專利名稱：：一種從油菜蜂花粉中提取總黃酮類的工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種從油菜蜂花粉中提取生物活性物質(zhì)黃酮類化合物的工藝方法。
背景技術(shù)：
：蜂花粉為蜜蜂采集的雄蕊花藥的粉狀物質(zhì)，被稱為"完全營養(yǎng)食品"，含有豐富的糖類，蛋白質(zhì)，氨基酸，維生素，黃酮類、酯類等各種營養(yǎng)物質(zhì)。現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)，蜂花粉中的黃酮類成分具有抗動(dòng)脈硬化、降低膽固醇等多種生理活性作用。黃酮類化合物的提取方法現(xiàn)在一般采用水煮提取、超臨界C02流體提取等方法。水煮和超臨界C02流體提取的方法存在諸多局限，沒有被廣泛應(yīng)用。目前尚未發(fā)現(xiàn)采用有機(jī)溶劑提取油菜蜂花粉總黃酮類物質(zhì)的工藝的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是為了提供一種從油菜蜂花粉中提取總黃酮的工藝。本發(fā)明的技術(shù)方案是，其特點(diǎn)是包括以下步驟①將干燥、粉碎的油菜蜂花粉用65-95%的乙醇溶液在60-90'C下回流提取、合并提取液并回收乙醇、過濾得水溶液；②將所得水溶液經(jīng)過經(jīng)乙醇處理的弱極性大孔吸附樹脂；③先用水洗脫弱極性大孔吸附樹脂至流出的溶液為無色或淡棕色，再用50-95%的乙醇洗脫至無黃酮流出并收集洗脫液；④蒸發(fā)回收洗脫液中的乙醇得黃酮溶液；⑤濃縮、干燥得粉狀黃酮產(chǎn)品。本發(fā)明的另一特點(diǎn)是步驟①中先將干燥、粉碎的油菜蜂花粉經(jīng)超臨界C02萃取提取油脂后，再用乙醇溶液進(jìn)行回流提取。本發(fā)明的另一特點(diǎn)是步驟①所述的回流提取的料液比為1:6-1:12，提取次數(shù)為2-4次，每次提取0.5-2.0小時(shí)。本發(fā)明的另一特點(diǎn)是步驟②所述的弱極性大孔吸附樹脂為AB-8型。本發(fā)明的另一特點(diǎn)是步驟②所述水溶液(提取液)通過弱極性大孔吸附樹脂的流速為0.2-2.0BV/h。本發(fā)明的另一特點(diǎn)是步驟③所述水洗脫及乙醇洗脫的流速為0.5-2.0BV/h。本發(fā)明的另一特點(diǎn)是步驟①中，油菜蜂花粉與乙醇的料液比為1:12，乙醇的濃度為65%，提取溫度為80-9CTC，回流提取4次，每次2小時(shí)。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)和效果1、本發(fā)明首次對油菜蜂花粉的黃酮類化合物的提取制備過程進(jìn)行了研究，對影響提取得率及黃酮含量的各個(gè)參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，從而確定了最優(yōu)條件；從而提高了黃酮類化合物得率，并減小了工業(yè)消耗、降低了生產(chǎn)成本。2、本發(fā)明采用乙醇為溶劑，安全可靠、易于工業(yè)化生產(chǎn)。3、本發(fā)明可廣泛應(yīng)用于各種黃酮類藥物及保健食品開發(fā)需求。本發(fā)明對影響黃酮類化合物提取的各個(gè)因素進(jìn)行了正交試驗(yàn)優(yōu)化研究，通過分光光度法測定吸光度對各次提取制得的黃酮含量進(jìn)行測定。選取了溫度、料液比、乙醇濃度、提取時(shí)間和提取次數(shù)5個(gè)因素，每個(gè)因素4個(gè)水平，采用U(45)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析表明，各因素對提取效果的影響程度為提取次數(shù)〉乙醇濃度>料液比〉時(shí)間>溫度。