專利名稱：：含有苦參堿或其氧化衍生物的用于改善皮膚狀況的組合物的制作方法含有苦參堿或其氧化衍生物的用于改善皮膚狀況的組合物發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及含有苦參堿和氧化苦參堿作為活性成分的組合物，對皮膚狀況呈現(xiàn)出極好的改善作用，并具有穩(wěn)定性和安全性。相關(guān)技術(shù)的描述皺紋由皮膚老化引起，并且老化的皮膚是與老化過程相關(guān)的天然變化的結(jié)果。皮膚老化可以寬泛地分成生理老化和光老化。前者表示與整個皮膚表面老化相關(guān)的皮膚功能和結(jié)構(gòu)的變化，而后者是由紫外線照射誘發(fā)的。真皮的變化隨著老化變得明顯，并且真皮萎縮是70歲后的代表性現(xiàn)象之一。成纖維細(xì)胞的數(shù)量及其生物合成潛能兩者的衰減導(dǎo)致胞外基質(zhì)中具有大分子量的生物分子的變化，使得真皮變化開始出現(xiàn)。變化包括膠原蛋白束的分離、粘多糖合成的降低、膠原蛋白和彈性蛋白的數(shù)量和直徑的減少、膠原蛋白和彈性蛋白的分解以及血管的擴張。通常，在幾個復(fù)雜的誘因中，如皮膚的含水量、膠原蛋白含量和對極端環(huán)境的免疫應(yīng)答，皺紋形成的主要因素涉及膠原酶的表達(dá)和活性，膠原酶是減少膠原蛋白的合成和含量的膠原蛋白降解酶。同時，人皮膚的顏色主要歸因于黑色素的濃度和分布。黑色素是酚基高分子量生物物質(zhì)之一，并且在防止由UV引發(fā)的皮膚損傷中起著重要作用。已經(jīng)報道了黑素細(xì)胞中存在的酪氨酸酶活性是黑色素生物合成的關(guān)鍵因素，酪氨酸酶通過將酪氨酸轉(zhuǎn)化成D0PA和DOPA-醌在皮膚變黑過程中起著關(guān)鍵作用，D0PA和D0PA-醌是黑色素聚合物產(chǎn)生的中間產(chǎn)物。由于環(huán)境污染和汽車排出的廢氣，激素不平衡變得日益惡化。鑒于此，脫發(fā)的發(fā)病率變得更高，發(fā)病年齡降低，并且由于誘導(dǎo)皮膚免疫系統(tǒng)的失調(diào)，已經(jīng)發(fā)生了各種皮膚疾病，如遺傳性過敏癥和牛皮辮。此外，由于膳食生活的變化，如肉和方便食品集中的膳食，年輕肥胖癥患者的數(shù)量快速增長。因此，深入地進(jìn)行了研究以研發(fā)能夠有效解決已經(jīng)成為嚴(yán)重社會問題的幾種現(xiàn)象(即，內(nèi)在的老化和由uv引起的皺紋的發(fā)生，黑素瘤或雀斑，肥胖，免疫不平衡或脫發(fā))。貫穿本申請，提及了幾篇專利和出版物，并且在括號中提供了引文。將這些專利和出版物的公開內(nèi)容引入本申請中，以便更全面地描述本發(fā)明和本發(fā)明所屬領(lǐng)域的狀況。發(fā)明詳述本發(fā)明人已經(jīng)進(jìn)行了深入的研究來研發(fā)活性物質(zhì)，該活性物質(zhì)在改善皺紋、皮膚增白、uv誘發(fā)的皮膚損傷以及防止脫發(fā)、氧化和肥胖中具有活性，并且具有高穩(wěn)定性和安全性，對皮膚沒有副作用。因此，提供用于改善皮膚狀況、抗氧化和抗肥胖的組合物，具有極好的效果和安全性。因此，本發(fā)明的目的是提供用于改善皮膚狀況的組合物，其中皮膚狀況是皺紋、增白、uv誘發(fā)的皮膚損傷或頭發(fā)生長。本發(fā)明的另一個目的是提供用于抗氧化的組合物。本發(fā)明的再一個目的是提供用于抗肥胖的組合物。本發(fā)明的另一個目的是提供用于改善皮膚狀況的方法。本發(fā)明的再一個目的是提供用于防止氧化的方法。本發(fā)明的另一個目的是提供用于抑制肥胖的方法。本發(fā)明的其他目的和優(yōu)點將從以下的詳述并結(jié)合所附的權(quán)利要求和附圖變得清楚。在本發(fā)明的一個方面中，提供了含有苦參堿或氧化苦參堿作為活性成分的用于改善皮膚狀況的組合物，其中皮膚狀況是皺紋、增白、uv誘發(fā)的皮膚損傷或頭發(fā)生長。在本發(fā)明的另一個方面中，提供了用于改善皮膚狀況的方法，其包括將含有苦參堿或氧化苦參堿作為活性成分的組合物施用于受試者。在本發(fā)明的再一個方面中，提供了苦參堿或氧化苦參堿用于制造改善皮膚狀況的組合物的用途。在本發(fā)明的另一個方面中，提供了用于抗氧化的含有苦參堿或氧化苦參堿作為活性成分的組合物。在本發(fā)明的再一個方面中，提供了用于防止氧化的方法，其包括將含有苦參堿或氧化苦參堿作為活性成分的組合物施用于受試者。在本發(fā)明的另一個方面中，提供了苦參堿或氧化苦參堿用于制造抗氧化組合物的用途。在本發(fā)明的再一個方面中，提供了用于抗肥胖的含有苦參堿或氧化苦參堿作為活性成分的組合物。在本發(fā)明的另一個方面中，提供了用于抑制肥胖的方法，其包括將含有苦參堿或氧化苦參堿作為活性成分的組合物施用于受試者。在本發(fā)明的再一個方面中，提供了苦參堿或氧化苦參堿用于制造抗肥胖組合物的用途。本發(fā)明人已經(jīng)進(jìn)行了透徹的研究來研發(fā)活性物質(zhì)，該活性物質(zhì)在改善皺紋、皮膚增白、uv誘發(fā)的皮膚損傷以及防止脫發(fā)、氧化和肥胖中具有活性，并且具有高穩(wěn)定性和安全性，對皮膚沒有副產(chǎn)。