專利名稱：：類別-i具體組織蛋白脫乙?；敢种苿┡c蛋白酶體抑制劑的組合的制作方法類別_1具體組織蛋白脫乙?；敢种苿┡c蛋白酶體抑制劑的組合本發(fā)明涉及與蛋白酶體抑制劑組合的組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制劑。涉及它們的制備方法，涉及含有它們的組合物，以及它們作為藥品的用途，例如，作為抑制生血肺瘤的藥品，比如、淋巴腺瘤和血癌。在它們的第一基質得到確定之后，即，核組織蛋白，HDAC酶家族已經(jīng)一皮命名。組織蛋白(H2A、H2B、H3和H4)形成八聚配合物，它們周圍的DNA螺旋被纏繞以確定凝聚染色質結構。組織蛋白的乙?；癄顟B(tài)處于受組織蛋白乙?；D移酶(HATs)(其乙?；?和HDACs支配的動態(tài)平tf,HDAC負責對組織蛋白尾部的脫乙酰作用。對HDAC酶的抑制作用有助于核粒組織蛋白尾部的乙?；饔?，有利于更具有轉染能力的染色質結構，這反過來導致在細胞代謝過程(比如細胞增殖、細胞程序死亡和分化)涉及的基因產生改變的表達。近年來，越來越多的另外的非組織蛋白HDAC基質已經(jīng)得到了鑒定。將結合致癌轉錄因子至染色質上的非規(guī)律和恒定HDAC補充已經(jīng)在特定的血癌和淋巴腺瘤形式中被觀察到了，比如急性早幼粒細胞性白血病(APL)、非Hodgkm，s淋巴腺瘤和急性骨髓性白血病(AML)。當疾病/人惡性病變和分化良好型的雄激素-響應前列腺腺癌向表型去分化雄激素非敏感前列腺癌癥發(fā)展時，蛋白水平上的HDAC1上調在前列腺癌細胞中被觀察到。此外，增強的HDAC2表達已經(jīng)在大多數(shù)人類結腸癌外植體中被發(fā)現(xiàn)，其由肺瘤抑制器腺瘤病息肉病大腸菌(APC)的缺失引發(fā)。與癌癥中的HDAC/HAT活性平衡一致，已經(jīng)表明，HDAC抑制劑在許多人類腫瘤細胞線中體外誘發(fā)細胞-周期停止、終末分化和/或細胞程序死亡，從而抑制血管形成和在棵鼠的人類異種移植模型中表現(xiàn)出體內4元癌活性。酶的HDAC家族通常被分為三類即類別I、II和III。在臨床研究中，當前僅僅類別I和II顯著地隱含介導HDAC抑制劑的作用。已經(jīng)表明，由HDAC家族成員1-3和8組成的類別-I組HDACs對于腫瘤細胞增殖是至關重要的。在眾多利用類別-IHDACS使具體啟動子靜止的轉錄因子中，—最熟知的實例為核激素受體類別，在它們的配體不存在時其僅僅結合HDAC3,和由此保持轉染靜止狀態(tài)。配合物以配體-依賴方式被分離，例如，通過類視黃醇、雌激素、雄激素等等，導致基因表達和分化。另一關鍵實例是依賴細胞周期蛋白的激酶抑制劑p21wafl'eipl的HDACl-依賴靜止。在HDAC抑制劑的抗增殖作用中，p21wafl'eipl誘導的關鍵作用由以下研究表明，該研究表明，同母系HCT-116細胞相比，在p2iwaf"^缺失的細胞中，對HDAC抑制劑曲古抑菌素A(TSA)的抗性增加6倍。此外，與真性胂瘤抑制基因不同，P21wafl'eipl普遍存在于腫瘤細胞中，和通過HDAC抑制劑誘發(fā)。組織蛋白并不是類別-IHDACs的唯一基質。例如，HDACs1-3脫乙?；阜瘟鲆种破鱬53,結果其達到泛素化和降解。因為p53為有效的腫瘤抑制器，包括細胞周期停滯和細胞程序死亡，保持該蛋白質的低水平對于允許胂瘤細胞存活和無控增殖是關鍵性的。類別-IIHDACs可以分為兩個亞類包含HDACs4、5、7、9和HDAC9剪接變體MITR的類別-IIa。類別-IIb包括均具有復制的HDAC域的HDAC6和HDAC10。類別-IIaHDACs不具有固有的組織蛋白脫乙酰基酶活性，但是通過發(fā)揮橋接因子的作用調節(jié)基因表達，因為它們同時與類別-1HDAC配合物和轉錄因子/DNA配合物相聯(lián)系。HDAC6,類別-lib的成員，由于其作為Hsp90脫乙?；敢黄ぷR別而受到了關注。HDAC抑制劑LAQ824和LBH589已經(jīng)被證實誘發(fā)Hsp90的脫乙酰作用，<旦是trapoxin和丁酸鈉不具有該作用。Hsp卯脫乙酰酶導致與Hsp90結合的前-存活和前-增殖委托(client)蛋白質相關的降解。