專利名稱：一種人類同種異體細(xì)胞提取液及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種人類同種異體細(xì)胞提取液，屬于細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)與人體保健領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
人體由各個(gè)系統(tǒng)組成，系統(tǒng)由各種組織組成，組織則由各種細(xì)胞 組成。有生命的機(jī)體內(nèi)各個(gè)細(xì)胞時(shí)時(shí)刻刻都在進(jìn)行著新陳代謝，并保 持正常的自我穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)功能才能維持正常的內(nèi)環(huán)境并抵抗來(lái)自外界 的各種致病因子的侵襲而不產(chǎn)生疾病。而細(xì)胞進(jìn)行新陳代謝并保持自 我穩(wěn)態(tài)需要消耗各種能源物質(zhì)。如核酸、氨基酸、微量元素、酶類、 免疫蛋白、各種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、多型膠原成分等。
我們通過嚴(yán)格的流程選取人類同種異體組織細(xì)胞，通過嚴(yán)格的流 程選取人類同種異體組織細(xì)胞，經(jīng)體外細(xì)胞培養(yǎng)，成為含有多種生物 學(xué)活性成分的細(xì)胞。采用超低溫萃取技術(shù)分離出細(xì)胞液，對(duì)細(xì)胞液中 的細(xì)胞進(jìn)行物理破壁處理后，將細(xì)胞的胞漿和細(xì)胞核中的核酸、多種 短肽、多肽細(xì)胞因子、多種氨基酸、微量元素等釋放到細(xì)胞液中，使 細(xì)胞液中富含核酸、氨基酸、天然免疫蛋白、細(xì)胞生長(zhǎng)因子群、多型 膠原成分等?？蓪⑵渲苽涑删哂屑?xì)胞生物學(xué)活性功能的制劑，作用于 人體后可提高機(jī)體細(xì)胞代謝功能、增強(qiáng)機(jī)體免疫力，并可改善皮膚彈
性與光澤等功效。通過各項(xiàng)安全性檢測(cè)未見毒副作用。
核酸、氨基酸和微量元素等合成蛋白質(zhì)的基本物質(zhì)，可提高細(xì)胞 質(zhì)量，使酶系統(tǒng)保持像正常的催化功能；天然免疫蛋白可以抵御和修 復(fù)機(jī)體自身和自然界對(duì)機(jī)體細(xì)胞的損傷；具有刺激細(xì)胞生長(zhǎng)作用的細(xì) 胞生長(zhǎng)因子群(包括轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-P、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮 細(xì)胞生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、干細(xì)胞生長(zhǎng)因子等)，對(duì)機(jī)體 細(xì)胞(含干細(xì)胞)的增殖與分化和新陳代謝、提高新生細(xì)胞所占比例、 替代更新原有的因衰老或病理性等因素所造成組織細(xì)胞的衰退和老 化等具有關(guān)鍵作用。由于機(jī)體細(xì)胞的新陳代謝被細(xì)胞因子群調(diào)控至最 佳狀態(tài)，機(jī)體細(xì)胞保持水分的能力也大大增強(qiáng)。多型膠原成分，可促 進(jìn)真皮層內(nèi)纖維母細(xì)胞增殖、成纖維母細(xì)胞合成和分泌更多膠原蛋 白，修復(fù)老化受損的膠原纖維與彈性纖維，還原肌膚彈性，使皮膚均 勻緊致。在細(xì)胞因子群調(diào)控下，誘導(dǎo)皮膚真皮組織內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞定 向增殖分化為成纖維細(xì)胞，成纖維細(xì)胞的數(shù)量大大增加進(jìn)而成源源 不斷分泌自體膠原蛋白。這種自體成纖維細(xì)胞在真皮下合成和分泌的 自體膠原蛋白能更好地與機(jī)體組織融合，使膠原蛋白重新支撐起皮 膚，真皮層厚度和密度增加，進(jìn)而消除皺紋，使老化的皮膚重新恢復(fù) 彈性與光澤。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種用于人體保 健和美容的人類同種異體細(xì)胞提取液。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述細(xì)胞提取液在制備用于提高機(jī)
