專利名稱：：具有抗腫瘤活性的去氫駱駝蓬堿衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供一種具有抗腫瘤活性的去氫駱駝蓬堿衍生物。技術(shù)背景自20世紀(jì)40年代氮芥用于治療惡性淋巴瘤后，幾十年來化學(xué)治療癌癥已經(jīng)有了很大的進(jìn)展。已由單一的化學(xué)治療進(jìn)入了聯(lián)合化療和綜合化療的階段，并且能成功地治愈病人或明顯地延長病人生命，因此抗腫瘤藥物在腫瘤治療中占有著越來越重要的地位。去氫駱駝蓬堿來源于蒺藜科植物駱駝蓬，為--咔啉類生物堿。20世紀(jì)70年代我國學(xué)者首次報(bào)道駱駝蓬生物堿具有明確的抗腫瘤作用，藥理作用十分廣泛，還包括對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用，對心血管系統(tǒng)的作用，對肌肉、離子通道的作用，對呼吸系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)的作用，輻射防護(hù)和光敏作用等。此外，其也是高效可逆的單胺氧化酶(MAO)抑制劑。國內(nèi)外有一定數(shù)量的文獻(xiàn)和專利報(bào)道去氫駱駝蓬堿衍生物合成工作(Bioorg.Med.Chem.Lett.1999,9(23):3319-3324;Bioorg.Med.Chem.Lett.2002,12(7):1129-1132;Eur.J.Med.Chem.2005,40(10):991-1001;Med.Chem.2004,12(17):4613-4623;Eur.J.Med.Chem.2005,40(3):249-257;Int.J.Cancer.2005，114(5):675-682;Bioorg.Med.Chem.Lett.2001,11(4):437-441)?，F(xiàn)有去氫駱駝蓬堿化合物活性還不是很高，例如去氫駱駝蓬堿的抗癌抑制活性為SGC-7901人胃癌細(xì)胞8.3ug/ml,HepG2人肝癌細(xì)胞10.2ug/ml，而其他去氫駱駝蓬堿衍生物不一定有活性或活性不高。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一類新的具有抗腫瘤活性的去氫駱駝蓬堿衍生物。該類化合物以去氫駱駝蓬堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)，引入不同的取代基團(tuán)，本發(fā)明的去氫駱駝蓬堿衍生物體外顯示具有抑制GC-7901人胃癌細(xì)胞和HepG2人肝癌細(xì)活性，從而顯示具有較高的抗腫瘤活性。本發(fā)明的具有抗腫瘤活性的去氫駱駝蓬堿衍生物用下述通式(I)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中，R表示NH2、NH3+Cl'或NHCOORp所述Ri選自dC4的烷基或芐基。上述dQ的烷基是指具有l(wèi)4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的垸基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、異丁基。優(yōu)選的本發(fā)明化合物是其中R為NH2、NH3+Cl—或NHCOORi的式(I)化合物，其中R,選自C3的垸基或芐基。進(jìn)一步優(yōu)選為R為NH2、NH3+Cr或NHCOOR4的式(I)化合物，其中Ri為異丙基。R為NH2、NH/Cr的式(I)化合物其合成路線如下首先l-甲氧羰基-7-甲氧基-"-咔啉4(合成方法可參見《上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》，1999,26(2):146-147文獻(xiàn)或《精細(xì)化工中間體》，2008,38(3)，22-24文獻(xiàn)制備方法說明)在室溫下與80%的水合肼發(fā)生胺解反應(yīng)得7-甲氧基-^咔啉-l-碳酰肼^然后7-甲氧基^咔啉-1-碳酰肼5在0r下與HN02反應(yīng)得到7-甲氧基-從咔啉-l-?；B氮f(產(chǎn)率可達(dá)99.5%)，最后一步的Curtius重排反應(yīng)得l-氨基-7-甲氧基-從咔啉j[，最后成鹽得l-氨基-7-甲氧基-^咔啉鹽酸鹽2。R為NHCOO&的式(I)化合物的合成路線如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>中間體酰基疊氮6經(jīng)Curtius重排得到的異氰酸酯類化合物分別與甲醇、乙醇、丙醇等反應(yīng)合成得到1-垸氧羰基氨基-7-甲氧基-P-咔啉類化合物。