專利名稱：：一種丹酚酸a氨基酸鹽、制備方法、粉針組合物及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：'本發(fā)明涉及一種丹酚酸A氨基酸鹽、其制備方法、一種包含丹酚酸A氨基酸鹽的凍干粉針組合物及其在制藥中的用途。
背景技術(shù)：
：丹酚酸A是存在于唇形科植物丹參中的一種酚酸類化合物。近年來(lái)丹酚酸A被發(fā)現(xiàn)具有抗血小板聚集、抗凝、抗血栓形成、抗氧化等多種藥理活性，對(duì)心、腦系統(tǒng)的多種疾病具有潛在的治療價(jià)值。由于丹酚酸A具有很強(qiáng)的抗氧活性，存在著易被氧化、穩(wěn)定性差，制成注射劑很難保證其長(zhǎng)期穩(wěn)定，因此將丹酚酸A制成凍干制劑成為最優(yōu)選注射劑型。CN1969822A公開了將丹酚酸A制成注射劑的技術(shù)方案，認(rèn)為丹酚酸A中存在的雜質(zhì)與丹酚酸A在高效液相色譜圖中有一定關(guān)系，而且制備成合格注射劑后，這種關(guān)系仍然存在；另外，該研究人員還發(fā)現(xiàn)在制劑過(guò)程中需要加入與丹酚酸A有一定比例關(guān)系的抗氧劑，制劑中pH值對(duì)丹酚酸A的降解具有很大的影響。因此，該發(fā)明人提供了以控制丹酚酸A中雜質(zhì)的性質(zhì)與含量、丹酚酸A與抗氧化劑的配比關(guān)系、pH值的范圍的方法來(lái)解決丹酚酸A注射劑的制備及穩(wěn)定性問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種在水溶液中穩(wěn)定性強(qiáng)、溶解度高、不易被氧化的丹酚酸A氨基酸鹽。本發(fā)明另一目的在于提供一種工藝性好、操作簡(jiǎn)單的丹酚酸A氨基酸鹽制備方法。本發(fā)明還有一個(gè)目的提供一種穩(wěn)定性好、均勻度高、符合藥品復(fù)水性要求的組合物。本發(fā)明的進(jìn)一步目的在于提供丹參酚酸A氨基酸鹽的新用途，即其在制藥中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下-一種丹酚酸A堿性氨基酸鹽。結(jié)構(gòu)通式如下3R-賴氨酸、組氨酸、精氨酸堿性氨基酸可以是賴氨酸、組氨酸、精氨酸，優(yōu)選為L(zhǎng)一精氨酸。本發(fā)明中涉及的丹酚酸A堿性氨基酸鹽可以大大提高丹酚酸A在水溶液中的溶解性，特別是在形成丹酚酸A精氨酸鹽后，在水溶液中的溶解度達(dá)到了50mg/tnl以上。丹酚酸A精氨酸鹽對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞釋放NO具有較強(qiáng)的抑制活性。與丹酚酸A相比，丹酚酸A精氨酸鹽對(duì)氧自由基的清除作用、對(duì)大鼠心臟缺氧再灌注損傷的保護(hù)、對(duì)大鼠局部腦缺血損傷的保護(hù)、對(duì)腎組織氧化損傷的保護(hù)作用對(duì)小鼠急性肝損傷的治療作用、對(duì)大鼠靜脈血栓形成的影響、對(duì)腦缺血大鼠血小板聚集的影響均明顯強(qiáng)于丹酚酸A，一種丹酚酸A堿性氨基酸鹽的制備方法，包括以下步驟取堿性氨基酸，加適量水溶解，取丹酚酸A加無(wú)水乙醇溶解或水混懸，將兩種溶液混合，充分?jǐn)嚢?，使反?yīng)完全，減壓低溫回收溶劑或常規(guī)冷凍干燥，得淡黃色固體，即得丹酚酸A鹽。丹酚酸A與堿性氨基酸的摩爾比為1:0.9-10.0。其中丹酚酸A與堿性氨基酸優(yōu)選的摩爾比為1:0.9-1.2，最優(yōu)選摩爾比為l:1。一種凍干粉針組合物，包括丹酚酸A堿性氨基酸鹽、抗氧劑、賦型劑。本發(fā)明中的凍干粉針組合物優(yōu)選含有重量比為0.1%99.5%的丹酚酸A堿性氨基酸鹽，最優(yōu)選含有重量比為0.5%95%的丹酚酸A堿性氨基酸鹽?？寡鮿┛梢允莵喠蛩釟溻c、亞硫酸鈉.、硫代硫酸氫鈉或維生素C中的一種或幾種，優(yōu)選為亞硫酸氫鈉。抗氧劑種類對(duì)凍干制劑的穩(wěn)定性、外觀、復(fù)水性有顯著性影響。對(duì)注射劑常用的抗氧劑篩選發(fā)現(xiàn)，亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉.、硫代硫酸氫鈉及維生素C均可以增強(qiáng)丹酚酸A鹽在水溶液中的穩(wěn)定性，處方中抗氧劑對(duì)于丹酚酸A鹽穩(wěn)定性有重要意義，4其中NaHS03和Vc抗氧效果優(yōu)于其他抗氧劑。對(duì)不同抗氧劑對(duì)凍干制劑外觀影響的考察結(jié)果表明，NaHSCb和Vc組藥塊均勻度優(yōu)于其他抗氧劑組。對(duì)凍干品復(fù)水性研究發(fā)現(xiàn)，NaHS03組能夠迅速完全溶解，符合凍干制劑復(fù)水性要求。所述亞硫酸氫鈉的用量為臨床可接受的常規(guī)用量，即為注射液的0.05-0.2W(w/v)，優(yōu)選0.1-0.2%。上文所述的賦型劑可以是甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、右旋糖酐、氯化鈉等，優(yōu)選甘露醇和葡萄糖。上文所述凍干粉針組合物還可以包括葡萄糖、NaCl等物質(zhì)。本發(fā)明還提供該丹酚酸A氨基酸鹽在制備血栓性疾病、氧化損傷性疾病、一氧化氮生成過(guò)量所致疾病治療藥物的用途，其中所述血栓性疾病包括TIA、腦血栓形成、腦栓塞、缺血性心臟病、缺血性心肌病、血栓閉塞性脈管炎、閉塞性動(dòng)脈硬化癥、糖尿病肢體動(dòng)脈閉塞癥、血栓性淺靜脈炎、下肢深靜脈血栓形成、糖尿病血栓形成、腦外傷形成的血栓病、燒傷形成的血栓病、創(chuàng)傷形成的血栓病等；所述氧化損傷性疾病包括動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈硬化、心肌缺血、心絞痛、心肌梗死、心肌炎、腦梗死、腦缺血、腦水腫、顱腦損傷、高血壓、腦出血、帕金森氏病、早老性癡呆、阿爾茨海默氏病、胃炎、消化性潰瘍、胃癌、病毒性肝炎、肝硬化、肝壞死、脂肪肝、酒精肝、肝纖維化、中毒性肝臟病變、原發(fā)性肝癌、急性胰腺炎、上呼吸道感染、支氣管哮喘、呼吸衰竭、成人呼吸窘迫綜合征、阻塞性肺氣腫、慢性肺源性心臟病、肺水腫、腎小球腎炎、急性腎功能衰竭、慢性腎功能衰竭、腎移植后排斥反應(yīng)、巨幼細(xì)胞貧血、再生障礙性貧血、急性白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、糖尿病、肝豆?fàn)詈俗冃?