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，最佳提取條件是提取溫度為9(TC，料液比為1:12，乙醇濃度為65%，提取時(shí)間為2h，提取次數(shù)為4次。但由于浸提溫度對黃酮的提取影響并不大，考慮到實(shí)際工業(yè)化生產(chǎn)，宜采用8(TC的提取溫度。這樣即能提高黃酮類化合物的得率，又能節(jié)省能源，且易于操作。經(jīng)綜合分析，加熱回流提取的最佳工藝條件為用1:12的65%乙醇溶液在80'C下，回流提取4次，每次2小時(shí)。表1為本發(fā)明中正交試驗(yàn)因素水平表表2為本發(fā)明中正交試驗(yàn)結(jié)果及數(shù)據(jù)分析表i因素水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表2正交試驗(yàn)結(jié)果及數(shù)據(jù)分析<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>164432kl31.2431.1132.5831.7828.50k230.4330.5131.7530.5831.77k331."30.4632.0330.4032.31k432.4833,2028.9132.5132.70R2.052.743.672.114.235.1具體實(shí)施例方式實(shí)施例一①將油菜蜂花粉干燥后粉碎，粉碎成粒度為20-80目，經(jīng)超臨界C02萃取提取油脂后，用6倍量的95%的乙醇溶液在90匸下回流提取4次，每次提取時(shí)間0.5小時(shí)，合并兩次提取液，濃縮回收乙醇得水溶液并過濾，②將過濾液以0.2BV/h的流速經(jīng)過乙醇處理的弱極性AB-8型大孔吸附樹脂塔；③先用水以流速0.5BV/h洗脫至無色或淡棕色后，再用80%乙醇以2.OBV/h的流速洗脫至無黃酮流出時(shí)停止洗脫(用FeCl3溶液檢測黃酮洗脫情況，如有黃酮化合物存在，加入FeCl3溶液時(shí)會顯墨綠色，如果沒有則不變色)，收集洗脫液；蒸發(fā)回收洗脫液中的乙醇得黃酮溶液，再減壓濃縮至粘稠狀，冷凍干燥，粉碎得到粉狀黃酮產(chǎn)品。實(shí)施例二①將油菜蜂花粉干燥后粉碎，粉碎成粒度為20-80目，用12倍量的65%的乙醇溶液在80。C下回流提取2次，每次提取時(shí)間1.5小時(shí)，合并兩次提取液，濃縮回收乙醇得水溶液并過濾，②將過濾液以2.0BV/h的流速經(jīng)過乙醇處理的弱極性AB-8型大孔吸附樹脂塔；③先用水以流速0.5BV/h洗脫至無色或淡棕色后，再用95%乙醇以2.0BV/h的流速洗脫至無黃酮流出時(shí)停止洗脫(用FeCl3溶液檢測黃酮洗脫情況，如有黃酮化合物存在，加入FeCl3溶液時(shí)會顯墨綠色，如果沒有則不變色)，收集洗脫液；④蒸發(fā)回收洗脫液中的乙醇得黃酮溶液，再減壓濃縮至粘稠狀，冷凍干燥，粉碎得到粉狀黃酮產(chǎn)品。實(shí)施例三①將油菜蜂花粉干燥后粉碎，粉碎成粒度為20-80目，經(jīng)超臨界C02萃取提取油脂后，用8倍量的7(m的乙醇溶液在7(TC下回流提取3次，每次提取時(shí)間2小時(shí)，合并三次提取液，濃縮回收乙醇得水溶液并過濾，②將過濾液以0.8BV/h的流速經(jīng)過乙醇處理好的弱極性AB-8型大孔吸附樹脂塔；③先用水以流速2.OBV/h洗脫至無色或淡棕色后，再用50%乙醇以2.0BV/h的流速洗脫至無黃酮流出時(shí)停止洗脫(用FeCl3溶液檢測黃酮洗脫情況，如有黃酮化合物存在，加入FeCl3溶液時(shí)會顯墨綠色，如果沒有則不變色)，收集洗脫液；④蒸發(fā)回收洗脫液中的乙醇得黃酮溶液，再減壓濃縮至粘稠狀，冷凍干燥，粉碎得到粉狀黃酮產(chǎn)品。