專利名稱：：一種中藥組合物在制備防治腦缺血的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥組合物的用途，具體地，涉及一種中藥組合物在制備防治腦缺血的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：2005年11月2日公告的發(fā)明專利說明書CN1225250C公開了一種防治老年癡呆的中藥組合物，其主要由茯苓、白術(shù)和當歸組成的原料藥中的多糖、正丁醇提取物和/或揮發(fā)油有效部位組成，或者主要由選自茯茶、白術(shù)和當歸中的一種或兩種原料藥中的多糖、正丁醇提取物和/或揮發(fā)油有效部位組成。該中藥組合物可采用超臨界萃取和水提取的方法制得。上述中藥組合物具有防治老年癡呆的用途。本發(fā)明發(fā)掘了該中藥組合物新的醫(yī)藥用途。對于已知的藥物，發(fā)現(xiàn)其還具有治療另一種疾病的性能，從而可以治療另一種疾病，這種第二次醫(yī)藥用途發(fā)明對于滿足醫(yī)療臨床需求與市場需求，具有重要意義。鑒于第二次醫(yī)藥用途的重要作用，研究和開發(fā)上述中藥組合物的新用途具有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種中藥組合物的新用途，即在制備防治腦缺血的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種中藥組合物在制備防治腦缺血的藥物中的應(yīng)用，該中藥組合物由茯苓、白術(shù)和當歸三種原料藥的超臨界萃取物和/或水提取物，或者超臨界萃取物和/或水提取物有效部位組成。為敘述方便，將本發(fā)明茯苓、白術(shù)、當歸組成的中藥組合物簡稱為FBD。茯苓簡稱F、白術(shù)簡稱B、當歸簡稱D。本發(fā)明FBD可以采用以下方法制得將原料藥粉碎成粗粉，經(jīng)二氧化碳超臨界萃取得到超臨界萃取物，之后藥渣用水提取后得到水提取物；或者原料藥經(jīng)超臨界萃取得到超臨界萃取物后，藥渣用水提取后，加乙醇至含醇濃度為45-95%時沉淀，得到多糖，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取，得到正丁醇提取物；或者，所述原料藥用水煎煮，水提取液濃縮后，加乙醇至含醇濃度為45-95%時沉淀，得到多糖，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取，得到正丁醇提取物；多糖和正丁醇提取物是水提取物有效部位。在所述的超臨界萃取物和水提取物有效部位中可加入藥用載體或敷料，制成中藥制劑。常用制劑輔料可選用，崩解劑如羥丙基淀粉、羥丙纖維素、羧甲基淀粉鈉、羧甲基纖維素鈣、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等；填充劑如乳糖、蔗糖、甘露醇、微晶纖維素、糊精、淀粉、磷酸鈣、磷酸氫鈣、硫酸鈣、碳酸鈣、環(huán)糊精、微粉纖維素等；潤濕劑和粘合劑如乙醇、預(yù)膠化淀粉、聚維酮、羧甲基纖維素鈉、羥丙甲纖維素；潤滑劑如滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、微粉硅膠、氫化植物油、聚乙二醇4000和6000;潤濕劑如十二烷基硫酸鈉、吐溫80。本發(fā)明FBD的用量和療程可根據(jù)劑型、患者的年齡、疾病的輕重程度作適當調(diào)整，但一般為每日口服3次，每次2片，以l個月為一個療程，可連續(xù)使用l個療程或更長時間。為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面將用本發(fā)明FBD的藥理試驗及結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途在藥效學研究中發(fā)現(xiàn)1、在線栓法引起大鼠局灶性腦缺血后再灌注損傷實驗中，F(xiàn)BD組及陽性藥尼莫地平(2mg/kg)對線栓法造成的局灶性腦缺血-再灌注損傷均有明顯的治療作用。結(jié)果表明FBD能有效防治中風，腦缺血。2、在小鼠斷頭全腦缺血模型中，尼莫地平(5mg/kg)可使小鼠斷頭全腦缺血模型張口呼吸時間明顯的增加(p〈0.05)。FBD對呼吸時間有一定的延長作用，但與陰性組比較沒有顯著性差異。尼莫地平和FBD都可以顯著提高SOD活力，對MDA含量無明顯影響。結(jié)果表明FBD能有效防治中風，腦缺血。3、在四動脈阻斷大鼠全腦缺血再灌注損傷實驗中，F(xiàn)BD能延長模型大鼠缺血后腦電圖消失時間、縮短再灌注后腦電圖恢復時間和翻正反射恢復時間，效果與劑量呈正相關(guān)。結(jié)果表明FBD能有效防治中風，腦缺血。4、在FBD對麻醉犬外周及腦血流量影響的研究中，F(xiàn)BD對麻醉犬具有一定的降低腦部血管阻力，增加腦部血流量的作用，并且對動物的外周血壓也有類似尼莫地平的作用降低外周血壓，特別是舒張壓；減慢心率。但作用強度和作用時間均小于尼莫地平。FBD十二指腸給藥對腦部血流的改善作用在給藥后30min最明顯。結(jié)果表明FBD能有效防治中風，腦缺血。5、陽性藥丹參注射液和FBD組可明顯增加軟腦膜微循環(huán)血管的網(wǎng)點計數(shù)(與給藥前相比p〈0.05)。結(jié)果表明FBD能有效改善微循環(huán)。6、FBD可以抑制大鼠動靜脈旁路血栓形成，降低血栓濕重；FBD與陽性藥丹參注射液(3000mg/kg)對大鼠腦微循環(huán)障礙的血液流態(tài)有不同程度的改善，表現(xiàn)為血細胞聚集程度有所減輕，如血液流態(tài)由淤滯狀變?yōu)榱?，或由粒狀變?yōu)閹罨蚓€狀，或由虛線狀變?yōu)榫€狀，使腦膜毛細血管網(wǎng)點計數(shù)明顯增加。