠中， 血清樣品中花生特異性IgA的濃度。敏化小鼠(WO)和脫敏后8周(W8)和16周(W16)的 結(jié)果表示成 450nm 處的光密度(OD)。*p < 0. 05，**p < 0. 001，***p < 0. 001。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及使用表皮給藥在對象中增加落花生耐受性的免疫治療方法。考慮到過 敏原尚未顯示出穿過皮膚進入血流，這種方法對于患者來說特別安全。因此，這種方法能夠 在免疫療法流程期間防止嚴(yán)重過敏的患者發(fā)生系統(tǒng)性或過敏性反應(yīng)的重大風(fēng)險。此外，本 發(fā)明人獲得的結(jié)果顯示，通過本發(fā)明的表皮途徑對落花生的脫敏作用，至少與使用其他給 藥途徑、特別是真皮內(nèi)途徑的脫敏作用同樣有效。具體來說，本發(fā)明顯示，通過本發(fā)明的落花生過敏原的皮膚施加所激起的特異性 免疫反應(yīng)，誘導(dǎo)了對象的免疫系統(tǒng)的改變，導(dǎo)致在對象中對落花生的耐受性的逐步增加。本發(fā)明的免疫治療方法涉及使用特殊的貼片裝置，通過表皮途徑向?qū)ο蠼o藥落花 生過敏原組合物，以引起耐受性。在本說明書中使用時，術(shù)語“表皮途徑”是指通過將過敏原施加到皮膚上，向?qū)ο?給藥這種過敏原。表皮途徑不需要使用針、注射器或任何其他穿孔或改變表皮表面層的完整性的手段。在足以允許過敏原穿透進入表皮的角質(zhì)層的條件下，使過敏原與皮膚的接觸 維持一段時間。這種擴散誘導(dǎo)朗格漢斯細胞的遷移和活化，從而促進了免疫反應(yīng)。術(shù)語“耐受性”在這里被定義為對象對特定過敏原、在本文中是落花生過敏原的免 疫反應(yīng)性的降低。在本說明書中使用的術(shù)語“落花生”或“花生”是指豆科植物(Fabaceae)中的物 種，例如花生屬(Arachis)0 花生(Peanuts)也被禾爾為 earthnuts、goobers、goober peas、 pindas、jack nuts、pinders、manila nuts 和 monkey nuts (這幾個詞的意思均為花生)。在本說明書中使用的術(shù)語“落花生過敏原”是指任何源自于落花生的、能夠激起過 敏反應(yīng)的蛋白或肽。這種過敏原可以選自天然或天生過敏原、修飾的天然過敏原、合成過敏 原、重組過敏原、類變應(yīng)原，及其混合物或組合物。優(yōu)選情況下，選定的過敏原能夠引起IgE 介導(dǎo)的速發(fā)類型的超敏反應(yīng)。術(shù)語“多肽”、“肽”和“蛋白”在本文中可以互換使用，是指氨 基酸殘基的聚合物。這些術(shù)語適用于其中一個或多個氨基酸殘基是修飾殘基或非天然存在 的殘基的氨基酸聚合物，例如相應(yīng)的天然存在的氨基酸的人造化學(xué)模擬物，以及天然存在 的氨基酸聚合物。 在本發(fā)明中，術(shù)語“源自于落花生的蛋白，，是指任何能夠從落花生獲得的蛋白，或 包含可以從落花生獲得的蛋白的一部分或序列的蛋白。在具體實施方案中，蛋白選自種子 貯存蛋白。優(yōu)選情況下，蛋白選自來自落花生(Arachis hypogaea)的Ara h 1、Ara h 2、 Ara h 3,Arah 4,Ara h 5,Ara h 6,Ara h 7,Ara h 8 禾口 Ara h 9。在最優(yōu)選實施方案中， 源自于落花生的蛋白至少包含Ara h UAra h 2或Ara h 3或它們的同工型。Ara h UAra h 2和Ara h 3的氨基酸序列對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。例如，Ara h 1蛋白、兩 個Ara h 2同工型和兩個Arah 3同工型的Genbank登記號，分別為AAL27476、AAM78596、 AAN77576、AAT39430和AAC63045。這些蛋白可以從落花生提取物獲得，或通過重組生物體 例如遺傳改造的細菌、酵母生產(chǎn)，或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何其他方法獲得。這些蛋 白可以組合或單獨使用。應(yīng)該理解，術(shù)語“源自于落花生的蛋白”也包括上述抗原的片段或 變體，例如含有表位的片段，或從落花生獲得、并隨后進行酶、化學(xué)、機械或熱改性的蛋白。在具體實施方案中，落花生過敏原組合物包含一種或多種源自于落花生的蛋白。