專利名稱：作為皮層兒茶酚胺能神經(jīng)傳遞調(diào)節(jié)劑的新型二取代的苯基吡咯烷的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含本發(fā)明化合物的藥物組合物，其在治療CNS障礙中的用途。有機(jī)和無(wú)機(jī)酸均可以用來(lái)形成本發(fā)明化合物無(wú)毒的藥學(xué)可接受的酸加成鹽。合適的本發(fā)明化合物的酸加成鹽包括與藥學(xué)可接受的鹽形成的那些，諸如如上所提到的。包含本發(fā)明化合物的藥物組合物還可包括用于促進(jìn)藥物制劑生產(chǎn)或制劑給藥的物質(zhì)。這些物質(zhì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，且例如可以是藥學(xué)可接受的佐劑、載體和防腐劑。 在臨床實(shí)踐中，根據(jù)本發(fā)明的化合物通常以藥物制劑形式通過口服、直腸、鼻或注射給藥，所述藥學(xué)制劑包括為游離堿或藥學(xué)可接受的無(wú)毒酸加成鹽(諸如，鹽酸鹽、乙酸鹽或氨基磺酸鹽)的活性成分，與藥學(xué)可接受的載體相關(guān)。所述載體可以為固體制劑、半固體制劑或液體制劑。通常，所述活性物質(zhì)將組成制劑重量的O. 1 99%，更特別地為打算用于注射的制劑重量的0. 5 20%和適合口服給藥的制劑重量的0. 2 50%。
為了制備用于口服施用的劑量單位形式的含有本發(fā)明化合物的藥物制劑，所選的化合物可以與固體賦形劑(例如，乳糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉諸如馬鈴薯淀粉、玉米淀粉或支鏈淀粉，纖維素衍生物、粘結(jié)劑諸如明膠或聚乙烯吡咯烷，和潤(rùn)滑劑諸如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、聚乙二醇、蠟、石蠟等)混合，然后壓制成片劑。如果需要包衣片劑，所述核(如上所述制備)可以用濃縮的糖溶液包衣，所述糖溶液可含有例如阿拉伯樹膠、明膠、滑石、二氧化鈦等?；蛘撸銎瑒┛梢杂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的聚合物包衣，所述聚合物溶于易揮發(fā)的有機(jī)溶劑或有機(jī)溶劑的混合物中?？梢詫⑷玖霞尤氲竭@些包衣中以易于區(qū)別含有不同活性物質(zhì)或含有不同量活性化合物的片劑。 為了制備軟明膠膠囊，可以將所述活性物質(zhì)與例如植物油或聚乙二醇混合。硬明
膠膠囊可以含有活性物質(zhì)的顆粒，使用所提到的用于片劑的賦形劑例如，乳糖、蔗糖、山梨
糖醇、甘露醇、淀粉(例如，馬鈴薯淀粉、玉米淀粉或支鏈淀粉)，纖維素衍生物或明膠。還可
以將液體或半固體藥物填充到硬明膠膠囊中。 適合于口服給藥的片劑和膠囊制劑的實(shí)例如下給出 片劑I mg/片 化合物 100 乳糖Ph. Eur 182. 75 交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 12.0 玉米淀粉糊(5% w/v糊) 2. 25 硬脂酸鎂 3. 0 片劑II mg/片 化合物 50 乳糖Ph. Eur 223. 75 交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 6.0 玉米淀粉 15.0 聚乙烯吡咯烷酮(5 % w/v糊) 2. 25 硬脂酸鎂 3. 0 片劑III mg/片 化合物 1. 0 乳糖Ph. Eur 93. 25 交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 4.0 玉米淀粉糊(5% w/v糊) 0. 75 硬脂酸鎂 1. 0 膠囊 mg/膠囊 化合物 10 乳糖Ph. Eur 488. 5 鎂 1. 5 直腸施用的劑量單位可以是溶液或懸浮劑或可以制成包含活性物質(zhì)與中性脂肪堿混合的栓劑形式，或者包括活性物質(zhì)與植物油或石蠟油混合的明膠直腸膠囊?？诜┯玫囊后w制劑可以是糖漿或懸浮液的形式，例如含有約0. 2%至約20wt^的本文所述活性物質(zhì)的溶液，余量為糖和乙醇、水、甘油和丙二醇的混合物。任選地，所述液體制劑可以含有著色劑、調(diào)味劑、糖精和作為增稠劑的羧甲基纖維素或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他賦形劑。