FBD對AA和ADP誘導的血小板聚集亦有明顯的抑制作用，對膠原誘導的血小板聚集則無明顯的抑制作用。結(jié)果表明FBD能有效改善血栓形成，降低血栓濕重。在作用機制的研究中發(fā)現(xiàn)1、在大鼠動靜脈旁路血栓形成實驗中，F(xiàn)BD對血栓形成有抑制作用，與陰性組比較有顯著性差異(P〈0.05)。但其抑制率小于陽性藥阿司匹林(25mg/kg)。2、在FBD對大鼠腦膜微循環(huán)障礙影響的研究中，丹參組(3000mg/kg)和FBD于給藥后，可明顯增加軟腦膜微循環(huán)血管的網(wǎng)點計數(shù)(與給藥前相比P〈0.05);血液流態(tài)有不同程度的改善。3、FBD對血小板聚集功能影響的研究中，F(xiàn)BD可有顯著性地抑制ADP和AA誘導的血小板聚集，而對膠原誘導的血小板聚集無明顯作用，其作用強度均低于阿司匹林(25mg/kg)。經(jīng)過上述研究顯示FBD對局部性和全腦缺血一再灌注損傷具有明顯的治療作用。其抗缺血性腦損傷的機制可能與抑制血栓形成、抗血小板聚集和改善微循環(huán)，增加腦部血流量有關(guān)。本發(fā)明的優(yōu)點在于本發(fā)明對已知的中藥組合物FBD發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明FBD安全無毒，藥理作用強，預(yù)示著很好的藥用前景。本發(fā)明FBD制備工藝簡單，并可制成各種口服劑型，如片劑、膠囊等。本發(fā)明FBD對局部性和全腦缺血一再灌注損傷具有明顯的治療作用，其抗缺血性腦損傷的機制可能與抑制血栓形成、抗血小板聚集和改善微循環(huán)，增加腦部血流量有關(guān)。這些作用有利于防治腦缺血。圖1是FBD十二指腸給藥對麻醉犬腦血管阻力影響的示意圖；'圖2是FBD十二指腸給藥對麻醉犬頸內(nèi)動脈流量影響的示意圖；圖3是FBD十二指腸給藥對麻醉犬外周平均動脈壓影響的示意圖；圖4是FBD十二指腸給藥對麻醉犬心率影響的示意圖。具體實施例方式以下通過試驗例對本發(fā)明的有益效果作進一步的闡述試驗例lFBD對動靜脈旁路血栓形成的影響1.1實驗?zāi)康挠^察受試樣品對大鼠動靜脈旁路血栓形成的影響。1.2動物品系SD大鼠來源上海斯萊克實驗動物責任有限公司性別雌雄各半體重200-240g動物合格證號SCXK(滬)2003-0003詞養(yǎng)動物飼養(yǎng)于正壓凈化通風動物房內(nèi)，室溫25土2。C，自由進食與飲水。1.3藥品1.3.1受試樣品名稱歸苓片(FBD)來源上海中藥制藥技術(shù)有限公司性狀深紅色片劑批號040904規(guī)格0.48g/片1.3.2陽性對照樣品名稱阿司匹林來源上海信誼百路達藥業(yè)有限公司規(guī)格25mg/片性狀白色腸溶片批號0305031.4動物分組30只雌性、30只雄性大鼠按隨機數(shù)字法各分為6組，每組10只(5只雌鼠，5只雄鼠)動物。1.5藥液配制I.阿司匹林_05%兩黃蓍&10mlII.FBD藥液的配制FBD量l片0.5%西黃蓍膠_3.加ml_1.6實驗方法第1組動物給予0.5%西黃蓍膠，其余5組動物按應(yīng)給予的藥液口服灌胃給藥，給藥體積均為0.5ml/100g，每天給藥1次，連續(xù)5天。在末次給藥后1小時，大鼠腹腔注射3鬼戊巴比妥鈉35mg/kg麻醉，將大鼠仰臥固定，切開頸部皮膚，分離左側(cè)頸動脈和右側(cè)頸外靜脈，以一旁路管連接，管中置一7cm長的4號手術(shù)絲線。手術(shù)結(jié)束后開放血流15分鐘，取出絲線稱重，減去絲線重量，即為血栓濕重。1.7結(jié)果從表1可見，與陰性組相比FBD不同劑量組能劑量依賴性地抑制大鼠動一靜脈旁路血栓的形成(P〈0.05或0.01);4.60、2.30、1.15和0.56g/kg給藥組對血栓形成的抑制率分別為19.95、16.77、11.62和8.17%。陽性藥阿司匹林能非常顯著地抑制大鼠動靜脈旁路血栓的形成(P〈0.0D，抑制率達36.58%(表l)。數(shù)據(jù)以平均值士標準差(；土SD)表示，數(shù)據(jù)差異統(tǒng)計采用t檢驗，組間差異以P<0.05判斷。表l.FBD對大鼠動靜脈旁路血栓形成的影響組別動物數(shù)血栓濕重(mg)抑制率(只)(％)陰性組1043.71±4.32/阿司匹林1027.72±4.01**36.58FBD1034.99±8.52'19.95*P〈0.05,**P〈0.01，aP=0.05034與陰性對照組相比試驗例2FBD對大鼠線栓法局灶性腦缺血-再灌注損傷的治療作用2.1實驗?zāi)康挠^察FBD對線栓法引起大鼠局灶性腦缺血后再灌注損傷的治療作用。2.2動物品系Wistar大鼠性別雄性體重250350克來源上海斯萊克實驗動物責任有限公司動物合格證號SCXK(滬)2003-0003飼養(yǎng)恒溫凈化通風動物房，自由進食與飲水，25±2°C。2.3藥品2.3.1試驗樣品同1.3.12.3.2陽性對照樣品名稱尼莫地平來源鄭州瑞康制藥廠批號20030106含量101.29%性狀淡黃色結(jié)晶性粉末2.4動物分組按隨機數(shù)字法分組，每組10只。2.5藥液配制I.尼莫地平用95%乙醇配制成20mg/ml的注射液II.FBD受試樣品的的配制同1.52.6實驗方法取健康雄性Wistar大鼠，體重250-350g，共50只，隨機分成3組，F(xiàn)BD樣品于缺血2小時后灌胃給藥，給藥體積為0.5ml/100g;陽性對照組尼莫地平給藥體積為0.01ml/100g,于缺血后2小時從大鼠尾靜脈注射給藥。陰性對照組給同等體積的0.5%西黃蓍膠。將大鼠以12%的水合氯醛腹腔麻醉(350400mg/kg)后，仰臥固定于手術(shù)臺上。室溫維持在25'C左右。切開右側(cè)頸部皮膚，分離、結(jié)扎右側(cè)頸總動脈、頸外動脈及其分支動脈。