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葉酸-多肽復(fù)合物介導(dǎo)的靶向抗腫瘤前體藥物及其制備方法

文檔序號(hào):935586閱讀:543來源:國知局
專利名稱:葉酸-多肽復(fù)合物介導(dǎo)的靶向抗腫瘤前體藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物與醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種葉酸-多肽復(fù)合 物介導(dǎo)的靶向抗腫瘤前體藥物及其制備方法。
技術(shù)背景靶向抗腫瘤分子藥物是依據(jù)腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間分子生物 學(xué)上的差異,選擇性作用于耙細(xì)胞的基因、酶、信號(hào)傳導(dǎo)分子等,從而達(dá)到治療的目的。這樣的例子有作用于表皮生長因子受體(EGFR) 的單克隆抗體艾布妥斯(cetuximab);乳腺癌細(xì)胞HER-2的胞外區(qū)的 人源化單克隆抗體赫賽汀(trastuzumab);作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)受體的單克隆抗體阿伐斯汀(bevacizumab);小分子 EGFR酪氨酸激酶抑制劑(gefitinib, erlotinib)等等。雖然靶向抗腫瘤分子藥物治療是一種理想的治療方式,但單藥使用效果并不 佳,尚存在許多問題。其中由于腫瘤細(xì)胞基因的不穩(wěn)定性,腫瘤細(xì)胞 往往通過靶分子的調(diào)變或缺失逃避藥物的攻擊,致使分子靶向藥物失 去療效就是一個(gè)亟待解決的課題。近年來,研究者開始將目光轉(zhuǎn)向基因組穩(wěn)定的腫瘤間質(zhì)細(xì)胞。在 腫瘤間質(zhì)中,成纖維細(xì)胞通過與腫瘤細(xì)胞相互作用而活化,這種活化 成纖維細(xì)胞被稱為腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(Carcinoma-Associated Fibroblasts, CAF) [Bho碰ickNA, et al. Nature. 432 (7015) : 332-7. 2004.]。大量證據(jù)表明,CAF對腫瘤的發(fā)生發(fā)展起著必要的支持促進(jìn)作用,比如表達(dá)細(xì)胞因子、蛋白酶及粘附分子等促進(jìn)腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移[Tuxhorn JA, et al. Clin Cancer Res. 8(9) :2912-23. 2002.]。 鑒 于CAF對于腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要性,選擇這群細(xì)胞為靶標(biāo),切斷其對 腫瘤細(xì)胞的支持促進(jìn)作用,不失為提高腫瘤靶向治療有效性的必要措 施。近年發(fā)展起來的酶激活式靶向前體藥物設(shè)計(jì)為實(shí)現(xiàn)腫瘤靶向治 療目標(biāo)帶來了新思路。其核心內(nèi)容是將細(xì)胞毒性小分子藥物與起特殊 導(dǎo)向作用的物質(zhì)交聯(lián),屏蔽其活性基團(tuán),從而形成暫時(shí)無活性的前體 藥物。前體藥物進(jìn)入體內(nèi),以非活化形式被輸送至靶部位,繼而利用 靶部位現(xiàn)存的選擇性激活機(jī)制,使其活性母體藥物得以釋放。其中發(fā) 展多肽修飾技術(shù)已成為酶激活式前藥設(shè)計(jì)領(lǐng)域的重要趨勢。這是由于 肽鍵不易被化學(xué)降解,而可降解肽鍵的酶類大多存在于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞 表面,因此,由多肽修飾的藥物在血液循環(huán)中十分穩(wěn)定,到達(dá)靶部位 的可能性大大增加,被靶部位細(xì)胞上的酶水解后釋放原型藥物發(fā)揮藥 理作用。