專利名稱：：一種丹酚酸a磷脂復(fù)合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，確切地說涉及一種丹酚酸A磷脂復(fù)合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：丹酚酸A(SalvianolicacidA)是存在于唇形科植物丹參(S"/Wam!7"wrWzflBge.)中的一種酚酸類化合物。其化學(xué)結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)如下該化合物的結(jié)構(gòu)及波譜數(shù)據(jù)在臺灣學(xué)者發(fā)表的文獻(xiàn)中有報道Yun-LianLinetal.BenzolignanoidandPolyphenolsfromOriganumvulgare.JournaloftheChineseChemicalSociety,2003,50,1079-1083。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所報道了丹A具有抗血栓、抗凝、改善血液循環(huán)、抗氧化損傷以及改善學(xué)習(xí)記憶的作用中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所.中草藥現(xiàn)代研究.北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社。中國專利02125424.9報道了從丹參中分離丹酚酸A的方法，中國專利200610012615.1首次報道了丹參提取物經(jīng)高溫高壓反應(yīng)轉(zhuǎn)化得到大量丹酚酸A的方法。但由于丹酚酸A本身水溶性和脂溶性均較差，致使常規(guī)劑型如片劑、膠囊劑等在消化道中分散性差，吸收存在問題，導(dǎo)致生物利用度不高，影響丹酚酸A本身的藥效作用，也限制了丹酚酸A在臨床上的使用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種丹酚酸A磷脂復(fù)合物，以改善丹酚酸A的生物利用度。本發(fā)明的另一目的是提供一種上述丹酚酸A磷脂復(fù)合物的工業(yè)化制備方法。本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下一種丹酚酸A磷脂復(fù)合物，由丹酚酸A與磷脂復(fù)合而成，其中丹酚酸A與磷脂的質(zhì)量比為l:0.5~10，優(yōu)選為l:1~2。所述磷脂是天然磷脂和/或合成磷脂。天然磷脂選自大豆卵磷脂和/或蛋黃卵磷脂；合成磷脂選自二棕櫚酰磷脂酰膽堿和/或二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺。丹酚酸A磷脂復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟(1)取丹酚酸A及相應(yīng)量的磷脂溶于脂溶性溶劑中；(2)于306CTC下攪拌至澄清，反應(yīng)0.5—2小時；(3)306(TC下以真空旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器回收溶劑，得黃色粉末狀固體物質(zhì)，即為丹酚酸A磷脂復(fù)合物。其中步驟1所述脂溶性溶劑是指四氫呋喃、乙酸乙酯、丙酮、無水乙醇或甲醇，優(yōu)選為無水乙醇。磷脂復(fù)合物的制備要求在非質(zhì)子性傳遞溶劑中進(jìn)行，同時要求該溶劑對藥物有一定的溶解度，否則會影響復(fù)合物的形成。因此對于一個特定的化合物來講，并不是所有的非質(zhì)子性溶劑均能用于磷脂復(fù)合物的制備。經(jīng)實驗，四氫呋喃、正己烷、乙酸乙酯、丙酮、無水乙醇、甲醇可滿足上述要求，出于工業(yè)生產(chǎn)成本及安全性的考慮，以無水乙醇為最佳反應(yīng)介質(zhì)。復(fù)合物的制備需一定的溫度，但溫度過高會影響磷脂的穩(wěn)定性，因此反應(yīng)溫度定于30~60°C。丹酚酸A室溫下在三氯甲垸中的溶解度較差，而與磷脂形成復(fù)合物后在三氯甲烷中的溶解度很好，因此可利用此特點來測定丹酚酸A與磷脂的結(jié)合率。具體方法如下，丹酚酸A與卵磷脂按一定重量比例，置溶劑中攪拌反應(yīng)，保持0.5~2小時，常規(guī)減壓回收溶劑，反應(yīng)物中加三氯甲烷，過濾，不溶物稱重，計算結(jié)合率。