體細(xì)胞代謝功能或增強(qiáng)機(jī)體免疫力的藥物或保健品中的應(yīng)用。 一種人類同種異體細(xì)胞提取液，由如下步驟制備而成
(1) 選取健康產(chǎn)婦新鮮胎盤、臍帶及其他同種異體組織；
(2) 將原料剪碎放置于容器中，用去熱原水將剪碎組織清洗，
瀝干；
(3) 加入注射用水，開啟勻漿機(jī)以8000 10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速勻
漿；
(4) 將勻漿液分裝到血袋中，封口，將分裝得到血袋經(jīng)平衡后， 置于離心機(jī)內(nèi)2500 3000轉(zhuǎn)/分離心，取上清液；
(5) 將上清液經(jīng)50kD的中空纖維柱超濾，濾出液用50kD的中 空纖維柱再次超濾，收獲濾液，即為原液；
(6) 除菌，滅活病毒。
本發(fā)明制得的人類同種異體細(xì)胞提取液含有核酸、氨基酸、天然 免疫蛋白、細(xì)胞生長(zhǎng)因子群、多型膠原成分等的細(xì)胞液。該細(xì)胞液能 提高機(jī)體細(xì)胞代謝功能和增強(qiáng)機(jī)體免疫力?？芍瞥勺⑸溽槃?、涂劑、 膏劑、霜?jiǎng)┗蚍蹌?br> 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果 本發(fā)明通過嚴(yán)格的流程選取人類同種異體組織細(xì)胞，經(jīng)體外細(xì) 胞培養(yǎng)，成為含有多種生物學(xué)活性成分的細(xì)胞。采用超低溫萃取技術(shù) 分離出細(xì)胞液，對(duì)細(xì)胞液中的細(xì)胞進(jìn)行物理破壁處理后，將細(xì)胞的胞 漿和細(xì)胞核中的核酸、多種短肽、多肽細(xì)胞因子、多種氨基酸、微量 元素等釋放到細(xì)胞液中，使細(xì)胞液中富含核酸、氨基酸、天然免疫蛋
白、細(xì)胞生長(zhǎng)因子群、多型膠原成分等。制得的細(xì)胞液可開發(fā)成具有
細(xì)胞生物學(xué)活性功能的制劑，作用于人體后可提高機(jī)體細(xì)胞代謝功
能、增強(qiáng)機(jī)體免疫力，并可改善皮膚彈性與光澤等功效。通過各項(xiàng)安
全性檢測(cè)未見毒副作用。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1
1. 從事細(xì)胞提取液生產(chǎn)人員應(yīng)具備醫(yī)學(xué)或生物學(xué)知識(shí)，且上崗前 手過嚴(yán)格操作培訓(xùn)。
2. 生產(chǎn)環(huán)境分離室潔凈度要求為整體萬(wàn)級(jí)，局部百級(jí)。
3. 生產(chǎn)設(shè)備高速勻漿機(jī)、離心機(jī)(5810R)、水浴箱、干燥箱、封蓋 機(jī)(置于車間內(nèi))、超凈臺(tái)、血液分離夾、高頻電耦封口機(jī)、澄明度
檢測(cè)臺(tái)、電子稱、PH計(jì)、冰箱、冰柜、真空泵、超凈工作臺(tái)。
4. 生產(chǎn)用具量筒、燒杯、鑷子(大，中，小號(hào))，剪刀兩把、止血
鉗、不銹鋼托盤、微量移液器(1000ul， 100ul， 10ul)、 30KD超濾管、 酒精燈、封口膜、打火機(jī)、西林瓶、瓶塞、瓶蓋、酒精噴壺500ml、 廢液缸、普通天平。
5. 易耗品75%酒精、針式過濾器、無(wú)菌副壓抽濾瓶、注射器(50ml、 20ml)、去離子水、注射用水、微量移液器吸嘴(1000ul、 200 ul、 10 ul)、 45ml無(wú)菌無(wú)熱原離心管、200ml血袋、醫(yī)用紗布、鱟試劑及檢 測(cè)用水、病毒檢測(cè)試劑(HBs、抗-HCV、抗-HIVl/2、梅毒檢測(cè)試劑)、 棉簽、84消毒液、生理鹽水、無(wú)菌無(wú)熱原不銹鋼盆。生產(chǎn)用源符合 飲用水標(biāo)準(zhǔn);純化水及注射用水符合現(xiàn)行《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。
6. 原材料的購(gòu)買、運(yùn)輸、接收、儲(chǔ)存及質(zhì)量控制