許多抗腫瘤小分子化學(xué)藥物的結(jié)構(gòu)中含有可發(fā)生?;磻?yīng)的 游離氨基,并且這些游離氨基往往影響著藥物的化學(xué)和生物學(xué)特性, 一旦被其他化學(xué)基團(tuán)修飾或封閉,將導(dǎo)致藥物的細(xì)胞毒性顯著降低,而去除修飾基團(tuán)其細(xì)胞毒性則即可恢復(fù)。這些藥物包括阿霉素(doxorubicin, Dox)、朿隨霉素(calicheamicin, Cal)、道諾霉素 (daunomycin, DM)等等。Trouet報(bào)道,阿霉素的四肽衍生物 N-alanyl-leucyl-alany1-leucyl-Dox對正常小鼠及荷瘤小鼠的毒性 僅為阿霉素的1/9。 [Trouet A, et al. Cancer Res. 61 (7) :2843-6.2001.]依據(jù)前列腺特異性抗原(PSA)具有前列腺腫瘤定位特異性和絲 氨酸蛋白酶水解活性,Denmeade等用His-Ser-Ser-Lys-Leu-Glu-ku 7 肽序列修飾阿霉素,獲得無活性阿霉素前體藥物Mu-HSSKLQ-Leu-Dox, 該前藥可被PSA水解并釋放出阿霉素。[DenmeadeSR, et al. Cancer Res. 58(12) :2537-40. 1998.]。成纖維細(xì)胞激活蛋白a (Fibroblast Activation Protein a , FAP a )是新近發(fā)現(xiàn)的特異性表達(dá)于CAF表 面的絲氨酸蛋白酶,不但具備肽鏈端解酶活性,而且具備肽鏈內(nèi)切酶(endop印tidase)的活性。FAP a可選擇性作用于脯氨酸與修飾物之 間的肽鍵,迅速將其水解成Z-GP 二肽和具有活性的修飾物。[Edosada CY, et al. FEBS Lett. 2006 Mar 6 ;580 (6):158卜6.]。研究證實(shí), 甘氨酸一側(cè)連有不同的氨基酸或基團(tuán)時(shí),F(xiàn)AP a的水解活性有顯著差 異。當(dāng)與甘氨酸順次相連的序列為絲氨酸和丙氨酸時(shí),即ASGP, FAPa表現(xiàn)出最佳的水解活性??梢栽O(shè)想,前體藥物在血液循環(huán)中的滯留時(shí)間越長,其靶向功能 受到體內(nèi)諸多因素負(fù)面影響的可能性就越大。針對這種情況,有必要考慮在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)能夠縮短該類前體藥物在血液循環(huán)中的滯留時(shí) 間,使其迅速在特定腫瘤組織中富集的輔助措施。受體靶向技術(shù)是利用受體分布的不均勻性達(dá)到增強(qiáng)藥物在靶細(xì)胞周圍富集的一種有效 措施,比如葉酸受體靶向技術(shù)。Bagnoli等發(fā)現(xiàn)葉酸受體在卵巢癌、 子宮內(nèi)膜癌、腎癌、乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌和鼻咽癌等上皮源性惡性腫瘤中的表達(dá)高于正常組織20-90倍[Bagnoli M, et al. Gynecol Oncol. 88 (1-2):S140-4. 2003.]。葉酸是該受體的天然配體,其葉酸受體具有高度的親和力(KD 10—1GM)并且不受所載物質(zhì)的影響 [Leamon CP et al. 2004; 56 (8) : 1127-41.]。由于葉酸分子量小、 理化性質(zhì)穩(wěn)定,尤其是分子內(nèi)存在的Y羧基易于與效應(yīng)分子形成葉酸 偶合物,故葉酸被認(rèn)為是前體藥物理想的加載導(dǎo)向工具。由于葉酸具 有這些優(yōu)異的特性,已被廣泛用來修飾低分子化學(xué)藥物、載藥蛋白結(jié) 合物和免疫治療藥物。用葉酸修飾后的5FU與5FU原藥相比,在體外 對產(chǎn)生5FU耐藥性的腫瘤細(xì)胞具有更明顯的細(xì)胞毒性殺傷作用。[Liu J, et al. J Org Chem. 2001 Aug 24; 66 (17) :5655-63.]