、慢性淋巴?xì)胞性甲狀腺炎、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白內(nèi)障、角膜炎、黃斑變性、視網(wǎng)膜色素變性、玻璃體渾濁、青光眼、視神經(jīng)萎縮、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、腫瘤、艾滋病等。作為一氧化氮生成抑制劑可用于治療的疾病包括骨性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、全身炎性反應(yīng)綜合征、膿毒血癥、膿毒性休克、多器官功能障礙綜合征、感染性休克、腦梗塞、高血壓、心肌梗塞、充血性心力衰竭、腎小球腎炎、肝硬化、炎癥性腸病、糖尿病、艾滋病、血管性頭痛、哮喘、腫瘤。本發(fā)明所述丹酚酸A氨基酸鹽的使用量可根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的疾病類型和嚴(yán)重程度等變化，用以治療疾病劑量范圍可以是為0.003-10mg/kg/日/人，優(yōu)選0.003-6mg/kg/日/人，可以一次或多次給藥。本發(fā)明中涉及的藥物和材料均為現(xiàn)有技術(shù)中己知的藥物，所用的藥物和材料均可以直5接從市場(chǎng)購(gòu)買獲得。綜上所述，本發(fā)明提供的丹酚酸A氨基酸鹽在水溶液中穩(wěn)定性強(qiáng)、溶解度高、不易被氧化；丹酚酸A氨基酸鹽的制備方法工藝性好、操作簡(jiǎn)單；含丹酚酸A氨基酸鹽的凍干粉針組合物穩(wěn)定性好、均勻度高、符合藥品復(fù)水性要求；本發(fā)明中提供的丹參酚酸A氨基酸鹽較丹酚酸A具有良好的抗血小板聚集作用、抗凝作用、抗血栓形成、清除自由基作用；較丹酚酸A對(duì)心臟缺血/再灌注損傷、肝臟氧化損傷、腎組織氧化損傷及局部腦缺血損傷有更好的保護(hù)作用；有NO抑制活性，同時(shí)沒(méi)有血管刺激性的作用，可用于制備治療血栓性疾病、氧化損傷性疾病、一氧化氮生成過(guò)量所致疾病治療藥物的用途。圖1.丹酚酸A精氨酸鹽質(zhì)譜圖2.丹酚酸A精氨酸鹽氫譜圖3.丹酚酸A精氨酸鹽碳譜圖4.丹酚酸A氫譜圖5.丹酚酸A碳譜具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述。以下實(shí)施例僅為本發(fā)明的幾個(gè)具體實(shí)施例，但本發(fā)明的設(shè)計(jì)構(gòu)思并不局限于此，凡利用此構(gòu)思對(duì)本發(fā)明進(jìn)行非實(shí)質(zhì)性的改動(dòng)，均應(yīng)屬于侵犯本發(fā)明保護(hù)范圍的行為。實(shí)施例l稱取L一精氨酸15.68g(0.09mol)，加100ml水溶解，取丹酚酸A49.4g(0.1mol)加1000ml無(wú)水乙醇溶解，將兩種溶液混合，于3(TC下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，使反應(yīng)完全，減壓50'C下回收溶劑，得淡黃色固體，即得丹酚酸A精氨酸鹽。實(shí)施例2取L—精氨酸17.4g(O.lmol)，100ml水溶解，取丹酚酸A49.4g(0.1mol)加1000ml無(wú)水乙醇溶解，將兩種溶液混合，于4(TC下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，使反應(yīng)完全，減壓5(TC下回收溶劑，得淡黃色固體，即得丹酚酸A精氨酸鹽。對(duì)丹酚酸A精氨酸鹽結(jié)構(gòu)確證如下核磁共振氫譜(CD3OD,400MHz)的解析丹酚酸A和丹酚酸A精氨酸鹽的'HNMR譜數(shù)據(jù)比較(溶劑CD3OD)丹酚酸A文獻(xiàn)值原料丹酚酸A(圖4)丹酚酸A精氨酸鹽(圖2)2.94(1H,dd,J=14.4,10.5Hz,H-7")2.96(IH，dd,J=14.3,8.5Hz,H-7")2.92(1H,dd,J=14.3，9.34Hz，H-7")3.03(1H,dd，J=14.4,4.5Hz，H-7")3.06(1H,dd,J=14.3,4.2H&H-7")3.06(1H,dd，J=14.3，3.56Hz,H-7")5.23(1H,dd,J=10.5,4.5Hz,H-8")5.17(1H，dd,J=8.5,4.3Hz,H-8")5.04(1H,dd,J=9.24,3.56Hz,H-8")6.27(1H,d,J=16.0Hz,H-oO6.29(1H,d,J=15.8Hz,H國(guó)a)6.31(1H,d，J=:15.8Hz，H國(guó)a)6.54(1H,dd,J=8.4,2.2H-6")6.55(1H,dd,J=8.08，2.0Hz，H-6")6.58(1H,dd，J==8.04,1.88Hz>H-6")6.62(lH,d，J=8.4Hz，H-5")6.64(1H,d,J=8.04Hz，H-5")6.64(1H,d,J=8.04Hz,H-5")6.67(lH,d,J==16.8Hz,H-7)6.64(1H,d,J==16.4Hz,H-7)6.68(1H,d，J=:16.4Hz,H-7)6.71(lH，d,J=8.7Hz，H-4')6.74(1H,d,J=8.44Hz，H-4')6.73(1H,d,J=8.36Hz，H-4')6.72(1H,d,J=:8.5Hz,H-5)6.75(1H,d，J=8.12Hz,H-5)6.75(1H,d,J=:8.04Hz，H-5)6.76(1H,d,J=2.2Hz,H-2")6.71(1H，d，J=2.0Hz，H-2，';)6.75(1H,d，J=1.96Hz,H-2")6.86(1H,dd,J=8.5,2.0,Hz，H-6)6.87(1H,dd，J:=8.2,1.96Hz,H-6)6.87(IH，dd,J=8.24,1.88Hz，H-6)7.04(IH,d,J=:2.0Hz,H-2)7.05(1H,d，J=丄96Hz，H