專利名稱：：一種治療糖尿病的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種通過腸道促吸收劑提高口服鹽酸小檗堿生物利用度的藥物組合物及其用在治療糖尿病的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：糖尿病是常見病，多發(fā)病，其患病率正隨著人們生活水平的提高，人口老化、生活方式的改變而迅速增加。估計(jì)我國(guó)現(xiàn)有糖尿病患者約3千萬，其中2型糖尿病(T2DM)患者占95%左右，T2DM的發(fā)病正趨向低齡化。糖尿病已成為居心血管病和腫瘤之后的第三大非傳染性疾病，對(duì)社會(huì)和經(jīng)濟(jì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。因此找到安全有效的降血糖及防治糖尿病并發(fā)癥的藥物具有重要意義。小檗堿(Berberine,Ber)又名黃連素，作為一種廣譜抗菌藥治療腸道細(xì)菌感染性疾病已有較長(zhǎng)的歷史，近年來發(fā)現(xiàn)小檗堿具有廣泛藥理作用，對(duì)心律失常、高血壓、充血性心力衰竭、糖尿病、高血脂等多種疾病有很好的治療作用。其中小檗堿對(duì)2型糖尿病患者有顯著的降血糖作用，近年來，大量臨床及實(shí)驗(yàn)研究表明，小檗堿在治療2型糖尿病患者中不僅具有降血糖，改善糖耐量受損的作用，而且對(duì)糖尿病并發(fā)癥如糖尿病腎病、高血壓、高血脂、血栓形成、糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病合并心腦血管疾病等疾病均有較好的防治作用。小檗堿治療糖尿病作用肯定，對(duì)其機(jī)制的研究也在不斷深入。目前的實(shí)驗(yàn)表明小檗堿治療糖尿病的機(jī)制可能有以下幾方面①增加胰島素敏感性，改善胰島素抵抗；②促進(jìn)胰島卩細(xì)胞的再生和功能修復(fù)，即導(dǎo)致胰島素釋放增加；③提高機(jī)體抗氧化能力；④降血脂、抗血小板凝集作用；⑤抑制醛糖還原酶活性。與其他大多數(shù)臨床常用藥相比，鹽酸小檗堿具有以下優(yōu)勢(shì)療效確切；作用廣泛，能起到一藥多用的作用；應(yīng)用范圍廣；副作用少；價(jià)格低廉等，因此越來越受到廣大臨床醫(yī)生的關(guān)注，有較大發(fā)展空間，具有巨大的市場(chǎng)潛力。鹽酸小檗堿具有如此顯著的優(yōu)勢(shì)，但臨床上除用于腸道感染之外，其他重要的藥理作用并未得到廣泛應(yīng)用。限制鹽酸小檗堿臨床應(yīng)用的最根本問題是其生物利用度很低，在10%左右，口服用藥難以達(dá)到有效血藥濃度，且用量過大造成病人用藥次數(shù)頻繁，耐受性差，藥效差，胃腸道副作用明顯，大大限制了其臨床應(yīng)用。如何改善鹽酸小檗堿在腸道的吸收，提高其生物利用度，降低其臨床服用量，避免其副作用成為目前亟待解決的問題。腸道吸收促進(jìn)劑與透過性差的藥物共同服用時(shí)，會(huì)增加藥物的透過性，進(jìn)而提高其生物利用度。目前腸道吸收促進(jìn)劑有很多類型，其中中鏈脂肪酸及其鹽類是常用的一類，其主要包括辛酸鈉、癸酸鈉、十二碳酸鈉、月桂酸鈉和油酸鈉等。其中癸酸鈉是一種低毒而有效的吸收促進(jìn)劑，并作為栓劑用于臨床，是一種被批準(zhǔn)在藥品中使用的促吸收劑。其促吸收機(jī)理主要是與膜結(jié)合，使膜的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生紊亂，同時(shí)與細(xì)胞間緊密連接處的各種離子產(chǎn)生螯合作用，導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白微絲收縮而暫時(shí)打開上皮緊密連接，調(diào)節(jié)緊密連接的孔徑促進(jìn)吸收，增加旁細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)。癸酸鈉的這種螯合作用造成的腸細(xì)胞損傷具有可逆性，在停藥后可迅速恢復(fù)，毒性較小，癸酸鈉促進(jìn)藥物在腸道的吸收效果確切。為此，本發(fā)明考慮將鹽酸小檗堿與腸吸收促進(jìn)劑合用從而改善鹽酸小檗堿的口服生物利用度。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種治療糖尿病的藥物組合物，目的在于通過鹽酸小檗堿與腸吸收促進(jìn)劑合用，改善鹽酸小檗堿在腸道的吸收，提高其血藥濃度，改善生物利用度，降低用量，減輕其副作用，從而能廣泛應(yīng)用于臨床。本發(fā)明采取的技術(shù)方案是是由鹽酸小檗堿和腸吸收促進(jìn)劑按重量份數(shù)比1:(0.1~10)組成。本發(fā)明腸吸收促進(jìn)劑包括下列一種或幾種辛酸鈉、癸酸鈉、十二碳酸鈉、月桂酸鈉、山梨酸鈉、油酸鈉。本發(fā)明鹽酸小檗堿與癸酸鈉的重量份數(shù)比為1:(0.5~2)。本發(fā)明鹽酸小檗堿與癸酸鈉優(yōu)選的重量份數(shù)比為1:1。本發(fā)明鹽酸小檗堿的口服給藥劑量是50-200mg/kg。