符合現(xiàn)行《中國(guó)藥典》或《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》的 要求。
6.1選取健康產(chǎn)婦新鮮胎盤、臍帶及其他同種異體組織。凡患有肝炎、 惡性腫瘤、免疫缺陷病、艾滋病、各種傳染病、人工流產(chǎn)、死胎、各 種畸形兒之胎盤及臍帶等組織不得使用；肉眼檢測(cè)外觀不正常或有腐 臭變質(zhì)的胎盤、臍帶等組織不得使用。
6.2胎盤娩出后，立即由接生人員用無(wú)菌操作放入滅菌容器(食品級(jí) 塑料袋)內(nèi)，并立即冷藏(10。C以下)，在收集運(yùn)輸過程中也應(yīng)冷藏。收 集的胎盤學(xué)逐支用國(guó)家藥品管理當(dāng)局批準(zhǔn)的試劑盒進(jìn)行抗-HBs、抗 -HBc等項(xiàng)檢測(cè)。
6.3 HBV標(biāo)志物陰性胎盤，再進(jìn)行抗-HCV、抗-HIV-l/HIV-2和梅毒
檢測(cè)，陰性者為合格胎盤。
6.4檢出合格的胎盤應(yīng)于-2(TC凍存,并在胎盤娩出后6個(gè)月內(nèi)投入生產(chǎn)。
7. 制備流程
按中國(guó)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求實(shí)施。 7.1將生產(chǎn)設(shè)備放置于車間的適當(dāng)位置，檢查所有生產(chǎn)設(shè)備的運(yùn)行情 況，填寫報(bào)告；
7.2器械和設(shè)備的清潔及無(wú)熱原處理
7.3將2000ml燒杯1個(gè)、500m 14個(gè)按清洗操作規(guī)程洗凈后用錫箔紙 封口放置于干燥箱內(nèi)250°C加熱1小時(shí)，待冷卻后取出并置于超凈臺(tái)
內(nèi)紫外消毒備用。
將高速勻漿機(jī)轉(zhuǎn)子、剪刀用1 %的84消毒液浸泡1小時(shí)后，用無(wú)熱原水清洗5遍并置于超凈臺(tái)內(nèi)紫外消毒備用。
7.4將高速勻漿機(jī)用75°/。酒精擦拭消毒置于超凈臺(tái)內(nèi)消毒。
7.5將用200倍稀釋的84消毒液浸泡12小時(shí)的超濾管(30kd)用去離子水清洗5遍，再用注射用水清洗5遍，置于超凈臺(tái)內(nèi)瀝干備用。
7.6西林瓶及瓶塞、瓶蓋的處理按照相應(yīng)清洗操作規(guī)程嚴(yán)格執(zhí)行。
7.7將微量移液器吸嘴(1000 ul、 200 ul、 10ul)、棉簽、醫(yī)用紗布1包、鑷子(大，中，小各兩把)，剪刀兩把、止血鉗10把、不銹鋼托盤3個(gè)高壓滅菌121 °C， 30分鐘，烘干備用。
7.8開啟車間紫外燈消毒1小時(shí)。
7.9將原料放置于4 'C解凍12小時(shí)，使用無(wú)熱原錫箔紙稱取對(duì)應(yīng)重 量的原料，用剪刀剪碎組織至每塊大小為2x2x2cm3，將剪碎組織 放置于500ml燒杯中。用去熱原水將剪碎組織清洗3次，每次用水量 為剪碎組織的3倍，洗后瀝干。
7.10在瀝干后的組織中加入1.5倍于組織的注射用水，開啟勻漿機(jī)以 8000 10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速勻漿2分鐘。
7.11將勻漿液用50ml注射器分裝到200ml血袋中，高頻電耦封口機(jī) 封口。
(以上操作均在超凈臺(tái)內(nèi)無(wú)菌操作) 7.12將分裝得到的200ml血袋經(jīng)平衡后，置于離心機(jī)內(nèi)2500 3000 轉(zhuǎn)/分離心30分鐘，并于血液分離夾上操作并取上清液；將上清液經(jīng)
50kD的中空纖維柱超濾，濾出液用50kD的中空纖維柱再次超濾， 收獲濾液，即為原液。
7.13將超濾管置入45ml離心管內(nèi)，于超凈臺(tái)內(nèi)將收集的離心上清液 加入超濾管中，每管不超過5ml離心，3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘； 7.14取出超濾液置于45ml無(wú)熱原離心管內(nèi)，經(jīng)0.22|im微孔濾膜過 濾除菌2次；
(以上細(xì)胞液提取工作均置于冰袋之上進(jìn)行低溫操作) 7.15進(jìn)行60'C水浴加溫10小時(shí)滅活病毒10小時(shí)。 8.體外細(xì)胞培養(yǎng) 8.1體外培養(yǎng)環(huán)境