因此，提供用于改善皮膚狀況、抗氧化和抗肥胖的組合物，具有極好的效果和安全性。因為代表性的生物堿物質(zhì)主要在槐屬根中提取得到，因此也在日本山豆根(fz/c力res"力/70"/caAe/7M)中觀察到本發(fā)明中用作活性成分的苦參堿和氧化苦參堿。四環(huán)-喹諾里西啶生物堿、苦參堿和氧化苦參堿是源自植物的化合物，由以下的通式I和II來表示。通常認(rèn)為具有苦味的苦參堿和氧化苦參堿對癌癥、乙肝、硬化、細(xì)菌、病毒、心臟病或皮膚疾病如牛皮癬或濕疹具有效果,(I)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(II)來源提取，天然來源為槐屬(Jop力ora)，如國槐(So/7力ora力/o//ca)、苦參(i^/力^ra/7ap^yce/s)、曰本山豆才艮(A"c力resfaya/7on/caAe/M)。詳細(xì)地，可以使用常規(guī)的各種提取方法來獲得苦參堿和氧化苦參堿。優(yōu)選，可以使用各種提取溶劑來獲得苦參堿和氧化苦參堿，例如，在0。C至50。C的提取溫度，提取溶劑為(a)水，(b)含有l(wèi)-4個碳原子的無水或含水低級醇(甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等)，(c)低級醇和水的混合物，(d)丙酮，(e)乙酸乙酯，(f)氯仿或(g)1,3-丁二醇。如果需要，可以對本發(fā)明中所用的苦參堿和氧化苦參堿進(jìn)行用本領(lǐng)域公知方法的附加純化，以及通過提取獲得的那些。例如，可以得知使用各種附加純化方法如使用限定分子量截留值的超濾和各種色語(為根據(jù)大小、電荷、疏水性和親和性純化而設(shè)計的)獲得的苦參堿和氧化苦參堿可以用于本發(fā)明中。本發(fā)明的組合物具有改善皮膚皺紋的新用途。本發(fā)明的組合物與用作抗皺劑的視黃醇相比具有更低的細(xì)胞毒性，并且在分子水平呈現(xiàn)出對膠原酶活性的抑制作用和對膠原蛋白生物合成的促進(jìn)作用，并且作為結(jié)果，呈現(xiàn)出改善皮膚皺紋的極好效果。在以下所述的實施例中證明了這樣的作用和功效。將認(rèn)識到皮膚皺紋的改善涵蓋了皮膚保護(hù)的一般用途(例如，防止皮膚皺紋、除去皮膚皺紋和防止皮膚老化)。此外，本發(fā)明用于改善皮膚狀況的組合物具有皮膚增白的新用途。在此所用的術(shù)語"增白"指的是防止由黑色素沉著誘發(fā)的皮膚黑化病的皮膚問題的改善。在本發(fā)明用于皮膚增白的組合物中，苦參堿和氧化苦參堿通過抑制胞內(nèi)酪氨酸酶活性呈現(xiàn)出對黑色素產(chǎn)生的抑制作用，并且作為結(jié)果，呈現(xiàn)出極好的皮膚增白效果?？鄥A和氧化苦參堿顯示出高穩(wěn)定性并且?guī)缀鯖]有副作用，如皮膚過敏誘發(fā)。此外，組合物中的苦參堿和氧化苦參堿的含量保持恒定。在以下所述的實施例中證明了這樣的作用和功效。此外，本發(fā)明用于改善皮膚狀況的組合物對uv誘發(fā)的皮膚損傷具有緩解、改善、預(yù)防或治療作用。本發(fā)明用于改善皮膚狀況的組合物能非常有效地預(yù)防脫發(fā)或促進(jìn)頭發(fā)生長。在此所用的術(shù)語"脫發(fā)預(yù)防，，和"頭發(fā)生長促進(jìn)"具有相同的意思。作為本發(fā)明組合物的活性成分的苦參堿和氧化苦參堿通過消除自由基呈現(xiàn)出抗氧化作用。本發(fā)明用于抗氧化的組合物可以用于通過抑制或消除氧化情況而能夠預(yù)防或治療的各種疾病、失調(diào)或異常情況。通過本發(fā)明治療的與抗氧化相關(guān)的疾病包括但不限于神經(jīng)變性失調(diào)，如動脈粥樣硬化、冠心病、再狹窄、再灌注損傷、帕金森氏癥或阿病、中風(fēng)、癌癥、老化、心血管障礙、骨質(zhì)疏松、中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙、外周血管疾病和呼吸困難。最優(yōu)選，本發(fā)明用于抗氧化的組合物用于預(yù)防或治療老化。已經(jīng)概括地報道了各種失調(diào)與自由基損傷之間的關(guān)聯(lián)，并且包括酶、離子通道、結(jié)構(gòu)蛋白和膜脂質(zhì)的各種細(xì)胞的成分是對抗反應(yīng)性自由基物質(zhì)的潛在目標(biāo)(Rice-EvansC，謝腐13(1):1-111(1992))。潛在目標(biāo)和自由基的反應(yīng)削弱了特定范圍的細(xì)胞功能，誘發(fā)病理變化并最終使細(xì)胞死亡。美國專利US5750351;US5773209;US5773231和US5846959中公開了由生理氧化引起的各種疾病。本發(fā)明用于抗氧化的組合物通過對消除自由基的極好效果來保護(hù)DNA、蛋白質(zhì)(包括脂蛋白)和膜脂質(zhì)免受氧化性損傷。此外，作為本發(fā)明活性成分的苦參堿和氧化苦參堿具有極好的抗肥胖作用。