專利名稱：一種眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種眼用脂質(zhì)體制劑及其制備方法。所述的脂質(zhì)體表 面修飾有游離的巰基，可與眼表面黏蛋白富含半胱氨酸的子域形成共價結(jié)合的二硫鍵， 將脂質(zhì)體錨定在黏膜表面，作為藥物貯庫在結(jié)膜囊內(nèi)緩慢釋藥，為藥物吸收提供持久 的驅(qū)動力。
背景技術(shù)：
眼睛是高度敏感而且具有多重保護(hù)機(jī)制的器官，因此眼部藥物傳遞系統(tǒng)的設(shè)計極 具挑戰(zhàn)性。由于滴入到結(jié)膜囊內(nèi)的藥液被迅速消除，加之角膜的生物屏障作用，常規(guī) 滴眼劑僅有不足10%的藥物能夠透過角膜到達(dá)眼內(nèi)發(fā)揮治療作用(N.M. Davies, Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 2000， 27: 558 - 562)。許多眼內(nèi)疾病采用滴眼劑進(jìn)行治 療難以獲得滿意的效果，必需借助像眼膏、凝膠和插入劑這樣的半固體或固體劑型來 增加藥物在眼部的吸收，或通過眼內(nèi)注射的方式給藥以確保有效劑量的藥物能夠到達(dá) 靶部位起效。這些劑型和給藥方式雖然可以提高藥物的療效但是不易被患者接受，應(yīng) 用舒適高效的新型給藥系統(tǒng)治療眼內(nèi)疾病已成為當(dāng)今眼科用藥發(fā)展的重要趨勢。理想的眼部給藥系統(tǒng)應(yīng)具有以下幾方面特點(diǎn)①安全性高，長期用藥不會產(chǎn)生眼 部和全身毒性；②療效好，可持續(xù)在眼部定位釋藥，靶部位藥物濃度高，無需頻繁給藥；③順應(yīng)性好，給藥后無損傷，無異物感，患者容易接受。脂質(zhì)體作為一種液體型 的眼用制劑，具有使用方便舒適、順應(yīng)性好，可增加角膜通透性、延緩釋放和降低藥 物毒性等優(yōu)點(diǎn)，不足之處在于眼部滯留時間相對較短，例如，中性與負(fù)電性脂質(zhì)體的 眼部消除速度與普通滴眼劑相近，不利于藥物在眼部吸收。因此，有必要進(jìn)一步研究 開發(fā)眼部滯留能力更強(qiáng)、療效更好的脂質(zhì)體制劑。眼角膜和鞏膜表面覆蓋著一層厚度為3 40um的黏液，其主要成分為黏蛋白。該 黏液層大約每15 20h更新1次。利用這一生理特征有研究設(shè)計黏膜黏附性的眼部給 藥系統(tǒng)，如高分子溶液與各種微粒、半固體以及固體眼用制劑(A. Ludwig, Adv. Drug Deliv. Rev. 2005, 57: 1595-1639)。由于眼睛可有效地清除異物，因此基于非共價相互作用的黏膜黏附性給藥系統(tǒng)，尤其是液體劑型，其延長藥物滯留時間的效果并不 理想。巰基化聚合物(Thiomers)是一類新型的黏膜黏附性高分子材料，其設(shè)計思想是 在現(xiàn)有輔料的分子中引入含有巰基的配體，如半胱氨酸、高半胱氨酸或巰基乙胺，利 用這些巰基在用藥部位與黏蛋白富含半胱氨酸的子域形成共價結(jié)合的二硫鍵，將高分 子輔料錨定在黏膜表面形成三維凝膠網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)而延長藥物與黏膜的接觸時間，為其跨 膜轉(zhuǎn)運(yùn)創(chuàng)造有利條件。最終，共價結(jié)合的黏附材料將隨著黏蛋白的更新而消除。迄今 為止文獻(xiàn)報道的巰基化聚合物可分為陰離子型與陽離子型兩大類，共包括巰基化的聚 丙烯酸(卡波姆(A. Bernkop-Schntlrch, et al, Drug Dev. Ind. Pharm. 2004, 30: l-8)和聚卡波菲(A. Bernkop-Schnllrch, et al, Int. J. Pharm. 