工作環(huán)境要求清潔、空氣干燥和無(wú)煙塵。 8丄1無(wú)菌培養(yǎng)室的空氣等徹底消毒，所有操作均要嚴(yán)格實(shí)行無(wú)菌 操作，各種物品拿入操作臺(tái)前應(yīng)消毒，用灑精擦表面，用前于紫外線 照；操作者洗手、泡手，酒精擦手，打開培養(yǎng)管前須在火焰上烙燒一 下瓶口以使灰塵固定，操作時(shí)須將瓶、管斜放，吸管注入液體應(yīng)避免 和瓶口接觸，操作時(shí)禁止講話。
8丄2溫度組織培養(yǎng)的最適溫度為35-37。C，偏離這一溫度范圍，細(xì) 胞的正常代謝和生長(zhǎng)將會(huì)受到影響，甚至導(dǎo)致死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫 的耐受力比高溫強(qiáng)。溫度增加2-3"C對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生不良影響，使之在24 小時(shí)死亡，溫度在43"C以上，細(xì)胞大多被殺滅，而低溫對(duì)細(xì)胞影響 較小，細(xì)胞置于25-35'C時(shí)，細(xì)胞仍能生存和生長(zhǎng)，但速度緩慢，放 在4'C數(shù)小時(shí)之后，再置37'C培養(yǎng)，細(xì)胞仍能繼續(xù)生長(zhǎng)。
8丄3.氣體所需的氣體主要有02和C02。 02參與三羧酸循環(huán)產(chǎn)生能 量供給細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和合成各種成分。C02既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物也是
細(xì)胞所需成分。它主要與維持培養(yǎng)液pH值有直接關(guān)系。 8丄4pH值多數(shù)細(xì)胞的適宜pH值為7.0-7.4，偏離此范圍對(duì)細(xì)胞可 產(chǎn)生有害的影響。培養(yǎng)液中的緩沖體系主要是碳酸氫鹽緩沖對(duì)。 8丄5.培養(yǎng)器皿的處理大多數(shù)細(xì)胞屬于貼壁依賴性細(xì)胞或培養(yǎng)物。 玻璃器皿須用清潔液浸泡1至7天，清水沖洗20次后再用蒸餾水過 洗2次，烤干備用。用前160'C高溫消毒2小時(shí)后使用。 8.2傳代細(xì)胞的靜置培養(yǎng)
每天要仔細(xì)觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況來(lái)決定是否要換液或傳代。用倒 置顯微鏡對(duì)活細(xì)胞形態(tài)、胞槳和胞膜進(jìn)行觀察。生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞 透明度大，細(xì)胞內(nèi)顆粒少，看不見空泡，胞膜清晰，折光性強(qiáng)。培養(yǎng) 上清液清晰透明，看不見懸浮的細(xì)胞和碎片。細(xì)胞機(jī)能不良時(shí)，胞質(zhì) 中常出現(xiàn)空泡，脂滴和其它顆粒狀物，細(xì)胞之間空隙加大，細(xì)胞形態(tài) 可變得不規(guī)則，甚至失去原有的特點(diǎn)。只有狀態(tài)良好的細(xì)胞才能用來(lái) 做實(shí)驗(yàn)。 一般在細(xì)胞接種或傳代后，每天或至多間隔l-2天，應(yīng)觀察 細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞生長(zhǎng)、培養(yǎng)液PH值和污染與否等，隨時(shí)掌握細(xì)胞動(dòng) 態(tài)變化，以便于做換液或傳代處理。如發(fā)現(xiàn)異常情況，及時(shí)采取措施。 正常情況下，培養(yǎng)液呈桃紅色，用一般溫箱培養(yǎng)時(shí)，隨細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)間 的延長(zhǎng)，二氧化碳積累增多，由于培養(yǎng)基內(nèi)有PH指示劑的存在，其 顏色可間接反映細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。呈橙黃色時(shí)，細(xì)胞一般生長(zhǎng)狀態(tài)較 好；呈淡黃色則可能是培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)，營(yíng)養(yǎng)不足，死亡細(xì)胞過多；呈
