專利名稱：：血清淀粉樣蛋白a基因在診斷和治療青光眼以及在鑒定抗青光眼物質(zhì)中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及診斷和治療青光眼的領(lǐng)域。更特別地，本發(fā)明提供了用于診斷和治療青光眼的方法和組合物，以及鑒定潛在用于治療青光眼的物質(zhì)的方法和組合物。2.相關(guān)文獻的描述有許多通過碎見神經(jīng)乳頭損傷、眼組織變性和/或眼內(nèi)壓升高引起或惡化的眼的疾病。例如，"青光眼"是一組虛弱性眼病，是美國和其他發(fā)達國家中不可逆失明的主要原因。原發(fā)性開角型青光眼("POAG")是青光眼的最常見形式。該病的特征為小梁網(wǎng)變性，導(dǎo)致房水離開眼的正常能力受到阻礙而不閉合虹膜和角膜之間的間隙(例如"角")(Vaughan，D.等人，(1992))。在這種疾病中此種阻礙的特征為眼內(nèi)壓("IOP")升高，如果不進行適當?shù)暮图皶r的治療，就會導(dǎo)致進行性視力喪失和失明。該疾病估計影響40歲以上所有成年人的0.4%到3.3。/。(Leske，M.C.等人，(1986);Bengtsson,B.(1989);Strong,N.P.(1992))。此外，該病的患病率隨年齡升高，75歲或75歲以上的人患病率在6。/o以上(Strong,N.P.，(1992))。青光眼影響眼中的三種單獨組織。與POAG相關(guān)的IOP升高是由于小梁網(wǎng)(TM)的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)的變化，所述小梁網(wǎng)是位于角膜和虹膜之間的角的組織。大部分營養(yǎng)性房水通過TM離開眼前段。青光眼的TM細胞的進行性喪失和TM細胞中細胞外碎片的積累導(dǎo)致房水流出的阻力增加，因此升高IOP。升高的IOP，以及其他因素諸如局部缺血，引起視神經(jīng)乳頭(ONH)的變性改變，導(dǎo)致ONH的進行性"杯狀(cupping)"和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞和軸突的喪失。造成TM、ONH和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的青光眼損傷的詳細分子機制是未知的。二十年前，對眼高壓、局部缺血和視神經(jīng)乳頭的機械扭曲的相互作用作為引起青光眼中視力喪失的主要因素進行了激烈辨論。自此以后，其他因素，包括興奮性神經(jīng)毒性、氧化一氮、重要神經(jīng)營養(yǎng)因子的缺乏、異常的神經(jīng)R^/神經(jīng)元相互作用和遺傳牽涉在變性性疾病的過程中。由于分子遺傳學(xué)可以最終定義細胞死亡的機制和提供多種形式青光眼的區(qū)別，所以對分子遺傳學(xué)的考慮值得討論。過去10年中，已經(jīng)對15種以上的青光眼基因進行了作圖并鑒定了7種青光眼基因。這包括原發(fā)性開角型青光眼的6種作圖的基因(G丄CL4-GXC7F)和兩種鑒定的基因(MI^C和OP77V)、先天性青光眼的兩種作圖的基因(G丄CX4-G丄CJ5)和一種鑒定的基因(OT/^0、色素^性/色素性青光眼的兩種作圖的基因和青光眼的發(fā)育或綜合征形式的許多基因(FOAT/、尸/7X2、ZJWA7B、iMX6)。因此，每種形式的青光眼可以具有獨特的病理學(xué)，因此可能需要疾病處理的不同治療方法。例如，影響降解視神經(jīng)乳頭的細胞外基質(zhì)的酶的表達的藥物不可能防止興奮性神經(jīng)毒性引起的RGC死亡。在青光眼中，通過稱為編程性細胞死亡(編程性細胞死亡)的過程發(fā)生RGC死亡。推測可以引起死亡的不同類型損傷可以通過匯聚幾種共同途徑發(fā)生編程性細胞死亡。靶向共同途徑的下游區(qū)是可以擴大藥物的實用性和增加藥物在處理不同形式疾病中的效用的可能性的策略。然而，影響多種代謝途徑的藥物更可能產(chǎn)生不希望的副作用。隨著用于鑒定青光眼的特定形式的基于基因的診斷試劑盒的出現(xiàn)，可以檢測選擇性神經(jīng)保護物質(zhì)以期降低有關(guān)測定的反應(yīng)的變化程度。當前青光眼的診斷基于疾病的特定癥狀(特征性的視神經(jīng)乳頭變化和視力喪失)。然而，半數(shù)以上的青光眼患者不知道他們患有此種失明疾病，到診斷他們患此種疾病時，他們已經(jīng)不可逆地喪失了他們的大約30-50%的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞。因此，需要早期診斷青光眼的改進方法。當前青光眼的治療針對降低IOP，所述IOP是青光眼發(fā)生和惡化的主要危險因素。然而，當前的IOP降低療法沒有一種實際上干擾負責(zé)升高的IOP的疾病過程并且對前段的進行性損傷繼續(xù)進行。這就是為什么多數(shù)患者"抵抗"常規(guī)青光眼治療的一個可能的原因。因此，需要改變(通過抑制或甚至逆轉(zhuǎn))該疾病過程的治療方法。發(fā)明概述本發(fā)明通過提供診斷青光眼的方法和治療青光眼的組合物，克服了現(xiàn)有技術(shù)的這些和其他缺點。一方面，本發(fā)明提供了通過向需要治療的患者施用治療有效量的組合物治療青光眼的方法，所述組合物包含與編碼血清淀粉樣蛋白A蛋白(SAA)的基因，或與該基因的啟動子序列相互作用的物質(zhì)。該物質(zhì)與編碼SAA的基因，或與它的啟動子序列之間的相互作用調(diào)節(jié)SAA的表達，使患者的青光眼狀況得到治療。在優(yōu)選的實施方案中，物質(zhì)將為蛋白質(zhì)、肽、肽模擬物(peptidomimetic)、小分子或核酸。另一方面，本發(fā)明提供了通過向需要治療的患者施用治療有效量的組合物治療青光眼的方法，所述組合物包含抑制血清淀粉樣蛋白A蛋白(SAA)與它的受體相互作用的物質(zhì)。優(yōu)選地，該物質(zhì)將為過氧化物酶體增殖物激活受體a(PPARa)激動劑、速激肽和它們的非肽類似物或a-硫辛酸。最優(yōu)選地，物質(zhì)應(yīng)為非諾貝特、Wy-14643、(4-氯-6-(2，3-二甲代苯^J")-2-嘧吱基^<羥)-乙酸)、環(huán)丙貝特、2-溴代十六烷酸、必降脂和環(huán)格列酮(ciglitizone)、batlloinycin、concanamycin或pseudolaricacidB。本發(fā)明還提供了用于治療青光眼的藥物組合物，所述藥物組合物包含治療有效量的血清淀粉樣蛋白A蛋白(SAA)拮抗劑和藥物載體。組合物中含有的拮抗劑可以是以上鑒定的任意一種化合物。在另一實施方案中，本發(fā)明提供了通過以下步驟診斷青光眼的方法a)自患者獲得生物學(xué)樣品；和b)分析所述樣品中編碼血清淀粉樣蛋白A蛋白(SAA)的基因或它的啟動子區(qū)或它的基因產(chǎn)物的異常水平、異常生物活性或突變，其中編碼SAA的所述基因包含SEQIDNO:l或SEQIDNO:3中給出的序列，其中它的啟動子區(qū)包含SEQIDNO:12或SEQIDNO:13中給出的序列，并且其中SAA包含SEQIDNO:2或SEQIDNO:4中給出的序列；其中SAA基因或基因產(chǎn)物的異常的高水平、異常的高生物活性的突變指出診斷為青光眼。