本發(fā)明的藥物組合物在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。鹽酸小檗堿與腸道吸收促進(jìn)劑混合后加入適當(dāng)?shù)乃幱幂o料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素混合均勻，可制成相應(yīng)的片劑、顆粒劑、膠囊劑等各種口服制劑。本發(fā)明的鹽酸小檗堿與腸道吸收促進(jìn)劑合用，提供了一種提高口服鹽酸小檗堿生物利用度的方法，對(duì)鹽酸小檗堿在腸道的吸收所產(chǎn)生的積極效果是①可顯著提高鹽酸小檗堿在各小腸段的通透系數(shù)，增加其吸收量。②提高鹽酸小檗堿的血藥濃度，改善生物利用度。③大量實(shí)驗(yàn)及臨床研究證實(shí)鹽酸小檗堿對(duì)糖尿病療效確切，同時(shí)改善其并發(fā)癥，能起到一藥多治的作用。本發(fā)明可降低鹽酸小檗堿的臨床用量，降低副作用，對(duì)鹽酸小檗堿應(yīng)用于臨床提供新思路和新方法。目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)尚無鹽酸小檗堿與腸道吸收促進(jìn)劑合用的報(bào)道。因此，本發(fā)明具有極大的創(chuàng)新性，能夠?yàn)辂}酸小檗堿更廣泛、有效地應(yīng)用提供了新方法。本發(fā)明的鹽酸小檗堿與腸道吸收促進(jìn)劑合用用于治療糖尿病，其中鹽酸小檗堿的口服給藥劑量是50-200mg/kg，腸吸收促進(jìn)劑的給藥劑量與鹽酸小檗堿劑的量重量比為1:(0.5~2)。通過實(shí)驗(yàn)證明采用鹽酸小檗堿與腸道吸收促進(jìn)劑合用合用后治療效果要顯著高于單獨(dú)使用鹽酸小檗堿治療，并且對(duì)腸道黏膜無明顯損傷作用，證明與腸吸收促進(jìn)劑合用后相同劑量鹽酸小檗堿的藥效增強(qiáng)。圖1240min時(shí)癸酸鈉對(duì)鹽酸小檗堿累積吸收量的影響(*<0.05,與同劑量鹽酸小檗堿組相比，n=5)圖290min時(shí)癸酸鈉對(duì)鹽酸小檗堿經(jīng)各小腸段滲透的影響(*P<0.05，**P<0.01，與同腸段鹽酸小檗堿組相比，n=5)圖3鹽酸小檗堿口服給藥后不同時(shí)間點(diǎn)血藥濃度(n=6)圖4各時(shí)間點(diǎn)大鼠腸黏膜病理切片觀察(A:空白對(duì)照組；B:鹽酸小檗堿組；C:鹽酸小檗堿加癸酸鈉組)圖5各實(shí)驗(yàn)組給藥l個(gè)月后空腹血糖(###P<0.001,DMvs.con;*P<0.05,"P<0.01,DM與各治療組相比，5,』』P0.01，Ber50+sc組與Ber50組相比。@P<0.05,Berl00+sc組與BerlOO組相比,n=6)圖6各實(shí)驗(yàn)組葡萄糖耐量曲線下面積(##P<0.01，DM組與正常組相比；*P<0.05,"PO.Ol，給藥組與模型組相比；』P<0.05，Ber50+sc組與Ber50組相比；@P<0.05，BerlOO+30組與86譏00組相比，n=6)具體實(shí)施例方式下面舉例腸道吸收及藥效學(xué)方面的實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。該實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而對(duì)本發(fā)明并沒有任何限制。實(shí)施例l在體實(shí)驗(yàn)考察癸酸鈉對(duì)鹽酸小檗堿小腸段促吸收作用1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組Ber將30只Wistar大鼠隨機(jī)分為6組，分別為鹽酸小檗堿低劑量組(50pmol丄—1)、中劑量組(lOOpmol丄-1)、高劑量組(SOOnmoLL-1)，鹽酸小檗堿加癸酸鈉低劑量組(50ixmol丄"+0.2。/。SC)、中劑量組(100(imol丄"+0.2。/。SC)、高劑量組(200(imol丄"十0.2。/。SC)。每組各5只。1.2酚紅紫外分光光度分析方法的建立(1)酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立精密配制28、56、84、112、140、168pmol丄-l系列濃度酚紅溶液，分別吸取0.5ml，加入0.2mol丄"NaOH溶液5ml顯色，在波長(zhǎng)557nm處以0.2mol丄"NaOH溶液為空白對(duì)照，測(cè)定吸收度A值為縱坐標(biāo)，酚紅濃度C為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=0.0058C-0.0092(r=0.9999)，可見標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好。(2)腸循環(huán)液中酚紅含量的測(cè)定精密吸取大鼠在體腸循環(huán)液0.5mL，加入0.2mol丄-'氫氧化鈉溶液5mL。按上述方法測(cè)定吸收度，計(jì)算出酚紅濃度。