2001, 226: 185 - 194))、羧甲基纖維素(A. Bernk叩-Schnllrch， S. Steininger. Int. J. Pharm. 2000， 194: 239 - 247)、海藻酸鹽(A. Bernkop-SchnUrch， et al, J. Control, Release 2001, 71: 277 - 285)和殼聚糖(A. Bernkop-Schnllrch, et al, Int. J. Pharm. 2003, 260:229 - 237)四類聚合物，涉及凝膠、微粒與片劑三種劑型，但尚未見有關(guān)巰基化 脂質(zhì)體的報道。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是為克服現(xiàn)有技術(shù)的普通滴眼劑在結(jié)膜囊內(nèi)滯留時間短，導(dǎo)致其眼 部生物利用度低，及半固體劑型的順應(yīng)性不好，不易被患者接受等缺陷，提供一種眼 用生物黏附脂質(zhì)體制劑及其制備方法。本發(fā)明以巰基修飾的脂質(zhì)體作為眼部給藥的載體，通過巰基與黏膜蛋白之間的共 價結(jié)合來延長藥物與角膜的接觸時間，進(jìn)而提高藥物的眼部生物利用度。本發(fā)明所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑由脂質(zhì)體、脂質(zhì)體膜修飾材料和脂質(zhì)體內(nèi) 包封的藥物三部分組成。所述脂質(zhì)體由磷脂和膽固醇構(gòu)成。用于制備該脂質(zhì)體的磷脂 可以是大豆磷脂和卵磷脂，其與膽固醇的重量比為2: 1至16: 1。為了調(diào)節(jié)脂質(zhì)膜的 流動性，脂質(zhì)體處方中也選擇性加入適量的維生素E。所述脂質(zhì)體膜修飾材料為巰基化聚合物。該聚合物可以選自聚丙烯酸、羧甲基纖 維素、海藻酸鹽和殼聚糖，其中優(yōu)選聚丙烯酸。聚丙烯酸(PAA)分子量可介于5, 000 55,000,000，優(yōu)選的分子量范圍為100，000 5,000，000。 PAA的游離羧基上共價連接一 定比例的半胱氨酸(Cys)和磷脂酰乙醇胺(PE)形成(Cys-PAA-PE)復(fù)合物，其中 Cys的游離巰基可與黏蛋白相互作用，形成二硫鍵，而PE則可以嵌入到脂質(zhì)體膜中， 進(jìn)而將巰基化聚合物修飾到脂質(zhì)體表面。PAA分子上連接Cys的量可介于50 5000Mmol/g，優(yōu)選500 2000Mmol/g。該巰基化聚合物在處方中的用量占脂質(zhì)體膜材 料總重量的1 5%。所述藥物可以是用于治療眼部疾病的各種藥物，在處方中的用量占脂質(zhì)體膜材料 總重量的O. 1 10%，優(yōu)選O. 1 5%,所述的藥物選自下述藥物中的一種或它們的復(fù)方1) 抗青光眼藥物，如匹羅卡品、e-受體阻滯劑等；2) 抗生素，如e-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、氨基糖甙類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素及其衍生 物等；3) 抗菌藥物，如喹諾酮類、咪唑類等；4) 抗病毒藥物，如核苷類等；5) 甾體類抗炎藥物，如腎上腺皮質(zhì)激素等；6) 多肽蛋白類藥物，如防御素、干擾素、環(huán)孢菌素和表皮生長因子等。 所述生物黏附脂質(zhì)體通過下述步驟制備(1) 脂質(zhì)體的制備，(2) 二是脂質(zhì)體的表面修飾。所述的脂質(zhì)體可以采用藥劑學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的方法制備，如水化成膜法、乙醇注入法、 逆向蒸發(fā)法、復(fù)乳法等。