在優(yōu)選的方面，生物學(xué)樣品為眼組織、淚液、房水、腦脊液、鼻或頰拭子或血清。最優(yōu)選地，生物學(xué)樣品包含小梁網(wǎng)細胞。備選地，本發(fā)明提供了通過以下步驟診斷患者中青光眼的方法a)從患者收集細胞；b)從所述細胞分離核酸；c)將樣品與一種或多種引物接觸，所述引物在一定條件下特異雜交SEQIDNO:l、SEQIDNO:3、SEQIDNO:12或SEQIDNO:13的至少一種等位基因的5，和3，從而發(fā)生該等位基因的雜交和擴增；和d)檢測擴增產(chǎn)物；其中樣品中SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:12或SEQIDNO:13的異常水平或突變指出診斷為青光眼。本發(fā)明也提供了通過以下步驟鑒定潛在用于治療青光眼的物質(zhì)的方法a)獲得表達SAA(SEQIDNO:1或SEQIDNO:2)的細胞或含有SAA啟動子/報道基因從而該報道基因得到表達的細胞；b)混合候選物質(zhì)與細胞；和c)確定細胞中SAA蛋白質(zhì)(SEQIDNO:2或SEQIDNO:4)的水平或基因表達的水平；其中在存在所述候選物質(zhì)時SAA蛋白質(zhì)的產(chǎn)生或基因表達的增加或減少表明所述候選物質(zhì)是潛在用于治療青光眼的物質(zhì)。另一方面，本發(fā)明提供了通過以下步驟鑒定潛在用于治療青光眼的物質(zhì)的方法a)形成包含(i)SAA蛋白質(zhì)或表達SAA或通過SAA啟動子驅(qū)動的才艮道基因的細胞；(ii)SAA蛋白質(zhì)結(jié)合配偶體；和(iii)受試化合物的反應(yīng)混合物；和b)在存在受試化合物和不存在受試化合物時，檢測SAA蛋白質(zhì)與結(jié)合配偶體的相互作用或報道基因產(chǎn)物的水平；其中相對于不存在受試化合物時的相互作用，存在受試化合物時SAA蛋白質(zhì)與它的結(jié)合配偶體的相互作用的減少或增加表明所述受試化合物是潛在用于治療青光眼的物質(zhì)。另一方面，本發(fā)明提供了通過以下步驟鑒定潛在用于治療青光眼的物質(zhì)的方法a)形成反應(yīng)混合物，其包含(i)包含SAA重組蛋白(SEQIDNO:2或SEQIDNO:4)的細胞或包含表達載體的細胞，所述表達載體包含SEQIDNO:1或SEQIDNO:3;和(ii)受試化合物；b)檢測存在受試化合物和不存在受試化合物時對下游信號傳遞(IL-8)的影響；其中相對于不存在受試化合物時的相互作用，存在受試化合物時下游信號傳遞減少或增加指出所述受試化合物是潛在用于治療青光眼的物質(zhì)。在優(yōu)選的方面，含有SAA蛋白質(zhì)或表達載體的細胞將是HL-60細胞。附圖簡述以下附圖形成本說明書的部分并且包括在本說明書中用來闡明本發(fā)明的某些方面。通過與文中給出的特定實施方案的詳一目結(jié)合參考這些附圖可以更好地理解本發(fā)明。圖1.12名青光眼(供者)與11名正常(供者)的TM組織中SAA表達的QPCR分析。NTM和GTM分別表示正常組和青光眼組中基因的平均表達水平。圖2A.TM細胞系中SAA表達的QPCR分析。NTM和GTM分別表示正常組和青光眼組中基因的平均表達水平。圖2B.視神經(jīng)乳頭組織中SAA表達的QPCR分析。NTM和GTM分別表示正常組和青光眼組中基因的平均表達水平。圖3.來自正常和青光眼供者(11=6)的TM組織中的SAA蛋白。與正常組織相比，在青光眼TM組織中觀察到SAA的顯著升高(3倍)(p-0.05)。柱表示均值+As.e.m。圖4.來自正常和青光眼個體的人房水中通過ELISA確定的SAA蛋白。值表示為平均SAA(ng)/ml房水，+/-s.e.m.(p=0.0001)。圖5.HL-60細胞響應(yīng)rhSAA升高的濃度的IL-8分泌。圖6.玻璃體內(nèi)注射腺病毒(Adv.)SAA2對小鼠IOP的效果。IOP用回彈式眼壓計TonoLab⑧測量。圖7.玻璃體內(nèi)注射28天后來自Balb/c小鼠的小鼠眼的SAA表達。SAA通過ELISA測定。對照:無效腺病射Adv.null)注射眼和未注射眼(腺病毒SAA2注射眼的對側(cè)眼；n=16);腺病毒SAA:腺病毒SAA2注射眼(n=17)。圖8A和圖8B.玻璃體內(nèi)注射Ad.SAA2+抗-CD40L抗體對Balb/c小鼠IOP的作用(圖8A)和虹膜充血的作用(圖8B)。數(shù)據(jù)表示為均值和SEM。圖9.重組人血清淀粉樣蛋白A(rhSAA，1pg/mL;處理開始于時間0)對灌注人前段的IOP的作用。圖10.重組人血清淀粉樣蛋白A(rhSAA，1pg/mL;處理開始于時間0)對灌注人前段的灌注液中白細胞介素-8(IL-8)水平的作用。圖11.MAPp38激酶抑制劑對TM細胞中SAA處理(ling/ml)誘導(dǎo)IL-8的作用。A:SB203580(4-(4-氟苯基)-2-(4-甲基亞磺酰基苯基-5-(4-吡啶基)-lH-咪唑)的作用。B:504-氮雜吲咮和BIRB-796(1-(5-叔丁基-2-對甲苯基-2H-吡唑-3-基)-3(4-(2-嗎啉-4-基畫乙氧基)萘-l-基)脲)的作用。借助ELISA測定IL-8。圖12.TM細胞和HL-60細胞中SB203580對SAA刺激的IL-8分泌的抑制。NTM650-03，p9或HL-60細胞在無血清DMEM中用1pg/mlSAA和指示濃度的SB202580處理4小時。借助ELISA測定IL-8。TM細胞中計算的IC5o=15nM，在HL-60細胞中計算的IC5。=25nM。圖13.在無血清DMEM中用1ng/mlSAA和指示濃度的抑制劑處理4小時，HL-60細胞中p38MAP激酶抑制劑、4-氮雜^咮和BIRB-796對SAA刺激的IL-8分泌的抑制。借助ELISA測定IL-8。計算的IC50:4-氮雜吲咮=0.3nM，BIRB-796=0.5nM。優(yōu)逸實施方案詳述青光眼是共有某些臨床特征的視神經(jīng)病的異質(zhì)群。青光眼中的視力喪失是由于神經(jīng)視網(wǎng)膜中視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的選擇性死亡，所述選擇性死亡在臨床上診斷為視野中的特征性改變、神經(jīng)纖維層缺陷和ONH的進行性杯化(c叩ping)。發(fā)生青光眼的主要危險因素之一是存在眼高壓(升高的眼內(nèi)壓，IOP)。IOP似乎也涉及正常眼壓性青光眼的致病原因中，所述正常眼壓性青光眼的患者具有常常認為正常的IOP。與青關(guān)目糾目關(guān)的升高的IOP是由于小梁網(wǎng)(TM)中房水流出阻力升高，小梁網(wǎng)是位于眼前房虹膜-角膜角中的小特化組織。