分離右側(cè)頸內(nèi)動脈(ICA)，至鼓泡處可見其顱外分支翼腭動脈，根部結(jié)扎該分支。在ICA近端備線、遠端放置動脈夾，頸總動脈分叉處切口，插入直徑為0.26ram的尼龍線1720mm，栓線進入ICA、穿過大腦中動脈(MCA)起始端至大腦前動脈近端，阻斷MCA的所有血流來源。扎緊備線，4小時后，拔出尼龍線，使其血流再通，結(jié)扎備線并縫合皮膚，于缺血后2小時給藥，將手術(shù)大鼠分籠放回動物房。缺血24小時后，進行神經(jīng)缺陷評分，評分方法為(1)提鼠尾離開地面約l尺，觀察前肢情況。正常大鼠兩前肢對稱地伸向地面。如果有左肩內(nèi)旋，左前肢內(nèi)收現(xiàn)象發(fā)生者，評分為4分，否則為0分。(2)將動物置平滑地板上分別推左(或右)肩向?qū)?cè)移動，檢査抵抗推動的阻力。正常大鼠雙側(cè)阻力明顯且對稱。如果推右肩向左側(cè)移動時，發(fā)現(xiàn)阻力下降者，根據(jù)下降程度的不同，評分為1_3分。(3)將動物兩前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察兩前肢的肌張力。正常大鼠兩前肢張力明顯且對稱。而發(fā)生左前肢張力下降者，根據(jù)下降程度的輕重評為0-3分。根據(jù)以上標準打分，滿分10分。評分完畢，斷頭取腦。將大腦平均冠狀分為5片，放于TTC溶液中，37t:溫育1015rnin染色。梗死區(qū)不著色，正常腦組織染成紅色。用生理鹽水沖洗后數(shù)碼照相，數(shù)碼照片利用計算機測量每片梗死區(qū)截面積和全腦截面積，計算梗死面積百分比。2.7結(jié)果FBD組以及陽性對照藥尼莫地平對大鼠線栓法大腦中動脈造成的局灶性腦缺血-再灌注損傷均有明顯的治療作用，與陰性對照組相比，使腦壞死百分比明顯降低，動物神經(jīng)學缺陷顯著改善。FBD組抗局部性缺血-再灌注損傷的作用與劑量呈明顯的正相關(guān)(表2)。表2.FBD對大鼠線栓法腦局部性缺血再灌注模型的影響組別n神經(jīng)缺陷評分腦壞死百分比21.98±9.5010.77±9.14*1.42±1.00"試驗例3FBD抗小鼠全腦缺血作用的藥效學研究3.l實驗?zāi)康耐ㄟ^小鼠斷頭全腦缺血模型研究FBD對全腦缺血的預(yù)防作用，以及對缺血腦耐缺氧能力的改善作用。3.2動物品系昆明種小鼠性別雌雄各半體重20_22g來源上海醫(yī)藥工業(yè)研究院動物房提供動物合格證號SYXK(滬)2004—0015飼養(yǎng)動物飼養(yǎng)于正壓凈化通風動物房內(nèi)，溫度25±2°〇，自由進食與飲水。3.3藥品3.3.1試驗樣品同1.3.13.3.2對照樣品同2.3.23.3.3其它試劑3,3.3.1名稱總蛋白測定試劑盒來源上海申索試劑有限公司上海生物制品研究所批號200407023.3.3.2名稱丙二醛(MDA)測定試劑盒來源南京建成生物工程研究所批號20041013陰性組97.9±1.9尼莫地平95.6±1.7*FBD94.2±0.4**卞〈0.05，，<0.01與陰性組比較3.3.3.3名稱超氧化物歧化酶(SOD)測試盒來源南京南京建成生物工程研究所3.4實驗儀器3.4.1名稱3K30高速低溫冷凍離心機3.4.2名稱JY92-II超聲細胞粉碎機3.4.3名稱80—2型離心機3.4.4名稱722光柵分光光度計批號20041015來源德國Sigma公司來源寧波新芝科器研究所來源上海手術(shù)器械廠來源上海第三分析儀器廠3.5動物分組將小鼠按隨機數(shù)字法分組，做SOD和MDA測定的共3組，每組10只動物；頭呼吸次數(shù)的，共3組，每組16只動物，均雌雄各半。3.6藥液配制l斷I.FBD藥液的配制FBD:1片II.尼莫地平3.7實驗方法5mg05%兩黃蓍膠_^6.52ml05%兩黃蓍齡一20ml各組均提前2天灌胃給藥，給藥體積0.2ml/10g體重。給藥開始后第3天給予第3次實驗樣品，并于給藥后l小時，用鋒利的剪刀將小鼠的頭連同小腦腦干一并剪下，并于剪下即刻開始計時，記錄斷頭張口呼吸的時間。將斷頭冰浴，剝下大腦及小腦,稱重，放入已預(yù)先冰浴好的離心管中。按照1.9ml冰生理鹽水/100mg腦的稀釋比例，用超聲細胞粉碎機140W，兩秒，10次制成5%的腦組織勻漿，并且在超聲的同時也保持冰浴。將組織勻漿在低溫離心機上以4°C，2700g離心30分鐘。小心吸取上清，測定組織勻漿總蛋白、S0D、MDA?？偟鞍子每偟鞍诇y定試劑盒測定，722分光光度計550nm測定吸光度，總蛋白計算公式如下測定管吸光度血清總蛋白(g/1)-X50標準管吸光度SOD和MDA分別用SOD和MDA試劑盒測定。每毫克組織蛋白在1ml反應(yīng)液中SOD抑制率達50%時所對應(yīng)的SOD量為一個SOD活力單位(U)。722分光光度計550nm測定吸光度SOD的計算公式如下對照管吸光度—測定管吸光度組織勻漿中SOD活力(U/mgprot)=對照管吸光度10反應(yīng)液總體積+50%X"^^^+組織中蛋白含量(mgprot/ml)MDA測定按照測定說明書操作，722分光光度計532nm測定吸光度。MDA的計算公卿"aa旦測定管吸光度一測定空白管吸光度式如下組織中MDA含量-對照管吸光值-X標準品濃度(10nmol/ml)+蛋白含量(mgprot/ml)3.8結(jié)果3.8.1對張口呼吸時間的影響各組小鼠斷頭后，均經(jīng)歷一個從激烈張口呼吸到相對靜止到再次張口呼吸數(shù)次最后死亡的過程。實驗結(jié)果見表3。陰性組張口呼吸時間為20.6±2.7秒；陽性對照組尼莫地'平5mg/kg張口呼吸時間為23.l土3.4秒，與陰性組比較有顯著性增加(p〈0.05)。FBD低劑量組張口呼吸時間為19.8±1.9秒；中劑量組張口呼吸時間為21.3±3.6秒與陰性組比較稍有延長。