1.3鹽酸小檗堿高效液相色譜分析方法的建立(1)色譜分析條件色譜柱ZorbaxExtend-Cl8;(4.6mmx250mm，5pm);流動(dòng)相10mM醋酸銨(0.1%甲酸)乙腈=72:28;用孔徑為0.45mhi微孔濾膜過濾器過濾，再超聲脫氣；流速:1.2mL/min;柱溫室溫；檢測(cè)波長(zhǎng):346nm;進(jìn)樣量20pl。分別取空白腸循環(huán)液、鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品及樣品在上述色譜條件下測(cè)定，色譜圖顯示樣品的主峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照液一致，保留時(shí)間約為5min，PBS(含Nacl8.00g/L、Na2HP04.H201.56g/L、Kcl0.20g/L、KH2P040.20g/L)緩沖液對(duì)鹽酸小檗堿的測(cè)定無干擾。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍將鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品用含酚紅PBS溶液配制成濃度分別為O.l，0.3，1，5，15，30，60嗎/ml系列溶液，在上述色譜條件下測(cè)定，以峰面積S對(duì)濃度C進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線S=31.763C-1.4038(r=0.9996)。表明鹽酸小檗堿在0.160嗎/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。(3)方法的精密度與準(zhǔn)確度分別取0.3、5、30ng/ml3個(gè)濃度的鹽酸小檗堿PBS溶液，每一濃度進(jìn)行6樣本分析，連續(xù)測(cè)定3天并與標(biāo)準(zhǔn)曲線同時(shí)進(jìn)行，計(jì)算樣品的濃度與配制濃度對(duì)照，求算測(cè)定方法的準(zhǔn)確度與精密度。測(cè)得日內(nèi)平均RSD分別為0.76。/。，0.62%，0.85%,日間RSD分別為0.93%,0.87%,1.30%。(4)腸循環(huán)液中鹽酸小檗堿濃度的測(cè)定大鼠在體腸循環(huán)液樣品經(jīng)0.45pm微孔濾膜過濾后，精確吸取2(HiL，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算鹽酸小檗堿濃度。1.4在體腸循環(huán)實(shí)驗(yàn)將大鼠禁食16h后，腹腔注射20%烏拉坦溶液(5ml.kg'')麻醉、固定。沿腹中線打開腹腔，結(jié)扎膽總管，在十二指腸上端和回腸下端各剪開一個(gè)小口，用37'C生理鹽水將小腸內(nèi)容物沖洗干凈，以空氣排出生理鹽水。然后在兩開口端插管并結(jié)扎，插管與恒流泵連接形成回路。先用37'C恒溫的PBS液以5ml/min速度循環(huán)20min，空氣排凈循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)PBS液；然后用37"C恒溫供試藥液100ml以5ml/min的速度循環(huán)10min，繼之以lml/min的速度循環(huán)，計(jì)時(shí)開始。供試液為含酚紅56pmol丄"和鹽酸小檗堿或鹽酸小檗堿加癸酸鈉的PBS緩沖液。于循環(huán)0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0h取回流液1.5ml，同時(shí)補(bǔ)充等量56pmol丄"酚紅溶液。分別測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)回流液中酚紅和鹽酸小檗堿在腸循環(huán)液中濃度。1.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.5.1大鼠在體腸循環(huán)鹽酸小檗堿吸收量鹽酸小檗堿高、中、低3個(gè)濃度小腸吸收量見表1?？梢娫?020(Himol丄"內(nèi)Ber吸收呈濃度依賴性和時(shí)間依賴性，高、中、低3個(gè)濃度4h鹽酸小檗堿吸收百分率分別為20.05%，17.59%，24.18%，說明鹽酸小檗堿腸道吸收較差。鹽酸小檗堿高、中、低三個(gè)濃度吸收速率常數(shù)ka依次為0.044、0.061、0.063h",Ka值基本保持不變，組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),且r值均X).9(表2)，表明鹽酸小檗堿濃度對(duì)數(shù)的下降與循環(huán)時(shí)間存在線性關(guān)系。說明在此濃度范圍內(nèi)，鹽酸小檗堿的吸收動(dòng)力學(xué)為一級(jí)吸收，吸收方式為被動(dòng)擴(kuò)散。由表l及圖l可見，癸酸鈉對(duì)鹽酸小檗堿高、中、低三個(gè)劑量組均有明顯的促吸收作用。4h鹽酸小檗堿吸收百分率分別為28.33%，29.24%,31.37%。