本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚由通式I和II表示的苦參堿和氧化苦參堿包物。衍生物通過促進(jìn)膠原蛋白合成和/或抑制膠原酶(固P-1)活性顯示出皺紋改善作用，或皮膚增白、UV誘發(fā)皮膚損傷改善、皮膚生長促進(jìn)或防止脫發(fā)、抗氧化和抗肥胖作用。更特別地，用作本發(fā)明活性成分的苦參堿和氧化苦參堿包括通式I和II的衍生物以及通式I和II的化合物。使用本領(lǐng)域公知的各種取代基通過方法獲得具有與通式I和II核相同的結(jié)構(gòu)核的衍生物。例如，提出通過將羥基、卣素、硝基或Cw烷基連接通式I和II的環(huán)碳形成的衍生物預(yù)期發(fā)揮與苦參堿和氧化苦參堿相同或相似的作用。這些取代的衍生物也落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。根據(jù)優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明中的苦參堿或氧化苦參堿活性成分以0.00001-15.Owt。/。的含量存在，更優(yōu)選，0.0001-10wt%，最優(yōu)選，0.0001-5wt%，基于組合物的總重。如果苦參堿或氧化苦參堿活性成分的含量低于0.00001wt。/。，組合物的作用是微不足道的；在超過15.Owt%的情況中，非?？赡馨l(fā)生一些副作用，如皮膚刺激和制劑的不穩(wěn)定性。根據(jù)優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的組合物是化妝品組合物。本發(fā)明的化妝品組合物除了作為活性成分的苦參堿或氧化苦參堿外，可以含有助劑以及載體。助劑的非限制性實例包括抗氧化劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、維生素、著色劑、臭味改善劑或這些成分的混合物。此外，化妝品組合物可以另外含有促進(jìn)皮膚吸收的物質(zhì)，以增強效果。本發(fā)明的化妝品組合物可以配制成各種形式，對于非限制性實例，包括溶液、懸浮液、乳液、糊劑、凝膠、霜劑、化妝水、粉末、皂、含表面活性劑的清潔劑、油、粉底、粉底乳、粉底蠟和噴霧。詳細(xì)地，可以以皮膚軟化劑(潤膚液)、營養(yǎng)乳液(奶液)、營養(yǎng)霜、按摩霜、香精、眼霜、潔面霜、潔面泡沫、潔面水、面膜、噴霧劑或粉末的形式來提供本發(fā)明的化妝品組合物。本發(fā)明化妝品組合物中含有的化妝品可接受載體可以根據(jù)制劑的類型而改變。例如，糊劑、霜或凝膠的制劑可以含有動物和植物脂肪、蠟、石蠟、淀粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅氧烷、膨潤土、二氧化硅、滑石、氧化鋅或這些成分的混合物。在粉末或噴霧的制劑中，可以含有乳糖、滑石、二氧化硅、氫氧化鋁、硅酸鈣、聚酰胺粉末或這些成分的混合物。噴霧劑可以另外含有常規(guī)的推進(jìn)劑，例如，氟氯烴、丙烷/丁烷或二甲醚。溶液和乳液的制劑可以含有溶劑、增溶劑或乳化劑，例如，水、乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、醋酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸節(jié)酯、丙二醇、1，3-丁二醇油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇、山梨聚糖的脂肪酸酯或這些成分的混合物。懸浮液的制劑可以含有液體稀釋劑，例如，水、乙醇或丙二醇，懸浮劑，例如，乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯山梨聚糖酯、微晶體纖維素、偏氫氧化(metahydroxide)鋁、膨潤土、瓊脂和黃蓍膠或這些成分的混合物。含有表面活性劑的清潔組合物的制劑可以含有脂肪醇硫酸鹽、脂肪醇醚硫酸鹽、磺基琥珀酸單酯、isothinate、咪唑衍生物、甲基?；撬猁}、肌氨酸鹽、脂肪酰胺醚硫酸鹽、烷基氨基甜菜堿、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、乙氧基化甘油脂肪酸酯或這些成分的混合物?？梢詫⒈景l(fā)明的組合物制成藥物組合物，并且藥物組合物中含有藥物學(xué)上可接受的栽體以及活性成分。通常用于藥物制劑中的藥物學(xué)上可接受的載體包括但不限于乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、rubberarable、磷酸鐘、arginate、明膠、珪酸鉀、孩i晶體纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿、甲基纖維素、甲基羥基苯甲酸酯、丙基羥基苯甲酸酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以進(jìn)一步包括潤滑劑、潤濕劑、甜味劑、調(diào)味劑、乳化劑、懸浮劑和防腐劑。