在另一個實施方案中，落花生過敏原組合物包含一種或多種源自于落花生的蛋 白，所述蛋白選自Ara h UAra h 2和Ara h 3，任選地與源自于落花生的其他蛋白組合。在另一個實施方案中，落花生過敏原組合物包含落花生提取物作為源自于落花生 的蛋白源。落花生提取物是指從落花生獲得的任何制備物(裂解物，濾出液，勻漿液等)。可 以直接使用落花生提取物，或可以從該提取物中至少部分純化落花生過敏原。這種純化工 藝可以包括過濾、離心、沉淀或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何其他技術(shù)。優(yōu)選情況下，源自于 落花生并給藥于對象的蛋白是至少部分純化的。在一個實施方案中，落花生過敏原組合物采用液體形式，例如溶液或顆粒的分散 液。在這種情況下，通過過敏原從過敏原組合物的液相遷移到皮膚，以便允許過敏原透入表 皮的角質(zhì)層，來確保有效的表皮給藥。在具體實施方案中，過敏原從過敏原組合物的液相的 遷移，通過過敏原的擴散來確保，這種擴散通過在氣密腔內(nèi)形成冷凝物、例如作為排汗的結(jié) 果來進行。
在另一個實施方案中，落花生過敏原組合物采用例如通過冷凍干燥獲得的干燥形 式，特別是顆粒形式。事實上，本發(fā)明顯示，對落花生的有效耐受性，能夠使用固體(例如干 燥)形式的落花生過敏原制備物來獲得。使用顆粒形式的蛋白是有利的。事實上，這種顆 粒狀過敏原可以直接附著于裝置的背襯，從而避免了任何化學(xué)相互作用或任何可能干擾這 些蛋白的免疫原性的反應(yīng)。此外，顆粒的使用允許將物質(zhì)保存在適合的包裝中，使得不再需 要執(zhí)行任何臨時的制備。在這種情況下，保持在貼片背襯上的落花生過敏原的表皮給藥，可 以通過這些過敏原在氣密腔內(nèi)形成的冷凝物中的溶解，來確保。在每種實施方案中，氣密腔內(nèi)出現(xiàn)的冷凝物可以來自于冷凝的皮膚分泌的汗液。本文中使用的術(shù)語“排汗”、“出汗”或“發(fā)汗”是指由哺乳動物皮膚中的汗腺分泌的 流體的產(chǎn)生。這種流體主要包含水，但是也含有各種不同的溶解的礦物質(zhì)和微量元素。在 本發(fā)明中，由皮膚分泌的汗液蒸發(fā)并冷凝在氣密腔內(nèi)。在本說明書中，術(shù)語“冷凝”是指物質(zhì)的物理狀態(tài)從氣相變成液相，特別是指蒸發(fā) 的汗變成液相。在貼片裝置施加到皮膚之后在腔內(nèi)由排汗形成的冷凝物，引起或增強了過 敏原的去除和表皮投送。事實上，過敏原可以溶解在冷凝的汗液中包含的水中，然后通過表 皮途徑投送到對象。過敏原組合物還可以包含附加成分，例如佐劑。在實施方案中，本發(fā)明中使用的落花生過敏原不使用任何佐劑進行配制。事實上， 本發(fā)明顯示，可以不需要附加的佐劑通過表皮途徑實現(xiàn)落花生免疫療法。在另一個實施方案中，本發(fā)明中使用的落花生過敏原組合物包含佐劑或與佐劑一 起使用。在本發(fā)明的文本中，佐劑是指任何當(dāng)與特定抗原組合使用時，用于激活、加速、延長 或增強抗原特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)。可以與落花生過敏原組合使用的佐劑化合物包括無機 鹽，例如磷酸鈣、磷酸鋁和氫氧化鋁；免疫刺激性DNA或RNA，例如CpG寡核苷酸；蛋白，例如 抗體或Toll樣受體結(jié)合蛋白；皂角甙，例如QS21 ；細胞因子；胞壁酰二肽衍生物；LPS ；MPL 及衍生物，包括3D-MPL ；GM-CSF(粒細胞巨噬細胞集落刺激因子)；咪喹莫特；膠粒；完全或 不完全弗氏佐劑；Ribi' s佐劑或細菌毒素，例如霍亂毒素或腸毒素(LT)。在具體實施方 案中，落花生過敏原組合物與腸毒素一起配制。本發(fā)明的方法中使用的皮膚貼片裝置包含背襯，所述背襯的外周適合于與皮膚形 成氣密腔。該背襯在腔內(nèi)其朝向皮膚的側(cè)面上帶有用于誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的落花生過敏原組合 物。本說明書中使用的術(shù)語“氣密腔”，是指貼片的背襯不透水份，并且該背襯的外周 構(gòu)成了封閉阻擋層，從而限定了封閉空間。該腔的不透水性，對于通過所述腔內(nèi)水份的作 用，利用例如溶解或抽提使過敏原從背襯去除，并隨后投送到對象，是必需的。貼片的有效 性受到該液體相的產(chǎn)生的極大制約，其中過敏原處于溶液或懸液中，從而促進它通過孔。本說明書中使用的術(shù)語“水份”是指存在處于液體或蒸汽相的水或其他液體。優(yōu)選情況下，背襯的外周具有黏附性質(zhì)，形成了氣密接縫，與皮膚一起產(chǎn)生了氣密 腔。在具體實施方案中，落花生過敏原通過靜電和/或范德華力維持在背襯上。這種 實施方案特別適合于落花生過敏原是固體形式(例如顆粒)的情況，盡管當(dāng)過敏原是液體 形式時也可以間接使用該實施方案。
