專利名稱：：解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖中的解毒劑，尤其是一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸及其制備方法。
背景技術(shù)：
：水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中的Cd、Hg、Pb、Cu等重金屬以及孔雀石綠、硝基呋喃類、喹諾酮類等毒性物質(zhì)主要來自農(nóng)業(yè)中的藥物殘留污染以及生活污水、氯堿工業(yè)、電池制造、煉礦等工業(yè)污染。上述物質(zhì)均具有較大的毒性(l).重金屬的毒副作用主要是妨礙人體必需微量元素的吸收，干擾巰基功能從而影響酶和蛋白的活性，具有急性毒性和累積毒性以及遠(yuǎn)期毒效應(yīng)，長期食用高重金屬含量的食物容易引起神經(jīng)系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)和消化系統(tǒng)多臟器損害；(2).孔雀石綠和硝基呋喃類均被發(fā)現(xiàn)具有致畸、致突變和致癌作用；(3).喹諾酮類具有使人體產(chǎn)生耐藥性和某些潛在的致癌性質(zhì)。因此國外對水產(chǎn)品中上述物質(zhì)的含量進(jìn)行了嚴(yán)格的限制。鰻鱺是底棲動(dòng)物，易從飼料、水、藥物和沉積物的污染等吸收有毒物質(zhì)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一是提供一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸，該納米微丸能夠有效降低鰻鱺體內(nèi)重金屬元素以及孔雀石綠、硝基呋喃類、喹諾酮類等毒性物質(zhì)的含量，并且有助于鰻鱺肝臟的修復(fù)，安全性高。本發(fā)明的目的之二是提供一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸的制備方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸，其納米草本植物微丸的有效成分及其重量百分比分別為欖仁葉白馬骨葉橄欖葉色木槭葉野茼蒿葉有機(jī)配體修飾后的納米二氧化硅微晶纖維素2.8%—3.20/0;5.8%—6.2%;7.0%—7.4%;3.4%—3.8%;10.0%—10.4%;39.8%—40.2%;23.8%—24.2%;5.8%——6.2%。一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸的制備方法，其制備方法的步驟為(1).按重量配比稱取欖仁葉、白馬骨葉、橄欖葉、色木槭葉、野茼蒿葉并用超音速高壓氣流噴射粉碎設(shè)備制成納米草本植物混合體，納米草本植物混合體的粒徑不大于120nm;(2).用真空混合機(jī)將按重量配比稱取的納米二氧化硅與納米草本植物混合體在常溫下混合2832分鐘，然后過IOO目篩得到混合物A備用；(3).將混合物A與按重量配比取的微晶纖維素以及殼聚糖在真空混合機(jī)中常溫混合13~17分鐘得到混合物B備用；(4).將混合物B與相應(yīng)重量的純凈水在常溫下攪拌均勻后投入自動(dòng)恒溫微丸機(jī)中制備直徑為1.5mm濕顆粒；(5).將制備好的濕顆粒在4347'C下干燥79h，即得到成品解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及有益效果是1.本解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸利用有機(jī)配體修飾后的納米二氧化硅具有較大的表面積和規(guī)則的氣孔，同時(shí)表面具有多種有機(jī)配體的特點(diǎn)，使之與Cd、Hg、Pb、Cu等重金屬、孔雀石綠、硝基呋喃類、喹諾酮類的特定官能團(tuán)有機(jī)結(jié)合而產(chǎn)生牢固的吸附作用，而且納米二氧化硅作為納米植物成分的載體，使有效成份順利進(jìn)入其孔徑中形成較封閉的環(huán)境，可有效防止外界因素的干擾和破壞，將有效成份相對完整地輸送到作用部位。2.本解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸通過加入納米欖仁葉、白馬骨葉、橄欖葉、色木槭葉、野茼蒿葉等解毒保肝的純植物成分，可顯著促進(jìn)鰻鱺中毒后肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)的修復(fù)，具有良好的抗肝損傷及修復(fù)肝損傷作用。