紫紅色則可能是細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好或已死亡。
8.3培養(yǎng)細(xì)胞的保存和復(fù)蘇 8.3.1影響凍存細(xì)胞活性的因素
S.3丄l細(xì)胞凍存保護(hù)劑常用的有二甲基亞砜(DMSO)和甘油，常 用的濃度為5%-10% (90%小牛血清)。DMSO對(duì)二倍體細(xì)胞的毒性 較甘油小。
8.3.1.2細(xì)胞懸液的凍結(jié)速度慢凍時(shí)冰凍在細(xì)胞外形成，因此不致?lián)p 害細(xì)胞。多數(shù)細(xì)胞以每分鐘下降rC的速度，降至-2(TC凍結(jié)。均可獲
得滿意效果。
8.3丄3保存溫度液氮罐，可達(dá)到-196'C，此時(shí)所有的物理化學(xué)活動(dòng) 均降至最低限度，以保證細(xì)胞長(zhǎng)期保存。
8.3丄4復(fù)蘇急速融化復(fù)蘇可防止損害細(xì)胞。凍結(jié)細(xì)胞從液氮中取出 后，應(yīng)立即放入37。C 43。C的水浴中，30秒至一分鐘內(nèi)融化。 8.3.2.凍存與復(fù)蘇方法
8.3.2.1細(xì)胞用胰蛋白酶+EDTA消化后用凍存液稀至2 5X106/ml。 8.3.2.2分裝于2ml凍存管中，裝量lml，封口，作好標(biāo)記，用幾層紗 布扎好。
8.3.2.3凍存管進(jìn)入液氮前應(yīng)有一個(gè)漸降溫的過程，以rC/min的速度 降溫， 一般掛在液氮上空8小時(shí)后，投入液氮貯存罐中長(zhǎng)期保存。 8.3.2.4為使凍存的細(xì)胞復(fù)蘇，將凍存管置于37。C 43。C水浴中，充 分搖動(dòng)使其急速融化，30秒至1分鐘內(nèi)完成。
8.3.2.5細(xì)胞懸液低速離心，去除上清中的保護(hù)添加劑，加入原來(lái)使用
的生長(zhǎng)液，置37'C培養(yǎng)。 8.4.試劑
8.4.1將1640溶于新蒸的三次蒸餾水中，攪拌使其充分溶解，過濾除 菌即可。
8.4.2小牛血清用前56°CX30分鐘滅活(破壞補(bǔ)體)分裝置-2(TC保存?zhèn)溆谩?br> 8.4.3青鏈雙抗液將100萬(wàn)單位的青霉素鈉鹽和硫酸鏈霉素用高壓2 次后的三蒸水100ml充分溶解，分裝凍存于-20。C，使用前融化，每 100ml生長(zhǎng)液中加lml，即使用終濃度為含RS 100pg/ml。(注P.S
不能凍融多次，應(yīng)少量分裝， 一次用完)。
8.4.4使用NaHC03液調(diào)整pH值，常用濃度為5 6%，配制用三蒸 水溶解后過濾除菌或高壓滅菌，分裝4'C保存。 8.4.5胰蛋白酶:在pH 8.0，溫度37"C時(shí)作用力最強(qiáng)。 8.4.6 EDTA液
8.4.7細(xì)胞凍存液小牛血清90%與二甲基亞砜(DMSO) 10%混合; -2(TC冰箱保存?zhèn)溆谩；蛐∨Ｑ?0%， 1640培養(yǎng)液60%， DMSO10c/o 混合;-2(TC冰箱保存?zhèn)溆谩?10.檢測(cè)
按2000年版規(guī)程附錄《生物制品化學(xué)及其他檢定方法》進(jìn)行. 10.1無(wú)菌實(shí)驗(yàn)按2002年版規(guī)程通則《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》A 項(xiàng)進(jìn)行；
10.2內(nèi)毒素檢測(cè)按2002年版規(guī)程通則《生物制品細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)
規(guī)程》進(jìn)行。滴度應(yīng)低于l: 500;細(xì)胞內(nèi)毒素含量應(yīng)不高于5EU/ml; 10.3病毒檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)為陰性；
10.4熱原質(zhì)試驗(yàn)按2002年版規(guī)程通則《生物制品熱原質(zhì)試驗(yàn)規(guī)程》 進(jìn)行；
10.5異常毒性試驗(yàn)按2002年版規(guī)程通則《生物制品異常毒性試驗(yàn) 規(guī)程》進(jìn)行.