關鍵的實例包括Her-2、Bcr-Abl、腎上腺糖皮質激素受體、變種(mutant)FLT-3、c-Raf和Akt。除了Hsp90之外，HDAC6還介導導致微管在應激狀態(tài)下失穩(wěn)的微管蛋白脫乙?；饔?。HDAC6的生物學角色進一步一皮HDAC6的具體小分子抑制劑tubacm導致a-微管蛋白過乙?；徒档图毎\動性而不影響細胞周期進展的事實證實。僅僅抑制HDAC6的a-微管蛋白脫乙?；赣虻腡ubacin僅僅導致HSP90乙酰化的很少量升高。與此一致，發(fā)現(xiàn)HDAC6對于MCF-7乳腺癌細胞的雌二醇-刺激的細胞遷移是關鍵的。最后，HDAC6在錯折疊蛋白質的細胞管理和由細胞質清除這些蛋白質中起著至關重要的作用。由于由HDACs在它們的表達水平或者活性水平上調節(jié)的大量細月包周期調節(jié)蛋白質，因此HDAC抑制劑的抗增殖作用不能與簡單的活性機制聯(lián)系。HDAC抑制作用在抗癌治療學中具有特定的預期，其中對涉及生長抑制、分化和細胞程序死亡的多種途徑的協(xié)同效應在異形病理學(比如腫瘤形成和生長)的處理中證實可能是有利的。這些年來，已經(jīng)顯然，HDACs不僅在致癌作用中起著關鍵作用，而且在多種非惡性分化過程中起著關鍵作用。對于類別-IIa4、5、7和9,這是最顯然的。例如，已經(jīng)提出，HDAC7在T細胞的胸腺成熟中起著至關重要的作用，而HDAC4已經(jīng)被指可用于軟骨細胞機能性肥大和軟骨內骨化的調節(jié)作用。然而，最關心的問題聚焦于類別-IIaHDACs在肌肉分化中的作用。由于為肌細胞增強因子2(MEF2)的轉染共-阻遏劑的原因，HDACs4、5、7和9都抑制肌細胞(肌細胞)的分化。使用HDAC抑制劑的最普遍毒性是輕度至中度的骨髓抑制。此外，惡心/嘔吐、疲勞和腹瀉是多種臨床試驗中的特征副作用。2003年9月18日公開的EP1485365描述了具有以下Markush式的制備、制劑和藥物性能。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其N-氧化物形式、藥學上可接受的加成鹽和立體化學異構形式，其中n、m、t、R1、R2、R3、R4、L、Q、X、Y、Z和"0具有如所述說明書中所定義的含義。在2006年2月2日公開的WO2006/010750公開了HDAC抑制劑JNJ26481585及其它化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>然而，HDAC抑制劑的治療學前景超過單個試劑的應用。受HDAC抑制劑影響的分子途徑使得它成為具有前景的聯(lián)合研究候選者?？紤]到效力和/或毒性，需要可以單獨或者協(xié)同其它治療劑提供臨床優(yōu)點的類別-I具體HDAC抑制劑。同樣，在癌癥治療學中，蛋白酶體抑制作用表示重要的最新研究策略。蛋白酶體是存在于所有在涉及細胞周期調整的蛋白質的降解中起作用的細胞中的多酶配合物。在細胞周期期間，多種關鍵的調節(jié)蛋白質，包括p53、細胞周期蛋白和依賴細胞周期蛋白的激酶p21wafl'eipl都通過泛素(ubiquitm)-蛋白酶體途徑暫時降解。對于細胞發(fā)展經(jīng)過細胞周期和經(jīng)受有絲分裂而言，需要這些蛋白質的有序降解。此外，對于轉染調節(jié)需要泛素-蛋白酶體途徑。EP788360、EP1312609、EP1627880、US6066730和US6083903/>開了可以用作蛋白酶體抑制劑的肽硼酸酯和酸化合物。一種N-吡。秦羰基-L-苯丙氨酸-L-亮氨酸硼酸化合物(PS-341,現(xiàn)在已知為硼替佐米(Bortezomib)或者Velcade(Millenium))在人類胂瘤異種移植才莫型中具有抗癌活性和已經(jīng)被批準用于治療患有再發(fā)性難治療多發(fā)性骨髓瘤的患者，并且當前正在對另外的適應癥進行臨床試馬全，包括另外的血液學癌癥以及實體肺瘤。硼替佐米通過導致錯折疊和其它受損蛋白質的出現(xiàn)從而活化細胞程序死亡的線粒體途徑而誘發(fā)細胞死亡，例如經(jīng)Bax-或者活性氧類依賴機制。硼替佐米導致泛素-偶聯(lián)的蛋白質被聚集成稱為聚集體的結構。