3.本解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸組分全部采用納米成分，利用納米技術(shù)加工原材料將其有效成分更多的釋放出來，同時(shí)比表面積增加，與給藥部位接觸面積大，促進(jìn)了有效成份的溶解，其粘附性能使有效成份在吸收部位時(shí)間延長，可大大提高有效成分吸收速度和吸收程度，從而減少用量。同時(shí)，納米成分由于其粒徑和形態(tài)的特點(diǎn)，容易被肝臟的Kupffer細(xì)胞捕捉和吞噬，使其在肝臟中聚集，然后逐步降解釋放到血液循環(huán)。此外，納米成分由于小的粒徑和大的選擇吸附能力，可穿透皮膚屏障，進(jìn)入魚肉、鰓部、血液、肝臟等任何毒素集中的部位，從而起到全身解毒的作用。5.本解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸的制備方法簡單，制備成微丸后，提高整個(gè)成品的有效性和穩(wěn)定性，保證產(chǎn)品的高效利用。6.本發(fā)明能夠有效降低鰻鱺體內(nèi)重金屬元素以及孔雀石綠、硝基呋喃類、喹諾酮類等毒性物質(zhì)的含量，并且有助于鰻鱺肝臟的修復(fù)，原材料全部采用純植物成分，不會給鰻鱺機(jī)體造成新的殘留，安全性高，同時(shí)符合國家環(huán)保要求。具體實(shí)施例方式本發(fā)明通過以下實(shí)施例進(jìn)一步詳述。需要說明的是下述實(shí)施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實(shí)施例來限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明中的有機(jī)配體修飾后的納米二氧化硅以及微晶纖維素均可以在市場上購買得到。實(shí)施例1一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸，其微丸的有效成分及其重量為欖仁葉30kg;白馬骨葉60kg;橄欖葉72kg;色木槭葉36kg;野茼蒿葉102kg;有機(jī)配體修飾后的納米二氧化硅400kg;微晶纖維素240kg;殼聚糖60kg。一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸的制備方法，其方法的步驟為(1).將按重量配比取的欖仁葉30kg、白馬骨葉60kg、橄欖葉72kg、色木槭葉36kg、野茼蒿葉102kg，用超音速高壓氣流噴射粉碎設(shè)備制成為納米草本植物混合體，納米草本植物混合體的粒徑小于120nm;(2).用真空混合機(jī)將按重量配比取的納米二氧化硅400kg與納米草本植物混合體在常溫下混合30分鐘，然后過100目篩得到混合物A備用；(3).將混合物A與按重量配比取的微晶纖維素240kg以及殼聚糖60kg在真空混合機(jī)中常溫混合15分鐘得到混合物B備用；(4).將混合物B與相應(yīng)量500kg的純凈水在常溫下攪拌均勻后投入自動(dòng)恒溫微丸機(jī)中制備直徑為1.5mm濕顆粒；(5).將制備好的濕顆粒在45。C下干燥8h，即得到成品解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸。實(shí)施例2一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸，其微丸的有效成分及其重量為欖仁葉28kg;白馬骨葉58kg;橄欖葉70kg;色木槭葉34kg;野茼蒿葉104kg;有機(jī)配體修飾后的納米二氧化硅402kg;微晶纖維素242kg;殼聚糖62kg。制備方法的步驟同實(shí)施例1。實(shí)施例3一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸，其微丸的有效成分及其重量為欖仁葉32kg;白馬骨葉62kg;橄欖葉74kg;色木槭葉38kg;野茼蒿葉100kg;有機(jī)配體修飾后的納米二氧化硅398kg;微晶纖維素238kg;殼聚糖58kg。制備方法的步驟同實(shí)施例1。實(shí)施例4一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸，其微丸的有效成分及其重量為欖仁葉28kg;白馬骨葉62kg;橄欖葉70kg;色木槭葉38kg;野茼蒿葉100kg;有機(jī)配體修飾后的納米二氧化硅402kg;微晶纖維素238kg;殼聚糖62kg。