10.6指紋圖譜檢測(cè)SDA-PAGE法分析應(yīng)出現(xiàn)3條主要帶；66kd 23kd 10kd
10.7蛋白檢測(cè)應(yīng)在lg/L左右；
10.8 PH:為6.7 7.3;
10.9多肽含量用BCA法測(cè)定，應(yīng)不低于1.0mg/ml; 10.10核酸含量應(yīng)不低于800pg/ml
10.11顏色應(yīng)為無(wú)色或微黃澄明液體，不應(yīng)有異物、渾濁或沉淀。
11. 分批
按2002年版規(guī)程通則《生物制品分批規(guī)程》進(jìn)行。
12. 分裝
按2002年版規(guī)程通則《生物制品分裝規(guī)程》進(jìn)行。 12.1將經(jīng)檢測(cè)合格原液調(diào)整至相應(yīng)濃度后，使用0.22um過濾器連續(xù) 過濾2次并將濾液置于45ml離心管；
12.2使用1000ul微量移液器，吸取濾液分裝至西林瓶，每瓶2.2ml， 加蓋膠塞及鋁塑；
(以上分裝過程須在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行)
12.3將加蓋膠塞及鋁塑蓋的西林瓶置于封蓋機(jī)上封口。
13. 規(guī)格每支裝量2ml不等。多肽含量應(yīng)不少于2mg/支。
14. 入庫(kù)經(jīng)澄明度檢測(cè)合格后，貼好標(biāo)簽放置于2t:-8t:的條件下保
存，做好相關(guān)記錄。
15. 保存、運(yùn)輸及有效期2.8'C避光保存及運(yùn)輸,自胎盤投料之日起有 效期為2年.
16. 注射用針劑的使用
16.1準(zhǔn)備好一次性塑料注射器(5ml規(guī)格，配備相應(yīng)針頭)，
16.2核對(duì)好注射劑名稱、型號(hào)，核查被注射者的姓名及適用指證，用 注射器抽吸注射劑5ml。
16.3囑被注射者取臥位或坐位,囑病人靜止不動(dòng)，肌肉放松。注射部 位常取一側(cè)臀部外上1/4區(qū)(在骶骨尖處引一水平線，再以髂后上棘 與脊柱距離之中點(diǎn)作一垂直線與水平線相交，將臀部分為4個(gè)區(qū))。 取消毒醫(yī)用棉球蘸取適量酒精(濃度75%)，先后由該注射點(diǎn)為圓心 逐漸向外周旋轉(zhuǎn)擦拭，使用四根以上酒精棉球重復(fù)以上消毒過程。
16.4左手拇指與食指繃緊注射部位皮膚，右手持注射器使針頭與皮膚 垂直，迅速刺入肌層，針頭刺入深度約2-3CM(根據(jù)不同部位及病人 胖痩而定，針頭不能全部刺入)。然后左手拇指與食指固定針頭，右手 回抽注射器內(nèi)栓。若回抽有一定阻力且無(wú)回血，即可將藥液緩慢推入 (為小兒注射推藥要稍迅速)；若有回血，可將針頭拔出少許再行試 抽。推藥完畢迅速拔出針頭，以無(wú)菌干棉球按壓針眼片刻，不要立即
用手按揉。
17.皮膚外用涂劑及液體的使用
17.1晨起后或晚睡前取適量溫水(37t:左右)濕潤(rùn)皮膚1-2分鐘，滴 取潔面乳液適量至手心揉勻，輕輕揉搓面部或其他皮膚部位約3分鐘 后，取適量溫水(37"C左右)清洗潔面乳揉搓的部位。
17.2晨起后用潔面乳清潔面部后，分別取活膚日霜、去鈹霜、美白 霜等各適量，均勻輕輕涂抹至面部或其他皮膚部位；或單獨(dú)應(yīng)用以上 皮膚外用涂劑。