合適的藥物學(xué)上可接受的載體和制劑的詳細(xì)內(nèi)容可以在Ae/z72'/^fo/7's戶力ar邁ace"〃ca/i^/e/3cesf#2夕威,，"中找到?？梢酝ㄟ^各種途徑將本發(fā)明的藥物組合物給藥于哺乳動物，如大鼠、小鼠、家畜和人，給藥途徑例如為口服、直腸給藥或靜脈內(nèi)注射、肌內(nèi)注射、皮下注射、子宮內(nèi)注射或腦室內(nèi)注射，優(yōu)選皮下注射，更優(yōu)選局部施用。本發(fā)明藥物組合物的合適劑量可以根據(jù)藥物配制方法、給藥方法、患者的年齡、體重、性別、發(fā)病狀況、飲食、給藥時間、給藥途徑、排泄率和對所用藥物組合物的敏感度而改變，并且本領(lǐng)域普通醫(yī)師可以決定用于所需治療的藥物組合物的有效量。在口服制劑的情況中，一天給藥一次至幾次合適的單位劑量，基于成人為0.001-100mg/kg。在外用制劑的情況中，可以通過一天施用一次至五次來給予合適的單位劑量，基于成人為1.0至3.Oml的含量，并且最好使用超過1個月。然而，單位劑量沒有限制本發(fā)明的范圍。根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)，本發(fā)明的藥物組合物可以與如上所述的藥物學(xué)上可接受的載體和/或介質(zhì)一起配制，最終提供單位劑型和多劑量形式的幾種形式。制劑的非限制性實例包括但不限于口服制劑，如粉末、顆粒、片劑、膠嚢、懸浮液、乳液、糖漿和氣霧劑，外用制劑，如膏劑和霜劑、栓劑和無菌注射液，可以進(jìn)一步含有分散劑或穩(wěn)定劑。本發(fā)明的組合物可以制成食品組合物。本發(fā)明的食品組合物可以含有用于制備食品組合物的常規(guī)添加劑，例如，蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂質(zhì)、營養(yǎng)物質(zhì)和調(diào)味劑。上述碳水化合物的非限制性實例包括但不限于單糖(例如，葡萄糖和果糖)；雙糖(例如，麥芽糖、蔗糖和寡糖)和多糖(例如，糊精和環(huán)糊精)；以及糖醇(例如，木糖醇、山梨糖醇和赤蘚醇)。調(diào)味劑的非限制性實例包括但不限于天然調(diào)味劑[竹芋蛋白和蜜葉糖的提取物(例如，甜葉菊甙A和甘草甜素)]和合成調(diào)味劑(例如，糖精和阿斯巴甜)。例如，在作為飲料提供本發(fā)明的食品組合物的情況中，可以進(jìn)一步含有檸檬酸、液體果糖、蔗糖、葡萄糖、醋酸、蘋果酸、果汁、杜仲提取物、棗提取物或甘草提取物。同時，累積的皮膚刺激的實驗結(jié)果說明作為天然物質(zhì)的苦參堿和氧化苦參堿對本發(fā)明的特定實施例中對人體是無害的。因此，由于幾乎不具有毒性和副作用，本發(fā)明的苦參堿和氧化苦參堿有把握可以長期使用，特別可以用于化妝品、藥物和食品組合物中，如上所述具有安全性。本發(fā)明的特征和優(yōu)點的概述如下(i)本發(fā)明的組合物含有苦參堿和氧化苦參堿作為活性成分。(ii)苦參堿和氧化苦參堿具有比用作抗皺劑的視黃醇具有更低的細(xì)胞毒性，并在分子水平呈現(xiàn)出對膠原酶活性的抑制作用和對膠原蛋白生物合成的促進(jìn)作用，具有改善皮膚皺紋的良好功效。此外，苦參堿和氧化苦參堿兩者都通過抑制胞內(nèi)酪氨酸酶活性呈現(xiàn)出對黑色素產(chǎn)生的抑制，UV誘發(fā)的皮膚損傷的改善效果和促進(jìn)皮膚生長或防止脫發(fā)。因此，苦參堿和氧化苦參堿對皮膚狀況具有極好的改善作用。(iii)此外，苦參堿和氧化苦參堿具有極好的抗肥胖和抗氧化作用。(iv)本發(fā)明的組合物可以用于化妝品、藥物和食品組合物，沒有細(xì)胞毒性和副作用。附圖簡述圖l是顯示了作為活性成分的苦參堿和氧化苦參堿與RA相比較對抗人成纖維細(xì)胞具有更低細(xì)胞毒性的圖。RA表示視黃酸。RA、苦參堿和氧化苦參堿各自以1liM、IOmM和50jiM的含量來處理。圖2是顯示出苦參堿和氧化苦參堿對膠原蛋白(1型膠原蛋白)的促進(jìn)作用的圖。RA以1jaM的含量來處理。圖3表示作為本發(fā)明活性成分的苦參堿和氧化苦參堿對原酶(畫P-1)的抑制作用。畫P-1和PMA各自表示1型膠原酶和佛波醇肉豆蔻酸醋酸鹽。PMA以100nM的含量來處理。現(xiàn)在通過實施例來進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明。本領(lǐng)域人員將清楚這些實施例是用來更具體地說明，而所附權(quán)利要求中列出的本發(fā)明的范圍不限于這些實施例或不受這些實施例所限。實施例實施例1:苦參堿和氧化苦參堿對皺紋改善作用的測量通常可以通過膠原蛋白生物合成能力、膠原酶降解抑制能力和人臨床測試來測量缺紋改善作用的測試。將人成纖維細(xì)胞(通常獲自pacific)接種于6-孔平板(2x105細(xì)胞/孔)并將細(xì)胞平板在5°化02培養(yǎng)箱中在37匸孵育24小時。