高劑量組張口呼吸時間為22.9土5.3秒，與陰性組比較延長了2秒左右。尼莫地平可使小鼠斷頭全腦缺血模型張口呼吸時間明顯的增加。FBD高劑量對小鼠斷頭全腦缺血模型張口呼吸時間有一定的延長作用，但與陰性組比較沒有顯著性差異(表3)。數(shù)據(jù)以平均值土標準差(；土SD)表示，數(shù)據(jù)差異統(tǒng)計采用t檢驗，組間差異以P<0.05判斷。表3.FBD對小鼠斷頭全腦缺血模型張口呼吸時間的影響組別張口呼吸時間(s)陰性組尼莫地平FBD16161620.4±2.723.0±3.3*22.9±5.1*p<0.05,**p<0.01，與陰性組比較。3.8.2對SOD和MDA的影響各組腦組織均按照實驗方法處理，并測定吸光度，分別測定總蛋白含量以及MDA含量和SOD活力。測定結(jié)果見表4。陰性組MDA含量為3.11±0.43nmol/mgprot，與陰性組比較各組的MDA值均沒有明顯的升高和降低(與陰性組比較沒有顯著性差異)。陰性組SOD含量為59.48±27.00U/mgprot，尼莫地平組為83.72±17.08U/mgprot(P<0.05)，顯著性升高了近23U/mgprot。FBD組S0D含量為83.98士21.25U/mgprot(P〈0.05)'也顯著性升高了近24U/mgprot;尼莫地平對斷頭MDA含量沒有明顯影響，但可以使腦組織中的S0D活力顯著性升高。(表4)。表4.FBD對小鼠斷頭全腦缺血模型MDA含量以及S0D活力的影響。組別n總蛋白含量(mg/ml)MDA含量(nmol/mgprot)S0D活力(U/mgprot)陰性組101.87±0.533.11±0.4359.48±27.00尼莫地平101.53±0.633.57±0.8583.72±12.08*FBD101.42±0.713.06±0.5683.98±21.25**p〈0.05，**p〈0.01,與陰性組比較試驗例4FBD抗四動脈阻斷全腦缺血再灌損傷藥效學研究4.1實驗?zāi)康挠^察FBD對四動脈阻斷大鼠全腦缺血再灌注損傷的預(yù)防作用。4.2動物品系Wistar大鼠性別雄性體重250270g來源上海斯萊克實驗動物責任有限公司動物合格證號SCXK(滬)2003-0003飼養(yǎng)恒溫凈化通風動物房，自由進食與飲水，25±2°C。4.3藥品4.3.1試驗樣品同1.3.14.3.2陽性對照樣品同2.3.14.4實驗儀器4.4.1名稱SW-30射頻雙極凝固器來源上海市檢測技術(shù)所檢測儀器廠4.4.2名稱SJ-42四道生理記錄儀來源上海醫(yī)用電子儀器廠4.5動物分組50只雄性大鼠按隨機數(shù)字法各分為5組，每組10只。4.6藥液配制I.尼莫地平用0.5X西黃蓍膠配制成10mg/ml的注射液II.FBD受試樣品的的配制同1.54.7實驗方法取健康雄性Wistar大鼠，體重250-350g，分陰性對照組、FBD組及陽性尼莫地平組。于缺血前1小時灌胃給藥，體積為0.5ml/100g。將動物用12%的水合三氯乙醛腹腔麻醉(350mg/kg)，在枕后暴露第一頸椎橫突孔，用雙極電凝對準橫突孔電灼凝固雙側(cè)椎動脈。然后在頸部作一切口暴露雙側(cè)頸動脈，分離后，用1號絲線穿好備用，縫合傷口。于術(shù)后24小時，大鼠清醒時，用帶硅膠管的動脈夾將雙側(cè)頸動脈夾閉，即造成4根動脈閉塞全腦缺血，取出動脈夾可使血流再通，為再灌流期。該實驗缺血與再灌時間均為1小時。凡缺血1小時內(nèi)腦電圖未消失或出現(xiàn)嚴重抑制一律剔除。觀察指標為缺血后腦電圖消失時間、再灌后腦電圖恢復時間及翻正反射恢復時間。所有數(shù)據(jù)均用f土s表示，統(tǒng)計學分析用t檢驗。4.8實驗結(jié)果從表5可以看出，與陰性組相比，F(xiàn)BD組能延長模型大鼠缺血后腦電圖消失時間、縮短再灌注后腦電圖恢復時間和翻正反射恢復時間，效果與劑量呈正相關(guān)。與陰性組相比，陽性藥尼莫地平亦能使灌注后腦電圖恢復時間和翻正反射恢復時間明顯縮短(P<0.05或P〈0.01)(表5)。表5.FBD對全腦缺血再灌注大鼠的腦電圖和行為學影響(7士SD)組別n腦電圖消失時間(S)腦電圖恢復時間(S:翻正反射恢復時間(S)陰性組1066±341221±13592376±1335尼莫地平1078±35173±143*784±433"FBD1()169±110"104±86*292±176*"AA*P〈0.05，"P<0.01，"*P〈0.001與陰性對照組比較；AP<0.05，AAP〈0.01與尼莫地平組比較；試驗例5FBD對麻醉犬外周及腦血流量影響的研究5.1實驗?zāi)康挠^察FBD十二指腸給藥對麻醉犬心率、外周動脈血壓、外周動脈和腦動脈流量以及腦血管阻力的影響。5.2動物品系雜種犬性別雌雄兼用體重10.1土0.7kg來源上海醫(yī)藥工業(yè)研究院動物房5.3藥品5.3.1試驗樣品同1.3.15.3.2對照樣品同2.3.25.3.3其它藥品肝素鈉140U/mg，中國醫(yī)藥(集團)上?；瘜W試劑總廠批號F200209305.4主要儀器5.4.1名稱ElamaMinogograf-82型八導生理記錄儀來源西門子公司5.4.2名稱MFV—2100電磁流量計來源日本光電公司5.4.3名稱GPS—2型高頻手術(shù)器來源江蘇武進無線電廠5.5動物分組每組6只。根據(jù)大鼠有效劑量折算出犬的給藥劑量。5.6藥液配制I.FBD藥液的配制FBD:l片(V邠兩昔蓍昤>1mlII.尼莫地平150mg0-5%兩昔蓍將150ml5.7.實驗方法將犬用3%戊巴比妥鈉30mg/kg靜脈注射麻醉。將動物仰臥位固定于手術(shù)臺上,于右側(cè)腹股溝處分離股靜脈，插入導管作輸液用，分離右側(cè)股動脈插管，連接壓力換能器，測定外周血壓。分離左側(cè)股動脈，以備測定外周動脈血流量。