專利名稱：：竹節(jié)參總皂苷的制備方法及其在治療心肌缺血的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種竹節(jié)參總皂苷的制備方法，本發(fā)明還涉及到竹節(jié)參總皂苷在治療心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。技術(shù)背景竹節(jié)參又名竹節(jié)三七、竹節(jié)人參、白三七等，為五加科人參屬植物竹節(jié)參PanaxjaponicusC.A.Mey.的干燥呈竹鞭狀根莖，具有滋補強壯、散瘀止痛、止血祛痰的功效。竹節(jié)參的主要活性成分是皂苷類，現(xiàn)已分離鑒定出20余種皂苷成分，化學(xué)結(jié)構(gòu)以齊墩果烷型皂苷為主，水解后可生成齊墩果酸。現(xiàn)代藥理研究表明，竹節(jié)參總皂苷及水提物具有明顯的抗炎、抗氧化、降血糖等作用。目前有關(guān)竹節(jié)參中總皂苷提取純化方面的研究報道并不多，以竹節(jié)參總皂苷為基本活性成分的藥物制劑未見報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種竹節(jié)參總皂苷的制備方法及其在治療心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種的竹節(jié)參總皂苷制備方法，其特征在于取竹節(jié)參藥材粗粉，加入粗粉重量6—12倍的40—70%的乙醇溶液，浸泡1一2.5小時后，加熱回流提取1一4次，每次3h，合并提取液，減壓回收溶劑至無醇味，加水稀釋后放置，離心，取上清液，用含水正丁醇等量萃取l一4次，合并萃取液，減壓回收溶劑至無正丁醇餾出，將稠浸膏用85%乙醇溶液充分溶解，然后緩慢加入4一5倍量丙酮，加時攪拌，于常溫下靜置4一6h使沉淀分離完全，離心，收集沉淀物并用丙酮洗滌，用6(T80'C熱風(fēng)干燥得到竹節(jié)參總皂苷。本發(fā)明的優(yōu)選工藝為取竹節(jié)參藥材粗粉，加入粗粉重量10倍的60%的乙醇溶液，浸泡2h后，加熱回流提取3次，每次3h，合并提取液，減壓回收溶劑至無醇味，加水稀釋后放置，離心，取上清液，用含水正丁醇等量萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑至無正丁醇餾出，將稠浸膏用85%乙醇溶液充分溶解，然后緩慢加入4一5倍量丙酮，加時攪拌，于常溫下靜置4一6h使沉淀分離完全，離心，收集沉淀物并用適量丙酮洗滌，60_80'C熱風(fēng)干燥得到竹節(jié)參總皂苷。所述的竹節(jié)參藥材粗粉為20—40目。竹節(jié)參總皂苷在治療心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的竹節(jié)參總皂苷制備方法，能夠簡單有效地從竹節(jié)參中提取竹節(jié)參總皂苷，最高的竹節(jié)參總皂苷的轉(zhuǎn)移率可達(dá)97.81%,表明本提取工藝較為穩(wěn)定可靠，且提取率較高；利用竹節(jié)參總皂苷為主要成份得到的藥物對治療心肌缺血的也有較好的療效。具體實施方式本發(fā)明中原材料的選擇竹節(jié)參藥材采自湖北恩施，經(jīng)宜昌市藥檢所中藥室鑒定為正品竹節(jié)參PanaxjaponicusC.A.Mey.的干燥根莖。取20_40目的竹節(jié)參藥材粗粉，加入粗粉重量10倍的60%的乙醇溶液，浸泡2h后，加熱回流提取3次，每次3h，合并提取液，減壓回收溶劑至無醇味，加水稀釋后放置，離心，取上清液，用含水正丁醇等量萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑至無正丁醇餾出，將稠浸膏用85%乙醇溶液充分溶解，然后緩慢加入4一5倍量丙酮，加時攪拌，于常溫下靜置4一6h使沉淀分離完全，離心，收集沉淀物并用適量丙酮洗滌，60—80'C熱風(fēng)干燥得到竹節(jié)參總皂苷。