24小時后，除去每個孔中的培養(yǎng)基并用各種濃度處理樣品，接著再次孵育24小時。孵育后，收集細(xì)胞培養(yǎng)基并用作樣品。為了測量樣品對成纖維細(xì)胞的細(xì)胞毒性，以剩余培養(yǎng)基體積的1/10倍將MTT試劑(lmg/ral)加入每個孔中，孵育3小時，并除去培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基溶解于DMSO中并測量其在540nm處的吸光度。通過使用I型原骨膠原C-肽EIA試劑盒(MK101,Takara,京都，日本)測量細(xì)胞培養(yǎng)基中的I型原骨膠原C-肽(PICP)含量來測定膠原蛋白合成的程度。根據(jù)制造商的實驗方案來進(jìn)行該方法。作為測量膠原酶(分解膠原蛋白的酶)活性的方法，使用了針對膠原酶的抗體。作為誘導(dǎo)膠原酶活性的材料，處理了PMA(佛波醇肉豆蔻酸醋酸酯，Sigma)。為了測量膠原酶活性，使用了l型膠原酶測i式試劑盒(AmershamBiosciences,RPN2629)，并4吏用ELISA閱讀器(Bio-TekELx808TM系列超微平板閱讀器，U.K)測量吸光度。將測量的平均值表示為平均土標(biāo)準(zhǔn)偏差。進(jìn)行使用SPSS/PC+的T-檢驗來確定顯著性，并且結(jié)果顯示于表l中。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>如表l中所示的，苦參堿和氧化苦參堿以濃度依賴性方式提高了膠原蛋白合成并抑制了膠原酶活性。同時，發(fā)現(xiàn)了苦參堿對膠原蛋白合成和膠原酶活性抑制的作用比氧化苦參堿更好。因此，這些結(jié)果證明苦參堿和氧化苦參堿具有皺紋改善的作用。制備實施例A和比較制備實施例營養(yǎng)霜的制備按照表2中所示的制備含有苦參堿和氧化苦參堿的營養(yǎng)霜(制備實施例A)。將包括純水、三乙醇胺和丙二醇的水相以及包括脂肪酸、油成分、乳化劑和防腐劑的油相加熱至70。C并混合乳化。乳化完成后，將乳液冷卻至45。C。加入苦參堿、氧化苦參堿和香料并分散，然后冷卻至3(TC。相反，以與制備實施例A相似的方式制備比較制備實施例，除了使用純水替代苦參堿或氧化苦參堿。表2含有苦參堿或氧化苦參堿的營養(yǎng)霜的成分和含量<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實施例2:含有苦參堿和氧化苦參堿的化妝品對皺紋改善作用的測量在臨床證明中測量了含有苦參堿和氧化苦參堿的化妝品對皺紋改善的作用。使用了制備實施例A(含有含量各自為1%和5%的苦參堿和氧化苦參堿的營養(yǎng)霜)和比較制備實施例(含有純水的營養(yǎng)霜)中制備的營養(yǎng)霜。通過測量皮膚彈性的變化來評價皺紋改善作用。在24。C至26匸的穩(wěn)定環(huán)境溫度和38%至40%的濕度下對30名健康女性測試者(年齡25至35)進(jìn)行測量。一天兩次將制備實施例A的4種營養(yǎng)霜和比較制備實施例的營養(yǎng)霜施用至測試者面部皮膚3個月后，使用CutometerSEM474(Courage+Khazaka，Cologne,德國)測量彈性。對皮膚彈性i殳定從零至5范圍內(nèi)的相對級別，零為沒有彈性，5為測量的最高彈性，并且結(jié)果顯示于表3中。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>如表3所示，本發(fā)明的制備實施例A與比較制備實施例相比，顯示出對皺紋改善明顯更好的作用，并且皮膚彈性隨著苦參堿和氧化苦參堿濃度的提高而提高。實施例3:苦參堿和氧化苦參堿對黑色素產(chǎn)生的抑制作用的測量使用B16小鼠黑素瘤細(xì)胞(韓國細(xì)胞系庫)測量苦參堿和氧化苦參堿對黑色素產(chǎn)生的抑制后，將測量值與熊果苷對黑色素產(chǎn)生的抑制相比較，熊果苷是已知的黑色素產(chǎn)生抑制劑。將B16小鼠黑素瘤細(xì)胞FIO(韓國細(xì)胞系庫)接種于6-孔平板每個孔(1x105細(xì)胞/孔)中含有10%FBS(胎牛血清)的麗M(Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基)中，并通過在37。C和5.0%0)2的條件下在C02培養(yǎng)箱中孵育將細(xì)胞培養(yǎng)至約超過80%匯合。培養(yǎng)后，除去培養(yǎng)基并將樣品重新放入以合適濃度稀釋的培養(yǎng)基中，接著在37t:和5.0%C02的條件下孵育3天。測定IOjjM、100pM和500yM的苦參堿和氧化苦參堿的濃度，沒顯示出細(xì)胞毒性。用PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)洗滌除去培養(yǎng)基的細(xì)胞并用胰蛋白酶處理來收集細(xì)胞。使用血細(xì)胞計數(shù)器(TiefeDepthProfondeur0.lOOmm,PaulMarienfeldGmbH&Co.KG，D.E)計算收集細(xì)胞的數(shù)目，在5，000至10,OOOrpm離心10分鐘并除去上清液，因此獲得沉淀物。