下面以水化成膜法為例簡要說明稱取處方量的磷脂、膽固 醇和維生素E,用氯仿溶解，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)除去氯仿，得到磷脂膜；將處 方量的藥物溶解在適量注射用水或緩沖鹽中，在振蕩條件下，用該藥物溶液水化磷脂 膜，得到脂質(zhì)體粗品，經(jīng)擠壓過膜、凍融或超聲處理得到粒徑符合要求的載藥脂質(zhì)體。 也可以用空白緩沖溶液水化磷脂膜，再采用主動載藥的方法將藥物包載到脂質(zhì)體中。 待脂質(zhì)體制備好后，可采用后嵌入法將巰基化聚合物修飾到脂質(zhì)體表面。具體的做法 是將脂質(zhì)體與巰基化聚合物在磷脂的相變溫度(通常為60。C)下共浴30min，聚合物 上連接的PE分子將自發(fā)嵌入到脂質(zhì)體膜中，形成表面連接巰基化聚合物的生物黏附性6脂質(zhì)體。
本發(fā)明所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體表面修飾有游離的巰基，能與眼表面黏蛋白富 含半胱氨酸的子域形成共價結(jié)合的二硫鍵，將脂質(zhì)體錨定在黏膜表面，作為藥物貯庫 在結(jié)膜囊內(nèi)緩慢釋藥，為藥物吸收提供持久的驅(qū)動力。該生物黏附脂質(zhì)體有助于促進(jìn) 藥物在眼部吸收，可提高藥物的生物利用度。


圖1是實(shí)施例9包載熒光素的生物粘附脂質(zhì)體體外釋放曲線，
其中- -對照脂質(zhì)體，-■- PAA-PE脂質(zhì)體，-▲- Cys-PAA脂質(zhì)體， -參-鈣黃綠素溶液。
具體實(shí)施例方式
以下為本發(fā)明的實(shí)施例。給出具體實(shí)施例的目的是為了進(jìn)一步闡明本發(fā)明，但并 不限制其保護(hù)范圍。
實(shí)施例1
半胱氨酸-聚丙烯酸(Cys-PAA)復(fù)合物的制備與分離、純化取三份lg PAA加 入100ml水中，用2M Na0H調(diào)節(jié)pH值至7.2 7.5之間，使其在水中分散。各加入l-乙基-3- (3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC) 3.8g，使其濃度為200mM，常溫 下攪拌45分鐘。用5MHCl調(diào)節(jié)pH值為4 5，充氮?dú)?5分鐘，再加入Cys充氮?dú)獬?溫攪拌反應(yīng)3小時。三份各加入半胱氨酸量如表l所示。
表l
_加入半胱氨酸量(g)_
PAA-Cys(l:l) 1,0 PAA-Cys(l:2) 2.0 PAA-Cys(l:4) 4.0
透析法分離產(chǎn)物。將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至透析袋中，在2000ml透析液中，避光、4'C下 進(jìn)行透析。第一次透析液為lmM HC1,含2 u M EDTA。第二次透析液為lraM HC1,含2 p MEDTA,并包含WNaCl，同樣介質(zhì)透析兩次。最后用0. 5mM HC1透析一次。同時用相同 制備與分離的方法得到對照品D、對照品E、對照品F。
表2是對照品D、對照品E、對照品F的PAA:Cys質(zhì)量比。
表2
PAA:Cys質(zhì)量比 對照品D(PAA+L-Cys) 1:1 對照品E(PAA+L-Cys) 1:2 對照品F(PAA+L-Cys) 1:4
將產(chǎn)物與對照品冷凍干燥，得到Cys-PAA復(fù)合物的白色固體粉末。 實(shí)施例2
