專利名稱：一種新鮮石榴皮抗氧化物的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物石榴皮有效成份的提取方法，特別是涉及一種新鮮石榴皮抗氧化物的 提取方法。
背景技術(shù)：
氧化應(yīng)激損傷在許多疾病(如動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、腫瘤)發(fā)生、發(fā)展過程中扮演 著一個(gè)十分重要的角色。因此，如何防治氧化應(yīng)激損傷是當(dāng)前醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域內(nèi)的熱點(diǎn)問題 之一。許多學(xué)者從天然植物中提取抗氧化物質(zhì)，應(yīng)用于氧化應(yīng)激損傷的防治，取得了一定 的效果。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，在28種常見水果果肉、果皮、果仁中，石榴皮的抗氧化活 性最強(qiáng)，并含有大量多酚類等天然抗氧化物質(zhì)，因此，研究其有效的提取方法以及應(yīng)用將 具有十分重要的醫(yī)學(xué)價(jià)值和潛在的市場前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新鮮石榴皮抗氧化物的提取方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下
一種新鮮石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步驟
按lg:2 20ml的比例，將新鮮石榴皮浸泡在混合溶劑中，浸泡提取0. 1 2小時(shí)，減壓 濃縮干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶劑由體積比為30 50:10 30:5 15:20 40 的丙酮、甲醇、乙醇和水組成。
浸泡提取的溫度可以選20 100。C，最好是80。C。
在浸泡提取時(shí)，可以將溶液的pH調(diào)節(jié)為3 8，最好是pH為6。
所述新鮮石榴皮和混合溶劑較好地選lg:5 10ml。
所述浸泡提取時(shí)間最好是1小時(shí)。
所述混合溶劑最好由體積比為40:20:10:30的丙酮、甲醇、乙醇和水組成。 本發(fā)明的一種石榴皮抗氧化物的提取方法，提取的石榴皮抗氧化物產(chǎn)率可達(dá)31.5%，
所提取的石榴皮抗氧化物經(jīng)測考，含多酚類24.4mg/g、類黃酮17.2 mg/g、原花色素5.3
mg/g、抗壞血酸0.9mg/g，其體外對超氧陰離子、羥自由基、脂質(zhì)自由基的清除能力和對
低密度脂蛋白氧化的保護(hù)作用均強(qiáng)于石榴果肉提取物。
采用健康昆明小鼠進(jìn)行的急性毒性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明采用上述方法提取的石榴皮抗氧化
物L(fēng)Dm大于12g/kg，因此，其毒性水平為實(shí)際無毒。


圖1為甲醇、乙醇、丙酮和混合溶劑對石榴皮抗氧化物質(zhì)提取效果的比較。 圖2為提取溫度對石榴皮抗氧化物質(zhì)提取效果的影響。圖3為提取pH對石榴皮抗氧化物提取效果的影響。 ，
圖4為提取時(shí)間對石榴皮抗氧化物提取效果的影響。
圖5為液料比對石榴皮抗氧化物提取效果的影響。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。 ， 實(shí)施例1
一種石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步驟-
按質(zhì)量比為lg:10 ml的比例，將石榴皮浸泡在混合溶劑中，常溫浸泡提取l小時(shí)，減 壓濃縮干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶劑由體積比為40:20:10:30的丙酮、甲醇、 乙醇和水組成。 實(shí)施例2
一種石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步驟-
按質(zhì)量比為lg:10 ml的比例，將石榴皮浸泡在混合溶劑中，將溶液的pH調(diào)節(jié)為6， 8(TC浸泡提取1小時(shí)，減壓濃縮干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶劑由體積比為 40:20:10:30的丙酮、甲醇、乙醇和水組成。 實(shí)施例3
一種石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步驟
按質(zhì)量比為lg:5的比例，將石榴皮浸泡在混合溶劑中，將溶液的pH調(diào)節(jié)為8， 20°C 浸泡提取2小時(shí)，減壓濃縮干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶劑由體積比為 30:20:15:20的丙酮、甲醇、乙醇和水組成。 實(shí)施例4
一種石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步驟