在本發(fā)明的文本中，術(shù)語“靜電力”通指任何涉及電荷的非共價力。術(shù)語范德華 力是指在背襯表面與固體過敏原之間產(chǎn)生的非共價力，可以有三種永久偶極力，誘導(dǎo)偶極 力，和倫敦-范德華力(London-Vander Waals forces)。靜電力和范德華力可以單獨或一 起起作用。就此而言，在優(yōu)選實施方案中，貼片裝置包含靜電背襯。本文中使用的表述“靜電 背襯”是指任何由能夠通過例如摩擦、加熱或電離而積累靜電荷和/或產(chǎn)生范德華力、并能 夠保存這種電荷的材料制成的背襯。靜電背襯典型地包括具有可以均勻或不均勻分散的空 間電荷的表面。在背襯表面的一個側(cè)面或另一個側(cè)面上出現(xiàn)的電荷，可以是正的或負的，取 決于構(gòu)成所述背襯的材料，以及用來產(chǎn)生電荷的方法。在所有情況下，在分布在背襯表面上 的正或負電荷，在導(dǎo)電或不導(dǎo)電材料上產(chǎn)生吸引力，由此使過敏原得以維持。顆粒也可以被 電離，由此在顆粒與背襯之間產(chǎn)生同樣類型的靜電吸引力。適合于提供靜電背襯的材料的例子是玻璃或聚合物，聚合物選自纖維素塑料(CA， CP)、聚乙烯(PE)、聚對苯二甲酸乙二酯(PET)、聚氯乙烯(PVCs)、聚丙烯、聚苯乙烯、聚碳酸 酯、聚丙烯酸化物、特別是聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)和含氟聚合物(例如PTFE)。上述名單 不是限制性的。背襯的背面可以覆蓋有可以在臨用前揭去的標(biāo)貼。該標(biāo)貼使得例如當(dāng)背襯是至少 部分半透明時，有可能將落花生過敏原儲存在暗處。表面與顆粒之間的力的強度，可以由水分存在所導(dǎo)致的水薄膜的出現(xiàn)而增加或降 低。一般來說，貼片在干燥處制造和保存。為了使活性成分得以保存，濕度應(yīng)該足夠低。為 了得到最大的黏附力，可以對含水率進行調(diào)節(jié)。正如上面討論的，當(dāng)過敏原采用干燥形式、例如顆粒形式時，靜電背襯的使用特別 有利。此外，顆粒尺寸可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員進行調(diào)整，以改進靜電和/或范德華力的效 率，將顆粒維持在支持物上。優(yōu)選情況下，顆粒尺寸在1到60微米范圍內(nèi)。在特定實施方案中，貼片包含聚合物或金屬或金屬涂層聚合物背襯，落花生過敏 原顆粒基本上通過范德華力維持在背襯上。優(yōu)選情況下，為了通過范德華力將顆粒維持在 支持物上，顆粒的平均尺寸小于大約60微米。在另一個實施方案中，落花生過敏原通過背襯上的黏附性涂層維持在背襯上。背 襯可以用黏附性材料完全覆蓋或僅僅部分覆蓋?？梢允褂貌煌拈]塞性背襯，例如用鋁涂 層的聚乙烯或PET薄膜，或帶有黏附層(丙烯酸類化合物、硅酮等)的PE、PVC或PET泡沫。顆粒形式的落花生過敏原組合物可以通過噴霧干燥工藝裝載到背襯上，例如在法 國專利申請No 0850406中描述的電噴霧工藝。電噴霧裝置使用高電壓將液體分散成細小 的氣溶膠。然后，將溶解在溶劑中的過敏原霧化在貼片背襯上，溶劑在那里蒸發(fā)后，留下了 顆粒形式的過敏原。根據(jù)所需的蒸發(fā)時間，溶劑可以是例如水或乙醇。其他溶劑可以由本 領(lǐng)域技術(shù)人員進行選擇。這種將物質(zhì)施加到貼片背襯上的工藝類型，允許產(chǎn)生納米尺寸和 單一尺寸的顆粒，顆粒在背襯上的規(guī)則均勻的分配。這種技術(shù)適合于任何類型的貼片，例如 具有背襯的貼片，其中背襯含有絕緣聚合物、摻雜聚合物或用導(dǎo)電層重新覆蓋的聚合物。優(yōu) 選情況下，背襯包含導(dǎo)電材料。在另一個實施方案中，背襯的外周覆蓋有干燥的親水性聚合物，所述親水性聚合 物能夠通過與潮濕的皮膚接觸形成黏附性水凝膠薄膜(如同在法國專利申請No 0757970中描述的)。在該實施方案中，在施加貼片之前，皮膚必須被潤濕。當(dāng)水凝膠與潮濕的皮膚 接觸時，聚合物顆粒吸收液體并變黏，由此當(dāng)貼片施加到皮膚上時產(chǎn)生了氣密腔。這種水凝 膠的例子包括聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸鈉、甲基乙烯基醚與馬來酸酐的共聚物。