按上述提取工藝進行3批藥材的驗證試驗，竹節(jié)參總皂苷的轉(zhuǎn)移率分別為95.28%，97.81%，96.97%，表明本提取工藝較為穩(wěn)定可靠，且提取率較高。竹節(jié)參總皂苷制備過程中的控制參數(shù)見表1。<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>竹節(jié)參總皂苷在治療心肌缺血藥物中的應(yīng)用竹節(jié)參為五加科植物竹節(jié)參尸fl"oxya/70"ic^C.A.Mey.，以干燥根莖入藥，是1977年以后各版《中國藥典》收載的品種之一，有滋補強壯、散瘀止痛、止血祛痰等功效。在心肌缺血性損傷時,由于細(xì)胞內(nèi)(^2+超載可激活磷脂酶A，導(dǎo)致膜磷脂的分解,由黃嘌呤氧化酶途徑生成的自由基增加可造成膜脂質(zhì)的過氧化，這些變化均可引起細(xì)胞膜的破壞,導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。而血清中CK、LDH、SOD和MDA正是這種變化的反應(yīng)。本文研究發(fā)現(xiàn)TSPJ(即竹節(jié)參總皂苷)能抑制ISO所致心肌缺血時的血清LDH、CPK水平的升高；并降低血清中MDA含量，升高SOD含量，顯示TSPJ的抗脂質(zhì)過氧化作用是保護心肌重要途徑之一。1.材料與方法1.1藥品與試劑竹節(jié)參總皂苷，自制，總皂苷含量在80%以上。異丙腎上腺素(isoproterenol,ISO)，為sigma公司產(chǎn)品。復(fù)方丹參片，河南天方藥業(yè)中藥有限公司。SOD、MDA、FFA試劑盒購于南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。1.2動物雄性SD大鼠，清潔級，體重200士20g。1.3方法實驗前在麻醉下記錄大鼠正常心電圖1次,對心電圖異常者予以剔除。實驗大鼠隨機分為5組，每組8組。正常對照組和缺血模型組，以生理鹽水20ml/kg，1次/天，連續(xù)灌胃8天。復(fù)方丹參片組、竹節(jié)參總皂苷高劑量組和低劑量組，分別以320mg/kg，400mg/kg，200mg/kg劑量灌胃8天。除正常對照組外，其他各組于第7天開始，灌胃后lh,皮下注射IS03mg/kg。間隔24h后，第二次皮下注射IS03mg/kg2h后，心主動脈采血5ml，3000r/min離心10min，分離血清，-20匸保存，待測血清中CK,LDH，MDA，SOD，F(xiàn)FA等藥理指標(biāo)。1.4心電圖測定用20。/。烏拉坦麻醉大鼠(5ml/kg)，每組大鼠開始皮下注射ISO前，記錄n導(dǎo)聯(lián)心電圖。最后一次皮下注射ISO后，記錄3min，8min，15min時心電圖，以T波高聳并伴有J點位移超過O.lmv為心肌缺血陽性評價標(biāo)準(zhǔn)。1.5數(shù)據(jù)處理結(jié)果以(S士s)表示，組間比用單因素方差分析，兩兩比較用q檢驗，所有數(shù)均用SPSS11.5統(tǒng)計軟件處理。2.結(jié)果2.1大鼠心電圖分析模型組兩次給異丙腎上腺素后，心電圖表現(xiàn)為T波高聳伴J點下移，且幅度較大，有部分大鼠出現(xiàn)ST段下移，主波倒置；15min后，心電圖還未恢復(fù)到正常狀態(tài)。而陽性藥物組，TSPJ高、低劑量組T波高聳和J點下移幅度較模型組小，且無大鼠出現(xiàn)主波倒置，另外15min后，多數(shù)給藥組大鼠心電圖都恢復(fù)到正常狀態(tài)?？梢?，TSPJ對大鼠急性心肌缺血有較顯著保護作用。2.2對血清中CK和LDH的影響(表2)與正常對照組比較，缺血模型組中CK和LDH含量升高，具有顯著差異。TSPJ的高、低劑量組和復(fù)方丹參片組均能降低大鼠血清中CPK和LDH的含量，與缺血模型組比較，復(fù)方丹參片組和TSPJ組具有顯著差異,與正常對照組比較沒有顯著差異。