制備方法的步驟同實(shí)施例1。實(shí)施例5一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸，其微丸的有效成分及其重量為:欖仁葉32kg;白馬骨葉58kg;橄欖葉74kg;色木槭葉34kg;野茼蒿葉104kg;有機(jī)配體修飾后的納米二氧化硅398kg;微晶纖維素242kg;殼聚糖58kg。制備方法的步驟同實(shí)施例1。本發(fā)明的試驗(yàn)效果試驗(yàn)魚采用同一養(yǎng)殖魚塘健康日本鰻鱺480尾(確保本底的同質(zhì)性)，平均體重(50.0士1.5)g，平均體長(47.2±2.O)cm(該規(guī)格鰻鱺代謝旺盛，對環(huán)境比較敏感)。一、解除重金屬中毒試驗(yàn)1材料與方法1.1試驗(yàn)材料1.1.1試驗(yàn)魚鰻鱺120尾。1.1.2試驗(yàn)藥品Pb、Cd、Hg、Cu，納米草本植物微丸(實(shí)驗(yàn)組，所有草本植物在使用前均進(jìn)行過檢測，不含重金屬、孔雀石綠、硝基呋喃類、喹諾酮類等有毒成分)、鰻鱺降毒寶(對照組，化藥成分，不含重金屬、孔雀石綠、硝基呋喃類、喹諾酮類等有毒成分)。1.2試驗(yàn)方法1.2.1將試驗(yàn)魚于200L水族箱中暫養(yǎng)2周，增氧器24h增氧(整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程增氧)，不投餌；水源為經(jīng)曝氣去氯處理的自來水(自來水中未檢出重金屬等有毒成分，Cu的本底值為0.004mg/L),其pH6.77.5，溶解氧6.8mg/L，其它指標(biāo)符合漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)；水溫控制在2325X:，采用半靜態(tài)換水法，每天更換三分之一的水。在試驗(yàn)過程中控制水溫、pH、溶解氧等指標(biāo)保持穩(wěn)定，同時(shí)保持12小時(shí)黑暗和12小時(shí)光照的條件。1.2.2重金屬中毒模型的建立及納米制劑使用劑量(1).重金屬中毒模型的建立參考急性毒理學(xué)試驗(yàn)半數(shù)致死劑量(LDs。)設(shè)置Pb、Cd、Hg、Cu的暴露濃度。三種重金屬均設(shè)置約十分之一LDs。濃度，即Pb、Cd、Hg、Cu的加入濃度分別為O.1mg/L、0.1mg/L、0.05mg/L、0.12mg/L。(2).納米制劑使用劑量200克/次，每天2次，間隔l天使用一次，連用3天。1.2.3試驗(yàn)分組及給藥方法隨機(jī)將鰻鱺平均分為4組，每組飼養(yǎng)鰻鱺30尾。其中組I作為試驗(yàn)的陰性空白對照組，養(yǎng)于清水中，每天更換三分之一的水；組II、組III、組IV為試驗(yàn)組，分別暴露于Pb、Cd、Hg、Cu的濃度分別為O.lmg/L、0.lmg/L、0.05mg/L、0.12mg/L的溶液中20天，每天換液l/3以保證此四種重金屬濃度基本穩(wěn)定。第21天起，組II作為試驗(yàn)的陽性空白對照組養(yǎng)于清水中；組III為陽性治療試驗(yàn)組，投喂納米制劑200克/次，每天2次，間隔l天使用一次，連用3天；組IV為陽性治療試驗(yàn)對照組，投喂鰻魚降毒寶200克/次，每天2次，間隔l天使用一次，連用3天。1.2.4生物樣品重金屬的分析試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，在冰盤中剖殺試驗(yàn)魚，迅速取出肝臟，每尾魚均在相同部位取樣，測定肝臟中重金屬的含量，用石墨爐原子吸收分光光度法測定Pb、Cd、Cu，冷原子吸收光度法測定Hg的含量。2結(jié)果與分析2.1肝組織超微結(jié)構(gòu)2.1.1組I(陰性空白對照組)電鏡下可見絕大部分肝細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整，橋粒及緊密連接清晰可見。細(xì)胞核核質(zhì)均勻，核被膜平滑，核膜雙層結(jié)構(gòu)清晰，核孔可見，核染色質(zhì)分布均勻，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)各種細(xì)胞器清晰可辨；核周隙正常。2.1.2組II(陽性空白對照組)電鏡下可見大多數(shù)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常變形。細(xì)胞核形狀不規(guī)則，呈線性或顆粒狀，核膜凹凸不平，結(jié)構(gòu)模糊；核質(zhì)不均勻，異染色質(zhì)凝聚成斑塊狀或線條狀，有些呈致密的顆?