陽(yáng)2)7.04(IH，d,J=:1.88Hz,H-2)7.11(1H,d,J=:8.7Hz>H-5，)7.12(1H,d，J=8.44Hz,H-5')7.10(1H,d,J=:8.36Hz,H-5')7.13(lH,d，J=:16.8H-8)7.M(lH，d，J=:16.4Hz,H-8)7.12(1H,d,J=:16.4Hz>H-8)8.05(IH，d,J=:16.0Hz，關(guān)8.06(1H,d,J=:15.8Hz,H-p)8.00(IH，d,J=:15.8Hz,H-p)精氨酸部分3.56(IH，U=6.16Hz,H-2)3.15(2H,dt,J=6.88,3.04Hz，H-5)1.60-1.74(2H)1.79-1.90(2H)精氨酸丹參酚酸A與丹參酚酸A的比較，以H-8"的化學(xué)位移變化最大，A5=0.13,而其它氫信號(hào)的化學(xué)位移變化很小，說(shuō)明精氨酸丹參酚酸A的成鹽部位在羧基上。這一點(diǎn)與碳譜數(shù)據(jù)結(jié)論也相一致。核磁共振碳譜(CD3OD，100MHz)的解析丹酚酸A和丹酚酸A精氨酸的碳譜數(shù)據(jù)(溶劑CD3OD)Pos.丹酚酸A(文獻(xiàn)值)丹酚酸A(圖5)丹酚酸A精氨酸(圖3)9，，174.0173.4177.8(+4.4)7，168.7168.6169.3(+0.7)3,148.2148.3148.1(-0.2)147.3147.4146.7(-0,7)4146.7146.7146.5(-0.2)2，146.5146.5146.2(-0.3)4，，146.1146.1146.0(-o."3，，145.2145.2144.8(-0.4)3144.4144.4144.4(0.0)7137.8137.9137.6(-0.3)1，131.4131.4131.5(+0.1)r'130.7129.313U(+1.8)7由表中數(shù)據(jù)可以看出丹酚酸A與L-精氨酸以1:l成鹽后，其C9"位的羧基碳的化學(xué)位移值變化最大，由S173.4向低場(chǎng)位移至5177.8，此外，與一COOH相鄰的C8"，7",l"5值也有較明顯地改變,分別向低場(chǎng)位移3.2,0.8和1.8ppm,其它譜線的ASO.4ppm，吻合度較好.由以上分析可以推斷，二者是以離子鍵方式成鹽，即在本實(shí)驗(yàn)條件下，精氨酸丹酚酸A是由丹酚酸A通過(guò)其C9"—COOH與L-精氨酸分子中C2—NH2以離子鍵結(jié)合形成的。質(zhì)譜解析儀器TSQQuantumAccess三重四極桿質(zhì)譜儀(美國(guó)熱電公司)測(cè)定條件ESI離子源負(fù)離子掃描模式分子量范圍m/z100-1000噴霧電壓3.5kv毛細(xì)管溫度300°C1128.3128.46，126.1126.16"122,0122.08120.7120.76120.4120.55，120.1120.12'，117.4117.45"116.3116.54，116.1116.3115.7115.65114.8114.82113.9114.08"75.074.77，，38.038.0精氨酸64321128.0126.4122.0120.6120.3120.2117.4116.9116.5116.2114.7114.177.938.8158.755.529.425.641.8174.5(-1.7)(-3.1)(-3.9)(-2.3)(-2,8)(-7.9)18噴霧氣48.23kpa干燥氣流速4L/min結(jié)果在ESI-MS圖譜(圖1)上可見m/z493.32的基峰及準(zhǔn)分子離子峰m/z173.33、m/z667.48(0.95%)。準(zhǔn)分子離子峰m/z667.48([M-H]+，0.95%)提示丹酚酸A(DFA)與精氨酸形成了新的化合物，m/z493.32([DFA-H]+，100%)和m/z173.3([Arg-H]+，8.8%)則表明在新化合物極易裂解成丹酚酸A和精氨酸的碎片，提示丹酚酸A與精氨酸通過(guò)離子鍵成鹽形成新化合物。實(shí)施例3取賴氨酸17.5gC0.12mo1)，200ml水溶解，取丹酚酸A49.4g(O.lmol)加500ml水混懸，將兩種溶液混合，于40'C下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，使反應(yīng)完全，至溶液澄清，常規(guī)冷凍干燥回收溶劑，得淡黃色固體，即得丹酚酸A賴氨酸鹽。實(shí)施例4取組氨酸31.0g(0.2mol)，加200ml水溶解，取丹酚酸A49.4g(0.1mol)加1000ml無(wú)水乙醇溶解，將兩種溶液混合，于4(TC下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，使反應(yīng)完全，冷凍干燥回收溶劑，得淡黃色固體，即得丹酚酸A組氨酸鹽。實(shí)施例5取L一精氨酸174g(lmol)，加2000ml水溶解，取丹酚酸A49.4g(0.1mol)加1000ml無(wú)水乙醇溶解，將兩種溶液混合，于40'C下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，使反應(yīng)完全，常規(guī)減壓干燥回收溶劑，得淡黃色固體，即得丹酚酸A精氨酸鹽。實(shí)施例6稱取20g甘露醇，置于適當(dāng)容器內(nèi)，加入200ml注射用水，加針用炭0.2g(0.1。/。w/v)，加熱至80'C，攪拌30min，0.22pm微孔濾膜過(guò)濾，濾液備用。稱取亞硫酸氫鈉3.0g，加注射用水1000ml使溶解，稱取10.0g丹參酚酸A精氨酸鹽加入溶液中，攪拌使丹參酚酸A完全溶解?；旌系⒎铀酇溶液及甘露醇溶液，補(bǔ)加注射用水至2000ml，檢測(cè)含量及pH值后,用0.22pm微孔濾膜過(guò)濾，分裝，裝量為每支含丹酚酸A25mg，冷凍干燥。真空壓塞，軋蓋，貼簽，包裝即得。實(shí)施例79稱取20g葡萄糖，置于適當(dāng)容器內(nèi)，加入300ml注射用水，加針用炭0.2g(0.iy。w/v)，加熱至8(TC，攪拌30min，0.22pm微孔濾膜過(guò)濾，濾液備用。稱取亞硫酸氫鈉3.0g，加注射用水1000ml使溶解，稱取20.0g丹參酚酸A精氨酸鹽加入溶液中，攪拌使完全溶解?