分離右側(cè)頸動脈直到頸外動脈和頸內(nèi)動脈的分叉處，結(jié)扎頸外動脈，頸內(nèi)動脈留用，將電磁流量計鉤在同側(cè)的頸總動脈上以備測定頸內(nèi)動脈的血流量。從腹中線剪開動物腹部約5cm，找到十二指腸，并縫制荷包，插管以備給藥。待動物手術(shù)后穩(wěn)定30min，藥物從十二指腸給予，給藥時間為lmin。給藥后觀察3小時，分別在給藥前和給藥后5、10、15、30和60、90、120、180分鐘記錄動物心電圖以及外周動脈血流量和頸內(nèi)動脈血流量和血壓。陰性對照組以同樣方法給予0.5%西黃蓍膠，lml/kg。給藥后180分鐘處死犬，取大腦稱重。以右頸總動脈血流量乘以2代表全腦血流量(CBF)。腦血管阻力(R)可用以下公式計算-R=MAP(kPa)/[CBF(ml/min)100g腦]。試驗數(shù)據(jù)從記錄上測量得到。MAP計算公式為lmmHg=0.1333KPa實驗數(shù)據(jù)用平均值土標準差(X±SD)表示。實驗結(jié)果統(tǒng)計用給藥后同給藥前的變化值和陰性對照組同時間點的變化值進行t檢驗5.8實驗結(jié)果FBD十二指腸給藥對麻醉犬心率、血壓、外周及腦血流量以及腦血管阻力的影響見表6-12，圖1-4。陰性組，外周血壓穩(wěn)定變化不大，心率隨著時間的推移有所降低，外周血流量和腦部血流量均逐漸降低，因此腦部血管阻力逐漸增加。尼莫地平組外周血流量在給藥后12min和120min顯著性增加，在給藥后的30、60、90、180min均非常顯著性增加。而給予尼莫地平后的頸動脈流量在第10、15分鐘非常顯著性增加，而在30-180分鐘顯著性增加。同時外周血壓在給藥后的15-180分鐘均顯著性降低，特別是外周動脈舒張壓，在給予尼莫地平后的15min顯著性降低，在后來的30-180min均非常顯著性降低(與陰性組同一時間點的變化率比較)。心率在給藥后的5、60、90min即顯著性降低，在15min非常顯著性降低。腦部血管阻力在給藥后的5min顯著性降低，在10-180min均非常顯著性降低。FBD十二指腸給予麻醉犬后對外周動脈流量和血壓以及腦部血管阻力均沒有明顯的影響，僅在給藥后的30min，其腦部血流量有一定的增加，在給藥后30min,血管阻力有非常顯著性降低，但降低的絕對值并不多。因此FBD對麻醉犬具有一定的降低腦部血管阻力，增加腦部血流量的作用，并且對動物的外周血壓也有類似尼莫地平的作用降低外周血壓，特別是舒張壓；減慢心率。但作用強度和作用時間均小于尼莫地平。FBD十二指腸給藥對腦部血流的改善作用在給藥后30min最明顯。表6.FBD十二指腸給藥對麻醉犬外周動脈血流量的影響(n=6，^土SD)樣品股動脈流量.給藥前給藥后(min)(ml/min)051015306090120180陰性平均值26.3±17.627.2±22.924.7±18.924.7±19.922.7±11.920.5±9.723.5±12.524.5±11.321.3±10.8對照變化％_-2.2±12.5-IO.I土12.8陽12.1土14.7陽9.1土-17.9.12.5±28.0-4.4±28.95.4±41.7-11.7±25.9FBD平均值29.8±14.628.5±14.028.2±14.029.7±16.229.2±17.224.0±14.621.肚9.522.2±8.820.7±6.2變化％-2.1±-3.3±1.5±0.7±-15.8±-192±-16.4-20.fe16.215.624.628.527.028.4±31.531.3平拘倍W2士n^25.5±33'5±41.2±54.7±57.5±57.5±56.2±57.0±尼莫"f^J1旦J1J"。9.818.521.328.727.829.627.727.5地平變化％-14.8±5.1±26.3±69.9±78.8±79.0±75.7±79.7±15.124.832.7*56.0**35.5**57.7**53.7*55.1***P<0.05，**P<0.01與陰性組比較表7.FBD十二指腸給藥對麻醉犬腦動脈血流量的影響(n=6，；±SD)頸內(nèi)動脈給藥前給藥后(min)樣口口流量(ml/min)05101530609012018030.5±30.0±29.7±27.7±26.8±25.7±26.0±24.5±陰性平均值31.0±13.112.513.013.612.913.512.812.811.7對照-1.4±-3.7±-5.4±陽12.0士-15.2±-18.6±-17.4±-22.0±變化o/。一2.34.65.85.07.38.09.17.338.0±38.7±38.3±39.2±37.3±35.5±34.8±33.8±平均值38.0±20.920.921.221.021.321.219.920.621.0FBD-0.5±2.1±2.3±5.8±-1.8±-6.1±-8.3±-11.1±變化％-1.35.39.813.5*7.3*7.7*11.012.325.3±39.3±40.5±33.0±29.5±28.7±28.2±26.7±尼莫平均值21.3±5.79.712.412.511.313.512.513.210.8地平9.0±62.7±77.6±54.9±42.5±38.8±36.8±31.4±變化％一17.742.6**55.5**62.9*47.7*44.8*47.1*49.0*P<0.05，P〈0.01與陰性組比較表8.FBD十二指腸給藥對麻醉犬動脈平均壓的影響(n=6,;±SD)股動脈給藥前給藥后(min)枰品血壓(mmHg)051015306090120180141.7±140.8±142.8±139.7±139.2±139.5±140.3±144.2±陰性平均值1楊±29.035.034.631.528.527.327.018.925.6對照0.4±-0.2±1.8±-0.2±0.1±0.7±1.9±4.1±變化％一5.25.62.81.79.712.910.910.6160.8±166.7±160.8±164.2±162.5±161.2±160.0±156.7±FBD平均值跳8±27.519.325.025.024.029.818.120.020.716尼莫地平變化％_平均值148.3±17.8變化％_0.9±4.3±0.3±2.6±0.9±1.3±0.5±-1.5±6.67.6《15.05.58.89.310.4141.7±120.