實(shí)施例四①將油菜蜂花粉干燥后粉碎，粉碎成粒度為20-80目，用10倍量的8(m的乙醇溶液在6(TC下回流提取4次，每次提取時(shí)間0.5小時(shí)，合并四次提取液，濃縮回收乙醇得水溶液并過濾，②將過濾液以1.0BV/h的流速經(jīng)過乙醇處理的弱極性AB-8型大孔吸附樹脂塔；③先用水以流速1.0BV/h洗脫至無色或淡棕色后，再用70%乙醇以0.8BV/h的流速洗脫至無黃酮流出時(shí)停止洗脫(用FeCl3溶液檢測黃酮洗脫情況，如有黃酮化合物存在，加入FeCl3溶液時(shí)會顯墨綠色，如果沒有則不變色)，收集洗脫液；④蒸發(fā)回收洗脫液中的乙醇得黃酮溶液，再減壓濃縮至粘稠狀，冷凍干燥，粉碎得到粉狀黃酮產(chǎn)品。權(quán)利要求1、一種從油菜蜂花粉中提取總黃酮類的工藝，其特征在于包括如下步驟①將干燥、粉碎的油菜蜂花粉用65-95％的乙醇溶液在60-90℃下回流提取、合并提取液并回收乙醇、過濾得水溶液；②將所得水溶液經(jīng)過經(jīng)乙醇處理的弱極性大孔吸附樹脂；③先用水洗脫弱極性大孔吸附樹脂至流出的溶液為無色或淡棕色，再用50-95％的乙醇洗脫至無黃酮流出并收集洗脫液；④蒸發(fā)回收洗脫液中的乙醇得黃酮溶液；⑤濃縮、干燥得粉狀黃酮產(chǎn)品。2、如權(quán)利要求1所述的一種從油菜蜂花粉中提取總黃酮類的工藝，其特征在于所述步驟①中先將干燥、粉碎的油菜蜂花粉經(jīng)超臨界C02萃取提取油脂后，再用乙醇溶液進(jìn)行回流提取。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種從油菜蜂花粉中提取總黃酮類的工藝，其特征在于步驟①所述的回流提取的料液比為1:6-1:12，提取次數(shù)為2_4次，每次提取0.5-2.0小時(shí)。4、如權(quán)利要求1或2所述的一種從油菜蜂花粉中提取總黃酮類的工藝，其特征在于步驟②所述的弱極性大孔吸附樹脂為AB-8型。5、如權(quán)利要求1或2所述的一種從油菜蜂花粉中提取總黃酮類的工藝，其特征在于步驟②所述提取液通過弱極性大孔吸附樹脂的流速為0.2-2.OBV/h。6、如權(quán)利要求1或2所述的一種從油菜蜂花粉中提取總黃酮類的工藝，其特征在于:步驟③所述水洗脫及乙醇洗脫的流速為0.5-2.0BV/h。7、如權(quán)利要求1所述的一種從油菜蜂花粉中提取總黃酮類的工藝，其特征在于所述步驟①中，油菜蜂花粉與乙醇的料液比為1:12，乙醇的濃度為65%，提取溫度為80-9(TC，回流提取4次，每次2小時(shí)。全文摘要一種從油菜蜂花粉中提取總黃酮類的工藝，涉及一種從油菜蜂花粉中提取生物活性物質(zhì)黃酮類化合物的工藝方法。其特點(diǎn)是包括如下步驟①將干燥、粉碎的油菜蜂花粉用65-95％的乙醇溶液在60-90℃下回流提取、合并提取液并回收乙醇、過濾得水溶液；②將所得水溶液經(jīng)過經(jīng)乙醇處理的弱極性大孔吸附樹脂；③先用水洗脫弱極性大孔吸附樹脂至流出的溶液為無色或淡棕色，再用50-95％的乙醇洗脫至無黃酮流出并收集洗脫液；④蒸發(fā)回收洗脫液中的乙醇得黃酮溶液；⑤濃縮、干燥得粉狀黃酮產(chǎn)品。文檔編號A61P9/00GK101554394SQ20081001796公開日2009年10月14日申請日期2008年4月8日優(yōu)先權(quán)日2008年4月8日發(fā)明者劉永軍,王小艷,王洪倫,索有瑞申請人:中國科學(xué)院西北高原生物研究所