在另一個具體實施方案中，液體落花生過敏原組合物維持在吸附性材料貯存器中 的貼片支持物上。組合物可以存在于過敏原溶液或過敏原分散液中，例如甘油中。吸附性 材料可以由例如醋酸纖維素制成。依賴于組成材料，背襯可以是剛性或柔性的，可以是親水性或不是親水性的，可以 是半透明或不是半透明的。在玻璃的情況下，可以通過向玻璃黏合一片塑料，將支持物制造 成抗裂的。在一個實施方案中，貼片的背襯含有透明區(qū)域，允許不必除去貼片就直接觀察和 控制炎性反應(yīng)。適合的透明材料包括聚乙烯薄膜、聚酯(聚對苯二甲酸乙二酯)薄膜、聚碳 酸酯和每種透明或半透明的生物相容薄膜或材料。在特定實施方案中，背襯帶有過敏原的部分不直接與皮膚接觸。在這種實施方案 中，由背襯、背襯的外周和皮膚所界定的腔的高度，在0. Imm到Imm的范圍內(nèi)。典型情況下，本發(fā)明的方法包括如上所公開的向?qū)ο蠓磸?fù)給藥一種或多種落花生 過敏原，導(dǎo)致對象中耐受性的逐步增加。過敏原的具體劑量以及施用數(shù)量和接觸時間，可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)對象、 過敏原制備物的性質(zhì)、使用的貼片裝置的類型等進行調(diào)整?！銇碚f，方法包括在一周到幾年之間的時間長度內(nèi)，施加至少兩個、優(yōu)選至少3、 5、10或15個如上公開的貼片裝置。治療可以在任何時間停止，例如一旦已建立有效的耐受 性后。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法包括在1個月到幾年的時間長度內(nèi)，每天反復(fù) 施加1到4張貼片，每周至少一次。在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的方法包括在1個月到幾年 的時間長度內(nèi)，每天施加1張貼片，每天使用或每周至少一次。對于每次施用來說，貼片與 皮膚的接觸時間長度在1到24小時的范圍內(nèi)，優(yōu)選為大約8小時。每張貼片上落花生過敏原的量，典型地在0. 1到1000 μ g/cm2貼片表面的范圍內(nèi)， 優(yōu)選在20到500 μ g/cm2貼片表面的范圍內(nèi)，更優(yōu)選在20到200 μ g/cm2貼片表面的范圍 內(nèi)。貼片表面積在Icm2到IOcm2的范圍內(nèi)，優(yōu)選在Icm2到5cm2的范圍內(nèi)。對于施用來說，貼片裝置可以不需任何預(yù)處理直接施加到皮膚上，優(yōu)選在身體的 無毛發(fā)部位上。可替選地，在施加裝置之前，可以在與貼片裝置接觸的位點處對皮膚進行處 理，以破壞角質(zhì)層、除去毛發(fā)或僅僅是引起皮膚的水化。為了有效地增加對象對落花生的耐 受性，落花生過敏原優(yōu)選以足以在對象中誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的劑量給藥。這種免疫反應(yīng)可以包括引起涉及局部血管系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的一系列級聯(lián)生物化 學(xué)事件的炎性反應(yīng)。炎性反應(yīng)是中度的紅斑的形式(炎性反應(yīng)的第一種臨床要素)，或者是 還表明出現(xiàn)局部水腫的丘疹的形式(炎性反應(yīng)的另一種成分)。通過表皮途徑施加落花生 過敏原所誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)，能夠用裸眼觀察到或不能用裸眼觀察到。正如在實驗部分中公開的，本發(fā)明的方法引起特異性IgE水平的降低，以及某些 特異性IgG水平、特別是IgG4水平的升高，導(dǎo)致對落花生耐受性的逐步增加。本文中術(shù)語 “特異性Ig”是指特異性針對至少一種對象對其過敏的過敏原的免疫球蛋白。在優(yōu)選實施