TM的青關(guān)眼變化包括TM細胞損失和細胞外碎片(包括蛋白質(zhì)斑狀材料)的沉積和積累。此外，在青光眼性視神經(jīng)乳頭(ONH)中也發(fā)生變化。在青光眼的眼中，在ONH神經(jīng)膠質(zhì)細胞中有形態(tài)和流動性改變。對IOP升高和/或暫時的局部缺血損傷的反應(yīng)是ONH細胞外基質(zhì)本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在青光眼TM組織和細胞中血清淀粉樣蛋白A(SAA)mRNA和蛋白質(zhì)的表達顯著上調(diào)。本發(fā)明人通過實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(QPCR)用Affymetrix基因芯片證實了所看到的差別mRNA表達并通過SAAELISA證實了升高的SAA蛋白質(zhì)水平。這是第一次表明SAA在TM中表達。人SAA包含許多小的、差別表達的載脂蛋白，其由位于ll號染色體短臂上的基因編碼。有四種SAA同種型。SEQIDNO:1編碼的SAA1(SEQIDNO:2)和SEQIDNO:3編碼的SAA2(SEQIDNO:4)稱為急性期反應(yīng)物，如C-反應(yīng)蛋白，即它們通過促炎細胞因子顯著上調(diào)。也提供了SAA1和SAA2基因的5，UTR啟動子區(qū)(分別為SEQIDNO:12和SEQIDNO:13)。SAA3(SEQlDNO:5)是假基因，SAA4(SEQIDNO:6)是編碼組成型SAA4(SEQIDNO:7)的低水平組成性表達的基因。SAA2具有兩種同種型SEQIDNO:8編碼的SAA2a(SEQIDNO:9)和SEQIDNO:10編碼的SAA2p(SEQBDNO:11),這兩種同種型僅僅有一個M酸不同。SAA1和SAA2蛋白在氨基酸水平(分別為SEQIDNO:2和SEQIDNO:4)有93.5%的同一性，這些基因在核苷酸水平(分別為SEQIDNO:1和SEQIDNO:3)有96.7%的同一性。SAA為急性期反應(yīng)物，作為身體對多種損傷，包括創(chuàng)傷、感染、炎癥和瘤形成的反應(yīng)的部分，所述SAA在血液中的水平升高大約1000倍。作為急性期反應(yīng)物，認為肝臟是主要表達部位。然而，最初描述了小鼠組織中肝外SAA表達，后來描述了人粥樣硬化病變的細胞中SAA的表達(O'Hara等人，2000)。隨后，發(fā)現(xiàn)在許多組織學(xué)正常人組織中SAAmRNA廣泛表達。在多種組織包括乳腺、胃、小腸和大腸、前列腺、肺、胰腺、腎、扁桃體、曱狀腺、垂體、胎盤、皮膚表皮和腦神經(jīng)元中注意到SAAmRNA的局部表達。在淋巴細胞、漿細胞和內(nèi)皮細胞中也觀察到SAAmRNA的表達。在組織學(xué)正常的人肝外組織中也報道了與SAAmRNA表達共定位的SAA蛋白表達(Liang等人，1997;Urieli-Shoval等人，1998)。SAA同種型是栽脂蛋白，其成為哺乳動物血漿中高密度脂蛋白(HDL)主要組分并且轉(zhuǎn)移來自HDL顆粒的A-I(ApoA-I)和磷脂(Miida等人，1999)。SAA結(jié)合膽固醇并且可以作為瞬時膽固醇結(jié)合蛋白。此外，SAA1或SAA2的過度表達導(dǎo)致在淀粉樣蛋白沉積物中形成線性原纖維，所述線性原纖維可以導(dǎo)致發(fā)病(Uhlar和Whitehead1999;Liang等人，1997)。SAA在感染、炎癥和組織修復(fù)刺激中起重要作用。炎癥、感染、壞死后，SAA濃度可以升高達1000倍，恢復(fù)后SAA濃度快速降低。因此，認為血清SAA濃度是監(jiān)測炎性疾病活性的有用標志。SAA的肝生物合成受到促炎細胞因子上調(diào)，導(dǎo)致急性期反應(yīng)。SAA濃度緩慢升高是繼發(fā)性淀粉樣蛋白病發(fā)病的必要條件，所述繼發(fā)性淀粉樣蛋白病是進行性的并且有時為致死性疾病，其特征為主要器官中主要由蛋白水解切割的SAA組成的不溶性斑點的沉積。此種同樣的過程也可以導(dǎo)致動脈粥樣硬化。需要正和負SAA控制機制來維持穩(wěn)態(tài)。這些機制允許快速誘導(dǎo)SAA表達以完成宿主保護功能，但他們也必須保證SAA的表達快速返回到基線水平以防止淀粉樣蛋白病。這些機制包括啟動子活性的調(diào)節(jié)，例如涉及謙導(dǎo)物核因子kB(NF-kB)和它的抑制劑IkB，白細胞介素-6核因子(NF-IL6)家族的轉(zhuǎn)錄因子的上調(diào)和轉(zhuǎn)錄阻抑物，如yin和yangl(YYl)。涉及mRNA穩(wěn)定性和翻譯效率改變的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)允許實現(xiàn)SAA蛋白合成的進一步上調(diào)和下調(diào)控制。在AP反應(yīng)的晚期階段，SAA的表達通過細胞因子拮抗劑諸如白細胞介素-1受體拮抗劑(IL-IRa)和可溶性細胞因子受體的增加的產(chǎn)生有效地下調(diào)，導(dǎo)致通過促炎細胞因子驅(qū)動的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)降低(Jensen和Whitehead1998)。有一些報導(dǎo)提出原發(fā)性淀粉樣蛋白病可能與青光目^T關(guān)。例如，發(fā)現(xiàn)在原發(fā)性系統(tǒng)性性淀粉樣蛋白病患者中淀粉樣蛋白沉積在多種眼組織，包括玻璃體、視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜、虹膜、晶狀體和TM中(Schwartz等人，1982)。Ermilov等人(1993)報導(dǎo)在25至90歲，患有白內(nèi)障、青光眼和/或糖尿病的313名患者的478只眼中，66只目艮(14。/。)含有淀粉樣蛋白-假片狀剝落淀粉樣蛋白(PEA)。Krasnov等人(1996)報導(dǎo)具有開角型青光眼的115名患者中44.4%顯示淀粉樣蛋白的細胞外沉積。82。/。的病例的鞏膜中顯示淀粉樣蛋白病并且70。/。的病例中顯示虹膜中淀粉樣蛋白病。許多臨床疾病，包括阿爾茨海默氏病，顯示與疾病相關(guān)的異常淀粉樣蛋白組織沉積。然而，淀粉樣蛋白是分子異質(zhì)的并且由不同的淀粉樣蛋白基因編碼。關(guān)于哪種淀粉樣蛋白可能與青關(guān)目M目關(guān)，以前的報導(dǎo)是不清楚的。本發(fā)明人第一次證明在青關(guān)眼TM組織中，SAA基因表達顯著升高。升高的SAA可能涉及產(chǎn)生升高的IOP和損傷視神經(jīng)，導(dǎo)致青關(guān)眼患者中視力喪失。本發(fā)明提供了用升高的SAA表達的發(fā)現(xiàn)來診斷青光眼的方法。本發(fā)明還提供了用于篩選改變SAA表達或功能的物質(zhì)以鑒定可能的抗青光眼物質(zhì)的方法。