其中以低劑量組50nmol丄"促吸收作用最為明顯，兩組各時(shí)間點(diǎn)的吸收量都有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(PO.05或PO.01)。而中、高劑量組180min后的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)才有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(PO.05)。癸酸鈉對(duì)鹽酸小檗堿吸收速率常數(shù)ka無顯著影響，各組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(見表2)。說明癸酸鈉對(duì)鹽酸小檗堿腸道吸收的影響只是增加其吸收程度，對(duì)其吸收速度影響很小。表l癸酸鈉對(duì)不同劑量鹽酸小檗堿在各時(shí)間點(diǎn)小腸吸收量的影響(XiS,n-5)吸收量4ig30min60min120min180min240minBer50173.30±12.81146.44±41.69211.05±57.37246.62±55.10272.75±50.03Ber50+0.2%sc543.7±27.6*567.0±38.0**501.5±39.2*503.6±24.5*526.6±30.9*Ber腦372.8±72.14540.45±98.23571.97±96.15592.6±49.6654.U86.15Berl00+0.2%sc486.6±63.49565.5±33.84662.7±53.05996.6±78.99*1087.3±179.8*Ber200756.9±166.4965.9±155.61275.5±257.41680.6±128.11798.2±261.8Ber200+0.2%sc1893.3±367.21833.7±330.21907.7±416.12233.4±399.5*2333.1±279.3*注*P<0.05，**P<0.01，與對(duì)應(yīng)鹽酸小檗堿組相比。7表2各實(shí)驗(yàn)組鹽酸小檗堿在體腸吸收速率常數(shù)Ka,h"(x士S，n=5)nKa.h"50+0.2%scioo,ii;1100+0.2%sc200pmoli;1200+0.2%sc10.0430.0380.0750.0760.0830.07120.0680.0440.0490.0880.0610.0540.0340.050.070.0630.0520細(xì)40.0480.0510.0550層0.0550.0740.0310.0420.0590.0840細(xì)0.065X0.0440.0450.0610.0770.0630扁S0扁50.00240.00480據(jù)60.00550細(xì)4實(shí)施例2.離體實(shí)驗(yàn)分腸段考察癸酸鈉對(duì)鹽酸小檗堿的腸道促吸收部位1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組將10只Wistar大鼠隨機(jī)分為2組，分別為鹽酸小檗堿組50pmol丄—1、鹽酸小檗堿加癸酸鈉組5(^mol丄"+0.2。/。SC。每組各5只。1.2分腸段外翻腸囊法禁食16h的大鼠腹腔注射20X烏拉坦溶液麻醉后，沿腹中線開腹后，在十二指腸上端和回腸下端(盲腸上5cm)處各開一個(gè)小口，用50ml注射器抽取37'C生理鹽水，自開口處沖洗腸管，取十二指腸(幽門下lcm為起始點(diǎn))、空腸上段(以幽門下15cm為起始點(diǎn))，回腸(以盲腸上20cm為起始點(diǎn))各8cm，迅速移入持續(xù)通氣的冰冷的PBS液中。用濾紙吸干腸段漿膜面水分，一端結(jié)扎后用細(xì)玻璃棒將腸段輕柔向外翻轉(zhuǎn)，使黏膜面朝外，漿膜面朝內(nèi)。另一端插管，注入2ml的PBS液體，迅速懸于盛有35mlBer50nmol丄"加或不加0.2y。SC供試液的大試管中，向試管中持續(xù)通入95%02和5%(:02。整個(gè)裝置放在37'C恒溫水浴中，于15、30、60、90min取腸囊內(nèi)液體lml，同時(shí)補(bǔ)充相同體積的不含藥PBS。HPLC法測(cè)定樣品中鹽酸小檗堿濃度。1.3數(shù)據(jù)處理各腸段鹽酸小檗堿表觀通透系數(shù)(叩parentpermeabilitycoefficients,Papp)的計(jì)算Papp=[V/(Area-Co)].dC/dt。其中V是腸囊內(nèi)液體體積，Area是腸囊的表面積，Q是囊夕卜Ber的初始濃度，dC/dt是囊內(nèi)Ber濃度對(duì)時(shí)間的變化率，可由囊內(nèi)Ber的濃度與時(shí)間直線回歸求得。用增滲比(EnhancementRatio,ER)來比較癸酸鈉對(duì)不同腸段鹽酸小檗堿吸收的促進(jìn)作用ER=P/PD(P和PQ分別是加和不加促進(jìn)劑后鹽酸小檗堿在腸囊的表觀滲透系數(shù))。1.