10方案中，這些免疫球蛋白特異性針對至少一種源自于落花生的蛋白，尤其是Ara hi、Ara h 2或Ara h 3或其同工型。本發(fā)明的方法還引起從優(yōu)勢的Th2分布情況向更加平衡的Thl/Th2分布情況的 免疫偏離。換句話說，本發(fā)明的方法導(dǎo)致針對給藥蛋白的Thl應(yīng)答的升高。Thl和Th2細 胞是兩種類型的CD4+輔助T細胞，區(qū)別在于它們的細胞因子產(chǎn)生的模式(pattern)。Thl 細胞產(chǎn)生IFN-γ、IL-2和TNF-β，參與細胞介導(dǎo)的、有益于對抗細胞內(nèi)病原體和惡性細胞 的宿主防御的免疫應(yīng)答，但是對介導(dǎo)自身免疫有害。Th2細胞分泌IL-4、IL-5、IL-9、IL-10 和IL-13，增加了抗體應(yīng)答、包括IgE產(chǎn)生，并針對寄生性侵襲進行保護，但是也能夠引起過 敏癥和哮喘。Thl和Th2應(yīng)答是互相拮抗的，使得它們一般保持平衡狀態(tài)存在，并彼此交叉 調(diào)控。在過敏對象中，Thl/Th2的平衡改變，Th2分布情況占優(yōu)勢。從優(yōu)勢的Th2分布情況 向更加平衡的Thl/Th2分布情況的免疫偏離，意味著從過敏狀態(tài)向耐受狀態(tài)的偏離。這種 由Treg細胞的增加所介導(dǎo)的偏離，可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法，例如IgGl/ IgG4比率的降低或分析細胞因子產(chǎn)生進行評估。在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的方法沒有系統(tǒng)性效應(yīng)。只有在對象皮膚上表皮給藥 位點處或緊靠該位點的周圍，可能觀察到炎性反應(yīng)。這種炎性反應(yīng)可以通過放置在背襯上 的過敏原的劑量來調(diào)節(jié)。本發(fā)明還提供了如上所述的皮膚貼片裝置，所述裝置含有背襯，所述背襯的外周 適合于與皮膚形成氣密腔，其中背襯在腔內(nèi)其朝向皮膚的側(cè)面上帶有一種或多種在本說明 書中描述的落花生過敏原，其劑量在貼片裝置施加到皮膚之后足以在對象的皮膚中誘導(dǎo)免 疫反應(yīng)，所述一種或多種過敏原在貼片裝置施加到皮膚之后從背襯去除，然后通過表皮途 徑投送到對象。本發(fā)明還涉及使用如上所述的皮膚貼片裝置制造組合物，用于在對落花生過敏的 對象中增加對落花生的耐受性。本發(fā)明還涉及使用如上所述的皮膚貼片裝置制造組合物，用于在對落花生過敏的 對象中增加針對落花生的Thl類型的免疫應(yīng)答。本發(fā)明還涉及貼片試劑盒，包含多個如上所述的貼片，試劑盒的貼片含有相同或 不同量的落花生過敏原。此外，在試劑盒的貼片上使用的過敏原組合物可以是相同或不同 的。例如，可以使用不同的落花生蛋白，帶有或不帶有佐劑。優(yōu)選情況下，在脫敏治療期間 使用同樣的組合物。出于說明而不是限制的目的，提供了下列實施例。 實施例方法動物和蛋白提取物使購自Charles River Laboratories (法國)的四周齡雌性BALB/c小鼠對花生蛋 白敏化。使用BALB/c小鼠作為對花生蛋白敏化的鼠類模型，描述在Adel-Patient等，2005 中。該模型將再現(xiàn)IgE精細特異性以及在過敏人類中激惹后觀察到的癥狀。所有實驗按照 歐洲共同體關(guān)于動物護理的法規(guī)進行?；ㄉ崛∥锿ㄟ^將花生粉(AllergonJi^W)在含有IM NaCl WpH 7. 4的20mM磷酸鹽緩沖液中，在室溫混合4小時來制備。離心后，保留上清液作為花生蛋白提取物(PPE)。 然后將PPE透析，通過BCA測定方法對蛋白含量進行定量，并通過SDS PAGE進行分析。內(nèi) 毒素水平低于0. 06ng/ml (E-toxate試劑盒，Sigma，法國)。敏化流稈在第1、6、12、18、24、30天，利用胃內(nèi)管飼法使8只BALB/c小鼠接受混合有IOyg 霍亂毒素(CT)的Img攪勻的PPE。在第0、18和43天從眶后靜脈叢收集血清，離心，將樣品 儲存在-20°C直到進一步測定。未接觸抗原的小鼠在同一天取血(η = 8)。敏化通過上面 定義的生物學(xué)參數(shù)進行監(jiān)測。脫敏流稈脫敏通過表皮(EP)途徑，在8到16周時間內(nèi)每周進行一次，方法如下將小鼠使用開他敏和甲苯噻嗪腹膜內(nèi)麻醉，使用電動剪毛機和脫毛霜剃毛。第二 天，將皮膚貼片裝置放置在小鼠背上，用繃帶維持48小時，所述皮膚貼片裝置具有背襯，背 襯帶有100 μ g干燥形式的ΡΡΕ，所述背襯的外周適合于與小鼠的皮膚形成氣密腔。過敏原激惹和組胺釋放的定量將小鼠禁食過夜，使用胃內(nèi)管飼法，將每只小鼠用IOmg PPE分成兩劑，間隔30分 鐘進行激惹。未接觸抗原的小鼠以同樣方式激惹。為了確定血漿組胺水平，在第二次胃內(nèi) 管飼法激惹后30分鐘收集血液，儲存在-20°C直到進行分析。組胺水平使用酶免疫測定試 劑盒(SPI-BI0，法國)，按照制造商的描述進行測定。