；旌系⒎铀酇溶液及甘露醇溶液，補(bǔ)加注射用水至2000ml，檢測(cè)含量及pH值后，用0.22|am微孔濾膜過(guò)濾，分裝，裝量為每支含丹酚酸A20mg，冷凍干燥。真空壓塞，軋蓋，貼簽，包裝即得。實(shí)施例8丹酚酸A和丹酚酸A精氨酸溶解度測(cè)定丹酚酸A:由煙臺(tái)靶點(diǎn)藥物研究有限公司分離自中藥丹參；丹酚酸A精氨酸按實(shí)施例2制備按中國(guó)藥典(2005版)一部凡例中關(guān)于溶解度的試驗(yàn)法操作。分別稱取研成細(xì)粉的丹酚酸A和丹酚酸A精氨酸，置于25ml25±2"的水溶液中，每隔5分鐘強(qiáng)有力振搖30秒鐘，觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，如無(wú)目視可見的溶質(zhì)顆粒時(shí)，即視為完全溶解。測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>結(jié)論丹酚酸A在水溶液中的溶解度小于5mg/ml，丹酚酸A精氨酸在水溶液中的溶解度大于50mg/ml，小于100mg/ml。實(shí)施例9賦型劑和抗氧劑種類對(duì)丹酚酸A精氨酸凍干制劑的影響1.材料丹酚酸A精氨酸按實(shí)施例2制備無(wú)水葡萄糖，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20070509;氯化鈉，天津市天大化式實(shí)驗(yàn)廠，批號(hào)20070519;蔗糖，天津市化學(xué)試劑一廠，批號(hào)061227;亞硫酸氫鈉，天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)20040907;無(wú)水亞硫酸鈉，天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)20070620;硫代硫酸鈉，天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)060427;Vc，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)F20070524。2.實(shí)驗(yàn)方法按下表中所要求的賦形劑種類和抗氧劑種類配制溶液，賦形劑的質(zhì)量體積濃度為2%，抗氧劑的質(zhì)量體積濃度為0.15%，然后稱取270.5mg丹酚酸A精氨酸鹽，用上述含賦形劑種類和抗氧劑的溶液配制成10mL的溶液，分裝到4個(gè)10mL的西林瓶中，每瓶2.5mL，放入-20。C的冰箱中預(yù)凍6h，然后放入冷凍干燥機(jī)中凍干24h。取出后觀察外觀性狀，測(cè)復(fù)水性和丹酸酚A含量，丹酚酸A精氨酸鹽溶液放置24h后再次測(cè)丹酸酚A含量。賦型劑和抗氧劑種類對(duì)丹酚酸A精氨酸鹽凍干制劑影響考察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>丹酚酸A精氨酸鹽溶液24小時(shí)穩(wěn)定性影響考察結(jié)果序號(hào)賦形劑抗氧劑丹酚酸A相對(duì)含量1甘露醇/95.0%2葡萄糖/95.0%3氯化鈉/95.5%4蔗糖/92.9%甘露醇NaHS0395.7%6甘露醇Na2S0390.8%7甘露醇Na2S20394.4%8甘露醇Vc98.5%9/NaHS0399.0%10/Na2S0396.7%11/Na2S20395.7%12/Vc98.0%13原料94.3%14精氨酸鹽未加抗氧劑溶液48小時(shí)91.9%15精氨酸鹽未加抗氧劑溶液48小時(shí)93.7%實(shí)施例101.材料丹酚酸A精氨酸按實(shí)施例2制備；亞硫酸氫鈉，天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)20040907。2.實(shí)驗(yàn)方法按下表中所要求的賦形劑種類和抗氧劑種類及濃度配制溶液，賦形劑的質(zhì)量體積濃度為1%，然后稱取270.5mg丹酚酸A精氨酸鹽，用上述含賦形劑種類和抗氧劑的溶液配制成lOmL的溶液，分裝到4個(gè)10mL的西林瓶中，每瓶2.5mL，放入-20'C的冰箱中預(yù)凍6h，然后放入冷凍干燥機(jī)中凍干24h。取出后觀察外觀性狀，測(cè)復(fù)水性和丹酸酚A含量。亞硫酸氫鈉的濃度對(duì)丹酚酸A精氨酸鹽凍干制劑的影響12<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>試驗(yàn)例l丹酚酸A精氨酸(SALA)對(duì)腦缺血大鼠血小板聚集的影響1、材料與動(dòng)物U、材料受試樣品丹酚酸A精氨酸(SALA)，煙臺(tái)靶點(diǎn)藥物研究有限公司提供，內(nèi)容物為橙黃色粉末，易溶于水。批號(hào)DA080102，規(guī)格100mg。SAL，煙臺(tái)靶點(diǎn)藥物研究有限公司提供，內(nèi)容物為橙黃色粉末。血塞通，昆明興中制藥有限責(zé)任公司，100mg/2ml，批號(hào)20070411，國(guó)藥準(zhǔn)字Z53021499。二磷酸腺苷(ADP):美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，生理鹽水配制，10Opmol/L。枸椽酸鈉白色粉末，天津市天河化學(xué)試劑廠，分析純，以蒸餾水配制3.8%溶液備用。DL-4000B型低速冷凍離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠。LBY-NJ2血小板聚集儀北京普利生公司產(chǎn)品。顯微鏡Olympus1.2、動(dòng)物SD大鼠，SPF級(jí)，雄性，體重230g250g2、分組與方法動(dòng)物隨機(jī)分為空白對(duì)照組(賦形劑)，血塞通組(XST，40mg/kg)，SAL，(40mg/kg)，SALA小劑量組(2.5mg/kg)，SALA中劑量組(5mg/kg)，SALA高劑量組(10mg/kg)，每組10只。禁食12小時(shí)后，尾靜脈注射相應(yīng)藥物，5min后，腹主動(dòng)脈取血5ml，以3.8%枸櫞酸鈉抗凝。