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果在腸外翻模型中，鹽酸小檗堿從黏膜面向漿膜面吸收的情況如表3所示，隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，透過腸壁藥物量逐漸增加，其中以十二指腸、空腸段吸收較好，回腸段吸收較差，但各腸段間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，表明Ber在各小腸段均有一定量吸收，無特定吸收部位。加入癸酸鈉后孵育30分鐘時(shí)，鹽酸小檗堿在回腸段的吸收明顯增加(P<0.05);孵育60分鐘時(shí)，十二指腸鹽酸小檗堿吸收增多，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(PO.05);孵育90分鐘時(shí)，癸酸鈉可顯著促進(jìn)各腸斷鹽酸小檗堿的吸收(PO.05或PO.01)，其中以回腸段作用效果最為明顯(圖2)。按1.3中的公式求出Ber在大鼠各腸段的表觀通透系數(shù)Papp，結(jié)果見表4。鹽酸小檗堿在十二指腸、空腸、回腸段Papp以空腸較高，但各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。加入癸酸鈉后，十二指腸、空腸、回腸段鹽酸小檗堿的Papp均有不同程度的升高(P《.05或PO.01)。增滲比ER分別為2.08、1.49、3.49，可見在回腸段癸酸鈉對(duì)鹽酸小檗堿促吸收作用最為顯著，不加促進(jìn)劑的回腸段的Papp為2.82"(T7cm's—1，加入癸酸鈉后Papp為9.85"(T7cnvs'、滲透系數(shù)提高了3.49倍。表3癸酸鈉對(duì)鹽酸小檗堿經(jīng)離體腸段滲透的影響(XiS，n=5)Time吸收量/ng(min)十:二指腸空腸回腸BERBER+SCBERBER+SCBERBER+SC1520.6±2.242.5±5.620.8±1.833.1±4.511.9±0.929.7±3.83063.9±5.460.7±5.936.1±2.955.9±6.227.7±3.279.4±6.8*60137.7±12.4260.7±24.5*116.1±12.5143.7±15.777.5±8.5267.9±29.3*90410.4±39.11056.2±120.1"540.8±48.7814.0±92.4*319.7±38.91664.6士303.1"注*P<0.05,**P<0.01，與相應(yīng)鹽酸小檗堿組相比。表4癸酸鈉對(duì)鹽酸小檗堿在大鼠各腸段的表觀通透系數(shù)Papp(cm's")的影響(x±S，n=5)Papp(cm's—)十二指腸^Ber3.56xl0'74.76x1(T7Ber+sc7.42x10—7*7.09xl0-7*ER2.081.49注*P<0.05，**P<0.01，與同腸段鹽酸小檗堿組相比。回腸2.82x10-79.85x10—7**3.49實(shí)施例3.整體實(shí)驗(yàn)考察吸收促進(jìn)劑對(duì)口服鹽酸小檗堿血藥濃度的影響U實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取Wistar大鼠24只，雄性，體重(160-180)g，分為4組，分別為鹽酸小檗堿組和鹽酸小檗堿+癸酸鈉組、鹽酸小檗堿+辛酸鈉組、鹽酸小檗堿+十二碳酸鈉組。1.2血漿中鹽酸小檗堿的高效液相色譜分析方法的建立(1)色譜分析條件流動(dòng)相甲醇-水-三乙胺(75:25:0.5v/v)，用磷酸調(diào)整pH為6.8。然后將流動(dòng)相用孔徑為0.45pm微孔濾膜過濾器過濾，再超聲脫氣。流速:1.0mL/min;柱溫室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)340nm;進(jìn)樣量20jxL。(2)血漿樣品的預(yù)處理空白血漿中加入鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品，取含鹽酸小檗堿血漿0.2mL，加入0.5mL色譜級(jí)乙腈，超聲處理lmin后，12000r/m，離心10min，再用油系一次性微孔濾膜過濾器過濾后，取2(HiL上清液進(jìn)樣。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備將空白大鼠血漿中加入鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液，將其配制成含鹽酸小檗堿濃度為0、10、50、100、200、400、800、1600ng/mL的溶液。樣品的預(yù)處理后，分別進(jìn)樣20pL按上述色譜條件測(cè)定。以濃度C(橫坐標(biāo)X)對(duì)峰面積A(縱坐標(biāo)Y)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=12.043C—764.97(R=0.9986)，線形關(guān)系良好。