特異性I迚、IrGU IgG2a的定量在免疫療法之前和期間，從眶后靜脈叢收集血樣，將血漿儲存在_30°C直到進一步 分析。使用ICH指導(dǎo)原則驗證的定量ELISA，被用于特異性IgE、IgGl和IgG2a。簡單來 說，將微量滴定板用濃度為10 μ g/ml的PPE act包被。將100 μ 1每種血清的連續(xù)稀釋液 分發(fā)到每個孔中，在4°C溫育24小時。使用堿性磷酸酶標(biāo)記的抗小鼠IgGl或IgG2a抗體 (Serotec，英格蘭)作為示蹤劑。反應(yīng)物(pNPP) (Sigma，法國)用作酶的底物。特異性IgE、 IgGl和IgG2a通過與濃度響應(yīng)曲線進行比較來定量，該濃度響應(yīng)曲線使用在相同條件下進 行的總IgE、IgGl或IgG2a分析測定來獲得，該測定使用了用抗小鼠IgE、IgG或IgG2a抗體 (Serotec，英格蘭)代替花生蛋白包被的固相，所述固相與示蹤劑互補。小鼠免疫球蛋白標(biāo) 準(zhǔn)品從Serotec獲得。I始測定方法測定了血清樣品中的特異性IgA。將在含有0. 1% BSA的PBS緩沖液中稀釋的血 清(1/50)，在用IOyg. Hir1PPE包被的板上溫育。特異性IgA如上所述使用堿性磷酸酶標(biāo) 記和檢測的山羊抗小鼠IgA抗體(Southern Biotechnology Associated，美國)進行檢測。 結(jié)果報告為405nm處的吸光度單位。細胞因子產(chǎn)生在最后一次取血樣后，通過脊椎錯斷處死小鼠，在無菌條件下收獲脾臟。細胞培養(yǎng) 在PPE (2. 5-250 μ g. ml-1)、PBS (陰性對照)或伴刀豆球蛋白A(1 μ g. ml—1，陽性對照)存在下 進行。IL-4、IL-5、IL-10、IFNy 和TGF0 使用 CytoSetTM試劑盒(BioSource International Europe,比利時)，按照制造商的說明書進行測定。
遲發(fā)型超敏應(yīng)答(DTH)為了引發(fā)DTH應(yīng)答，在最后一次口服免疫接種后，通過將含有100 μ g花生蛋白的 PBS注射到后腳墊中，對小鼠進行激惹。在另一個腳墊中注入PBS。在激惹后24小時，使用 千分尺測量兩個腳墊的凈腫脹，并彼此進行比較。統(tǒng)計分析使用Graph Pad軟件(San Diego，美國)進行統(tǒng)計分析。當(dāng)比較處理的小鼠與對 照時，使用方差分析(ANOVA)和Durmett’ s檢驗來分析數(shù)據(jù)，當(dāng)對所有組進行相互比較時， 使用ANOVA和Tukey ’ s檢驗來分析數(shù)據(jù)。MM初步標(biāo)志了解小鼠和人類中的免疫系統(tǒng)，以及對它們的機制例如Thl和Th2應(yīng)答的相同性 和差異的研究，仍在進行之中。為了對被開發(fā)用作表皮免疫療法概念的證據(jù)的模型進行評 估，提供了關(guān)于人類和小鼠中主要過敏性生物標(biāo)志物的一些要素以及它們的解釋，特別是 關(guān)于Thl/Th2平衡。fl巴大細胞的脫粒作用在人類中,IgE是唯一直接觸發(fā)肥大細胞脫粒作用并隨后 表現(xiàn)出過敏性反應(yīng)的免疫球蛋白同種型，而在小鼠中，肥大細胞的脫粒作用由IgGl與IgE 一起觸發(fā)。IgG抗體的產(chǎn)牛在人類中，IgG抗體、主要是IgG4亞型的產(chǎn)牛，能夠拮抗和“阻斷” 由IgE識別抗原所引起的過敏性炎性級聯(lián)反應(yīng)。在小鼠中，沒有描述過等價的抗體，從Th2 向Thl分布情況的轉(zhuǎn)換由IgG2a抗體的增加構(gòu)成。在人類中，在Th2細胞中IgE和IgG4的產(chǎn)生受到刺激，而在Thl細胞中IgGl和 IgG3的產(chǎn)生受到刺激。在小鼠中，在Th2細胞中IgE和IgGl的產(chǎn)生受到刺激，而在Thl細胞中IgG2a和 IgG3的產(chǎn)生受到刺激。歸納來說，在鼠類模型中，免疫療法的效能主要通過特異性IgG2a的增加來評估。1.敏化的驗證L 1敏化期間的特異性I迚、IrGU IgG2a在通過管飼法給藥PPE后，分析了在BALB/c小鼠中誘導(dǎo)的PPE特異性抗體。如圖 1中所示，特異性IgE和IgGl的產(chǎn)生顯示了小鼠中的花生敏化。也產(chǎn)生了 IgG2a，但是與特 異性IgGl相比程度較低。在未接觸抗原的小鼠中不能檢測到特異性抗體。1. 2脾細胞體外重新活化后分泌的細胞因子來自用CT加上PPE敏化的小鼠的脾細胞，分泌了大量過敏原特異性IL-4和IL_5， 以及少量IL-10、IFNy和TGFi3 (圖2)。在對照小鼠中沒有發(fā)現(xiàn)細胞因子。這些結(jié)果證明， 在通過管飼法接受花生蛋白的BALB/c小鼠中誘導(dǎo)了 PPE特異性Th2應(yīng)答。1.3 口服激惹后的組胺水平因為組胺水平升高反映了肥大細胞的脫粒作用，是過敏性反應(yīng)的主要介導(dǎo)物之 一，因此測定了口服激惹后血漿中的組胺。組胺只在來自敏化小鼠的血漿樣品中可以檢測 到(圖3)。1. 4遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)