目前尚未見到利用葉酸導(dǎo)向技術(shù)和肽修飾技術(shù)合成攜帶有在腫 瘤間質(zhì)細(xì)胞周圍選擇性水解的多肽結(jié)構(gòu)和對腫瘤細(xì)胞上的葉酸受體 有高親和力的葉酸的酶激活式靶向抗腫瘤前體藥物的相關(guān)報(bào)道。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種葉酸-多肽復(fù)合物介導(dǎo)的酶激活式 靶向抗腫瘤前體藥物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述前體藥物的制備方法。本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供所述葉酸-多肽復(fù)合物介導(dǎo)的酶激活 式靶向抗腫瘤前體藥物的藥物組合物。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來予以實(shí)現(xiàn)提供一種葉酸-多肽復(fù)合物介導(dǎo)的耙向抗腫瘤前體藥物,其結(jié)構(gòu)通式如(I)所示X-ASGP-Cyt' (I)其中X代表與細(xì)胞膜上的葉酸受體有較高親和力的物質(zhì),包括葉酸、亞葉酸、二氫葉酸、四氫葉酸、蝶酸、四氫蝶呤、蝶酰多谷氨酸、2-去氨基-羥基葉酸、l-去氨基-羥基葉酸、1-去氮葉酸、3-去氮葉酸和8-去氮葉酸;ASGP代表丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酰連接子;Cyt'代表含有游離氨基的抗腫瘤細(xì)胞毒性藥物,包括阿霉素 (doxorubicin, Dox)、束隨霉素(calicheamicin, Cal)、道諾霉素 (dau腦ycin, DM)、甲氨喋呤(methotrexate)、苯丙氨酸氮芥 (melphalan)、阿糖胞苷(cytarbine)、絲裂霉素C (mitomycin-C)、 5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)或紫杉醇(paclitaxel)等。 ASGP代表丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氮酰連接子; Cyt'代表含有游離氨基的抗腫瘤細(xì)胞毒性藥物,包括阿霉素、刺 孢霉素、道諾霉素、甲氨喋呤、苯丙氨酸氮芥、阿糖胞苷、絲裂霉素 C、 5-氟尿嘧啶或紫杉醇。作為一個(gè)典型的方案,所述結(jié)構(gòu)通式中X是葉酸,Cyt'是阿霉素, 其結(jié)構(gòu)式為本發(fā)明同時(shí)提供所述葉酸-多肽復(fù)合物介導(dǎo)的靶向抗腫瘤前體藥物的制備方法,包括以下步驟(1)合成脯氨酰-樹脂,領(lǐng)啶脯氨酰-樹脂的loading值;合成<formula>formula see original document page 9</formula>多肽-樹脂;稱取多肽合成樹脂,包括氯甲基樹脂(Merrifield樹脂)、4-芐氧 基芐醇樹脂(Wang樹脂)、2, 4-二烷氧基芐醇樹脂(SASRIN)、 4-羥甲基-3-甲氧基苯氧基丁酸樹脂(HMPB樹脂)、4-羥甲基苯甲酸樹 脂(HMBA樹脂)、(2, 4-二甲氧基)-二苯基甲胺樹脂(Rink樹脂)、 2-氯-三苯甲基氯樹脂(Barlos樹脂)、4-羥基巴豆酰胺甲基樹脂 (Hymm樹脂),加入脯氨酸和催化劑,催化劑包括二異丙基乙基胺 (DIPEA)和三乙胺,合成脯氨酰-樹脂,測定脯氨酰-樹脂的loading 值;再依次加入甘氨酸、絲氨酸、丙氨酸,合成多肽-樹脂;(2) 將葉酸與多肽-樹脂連接反應(yīng),加入1% TFA切除樹脂得到 N葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酸;葉酸采用酸酐法、碳二亞胺法、活化酯法、酰鹵法、磷鎗鹽試劑 法或脲鎗鹽試劑法與多肽-樹脂連接,可選用的試劑包括氯甲酸烷基 酯、二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、 H0Bt、 H0At、 H0Su、 TBTU、 HBTU、 HATU, 