650rpm離心15min，移出上層血槳即富血小板血漿(PRP)0.5ml，余下部分再以3000rpm離心10min，上層清液即為乏血小板血衆(zhòng)(PPP)。調(diào)整PRP的血小板數(shù)〈00萬(wàn)個(gè)/ml，移取0.3ml調(diào)整好濃度的血小板至比濁管內(nèi)，將比濁管放入用PPP調(diào)零后的血小板聚集儀中，37。C溫育3min后加入1(^1的ADP，同時(shí)開啟血小板聚集儀進(jìn)行記錄，記錄時(shí)間為5min，打印記錄結(jié)果。最大聚集率用i土s表示，并與空白對(duì)照組比較，T-Test檢驗(yàn)。3、結(jié)果結(jié)果如表所示，SALA2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg劑量組血小板最大聚集率明顯低于空白對(duì)照組，10mg/kg劑量組優(yōu)于SAL組。SALA對(duì)ADP誘導(dǎo)的腦缺血大鼠血小板聚集的影響(Z±s)組別聚集率空白對(duì)照組31.2±5.6血塞通組23.9±5.1**SAL組26.8±4.1*SALA高劑量組21.8±6.8**，ASALA中劑量組24.1±6.7*SALA小劑量組25,0±4,8*與空白對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01，與SAL組比較AP<0.05試驗(yàn)例2丹酚酸A精氨酸(SALA)對(duì)大鼠靜脈血栓形成的影響1、材料與動(dòng)物U、材料受試樣品SALA，煙臺(tái)靶點(diǎn)藥物研究有限公司提供，按實(shí)施例2制備，內(nèi)容物為橙黃色粉末，易溶于水。批號(hào)DA080102,規(guī)格lOOmg。SAL，煙臺(tái)耙點(diǎn)藥物研究有限公司提供，為橙黃色粉末。血塞通，昆明興中制藥有限責(zé)任公司，100mg/2ml，批號(hào)20070411，國(guó)藥準(zhǔn)字Z53021499。1.2、動(dòng)物SD大鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，體重230g250g。2、分組與方法動(dòng)物隨機(jī)分為空白對(duì)照組(賦形劑)，血塞通組(XST，40mg/kg)，SAL(40mg/kg)，SALA小劑量組(2.5mg/kg)，SALA中劑量組(5mg/kg)，SALA高劑量組(10mg/kg)，每組10只。禁食12小時(shí)后，各組動(dòng)物尾靜脈注射相應(yīng)藥物，15min后水合氯醛麻醉(350mg/kg，i.p.)，開腹分離下腔靜脈，于左腎靜脈下方用粗絲線結(jié)扎下腔靜脈，縫合腹部。6小時(shí)后重新開腹，在結(jié)扎處下方2cm處夾閉血管，剖開管腔，取出血栓，稱重。數(shù)據(jù)用X土s表示，并與空白對(duì)照組比較，T-Test檢驗(yàn)。3、結(jié)果結(jié)果如表所示，SALA5mg/kg、10mg/kg劑量組血栓重量明顯低于空白對(duì)照組，10mg/kg劑量組優(yōu)于SAL組。SALA對(duì)大鼠靜脈血栓形成的影響(X±s)組別血栓濕重(mg)空白對(duì)照組35.2±10.5XST組16.7±11.2**SAL組27.2±12.4*SALA高劑量組19.5±10.5**，ASALA中劑量組23.3±11.5**SALA小劑量組29.6±12.3與空白對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與SAL組比較AP<0.05。試驗(yàn)例3丹酚酸A及丹酚酸A精氨酸鹽清除自由基實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)器材Tu—1810紫外分光光度計(jì)。2.實(shí)驗(yàn)試劑還原性輔酶I(NADH)、酚嗪二甲基硫酸鹽(PMS)、四氮唑藍(lán)(NBT),l,l-二苯基-2苦基苯基(DPPH)、菲洛嗪(Ferrozine)、六氰合鐵(II)酸鉀[Potassiumhexacyanoferrate(n)]、菲咯啉，均為Sigma產(chǎn)品。無(wú)水乙醇、氯化亞鐵(FeCl24H20),三氯乙酸(TCA)、氯化鐵(FeCl36H20)、過(guò)氧化氫(&02,31%)、鉬酸銨、碘化鉀(KI)、硫代硫酸鈉(NaS203)、淀粉為分析純?cè)噭?，?gòu)于天津化學(xué)試劑廠。清除率呵1-(A1-A0)/A0]X100%3.實(shí)驗(yàn)方法3.1藥物對(duì)超氧陰離子的清除作用參考文獻(xiàn)(LiuF，OoiVEC,ChangST.Freeradicalsscavengingactivityofmushroompolysaccharideextracts[J]丄ifeSci，1997，60:763-771.)的方法檢測(cè)藥物清除超氧陰離子的能力。依次加入120plmol/LPMS、936pmol/LNADH、300nmol/LNTB溶液(用O.lmol/L的15pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液配制)各0.75mL，建立反應(yīng)體系,然后加入不同質(zhì)量濃度的藥物0.3mL,混勻，室溫靜置反應(yīng)5min。在560nm處測(cè)定Al;以超純水代替藥品，560nm處測(cè)定AO;以磷酸鹽緩沖溶液代替PMS溶液,在560nm處測(cè)定A2;超純水調(diào)零。計(jì)算超氧陰離子清除率和lC5o。3.2藥物抑制羥基自由基產(chǎn)生的能力參考Fenton反應(yīng)體系(YuWL,ZhaoYP，ShuB.TheradicalscavengingactivitiesofRadixPuemriaeisoflavonoids:Achemiluminescencestudy[J].FoodChem，2004,86:525-529)檢測(cè)藥物抑制羥基自由基產(chǎn)生的能力。