肚110.0±96.7±97.5±97.5±跳8±103.3±14.721.515.521.622.125.824.827.50.6±-7.5±-15.2±-26.1±-29.8±-30.6±1-27.1±-28.6±5.011.012.7*18.1**14.2**8.0**16.2**17.6***P<0.05，"P<0.01與陰性組比較表9.FBD十二指腸給藥對麻醉犬動脈收縮壓的影響(n=6，；±SD)股動脈給藥前給藥后(min)秤品血壓(mmHg)051015306090120180167.5±173.3±170.8±168.3±跳3±171.7±175.0±173.3±陰性平均值170.8±31.134.034.931.729.130.127.323.720.4對照-2.2±1.2±0.0±-0.7±-l.l士0.9±3.5±2.7±變化％—4.35.45.44.77.86.58.58.4199.2±220.8±198.3±205.8±205.0±200.0±198.3±192.5±平均值203.3±20.215.036.413.715.015.58.48.813.3FBD-l.肚9.0±-2.2±1.6±U士-1.1±-1.8±-4.7±變化％—4.018.53.36.64.17.59.610.5179.2±171.7±160.肚145.0±144.2±153.3±154.2±151.7±尼莫平均值185.8±19.317.723.620.827.635.832.429.223.2地平-0.3±-2.4±-8.7±-17.0±-18.6士扁16.3士-13.5土-16.5±變化％_4.07.77.0*11.1**16.2*14.7*14.5*11.3**PO.05，P<0.01與陰性組比較表10.FBD十二指腸給藥對麻醉犬動脈舒張壓的影響(n=6,^士SD)股動脈樣品血壓(mmHg)給藥前給藥后(min)051015306090120180129.2±126.7±128.3±123.3±130.0±130.0±133.3±135.8±33.231.132.832.232.130.325.226.7-0.1±-1.9±-0.8±-4.8±0.8±0.9±4.6±6.5±5.25.36.07.39.47.86.06.0陰性對照平均值128.3±27.9變化％_<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>對照FBD尼莫地平變化％平均值變化％平均值變化％0.48±0.280.72±0.312.0±3.7±7.9±13.7±19.5±25.4±25.0±35.2±6.05.56.16.821.223.521.424.40.50±0.50±0.46±0.46±0.49±0.53±0.55±0.55±0.330.310.240.230.270.340.350.340.9±1.6±-2.0±-2.1±2.7士7.9±10.5±12.6±6.64.76.110.1**8.812.217.719.10.64±0.35±0.29±0.30±0.35±0.34±0.37±0.40±0.330.180.150.150.190.150.180.21-14.0±-52.5±-59.6±-56.8±-50.4±-49.4±-45.1±-40.6±16.4*16.4**11.2**12.6**16.4**18.9**22.5**25.9**P<0.05，P<0.01與陰性組比較試驗例6FBD對腦微循環(huán)障礙的影響6.1實驗?zāi)康挠^察FBD對大鼠腦膜微循環(huán)障礙的影響，探討其抗腦缺血作用機制。6.2動物品系SD大鼠性別雄性體重240260g來源上海斯萊克實驗動物責任有限公司動物合格證號SCXK(滬)2003-0003詞養(yǎng)恒溫凈化通風動物房，自由進食與飲水，25±2°C。6.3藥品6.3.1試驗樣品同1.3.16.3.2陽性對照樣品名稱丹參注射液來源上海中西藥業(yè)股份有限公司批號030305含量3g/2ml性狀淡黃色液體6.4實驗儀器6.4.1名稱307-6臺式牙鉆車來源上海齒科醫(yī)械廠6.4.2名稱SXP-1B手術(shù)顯微鏡來源上海醫(yī)用光學儀器廠6.4.3名稱SQF-E解剖顯微鏡來源上海萬科儀器有限公司6.4動物分組48只雄性大鼠按隨機數(shù)字法各分為6組，每組8只。6.6藥液配制I.丹參原液使用II.FBD受試樣品的的配制同1.56.7實驗方法FBD于高分子右旋糖苷注射后20分鐘灌胃給藥，給藥體積為0.5ml/kg。丹參注射液于高分子右旋糖苷注射后20分鐘尾靜脈注射給藥，給藥體積為2ml/kg。將大鼠用3%的戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔麻醉，作顱骨開窗術(shù)，剪開硬腦膜暴露一側(cè)大腦半球的額頂區(qū)，以解剖顯微鏡觀察軟腦膜微循環(huán)，在觀察軟腦膜微循環(huán)后，自股靜脈注射10%的高分子右旋糖苷(分子量50萬)生理鹽水溶液，劑量15ml/kg，假手術(shù)組給15ml/kg的生理鹽水，在注射后20分鐘觀察軟腦膜微循環(huán)變化。當證實已造成微循環(huán)障礙(血流緩慢，血細胞聚集)，再根據(jù)分組給藥治療，于給藥后60min,觀察微循環(huán)情況。觀察指標如下①流態(tài)紅細胞的流態(tài)可分為4級0級，直線(帶)狀；I級，虛線狀；II級，粒狀；III級，淤滯狀。