反應(yīng)結(jié)束后,加入9596TFA切除劑,得到N葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨 酰脯氨酸(F-ASGP);(3) 稱取N葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酸溶于N, N-二甲基 甲酰胺,活化后加入溶解于含Et3N的DMF中的抗腫瘤細(xì)胞毒性藥物 溶液,攪拌反應(yīng)后加入乙醚萃取,乙醚萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得葉酸-多肽-阿霉素粗品。稱取N葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酸(F-ASGP)溶于N, N-二甲基甲酰胺,采用酸酐法、碳二亞胺法、活化酯法、酰鹵法、磷鎿鹽試劑法或脲鎿鹽試劑法活化,可選用的試劑包括氯甲酸烷基酯、二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、 HOBt、 H0At、 H0Su、 TBTU、 HBTU、 HATU;抗 腫瘤藥物用含有三乙胺的DMF溶解后,與活化的F-ASGP混合;反應(yīng) 結(jié)束后加入乙醚萃取,乙醚萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得葉酸-多肽-抗腫瘤 藥物粗品。步驟(1)包括以下步驟(A) 在催化劑催化作用下,多肽合成樹脂與脯氨酸反應(yīng),再加 入甲醇反應(yīng)10min,測得脯氨酰-樹脂loading值,加入哌啶/DMF脫 去保護(hù)基團(tuán)Fmoc得到脯氨酰-樹脂;(B) 依次稱取Fmoc-甘氨酸、Fmoc-絲氨酸和Fmoc-丙氨酸,分 別與HOBU DIC和步驟(A)合成的脯氨酰-樹脂反應(yīng)至樹脂經(jīng)Kaiser 方法測定為陰性,加入25%哌啶/DMF脫去保護(hù)基團(tuán)Fmoc得到丙氨酰 絲氨酰甘氨酰脯氨酰-樹脂。步驟(A)所述Fmoc-脯氨酸與根據(jù)樹脂loading值計(jì)算所得的 氨基酸結(jié)合摩爾之比為3 : 1;所述甲醇與根據(jù)樹脂loading值計(jì)算 所得的氨基酸結(jié)合摩爾之比為1:1;所述催化劑為DIPEA,加入的 方法是第一步加入與根據(jù)樹脂loading值計(jì)算所得的氨基酸結(jié)合摩 爾之比為3. 3 : 1的DIPEA,反應(yīng)5 min,第二步加入與根據(jù)樹脂 1oading值計(jì)算所得的氨基酸結(jié)合摩爾之比為6.6 : 1的DIPEA,反 應(yīng)反應(yīng)2 3小時(shí);步驟(B)所述Fmoc-甘氨酸、Fmoc-絲氨酸、Fmoc-丙氨酸、HOBt或DIC與步驟(A)合成的脯氨酰-樹脂的loading值 的摩爾數(shù)之比為4 : 1。步驟(2)所述連接反應(yīng)時(shí)間為48 72小時(shí)。步驟(3)所述攪拌反應(yīng)為室溫?cái)嚢璺磻?yīng)18 24小時(shí);所述乙醚 萃取采用5倍于反應(yīng)液體積的乙醚進(jìn)行萃取。本發(fā)明同時(shí)提供所述前體藥物制備得到的藥物組合物,由所述藥 物與藥用輔料混合制成。所述藥物組合物可以為小針劑、凍干粉劑、微球劑、納米劑或腸 溶膠囊劑。所述藥物輔料是藥劑學(xué)上允許的賦形劑、粘合劑、助懸劑、崩解 劑、稀釋劑、潤滑劑、腸溶包衣材料、生物粘附材料或非水溶性骨架 材料。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明基于腫瘤間質(zhì)細(xì)胞含有特異性高表達(dá)的肽鏈內(nèi)切酶,利用 其特異性底物丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酸(ASGP)多肽為連接子,將 其游離羧基對阿霉素等抗腫瘤藥物的游離氨基進(jìn)行?;揎?,而將其 游離氨基與葉酸的羧基相連,成功合成攜帶有在腫瘤間質(zhì)細(xì)胞周圍選 擇性水解的多肽結(jié)構(gòu)和對腫瘤細(xì)胞上的葉酸受體有高親和力的葉酸 的酶激活式靶向抗腫瘤前體藥物,達(dá)到加快該類抗腫瘤藥物主動(dòng)向特 定腫瘤組織的富集,在腫瘤組織周圍水解釋放出細(xì)胞毒性藥物的靶向 性的目的。