；驁F(tuán)塊狀，向一側(cè)偏移，內(nèi)有氣泡；核周隙增大。2.1.3組III(陽性治療試驗(yàn)組)電鏡下可見絕大多數(shù)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)己基本恢復(fù)正常。細(xì)胞核形狀規(guī)則，呈卵圓形；細(xì)胞核核質(zhì)均勻，核仁清晰可見，核被膜平滑，核膜雙層結(jié)構(gòu)非常清晰；核周隙正常。2.1.4組IV(陽性治療試驗(yàn)對照組)電鏡下部分肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常，但多數(shù)形狀較不規(guī)則。正常胞核結(jié)構(gòu)正常，染色質(zhì)較均勻，核仁較清晰，核被膜平滑，核膜雙層結(jié)構(gòu)較清晰；核周隙增大。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>二、解除孔雀石綠中毒試驗(yàn)1材料與方法1.1試驗(yàn)材料1.1.1試驗(yàn)魚鰻鱺120尾。1.1.2試驗(yàn)藥品孔雀石綠、無色孔雀石綠、納米草本植物微丸、鰻鱺降毒寶1.2試驗(yàn)方法1.2.1將試驗(yàn)魚于200L水族箱中暫養(yǎng)2周，增氧器24h增氧(整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程增氧)，不投餌；水源為經(jīng)曝氣去氯處理的自來水(自來水中未檢出重金屬等有毒成分，Cu的本底值為O.004mg/L)，其pH6.77.5，溶解氧6.8mg/L，其它指標(biāo)符合漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)；水溫控制在2325t:，采用半靜態(tài)換水法，每天更換三分之一的水。在試驗(yàn)過程中控制水溫、pH、溶解氧等指標(biāo)保持穩(wěn)定，同時(shí)保持12小時(shí)黑暗和12小時(shí)光照的條件。1.2.2孔雀石綠中毒模型的建立及納米制劑使用劑量(1).孔雀石綠中毒模型的建立孔雀石綠中毒模型的暴露濃度為0.2mg/L。(2).納米制劑使用劑量250克/次，每天2次，連用3天。1.2.3試驗(yàn)分組及給藥方法隨機(jī)將鰻鱺平均分為4組，每組飼養(yǎng)鰻鱺30尾。其中組I作為試驗(yàn)的陰性空白對照組，養(yǎng)于清水中，每天更換三分之一的水；組II、組III、組IV為試驗(yàn)組，分別暴露于孔雀石綠濃度為0.2mg/L的溶液中24小時(shí)。第25小時(shí)起，組II作為試驗(yàn)的陽性空白對照組養(yǎng)于清水中，連續(xù)飼養(yǎng)3天；組III為陽性治療試驗(yàn)組，投喂納米制劑250克/次，每天2次，連用3天；組IV為陽性治療試驗(yàn)對照組，投喂鰻魚降毒寶250克/次，每天2次，連用3天。1.2.4生物樣品孔雀石綠的分析試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，在冰盤中剖殺試驗(yàn)魚，迅速取出肝臟，每尾魚均在相同部位取樣，使用高效液相色譜法測定肝臟中孔雀石綠的含量。2結(jié)果與分析2.1肝組織超微結(jié)構(gòu)2.1.1組I(陰性空白對照組)電鏡下可見絕大部分肝細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整，橋粒及緊密連接清晰可見。細(xì)胞核核質(zhì)均勻，核被膜平滑，核膜雙層結(jié)構(gòu)清晰，核孔可見，核染色質(zhì)分布均勻，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)各種細(xì)胞器清晰可辨；核周隙正常。2.1.2組II(陽性空白對照組)出現(xiàn)了一系列凋亡細(xì)胞的特征，如核內(nèi)染色質(zhì)凝聚，呈顆粒或團(tuán)塊狀，染色質(zhì)周邊化，棱向細(xì)胞質(zhì)突出、斷裂，細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)大量空泡，細(xì)胞向外突出，形成凋亡小體。核周隙增大。2.1.3組III(陽性治療試驗(yàn)組)電鏡下可見絕大多數(shù)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)已基本恢復(fù)正常。