用60pll.Ommol/LFeCl2，l.Ommol/L菲咯啉，2.4ml磷酸鹽緩沖溶液(pH7.8)，150pl0.17mol/LH2O2組成反應(yīng)體系，加入不同質(zhì)量濃度的藥物，混合后室溫反應(yīng)5min。在560nm測(cè)定Al，以超純水代替藥品，在560nm處測(cè)定A0;以磷酸鹽緩沖溶液代替菲咯啉溶液，在560nm處測(cè)定A2，超純水調(diào)零。計(jì)算藥物對(duì)羥基自由基產(chǎn)生的清除率及其IC5o。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果丹酚酸A及丹酚酸A精氨酸鹽清除氧自由基作用的半數(shù)抑制濃度(i^mol/L)受試物o2—OH丹酚酸A1.74±2.100.01U0.007丹酚酸A精氨酸鹽0.68±0.230.05±0.035.結(jié)論丹酚酸A精氨酸鹽對(duì)氧自由基的清除作用明顯強(qiáng)于丹酚酸A。試驗(yàn)例4本試驗(yàn)例考察了丹酚酸A及丹酚酸A精氨酸鹽對(duì)心臟缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用。按大鼠離體心臟法。缺氧再灌注組先通N2缺氧45分鐘，后恢復(fù)正常灌流30分鐘，與正常組比較，心肌丙二醛(MDA)含量增高，超氧化物歧化酶(SOD)活性下降。分別于灌流液中加丹酚酸A(20umol/L)、丹酚酸A精氨酸鹽(20umol/L)，然后進(jìn)行缺氧再灌，則二者皆表現(xiàn)為心肌MDA含量較缺氧再灌注明顯減少，丹酚酸A精氨酸鹽對(duì)SOD活性亦有所改善。說(shuō)明丹酚酸A與丹酚酸A精氨酸鹽皆對(duì)心臟缺氧再灌注損傷有保護(hù)作用，其中后者活性優(yōu)于前者。丹酚酸A及丹酚酸A精氨酸鹽對(duì)大鼠離體心臟缺氧再灌注時(shí)心肌丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性的影響組別nSOD(U/mg蛋白)MDA(nmol/g心濕重)16正常對(duì)照組835.4±1.7230±23缺氧再灌組830.6±2.6*390±55**丹酚酸A組831.3±3.7289±19##丹酚酸A精氨酸鹽組833.1±2.5#265±46##注與正常對(duì)照比P<0.05，"P<0.01;與缺氧再灌比"P〈0.05,，<0,01;試驗(yàn)例5丹酚酸A精氨酸(SALA)對(duì)小鼠急性肝損傷的治療作用研究1、材料與動(dòng)物-U、材料受試樣品丹酚酸A精氨酸(SALA)，煙臺(tái)靶點(diǎn)藥物研究有限公司提供，按實(shí)施例2制備，內(nèi)容物為橙黃色粉末，易溶于水。批號(hào)DA080102，規(guī)格100mg。丹酚酸A(SAL)，煙臺(tái)靶點(diǎn)藥物研究有限公司提供。CCU，分析純，20070822，天津市天大化工實(shí)驗(yàn)廠。橄欖油，特級(jí)初搾，060215，西班牙MORENO公司。生理鹽水，0.9%,070206，山東科倫藥業(yè)有限公司。ALT試劑盒，AST試劑盒，070311，中生北控。酶標(biāo)儀，VarioskanFlash,ThermoELECTRONCORPORATION。1.2、動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，體重18-22g。2、分組與方法動(dòng)物隨機(jī)分為正常對(duì)照組(生理鹽水)，模型組(生理鹽水)，空白對(duì)照組(賦形劑)，SAL組(40mg/kg)，SALA小劑量組(2.5mg/kg)，SALA中劑量組(5mg/kg)，SALA高劑量組(10mg/kg)，各組小鼠連續(xù)尾靜脈注射給藥3天，第2天給藥后30min，除正常組腹腔注射等容量花生油外，各組小鼠均腹腔注射0.1%四氯化碳橄欖油溶液0.1ml/10g，禁食不禁水過(guò)夜。第3天給藥后30min，即造模24h后，小鼠眼球取血，3000r/min、4度離心10min，取血清，酶標(biāo)儀測(cè)定血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)含量；取血完畢后，立即脫臼處死小鼠，摘取肝臟并稱重，計(jì)算肝臟重量指數(shù)。肝指數(shù)=肝臟重量/體重X100%3、結(jié)果結(jié)果如表所示，與模型組及空白對(duì)照組比較，SALA2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg17劑量可使升高的AST、ALT水平明顯降低，5mg/kg、10mg/kg劑量組優(yōu)于SAL組；SALA5mg/kg、Wmg/kg劑量還可使肝臟重量指數(shù)降低。SALA對(duì)CCL4誘導(dǎo)肝損傷小鼠血清AST、ALT活性及肝臟重量指數(shù)的影響(X±s)組別齊糧(mg/kg)AST(U/L)ALT(U/L)肝指數(shù)(mg/g)正常對(duì)照組—101.2±21.836.2±4.831.2±6.8模型組—212.3±18.9189.3±8.957.3±6.9空白對(duì)照組—201,9±19.5181.9±9.555.2±5.5SAL組40181.2±22,4*142.2±7.4**48.2±5.4*SALA高劑量組10149.5±20.5**，A113.5±7.5**,AA40.5±7.5**SALA中劑量組5163,3±21.5**133,3±5.5**,A46.3±6.5*SALA小劑量組2.5179.2±19.3*152.2±8.3*50.2±7.3與空白對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與SAL組比較AP<0.05,AAP<0.01試驗(yàn)例6本試驗(yàn)例考察了丹酚酸A及丹酚酸A精氨酸鹽對(duì)腎組織氧化損傷的保護(hù)作用。丹酚酸A、丹酚酸A精氨酸鹽對(duì)維生素C一還原型輔酶II系統(tǒng)(NADPH)和半胱氨酸F^+系統(tǒng)誘發(fā)的大鼠腎微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化有明顯抑制作用，后者活性是前者的10倍，結(jié)果見下表。