合成得到前體藥物的特點(diǎn)是 一、在葉酸導(dǎo)向作用下,選擇性地富集到腫瘤組織周圍,而在正常組織周圍較少存在;二、經(jīng)過多肽修 飾的抗腫瘤藥物的毒性降低,幾乎不破壞正常細(xì)胞的生長;三、這種多肽在腫瘤組織周圍的腫瘤間質(zhì)細(xì)胞的作用下才能被特異性水解,游 離出的抗腫瘤藥物能發(fā)揮正常的細(xì)胞毒性作用,破壞腫瘤細(xì)胞的生 長,殺滅腫瘤細(xì)胞,而葉酸和多肽對正常組織無毒無害。同時(shí)本發(fā)明研究得出了方便易行的前體藥物的制備方法,具有良 好的醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用推廣價(jià)值。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酰-阿霉素(F-ASGP-Dox) 的合成(1)合成脯氨酰-樹脂,測定脯氨酰-樹脂的loading值;合成 多肽-樹脂;A、 脯氨酰-樹脂的合成稱取2-氯-三苯甲基氯樹脂(1.0 mmol/g) 300 mg , DCM洗3 次,DCM浸泡5min, N2壓干。逐滴加入DCM到304 mg的Fmoc-脯氨 酸128 mg的DIPEA至其完全溶解,將此混合物加入樹脂,攪拌反應(yīng) 5min后,再加入225 mg的DIPEA,反應(yīng)2 3小時(shí)后,加入300 u 1 的甲醇,反應(yīng)10min,測量loading值為0.8。加入1. 0 ml 25%哌 啶/DMF脫去保護(hù)基團(tuán)Fmoc。 DMF洗5次,N2壓干。B、 丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酰-樹脂的合成稱取147 mg的Fmoc-甘氨酸、285 mg H0Bt和121 mg DIC, DMF 溶解后,加入脯氨酰-樹脂,反應(yīng)2 3小時(shí)后,取少量樹脂經(jīng)Kaiser test為陰性,加入1. 0 ml的25%哌啶/DMF脫去保護(hù)基團(tuán)Fmoc。 DMF 洗5次,N2壓干。依次稱取100 mg的Fmoc-絲氨酸、285 mg H0Bt和121 mg DIC,重復(fù)上述步驟。最后稱取85 mg的Fmoc-丙氨酸、 285 mg HOBt和121 mg DIC,重復(fù)上述步驟。稱取10 mg反應(yīng)物,加入1% TFA將葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨酰 脯氨酸從樹脂上切除下來,通過HPLC和質(zhì)譜確證其分子量和純度。(2) 將葉酸、H0Bt和DIC加入多肽-樹脂反應(yīng),加入1呢TFA切 除樹脂得到N葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酸;稱取76. 7 mg的葉酸、61. 3 mg H0Bt和75. 7 mg DIC,用5 ml DMF溶解后,加入40 mg丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酰-樹脂,反應(yīng)48 72小時(shí)后,加入95%TFA將葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酸從樹脂 上切除下來。(3) 稱取N葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酸溶于N, N-二甲基 甲酰胺,活化后加入溶于Et3N的DMF的抗腫瘤細(xì)胞毒性藥物溶液, 攪拌反應(yīng)后加入乙醚萃取,乙醚萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得葉酸-多肽-阿霉素粗品。稱取5 mg的F-ASGP溶于1ml的N, N-二甲基甲酰胺(DMF), 加入2 ul氯甲酸乙酯,室溫下攪拌2分鐘。