通過注射用于腸胃外施用的溶液可制成活性物質(zhì)的水溶性藥學(xué)可接受的鹽的水溶液，優(yōu)選濃度為0. 5wt^至約10wt%。這些溶液還可以含有穩(wěn)定劑和/或緩沖劑，且可以方便地以各種劑量單位安瓿提供。對(duì)待治療患者的所述用途和給藥對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見的。 對(duì)于鼻內(nèi)給藥或吸入給藥，本發(fā)明的化合物可以以溶液、干粉或懸浮劑形式遞送。給藥可以經(jīng)由由患者擠壓或抽吸的泵噴霧容器或通過來(lái)自加壓的容器或噴霧器的氣溶膠噴霧呈遞進(jìn)行，使用合適的推進(jìn)劑，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氧化碳或其他合適氣體。還可以經(jīng)由干粉吸入器以與載體物質(zhì)(例如，糖類)結(jié)合的細(xì)分散粉末或微滴施用本發(fā)明化合物。所述吸入劑、泵噴霧或氣溶膠噴霧可以單一劑量或多劑量。所述劑量可以通過遞送標(biāo)準(zhǔn)量活性物質(zhì)的閥來(lái)控制。 還可以以受控釋放制劑施用本發(fā)明的化合物。以所需速率釋放所述化合物以在所需的一段時(shí)間內(nèi)維持恒定的藥學(xué)活性。所述劑量形式在預(yù)定的一段時(shí)間內(nèi)給身體提供藥物，因此在治療范圍內(nèi)維持藥物水平的時(shí)間比常規(guī)的非受控制劑長(zhǎng)。所述化合物還可以制成其中活性化合物的釋放被靶定的受控釋放制劑。例如，所述化合物的釋放可通過制劑的pH敏感性而被局限于消化系統(tǒng)的特定區(qū)域。所述制劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。
可在最新片反的Remington' s Pharmaceutical Sciences (MaackPublishing Co.，Easton， PA)中找到關(guān)于配制和給藥技術(shù)的進(jìn)一步細(xì)節(jié)。 根據(jù)所述障礙和待治療的患者以及施用途徑，可以以各種劑量施用所述組合物。所述劑量還取決于吸收能力與施用頻率和途徑的關(guān)系。可以每天施用所述劑量一次，兩次或三次或三次以上。可以以0. 01mg-500mg/kg體重/天的劑量給受試者施用本發(fā)明化合物，雖然根據(jù)待治療的受試者的體重、性別和病癥、待治療的疾病狀態(tài)和所選的具體給藥途徑進(jìn)行變化是必須的。然而，為了治療疾病，在人中最理想使用的是0. lmg-10mg/kg體重/天的范圍內(nèi)的劑量水平(單一劑量或分開劑量)?；蛘?，所述劑量水平使得獲得O. lnM至10iiM化合物的血清濃度。 在下面的實(shí)施例中進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，其無(wú)論以任何方式都不旨在限制本發(fā)
明的范圍。 實(shí)施例1 : 3- (3， 4- 二氯苯基)吡咯烷 在50psi用氫處理3-(3，4-二氯苯基)-2，5-二氫-lH-吡咯(1. 0g， 4. 67,1)和氧化鉑(0. lg)在甲醇(20ml)中的混合物15h。將所述混合物通過硅藻土墊過濾，并且蒸發(fā)濾液。加入碳酸鈉水溶液(腦，50ml)用乙酸乙酯(3x30ml)萃取水相。干燥(脇04)合并的有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)。通過制備性HPLC然后在硅膠上通過快速色譜純化得到標(biāo)題化合物(0. 2g)。將該胺轉(zhuǎn)化成鹽酸鹽并從甲醇/乙醚重結(jié)晶M. p. 136-137°C . MS m/z (相對(duì)強(qiáng)度，70eV) 217 (M+， 63) ， 215 (M+， bp) ， 172 (18) ， 151 (37) ， 115 (60)。
實(shí)施例2 :