按質(zhì)量比為lg:2 ml的比例，將石榴皮浸泡在混合溶劑中，將溶液的pH調(diào)節(jié)為3， 50 T浸泡提取2小時(shí)，減壓濃縮干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶劑由體積比為 40:30:5:30的丙酮、甲醇、乙醇和水組成。 實(shí)施例5
一種石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步驟-
按質(zhì)量比為lg:20 ml的比例，將石榴皮浸泡在混合溶劑中，將溶液的pH調(diào)節(jié)為6， IO(TC浸泡提取0.1小時(shí),減壓濃縮干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶劑由體積比為 50:10:12:40的丙酮、甲醇、乙醇和水組成。 實(shí)施例6
一種石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步驟-
按質(zhì)量比為lg:8 ml的比例，將石榴皮浸泡在混合溶劑中，將溶液的pH調(diào)節(jié)為7， 80 'C浸泡提取0.5小時(shí)，減壓濃縮干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶劑由體積比為 35:22:15:22的丙酮、甲醇、乙醇和水組成。 實(shí)施例7混合溶劑對石榴皮抗氧化物質(zhì)的提取效果
采用FRAP法測定抗氧化活性，根據(jù)甲醇、乙醇、丙酮在混合溶劑中的含量水平(40%、 30%、 20%、 10%、 O)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，選擇其中有較好提取效果(通過測定提取物的抗氧化活 性進(jìn)行評價(jià))的體積比進(jìn)行進(jìn)一步比較，結(jié)果如表l所示，2、 3、 4、 5號(hào)混合溶劑組間無 顯著性差異，但都與1號(hào)溶劑存在顯著性差異(代O. 05)，.其中4號(hào)溶劑最好。
表1不同混合比例溶劑提取石榴皮抗氧化物效果比較 溶劑 比例(％)
12345
丙酮100204030
甲醇1010102010
乙醇2030101030
水6060603030
FRAP值2. 37*2.882.823.012.80
(咖ol/U± 0.08± 0.10± 0. 15± 0.03± 0. 16
*風(fēng)05,1 vs 2， 3，4 or 5.n=4.
實(shí)施例8
甲醇、乙醇、丙酮和混合溶劑對石榴皮抗氧化物提取效果的比較 采用FRAP法測定抗氧化活性，比較甲醇、乙醇、丙酮和混合溶劑對石榴皮抗氧化物提 取效果。測定結(jié)果如圖l所示，其中溶劑代號(hào)l、 2、 3、 4分別代表甲醇、乙醇、丙酮溶液 和混合溶劑。結(jié)果表明混合溶劑所提取的抗氧化物抗氧化活性最強(qiáng)，與其它溶劑提取物比 較差異具有非常顯著性(代O. 01)，
實(shí)施例9
提取溫度對石榴皮抗氧化物提取效果的影響
采用FRAP法測定抗氧化活性，以上述混合溶劑在不同溫度下提取石榴皮中抗氧化物質(zhì)。 結(jié)果(圖2)表明，8(TC時(shí)提取效果最好。 實(shí)施例10
提取pH對石榴皮抗氧化物提取效果的影響 采用FRAP法測定抗氧化活性，以上述混合溶劑在不同pH下提取石榴皮中抗氧化物質(zhì)。 結(jié)果(圖3)表明，pH6時(shí)提取效果最好。 實(shí)施例11
提取時(shí)間對石榴皮抗氧化物提取效果的影響
采用FRAP法測定抗氧化活性，以上述混合溶劑提取石榴皮中抗氧化物質(zhì)，觀察提取時(shí) 間的影響。結(jié)果(圖4)表明，提取l小時(shí)效果最好。 實(shí)施例12
液料比對石榴皮抗氧化物提取效果的影響采用FRAP法測定抗氧化活性，以上述混合溶劑提取石榴皮中抗氧化物質(zhì)，觀察液料比 的影響。結(jié)果(圖5)表明，液料比10/1 20/1時(shí)提取效果較好，從節(jié)約溶劑的角度考慮， 應(yīng)選擇液料比10/1。 實(shí)施例13
石榴皮提取物中抗氧化物質(zhì)含量測定 ，
采用Folin-酚法、分光光度法或熒光法分別測定提取物中多酚類、總類黃酮、原花色 素、維生素C含量，結(jié)果表明提取物中抗氧化物質(zhì)含量十分豐富，多酚類、類黃酮、原花 色素、抗壞血酸含量分別為24. 4mg/g、 17.2 mg/g、 5.3 mg/g、 0.9 mg/g (實(shí)施例2)。
實(shí)施例14
石榴皮提取物對超氧陰離子、羥自由基、脂質(zhì)自由基的清除作用 采用黃嘌呤氧化酶法、HORAC法、ORAC法測定石榴皮提取物對超氧陰離子自由基(02_。)、 羥自由基('0H)、脂質(zhì)自由基(R00')的清除能力，并與石榴果肉提取物相比較。結(jié)果(表 2)表明，石榴皮提取物(實(shí)施例2)對上述自由基均有良好的清除作用，并強(qiáng)于果肉提取 物。
表2石榴皮提取物對0:r、'0H、 R00'清除作用(x土s， n=5)
提取物02— (lX103NU/g)■OHCumol/g)ROO' (,1/g)
果肉8. 46 ± 0. 71007.68 ± 0.4400.29 ± 0.040
果皮9.03 ± 0.77*195.35 ±0. 74 ± 0. 13**
11. 31林
求/^0.05，氺木/xo. oi
實(shí)施例15
石榴皮提取物急性毒性實(shí)驗(yàn)