將該細(xì)胞沉淀物在6(TC干燥，加入lOOja1含有1MNaOH的10%DMSO，并在60°C的培養(yǎng)箱中獲得胞內(nèi)黑色素。然后，使用微平板閱讀器(Bio-TekELx8081U，U.S)測量細(xì)胞溶液在490nm處的吸光度，并且估算黑色素含量/細(xì)胞常數(shù)。實驗結(jié)果概括于表4中。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>如表4中所示，苦參堿和氧化苦參堿以濃度依賴性方式抑制黑色素產(chǎn)生。此外，發(fā)現(xiàn)了苦參堿和氧化苦參堿與熊果苷相比，顯示出對黑色素產(chǎn)生的抑制作用明顯更好。實施例4:苦參堿和氧化苦參堿對酪氨酸酶活性的抑制作用使用B16小鼠黑素瘤細(xì)胞(韓國細(xì)胞系庫)測量苦參堿和氧化苦參堿對黑色素產(chǎn)生的抑制后，將測量值與熊果苷對胞內(nèi)酪氨酸酶活性的抑制相比較，熊果*是已知的黑色素產(chǎn)生抑制劑。將鼠黑素瘤(B-16Fl)細(xì)胞接種于6-孔平板每個孔(lxl()S細(xì)胞/孔)中含有10%FBS(胎牛血清)的DMEM中，并通過在37。C和5.0°線的條件下在C02培養(yǎng)箱中孵育將細(xì)胞培養(yǎng)至約超過80%粘附。培養(yǎng)后，除去培養(yǎng)基并將樣品重新放入以合適濃度稀釋的培養(yǎng)基中，接著在37。C和5.0%0)2的條件下孵育3天。測定10pM、IOOmM和500pM的苦參堿和氧化苦參堿的濃度，沒顯示出細(xì)胞毒性。用PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)洗滌除去培養(yǎng)基的細(xì)胞并用胰蛋白酶處理來收集細(xì)胞。使用血細(xì)胞計數(shù)器計算收集細(xì)胞的數(shù)目，在5，000至10，OOOrpm離心10分鐘并除去上清液，因此獲得沉淀物。使用裂解緩沖液將該細(xì)胞沉淀物裂解，在12，OOOrpm離心IO分鐘，并收集上清液。然后，-使用^t平板閱讀器測量細(xì)胞溶液在492nm處的吸光度，并且估算酪氨酸酶活性/細(xì)胞常數(shù)。實驗結(jié)果概括于表5中。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實施例5:動物水平中皮膚增白作用的評價使用棕色豚鼠(CharlesRiverLaboratories,Inc.)測量苦參堿和氧化苦參堿的增白作用，已知豚鼠暴露于紫外線時與人一樣能增加其色素沉著。為了引起棕色豚鼠中由紫外線(UV)引起的色素沉著，將帶有3x3ci^方格的鋁箔粘在棕色豚鼠除去毛發(fā)的腹部皮膚，然后使用SE燈(波長290-320nm，Toshiba)對其上照射UV光(總照射能量=1350mJ/cm2)。UV照射后，除去鋁箔，并按照以下的方法施用樣品(苦參堿、氧化苦參堿或熊果苷)。在UV照射后第2天或第3天觀察到提高的色素沉著，并且在約2周后達(dá)到最大。從最大開始，施用樣品。施用一天進(jìn)行一次或兩次，持續(xù)50天。將樣品溶解或稀釋于特定溶劑中(丙二醇乙醇水-5:3:2)并通過棉簽施用。只含有溶劑的對照施用至另一部位。還檢查了累積刺激的發(fā)生。使用色度測量計(CR2002,MINOLTA,JP)測定皮膚色素沉著的程度來評估所用樣品的作用。結(jié)果顯示于以下的表6中。使用L'a'b'比色體,系將顏色分級并且將L'值用作本發(fā)明中的標(biāo)準(zhǔn)。使用白板標(biāo)準(zhǔn)校正L'值，并且在一個部位重復(fù)測量超過五次。色素沉著均勻分布。獲得施用最初點和施用最終點之間的膚色差異(AL')，然后使用這些值，計算施用樣品的作用。等式l△L'-施用后00天時的L'值-施用開始那天的L'值在樣品施用部位和對照施用部位都獲得AL'值并比較，由此可以評價增白物質(zhì)的作用。這些實驗結(jié)果概括于以下的表6中。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>如表6中所述，苦參堿和氧化苦參堿以濃度依賴性方式呈現(xiàn)出增白作用。此外，苦參堿和氧化苦參堿比熊果苷顯示出更好的增白作用，并且還具有安全性，因為沒有觀察到累積刺激的發(fā)生。實施例6:苦參堿和氧化苦參堿對人皮膚的安全性測試為了確定苦參堿和氧化苦參堿對用于人皮膚上是否安全，進(jìn)行了皮膚安全性測試。為此合適的是累積皮膚刺激測試。將含有1°/。、5%和10%含量苦參堿和氧化苦參堿的角鯊烯基制劑在貼劑中施用于30名健康成人的上臂9次，每人一天一次，持續(xù)24小時的總時間段。進(jìn)行這24-小時累積貼劑測試來測定苦參堿和氧化苦參堿是否刺激了皮膚。選擇芬蘭室(Epitest有限公司，芬蘭)作為貼敷方法。將以上用于外用于皮膚上的制劑以15ja1的含量滴入每個室中，并施用貼劑。