3- (2， 4- 二氟苯基)吡咯烷 將l-芐基-3-(2，4-二氟苯基)-3-氟吡咯烷(0. 80g， 2. 75mmo1)、碳載鈀(0. 08g)和甲酸銨(ammonium formiate) (1. 73g，27. 5mmo1)于甲醇(20ml)的混合物回流20分鐘。將
所述混合物通過硅藻土墊過濾，并且蒸發(fā)濾液。加入碳酸鈉水溶液(10%， 50ml)且水相用
乙酸乙酯(2x50ml)萃取。干燥有機(jī)相并蒸發(fā)得到標(biāo)題化合物(0. 37g)。將該胺轉(zhuǎn)化成草酸
鹽并從甲醇/乙醚重結(jié)晶M. p. 116-116°C MS m/z(相對(duì)強(qiáng)度，70eV) 183(M+，bp) ， 153(35)，
140(22) ， 133(21) ， 127(48)。 實(shí)施例3 : 3-(3，5-二氟苯基)吡咯烷 根據(jù)實(shí)施例2制備l-芐基-3-(3，5-二氟苯基)-2，5-二氫-lH-吡咯(0. 71g，2. 62mmol)，甲酸銨(1. 65g，26. 2mmo1)，碳載鈀(0. 07g)，甲醇(50ml)。過濾并蒸發(fā)甲醇后，加入碳酸鈉水溶液(10%，50ml)且水相用乙酸乙酯(2x50ml)萃取。蒸發(fā)合并的有機(jī)相，加入鹽酸水溶液(5X，40ml)，水相用兩份乙醚洗滌然后通過加入碳酸鈉水溶液堿化。加入乙酸乙酯并分離有機(jī)相，干燥(MgS04)并蒸發(fā)。將該胺轉(zhuǎn)化成草酸鹽且從乙醇/乙醚重結(jié)晶:M.p. 199-200°C .MS m/z (相對(duì)強(qiáng)度，70eV) 183 (M+， bp) ， 153 (44) ， 151 (24) ， 133 (23)，127(43)。 實(shí)施例4 : 3-(3，4-二氟苯基)-1_甲基吡咯烷 3-(3，4-二氟苯基)妣咯烷(0. 31g， 1. 69,1)在甲酸(4. 9ml)和甲醛(40%溶液，4. 4ml)中的混合物在IO(TC加熱lh。加入水(50ml)且通過加入氫氧化鈉水溶液(5M，20ml)堿化該溶液。水相用乙酸乙酯(2x50ml)萃取，干燥(MgS04)合并的有機(jī)相并在減壓下蒸發(fā)得到粗產(chǎn)物(0. 33g)。通過快速色譜法純化(乙酸乙酯/甲醇1 : 1)，標(biāo)題化合物的產(chǎn)量0. 19g(57% )。將該胺轉(zhuǎn)化為富馬酸鹽并從乙醇/ 二異丙基醚重結(jié)晶M. p. 140-142°C . MSm/z (相對(duì)強(qiáng)度，70eV) 197 (M+， 71) ， 196 (23) ， 153 (13) ， 127 (19) ， 57 (bp)。
實(shí)施例5 :
3-(3，4-二氟苯基)吡咯烷 用氮?dú)獯祾遧-芐基-3-(3，4-二氟苯基)-2，5-二氫-lH-吡咯(1. 96g， 7. 23,1)和甲酸銨(4. 55g，72. 3mmo1)在甲醇(20ml)中的混合物，之后加入碳載鈀(0. 2g)?；旌衔锘亓?h，冷卻到環(huán)境溫度并通過硅藻土墊過濾。蒸發(fā)濾液，粗產(chǎn)物用制備性HPLC純化得到標(biāo)題化合物(0. 3g)。將該胺轉(zhuǎn)化成鹽酸鹽并從乙醇/乙醚重結(jié)晶M. p. 139-140°C . MS m/z (相對(duì)強(qiáng)度，70eV) 183 (M+， bp) ， 153 (38) ， 151 (22) ， 133 (24) ， 127 (45)。
下述制備物用于上述實(shí)施例的合成。
制備1 : 1-節(jié)基-3-(3， 5- 二氟苯基)吡咯烷-3-醇 在氮?dú)庀略?78。C，向l-溴-3，5-二氟苯(2. 5g，12. 8mmo1)的無(wú)水乙醚(30ml)溶液中逐滴加入己基鋰(2. 3M于己烷中，5. 6ml， 12. 8mmo1)。攪拌混合物1分鐘，之后逐滴加入l-芐基吡咯烷-3-酮(1. 5g，8. 6mmo1)的無(wú)水乙醚(20ml)溶液。使所得的混合物回到環(huán)境溫度，加入水(20ml)且混合物用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，干燥(MgS04)，過濾并蒸發(fā)。通過快速柱色譜法純化(乙酸乙酯/異辛烷，1 : l)得到標(biāo)題化合物(2. 07g) 。 MS m/z (相對(duì)強(qiáng)度，70eV) 289 (M+， 7) ， 198 (60) ， 134 (34) ， 133 (56) ， 132 (43)，91 (bp)。