Cys-PAA復(fù)合物中巰基含量的測定巰基的數(shù)量可以利用DTNB法來測定。取產(chǎn)物 和對照品各2mg分別用10ml 0. 5M磷酸鹽緩沖液(PH8. O)分散，各取0. 5ml，加入0. 5ml 0. 03% 5, 5-二巰基-2, 2-二硝基苯甲酸(DTNB)溶液，常溫放置2小時，取0. 3ml移入 96孔板，放入酶標(biāo)儀測吸光度(吸收值設(shè)定405nm)。得到半胱氨酸溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線 Y-163.38X+28.456，以此計算Cys-PAA中的巰基含量?？鄢瞻讓φ掌?D、 E、 F)吸 光度后所得的巰基含量如表3所示
表3
巰基含量(u M) 巰基含量(u mol/g)
82.35 411.75
123.18 615.90
202.27 1011.35
實(shí)施例3
PAA-Cys(l:l) PAA-Cys(l:2) PAA-Cys(l:4)
8200810042942.0
說明書第6/ll頁
PAA-Cys復(fù)合物的生物黏附性評價取成年大鼠，麻醉后處死，解剖，取小腸黏膜， -2(TC保存待用。
分別取適量PAA-Cys (1:1)， PAA-Cys (1:2)， PAA-Cys (1:4) ， PAA配成含0. 2% PAA 溶液。然后分成兩份， 一份用2MNaOH調(diào)節(jié)pH值至中性，另一份用5M HC1調(diào)節(jié)pH值 為3。同樣將純水pH值也調(diào)至中性和3。分別將己配好的上述溶液各取0.2ml滴于小 腸黏膜表面，用扭力天平測定其10分鐘與30分鐘的黏附力(mg)，每一樣品重復(fù)測定 6次。所得黏附力結(jié)果見表4:
表4 (中性)
10分鐘30分鐘
純水802796. 5
PAA845922. 5
PAA-Cys(l:l)10621243
PAA-Cys(l:2)12501357
PAA-Cys(l:4)1569. 51735
(pH3)
10分鐘30分鐘
純水747763
PAA752759.5
PAA-Cys(l:l)992.51009
PAA-Cys(l:2)10101065. 5
PAA-Cys(l:4)10621105. 5
(凈黏附力(mg))
10分鐘30分鐘
PAA-Cys(l:l)中性217320.5PAA-Cys (1:2)中性 405 434.5
PAA—Cys(l:4)中性 724.5 812.5
PAA-Cys(l:l)pH3 240.5 249.5
PAA-Cys(l:2)pH3 258 306
PAA-Cys(l:4)pH3 310 346
結(jié)果表明，PAA分子中引入Cys后，可提高其生物黏附性能，而且生物黏附性能提高的程度，與其所含Cys的量有關(guān)。
實(shí)施例4
半胱氨酸-聚丙烯酸-磷脂酰乙醇胺(Cys-PM-PE)復(fù)合物制備與分離取0. 08g PAA分散于12ml DMSO中，攪拌至完全溶解，并加入引發(fā)劑DMAP 0. 002g與DCC 0. 04g，加熱至6(TC，攪拌至完全溶解。取0.01g PE加入0.5ml CHCl3中，加熱至6(TC使其充分溶解后加至DMSO中攪拌并保持6(TC反應(yīng)8小時。室溫下反應(yīng)過夜。
第二天分離產(chǎn)物。將反應(yīng)物用50ml丙酮分三次沉淀，洗去溶劑和引發(fā)劑DMAP和DCC。 4000r/min離心10分鐘，得到白色粘稠狀半固體。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)盡量除去丙酮。用水再次將沉淀分散。0. 1N的NaOH調(diào)節(jié)水體系的pH值，使其保持在7. 2 7. 5之間，邊攪拌邊滴加NaOH至凝膠狀物質(zhì)基本溶解，且體系的流動性較好，溶液為乳白色為止。將其轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中冷凍干燥。凍干后得到白色粉末狀產(chǎn)物，產(chǎn)率分別為87.7%。