1.3藥物代謝動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)前禁食24h，按藥物按照Berl00mg/kg、Berl00mg/kg+SC50mg/kg、Berl00mg/kg+C855mg/kg、Berl00mg/kg+C12100mg/kg的濃度灌胃給藥，分別于給藥后0h、0.5h、lh、2h、4h、6h自尾靜脈采血0.5mL，按照血漿樣品進(jìn)行處理的方法進(jìn)行后，用上述檢測(cè)方法檢測(cè)鹽酸小檗堿濃度，并計(jì)算6h內(nèi)藥時(shí)曲線下面積。1.4血藥濃度測(cè)定結(jié)果灌胃給藥后不同時(shí)間內(nèi)測(cè)定鹽酸小檗堿血藥濃度，以鹽酸小檗堿在大鼠體內(nèi)的血藥濃度的平均值為縱坐標(biāo)，以時(shí)間為橫坐標(biāo)繪制成血藥濃度隨時(shí)間變化圖，見圖3。從圖3中可看出，加促吸收劑組鹽酸小檗堿血藥濃度自lh起高于單純鹽酸小檗堿組，計(jì)算藥時(shí)曲線下面積，加癸酸鈉、辛酸鈉、十二碳酸鈉組曲線下面積與單純鹽酸小檗堿組相比顯著增高(P<0.05)。實(shí)施例4.癸酸鈉安全性考察1.1腸循環(huán)液中乳酸脫氫酶含量測(cè)定10乳酸脫氫酶(Lactatedehydrogenase，LDH)是一種存在于上皮細(xì)胞內(nèi)的酶，腸循環(huán)液中存在LDH提示有細(xì)胞損壞，因此測(cè)定腸循環(huán)液中LDH的含量可以揭示腸上皮細(xì)胞發(fā)生的細(xì)微變化。在體腸循環(huán)實(shí)驗(yàn)取得的標(biāo)本各20pL，按照乳酸脫氫酶試劑盒步驟進(jìn)行，測(cè)得絕對(duì)吸收度OD值，代入標(biāo)準(zhǔn)方程計(jì)算其LDH活力。1.2腸黏膜形態(tài)學(xué)觀察本實(shí)驗(yàn)通過制備大鼠腸黏膜病理切片標(biāo)本，觀察促吸收劑SC對(duì)腸黏膜形態(tài)學(xué)的影響。腸黏膜毒性最直觀的評(píng)價(jià)方法是用顯微鏡觀察給藥后黏膜組織結(jié)構(gòu)的變化及表面纖毛的形態(tài)變化。根據(jù)吸收促進(jìn)劑對(duì)黏膜的刺激作用，將吸收促進(jìn)劑對(duì)黏膜的刺激作用分別為3個(gè)級(jí)別輕度、中度和重度。評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)如下①輕度黏膜上皮細(xì)胞完整，黏膜下少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，杯狀細(xì)胞密度增加；②中度黏膜上皮細(xì)胞水腫，黏膜下炎細(xì)胞浸潤(rùn)；③重度黏膜上皮細(xì)胞變性壞死或脫落，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表6顯示隨著腸道灌流時(shí)間的增加，各實(shí)驗(yàn)組腸循環(huán)液中LDH的含量也在不斷增加，鹽酸小檗堿組、癸酸鈉+鹽酸小檗堿組腸循環(huán)液中LDH的含量與空白對(duì)照組無顯著差異(P>0.05),癸酸鈉+鹽酸小檗堿組與鹽酸小檗堿組相比亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，說明鹽酸小檗堿、癸酸鈉對(duì)腸道細(xì)胞無明顯損傷作用。腸黏膜形態(tài)學(xué)圖4，可見隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，空白組、鹽酸小檗堿組和鹽酸小檗堿加癸酸鈉組腸黏膜均有明顯的損傷。在實(shí)驗(yàn)O分鐘時(shí)刻腸黏膜完整、絨毛排列整齊30分鐘時(shí)可見黏膜下有少量嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。60分鐘時(shí)可見少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，杯狀細(xì)胞增多；在90分鐘時(shí)微絨毛稀疏，排列不整齊，黏膜上皮細(xì)胞水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，局部黏膜有缺損、變性壞死和脫落狀況，可見腸黏膜呈中度到重度刺激作用。與空白對(duì)照組相比，鹽酸小檗堿組、鹽酸小檗堿加癸酸鈉組均無明顯加重腸黏膜損傷的表現(xiàn)，說明這種損傷來自于影響腸黏膜活性的其它因素如手術(shù)過程中的損傷，供氧、能量不足、溫度以及PBS緩沖液等很多因素。表6大鼠腸循環(huán)液中LDH的活力(^士S，n=5)preOmin30min60min120min180min240min<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例5.癸酸鈉對(duì)鹽酸小檗堿降血糖作用藥效學(xué)考察1.1實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠模型的制備將Wistar大鼠分為正常對(duì)照組(IO只)與模型組(90只)。正常對(duì)照組喂以普通飼料，模型組喂以高脂飼料。高脂高糖飼料由基礎(chǔ)飼料加煉豬油、蛋白質(zhì)、淀粉等混合而成，總熱量為44.3kJ/kg。飼養(yǎng)4周后,給予腹腔注射STZ30mg/kg2次，期間間隔1周。