制備2: 1-芐基-3- (3， 5- 二氟苯基)-2， 5- 二氫-1H-吡咯 將l-芐基-3-(3，5-二氟苯基)吡咯烷-3-醇(1.6g，5.5mmo1)和多磷酸(2g)的 混合物在85t:加熱1.5h。使混合物冷卻到環(huán)境溫度，加入水(50ml)，且混合物用氫氧化鈉 水溶液(5M)堿化。加入二氯甲烷且干燥(MgS04)并且蒸發(fā)有機(jī)相。通過硅膠上的柱色譜 法純化得到標(biāo)題化合物(0. 71g) 。 MS m/z (相對(duì)強(qiáng)度，70eV) 271 (M+，bp) ， 270 (56) ， 369 (93)， 180 (26) ，91 (93)。
制備3: l-節(jié)基-3-(3，4-二氟苯基)吡咯烷-3-醇 在氮?dú)庀略?78。C，向l-溴-3，4-二氟苯(3. 0g， 15. 5mmo1)的無(wú)水乙醚(25ml) 溶液逐滴加入正丁基鋰(2. 5M于己烷中，6. 25ml， 15. 5mmo1)。攪拌混合物lh，之后逐滴加 入l-節(jié)基吡咯烷-3-酮(2. 7g， 15. 5mmo1)的無(wú)水乙醚(25ml)溶液。使所得混合物回到環(huán) 境溫度，攪拌O. 5h，加入水(20ml)且混合物用乙酸乙酯(2x50ml)萃取。干燥(Na2S04)合 并的有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)。通過快速柱色譜法在硅膠(乙酸乙酯/異辛烷，1 : l)上純化 得到標(biāo)題化合物(2. 7g) 。 MS m/z (相對(duì)強(qiáng)度，70eV) 289 (M+， 9) ， 198 (bp) ， 134 (23) ， 133 (35)， 132 (30) ，91 (63)。
制備4: l-節(jié)基-3-(3，4-二氟苯基)-2，5和2，3-二氫-lH-妣咯 將l-芐基-3-(3，4-二氟苯基)吡咯烷-3-醇(1.6g，5. 5mmo1)和三氟乙酸(20ml) 在6(TC加熱14h并在9(TC加熱4h。蒸發(fā)該三氟乙酸，加入碳酸鈉水溶液(10%，50ml)且水 相用乙酸乙酯(50ml)萃取。加入水(50ml)且該溶液用氫氧化鈉水溶液(5M)堿化。蒸發(fā) 合并的有機(jī)相，加入鹽酸水溶液(5X，40ml)，用兩份乙醚洗滌水相然后通過加入碳酸鈉水 溶液堿化。加入乙酸乙酯且分離有機(jī)相，干燥(MgS04)并蒸發(fā)得到標(biāo)題化合物。(1.96g)MS m/z (相對(duì)強(qiáng)度，70eV) 271 (M+， 51) ， 270 (31) ， 269 (31) ， 180 (35) ，91 (bp)。
制備5: 1-節(jié)基-3-(2，4- 二氟苯基)吡咯烷-3-醇根據(jù)制備1制備l-溴-2，4-二氟苯(7.49g，38. 5mmol)，無(wú)水乙醚(60ml)，己基 鋰(2. 3M于己烷中，16. 8ml，38. 5mmo1)和l-節(jié)基妣咯烷-3-酮(4. 5g， 25. 7,1)。產(chǎn)量 5. 7g. MS m/z (相對(duì)強(qiáng)度，70eV) 289 (M+， 5) ， 198 (66) ， 133 (52) ， 132 (42) ，91 (bp)。
制備6 : 1-節(jié)基-3- (2， 4- 二氟苯基)-3-氟吡咯烷 向冷卻的((TC )l-芐基-3-(2，4-二氟苯基)吡咯烷-3-醇(1. 9g， 6. 57mmo1)的 二氯甲烷(50ml)溶液中逐滴加入二乙基氨基三氟化硫(0.86ml，6. 57mmo1)的二氯甲烷 (25ml)溶液。攪拌混合物0.5h，之后加入碳酸鈉水溶液(50ml)且分離各相。水相用二氯 甲烷(50ml)萃取并且將合并的有機(jī)相干燥(MgS04)且蒸發(fā)。通過在硅膠上的快速柱色譜 法純化得到標(biāo)題化合物(0. 8g)。 MS m/z(相對(duì)強(qiáng)度，70eV)291(M+，59)，27135)，133(64)， 132(49)，91 (bp)。