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例1:7-甲氧基-^咔啉-l-碳酰肼⑤的合成將134.0mg(0.52mmol)4溶于2ml甲醇中，緩慢滴加0.7ml80%水合肼，漸漸析出白色固體，室溫下攪拌半小時(shí)，放入冰箱過夜。過濾，濾渣用少量甲醇洗滌，真空千燥得到白色固體133.0mg(99.3%)。m.p.250.4-252.7。C。^NMR(DMSO-de)S:3,86(s,3H,7-OCH3)，6.86，6.89(dd，1H，《/=2.6，8.9Hz，ArH)，7.31(d,1H，/=1.8Hz,ArH),8.12(d，1H，/=8.5Hz,ArH)，8.18(d,1H，《/=5.0Hz,ArH),8.31(d，1H,/=4.6Hz,ArH).實(shí)施例2:7-甲氧基-從咔啉-l-酰基疊氮(^)的合成在17.3ml水中加入133.0mg(0.52mmol)f，加入36%鹽酸0.76ml，冷卻至0°C,加入41.0mg(0.59mmol)NaN02，繼續(xù)在0。C攪袢2h。慢慢加入飽和Na2C03水溶液，調(diào)節(jié)pH值呈強(qiáng)堿性，過濾，真空干燥得138.0mg淡黃色粉末(99.5%)。m.p.100°C(dec.)。實(shí)施例3:l-氨基-7-甲氧基-^咔啉0)的合成將149.0mg(0.56mmol)f溶于3ml無水苯中，在N2保護(hù)下，回流10min，降溫至50°C，加入0.6ml50%NaOH水溶液，回流半小時(shí)。反應(yīng)液冷卻后，加入5ml乙酸乙酯，過濾，濾渣依次用水、乙酸乙酯洗滌，真空干燥，乙醇重結(jié)晶得114.0mg淡黃色粉末(96%)。m.p.230.5°C(dec.)。EIMSm/z:213.10(M+，4.01%),60.05(79.19%)，45.00(93.19%),43.00(100.00%).實(shí)施例4:l-氨基-7-甲氧基-^咔啉鹽酸鹽(l)的制備將40.0mgi用5mlHCl氣體飽和的甲醇溶液溶解，在接近回流的狀態(tài)下，慢慢滴加無水乙醚至剛好出現(xiàn)混濁，靜置冷卻后放入冰箱，過濾得到37.0mg黃色固體(92.5%)。&NMR(DMSO-d6)S:3.93(s，3H,7-OCH3),7.04，7.07(dd，1H,J=2.8，12.0Hz,6-ArH),7.38(d,1H,J=2.8Hz,8-ArH),8.38(d,1H,/=11.6Hz，5-ArH),8.50(d，1H，《/=8.0Hz,4-ArH),8.69(d，1H,J=7.6Hz,3-ArH)，12.26(s,1H，9-NH).13C畫R(DMSO-d6)S:55.62:95.65,112.12，112.95，117.79,124.50,131.60,134.60,135.89,146.51,162.20,163.04.Anal.Calc.forC12H12C1N30:C，57.72;H,4.84;N,16.83.Found:C,57.78;H,4"0;N,16.67.實(shí)施例5:l-甲氧羰基氨基-7-甲氧基-^咔啉Qa)的合成向2ml無水甲醇中加入61.0mg(0.23mmol)f回流攪拌5h，靜置冷卻后放入冰箱過夜，析出淡黃色固體，過濾，濾渣用少量甲醇洗滌，真空干燥得26.0mg淡黃色粉末(42.0%)。m.p.204.0°C(dec.)。'HNMR(CDC13)5:3.92(s,6H,7-OCH3，COOCH3)，6.90(d,1H,/=8,0Hz,ArH),7.01(s，1H,ArH),7.68(d，1H，/=4.8Hz，ArH),7.95(d，1H，/=8.4Hz，ArH),8.03(s,1H,ArH),9.00(brs,1H，l-NH)，10.53(brs,1H,9隱NH)。13CNMR(CDC13)S:29.69，53.06，55.57，88.26，94.77,110.18，110.86，115.27，122.21，132.19，136.48,141.84，155.33,161.16。EIMSm/z:272.00(M+l，4.62%),271.00(M+，30.59%)，239.00(100.00%)，196.00(20.29%)。Anal.Calc.forC14H13N303:C，61.99;H,4.83;N，15.49.Found:C,61.84;H,4.94;N,15.40.實(shí)施例6:l-乙氧羰基氨基-7-甲氧基-從咔啉(^)的合成向3ml無水乙醇中加入50.0mg(0.19mmol)g，回流攪拌5h，靜置冷卻，析出淡黃色晶體，過濾，濾渣用少量乙醇洗滌，真空干燥得34.0mg淡黃色粉末(63.7%)。