取PAA-PE復(fù)合物，按照實(shí)施例1的方法制備脂質(zhì)體膜修飾材料Cys-PAA-PE。并按照實(shí)施例2方法測定其巰基含量，得產(chǎn)物中巰基含量為1. 106ramol/g。
實(shí)施例5
人源性防御素脂質(zhì)體的制備以磷脂:膽固醇(2:1)的比例稱取適量磷脂與膽固醇，氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)成膜，置于真空干燥箱中，室溫條件下放置備用；向上述燒瓶中加入一定濃度的防御素溶液，高于磷脂相變溫度水浴振蕩2小時，再經(jīng)水浴/液氮凍融10次，即得人防御素脂質(zhì)體。
實(shí)施例6BCA法測定脂質(zhì)體包封率按照BCA蛋白含量試劑盒的說明，以防御素濃度為橫坐標(biāo)，吸光度A值為縱坐標(biāo)繪制人防御素標(biāo)準(zhǔn)曲線。人防御素脂質(zhì)體經(jīng)高速離心棄去上清液后，加入適量的Triton x-100破壞脂質(zhì)體膜，用試劑盒測定脂質(zhì)體中防御素含量，經(jīng)計算得到其包封率為40. 22 ±8. 93%。
實(shí)施例7
包載熒光素的生物粘附脂質(zhì)體的制備:稱取磷脂酰膽堿(PC)O. 02g與膽固醇0. 005g(CH0L)于50ml圓底燒瓶中，加入適量三氯甲烷使其溶解。4(TC水浴下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至溶劑完全揮干，置真空干燥箱中干燥過夜即得脂質(zhì)體膜。
稱取適量鈣黃綠素，加蒸餾水溶解，攪拌狀態(tài)下加入4M NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.4，用水稀釋至鈣黃綠素溶液終濃度為50mM。
將配好的鈣黃綠素溶液4ml加入脂質(zhì)體膜的圓底燒瓶中，使其中的磷脂濃度為5mg/ml。在65。C水浴中以50振/分鐘的頻率震蕩2小時。溶液呈深棕紅色。
將水化好的脂質(zhì)體溶液過100nm膜，擠壓20次后收集脂質(zhì)體。將收集到的脂質(zhì)體過S印harose CL-4B硅膠柱，洗脫液為0. 9% NaCl溶液。收集大約1/3柱體積洗脫出來的橙紅色部分，即得包載鈣黃綠素的脂質(zhì)體。
稱取實(shí)施例4所制得的Cys-PAA-PE復(fù)合物0. 5mg加入到0. 5ml， pH7. 4的等滲磷酸緩沖液中，并滴加O. lN的NaOH調(diào)節(jié)pH值，使其充分分散呈乳白色液體。加入2ml包載有鈣黃綠素的脂質(zhì)體(未過柱)在6CTC下共同孵育0. 5小時。得到橙紅色混懸液，即為包載熒光素的生物粘附脂質(zhì)體。
實(shí)施例8
包載熒光素的生物粘附脂質(zhì)體表面巰基含量的測定取包載熒光素的生物粘附脂質(zhì)體，5000r/min離心10分鐘，取上清液過凝膠柱，收集1/3柱體積洗出來的橙紅色脂質(zhì)體部分，取lml用碘量法滴定。同時取沉淀，用pH7. 4的磷酸緩沖液分散后用碘量法滴定。將測定結(jié)果代入標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 20.8176 x + 34.8922計算，得到上清液中巰基濃度為1. 206 u M，沉淀中巰基濃度為3. 128 u M。
實(shí)施例9
11包載熒光素的生物粘附脂質(zhì)體的體外釋放采用透析法考察包載鈣黃綠素的生物
粘附脂質(zhì)體的體外釋放。未修飾的脂質(zhì)體、PE-PAA復(fù)合物修飾的脂質(zhì)體、Cys-PAA-PE復(fù)合物修飾的脂質(zhì)體、鈣黃綠素溶液各取1ml加入至截留分子量為12000 14000的透析袋中扎緊，置裝有50mlpH7.4生理等滲PBS的具塞三角燒瓶中。平行試驗2份，37"C水浴震蕩，分別于0.5、 1、 2、 4、 6、 8、 10、 12、 24小時取樣lml，同時補(bǔ)充等體積空白介質(zhì)。在96孔白底熒光板上每孔加入300nl各時間點(diǎn)的樣品，每個樣品作3復(fù)孔，于LS-55型熒光分光光度計上以吸收波長為572nm、發(fā)射波長為536nm測定熒光值(F)。從各樣品的體外釋放曲線(圖1)可以看出，生物粘附脂質(zhì)體具有良好的緩釋性能。