結(jié)合率計算公式艦酸A與磷脂的結(jié)合率=丹隨？J重i::f爐量xi駆丹酚酸A投料重量試驗表明，在丹酚酸A與卵磷脂重量低于1:0.5時，結(jié)合率較低，1:l時，結(jié)合率可達(dá)95%以上，大于l:2時，結(jié)合率達(dá)100%?？紤]到制備方法的經(jīng)濟性和卵磷脂的藥物服用量，當(dāng)?shù)し铀酇與卵磷脂重量比為1:0.5~10時，已能達(dá)到本發(fā)明的效果，不必制備更高比例的磷脂復(fù)合物。本發(fā)明所得的磷脂復(fù)合物在硅膠薄層層析及顯示與丹酚酸A相同的Rf值，液相色譜出峰時間相同，說明未形成新的化合物。該復(fù)合物在差熱分析(DSC)、紅外光譜(IR)及氫核磁共振。H—NMR)中與丹酚酸A與磷脂的物理混合物均存在明顯的差別。這說明丹酚酸A磷脂復(fù)合物雖然不是新生成的化合物，但也不完全同于二者的簡單的混合，而是以一種復(fù)合物的形式存在。大鼠體內(nèi)試驗表明復(fù)合物比丹酚酸A單體大提高了生物利用度。取大鼠隨機分組，禁食12h后分別用丹酚酸A復(fù)合物及丹酚酸A灌胃。分別于給藥前及給藥后15min、30min、45min、lh、2h、3h、5h、7h、9h、llh大鼠眼眶取血，每次眼眶取血300ul(試驗期間正常給食、水)于1.5ml肝素處理過的EP管中，置冰盒里，大約在lh內(nèi)處理出來。將樣品檢測得結(jié)果，經(jīng)3p97軟件處理，得AUC值及相關(guān)參數(shù)，各組分別計算平均值，經(jīng)比較，丹酚酸A復(fù)合物組的生物利用度明顯高于丹酚酸A組，說明丹酚酸A磷脂復(fù)合物確實能夠促進(jìn)丹酚酸A在大鼠體內(nèi)的吸收。圖1為丹酚酸A磷脂復(fù)合物與混合物的薄層層析結(jié)果比較(自左至右a、丹酚酸A;b、丹酚酸A磷脂復(fù)合物；C、丹酚酸A與磷脂的物理混合物)；圖2為丹酚酸A磷脂復(fù)合物與丹酚酸A的液相色譜圖3為丹酚酸A磷脂復(fù)合物差熱分析圖譜；圖4為丹酚酸A與磯脂物理混合物的差熱分析圖譜；圖5為大豆卵磷脂的差熱分析圖譜；圖6為丹酚酸A的差熱分析圖譜；圖7為丹酚酸A磷脂復(fù)合物的紅外譜圖8為丹酚酸A的紅外譜圖9為大豆卵磷脂的紅外譜圖10為丹酚酸A磷脂復(fù)合物的氫譜；圖11為丹酚酸A的氫譜；圖12為丹酚酸A與磷脂物理混合物的氫譜；圖13為大豆卵磷脂的氫譜。具體實施例方式5取丹酚酸A49.4g，溶于500ml無水乙醇中，得黃色澄明液體，加入49.4g大豆卵磷脂，于4(TC下攪拌反應(yīng)直至溶液澄清，保持2小時。5(TC下常規(guī)減壓回收無水乙醇至干，即得丹酚酸A磷脂復(fù)合物，計95.1g。將丹酚酸A磷脂復(fù)合物、丹酚酸A與磷脂的物理混合物、丹酚酸A和卵磷脂點于同一硅膠薄層板上(煙臺化工研究所，DF254,2.5xl0cm)，以氯仿乙酸乙酯甲苯甲酸甲醇(1.5:2:1:1:0.1)展開系統(tǒng)展開，在三用紫外分析儀(254nm)下檢視，其薄層色譜圖如圖1所示。結(jié)果表明，丹酚酸A磷脂復(fù)合物、丹酚酸A與磷脂的物理混合物、丹酚酸A的Rf值均一致，這說明磷脂與丹酚酸A形成的是一種復(fù)合物，而不是新化合物。將100mg丹酚酸A磷脂復(fù)合物及50mg丹酚酸A溶于同一甲醇溶液中，用流動相稀釋成每lml含0.04mg丹酚酸A的溶液，取上述溶液20W，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。圖譜僅9.9分鐘丹酚酸A—個色譜峰(圖2)，表明磷脂與丹酚酸A未形成新化合物。色譜柱DiscoveryC18柱(4.6x250mm，5p);流動相乙腈-0.2%磷酸水(30:70)，檢測波長285nm，流速lml/min，柱溫30°C。使用梅特勒差熱分析儀，以A1203為參比物，升溫速度1(TC/min，掃描范圍30—350。C，N2流速0.2ml/min，分別稱取丹酚酸A、丹酚酸A磷脂復(fù)合物、丹酚酸A磷脂混合物、大豆卵磷脂進(jìn)行差熱分析。結(jié)果見圖3圖6。從圖譜上可以看到丹酚酸A磷脂復(fù)合物的吸收曲線即不同于丹酚酸A、大豆卵磷月旨，也不同于丹酚酸A磷脂混合物，證明形成了磷脂復(fù)合物。對丹酚酸A、丹酚酸A磷脂復(fù)合物、丹酚酸A磷脂混合物、大豆卵磷脂進(jìn)行紅外掃描，結(jié)果見圖7圖10。