②毛細血管網(wǎng)點計數(shù)取面積約為1平方毫米左右的固定區(qū)域(此區(qū)域由血管圍成邊界)，計算此區(qū)域中毛細血管與邊界(血管)的交點數(shù)。未與邊界相交的毛細血管不計算在內(nèi)。③血色觀察血色，分鮮紅、暗紅、淡紅等。④毛細血管周圍的變化主要觀察毛細血管周圍有無滲出、和出血現(xiàn)象。網(wǎng)點計數(shù)數(shù)據(jù)用；土SD表示，統(tǒng)計學分析用t檢驗。其它質(zhì)反應(yīng)資料不作統(tǒng)計學分析。6.8實驗結(jié)果腦膜微循環(huán)流態(tài)變化對照組和實驗各組動物在注射高分子右旋糖苷后，血液流態(tài)有異常改變。血液流態(tài)由正常的帶狀、線狀變?yōu)樘摼€狀、粒狀，甚至變?yōu)橛贉?，陰性對照組動物在注射生理鹽水后，血液流態(tài)未見改善。而丹參組和FBD不同劑量組于給藥后，血液流態(tài)有不同程度的改善，表現(xiàn)為血細胞聚集程度有所減輕，如血液流態(tài)由淤滯狀變?yōu)榱?，或由粒狀變?yōu)閹罨蚓€狀，或由虛線狀變?yōu)榫€狀(表14)。血色變化對照組和實驗各組動物在注射高分子右旋糖苷后，血色與原來相比無明顯改變。毛細血管周圍的變化實驗各組動物在注射高分子右旋糖苷及樣品后，與原來相比毛細血管周圍未見滲出和出血。給藥前后毛細血管網(wǎng)變化表13顯示，陽性藥丹參注射液和FBD組可明顯增加軟腦膜微循環(huán)血管的網(wǎng)點計數(shù)(與給藥前相比p〈0.05)。表13.FBD不同劑量組對腦膜毛細血管網(wǎng)點計數(shù)的影響(；土SD，n=10)組別血淤前網(wǎng)點計數(shù)治療前網(wǎng)點計數(shù)治療后網(wǎng)點計數(shù)正常組5.10±0.745.10±0.745.10±0.74陰性組5.00±0.473.60±0.7CT3.60±0.70丹參5.20±0.633.80±1.03**4.80±0.92A5.OO土O.673.70±0.67*'4.70±0.82A*p<0.05，**p<0.01與血淤前相比；△p<0.05,,〈0.01與治療前相比表14.FBD不同劑量組對腦微循環(huán)流態(tài)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>試驗例7FBD對血小板聚集功能的影響7.1實驗?zāi)康挠^察FBD對血小板聚集功能的影響。7.2動物品系SD大鼠性別雄性體重250270克來源上海斯萊克實驗動物責任有限公司動物合格證號SCXK(滬)2003-0003飼養(yǎng)恒溫凈化通風動物房，自由進食與飲水，25±2°C。7.3藥品7.3.1試驗樣品同1.3.17.3.2陽性對照樣品名稱阿司匹林腸溶片來源BayerHealthCareAG規(guī)格100mg/片批號BTA4E31性狀白色藥片7.3.3其它試劑7.3.3.1名稱ADP來源Sigma公司批號129F04967.3.3.2名稱AA(花生四烯酸)來源Fluka公司批號318175/11937.3.3.3名稱膠原來源TrinityBiotechPlc，Bray，Co.Wicklow，Treland.公司批號200501147.4實驗儀器7.4.1名稱80—2型離心機來源上海手術(shù)器械廠生產(chǎn)7.4.2名稱MK4/HC血小板計數(shù)儀來源美國BakerInstruments公司7.4.3名稱Laboraggregometer-153型雙道血小板聚集儀來源德國LaborGmbHHanburg公司7.5動物分組每組10—12只。7.6藥液配制I.阿司匹林_0.5%兩黃蓍3一20mlII.FBD受試樣品的的配制同1.5III.ADP:pH7.4磷酸緩沖液配成200)aM濃度溶液，一20。C冰箱保存?zhèn)溆?。AA:0.1MNa2C03緩沖液配成0.5mmol/L濃度溶液，一18。C冰箱保存?zhèn)溆?。膠原制劑標識量2.0mg/ml，28t冰箱保存，白色粉針劑，臨用前以雙蒸水溶解，0.5ml/支，現(xiàn)配現(xiàn)用。7.7實驗方法試驗藥物單次口服灌胃，體積為5ml/kg，陰性對照組給予同體積西黃蓍膠?？诜辔附o藥后1小時腹腔注射戊巴比妥鈉45mg/kg麻醉，仰臥固定，腹主動脈采血，用3.8%枸櫞酸鈉按1:9比例抗凝，以500rpm離心5分鐘，取上部血漿即為富血小板血漿(PRP)，余下部分再次以3000rpm離心15分鐘，上清液為貧血小板血漿(PPP)，用血小板計數(shù)儀計數(shù)PRP血小板數(shù)，用PPP調(diào)整PRP的血小板數(shù)至6X1()5個/mm3左右。在測試管中加入PRP200ial，調(diào)節(jié)記錄儀至零點，另用一PPP管放入測試孔，調(diào)節(jié)增益至記錄儀行程為60格，以此為100%。樣品管37。C保溫2分鐘后開始攪拌1分鐘，攪拌子轉(zhuǎn)速500rpm，再加入ADP5^1或AA4pl或膠原8|al，使ADP終濃度為AA濃度為4pM;膠原濃度為8|liM;，記錄加入ADP或AA或膠原后的記錄筆移動的行程，按下式計算聚集率-窓佳步0/力口ADP后的行程聚集率％=o-io(w的行程x100/0計算出各試驗組的平均聚集率及標準差，用t-檢驗同西黃蓍膠組進行比較。并按下式計算各試驗組的聚集抑制率聚集抑制率％=聚集率(陰性組)一聚集率(試驗組)X100%聚集率(陰性組)7.8實驗結(jié)果實驗結(jié)果表明，陽性藥阿司匹林(25mg/kg)對ADP、膠原、AA誘導的血小板聚集均有非常顯著的抑制作用(P〈O.OOD。FBD對ADP誘導的大鼠血小板聚集均有抑制作用，且抑制作用與劑量正相關(guān)。FBD對AA誘導的大鼠血小板聚集均有抑制作用，且抑制作用與劑量呈正相關(guān)。