核內(nèi)染色質(zhì)均勻，細(xì)胞質(zhì)中空泡消失，凋亡小體消失。核周隙基本恢復(fù)正常。2.1.4組IV(陽性治療試驗(yàn)對照組)電鏡下部分肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常，但多數(shù)細(xì)胞核核內(nèi)染色質(zhì)依然不均勻，部分凋亡小體繼續(xù)存在。核周隙基本恢復(fù)正常。2.2孔雀石綠在肝臟的殘留量(單位mg/kg)組別^^-^^孔雀石綠無色孔雀石綠組I00組n68.51642.3組ni0.0216.8組IV0.18147.6三、解除硝基呋喃類中毒試驗(yàn)1材料與方法1.1試驗(yàn)材料1.1.1試驗(yàn)魚鰻鱺120尾。1.1.2試驗(yàn)藥品呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋喃它酮混合溶液，納米草本植物微丸、鰻鱺降毒寶1.2試驗(yàn)方法1.2.1將試驗(yàn)魚于200L水族箱中暫養(yǎng)2周，增氧器24h增氧(整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程增氧)，不投餌；水源為經(jīng)曝氣去氯處理的自來水(自來水中未檢出重金屬等有毒成分，Cu的本底值為0.004mg/L)，其pH6.77.5，溶解氧6.8mg/L，其它指標(biāo)符合漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)；水溫控制在2325'C，采用半靜態(tài)換水法，每天更換三分之一的水。在試驗(yàn)過程中控制水溫、PH、溶解氧等指標(biāo)保持穩(wěn)定，同時(shí)保持12小時(shí)黑暗和12小時(shí)光照的條件。1.2.2硝基呋喃類中毒模型的建立及納米制劑使用劑量(1).硝基呋喃類中毒模型的建立硝基呋喃類混合溶液的暴露濃度分別為O.3mg/L。(2).納米制劑使用劑量305克/次，每天2次，連用3天。1.2.3試驗(yàn)分組及給藥方法隨機(jī)將鰻鱺平均分為4組，每組飼養(yǎng)鰻鱺30尾。其中組I作為試驗(yàn)的陰性空白對照組，養(yǎng)于清水中，每天更換三分之一的水；組II、組III、組IV為試驗(yàn)組，分別暴露于硝基呋喃類混合溶液濃度為0.3mg/L的溶液中24小時(shí)。第25小時(shí)起，組II作為試驗(yàn)的陽性空白對照組養(yǎng)于清水中，連續(xù)飼養(yǎng)3天；組III為陽性治療試驗(yàn)組，投喂納米制劑305克/次，每天2次，連用3天；組IV為陽性治療試驗(yàn)對照組，投喂鰻魚降毒寶305克/次，每天2次，連用3天。1.2.4生物樣品硝基呋喃類的分析試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，在冰盤中剖殺試驗(yàn)魚，迅速取出肝臟，每尾魚均在相同部位取樣，使用高效液相色譜法測定肝臟中硝基呋喃類的含量。2結(jié)果與分析2.1肝組織超微結(jié)構(gòu)2.1.1組I(陰性空白對照組)電鏡下可見絕大部分肝細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整，橋粒及緊密連接清晰可見。細(xì)胞核核質(zhì)均勻，核被膜平滑，核膜雙層結(jié)構(gòu)清晰，核孔可見，核染色質(zhì)分布均勻，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)各種細(xì)胞器清晰可辨；核周隙正常。2.1.2組II(陽性空白對照組)電鏡下可見大多數(shù)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常。核內(nèi)染色質(zhì)發(fā)生不規(guī)則凝集、固縮和周邊化，有些呈月牙形，分布在核膜一側(cè)，有些呈致密的顆?；驁F(tuán)塊狀，部分核內(nèi)凝集的染色質(zhì)突出到核外，形成凋亡小體，最終在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大量凋亡。核周隙縮小。2.1.3組III(陽性治療試驗(yàn)組)電鏡下可見絕大多數(shù)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)己基本恢復(fù)正常。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)較均勻，核仁清晰可見，凋亡小體消失。