從圖譜中明顯可以看出丹酚酸A磷脂復(fù)合物紅外光譜不同于丹酚酸A磷脂物理混合物的光譜，這說明所制備的丹酚酸A磷脂復(fù)合物不同于二者的簡單混合，而是以一種復(fù)合物的形式存在。以氘代甲醇為溶劑，對對丹酚酸A、丹酚酸A磷脂復(fù)合物、丹酚酸A磷脂混合物、大豆卵磷脂進(jìn)行核磁共振分析(400MHz)，圖譜見圖ll一圖14，丹酚酸A磷脂復(fù)合物所出現(xiàn)的峰為丹酚酸A與磷脂的加合，表明未形成新化合物。實施例2取丹酚酸A49.4g，溶于500ml甲醇中，得黃色澄明液體，加入24.7g大豆6卵磷脂，于3(TC下攪拌反應(yīng)直至溶液澄清，保持2小時。6(TC下真空旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器回收甲醇至干，即得丹酚酸A磷脂復(fù)合物，計76.4g。實施例3取丹酚酸A49.4g，溶于1000ml乙酸乙酯中，得黃色澄明液體，加入98.8g蛋黃卵磷脂，于4(TC下攪拌反應(yīng)直至溶液澄清，保持2小時。5(TC下真空旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器回收乙酸乙酯至干，即得丹酚酸A磷脂復(fù)合物，計145.4g。實施例4取丹酚酸A49.4g，溶于500ml無水乙醇中，得黃色澄明液體，加入494g二棕櫚酰磷脂酰膽堿，于5(TC下攪拌反應(yīng)直至溶液澄清，保持0.5小時。6(TC下真空旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器回收乙醇至干，即得丹酚酸A磷脂復(fù)合物，計537.8g。試驗例l本試驗例考察了丹酚酸A磷脂復(fù)合物生物利用度1.材料與動物丹酚酸A復(fù)合物(根據(jù)實施例1制備)丹酚酸A:由煙臺靶點藥物研究有限公司天然藥物化學(xué)研究室提供，純度大于96%(高效液相色譜)SD大鼠雌雄各半(重量為200g-220g)2.方法內(nèi)標(biāo)溶液的制備精密稱取水楊酸7.7mg,置25ml量瓶中，加色譜甲醇定容至刻度，搖勻，即得。取SD大鼠12只，隨機分為3組，每組雌雄各兩只?？瞻捉M(生理鹽水)、丹酚酸A復(fù)合物組(i.g.32mg/kg，以丹酚酸A計)、丹酚酸A組(i,g.32mg/kg)。灌胃給藥，給藥前禁食12h。分別于給藥前及給藥后15min、30min、45min、lh、2h、3h、5h、7h、9h、llh大鼠眼眶取血，每次眼眶取血300^1(試驗期間正常給食、水)于1.5ml肝素處理過的EP管中，置冰盒里，大約在lh內(nèi)處理出來。處理過程如下4000r/min離心lOmin(4°C)，取上層血漿100pl，加內(nèi)標(biāo)水楊酸-甲醇溶液(7.7mg/25ml)10^1，渦旋30s——加0.5mol/L的鹽酸溶液25^il，渦旋30s——加乙腈400pi,渦旋2min——8000r/min離心lOmin——取上清450^1，置1.5mlEP管中，3(TC水浴氮氣吹干，加200pl流動相溶解殘渣——8000r/min離心4min，取上清20W，進(jìn)樣檢測。D-A標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取丹酚酸A標(biāo)準(zhǔn)品109.2mg，置25ml量瓶中，加流動相溶解，并稀釋至刻度，作為母液。精密移取0.025ml，0.05ml，O.lml，0.5ml，2,5ml，5ml置10ml量瓶中，加流動相至刻度，分別為l弁，2#，3#，4#，5#，6#，7#，母液為8#。取大鼠空白血槳100^8份，分別加入上述D-A系列標(biāo)準(zhǔn)溶液10ul，渦旋混勻，照上述血漿樣品處理方法進(jìn)行處理。色譜條件Agilent1200高效液相色譜儀，廣州菲羅門色譜柱(250*4.6mm5p)，流動相乙腈-0.2%磷酸水(30:70)，檢測波長285腦，流速lml/min，柱溫30。C3.結(jié)果以D-A血藥濃度(pg/ml)為橫坐標(biāo)，以D-A峰面積與水楊酸峰面積比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得線性方程y=0.1582x-0.418r=0.9996將樣品檢測得結(jié)果，經(jīng)3p97軟件處理，得AUC值及相關(guān)參數(shù)，各組分別計算平均值，經(jīng)比較，丹酚酸A復(fù)合物組的生物利用度明顯高于丹酚酸A組。詳見下表。