另一方面，本發(fā)明提供了用拮抗SAA作用和/或與其他蛋白質(zhì)相互作用的物質(zhì)治療青光眼的方法和組合物。診斷青光眼基于發(fā)明人發(fā)現(xiàn)某些青光眼受試者的SAA表達水平升高，本發(fā)明提供了用于診斷青光眼的多種方法。本發(fā)明的某些方法可以檢測導(dǎo)致SAA蛋白不適當?shù)馗咚降暮?列中的突變。基于人SAA的已知核,列或編碼的M酸序列，可以開發(fā)這些診斷法(參見Miller2001)?；谌薙AA的基因組序列或調(diào)節(jié)SAA表達的基因的序列，可以開發(fā)其他的方法。基于在mRNA水平上SAA基因表達水平的改變，還可以開發(fā)其他方法。在備選的實施方案中，本發(fā)明的方法可以檢測SAA信號蛋白或編碼SAA信號蛋白的基因的活性或水平。例如可以開發(fā)此類方法來檢測不適當?shù)牡蚐AA信號活性，包括例如導(dǎo)致SAA信號組分的不適當功能，包括IL-8的SAA誘導(dǎo)的突變。此外，可以用基于非核酸的技術(shù)檢測任意這些SAA信號蛋白的量或比活性的改變。當前技術(shù)人員可以獲得多種方法用于檢測基因和基因產(chǎn)物的異常水平或活性。這些方法是技術(shù)人員公知的并成為常規(guī)方法。例如，可以獲得許多方法用于檢測人多態(tài)性基因座上的特定等位基因。檢測特定多態(tài)性等位基因的優(yōu)選的方法部分取決于多態(tài)性的分子性質(zhì)。多態(tài)性基因座的多種等位基因形式可以通過DNA的單個堿基對而不同。此種單個核苷酸多態(tài)性(或SNP)是遺傳變異的主要貢獻者，包含所有已知多態(tài)性的大約80。/。，它們在人基因組中的密度估計為平均每l，OOO個堿基對1個?？色@得多種方法用于檢測個體中特定單核苷酸多態(tài)性等位基因的存在。本領(lǐng)域的*提供了準確的、容易的和便宜的大規(guī)模SNP基因型分型。例如，參見美國專利號4,656，127;法國專利2,650，840;PCT申請?zhí)朩O91/02087;PCT申請?zhí)朩092/15712;Komher等人，1989;Sokolov1990;Syvanen等人，19卯;Kupp,amy等人，1991;Prezant等人，1992;Ugozzoli等人，1992;Nyren等人，1993;Roest等人，1993;和vanderLuijt等人，1994)?？梢岳萌我饧毎愋突蚪M織以獲得用于在文中描述的診斷法中使用的核酸樣品。在優(yōu)選的實施方案中，通過已知技術(shù)(例如靜脈穿刺術(shù))從體液，例如血液或口腔細胞獲得DNA樣品。最優(yōu)選地，用于本發(fā)明方法中的樣品獲得自血液或口腔細胞。備選地，可以對千燥樣品(例如頭發(fā)或皮膚)進行核酸試驗。也可以在從活組織檢查或切除得到的患者組織的組織切片(固定和/或冷凍)上原位直接進4亍珍斷步驟，這樣不必進行核酸純化。對于此類原位步驟，核酸試劑可以用作探針和/或引物(參見，例如，Nuovo1992)。除了主要集中于檢測一種核酸序列的方法外，也可以在此類檢測方案中評估分布圖。例如，通過利用差異顯示方法、Northern分析和/或RT-PCR可以產(chǎn)生指紋分布圖。優(yōu)選的檢測方法為等位基因特異雜交，其使用探針，所述探針與指示青光眼的SAA信號組分的至少一個等位基因的區(qū)域重疊并且具有突變或多態(tài)性區(qū)域周圍大約5、10、20、25或30個連續(xù)核苷酸。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，能特異雜交涉及青光眼的其他等位基因變體的幾種探針附著到固相支持體例如，"芯片"(可以容納多達約250,000個寡核苷酸)。寡核苷酸可以通過多種方法，包括平版印刷術(shù)結(jié)合到固相支持體上。例如在Cronin等人(1996)中描述了用包含寡核苷酸的這些芯片(也稱為"DNA探針陣列，，)進行突變檢測分析。在一個實施方案中，芯片包含基因的至少一個多態(tài)區(qū)域的所有等位基因變體。然后將固相支持體與受試核酸接觸并檢測與特異探針的雜交。因此，在簡單的雜交實驗中，可以鑒定一種或多種基因的許多等位基因變體的身份。這些技術(shù)還可以包括在分析前擴增核酸的步驟。擴增技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，包括但不限于克隆、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、特定等位基因的聚合HM反應(yīng)(ASA)、連接SW:反應(yīng)(LCR)、嵌套式聚合HM反應(yīng)、自動維持序列擴增(GuateHi等人，19卯)、轉(zhuǎn)錄擴增系統(tǒng)(Kwoh等人，1989)和Q畫Beta復(fù)制酶(Lizardi等人，1988)。可以以多種方法測定擴增產(chǎn)物，包括大小分析、限制性消化后大小分析、檢測反應(yīng)產(chǎn)物中的特異標記的寡核苷酸引物、等位基因特異寡核苷酸(ASO)雜交、等位基因特異5，外切核酸酶檢測、測序、雜交、SSCP等等。基于PCR的檢測方法可以包括同時對許多標記的多重擴增。例如選擇PCR引物以產(chǎn)生大小不重疊并可以同時分析的PCR產(chǎn)物是本領(lǐng)域//^的。備選地，可以用差別標記并且因此可以區(qū)別檢測的引物擴增不同標志。當然，基于檢測方法的雜交允許在一個樣品中差別檢測多種PCR產(chǎn)物。其他技術(shù)是本領(lǐng)域已知的以允許多種標志的多重分析。在僅僅闡明性實施方案中，該方法包括步驟(i)自患者收集細胞樣品，(ii)自樣品的細胞中分離核酸(例如，基因組、mRNA或基因組和mRNA)，(iii)在一定條件下將核酸樣品與特異雜交指示青光眼的SAA的至少一種等位基因的5，和3'的一種或多種引物接觸從而發(fā)生等位基因雜交和擴增，和(iv)檢測擴增產(chǎn)物。如果核酸分子以非常低的數(shù)目存在，那么這些檢測方案特別用于檢測此類核酸分子。在主題測定法的優(yōu)選實施方案中，通過限制性內(nèi)切酶切割帶型的改變鑒定指示青光眼的SAA的異常水平或活性。例如，分離樣品和對照DNA，擴增(任選)，用一種或多種限制性內(nèi)切酶消化，通過凝膠電泳確定片段長度大小。在另一個實施方案中，本領(lǐng)域已知的任意多種測序反應(yīng)可以用于直接等位基因測序。代表性測序反應(yīng)包括基于Maxim和Gilbert(1977)或Sanger(1977)開發(fā)的技術(shù)的測序反應(yīng)。也可以計在進行主題測定時，可以利用任意多種自動測序方法，包括通過質(zhì)語測定法測序(參見，例如WO94/16101;Cohen等人，1996;Griffin等人，1993)。本領(lǐng)域才支術(shù)人員是顯而易見的是，對于某些實施方案，在測序反應(yīng)中需要確定僅僅一個、兩個或三個核酸堿基的發(fā)生。例如，僅僅檢測一個核酸時，可以進行A-track等等。