制備7 : 叔丁基3-(3， 4- 二氯苯基)-3-羥基吡咯烷_1_甲酸酯
在氮?dú)庀?，?-溴-l，2-二氯苯(2.0g，8.85mmo1)的無(wú)水四氫呋喃(35ml)溶液 加入鎂屑(0. 21g，8. 85mmol)。混合物回流lh，冷卻到環(huán)境溫度并逐滴加入l-N-boc-3-吡 咯烷酮(1.63g，8.85mmo1)的無(wú)水四氫呋喃(10ml)溶液。將得到混合物回流3h，之后加入 飽和氯化銨水溶液(40ml)并且混合物用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。干燥(MgS04)合并的有 機(jī)相，過濾并蒸發(fā)。通過在硅膠上的快速色譜法純化(異辛烷/乙酸乙酯l : l)得到標(biāo)題 化合物(lg)。 MS m/z(相對(duì)強(qiáng)度，70eV)332(M+，1)，275(41)，232(37)，231 (28)，230(52)， 57 (bp)。 制備8 : 3- (3， 4- 二氯苯基)-2， 5- 二氫_1H_吡咯 將叔丁基3-(3，4-二氯苯基)-3-羥基吡咯烷-1_甲酸酯(6. 15g， 18. 5mmo1)和三 氟乙酸(20ml)在7(TC加熱14h?；旌衔锢鋮s到(TC并加入氫氧化鈉水溶液(5N)直到pH 達(dá)到10。水相用乙酸乙酯(2x50ml)萃取干燥(Na2S04)并蒸發(fā)。通過快速柱色譜法純化 (甲醇)得到標(biāo)題化合物(1. g) 。 MS m/z (相對(duì)強(qiáng)度，70eV) 215 (45) ， 214 (M+， 72) ， 213 (76)， 212 (bp) ， 177(68)。 采用下述測(cè)試來(lái)評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物。
體內(nèi)測(cè)試神經(jīng)化學(xué) 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中使用重220-320g的雄性Sprague-Dawley大鼠。在給予所述測(cè) 試物質(zhì)后60分鐘，將所述大鼠斬首。在斬首后直接從顱骨取出大腦并置于裝滿冰的有 蓋玻璃碗上。用兩個(gè)薄的成一定角度的鑷子切開大腦邊緣系統(tǒng)(含有伏隔核(nucleus accumbens)-核和殼，大部分的嗅結(jié)節(jié)和腹側(cè)蒼白球(ventral pallidum))并直接放在干 冰(二氧化碳-7『C )上的金屬薄片上。然后對(duì)紋狀體和皮層解剖并同樣放在干冰上。從斬 首直到最后一個(gè)組織解剖經(jīng)歷的時(shí)間在4-6分鐘間變化。采用與計(jì)算機(jī)連接的Sartorius BP3105對(duì)所述組織進(jìn)行稱重并用貼上標(biāo)簽的錫紙包裝，然后貯藏于-S(TC的冷凍室中。要 非常小心以確保組織冷凍直到神經(jīng)化學(xué)分析的時(shí)間。隨后就一元胺及其代謝物的含量對(duì)每 一個(gè)腦部分進(jìn)行分析。 通過HPLC分離和電化學(xué)檢測(cè)對(duì)腦組織勻漿中的一元胺傳遞物質(zhì)(NE (去甲腎上腺 素)、DA(多巴胺)、5-HT(5-羥色胺))以及其胺(NM(去甲變腎上腺素)、3_MT(3_甲氧酪 胺))和酸(D0PAC(3，4-二羥基苯乙酸)、5-HIAA(5-羥基-吲哚乙酸)、HVA(高香草酸)) 代謝物進(jìn)行定量。 所述分析方法基于專用于胺或酸的兩種色譜分離法。兩種色譜系統(tǒng)共享一個(gè)共同
的帶有io-通孔閥的自動(dòng)注射器和用于在兩個(gè)系統(tǒng)中同時(shí)注射的兩個(gè)樣品環(huán)。兩個(gè)系統(tǒng)都