對(duì)照組注射等量檸檬酸緩沖液。自第二次給STZ起1月后測(cè)定大鼠體重、攝食量(Foodintake)、空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、甘油三脂(TG)、膽固醇(TC)含量。將6.9〈FBG〈5mmol/l的糖尿病模型大鼠納入實(shí)驗(yàn)。1.2動(dòng)物分組取6只正常大鼠設(shè)為正?？瞻讓?duì)照組，另取54只2型糖尿病模型大鼠隨機(jī)分為6組，分別為模型組(DM)鹽酸小檗堿低劑量組Ber50mg/kg鹽酸小檗堿高劑量組:Ber100mg/kg鹽酸小檗堿低劑量加癸酸鈉低劑量組:Ber50mg/kg十SC25mg/kg鹽酸小檗堿低劑量加癸酸鈉中劑量組:Ber50mg/kg+SC50mg/kg鹽酸小檗堿低劑量加癸酸鈉高劑量組:Ber50tng/kg+SC100mg/kg鹽酸小檗堿高劑量加癸酸鈉低劑量組:Ber100mg/kg+SC25mg/kg鹽酸小檗堿高劑量加癸酸鈉中劑量組:Ber100mg/kg+SC50mg/kg鹽酸小檗堿高劑量加癸酸鈉高劑量組:Ber100mg/kg+SC100mg/kg每組各6只。1.3實(shí)驗(yàn)操作動(dòng)物分組后分別按照上述劑量灌胃給藥，正常對(duì)照組及模型組給予等劑量生理鹽水，每天一次，連續(xù)4周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定各組大鼠空腹血糖及葡萄糖耐量。葡萄糖耐量測(cè)定試驗(yàn)大鼠禁食12小時(shí)后，測(cè)空腹血糖值，然后給予5(P/。葡萄糖2g/kg腹腔注射，分別于30min、60min、120min尾靜脈取血，3000卬m離心后取血清，氧化酶法測(cè)定血糖值。1.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.4.1糖尿病模型大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)自第二次給STZ起1月后，測(cè)定模型組體重、進(jìn)食量、空腹血糖、空腹胰島素、膽固醇及甘油三脂，結(jié)果見表7?？梢娕c正常對(duì)照組相比，模型組大鼠的空腹胰島素值明顯降低(P<0.05)，F(xiàn)BG升高極顯著(PO.OOl)，平均值為11.56土0.57。模型組較對(duì)照組攝食能量增加，TG、TC值也有明顯增高(P<0.05)，符合T2DM臨床特點(diǎn)，造模成功。表7造模結(jié)束后大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注*P<0.05，"P<0.01，***PO.001,DM與Control組相比.1.4.2空腹血糖測(cè)量實(shí)驗(yàn)結(jié)果將6.9《FBG〈5mmol/l的糖尿病模型大鼠納入實(shí)驗(yàn)。灌胃給藥l月后，測(cè)量其空腹血糖，結(jié)果如圖7所示，模型組FBG為10.65mmol/l，與空白對(duì)照組相比有極顯著的差異(PO.001)。給藥組與模型組相比，除Ber50組外，其余各組FBG均有顯著降低(P〈0.05或PO.01)。與Ber50組相比，Ber50+sc組降血糖效果均顯著提高。Berl00+sc組FBG值均低于Berl00組，其中100mg/kg+SC100mg/kg組與Berl00組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),降血糖效果顯著提高。1.4.3各實(shí)驗(yàn)組糖耐量實(shí)驗(yàn)結(jié)果腹腔給予葡萄糖后0min、30min、60min、120min分別測(cè)定血糖值見表8。結(jié)果可見與空白對(duì)照組相比，模型組各時(shí)間點(diǎn)血糖值均顯著增高，120min仍處于較高水平，其葡萄糖耐量曲線下面積顯著高于空白對(duì)照組[(3765土244)mmol/L'minvs(1234±166)mmol/Lmin,PO.01](圖5)。各給藥組血糖曲線均處于正常組和模型組之間，說明各給藥組都有一定的改善糖尿病模型大鼠糖耐量的作用。與模型組相比，給藥組除Ber50組外，其余各組曲線下面積均有顯著減少(PO.05或PO.01)。另夕卜，Ber50mg/kg+SC50mg/kg組、Ber50mg/kg+SC100mg/kg組與單純Ber50組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，Ber100mg/kg+SC100mg/kg組與單純BerlOO組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，說明加入癸酸鈉后顯著增強(qiáng)了鹽酸小檗堿改善2型糖尿病模型葡萄糖耐量的作用。