丹酚酸A及丹酚酸A精氨酸鹽對(duì)大鼠腎微粒體丙二醛生成的影響藥物濃度MDA(nmol/mg蛋白)(mol/L)維生素C一還原型輔酶II系統(tǒng)半胱氨酸F^+系統(tǒng)對(duì)照3.63±0.335.28±0.1810—50.17±0.13**2.28±0.15**丹酚酸A10—60.71±0.17**4.28±0.16*10—72.11士1.10'5.18±0.1810—60.15±0.14**2.18±0.17**丹酚酸A精氨酸鹽l(T70.58±0.19**4.03士0.14"10_81.91±1.11*5.09±0.16與空白對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.0118試驗(yàn)例7丹酚酸A及丹酚酸A精氨酸鹽對(duì)大鼠局部腦缺血損傷的影響。1.分組與實(shí)驗(yàn)方法Wistar大鼠隨機(jī)分為(l)假手術(shù)組(等容量溶劑)，(2)模型對(duì)照組(等容量溶劑)，(3)丹酚酸A組(6mg/kg，iv)，(4)丹酚酸A精氨酸鹽低劑量組(3mg/kg，iv);(5)丹酚酸A精氨酸鹽中劑量組(6mg/kg，iv);(6)丹酚酸A精氨酸鹽高劑量組(12mg/kg，iv)。每組10只。禁食12小時(shí)后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，夾閉頸內(nèi)、頸總動(dòng)脈，頸外動(dòng)脈近心端及遠(yuǎn)心端結(jié)扎，中間剪斷。將頸外動(dòng)脈游離端拉至與頸內(nèi)動(dòng)脈成一條直線，將栓線(選用直徑0.24mm尼龍線，長(zhǎng)度5.0cm)由頸外動(dòng)脈插入至顱內(nèi)，遇輕微阻力時(shí)停止，插入深度約為2cm。結(jié)扎頸外動(dòng)脈開口，并打開頸總動(dòng)脈動(dòng)脈夾，消毒縫合傷口，造成左側(cè)大腦中動(dòng)脈缺血模型；假手術(shù)組僅進(jìn)行右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈的分離(以上實(shí)驗(yàn)均在23。C25'C進(jìn)行)。術(shù)后各組動(dòng)物靜脈注射相應(yīng)藥物。24小時(shí)后按文獻(xiàn)劉小光，徐理納，一種能評(píng)價(jià)溶栓和抗溶栓的大鼠腦中動(dòng)脈模型，藥學(xué)學(xué)報(bào)，1995，30:662所述方法及標(biāo)準(zhǔn)觀察并記錄大鼠的行為障礙(A)提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對(duì)稱伸向地面，計(jì)為0分，如手術(shù)對(duì)側(cè)前肢出現(xiàn)腕屈曲計(jì)為1分，肘屈曲計(jì)為2分，肩內(nèi)旋計(jì)為3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩內(nèi)旋者，計(jì)為4分。(B)將動(dòng)物置于平地面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動(dòng)，檢查阻力。如雙側(cè)阻力對(duì)等且有力，計(jì)為0分，如向手術(shù)對(duì)側(cè)推動(dòng)時(shí)阻力下降者，根據(jù)下降程度不同分為輕、中、重三度，分別計(jì)為l，2和3分。(C)將動(dòng)物雙前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢肌張力對(duì)等且有力者計(jì)為O分。同樣根據(jù)手術(shù)對(duì)側(cè)肌張力下降程度不同計(jì)為1，2和3分。(D)動(dòng)物有不停地向一側(cè)轉(zhuǎn)圈者，計(jì)為1分。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，滿分為11分，分?jǐn)?shù)越高，表示動(dòng)物行為障礙越嚴(yán)重。行為評(píng)分后處死大鼠，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，冠狀切成5片，腦片用紅四氮唑(TTC)染色，正常組織經(jīng)染色后呈紅色，梗塞組織呈白色，染色后照相，用中國(guó)航空航天大學(xué)病理圖像分析軟件求梗塞面積比。并測(cè)腦皮層MDA含量。數(shù)據(jù)用7士s表示，以組間f檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2.結(jié)果如表所示，缺血24小時(shí)后，大鼠表現(xiàn)出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到全腦的25%左右；給予不同劑量的精氨酸丹酚酸A，動(dòng)物行為障礙有不同程度的減輕，大鼠腦缺血區(qū)也有明顯好轉(zhuǎn)，且呈劑量依賴性。與丹酚酸A組相比有顯著性差異。詳見下表。精氨酸丹酚酸A對(duì)大鼠局部腦缺血損傷的影響(n=10，I±S)組別行為障礙缺血面積(％)MDA(nmol/g濕重)假手術(shù)組模型對(duì)照組丹酚酸A組丹酚酸A精氨酸鹽組3mg/kg6mg/kg12mg/kg09.02±1.648.91±1.247.33±3.08*5.79±1.284.45±1.27**糾024.09±4.4223.11±2.7020.67±2.66*16.11±3.5810.12±3.673.55±1.128.79士1.055.29士0.14'4.68士0.34'3.27±0.19**#2.28±0.10注與模型對(duì)照組比較'P<0.05，><0.01，與丹酚酸A組比較^<0.05,#*P<0.01。試驗(yàn)例8對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞釋放NO的抑制活性實(shí)驗(yàn)方法1.