裝有反相柱(Luna C18(2)，dp 3線50*2mm i. d. ，Phenomenex)，和在玻碳電極的兩個(gè)電壓 下實(shí)現(xiàn)電化學(xué)檢測(cè)(MF-IOOO， Bioanalytical Systems, Inc.)。柱流出物經(jīng)由T形連接流 到檢測(cè)池或廢液口。這通過兩個(gè)電磁線圈閥實(shí)現(xiàn)，其阻斷廢液或檢測(cè)器出口。通過防止色 譜前液到達(dá)檢測(cè)器，獲得更好的檢測(cè)條件。用于酸系統(tǒng)的水性流動(dòng)相(0.4ml/min)含有檸 檬酸14mM、擰檬酸鈉10mM、 MeOH 15% (v/v)禾P EDTA 0. lmM。相對(duì)Ag/AgCl參比電極的檢 測(cè)電位為0. 45和0. 60V。用于胺系統(tǒng)的離子對(duì)水性流動(dòng)相(0. 5ml/min)含有檸檬酸5mM、 擰檬酸鈉10mM、MeOH 9% (v/v)、MeCN 10.5% (v/v)、癸烷磺酸0. 45mM和EDTA 0. lmM。相 對(duì)Ag/AgCl參比電極的檢測(cè)電位為0. 45和0. 65V。
體內(nèi)測(cè)試微誘析 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中使用重220-320g的雄性Sprague-Dawley大鼠。在實(shí)驗(yàn)之前，將動(dòng) 物成群豢養(yǎng)，每一個(gè)籠子中5只，自由獲取水和食物。動(dòng)物到來(lái)后，在實(shí)驗(yàn)中手術(shù)和使用前 將其豢養(yǎng)至少5天。對(duì)于微透析，每一只大鼠只用一次。 我們使用I-形探針(Santiago和Westerink 1990)的改良形式(Waters,Lofberg 等人1994)。我們使用的透析膜為AN69聚丙烯腈/甲磺酸鈉(sodium methalyl sulfonate) 的共聚物(HOSPAL ;o. d. /i. d. 310/220 ii m :Gambro， Lund， Sweden)。在背側(cè)紋狀體中，我們 使用具有3mm暴露長(zhǎng)度的透析膜的探針而在前額葉皮層中對(duì)應(yīng)長(zhǎng)度為2.5mm。當(dāng)將大鼠 放置在Kopf立體定位儀上時(shí)，在異氟醚吸入麻醉下對(duì)大鼠進(jìn)行手術(shù)。根據(jù)(Paxinos and Watson 1986)，計(jì)算相對(duì)前囟的坐標(biāo)；背側(cè)紋狀體AP+1，ML±2. 6，DV_6. 2 ;Pf皮層(額葉前 部的皮層)，AP+3.2，8。 ML±1.2，DV-4.0。在立體定位指導(dǎo)下將透析探針定位在鉆孔中并 用phosphatine牙科粘固粉粘牢。 在透析實(shí)驗(yàn)前，將大鼠單獨(dú)豢養(yǎng)在籠中40個(gè)小時(shí)，使它們從手術(shù)中恢復(fù)并在下述 實(shí)驗(yàn)期間使藥物與麻醉劑相互作用的風(fēng)險(xiǎn)最小。在這段時(shí)間中，大鼠可自由獲取食物和水。 在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，大鼠經(jīng)由轉(zhuǎn)環(huán)與微灌注泵相連并被置于籠中，在籠中它們可以在其限制內(nèi)自 由移動(dòng)。灌注介質(zhì)是含有下述物質(zhì)(mmol/1)的林格氏溶液NaCl ;140， CaC12 ;1. 2， KC1 ; 3. 0，MgC12 ;1. 0和抗壞血酸；0. 04，根據(jù)(Moghaddam和Bunney 1989)。設(shè)置泵的灌注速度 為2 ii 1/min和每20分鐘收集40 樣品。 通過HPLC分離和電化學(xué)檢測(cè)對(duì)腦組織勻漿中的一元胺類傳遞物質(zhì)(NE (去甲腎 上腺素)、DA(多巴胺)、5-HT(5-羥色胺))以及其胺(NM(去甲變腎上腺素)，3_MT(3_甲 氧基-酪胺))和酸(D0PAC(3，4-二羥基苯乙酸)、5-HI AA(5-羥吲哚乙酸)、HVA(高香草 酸))代謝物進(jìn)行定量。 通過HPLC分離和電化學(xué)檢測(cè)對(duì)微透析樣品中的一元胺類傳遞物質(zhì)(NA、DA、5-HT) 以及其胺(NM、3-MT)和酸(D0PAC、5-HIAA、HVA)代謝物進(jìn)行定量。 所述分析方法基于專用于胺或酸的兩種色譜分離法。兩種色譜系統(tǒng)共享一個(gè)共同 的帶有10-通孔閥的自動(dòng)注射器和用于在兩個(gè)系統(tǒng)中同時(shí)注射的兩個(gè)樣品環(huán)(用于酸的為 5iU，用于堿的為20iU)。通過反相色譜分離酸而在柱交換裝置中通過反相分離然后反相 離子對(duì)然后來(lái)分離堿。 使用三種不同長(zhǎng)度的分離柱(Luna C18(2)，dp 3 ii m， 2mm i. d. ， Phenomenex)。在 玻碳電極上實(shí)現(xiàn)電化學(xué)檢測(cè)(MF-IOOO， Bioanalytical Systems, Inc.)。