兩種藥物生物利用度參數(shù)比較<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>4.結(jié)論丹酚酸A復(fù)合物與丹酚酸A比較，相對生物利用度FQ/。為186.15%。丹酚酸A復(fù)合物的生物利用度是丹酚酸A的1.8倍，峰濃度約為3倍。因此丹酚酸A復(fù)合物與丹酚酸A比較，顯著得提高了口服給藥的生物利用度。以下文字移自說明書附7、圖8和圖9:圖7星期五12月2115:17:022007(GMT+08:00)標(biāo)峰譜圖星期五12月2114:57:472007范圍4000.00400.00(絕對)閾值:35.519靈敏度50峰表峰位置:510.48強度:24.625峰位置586.76強度26.094峰位置723.16強度24.753峰位置811.80強度14.130峰位置868.18強度23.426峰位置970.54強度7.316峰位置1060.15強度3.264(GMT+08:00)DFA-PC071217圖8,期四標(biāo)峰12月2016:16:012007(GMT+08:00)譜圖星期四12月2016:14:372007范圍4000.00400.00(絕對)閾值:51.032靈敏度50峰表-峰位置:483.07強度:42.840峰位置586.61強度42.588峰位置807.46強度38.106峰位置863.63強度46.412峰位置969.16強度37.095峰位置1040.96強度36.353峰位置1070.48強度38.081(GMT+08:00)DFA071212王磊圖9星期五12月2114:55:552007標(biāo)峰(GMT+08:00)譜圖范圍(絕對)靈敏度峰表閾值:星期五12月2114:49:3820074000.00400.0071.498(GMT+08:00)卵磷脂類50峰位置:506.31強度:63.598峰位置578.29強度64.876峰位置722.39強度54.427峰位置821.10強度59.526峰位置873.62強度67.579峰位置923.09強度62.186峰位置968.61強度40.36權(quán)利要求1、一種丹酚酸A磷脂復(fù)合物，由丹酚酸A與磷脂復(fù)合而成，其中丹酚酸A與磷脂的質(zhì)量比為10.5～10。2、如權(quán)利要求1所述的丹酚酸A磷脂復(fù)合物，其特征在于丹酚酸A與磷脂的質(zhì)量比為1:1~2。3、如權(quán)利要求1或2所述丹酚酸A磷脂復(fù)合物，其特征在于所述磷脂是天然磷脂和/或合成磷脂。4、如權(quán)利要求3所述的丹酚酸A磷脂復(fù)合物，其特征在于天然磷脂選自大豆卵磷脂和/或蛋黃卵磷脂；合成磷脂選自二棕櫚酰磷脂酰膽堿和/或二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺。5、權(quán)利要求l或2所述丹酚酸A磷脂復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟(1)取丹酚酸A及相應(yīng)量的磷脂溶于脂溶性溶劑中；(2)于3060'C下攪拌至澄清，反應(yīng)0.5—2小時；(3)3060'C下以真空旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器回收溶劑，得黃色粉末狀固體物質(zhì)，即為丹酚酸A磷脂復(fù)合物。6、如權(quán)利要求5所述丹酚酸A磷脂復(fù)合物的制備方法，其特征在于步驟1所述脂溶性溶劑是指四氫呋喃、乙酸乙酯、丙酮、無水乙醇或甲醇。7、如權(quán)利要求6所述丹酚酸A磷脂復(fù)合物的制備方法，其特征在于所述脂溶性溶劑優(yōu)選為無水乙醇。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
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，公開了一種丹酚酸A磷脂復(fù)合物，由丹酚酸A與磷脂復(fù)合而成，其中丹酚酸A與磷脂的質(zhì)量比為1∶0.5-10，優(yōu)選為1∶1-2。本發(fā)明還公開了丹酚酸A磷脂復(fù)合物的制備方法，利用本方法得到的丹酚酸A磷脂復(fù)合物可有效提高丹酚酸A的生物利用度。文檔編號A61P7/00GK101496797SQ20081001451公開日2009年8月5日申請日期2008年1月31日優(yōu)先權(quán)日2008年1月31日發(fā)明者傅瑩瑩,珂劉,劉軍鋒,卉許申請人:煙臺靶點藥物研究有限公司