加入2.8 三乙胺, 室溫?cái)嚢?小時(shí)。稱取3. 85mg鹽酸阿霉素溶于0. 3mL DMF中,向其中加入1 u 1 三乙胺并混勻。將溶解好的鹽酸阿霉素溶液加入經(jīng)上述活化的F-ASGP 溶液,室溫?cái)嚢?8 24小時(shí)。產(chǎn)物用6. 5 ml的乙醚(5倍于反應(yīng)液 體積)進(jìn)行萃取,減壓抽濾棄去沉淀,乙醚萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得粗 品。HPLC檢測純度〉95%。實(shí)施例2葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酰-美法蘭(F-ASGP-PAM) 的合成(1) 按照實(shí)施例1的步驟(1)、 (2)合成F-ASGP(2) 稱取N葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酸溶于N, N-二甲基 甲酰胺,活化后加入溶于Et3N的DMF的抗腫瘤細(xì)胞毒性藥物溶液, 攪拌反應(yīng)后加入乙醚萃取,乙醚萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得葉酸-多肽-美法蘭粗品。稱取5 mg的F-ASGP溶于lml的N, N-二甲基甲酰胺(DMF), 加入2 Pl氯甲酸乙酯,室溫下攪拌2分鐘。加入2.8 yl三乙胺, 室溫?cái)嚢?小時(shí)。稱取2 mg苯丙氨酸氮芥(P扁)溶于0. 3mL DMF中,向其中加 入1 yl三乙胺并混勻。將溶解好的苯丙氨酸氮芥加入經(jīng)上述活化 的F-ASGP溶液,室溫?cái)嚢?8 24小時(shí)。產(chǎn)物用6. 5 ml的乙醚(5 倍于反應(yīng)液體積)進(jìn)行萃取,減壓抽濾棄去沉淀,乙醚萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)即得粗品。HPLC檢測純度〉95%。
權(quán)利要求
1、一種葉酸-多肽復(fù)合物介導(dǎo)的靶向抗腫瘤前體藥物,其特征在于其結(jié)構(gòu)通式如(I)所示X-ASGP-Cyt’(I)其中X代表與細(xì)胞膜上的葉酸受體有較高親和力的物質(zhì),包括葉酸、亞葉酸、二氫葉酸、四氫葉酸、蝶酸、四氫蝶呤、蝶酰多谷氨酸、2-去氨基-羥基葉酸、1-去氨基-羥基葉酸、1-去氮葉酸、3-去氮葉酸或8-去氮葉酸;ASGP代表丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酰連接子;Cyt’代表含有游離氨基的抗腫瘤細(xì)胞毒性藥物,包括阿霉素、刺孢霉素、道諾霉素、甲氨喋呤、苯丙氨酸氮芥、阿糖胞苷、絲裂霉素C、5-氟尿嘧啶或紫杉醇。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述葉酸-多肽復(fù)合物介導(dǎo)的靶向抗腫瘤前體 藥物,其特征在于所述結(jié)構(gòu)通式中X是葉酸,Cyt'是阿霉素。
3、 一種權(quán)利要求1或2所述葉酸-多肽復(fù)合物介導(dǎo)的靶向抗腫瘤 前體藥物的制備方法,其特征在于包括以下步驟(1) 合成脯氨酰-樹脂,領(lǐng)淀脯氨酰-樹脂的loading值;合成 多肽-樹脂;(2) 將葉酸與多肽-樹脂連接反應(yīng),加入1% TFA切除樹脂得到 N葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酸;(3) N葉酸-丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酸溶于N, N-二甲基甲酰 胺,活化后加入溶解于含Et3N的DMF中的抗腫瘤細(xì)胞毒性藥物溶液,攪拌反應(yīng)后加入乙醚萃取,乙醚萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得葉酸-多肽-阿霉素粗品。