實驗結(jié)果見表1517。表15.FBD對ADP誘導的大鼠血小板聚集的影響組別最大聚集率(%)聚集抑制率(%)陰性組12阿司匹林1087.4±9.660.8±13.1'30.5FBD1084.9±9.02.9*P〈0.05，**P〈0.01、***P<0.001與西黃蓍膠組比較表16.FBD對膠原誘導的大鼠血小板聚集的影響組別(%)聚集抑制率(%)陰性組阿司匹林121038.7±7.224.8±2.3材*35.823<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>*P〈0.05，**P〈0.01，***P<0.001與西黃蓍膠組比較表17.FBD對M誘導的大鼠血小板聚集的影響組別最大聚集率聚集抑制率(%)陰性組阿司匹林FBD12101052.8±5.034.9±2.8':47.9±11.333.89.3*P〈0.05，**P〈0.01，***P<0.001與西黃蓍膠組比較結(jié)論通過以上試驗結(jié)果可以看到FBD對大鼠線栓法局灶性腦缺血及四動脈阻斷全腦缺血模型均有治療或預(yù)防作用，表現(xiàn)為改善大鼠行為學評分，減小大腦壞死面積；延長模型大鼠缺血后腦電圖消失時間、縮短再灌注后腦電圖恢復時間和翻正反射恢復時間，其效果優(yōu)于尼莫地平(25mg/kg)。在9.2g/kg的劑量時，對小鼠斷頭全腦缺血模型也能延長其張口呼吸時間，提高SOD的活力，但效果低于尼莫地平(5mg/kg)。此外，在FBD對麻醉犬外周及腦血流量影響的研究中，F(xiàn)BD組對麻醉犬具有一定的降低腦部血管阻力，增加腦部血流量的作用，并且對動物的外周血壓也有類似尼莫地平的作用降低外周血壓，特別是舒張壓；減慢心率。但作用強度和作用時間均小于尼莫地平(5mg/kg)。其對腦部血流的改善作用在給藥后30min最明顯。在作用機制方面的研究中發(fā)現(xiàn)FBD可以抑制大鼠動靜脈旁路血栓形成，降低血栓濕重；FBD與陽性藥丹參注射液(3000mg/kg)對大鼠腦微循環(huán)障礙的血液流態(tài)有不同程度的改善，表現(xiàn)為血細胞聚集程度有所減輕，如血液流態(tài)由淤滯狀變?yōu)榱?，或由粒狀變?yōu)閹罨蚓€狀，或由虛線狀變?yōu)榫€狀，使腦膜毛細血管網(wǎng)點計數(shù)明顯增加。FBD對AA和ADP誘導的血小板聚集亦有明顯的抑制作用，對膠原誘導的血小板聚集則無明顯的抑制作用。以下通過實施例對本發(fā)明作進一步的闡述實施例1取茯苓25g，白術(shù)12g，當歸7g，混合后，用水煎煮，水提取液濃縮后，加;^"乙醇沉淀，得多糖(2.3g)，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取，得正丁醇部位(0.71g),合并水提取物有效部位(多糖與正丁醇提取物)，加入適量輔料后，壓成片劑。實施例2取茯苓50g，白術(shù)40g，當歸20g,混合后，C02超臨界萃取提取揮發(fā)油(2.5ml)，控制提取萃取罐壓力為10.0MP，溫度為35'C，提取時間為2小時。藥渣用水提取后，加乙醇至含醇量為90%，沉淀，得到總多糖(4.2g)，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取,合并揮發(fā)油，總多糖及正丁醇提取物(7.5g)，加適量輔料，制粒，灌制膠囊。實施例3取茯苳40g，白術(shù)20g，當歸10g，混合后，C02超臨界萃取，控制萃取罐壓力為12.0MP，溫度為35C，提取時間為2小時，得到超臨界萃取物。藥渣用水提取后，加乙醇至含醇量為85%，沉淀，得到總多糖，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取，合并超臨界萃取物，總多糖及正丁醇提取物，加適量輔料，制粒，灌制膠囊。實施例4取茯苓40g，白術(shù)20g，當歸12g，混合后，用乙醇用夾帶劑，進行C02超臨界萃取提取揮發(fā)油(1.64ml)，藥渣用水提取后，加乙醇沉淀，得到總多糖(2.74g)，上清液回收乙醇后甩正丁醇萃取(4.9g)，合并揮發(fā)油，總多糖及正丁醇提取物，加適量淀粉，制粒，灌制膠囊16粒。服用劑量一日服用2次，每次2粒。實施例5取茯苓50g,白術(shù)25g，當歸15g，混合后，用水煎煮，水提取液濃縮后，加入乙醇沉淀，得多糖(4.77g)，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取，得正丁醇部位(1.46g)，合并多糖與正丁醇提取物，加入適量輔料后，制成片劑18片。服用劑量一日服用2次，每次2片。實施例6取茯苓50g，白術(shù)40g，當歸20g，混合后，C02超臨界萃取提取揮發(fā)油(2.5ml)，控制提取萃取罐壓力為IO.OMP，溫度為35'C，提取時間為2小時。藥渣用水提取后，得到水提取物，合并揮發(fā)油及水提取物，加適量輔料，壓制成片。2權(quán)利要求1、一種中藥組合物在制備防治腦缺血的藥物中的應(yīng)用，所述的中藥組合物由茯苓、白術(shù)和當歸三種原料藥的超臨界萃取物和/或水提取物，或者超臨界萃取物和/或水提取物有效部位組成。全文摘要本發(fā)明公開了一種中藥組合物在制備防治腦缺血的藥物中的應(yīng)用，該中藥組合物由茯苓、白術(shù)和當歸三種原料藥的超臨界萃取物和/或水提取物，或者超臨界萃取物和/或水提取物有效部位組成。文檔編號A61K36/185GK101601710SQ200810189050公開日2009年12月16日申請日期2005年12月20日優(yōu)先權(quán)日2005年12月20日發(fā)明者嚴永清,周迎新,朱丹妮,林志宏,沈平孃,偉虞,阮克鋒申請人:上海中藥制藥技術(shù)有限公司;中國藥科大學