在另一實施方案中，對切割劑(諸如核酸酶、羥胺或四氧化鋨和哌咬)錯配堿基(Myers等人1985b;Cotton等人1988;Saleeba等人1992)。在優(yōu)選的實施方案中，可以標記對照DNA或RNA用于檢測。在另一個實施方案中，錯配切割反應(yīng)利用識別雙鏈DNA中錯配g對的一種或多種蛋白質(zhì)(也稱為"DNA錯配修復(fù)"酶)。例如，大腸桿菌(E.coli)的mutY酶切割G/A錯配中的A,來自HeLa細胞的胸苷DNA糖基化酶切割T和G/T錯配(Hsu等人，1994;美國專利號5，459，039)。在其他實施方案中，電泳遷移率的改變用于鑒定指示青光眼的SAA的異常水平或活性。例如，單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)可以用于檢測突變體和野生型核酸之間電泳遷移率的差異(Orita等人1989;Cotton1993;Hayashi1992;Keen等人1991)。在另一個實施方案中，用變性梯度凝膠電泳(DGGE)測定了含有變性劑梯度的聚丙烯酰胺凝膠中等位基因的移動(Myers等人1985a)。在另外的實施方案中，用溫度梯度代替變性劑梯度以鑒定對照和樣品DNA的遷移率中的差異(Rosenbaum和Reissner1987)。用于檢測等位基因的其他技術(shù)的實例包括但不限于，選擇性寡核香酸雜交、選擇性擴增或選擇性引物延伸。例如，可以制備寡核苷酸引物，在所述寡核苷酸引物中將已知突變或核苷酸差異(例如，等位基因變體中)置于中間然后在僅僅發(fā)現(xiàn)精確匹配時允許雜交的條件下與靶DNA雜交(Saiki等人1986;Saiki等人1989)。寡核苷酸與PCR擴增的耙DNA雜交時，此類等位基因特異的寡核苷酸雜交技術(shù)可以用于每次反應(yīng)檢測一個突變或多態(tài)性區(qū)域，或當寡核苷酸附著雜交膜并與標記的靶DNA雜交時，所述技術(shù)可以用于檢測許多不同突變或多態(tài)性區(qū)域。備選地，依賴于選擇性PCR擴增的等位基因特異擴增技術(shù)可以與本發(fā)明聯(lián)合使用。用作特異擴增引物的寡核苷酸可以在分子的中央攜帶突變或目的多態(tài)性區(qū)域(從而擴增取決于差別雜交)(Gibbs等人1989),或在一個引物的3，末端攜帶突變或目的多態(tài)性區(qū)域，在該情況中，在適當條件下，錯配可以防止或降低聚合酶延伸(Prossner1993)。此外希望在突變區(qū)導(dǎo)入新的限制性位點以產(chǎn)生基于切割的檢測(Gasparini等人1992)。預(yù)計在某些實施方案中使用用于擴增的Taq連接酶也可以進行擴增(Barany1991)。在此種情況下，只有在5，序列的3，末端存在完全匹配才發(fā)生連接，使得可以通過尋找擴增的存在或不存在^測在特定位點已知突變的存在.在另一實施方案中，如在美國專利號4，998，617和在Landegren等人1988中描述地，用寡核苷酸連接測定法(OLA)進行等位變體的鑒定。Nickerson等人描述了組合PCR和OLA性質(zhì)的核酸檢測測定法(Nickerson等人1990)。在此方法中，PCR用于實現(xiàn)靶DNA的指數(shù)擴增，然后用OLA檢領(lǐng)'耙DNA。已經(jīng)基于此種OLA方法開發(fā)了幾種技術(shù)，此類技術(shù)可以用于檢測指示青光眼的SAA的異常水平或活性。例如美國專利號5,593,826和Tobe等人(1996)描述了常常使用的此類技術(shù)。在一個實施方案中，在藥學(xué)可接受的組合物中可以配制過氧化物酶體增殖物激活受體a(PPARa)激動劑非諾貝特并且可以通過調(diào)節(jié)SAA表達用于治療青光眼。研究顯示非諾貝特和WY14643治療降低了血漿SAA濃度(Yamazaki等人2002)。認為其他PPARa激動劑，諸如環(huán)丙貝特、2-溴代十六烷酸、必降脂、環(huán)丙貝特和ciglitizone也可以用于治療青光眼。在一個實施方案中，p38MAP激酶抑制劑通過調(diào)節(jié)SAA誘導(dǎo)的IL-8表達和下游信號傳導(dǎo)事件，可用于治療罹患升高的眼內(nèi)壓的患者的青光眼或高眼壓癥和降低眼內(nèi)壓。本發(fā)明人指出SAA刺激IL-8在小梁網(wǎng)細胞和組織中的分泌。增量調(diào)節(jié)IL-8的一條途徑是通過活化MAP激酶。本發(fā)明人還指出p38MAP激酶抑制劑在灌注培養(yǎng)的人眼中，以及嚙齒動物眼中體內(nèi)阻斷TM細胞中SAA誘導(dǎo)的IL-8。發(fā)現(xiàn)TM細胞中代表不同種類的MAPK抑制劑的化合物是SAA誘導(dǎo)IL-8表達的有效抑制劑(表3)。它們中最有效的是p38MAPK抑制劑，SB203580、4-氮雜巧l咮和BIRB-796(圖11)。SB203580抑制TM細胞和HL60細胞中產(chǎn)生的SAA誘導(dǎo)的IL-8的劑量反應(yīng)曲線給出相似的結(jié)果(TM細胞中IC50=15nM，HL60細胞中IC50=25,圖12).在HL60細胞中進行3-(4-氟苯基)-2-(吡咬-4-基)-lH-吡咯并[3，2-b吡啶(文中也稱為4-氮雜吲咪)和BIRB0796的抑制曲線顯示這兩種化合物均比SB203580更有效大約10倍(4-氮雜巧l哚的IC50=0.3nM,BIRB-796的IC50=0.5pM(圖.13))。表3.TM細胞中篩選的抑制SAA誘導(dǎo)IL-8分泌的化合物種類%SAAi秀導(dǎo)的IL-8分泌的抑制化合物靶標選擇性100jiM50nM2510nM1fiMSB203580MAPKp38MAP激酶98.773.861,038.116.3SB202190MAPKp38MAP激酶38.243.317.2BIRB-796MAPKP38MAP激酶78.128,94-氮雜丐l咮MAPKp38MAP激酶94.322,6PD98059MAPKMEK34.0U0126MAPKMEK53.050.630.9非諾貝特SAAPPARa興奮劑57.252.759.9表3中鑒定的化合物的化學(xué)名稱如下SB203580:(4-(4-氟苯基)-2-(4-甲基亞磺?；交?5-(4-吡吱基)-lH-咪唑)；SB202190:4-[4-(4-氟苯基)-5-(4-吡"^)-lH-咪唑-2-基]酚；BIRB-796:(l-(5-叔丁基-2畫對甲苯基-2H-p比喳-3畫基)-3(4-(2曙嗎啉-4畫基-乙氧基)萘-l-基)脲；4-氮雜吲咪3-(4-氟苯基)-2-(吡咬-4-基)-lH-吡咯并3，2-bl吡啶；PD98059:2，-氨基-3，-甲氧基黃酮；U0126:1，4-二氨基-2，3-二氰-l，4畫雙(2國aminophynyltio)丁二烯；CalBio506126:2-(4-氯苯基)-4-(4-氟苯基)-5-吡啶-4-基-1，2-二氬比哇-3-酮。體外測試顯示幾個p38MAPK抑制劑顯著阻斷SAAi秀導(dǎo)的IL-8。