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于步驟(1)包括以下步驟(A) 在催化劑催化作用下,多肽合成樹脂與脯氨酸反應(yīng),再加 入甲醇反應(yīng),測得脯氨酰-樹脂loading值,加入哌啶/DMF脫去保護(hù) 基團(tuán)Fmoc得到脯氨酰-樹脂;(B) 依次稱取Fmoc-甘氨酸、Fmoc-絲氨酸和Fmoc-丙氨酸,分 別與H0Bt、 DIC和步驟(A)合成的脯氨酰-樹脂反應(yīng)至樹脂經(jīng)Kaiser 方法測定為陰性,加入25%哌啶/DMF脫去保護(hù)基團(tuán)Fmoc得到丙氨酰 絲氨酰甘氨酰脯氨酰-樹脂。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于步驟(A)所述 Fmoc-脯氨酸與根據(jù)樹脂loading值計(jì)算所得的氨基酸結(jié)合摩爾之比 為3 : 1;所述甲醇與根據(jù)樹脂loading值計(jì)算所得的氨基酸結(jié)合摩 爾之比為1 : 1;所述催化劑為DIPEA,加入的方法是第一步加入與 根據(jù)樹脂loading值計(jì)算所得的氨基酸結(jié)合摩爾之比為3. 3 : 1的 DIPEA,反應(yīng)5 min,第二步加入與根據(jù)樹脂loading值計(jì)算所得的 氨基酸結(jié)合摩爾之比為6.6 : 1的DIPEA,反應(yīng)反應(yīng)2 3小時(shí);步 驟(B)所述Fmoc-甘氨酸、Fmoc-絲氨酸、Fmoc-丙氨酸、H0Bt或DIC 與步驟(A)合成的脯氨酰-樹脂的loading值的摩爾數(shù)之比為4:1。
6、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于步驟(2)連接 反應(yīng)時(shí)間為48 72小時(shí)。
7、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于所述攪拌反應(yīng) 為室溫?cái)嚢璺磻?yīng)18 24小時(shí);所述乙醚萃取采用5倍于反應(yīng)液體積 的乙醚進(jìn)行萃取。
8、 一種權(quán)利要求1或2所述藥物制備得到的藥物組合物,其特 征在于由權(quán)利要求1或2所述藥物與藥用輔料混合制成。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述藥物組合物,其特征在于為小針劑、凍 干粉劑、微球劑、納米劑或腸溶膠囊劑。
10、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物,其特征在于所述藥物輔 料是藥劑學(xué)上允許的賦形劑、粘合劑、助懸劑、崩解劑、稀釋劑、潤 滑劑、腸溶包衣材料、生物粘附材料或非水溶性骨架材料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種葉酸-多肽復(fù)合物介導(dǎo)的靶向抗腫瘤前體藥物,其結(jié)構(gòu)通式為X-ASGP-Cyt’,并公開了一種典型的前體藥物葉酸-多肽-阿霉素。本發(fā)明同時(shí)公開了所述前體藥物的制備方法,利用特異性底物丙氨酰絲氨酰甘氨酰脯氨酸(ASGP)多肽為連接子,將其游離羧基對阿霉素等抗腫瘤藥物的游離氨基進(jìn)行?;揎?,而將其游離氨基與葉酸的羧基相連,成功合成攜帶有在腫瘤間質(zhì)細(xì)胞周圍選擇性水解的多肽結(jié)構(gòu)和對腫瘤細(xì)胞上的葉酸受體有高親和力的葉酸的酶激活式靶向抗腫瘤前體藥物,達(dá)到加快該類抗腫瘤藥物主動(dòng)向特定腫瘤組織的富集,在腫瘤組織周圍水解釋放出細(xì)胞毒性藥物的靶向性的目的。
文檔編號(hào)A61K47/48GK101224306SQ200810026379
公開日2008年7月23日 申請日期2008年2月20日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月20日
發(fā)明者鵬 劉, 卜憲章, 軍 杜, 謝白露 申請人:中山大學(xué)
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