表2:TSPJ對ISO誘導(dǎo)的心肌缺血模型大鼠血清中LDH和CPK的影響(；b，『8)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注與正常對照組比較，*P<0.05,**P<0.0;與缺血模型組比較，AP<0.05,AAP<0.01。2.3對大鼠血清中MDA、SOD和FFA影響(表3)TSPJ高高劑量組和復(fù)方丹參片組對心肌缺血大鼠MDA、SOD和FFA含量影響，與正常對照組比較無顯著性差異，與缺血模型組比較，具有顯著差異。表3:TSPJ對ISO致心肌缺血模型大鼠血清中MDA、SOD禾卩FFA含量影響(；士s,n-8)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注與正常對照組比較，*P<0.05,**P<0.0;與缺血模型組比較，APO.05，AAPO.01。3.結(jié)論用大劑量異丙腎上腺素型致大鼠心肌缺血，簡單易行，是藥物活性篩選常用方法之一。通過實驗發(fā)現(xiàn)TSPJ具有抗異丙腎上腺素致心肌缺血藥理作用，其降低血清FFA、CPK、LDH水平，改善心肌MDA及SOD活性是TSPJ的抗心肌缺血作用機理。權(quán)利要求1、一種的竹節(jié)參總皂苷制備方法，其特征在于取竹節(jié)參藥材粗粉，加入粗粉重量6-12倍的40-70％的乙醇溶液，浸泡1-2.5小時后，加熱回流提取1-4次，每次3h，合并提取液，減壓回收溶劑至無醇味，加水稀釋后放置，離心，取上清液，用含水正丁醇等量萃取1-4次，合并萃取液，減壓回收溶劑至無正丁醇餾出，將稠浸膏用85％乙醇溶液充分溶解，然后緩慢加入4-5倍量丙酮，加時攪拌，于常溫下靜置4-6h使沉淀分離完全，離心，收集沉淀物并用丙酮洗滌，用60~80℃熱風(fēng)干燥得到竹節(jié)參總皂苷。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的竹節(jié)參總皂苷的制備方法，其特征在于取竹節(jié)參藥材粗粉，加入粗粉重量10倍的60%的乙醇溶液，浸泡2h后，加熱回流提取3次，每次3h，合并提取液，減壓回收溶劑至無醇味，加水稀釋后放置，離心，取上清液，用含水正丁醇等量萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑至無正丁醇餾出，將稠浸膏用85%乙醇溶液充分溶解，然后緩慢加入4一5倍量丙酮，加時攪拌，于常溫下靜置4一6h使沉淀分離完全，離心，收集沉淀物并用適量丙酮洗滌，60_80'C熱風(fēng)干燥得到竹節(jié)參總皂苷。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的竹節(jié)參總皂苷制備方法，其特征在于所述的竹節(jié)參藥材粗粉為20_40目。4、竹節(jié)參總皂苷在治療心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。全文摘要一種竹節(jié)參總皂苷的制備方法及其在治療心肌缺血的藥物中的應(yīng)用，取竹節(jié)參藥材粗粉，加入粗粉乙醇溶液進行浸泡，加熱回流后提取，合并提取液，減壓回收溶劑至無醇味，加水稀釋后放置，離心，取上清液，用含水正丁醇等量萃取，合并萃取液，減壓回收溶劑至無正丁醇餾出，將稠浸膏用85％乙醇溶液充分溶解，然后緩慢加入丙酮，加時攪拌，于常溫下靜置，使沉淀分離完全，離心，收集沉淀物并用丙酮洗滌，干燥后得到竹節(jié)參總皂苷。本發(fā)明能夠簡單有效地從竹節(jié)參中提取竹節(jié)參總皂苷，竹節(jié)參總皂苷的最高轉(zhuǎn)移率可達(dá)97.81％，表明本提取工藝較為穩(wěn)定可靠，且提取率較高；利用竹節(jié)參總皂苷為主要成份得到的藥物對治療心肌缺血的也有較好的療效。文檔編號A61K125/00GK101249121SQ200810047148公開日2008年8月27日申請日期2008年3月24日優(yōu)先權(quán)日2008年3月24日發(fā)明者何毓敏,盧訓(xùn)叢,周志勇,張長城,胡遠(yuǎn)浪,丁袁,趙海霞,魯科明,黃曉飛,黃鶴飛申請人:三峽大學(xué)