17.3晚睡前用潔面乳清潔面部后，取活膚乳液適量，均勻輕輕涂抹 至面部或其他皮膚部位。
17.4晨起后或晚睡前用潔面乳清潔面部后，分別用活膚液配備的取 液管(側(cè)面撕開鋁蓋后取下密封膠塞，套上取液管)取活膚液lml 均勻涂抹面部,輕微按摩至充分吸收。2-3分鐘后再次熱敷1分鐘，取 活膚液lml均勻涂抹面部肌膚，輕微按摩3分鐘，使其充分吸收。每 支在打開瓶蓋后未一次性使用完畢，扣嚴(yán)膠塞后置4'C至8"C冷藏箱 保存，每支儲(chǔ)存不超過24小時(shí)。每使用14ml (7支)后，間隔3天 再次使用活膚液。取液管用后請(qǐng)用清水沖洗干凈放置盒內(nèi)備用。
權(quán)利要求
1. 一種人類同種異體細(xì)胞提取液，其特征在于由如下步驟制備而成(1)選取健康產(chǎn)婦新鮮胎盤、臍帶及其他同種異體組織；(2)將原料剪碎放置于容器中，用去熱原水將剪碎組織清洗，瀝干；(3)加入注射用水，開啟勻漿機(jī)以8000～10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速勻漿；(4)將勻漿液分裝到血袋中，封口，將分裝得到血袋經(jīng)平衡后，置于離心機(jī)內(nèi)2500～3000轉(zhuǎn)/分離心，取上清液；(5)將上清液經(jīng)50kD的中空纖維柱超濾，濾出液用50kD的中空纖維柱再次超濾，收獲濾液，即為原液；(6)除菌，滅活病毒。
2. 權(quán)利要求1所述細(xì)胞提取液在制備用于提高機(jī)體細(xì)胞代謝功能 或增強(qiáng)機(jī)體免疫力的藥物或保健品中的應(yīng)用。
3. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物的劑型為注射
全文摘要
本發(fā)明公開了一種人類同種異體細(xì)胞提取液及其應(yīng)用。本發(fā)明通過嚴(yán)格的流程選取人類同種異體組織細(xì)胞，經(jīng)體外細(xì)胞培養(yǎng)，成為含有多種生物學(xué)活性成分的細(xì)胞。采用超低溫萃取技術(shù)分離出細(xì)胞液，對(duì)細(xì)胞液中的細(xì)胞進(jìn)行物理破壁處理后，將細(xì)胞的胞漿和細(xì)胞核中的核酸、多種短肽、多肽細(xì)胞因子、多種氨基酸、微量元素等釋放到細(xì)胞液中，使細(xì)胞液中富含核酸、氨基酸、天然免疫蛋白、細(xì)胞生長(zhǎng)因子群、多型膠原成分等。制得的細(xì)胞液可開發(fā)成具有細(xì)胞生物學(xué)活性功能的制劑，作用于人體后可提高機(jī)體細(xì)胞代謝功能、增強(qiáng)機(jī)體免疫力，并可改善皮膚彈性與光澤等功效。通過各項(xiàng)安全性檢測(cè)未見毒副作用。
文檔編號(hào)A61K35/48GK101380332SQ20081021179
公開日2009年3月11日 申請(qǐng)日期2008年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月25日
發(fā)明者敏 陸 申請(qǐng)人:浙江金時(shí)代生物技術(shù)有限公司