m.p.200.0°C(dec.)。&NMR(DMSO-d6)S:1.28(t,3H,■/=6.8Hz，-OCHCH2),3.86(s，3H,7-OCH3),4.20(q,2H,/=6.8Hz,-0￡^CH3)，6.83,6.85(dd,1H，J=2.0,8.8Hz，6-ArH),7.13(d，1H,/=1.6Hz,8-ArH),7.84(d,1H,/=5.2Hz，4-ArH),8.03(d,1H,/=5.2Hz，3-ArH),8.06(d,1H，/=8.4Hz,5-ArH)，9.92(s,1H,卜NH),10.87(s，1H,9-NH)。EIMSm/z:286.05(M+l,1.89%)，285.10(M+，10.98%)，239.05(100.00%),196.05(24.67%)。Anal.Calc.forC15H15N303:C,63.15;H,5.30;N，14.73.Found:C，63.32;H，5.22;N，14.56.實(shí)施例7:l-正丙氧羰基氨基-7-甲氧基-^咔啉Qs)的合成向3ml無水正丙醇中加入58.0mg(0.22mmo1)《，回流攪拌5h，靜置冷卻，過濾，濾渣用少量正丙醇洗漆，真空干燥得46.0mg淡黃色針狀結(jié)晶(70.8%)。m.p.224.0°C(dec.)。!HNMR(DMSO-d6)5:0.94(t，3H,/=7.2Hz，-CH，CH!).1.63-1.70(m,2H,/-6.8，7.2Hz,-CH2CHA3.86(s，1H,7-OCH3),4.11(t,2H,/=6.8Hz，-OCH2),6.83,6.85(dd，1H,J=2.0,8.8Hz，6-ArH)，7.13(d,1H，/=2.0Hz,8-ArH),7.83(d，1H，J=5.2Hz,4-ArH)，8.03(d,1H，J=5.2Hz,3-ArH),8.06(d，1H，/=8.4Hz,5-ArH),9.92(s，1H,l國NH),10.87(s,1H,9-NH)。13CNMR(CDC13)S:10.36，22.30,55.53，67.69,94.75，109.97，110.63,115.31,122.15，125.46,132.12,136.37,137.04,141.72,155.15，161.01。EIMSm/z:300.00(M+l，2.93%)，299.05(M+，8.79%)，239.00(100.00%),196.00(26.06%)。Anal.Calc.forC16H17N303:C，64.20;H，5.72;N,14.04.Found:C，64.26;H，5.95;N，13.87.實(shí)施例8:l-異丙氧羰基氨基-7-甲氧基-A咔啉(M)的合成向3ml干燥的異丙醇中加入61.0mg(0.23mmo1)《，回流攪拌4h，靜置冷卻，過濾，濾渣用少量異丙醇洗漆，真空千燥得44.0mg淡黃色粉末(64.4%)。m.p.190.5-192.7°C。!HNMR(CDC13)S:1.40(d，6H，《/=8.0Hz，-CWCHA),3.91(s，3H,7-OCH3)，5.09-5.13(m，1H,J=8.4Hz，-CH)，6.87，6.90(dd,1H，《/=2.8，11.6Hz，6陽ArH)，7.00(d，1H，《/=3.2Hz，,8-ArH)，7.66(d,1H,J=6.8Hz,4-ArH),7.94(d，1H，《/=11.6Hz,5-ArH),8.08(d，1H,/=6.0Hz,3-ArH),9.07(brs,1H，l-NH)，10.53(brs，9-NH).13CNMR(CDC13)S:22.13，55.51，69.85,94.61，109.95,110.49，115.22，122.15，125.36,132.03,136.43,137.14,141.64,154.67,160.89.EIMSm/z:300.05(M+l，5.57%),299.05(M+，28.18%)，239.00(100.00%)，213.05(50.32%),196.00(26.23%),45.05(22.65%)。Anal.Calc.forC16H17N303:C，64.20;H,5.72;N,14.04.Found:C,64.46;H,5.38;N,14.01.實(shí)施例9:l-正丁氧羰基氨基-7-甲氧基-^咔啉Os)的合成向3ml干燥的正丁醇中加入61.0mg(0.23mmol)f回流攪拌4h，靜置冷卻，析出針狀結(jié)晶，過濾，濾渣用少量正丁醇洗滌，真空干燥得44.0mg銀白色粉末(61.5%)。m.p.154.6-155.6。