13
為了完成以前顯示了小鼠對花生蛋白的敏化的結(jié)果，研究了 DTH應(yīng)答。在敏化結(jié) 束時進行了腳墊激惹，證明了只有敏化小鼠發(fā)生了腫脹(圖4)。在用PBS處理的腳墊中沒 有發(fā)現(xiàn)DTH應(yīng)答。2.花牛免疫療法2. 1用于免疫療法的劑型通過SDS-PAGE對用于免疫療法的制劑的蛋白含量進行了表征(圖5)。2. 2免瘡療法期間的特異件IgE、IgGU IgG2aIrE和IgGj 通過特異性IgE和IgGl的產(chǎn)生對花生敏化進行了具體表征。在免 疫療法期間，監(jiān)控了特異性抗體的演變。如圖6中所示，在8周和16周的脫敏期間，特異性 IgE的產(chǎn)生穩(wěn)定。特異性IgE的降低是長期的過程，只有在幾個月后才能觀察到。此外，在 免疫療法期間，沒有觀察到特異性IgGl的改變(數(shù)據(jù)未顯示)。lRG2a 在8周和16周的脫敏之后，對于處理過的小鼠來說，特異性IgG2a顯著增 加(圖7)。為了驗證從優(yōu)勢的Th2分布情況向平衡的Th2/Thl分布情況的免疫偏離，對于每 個組評估了 IgGl/IgG2a比率EP脫敏，NT和對照(圖8)。只有處理過的小鼠的IgGl/IgG2a 比率降低，顯示出Thl分布情況的加大，以便獲得更平衡的Th2/Thl分布情況。2. 3 組胺組胺是過敏性反應(yīng)的主要介導(dǎo)物之一。作為肥大細胞脫粒作用的標(biāo)志物，測定了 口服激惹后30分鐘收集的血漿樣品中的組胺。在16周的脫敏后，對每組小鼠(處理過或 沒處理)的組胺釋放進行了定量(圖9)。用PPE表皮處理的小鼠顯示出明顯更低的組胺釋 放。該結(jié)果證實了小鼠過敏性狀態(tài)的改善。2. 4免疫療法期間的特異性IgA在8周的脫敏后，進行了血清樣品的特異性IgA滴定(

圖10)。在8周的脫敏后， 在使用PPE表皮途徑處理的小鼠中特異性IgA顯著增加。在未處理小鼠中沒有觀察到變化。 在對照小鼠中不能檢測到特異性IgA。據(jù)描述，在免疫療法期間，特異性IgA與IgG4具有類似的作用。其免疫調(diào)節(jié)效應(yīng) 可以導(dǎo)致IL-10的產(chǎn)生和TGF β表達(Francis等，2008)。結(jié)論表皮途徑顯示出是對花生致敏小鼠進行脫敏的有效的、原創(chuàng)的方式。表皮脫敏引起從優(yōu)勢的Th2分布情況向重新平衡的Th2/Thl分布情況的免疫偏 離，以及特異性IgA的增加。作為過敏原性(肥大細胞的脫粒作用)的標(biāo)志物，組胺的釋放 在通過表皮途徑處理的小鼠中降低了。參考文獻Adel-Patient 等，Allergy，2005，60 (5) :658_64Becker 等，Int Arch Allergy Immunol, 2001,124 100-2Burks 等，J Allergy Clin Immunol, 1992,90 962~9Burks 等，J Allergy Clin Immunol, 1991,88 172-9Chatel 等，Int Arch Allergy Immunol, 2003 ；131(1) :14_8Francis 等，J Allergy Clin Immunol, 2008,121 (5) :1120_1125