評測了3-(4-氟苯基)-2-(吡啶-4-基)-lH-吡咯并[3，2-b吡啶，最有效的p38MAPK抑制劑之一在小鼠中降低IOP，這是通過玻璃體內(nèi)注射Ad,SAA2(2xl()7pfu/眼)+抗CD40L，之后局部應(yīng)用3-(4-氟苯基)-2-(吡咬-4-基)-lH-吡咯并[3，2-bj吡啶的1%懸浮液進行的。腺病毒SAA2導(dǎo)致顯著的IOP升高，其在第10-12天達到頂峰(從基線增加10-12mmHg)，然后緩慢的降低。第24天，IOP高于基線6-7mmHg。高眼壓癥通過局部施用4-氮雜吲咮(1%;b丄d.)阻斷。4-氮雜吲哚施用在第7天停止后，IOP回到載體處理的Ad.SAA2-注射組的相同水平。當?shù)?3天重新開始藥物施用時，在第3天IOP再次降低至基線(圖8)。重復(fù)該實驗，得到類似的結(jié)果。此體內(nèi)數(shù)據(jù)顯示p38MAPK抑制劑4-氮雜吲哚可以抵消Ad,SAA2誘導(dǎo)的高眼壓癥。本發(fā)明該實施方案優(yōu)選的化合物是表3中列出的那些化合物種類，并擴展到顯示這些實施例中描述的p38MAP激酶抑制性質(zhì)的其他化合物種類，包括SB202190、SB203580、SB220025、PD169316、SB23卯63、4畫氮雜丐1味、BIRB-796、CalBio506126、RO3201195、R1487。本發(fā)明人還假定防止淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的細胞死亡的物質(zhì)可以用于保護TM和前眼球血管膜和眼后的其他的眼組織，特別是視網(wǎng)膜和視神經(jīng)乳頭。本發(fā)明的化合物可以摻入用于遞送到眼(例如，局部、intracamerally或通過植入)的多種類型的眼科制劑(ophthalmicformulation)中。所述化合物優(yōu)選摻入局部眼科制劑中用于遞送到眼。所述化合物可以與眼科可接受的防腐劑、表面活性劑、粘性增強劑、滲透增強劑、緩沖劑、氯化鈉和水組合以形成含水的、無菌眼科懸浮液或溶液。通過在生理學(xué)上可接受的等滲水性緩沖劑中溶解化合物可以制備眼科溶液制劑。此外，眼科溶液可以包括眼科可接受的表面活性劑以幫助溶解該化合物。而且，眼科溶液可以含有增加粘性的物質(zhì)，諸如，羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、曱基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等等以改善結(jié)膜嚢中制劑的保持。也可以使用膠凝劑，包括但不限于膠凝糖(gellan)和黃原膠。為了制備無菌眼膏制劑，將活性成分與防腐劑在適當載體，諸如礦物油、液體羊毛脂或白礦脂中組合。根據(jù)相似眼科制劑的公開制劑可以在從例如carb叩ol-974等等的組合制備的親水基質(zhì)中懸浮所述化合物制備無菌眼科凝膠制劑；可以摻入防腐劑和張度劑。所述化合物優(yōu)選作為局部眼科懸浮液或溶液配制，pH大約為4至8。對每個個體的特定劑量方案的建立由臨床醫(yī)生決定。在這些制劑中含有的所述化合物的量通常按重量計為0.01%至5%，但優(yōu)選0.05%至2%和最優(yōu)選按重量為0.1至1.0%。劑型可以是溶液劑、混懸劑、微乳劑。因此，根據(jù)熟練臨床醫(yī)生的決定，對于局部施用每天l-4次，每次1至2滴將這些劑型遞送到眼表面。所述化合物也可以與用于治療青光眼的其他物質(zhì)諸如，但不限于p-阻斷劑、前列腺素、碳酸酐酶抑制劑、a2激動劑、縮瞳劑和神經(jīng)保護劑組合使用。包括以下實施例用來闡明本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)行良好的技術(shù)，因此可以考慮組成本發(fā)明實踐的優(yōu)選方式。然而，根據(jù)本公開的專利，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解可以對公開的特定實施方案進行許多修改并且仍獲得相同或相似結(jié)果而不背離本發(fā)明的精神和范圍。實施例1.青光眼TM細胞和組織中SAA1和SAA2的升高的表達用Affymetric基因芯片(GeneChips)組(HG-U133)對來自13名正常供者對9名青光眼供者的TM組織的RNA庫確定基因表達。與正常TM組織相比，鑒定了青光眼中淀粉樣蛋白A2的表達增加了4倍。為了證實此結(jié)果，用來自12名青光眼和11名正常TM組織的單獨RNA進行QPCR。來自12名青光眼TM組織中的5名(42%)顯示SAA1/2表達的顯著增加。12名青光眼TM中SAA表達的平均值是11名正常TM的5.4倍(圖1)。此外，在青光眼TM細胞或青光眼視神經(jīng)乳頭組織中觀察到SAA差別表達的相似趨勢。與正常TM細胞相比，青光眼TM細胞中(14名青光目M"11名正常TM細胞系，圖2A)平均升高5.4倍，青光眼視神經(jīng)乳頭組織(14名青光眼對12名正常組織，圖2B)中平均增加118倍。來自6名正常和6名青光眼供者的TM組織中SAA的ELISA顯示，與正常TM組織相比，在青光眼TM組織中SAA蛋白也顯著增加。青光眼組織中SAA的濃度與正常組織相比有3倍差異(分別為11.3和3.8照/mg蛋白質(zhì))。這些數(shù)據(jù)在圖3中顯示。SAA的升高的表達與青光眼的相關(guān)性在人房水中進一步證實。通過ELISA測定來自16名正常個體和20名青光眼個體的房水中的SAA蛋白質(zhì)。發(fā)現(xiàn)SAA在青光眼房水中比正常樣品中的高幾乎3倍(分別為10,0ng/ml對3Jng/ml)。此結(jié)果在圖4中顯示。實施例2.用于局部應(yīng)用的非諾貝特的制劑1%非諾貝特用于局部應(yīng)用以減少SAA和降^f氐眼中的IOP。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>實施例3.用于篩選和鑒定改變SAAmRNA或SAA蛋白質(zhì)的表達的化合物的方法可以用于篩逸改變SAA表達和功能的物質(zhì)的一種方法是確定SAA蛋白質(zhì)水平的改變。用于定量確定動物或人血清、血漿、緩沖溶液、細胞培養(yǎng)基和組織或細胞提取物中的血清淀粉樣蛋白A(SAA)的體外測定試劑盒可通過商業(yè)途徑獲得。此測定法是固相夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)。將對SAA特異的單克隆抗體包被在微量滴定板的孔上。將包括已知SAA含量的標準樣品或未知SAA含量的樣品加到這些孔中，一起還加入綴合堿性磷酸酶或過氧化物酶的二級抗體。構(gòu)建抗體使得一種抗體不干擾另一種抗體的結(jié)合表位。在一步步驟中，將SAA通過固定化抗體捕獲在板上并用綴合的二級抗體標記。孵育期后，將板清洗以除去所有未結(jié)合的材料并加入底物(PNPP或過氧化物)。有色產(chǎn)物的強度與未知樣品中存在的SAA濃度是成比例的。