實(shí)驗(yàn)材料小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW264.7RPMI1640培養(yǎng)液胎牛血清胰蛋白酶噻唑蘭脂多糖(LPS)臺(tái)盼藍(lán)萘乙二胺鹽酸鹽磺胺磷酸2.實(shí)驗(yàn)主要儀器3111型二氧化碳培養(yǎng)箱超低溫冰箱VarioskanFlash酶標(biāo)儀3K15臺(tái)式高速低溫離心機(jī)CKX41組織培養(yǎng)用顯微鏡Milli-Q超純水GenMedScientificsInc.USAMDgenicsInc.碧云天生物技術(shù)研究所AmrescoInc.AmrescoIncSigmaInc,SigmaInc.國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司天津天大化學(xué)試劑廠美國(guó)熱電Thermo公司美國(guó)熱電Thermo公司美國(guó)熱電Thermo公司德國(guó)Sigma公司日本奧林巴斯公司美國(guó)Millipore公司3.實(shí)驗(yàn)方法RAW264.7細(xì)胞(小鼠巨噬細(xì)胞)用RPMI1640培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)，細(xì)胞長(zhǎng)滿后，用移液管回收于50ml離心管中離心(4。C，1000rpm，3min),棄去上清液，20加入10ml新的培養(yǎng)基使細(xì)胞懸浮，調(diào)整細(xì)胞濃度為5xl()Scells/ml,將細(xì)胞懸浮液加入到96孔培養(yǎng)板中(200pl/孔)，放入C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)1小時(shí)，加入LPS(100嗎/ml)2pl(終濃度1pg/ml),加入樣品溶液(DMSO溶解)0.4pl，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)后，取上清液100pl，加入0.1%萘乙二胺鹽酸鹽和1%磺胺磷酸各5(^1，放置10min，在540nm測(cè)定吸光度值，計(jì)算NO產(chǎn)生量和抑制率。剩下的100^1細(xì)胞，加入8plMTT，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，計(jì)算細(xì)胞存活率。NO抑制活性結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>試驗(yàn)例9丹酚酸A精氨酸鹽的血管刺激性。取健康家兔6只，隨機(jī)分成2組，每組3只。第一組每日一側(cè)耳緣靜脈緩慢注射濃度為0.375mg/ml的丹酚酸A精氨酸鹽3.33ml/kg,第二組同法注射氯化鈉注射液，連續(xù)3日。于注射完后24小時(shí)，肉眼觀察兔耳靜脈有無(wú)刺激反應(yīng)，并將動(dòng)物放血處死，剪下耳緣，對(duì)耳緣血管作病理切片檢査，觀察組織變性或壞死等明顯刺激反應(yīng)。試驗(yàn)結(jié)果表明，肉眼觀察注射部位血管均未見明顯充血水腫等刺激反應(yīng)現(xiàn)象，病理切片觀察結(jié)果丹酚酸A精氨酸鹽組與氯化鈉注射液對(duì)照組相似，耳廓皮膚的表皮和真皮結(jié)構(gòu)完好，未見變性、壞死、缺失及過(guò)度角化，耳緣靜脈未見擴(kuò)張充血、未見血栓形成，周圍組織未見出血、水腫。權(quán)利要求1、一種丹酚酸A堿性氨基酸鹽，結(jié)構(gòu)通式如下R＝賴氨酸、組氨酸、精氨酸2、根據(jù)權(quán)利要求1中所述的丹酚酸A堿性氨基酸鹽，其特征在于堿性氨基酸是賴氨酸、組氨酸、精氨酸。3、根據(jù)權(quán)利要求l中所述的丹酚酸A堿性氨基酸鹽，其特征在于堿性氨基酸是L一精氨酸。4、一種丹酚酸A堿性氨基酸鹽的制備方法，包括以下步驟取堿性氨基酸，加適量水溶解，取丹酚酸A無(wú)水乙醇溶解或加水混懸，將兩種溶液混合，充分?jǐn)嚢枋钩吻澹Ｒ?guī)減壓常溫回收溶劑或冷凍干燥得到。5、根據(jù)權(quán)利要求4中所述的丹酚酸A堿性氨基酸鹽的制備方法，其特征在于丹酚酸A與堿性氨基酸的摩爾比為1:0.9-10.0。6、根據(jù)權(quán)利要求4中所述的丹酚酸A堿性氨基酸鹽的制備方法，其特征在于丹酚酸A與堿性氨基酸優(yōu)選的摩爾比為1:0.9-1.2。7、根據(jù)權(quán)利要求4中所述的丹酚酸A堿性氨基酸鹽的制備方法，其特征在于丹酚酸A與堿性氨基酸優(yōu)選的摩爾比為1:1。8、一種凍干粉針組合物，包括丹酚酸A堿性氨基酸鹽、抗氧劑、賦型劑。9、根據(jù)權(quán)利要求7中所述的凍千粉針組合物，其特征在于抗氧劑是亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、、硫代硫酸氫鈉或維生素c中的一種或幾種。10、根據(jù)權(quán)利要求7中所述的凍干粉針組合物，其特征在于抗氧劑是亞硫酸氫鈉。11、權(quán)利要求l、2、3中的任一項(xiàng)藥物組合物在制備治療血栓性疾病、氧化損傷性疾病、一氧化氮生成過(guò)量所致疾病治療藥物的用途。全文摘要本發(fā)明公開了一種丹酚酸A氨基酸鹽、丹酚酸A氨基酸鹽制備方法、一種包含丹酚酸A氨基酸鹽的凍干粉針組合物及其在制備血栓性疾病、氧化損傷性疾病、一氧化氮生成過(guò)量所致疾病治療藥物的用途。本發(fā)明提供的丹酚酸A氨基酸鹽在水溶液中穩(wěn)定性強(qiáng)、溶解度高、不易被氧化；丹酚酸A氨基酸鹽的制備方法工藝性好、操作簡(jiǎn)單；含丹酚酸A氨基酸鹽的凍干粉針組合物穩(wěn)定性好、均勻度高、符合藥品復(fù)水性要求；本發(fā)明中提供的丹參酚酸A氨基酸鹽可用于制備血栓性疾病、氧化損傷性疾病、一氧化氮生成過(guò)量所致疾病治療藥物。文檔編號(hào)A61K9/19GK101497570SQ20081001451公開日2009年8月5日申請(qǐng)日期2008年1月31日優(yōu)先權(quán)日2008年1月31日發(fā)明者何克江,珂劉,劉軍鋒,孫傳厚,柳全文,翟大偉,卉許,烽趙,萌邵申請(qǐng)人:煙臺(tái)靶點(diǎn)藥物研究有限公司