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一種用于在對象中增加對落花生的耐受性的免疫治療方法，所述方法包括利用皮膚貼片裝置，通過表皮途徑向所述對象反復(fù)地給藥一種或多種源自于落花生的蛋白，所述皮膚貼片裝置含有背襯，所述背襯的外周適合于與皮膚形成氣密腔，其中背襯在腔內(nèi)其朝向皮膚的側(cè)面上帶有所述一種或多種蛋白，所述一種或多種蛋白的劑量在貼片裝置施加到皮膚之后在所述對象中足以誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，所述一種或多種蛋白在貼片裝置施加到皮膚之后從背襯去除，然后通過表皮途徑投送到對象，所述給藥在反復(fù)進行之后，導(dǎo)致對象對落花生耐受性的逐步增加。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種蛋白選自ARAhl、ARAh2和ARAh3，任選地與 源自于落花生的其他蛋白組合。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述一種或多種蛋白采用落花生的至少部分純化的提 取物的形式給藥。
4.權(quán)利要求1到3任一項的方法，其中所述一種或多種蛋白采用干燥形式。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述一種或多種蛋白采用顆粒形式，并且不使用黏合劑，利 用靜電和/或范德華力附著到背襯上。
6.權(quán)利要求4的方法，其中所述一種或多種蛋白采用顆粒形式，并且利用背襯上的黏 附性涂層附著到背襯上。
7.權(quán)利要求1到5任一項的方法，其中所述一種或多種蛋白利用噴霧干燥方法裝載到 背襯上。
8.權(quán)利要求1到3任一項的方法，其中所述一種或多種蛋白溶解或分散在液體中。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述采用液體形式的一種或多種蛋白維持在吸附性材料貯 存器中的背襯上。
10.權(quán)利要求1到9任一項的方法，其中在貼片裝置施加到皮膚后，在腔內(nèi)形成了冷凝 物，這引起或增強了蛋白的去除和表皮投送。
11.權(quán)利要求10的方法，其中冷凝物作為排汗的結(jié)果而形成。
12.權(quán)利要求1到11任一項的方法，其中所述一種或多種蛋白不用任何佐劑進行配制。
13.權(quán)利要求1到11任一項的方法，其中所述一種或多種蛋白用一種或多種佐劑進行 配制。
14.權(quán)利要求1到13任一項的方法，其中誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)是可見的炎性反應(yīng)，并且其中 背襯優(yōu)選包含允許對炎性反應(yīng)進行觀察的透明區(qū)。
15.權(quán)利要求1到14任一項的方法，其中背襯的外周具有黏附性質(zhì)。
16.權(quán)利要求1到15任一項的方法，其中背襯的外周在潮濕皮膚上具有黏附性質(zhì)。
17.權(quán)利要求1到16任一項的方法，其中包括在1個月到幾年的時期內(nèi)，反復(fù)地施加每 天至少1張貼片，每周至少一次。
18.權(quán)利要求1到17任一項的方法，所述方法引起特異性IgG水平的增加。
19.權(quán)利要求18的方法，所述方法引起特異性IgG4水平的增加。
20.權(quán)利要求1到19任一項的方法，所述方法引起對給藥蛋白的Thl應(yīng)答的升高。
21.權(quán)利要求1到20任一項的方法，所述方法引起從優(yōu)勢的Th2分布情況向更加平衡 的Thl/Th2分布情況的免疫偏離。
22.—種皮膚貼片裝置，所述裝置含有背襯，所述背襯的外周適合于與皮膚形成氣密腔，其中背襯在腔內(nèi)其朝向皮膚的側(cè)面上帶有一種或多種源自于落花生的蛋白，所述蛋白 的劑量在貼片裝置施加到皮膚之后足以在對象中誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，所述一種或多種源自于落 花生的蛋白在貼片裝置施加到皮膚之后從背襯去除，然后通過表皮途徑投送到對象。
23.權(quán)利要求22的裝置在制造增加對象對落花生的耐受性的組合物中的應(yīng)用。
24.一種試劑盒，包含多個權(quán)利要求22的皮膚貼片裝置，每個貼片包含相同量的落花 生過敏原。
全文摘要
本發(fā)明描述了一種用于使對象對落花生逐步脫敏的新方法。更具體來說，本發(fā)明涉及使用表皮給藥，在過敏對象中增加對落花生耐受性的免疫治療方法。本發(fā)明還涉及使用皮膚貼片裝置使對象對落花生逐步脫敏。
文檔編號A61K9/70GK101951952SQ200880119074
公開日2011年1月19日 申請日期2008年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月3日
發(fā)明者克里斯托弗·杜邦, 皮埃爾-亨利·本哈穆, 貝特朗·杜邦, 露西·蒙杜雷特 申請人:Dbv技術(shù)公司