表8各給藥組葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)血糖值(n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>CON4.70713.20511.6178.164DM10.43634.73938.21128.244Ber5010.46233細(xì)29.97521.916Berl007.35827.62225.39814.948Ber50+SC256.52425.77427.63817.569Ber50+SC508.40521.79716.87111.191Ber50+SC滿5.42015,78315.3846.357Berl00+SC257.09724.38725.49916.452BerlOO+SC506扁16.84824.87220.355BerlOO+SClOO5.88723.25218.02314.293實(shí)施例6.片劑鹽酸小檗堿32kg，癸酸鈉32kg，將原料鹽酸小檗堿和癸酸鈉配以制備片劑的常規(guī)輔料淀粉、乳糖、糊精、纖維素、硬脂酸鎂混合均勻，過16目篩千燥，壓制成片劑。實(shí)施例7.膠囊劑鹽酸小檗堿16kg，癸酸鈉32kg，將原料鹽酸小檗堿和癸酸鈉加入適量的輔料，采用常規(guī)膠囊劑制備方法即可制成。實(shí)施例8.顆粒劑鹽酸小檗堿32kg，癸酸鈉16kg,將原料鹽酸小檗堿和癸酸鈉加入適量的輔料，采用常規(guī)顆粒劑制備方法即可制成。實(shí)施例9.片劑鹽酸小檗堿32kg,辛酸鈉3.2kg,將原料鹽酸小檗堿和辛酸鈉配以制備片劑的常規(guī)輔料淀粉、乳糖、糊精、纖維素、硬脂酸鎂混合均勻，過16目篩干燥，壓制成片劑。實(shí)施例10.顆粒劑鹽酸小檗堿1.6kg，辛酸鈉16kg，將原料鹽酸小檗堿和辛酸鈉加入適量的輔料，采用常規(guī)顆粒劑制備方法即可制成。實(shí)施例11.膠囊劑鹽酸小檗堿16kg,辛酸鈉16kg，將原料鹽酸小檗堿和辛酸鈉加入適量的輔料，采用常規(guī)膠囊劑制備方法即可制成實(shí)施例12.顆粒劑鹽酸小檗堿1.6kg，十二碳酸鈉16kg，將原料鹽酸小檗堿和十二碳酸鈉加入適量的輔料,采用常規(guī)顆粒劑制備方法即可制成。14實(shí)施例13.膠囊劑鹽酸小檗堿16kg，十二碳酸鈉16kg，將原料鹽酸小檗堿和十二碳酸鈉加入適量的輔料，采用常規(guī)膠囊劑制備方法即可制成實(shí)施例14.顆粒劑鹽酸小檗堿16kg，十二碳酸鈉1.6kg,將原料鹽酸小檗堿和十二碳酸鈉加入適量的輔料，采用常規(guī)顆粒劑制備方法即可制成。實(shí)施例15.片劑鹽酸小檗堿16kg，辛酸鈉8kg，十二碳酸鈉8kg，將原料鹽酸小檗堿和辛酸鈉、十二碳酸鈉加入適量的輔料，采用常規(guī)片劑制備方法即可制成。實(shí)施例16.膠囊劑鹽酸小檗堿24kg,癸酸鈉8kg、辛酸鈉8kg，十二碳酸鈉8kg,將原料鹽酸小檗堿和癸酸鈉、辛酸鈉、十二碳酸鈉加入適量的輔料，采用常規(guī)膠囊劑制備方法即可制成實(shí)施例17.顆粒劑鹽酸小檗堿16kg，癸酸鈉4kg、辛酸鈉4kg，十二碳酸鈉4kg，月桂酸鈉4kg、山梨酸鈉4kg、油酸鈉4kg，將原料鹽酸小檗堿和十二碳酸鈉加入適量的輔料，采用常規(guī)顆粒劑制備方法即可制成。權(quán)利要求1、一種治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于是由鹽酸小檗堿和腸吸收促進(jìn)劑按重量份數(shù)比1∶(0.1～10)組成。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于腸吸收促進(jìn)劑包括下列一種或幾種辛酸鈉、癸酸鈉、十二碳酸鈉、月桂酸鈉、山梨酸鈉、油酸鈉。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于，鹽酸小檗堿與癸酸鈉的重量份數(shù)比為1:(0.5~2)。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于，鹽酸小檗堿與癸酸鈉優(yōu)選的重量份數(shù)比為1:1。5、根據(jù)權(quán)利要求1、2、3或4所述的促進(jìn)口服小檗堿吸收的藥物組合物，其特征在于鹽酸小檗堿的口服給藥劑量是50-200mg/kg。6、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種治療糖尿病的藥物組合物，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。是由鹽酸小檗堿和腸吸收促進(jìn)劑按重量份數(shù)比1∶(0.1～10)組成，優(yōu)選鹽酸小檗堿與癸酸鈉的重量份數(shù)比為1∶(0.5～2)。促吸收劑與小檗堿聯(lián)用能夠顯著改善后者在腸道的吸收，提高血藥濃度，改善鹽酸小檗堿的生物利用度，增強(qiáng)其藥效，并且對(duì)腸道黏膜無明顯損傷作用，為鹽酸小檗堿廣泛應(yīng)用于臨床治療提供了一種安全、有效的途徑。本發(fā)明可廣泛應(yīng)用于片劑、膠囊劑、顆粒劑等多種劑型藥物的生產(chǎn)。文檔編號(hào)A61K31/4353GK101574343SQ200810050679公開日2009年11月11日申請(qǐng)日期2008年5月7日優(yōu)先權(quán)日2008年5月7日發(fā)明者呂曉艷,晶李,立陳申請(qǐng)人:吉林大學(xué)