使用以下的等式1將每個測試皮膚上的反應(yīng)水平評分，并且結(jié)果顯示于表7中。等式2平均反應(yīng)水平-[U反應(yīng)指數(shù)x反應(yīng)水平)/測試患者的數(shù)目x最大點(4點)}x100]+測試的數(shù)目(9次)根據(jù)反應(yīng)水平來標(biāo)記點，例如，±表示1點，+表示2點，而++表示四點。如果平均反應(yīng)水平低于3，可以認(rèn)為組合物是安全的。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>在表7中，人的數(shù)目各自為零、1、2、零、2和2，對于測試l、2、3、4、5和6中所有的士、+和++，計算平均反應(yīng)水平不超過3。因為平均反應(yīng)水平低于3，證明苦參堿和氧化苦參堿對于人皮膚是安全物質(zhì)，沒有顯示出任何明顯的累積刺激。實施例7:抗氧化作用已知超氧化物岐化酶(SOD)是抗氧化催化酶，其將超氧化物陰離子轉(zhuǎn)化成&02和02。該實驗通過觀察除去由黃嘌呤氧化酶產(chǎn)生的超氧化物陰離子來評價樣品的抗氧化活性。使用購自Dojindo(JP)的試劑盒(S0D測試試劑盒-WST)根據(jù)制造商的實驗方案來進(jìn)行實驗。實驗結(jié)果概括于表8中。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>來測量所鑒定條帶的放射性(表9)。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>如表9中所述的，結(jié)果提出苦參堿和氧化苦參堿隨著處理濃度提高有效地抑制了COX活性。從這些結(jié)果，發(fā)現(xiàn)了苦參堿和氧化苦參堿具有炎癥抑制作用。實施例9:免疫抑制作用的評價為了檢測該實施例中所用的樣品是否抑制與炎癥相關(guān)的免疫應(yīng)答，進(jìn)行了白細(xì)胞間介素-2熒光素酶報告子活性的實驗。報道了保細(xì)胞間介素-2啟動子在炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子的產(chǎn)生中起著重要作用。使用以下方法測量了白細(xì)胞間介素-2熒光素酶的活性將人T淋巴細(xì)胞系，1x106個Jurkat細(xì)胞(韓國細(xì)胞系庫)等分至6-孔的每個孔中，使用superfect轉(zhuǎn)染試劑(Invitrogen)轉(zhuǎn)染IL-2熒光素酶報告子質(zhì)粒DNA(Stratagene)。轉(zhuǎn)染后24小時，處理PHA(植物血球凝集素，Sigma)(100ng/ml)來激活Jurkat細(xì)胞，并且用不同的濃度來處理每種樣品。24小時后，收集細(xì)胞并使用光度計(BertholdTechnologiesGmbH&Co.KG，德國)測量焚光素酶活性。結(jié)果才既括于表10中。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>表ll<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>如表11中所示的，在苦參堿和氧化苦參堿中，體重增加得到抑制。觀察到按照給藥的濃度，作用的優(yōu)點很高。實施例11:預(yù)防脫發(fā)和促進(jìn)頭發(fā)生長的作用為了測量預(yù)防脫發(fā)和促進(jìn)頭發(fā)生長的作用，制備只含有粘度增強劑和防腐劑的水凝膠基形式的樣品，并進(jìn)行測試。將為促進(jìn)頭發(fā)生長制備的每3cc外用液體施用至IO名脫發(fā)患者的脫發(fā)部位，一天兩次，持續(xù)3個月。結(jié)果，含有樣品的液體顯示出極好的作用，如8名脫發(fā)患者產(chǎn)生了發(fā)根。實驗結(jié)果如下。對照組使用購自Hanmipharmaceutical的米諾地爾(moxidil)。表12<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>如表12中所示的，結(jié)果證明本發(fā)明的苦參堿和氧化苦參堿發(fā)揮出一如2所述，本發(fā)明;;;含有苦參:和丄化)參堿作為活性成分的用于改善皮膚狀況的組合物。苦參堿和氧化苦參堿與用作抗皺劑的視黃醇相比具有更低的細(xì)胞毒性，并在分子水平上呈現(xiàn)出對膠原酶活性的抑制作用和對膠原蛋白生物合成的促進(jìn)作用，并且作為結(jié)果，呈現(xiàn)出極好的改善皮膚皺紋的功效。此外，苦參堿和氧化苦參堿通過抑制胞內(nèi)酪氨酸酶活性呈現(xiàn)出對黑色素產(chǎn)生的抑制作用，改善uv誘發(fā)的皮膚損傷的作用和促進(jìn)皮膚生長或預(yù)防脫發(fā)。因此，苦參堿和氧化苦參堿具有極好的抗肥胖和抗氧化作用。由于不具有細(xì)胞毒性和副作用，本發(fā)明的組合物可以用于化妝品、藥物和食品組合物中。