C。!HNMR(CDC13)S:0.91-1.06(m,3H,-CH7CH2),1.42-1.54(m,2H,-CH2CHQ,1.71-1.81(m,2H,-OCHCH2),3.91(s，3H,7-OCH3)，4.27-4.31(m,2H，-OCH2),6.87,6.89(dd，1H,/=2.8，11.6Hz,6-ArH),6.98(d,1H，《/=2.8Hz,8-ArH),7.65(d,1H,/=7.2Hz，4-ArH),7.94(d,1H，J=11.2Hz，5-ArH)，8.09(d,1H,/=7.6Hz，3-ArH),9.33(brs,1H,1-NH),10.50(brs,1H,9-NH).13CNMR(CDC13)S:13.71,19.10,30.97,55.53,65.95,94.75，109.95,115.59,115.32，122.15，125.48，132.12,136.41,137.06，141.71，155.18，161.01。EIMSm/z:314.05(M+1,2.88%)，313.05(M+,13.70%),239.00(100.00%),196.00(22.15%)。Anal.Calc.forCnH19N303:C，65.16;H，6.11;N，13.41.Found:C，65.30;H,6.12;N，13.56.'實(shí)施例10:l-芐氧羰基氨基-7-甲氧基-A咔啉Qf)的合成向3ml無水苯甲醇中加入61.0mg(0.23mmo1)《，浴溫升至120-130°C，攪拌4h。減壓蒸去苯甲醇，加入3ml無水乙醇回流，靜置冷卻，過濾，濾渣用少量無水乙醇洗滌，真空干燥得35.0mg淺棕色粉末(44.1%)。m.p.194.0°C(dec.)。!HNMR(CDCl3)S:3.92(s，3H,7-OCH3),5.32(s,2H，-OCH2Ph),6.87,6》0(dd，1H,</=2.8，11.6Hz,6扁ArH)，6.99(d,1H，/=2.4Hz,8-ArH),7.34-7.47(m,5H,PhH)，7.61(d，1H，/=7.2Hz,4-ArH)，7.93(d,1H,/=12.0Hz，5-A鄰,8.00(d,1H,■/=7.2Hz，3-ArH).13CNMR(CDC13)S:29.69，55.56,67.76,94.77，110.03，110.79,115.30，122.19，125.38，128.18,128.49,128.70,132.16,135.72,136.50，141.71，161.06。EIMSm/z:348.05(M+l，2.11%),347.05(lvT，5.98%),239.00(100.00%),196.00(33.87%),108.05(27.69%),79.05(32.34%)。Anal.Calc.forC20H17N3O3:C，69.15;H,4.93;N，12.10.Found:C,68.97;H,5.22;N，12.05.實(shí)施例11:l-叔丁氧羰基氨基-7-甲氧基-^咔啉Qg)的合成向2ml干燥的叔丁醇中加入44.0mg(0.17mmol)f，回流攪拌5h。減壓蒸去叔丁醇，加入2ml無水乙醇回流，靜置冷卻后放入冰箱，過濾，濾渣用少量無水乙醇洗滌，真空干燥得26.0mg淡黃色粉末(50.4%)。m.p.230.0。C(dec.)。'HNMR(CDC13)S:1.60(s，9H，-C(CH3)3),3.93(s,3H,7-OCH3),6.86，6.89(dd，1H，《/=3.2,11.6Hz，6-ArH),7.02(d，1H，/=2.8Hz,8-ArH),7.63(d,1H，《/=7.2Hz,4國ArH)，7.93(d,1H，J=11.6Hz，5-ArH)，8.05(s,1H,J=7.2Hz,3-緒)，8.46(brs，1H,l-NH)，10.50(brs，1H，9-NH)。EIMSm/z:314.00(M+l,4.48%)，313.05(IvT,20.88%),239.00(39.02%)，213.00(100.00%)。Anal.Calc.forC17H19N303:C,65.16;H，6.11;N,13.41.Found:C，65.28;H，6.18;N，13.50.實(shí)施例12:l-仲丁氧羰基氨基-7-甲氧基-^咔啉Qli)的合成向2ml干燥的仲丁醇中加入45.0mg(0.17mmol)《，回流攪拌5h。靜置冷卻后析出晶體，過濾，濾渣用少量仲丁醇洗滌，真空干燥得28.0mg無色針狀晶體(53.1%)。m.p.160.2。C(dec.)。'