實(shí)施例10
包載匹魯卡品的生物粘附脂質(zhì)體的制備稱取磷脂酰膽堿(PC) 0.02g與膽固醇O.Olg (CHOL)于50ml圓底燒瓶中，加入適量三氯甲烷使其溶解。4CTC水浴下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至溶劑完全揮干，置真空干燥箱中干燥過夜即得脂質(zhì)體膜。
稱取適量匹魯卡品，加磷酸緩沖溶液溶解。將配好的匹魯卡品溶液5ml加入脂質(zhì)體膜的圓底燒瓶中。在65'C水浴中以50振/分鐘的頻率震蕩2小時。
將水化好的脂質(zhì)體溶液過100nm膜，擠壓20次后收集脂質(zhì)體。將收集到的脂質(zhì)體過S印harose CL-4B硅膠柱，洗脫液為0. 9% NaCl溶液。收集大約1/3柱體積洗脫出來的部分，即得包載匹魯卡品的脂質(zhì)體。
稱取實(shí)施例4所制得的Cys-PAA-PE復(fù)合物1. 5mg加入到0. 5ml， pH7. 4的等滲磷酸緩沖液中，并滴加O. lN的NaOH調(diào)節(jié)pH值，使其充分分散呈乳白色液體。加入5ml包載有匹魯卡品的脂質(zhì)體(未過柱)在60'C下共同孵育0.5小時。得到包載匹魯卡品的生物粘附脂質(zhì)體，其中匹魯卡品占脂質(zhì)體總重的1%。
實(shí)施例11
包載氧氟沙星的生物粘附脂質(zhì)體的制備稱取磷脂酰膽堿(PC) 0.64g與膽固醇0.04g (CHOL)于50ml圓底燒瓶中，加入適量三氯甲烷使其溶解。40'C水浴下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至溶劑完全揮干，置真空干燥箱中干燥過夜即得脂質(zhì)體膜。
稱取適量氧氟沙星，加磷酸緩沖溶液溶解。將配好的氧氟沙星溶液40ml加入脂質(zhì)
12體膜的圓底燒瓶中。在65'C水浴中以50振/分鐘的頻率震蕩2小時。
將水化好的脂質(zhì)體溶液過100nm膜，擠壓20次后收集脂質(zhì)體。將收集到的脂質(zhì)體過S印harose CL-4B硅膠柱，洗脫液為0. 9% NaCl溶液。收集大約1/3柱體積洗脫出來的部分，即得包載氧氟沙星的脂質(zhì)體。
稱取實(shí)施例4所制得的Cys-PAA-PE復(fù)合物6. 8mg加入到0. 5ml， pH7. 4的等滲磷酸緩沖液中，并滴加0. 1N的NaOH調(diào)節(jié)pH值，使其充分分散呈乳白色液體。加入40ml包載有氧氟沙星的脂質(zhì)體(未過柱)在60'C下共同孵育0.5小時。得到包載氧氟沙星的生物粘附脂質(zhì)體，其中氧氟沙星占脂質(zhì)體總重的10%。
實(shí)施例12
包載阿昔洛韋的生物粘附脂質(zhì)體的制備:稱取磷脂酰膽堿(PC)O. 4g與膽固醇0. 05g(CHOU于50ml圓底燒瓶中，加入適量三氯甲烷使其溶解。40。C水浴下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至溶劑完全揮干，置真空干燥箱中干燥過夜即得脂質(zhì)體膜。
稱取適量阿昔洛韋，加碳酸氫鈉緩沖溶液溶解。將配好的阿昔洛韋溶液8ml加入脂質(zhì)體膜的圓底燒瓶中。在65'C水浴中以50振/分鐘的頻率震蕩2小時。
將水化好的脂質(zhì)體溶液過100nm膜，擠壓20次后收集脂質(zhì)體。將收集到的脂質(zhì)體過S印harose CL-4B硅膠柱，洗脫液為0. 9% NaCl溶液。收集大約1/3柱體積洗脫出來的部分，即得包載阿昔洛韋的脂質(zhì)體。