雄性昆明小鼠30只，體重20. l土l.lg，適應(yīng)喂養(yǎng)5天，按體重隨機(jī)分為a、 b、 c三組， 每組10只進(jìn)行灌胃；a組樣品灌胃濃度200g/L，每次灌胃0. 4mL，連續(xù)3次，每次間隔2 3h， b組灌胃濃度200g/L，灌胃一次；c組灌胃濃度50g/L，灌胃一次。a組累積劑量為12g/kg， b組4g/kg， c組lg/kg，觀察7天。
觀察結(jié)果表明，灌喂石榴皮提取物b、 c兩組一切正常，a組小鼠24h內(nèi)無死亡，但精 神稍差，可能為多次灌胃所致；24h后各組小鼠一切活動(dòng)均正常。觀察一周，無異常情況 出現(xiàn)。計(jì)算LD50大于12 g/kg，根據(jù)國標(biāo)法急性毒性試驗(yàn)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，可認(rèn)為石榴皮提取物 實(shí)際無毒。
實(shí)施例16提取率實(shí)驗(yàn)
'采用本發(fā)明的提取方法，提取新鮮石榴皮中的抗氧化物，重復(fù)四次，采用FRAP法，測 定提取液抗氧化活性為(4.6±0.6) mmol/L。提取液經(jīng)減壓濃縮，得干燥褐色提取物，計(jì) 算平均收率為(31.5±3.0)%，水分含量為(8.9±0.8)%。
權(quán)利要求
1. 一種新鮮石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是包括如下步驟按1g:2～20ml的比例，將新鮮石榴皮浸泡在混合溶劑中，浸泡提取0.1～2小時(shí)，減壓濃縮干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶劑由體積比為30～50:10～30:5～15:20～40的丙酮、甲醇、乙醇和水組成。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新鮮石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是所述浸泡提取的 溫度為20 100°C。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種新鮮石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是在所述浸泡 提取時(shí)，將溶液的pH調(diào)節(jié)為3 8。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種新鮮石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是所述石榴皮 和混合溶劑比為lg:5 10ral。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種新鮮石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是所述浸泡提 取時(shí)間為1小時(shí)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種新鮮石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是所述混合溶 劑由體積比為40:20:10:30的丙酮、甲醇、乙醇和水組成。
7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種新鮮石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是所述浸泡提取溫 度為8CTC。
8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種新鮮石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是在所述浸泡提取 時(shí)，將溶液的pH調(diào)節(jié)為6。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新鮮石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步驟按1g∶2～20ml的比例，將新鮮石榴皮浸泡在混合溶劑中，浸泡提取0.1～2小時(shí)，減壓濃縮干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶劑由體積比為30～50∶10～30∶5～15∶20～40的丙酮、甲醇、乙醇和水組成。本發(fā)明的方法提取的石榴皮抗氧化物產(chǎn)率可達(dá)31.5％，經(jīng)測定，含多酚類24.4mg/g、類黃酮17.2mg/g、原花色素5.3mg/g、抗壞血酸0.9mg/g，其體外對超氧陰離子、羥自由基、脂質(zhì)自由基的清除能力和對低密度脂蛋白氧化的保護(hù)作用均強(qiáng)于石榴果肉提取物。石榴皮抗氧化物L(fēng)D₅₀大于12g/kg，其毒性水平為實(shí)際無毒。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101411733SQ20081015355
公開日2009年4月22日 申請日期2008年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月27日
發(fā)明者吳健全, 靜 徐, 李云峰, 楊繼軍, 郭長江, 韋京豫 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所