HNMR(CDC13)S:1.00(t,3H,/=10.0Hz，-CH，CH》,1.36-1.44(m,3H，-CHQHj),1.63-1.82(m,2H,-CH2)，3.91(s,3H,7-OCH3),4.90-4.97(m,1H，-CH),6.86，6.89(dd,1H，《/=3.2,11.6Hz,6-ArH),6.99(d，1H,/=3.2Hz,8-ArH)，7.65(d，1H,J=7.2Hz,4-ArH),7.93(d，1H,/=11.2Hz，5-ArH),8.10(d，1H,/=7.2Hz，3-ArH),9.16(brs，l-NH)，10.52(brs，9-NH)。EIMSm/z:314.05(M+l,9.99%)，313.05(IVT,44.96%),239.00(66.71%),213.00(100.00%)。Anal.Calc.forC17H19N303:C，65.16;H,6.11;N，13.41.Found:C,64.94;H,6.63;N,13.22.實(shí)施例13:l-異丁氧羰基氨基-7-甲氧基-^咔啉Qi)的合成向2ml干燥的異丁醇中加入40.0mg(0.15mmol)f，回流攪拌4.5h。靜置冷卻后析出晶體，過濾，濾渣用少量異丁醇洗滌，真空干燥得36.0mg淡黃色粉末(76.8%)。m.p.172.0-174.0°C。！HNMR(CDC13)5:1.01-1.03(m.6H，隱CH(CH!V),2.01-2.14(m，1H，-CH),3.91(s，3H,7-OCH3),4.07(d，2H,7=8.8Hz,-CH2),6.87，6.90(dd,1H,/=2.8,11.6Hz，6-ArH),6.98(d,1H,/=2.8Hz,8-ArH)，7.65(d,1H,/=6.8Hz,4-ArH)，7.94(d,1H，</=11.2Hz，5-ArH),8.07(d,1H,</=7.6Hz,3-ArH)，8.83(brs，1H,l-NH)，10.47(brs,1H，9-NH)。EMSm/z:314.00(M+l，5.61%)，313.05(M^29.40%)，239.00(100.00%),213.00(29.79%)，40.00(26.05%)。Anal.Calc.forCi7Hi9N303:C,65.16;H，6.11;N,13.41.Found:C,65.18;H,6.40;N,13.25.實(shí)施例14:選取部分上述實(shí)施例制備出來的去氫駱駝蓬堿衍生物，但并不限于這幾種，在國家新藥篩選中心進(jìn)行腫瘤抑制試驗(yàn)。采用磺酰羅丹明B蛋白染色法作用72小時(shí)進(jìn)行后，測定各化合物10.5mol/L濃度下對腫瘤細(xì)胞生長的百分抑制率％，結(jié)果如下表，同時(shí)，我們也采用了相同的方法測定了去氫駱駝蓬堿在10.5mol/L濃度下對腫瘤細(xì)胞生長的百分抑制率％，結(jié)果也列于下表。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>相對比于去氫駱駝蓬堿的抗癌抑制活性，我們設(shè)計(jì)的化合物對HepG2和SGC-7901的百分抑制率有明顯的提高。以上實(shí)施例是對專利的說明和進(jìn)一步解釋，而不是對本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的精神和權(quán)利保護(hù)范圍內(nèi)所做的任何修改，都落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。權(quán)利要求1、下述通式(I)化合物其中，R表示NH2、NH3+Cl-或NHCOOR1，所述R1選自C1～C4的烷基或芐基。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于R,選自C3的烷基或芐基。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其特征在于R表示NH2或NH3+C1'。4、根據(jù)權(quán)利要求l或2所述的化合物，其特征在于R4選自異丙基。全文摘要本發(fā)明涉及通式(I)具有抗腫瘤活性的去氫駱駝蓬堿衍生物，其中，R表示NH₂、NH₃⁺Cl^-或NHCOOR₁，所述R₁選自C₁～C₄的烷基或芐基。該類化合物以去氫駱駝蓬堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)，引入不同的取代基團(tuán)，其生物體外顯示具有抑制GC-7901人胃癌細(xì)胞和HepG2人肝癌細(xì)活性，從而顯示具有較高的抗腫瘤活性。文檔編號A61P35/00GK101328175SQ20081006324公開日2008年12月24日申請日期2008年7月25日優(yōu)先權(quán)日2008年7月25日發(fā)明者伊周,徐廣宇,蔣勇軍,鄒建衛(wèi)申請人:浙江大學(xué)寧波理工學(xué)院