稱取實(shí)施例4所制得的Cys-PAA-PE復(fù)合物18mg加入到0. 5ml， pH7. 4的等滲磷酸緩沖液中，并滴加O. 1N的NaOH調(diào)節(jié)pH值，使其充分分散呈乳白色液體。加入8ml包載有阿昔洛韋的脂質(zhì)體(未過柱)在6(TC下共同孵育0.5小時。得到包載阿昔洛韋的生物粘附脂質(zhì)體，其中阿昔洛韋占脂質(zhì)體總重的5%。
實(shí)施例13
包載益康唑的生物粘附脂質(zhì)體的制備稱取磷脂酰膽堿(PC) 0. 5g與膽固醇0.05g(CHOL)于50ml圓底燒瓶中，加入適量三氯甲烷使其溶解。40。C水浴下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至溶劑完全揮干，置真空干燥箱中干燥過夜即得脂質(zhì)體膜。
稱取適量益康唑，加緩沖溶液溶解。將配好的益康唑溶液10ml加入脂質(zhì)體膜的圓底燒瓶中。在65'C水浴中以50振/分鐘的頻率震蕩2小時。
將水化好的脂質(zhì)體溶液過100nm膜，擠壓20次后收集脂質(zhì)體。將收集到的脂質(zhì)體過S印harose CL-4B硅膠柱，洗脫液為0. 9% NaCl溶液。收集大約1/3柱體積洗脫出來的部分，即得包載益康唑的脂質(zhì)體。
稱取實(shí)施例4所制得的Cys-PAA-PE復(fù)合物16. 5mg加入到0. 5ml， pH7. 4的等滲磷酸緩沖液中，并滴加O. 1N的NaOH調(diào)節(jié)pH值，使其充分分散呈乳白色液體。加入lOtnl包載有益康唑的脂質(zhì)體(未過柱)在6(TC下共同孵育0.5小時。得到包載益康唑的生物粘附脂質(zhì)體，其中益康唑占脂質(zhì)體總重的8%。
實(shí)施例14
包載地噻米松的生物粘附脂質(zhì)體的制備稱取磷脂酰膽堿(PC) 0.48g與膽固醇0.04g (CHOL)于50ml圓底燒瓶中，加入適量三氯甲烷使其溶解。4(TC水浴下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至溶劑完全揮干，置真空干燥箱中干燥過夜即得脂質(zhì)體膜。
稱取適量地噻米松，加緩沖溶液溶解。將配好的地噻米松溶液6ml加入脂質(zhì)體膜的圓底燒瓶中。在65'C水浴中以50振/分鐘的頻率震蕩2小時。
將水化好的脂質(zhì)體溶液過100nm膜，擠壓20次后收集脂質(zhì)體。將收集到的脂質(zhì)體過S印harose CL-4B硅膠柱，洗脫液為0. 9% NaCl溶液。收集大約1/3柱體積洗脫出來的部分，即得包載地噻米松的脂質(zhì)體。
稱取實(shí)施例4所制得的Cys-PAA-PE復(fù)合物5. 2mg加入到0. 5ml， pH7. 4的等滲磷酸緩沖液中，并滴加0.1N的NaOH調(diào)節(jié)pH值，使其充分分散呈乳白色液體。加入6ml包載有地噻米松的脂質(zhì)體(未過柱)在6(TC下共同孵育0.5小時。得到包載地噻米松的生物粘附脂質(zhì)體，其中地噻米松占脂質(zhì)體總重的0.1%。
權(quán)利要求
1、一種眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于由脂質(zhì)體、脂質(zhì)體膜修飾材料和脂質(zhì)體內(nèi)包封的藥物組成，所述的脂質(zhì)體由磷脂和膽固醇構(gòu)成，其重量比為2∶1～16∶1；所述脂質(zhì)體表面修飾半胱氨酸-聚丙烯酸-磷脂酰乙醇胺復(fù)合物，其用量占脂質(zhì)體膜材料總重量的1～5％，所述脂質(zhì)體內(nèi)包封的藥物為治療眼部疾病的藥物，其劑量占脂質(zhì)體膜材料總重量的0.1～10％。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述的磷脂是大豆 磷脂和卵磷脂。