核周隙基本恢復(fù)正常。2.1.4組IV(陽性治療試驗(yàn)對照組)電鏡下部分肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常，凋亡小體消失，但部分細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)依然呈不規(guī)則凝聚。核周隙部分恢復(fù)正常。2.2硝基呋喃類在肝臟的殘留量(單位mg/kg)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>四、解除喹諾酮類中毒試驗(yàn)1材料與方法1.1試驗(yàn)材料1.1.1試驗(yàn)魚鰻鱺120尾。1.1.2試驗(yàn)藥品恩諾沙星、乳酸環(huán)丙沙星混合溶液，納米草本植物微丸、鰻鱺降毒寶1.2試驗(yàn)方法1.2.1將試驗(yàn)魚于200L水族箱中暫養(yǎng)2周，增氧器24h增氧(整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程增氧)，不投餌；水源為經(jīng)曝氣去氯處理的自來水(自來水中未檢出重金屬等有毒成分，Cu的本底值為0.004mg/L)，其pH6.77.5，溶解氧6.8mg/L，其它指標(biāo)符合漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)；水溫控制在2325"C，采用半靜態(tài)換水法，每天更換三分之一的水。在試驗(yàn)過程中控制水溫、pH、溶解氧等指標(biāo)保持穩(wěn)定，同時(shí)保持l2小時(shí)黑暗和12小時(shí)光照的條件。1.2.2喹諾酮類中毒模型的建立及納米制劑使用劑量(1).喹諾酮類中毒模型的建立喹諾酮類混合溶液的暴露濃度分別為4.Omg/L。(2).納米制劑使用劑量290克/次，每天2次，連用3天。1.2.3試驗(yàn)分組及給藥方法隨機(jī)將鰻鱺平均分為4組，每組詞養(yǎng)鰻鱺30尾。其中組I作為試驗(yàn)的陰性空白對照組，養(yǎng)于清水中，每天更換三分之一的水；組II、組III、組IV為試驗(yàn)組，分別暴露于喹諾酮類混合溶液濃度為4.0mg/L的溶液中24小時(shí)。第25小時(shí)起，組II作為試驗(yàn)的陽性空白對照組養(yǎng)于清水中，連續(xù)飼養(yǎng)3天；組III為陽性治療試驗(yàn)組，投喂納米制劑290克/次，每天2次，連用3天；組IV為陽性治療試驗(yàn)對照組，投喂鰻魚降毒寶290克/次，每天2次，連用3天。1.2.4生物樣品喹諾酮類的分析試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，在冰盤中剖殺試驗(yàn)魚，迅速取出肝臟，每尾魚均在相同部位取樣，使用高效液相色譜法測定肝臟中喹諾酮的含量。2結(jié)果與分析2.1肝組織超微結(jié)構(gòu)2.1.1組I(陰性空白對照組)電鏡下可見絕大部分肝細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整，橋粒及緊密連接清晰可見。細(xì)胞核核質(zhì)均勻，核被膜平滑，核膜雙層結(jié)構(gòu)清晰，核孔可見，核染色質(zhì)分布均勻，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)各種細(xì)胞器清晰可辨；核周隙正常。2.1.2組n(陽性空白對照組)電鏡下可見大多數(shù)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常。細(xì)胞核形狀不規(guī)則，核膜凹凸不平，結(jié)構(gòu)模糊；核質(zhì)不均勻，異染色質(zhì)凝聚成斑塊狀，或濃縮靠邊位于核膜下，有些呈致密的顆?；驁F(tuán)塊狀。核周隙增大。2.1.3組III(陽性治療試驗(yàn)組)電鏡下可見絕大多數(shù)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)己基本恢復(fù)正常。細(xì)胞核形狀規(guī)則，呈卵圓形；細(xì)胞核核質(zhì)均勻，核仁清晰可見，核被膜平滑，核膜雙層結(jié)構(gòu)非常清晰；核周隙正常。2.1.4組IV(陽性治療試驗(yàn)對照組)電鏡下部分肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常，但多數(shù)形狀較不規(guī)則。