用于酸系統(tǒng)的水性流動(dòng)相(0. 6ml/min)含有擰檬酸40mM、磷酸氫二鉀10mM、 MeOH 8% (v/v)和EDTA 0. lmM。柱長(zhǎng)度為30mm。相對(duì)Ag/AgCl參比電極的檢測(cè)電位為0. 70V。
用于胺系統(tǒng)的離子對(duì)水性流動(dòng)相(0. 4ml/min)含有擰檬酸5mM、擰檬酸鈉10mM、 MeCN 10% (v/v)。 THF 4% (v/v)、十二烷磺酸0. 05mM和EDTA 0. lmM。柱長(zhǎng)度為50mm。相 對(duì)Ag/AgCl參比電極的檢測(cè)電位為0. 45和0. 65V。 用于聯(lián)合的反相分離的水性流動(dòng)相(0.4ml/min)與離子對(duì)流動(dòng)相一致，但是除去 十二烷磺酸。柱長(zhǎng)度為20mm。為了最優(yōu)化，隨時(shí)間可以進(jìn)行分析條件的微小改變。
實(shí)驗(yàn)后，將大鼠與灌注泵分開并斬首。將其大腦快速取出并固定在Accustain溶 液中(Sigma， Sweden)用于后續(xù)的探針定位觀察。動(dòng)物倫理委員會(huì)(G6 teborg， )批準(zhǔn)了在這些實(shí)驗(yàn)中采用的程序。 參考文獻(xiàn)1的比較實(shí)施例16使用了較早的分析程序。在該程序中，分離胺而無(wú)需 進(jìn)行柱轉(zhuǎn)換且離子對(duì)條件被略微不同地優(yōu)化。關(guān)于參考文獻(xiàn)1的比較實(shí)施例16，通過注射 克他命和甲苯噻嗪來(lái)誘導(dǎo)麻醉，并將大腦固定在Neo-fix溶液中(Kebolab， Sweden)用于后
續(xù)的探針定位觀察。
參考文獻(xiàn) Moghaddam， B. and B. S. Bu皿ey (1989). 〃 Ionic Compositionof Microdialysis Perfusing Solution Alters the PharmacologicalResponsiveness and Basal Outflow of Striatal Dopamine. 〃 J. Neurochem. 53 :652-654. Paxinos， G. and C. Watson(1986). The Rat Brain inStereotaxic Coordinates. New York, Academic Press. Santiago, M. and B. H. C. Westerink (1990). 〃 Characterization of the in vivo release of dopamine as recordedby different types of intracerebral microdialysis probes. 〃 Naunyn-Schmiedeberg' s Arch. Pharmacol. 342 :407-414.
Waters, N. ， L. Lofberg， S. Haadsma-Svensson， K. Svensson， C. Sonesson and A.Carlsson(1994). 〃 Differential effects ofdopamine D2 and D3 receptor antagonists in regard to dopaminerelease， in vivo receptor displacement and behaviour. 〃 J NeuralTransm Gen Sect 98(1) :39—55.