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述的半胱氨酸-聚丙烯酸-磷脂酰乙醇胺復(fù)合物中聚丙烯酸分子量為5, 000 5, 000, 000。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述的半胱氨酸-聚丙烯酸-磷脂酰乙醇胺復(fù)合物中聚丙烯酸分子量為100, 000 5， 000, 000。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述的半胱氨酸-聚丙烯酸-磷脂酰乙醇胺中聚丙烯酸分子上連接半胱氨酸的量為50 5000mol/g。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于半胱氨酸-聚丙烯 酸-磷脂酰乙醇胺中聚丙烯酸分子上連接半胱氨酸的量為500 2000Mmol/g。
7、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述脂質(zhì)體內(nèi)包封 的藥物量占脂質(zhì)體膜材料總重量的0. 1 5%。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述脂質(zhì)體內(nèi)包封 的藥物是抗青光眼藥物中的一種或它們的復(fù)方。
9、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述藥物是治療眼 部疾病抗生素類藥物中的一種或它們的復(fù)方。
10、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述藥物是治療 眼部疾病抗菌藥物中的一種或它們的復(fù)方。
11、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述藥物是治療 眼部疾病抗病毒藥物中的一種或它們的復(fù)方。
12、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述藥物是治療眼部疾病甾體抗炎類藥物中的一種或它們的復(fù)方。
13、根據(jù)權(quán)利要求1所述的眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑，其特征在于所述藥物是治療 眼部疾病蛋白質(zhì)及多肽類藥物中的一種或它們的復(fù)方。
全文摘要
本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種眼用脂質(zhì)體及其制備方法。本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)的普通滴眼劑在結(jié)膜囊內(nèi)滯留時間短，導(dǎo)致其眼部生物利用度低，及半固體劑型的順應(yīng)性不好，不易被患者接受等缺陷，提供了眼用生物黏附脂質(zhì)體制劑。本發(fā)明由脂質(zhì)體、脂質(zhì)體膜修飾材料和脂質(zhì)體內(nèi)包封的藥物組成，其脂質(zhì)體表面修飾有游離的巰基，可與眼表面黏蛋白富含半胱氨酸的子域形成共價結(jié)合的二硫鍵，將脂質(zhì)體錨定在黏膜表面，作為藥物貯庫在結(jié)膜囊內(nèi)緩慢釋藥，為藥物吸收提供持久的驅(qū)動力。本發(fā)明制劑有助于促進(jìn)藥物在眼部吸收，能提高藥物的生物利用度。
文檔編號A61P27/00GK101669909SQ20081004294
公開日2010年3月17日 申請日期2008年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月12日
發(fā)明者翀 李, 操 謝, 陸偉躍, 剛 魏 申請人:復(fù)旦大學(xué)