正常胞核結(jié)構(gòu)正常，染色質(zhì)較均勻，核仁較清晰，核被膜平滑，核膜雙層結(jié)構(gòu)較清晰；不規(guī)則細(xì)胞結(jié)構(gòu)依然很模糊，核周隙增大。2.2硝基呋喃類在肝臟的殘留量(單位mg/kg)組別^^^^恩諾沙星乳酸環(huán)丙沙星組I00組II1.61.8組ni0.020.03組IV0.120.20分析與結(jié)論電鏡觀察結(jié)果顯示，陰性空白對照組健康鰻鱺肝細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)為正常超微結(jié)構(gòu)；陽性空白對照組鰻鱺肝細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)為重金屬、孔雀石綠、硝基呋喃類、喹諾酮類中毒所致肝損傷時(shí)超微結(jié)構(gòu)；通過對治療試驗(yàn)組的電鏡觀察比較，試驗(yàn)中各治療組鰻鱺肝組織細(xì)胞的超微病理結(jié)構(gòu)較陽性空白對照組已有顯著的改善，并顯示了損傷細(xì)胞進(jìn)行修復(fù)時(shí)所具有的一些微觀變化，但總體來講陽性治療實(shí)驗(yàn)組的效果比對照組明顯。同時(shí)，從各類物質(zhì)在肝臟的殘留量的數(shù)據(jù)監(jiān)測顯示，治療實(shí)驗(yàn)組能明顯消除重金屬、孔雀石綠、硝基呋喃類、喹諾酮類在鰻鱺體內(nèi)的殘留。這表明，采用由欖仁葉、白馬骨葉、橄欖葉、色木槭葉、野茼蒿葉、納米二氧化硅等制成的納米草本植物微丸對重金屬、孔雀石綠、硝基呋喃類、喹諾酮類的蓄積以及肝損傷有顯著作用，從亞細(xì)胞水平上起到保肝解毒之功效。權(quán)利要求1.一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸，其特征在于納米草本植物微丸的有效成分及其重量百分比分別為欖仁葉2.8％-3.2％；白馬骨葉5.8％-6.2％；橄欖葉7.0％-7.4％；色木槭葉3.4％-3.8％；野茼蒿葉10.0％-10.4％；有機(jī)配體修飾后的納米二氧化硅39.8％-40.2％；微晶纖維素23.8％-24.2％；殼聚糖5.8％-6.2％。2.—種如權(quán)利要求1所述的解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸的制備方法，其特征在于制備方法的步驟為(1).按重量配比稱取欖仁葉、白馬骨葉、橄欖葉、色木槭葉、野茼蒿葉并用超音速高壓氣流噴射粉碎設(shè)備制成納米草本植物混合體，納米草本植物混合體的粒徑不大于120nm;(2).用真空混合機(jī)將按重量配比稱取的納米二氧化硅與納米草本植物混合體在常溫下混合28~32分鐘，然后過100目篩得到混合物A備用；(3).將混合物A與按重量配比取的微晶纖維素以及殼聚糖在真空混合機(jī)中常溫混合1317分鐘得到混合物B備用；(4).將混合物B與相應(yīng)重量的純凈水在常溫下攪拌均勻后投入自動(dòng)恒溫微丸機(jī)中制備直徑為1.5mm濕顆粒；(5).將制備好的濕顆粒在4347。C下干燥7~9h，即得到成品解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸。欖仁葉白馬骨葉橄欖葉色木槭葉野茼蒿葉2.8%—3.2%;5.8%—6.2%;7.0%—7.4%;3.4%—3.8%;10.0%—10.4%;39.8%—40.2%;23.8%—24.2%;5.8%—6.2%。有機(jī)配體修飾后的納米二氧化硅微晶纖維素殼聚糖全文摘要本發(fā)明涉及一種解除鰻鱺中毒的納米草本植物微丸及其制備方法，其中該微丸的有效成分及其重量百分比為欖仁葉2.8％-3.2％；白馬骨葉5.8％-6.2％；橄欖葉7.0％-7.4％；色木槭葉3.4％-3.8％；野茼蒿葉10.0％-10.4％；有機(jī)配體修飾后的納米二氧化硅39.8％-40.2％；微晶纖維素23.8％-24.2％；殼聚糖5.8％-6.2％。本發(fā)明能夠有效降低鰻鱺體內(nèi)重金屬元素以及孔雀石綠、硝基呋喃類、喹諾酮類等毒性物質(zhì)的含量，并且有助于鰻鱺肝臟的修復(fù)，原材料全部采用純植物成分，不會給鰻鱺機(jī)體造成新的殘留，安全性高，同時(shí)符合國家環(huán)保要求。文檔編號A61K36/185GK101653498SQ20081005417公開日2010年2月24日申請日期2008年8月19日優(yōu)先權(quán)日2008年8月19日發(fā)明者建孫,陳慶忠申請人:天津瑞貝特科技發(fā)展有限公司