實施例4.培養(yǎng)細胞系中SAA的誘導(dǎo)用于篩選改變SAAmRNA或蛋白質(zhì)表達的化合物人肝癌細胞系HepG2廣泛用于通過細胞因子對SAA誘導(dǎo)的研究、用于用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和報道子測定。在一些人肝癌細胞系(包括PCL/PRF/5、H印B和HepG2)中可以通過多種細胞因子誘導(dǎo)SAAmRNA和蛋白質(zhì)合成(Uhlar和Whitehead1999)。人主動脈平滑肌細胞(HASMC)的SAA的合成是通過糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的而不是通過促炎細胞因子IL-1、IL-6、和TNF-a誘導(dǎo)的，所述促炎細胞因子刺激肝癌細胞產(chǎn)生SAA(Kumon等人2002b;Kumon等人2001;Thorn和Whitehead2002)。當用Chemotaxicell培養(yǎng)腔測定時，SAA以依賴劑量的方式刺激HASMC的趨化性移行(Kumon等人2002a)。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜細胞的原代培養(yǎng)物中證明了SAAmRNA表達和蛋白質(zhì)產(chǎn)物產(chǎn)生(O，Hara等人2000)。實施例5.培養(yǎng)細胞中SAA的功能分析SAA的細胞因子樣性質(zhì)包括誘導(dǎo)嗜中性粒細胞分泌IL-8(Furlaneto和Campa,2002;He等人2003)。鑒定了早幼粒細胞細胞系HL-60細胞，其應(yīng)答SAA而增加IL-8分泌，并且可用于SAA功能的體外測定。用升高濃度的重組人SAA處理HL-60細胞4小時，通過ELISA測定培養(yǎng)基中的IL-8。IL-8的分泌以依賴劑量的方式增加(圖5)。HL-60細胞可以用作功能測定的替代細胞系以鑒定改變SAA功能和表達水平的物質(zhì)。實施例6小鼠中腺病毒介導(dǎo)的SAA表達增加IOP,p38MAPK抑制劑降低誘導(dǎo)的IOP研究了腺病毒增量調(diào)節(jié)SAA表達提高IOP的能力和p38MAPK抑制劑在小鼠中阻斷誘導(dǎo)的IOP的功效。1.小鼠中增量調(diào)節(jié)的SAA表達提高IOP每只Balb/c小鼠的一只眼睛玻璃體內(nèi)注射劑量為7x107pfu/目^/2jil的腺病毒SAA2(處理)或無效腺病毒(載體)。每只動物的對側(cè)眼不注射。除了腺病毒，在第-1、0、1、2、5、9和14天每只動物接受腹腔注射抗-CD40L(O.5mg/注射)以延長腺病毒SAA2的表達期。小鼠IOP以掩蔽方式(maskway)通過Tonolab測定。每只眼的平均IOP從18-30個測試獲得。小鼠中玻璃體內(nèi)注射腺病毒SAA2顯著增加IOP(49%或5.8mmHg，n=6-8，pO.OS)(圖6)。所有腺病毒SAA2處理的眼中SAA表達均顯著高于對照眼(包括載體處理的眼和沒有注射的對側(cè)眼，(pO.0001;n=16))(圖7)，這些結(jié)果證明增量調(diào)節(jié)SAA表達可以增加小鼠IOP,提供SAA與青光眼發(fā)病機理關(guān)聯(lián)的證據(jù)。2.小鼠中p38MAPK抑制劑降低腺病毒SAA2誘導(dǎo)的IOP:在體外確認了4-氮雜吲咮，P38MAPK抑制劑抑制SAA-誘導(dǎo)的IL-8表達后，本發(fā)明人玻璃體內(nèi)注射Ad,SAA2(2xl07pfu)+抗CD40L后，在第-1至7天和第13至17天b.i.d.雙眼局部施用5fiL1%4-氮雜丐l咪或載體，測試了化合物對小鼠IOP的作用。同樣，玻璃體內(nèi)注射腺病毒SAA2在第4至24天顯著提高小鼠IOP(載體組)。處理期間(第-1至7天和第13至17天，4-氮雜吲味不影響非注射眼的IOP)局部施用4-氮雜丐|哚顯著抑制腺病毒SAA2-誘導(dǎo)的IOP(圖8A)。第4天后虹膜充血在所有的Ad.SAA2-注射眼中觀察到，并在注射后的第2周緩慢減輕(圖8B)。4-氮雜吲哚不影響注射眼中的充血，這表明4-氮雜吲哚降低IOP的作用不是通過消除虹膜充血。這些結(jié)果證明p38MAPK抑制劑治療高眼壓癥的潛能。實施例7重組SAA降低灌注培養(yǎng)的人眼中的流出便利性五對人眼灌注含有重組SAA(1fig/mL)(試驗眼)或等體積的載體(對照目艮)的培養(yǎng)基。在培養(yǎng)期末，每只眼的四個象限(quadrant)通過透射電子顯孩t鏡檢查，以確定TM組織的活力。收集每只眼的灌注液，用于ELISA測定IL-8水平。處理24小時內(nèi)所有五對眼具有提高的IOP(圖9)。所有五對眼評測提高的IL-8水平(圖10)。灌注液中IOP的改變與SAA-誘導(dǎo)的白細胞介素-8的增加相關(guān)。所有五對眼接受灌注后TM活力評分。這些結(jié)果證明提高的SAA水平可以提高灌注培養(yǎng)的人眼中的IOP。按照本公開，不用過度實驗就可以進行和執(zhí)行文中公開的和要求專利保護的所有組合物和/或方法。盡管本發(fā)明的組合物和方法按照優(yōu)選的實施方案描述，但是如本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的，可以對文中描述的組合物和/或方法和方法步驟或步驟的順序進行改變而不背離本發(fā)明概念、精神和范圍。更特別地，顯然，化學(xué)和結(jié)構(gòu)相關(guān)的某些物質(zhì)可以替代文中描述的物質(zhì)以實現(xiàn)相似結(jié)果。本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的所有此類代替和修飾都在如所附權(quán)利要求定義的本發(fā)明的精神、范圍和概念內(nèi)。參考文獻將以下參考文獻特別引用作為參考，它們對文中給出的參考文獻示例性程序上的或者其他細節(jié)補充。其他出版物Furlenato，CJ和CampaA，j朋ve/o/serw附fl考/oiV/y4.."6"fl，/wte/*/e"Ai'/i-SAw附awwefro//r//，BlOCHEM.BlOPHYS.RES.COMMUN268:405-408(2002).He，R，SangH，Ye，RD,5^rw附a附盧,WJiWwces■yecre&V/!fA/wg/r(pr她/w-co，/edrece沙r，^FP/ZJ/LX4狄，Blood101:1572-1581(2003).JensenLE和WhiteheadAS,BlOCHEM.J.334:489—503(1998).JordatMS等，PlantaMed.68:667-71(2002).Kane等，J.NEUROCHEM.，72:1939-1947(1999).Kumon，Y.，Hosokawa，T.,Suehiro，T.，Ideda,Y.，Sipe，J.D.