已經(jīng)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，應(yīng)當(dāng)理解落入本發(fā)明精神內(nèi)的變化和改變是本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的，并且本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等價物來確定。權(quán)利要求1.用于改善皮膚狀況的含有苦參堿或氧化苦參堿作為活性成分的組合物，其中皮膚狀況是皺紋、增白、UV誘發(fā)的皮膚損傷或頭發(fā)生長。2.用于抗氧化的含有苦參堿或氧化苦參堿作為活性成分的組合物。3.用于抗肥胖的含有苦參堿或氧化苦參堿作為活性成分的組合物。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項的組合物，其中苦參堿或氧化苦參堿以0.0001-10wt。/。的量存在，基于組合物的總重。5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項的組合物，其中組合物是化妝品組合物。6.根據(jù)權(quán)利要求5的組合物，其中組合物是選自溶液、懸浮液、乳液、糊劑、凝膠、霜劑、化妝水、粉末、肥皂、含表面活性劑的清潔劑、油、粉底粉、粉底乳、粉底蠟和噴霧劑之一的形式。7.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項的組合物，其中組合物是藥物組合物。8.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項的組合物，其中組合物是食品組合物。9.用于改善皮膚狀況的方法，其包括將含有苦參堿或氧化苦參堿作為活性成分的組合物施用于受試者。10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中皮膚狀況是皺紋、增白、UV誘發(fā)的皮膚損傷或頭發(fā)生長。11.用于預(yù)防氧化的方法，其包括將含有苦參堿或氧化苦參堿作為活性成分的組合物施用于受試者。12.用于抑制肥胖的方法，其包括將含有苦參堿或氧化苦參堿作為活性成分的組合物施用于受試者。13.根據(jù)權(quán)利要求9至12任一項的方法，其中苦參堿或氧化苦參堿以0.0001-10wt。/。的量存在，基于組合物的總重。14.根據(jù)權(quán)利要求9至13任一項的方法，其中組合物是化妝品組合物。15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中組合物是選自溶液、懸浮液、乳液、糊劑、凝膠、霜劑、化妝水、粉末、肥皂、含表面活性劑的清潔劑、油、粉底、粉底乳、粉底蠟和噴霧劑之一的形式。16.根據(jù)權(quán)利要求9至13任一項的方法，其中組合物是藥物組合物。17.根據(jù)權(quán)利要求9至13任一項的方法，其中組合物是食品組合物。18.苦參堿或氧化苦參堿用于制造改善皮膚狀況的組合物的用途。19.根據(jù)權(quán)利要求18的苦參堿或氧化苦參堿的用途，其中皮膚狀況是皺紋、增白、UV誘發(fā)的皮膚損傷或頭發(fā)生長。20.苦參堿或氧化苦參堿用于制造抗氧化組合物的用途。21.苦參堿或氧化苦參堿用于制造抗肥胖組合物的用途。22.根據(jù)權(quán)利要求18至21任一項的苦參堿或氧化苦參堿的用途，其中苦參堿或氧化苦參堿以0.0001-10wty。的量存在，基于組合物的總重。23.根據(jù)權(quán)利要求18至22任一項的苦參堿或氧化苦參堿的用途，其中組合物是化妝品組合物。24.根據(jù)權(quán)利要求23的苦參堿或氧化苦參堿的用途，其中組合物是選自溶液、懸浮液、乳液、糊劑、凝膠、霜劑、化妝水、粉末、肥皂、含表面活性劑的清潔劑、油、粉底粉、粉底乳、粉底蠟和噴霧劑之一的形式。25.根據(jù)權(quán)利要求18至22任一項的苦參堿或氧化苦參堿的用途，其中組合物是藥物組合物。26.根據(jù)權(quán)利要求18至22任一項的苦參堿或氧化苦參堿的用途，其中組合物是食品組合物。全文摘要本發(fā)明涉及用于改善皮膚狀況的含有苦參堿和氧化苦參堿作為活性成分的組合物。苦參堿和氧化苦參堿比用作抗皺劑的視黃醇具有更低的細(xì)胞毒性，并在分子水平呈現(xiàn)出對膠原酶活性的抑制作用和對膠原蛋白生物合成的促進(jìn)作用，對皮膚皺紋的改善具有極好的功效。此外，苦參堿和氧化苦參堿通過抑制胞內(nèi)酪氨酸酶活性呈現(xiàn)出對黑色素產(chǎn)生的抑制作用，UV誘發(fā)的皮膚損傷的改善作用和促進(jìn)皮膚生長或防止脫發(fā)。因此，苦參堿和氧化苦參堿對皮膚狀況具有極好的改善作用。此外，苦參堿和氧化苦參堿具有極好的抗肥胖和抗氧化作用。本發(fā)明的組合物可以用于化妝品、藥物和食品組合物中，沒有細(xì)胞毒性和副作用。文檔編號A61K8/49GK101641081SQ200880009614公開日2010年2月3日申請日期2008年2月21日優(yōu)先權(quán)日2007年2月21日發(fā)明者樸德勛,李鐘星,鄭恩善申請人:生物光譜公司