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權(quán)利要求
式(2)的化合物，其任何立體異構(gòu)體或其立體異構(gòu)體的任何混合物，或其N-氧化物，或其藥學(xué)可接受的鹽，其中Ar選自苯基、噻吩基、呋喃基、2-嘧啶基、噁唑基和噻唑基；R1選自F和Cl；R2選自F和Cl；且R3選自H和Me，條件是，當(dāng)Ar是苯基且R1和R2中的一個(gè)位于對(duì)位且R1和R2中的另一個(gè)位于間位時(shí)，那么當(dāng)R3是H時(shí)R1和R2不都是F。F2008800187862C00011.tif
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Ar為苯基。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2的化合物，具有式(3):或式(4):<formula>formula see original document page 2</formula>(4)或式(5):<formula>formula see original document page 2</formula>(5)或式(6):<formula>formula see original document page 3</formula> (6)其中W、R2和R3如權(quán)利要求1所定義的，條件是，在上述式(5)中，當(dāng)R3是H時(shí)，W和R2不都是F。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的化合物，其中R1為F。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的化合物，其中當(dāng)R3為H或Me時(shí)，R2為F。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的化合物，其中R3為H。
7. 根據(jù)權(quán)利要求l-6中任一項(xiàng)的化合物，為(+)-對(duì)映異構(gòu)體形式。
8. 根據(jù)權(quán)利要求l-6中任一項(xiàng)的化合物，為(-)-對(duì)映異構(gòu)體形式。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其是3-(3，4-二氯苯基)吡咯烷；3-(2，4-二氟苯基)吡咯烷；3-(3，5-二氟苯基)吡咯烷；3_(3，4-二氟苯基)-1-甲基吡咯烷；或其藥學(xué)可接受的鹽。
10. —種藥物組合物，其包括治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的化合物，或化合物3-(3，4-二氟苯基)吡咯烷，其任何立體異構(gòu)體或其立體異構(gòu)體的任何混合物，或其N-氧化物，或其藥學(xué)可接受的鹽，以及一種或多種藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑。
11. 權(quán)利要求l-9中任何一項(xiàng)的化合物，或化合物3-(3，4-二氟苯基)吡咯烷，其任何立體異構(gòu)體或其立體異構(gòu)體的任何混合物，或其N-氧化物，或其藥學(xué)可接受的鹽在制備藥物中的用途。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11的用途，所述用途為制備用于治療、預(yù)防或減輕包括人的哺乳動(dòng)物的疾病或中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙的藥物組合物。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙是認(rèn)知障礙、神經(jīng)退行性障礙、癡呆、年齡相關(guān)的認(rèn)知損害、發(fā)育障礙、自閉癥譜系障礙、ADHD、腦癱、抽動(dòng)穢語(yǔ)綜合征、作為精神分裂癥的核心癥狀的一部分發(fā)生的認(rèn)知障礙、精神分裂癥、精神分裂癥樣精神障礙、情感障礙、抑郁癥、雙相情感障礙、焦慮障礙、泛化性焦慮障礙癥(GAD)、特異恐怖癥、驚恐障礙(PD)或睡眠障礙。
14. 一種治療、預(yù)防或減輕包括人的活動(dòng)物體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙的方法，所述方法包括給對(duì)其有需要的活動(dòng)物體施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的化合物、或化合物3- (3， 4- 二氟苯基)吡咯烷、或其任何立體異構(gòu)體或其立體異構(gòu)體的任何混合物、或其N-氧化物、或其藥學(xué)可接受的鹽的步驟。
15. 根據(jù)權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)的化合物、或化合物3-(3，4-二氟苯基)吡咯烷、其任何立體異構(gòu)體或其立體異構(gòu)體的任何混合物、或其N-氧化物、或其藥學(xué)可接受的鹽，用作藥物。
16.根據(jù)權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)的化合物、或化合物3-(3，4-二氟苯基)吡咯烷、其任何立體異構(gòu)體或其立體異構(gòu)體的任何混合物、或其N-氧化物、或其藥學(xué)可接受的鹽，用于治療、預(yù)防或減輕包括人的哺乳動(dòng)物的疾病或障礙或病癥，所述疾病、障礙或病癥對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中多巴胺能功能的調(diào)節(jié)有響應(yīng)。
全文摘要
本發(fā)明提供增加哺乳動(dòng)物大腦的大腦皮層區(qū)中兒茶酚胺、多巴胺和去甲腎上腺素的細(xì)胞外水平的化合物，更具體地涉及3-二取代的苯基-1-吡咯烷在治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙中的用途。
文檔編號(hào)A61P25/00GK101711234SQ200880018786
公開日2010年5月19日 申請(qǐng)日期2008年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月5日
發(fā)明者C·索尼森, F·彼德松, L·斯萬(wàn)森, N·瓦特斯, S·瓦特斯 申請(qǐng)人:Nsab神經(jīng)研究瑞典公司分公司