和Hashimoto,K,，Jcw&-/7/rflse，Wco附故"ftVescww"考/o,V/j(S^4J&cAe附。似"/c/orcw/似/WAm附""ce//s，AMYLOID9:237-241(2002a).Kumon，Y.，Suehiro,T.，F(xiàn)aulkes，D.J.，Hosakawa,T.，Ideda，Y.，Woo,P.，Sipe，J.D.和Hashimoto,K.，『ra附cfi)^o歸/1^gwtoZ卵o/5^fi/加CC4J/v她/"sfC/E"必/V做^&yh附HepG2scand.J.immunol.56:504-511(2002b),Kumon，Y.，Suehiro，T.，Hashimoto,K.和Sipe，J.D.，Z)d"附"/tfls朋e，ScandJ.Immunol.53:7-12(2001).Lambert等，Proc.Nat.Acad.Sci，USA95:6448-6453(1998),Uang，J.S.，Sloane，J.A.，Wells，J.M.，Abraham,C.R.，F(xiàn)ine,R.E.和Sipe,J.D.，￡V/cfewce/oca//fW"cftVw</p:Aasepo/f》0!pro^//i*^/*///4/zAe/iwer，s1<//s^se6rfir/"，NEUROSCI爭Lett.225:73-76(1997).Liu等，J.Neurochem.69:2285-2293(1997).MiidaT.，Yamada，T.，Yamadera,T.，Ozaki，K"Inano,K.，Okada，M.，A/g/i-i/ew鄉(xiāng)pr咖'",BlOCHEM.38(51》16958-16962(1999).Miller,G卿膨3(1):reviews3001.1-3001.15(2001)(也在http:〃genoinebiology,com/2001/3/l/reviews/3001*l)Nakagami等，Eur.J.Pharmacol.457:11-17(2002a).Nakagami等，Br.J.Pharmacol"137:676-682(2002b).O，Hara，R"Murphy,E,P"Whitehead,A.S.，F(xiàn)itzGerald，O.和Bresnihan,B.,y4cw紐'-/7Afl5^sem附j(luò)/wW"C/柳一'r/te"附a勿Zd，銷W紐we，ArthritisRes.2:142-144(2000).Pike等，J.Neurosci,13:1676-1687(1993).Thorn,C.F.和Whitehead,A.S.，Z)iJ5^mift.fl/g/wcocw,/cwV/p/iasese/"M/wn附盧/fif/4ge/ies，5/147朋d5!^44，J.IMMUNOL.169:399-406(2002).Uhlar，C.M.和Whitehead,A.S.，5^f"附"附盧/</j，決e附咖rverfe6ni&tfcw/e-p/ioyeEUR.J.BlOCHEM.265:501-523(1999).Urieli國Shoval，S.，Cohen,P.，Eisenb:erg，S.和Matzner，Y.，附despmidex/ress,Vm■serM/wa考/o/iZ爿/AM附a"泡s亂尸mfe附/w朋fto幼e印/幼W/ii附，j.Histochem.Cytochem.46:1377-1384(1998).Yamazaki等，BiochemicalandBiophysicalRes.Comm"290:1114-1122(2002).Yankner等，science250:279-282(1990)Zhang等，Neurosci.Lett.312:125-128(2001)權(quán)利要求1.治療高眼壓癥的方法，所述方法包括向需要其的患者局部眼施用治療有效量的組合物，該組合物包含與編碼血清淀粉樣蛋白A蛋白(SAA)的基因相互作用的小分子物質(zhì)，其中所述相互作用調(diào)節(jié)SAA的表達，由此SAA表達的降低治療青光眼，并且其中所述的物質(zhì)抑制p38MAP激酶。2.4又利要求1的方法，其中所述物質(zhì)選自SB2021卯、SB203580、SB220025、PD169316、SB23卯63、3-(4-氟苯基)-2陽(吡咬-4-基)-lH-p比咯并[3,2畫b吡咬、BIRB-796、CalBio506126、RO3201195和R1487。3.治療高眼壓癥的方法，所述方法包括向需要其的患者局部目M&用治療有效量的組合物，所述組合物包含抑制血清淀粉樣蛋白A蛋白(SAA)與其受體相互作用或調(diào)節(jié)SAA下游信號傳導(dǎo)事件的物質(zhì)，其中所述的物質(zhì)抑制p38MAP激酶。4.權(quán)利要求3的方法，其中所述物質(zhì)選自SB2021卯、SB203580、SB220025、PD169316、SB239063、3-(4-氟苯基)-2-(吡咬-4-基)-lH-吡咯并3，2-b吡咬、BIRB-796和CalBio506126。5.局部眼組合物，其包含治療有效量的血清淀粉樣蛋白A蛋白(SAA)拮抗物和藥物載體，其中所述SAA拮抗物是p38MAP激酶的小分子抑制劑。6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述p38MAP激酶抑制劑選自SB202190、SB203580、SB220025、PD169316、SB239063、3-(4國氟苯基)國2-(p比吱-4-基)-lH-吡咯并[3，2-b吡咬、BIRB-796和CalBio506126。7.降低具有提高的眼內(nèi)壓的患者的眼內(nèi)壓的方法，所述方法包括對所述患者施用治療有效量的眼科組合物，所述眼科組合物包含與編碼血清淀粉樣蛋白A蛋白(SAA)的基因相互作用的小分子物質(zhì)，其中所述相互作用調(diào)節(jié)SAA的表達，由此SAA表達的減少降低IOP，并且其中所述的物質(zhì)抑制p38MAP激酶。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述物質(zhì)選自SB202190、SB203580、SB220025、PD169316、SB239063、3-(4-氟苯基)-2-(吡咬-4-基)-lH-吡咯并[3，2畫b]吡咬、BIRB畫796、CalBio506126、RO3201195和R1487。9.權(quán)利要求7的方法，其中所述組合物局部施用。全文摘要本發(fā)明提供了用于治療青光眼的組合物和方法，用于診斷青光眼的方法和用于鑒定可以用于治療青光眼的物質(zhì)。更特別地，本發(fā)明描述了調(diào)節(jié)血清淀粉樣蛋白A表達的物質(zhì)的用途。文檔編號A61K31/7042GK101563081SQ200780046610公開日2009年10月21日申請日期2007年12月17日優(yōu)先權(quán)日2006年12月22日發(fā)明者A·F·克拉克,L·G·麥克納特,王萬恒申請人:愛爾康公司