聚集體似乎參與響應蛋白酶體抑制作用而被激活的細胞保護響應，所述細胞保護響應可能通過將泛素化蛋白質往復運送至溶酶體進行降解而被激活。硼替佐米-誘發(fā)聚集體構造可以利用HDAC抑制劑SAHA(辛二酰苯胺異羥肟酸)進4亍斷裂。SAHA還一皮證實對體外和體內正位胰癌異種移植沖莫型的細胞程序死亡具有協(xié)同作用(CancerResearch2006;66:(7)3773陽3781)。平(JournalofBiologicalChemistry2005;280:(29)26729-26734)。SAHA和LAQ824與硼替佐米的協(xié)同作用涉及到它們的HDAC6抑制活性。進一步需要提高蛋白酶體抑制劑對腫瘤生長的抑制效力和提供所述試劑的較低劑量以降低對患者不利的毒副作用的可能性。當前，并沒有關于乙?；潭扰c腫瘤響應的相關性的充分數(shù)據(jù)。快速、簡單和易于重現(xiàn)的定量由下述類別-I具體HDAC抑制劑或者包含所述HDAC抑制劑的組合物所引起的組織蛋白和非組織蛋白基質的乙?；潭鹊姆椒▽τ谒鼈兊奈磥響檬侵陵P重要的。本發(fā)明的目的是提供類別-I具體HDAC抑制劑和蛋白酶體抑制劑與如下所述類型的HDAC抑制劑的治療學組合，其具有強烈和特征的乙?；饔?、類別-I具體HDAC抑制作用、對腫瘤細胞生長的有利抑制作用和降低的不期望副作用。因此，根據(jù)本發(fā)明，我們提供了蛋白酶體抑制劑和式(I)的HDAC抑制劑的組合其藥學上可接受的酸或者堿加成鹽和立體化學異構形式，其中Rs選自氫；噻吩基；被二(C"烷基)氨基Cw烷基或者C"烷基哌嗪基C"烷基取代的噻吩基；呋喃基；苯基；或者被一個獨立地選自二(Q-4烷基)氨基Cw烷氧基、二(d—4烷基)氨基、二(d—4烷基)氨基4烷基、二(d—4烷基)氨基C!—4烷基(d-4烷基)氨基Cl4烷基、吡咯烷基Cw烷基、吡咯烷基d-4烷氧基或者d-4烷基哌。秦基Cw烷基的取代基取代的苯基。從取代基畫入二環(huán)系統(tǒng)中的線表示所示4建可以連接在二環(huán)系統(tǒng)的任何適宜環(huán)原子上。如以上定義和下文中所使用，d—4烷基的定義為具有1~4個碳原子的直鏈和支鏈飽和烴基，比如，例如為曱基、乙基、丙基、丁基、1-甲基乙基、2-甲基丙基等等；Cm烷基包括CM烷基及其具有5~6個碳原子的高級同系物，比如，例如為戊基、2-甲基-丁基、己基、2-曱基戊基等等。感興趣的式(I)化合物為其中"~為(a-2)的那些式(I)化合物。還感興趣的化合物為其中115為氫的那些式(I)化合物。仍然感興趣的化合物為其中RS位于對位的那些式(I)化合物。優(yōu)選的式(I)化合物為化合物No.6、No.100、No.104、No.128、No.144、No.124、No.154、No.125、No.157、No.156、No.159、No.163、No.164、No.168、No.169、No.127、No.171、No.170、No.172和No.173,對應于EP1485365中21-23頁表才各中所示的編號。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>最優(yōu)選的式(I)化合物為其中為(a-2)和115為氫的化合物(EP1485365中化合物No.6(R306465)),或者其藥學上可接受的加成鹽。在此使用的術語"組蛋白脫乙?；福?，和"HDAC"意圖是指任何從組蛋白N-末端賴氨酸殘基的s-氨基上除去乙?；拿讣易逯械囊环N。除非在上下文中另有說明，術語"組蛋白"意圖是指從任何物種中得到的任意組蛋白蛋白，包才舌H1、H2A、H2B、H3、H4和H5。人類HDAC蛋白或者基因產品，包括但不限于HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC-5、HDAC-6、HDAC-7、HDAC-8、HDAC畫9、HDAC-10和HDAC-11。所述組蛋白脫乙?；高€可以源于原生動物或者真菌源。術語"組織蛋白脫乙?；敢种苿?或者"組織蛋白脫乙酰基酶的抑制劑"用于鑒定能夠與組織蛋白脫乙?；赶嗷プ饔煤鸵种扑幕钚?更特別而言是它的酶活性)的化合物。抑制組織蛋白脫乙?；该富钚砸馕吨档徒M織蛋白脫乙酰基酶從組織蛋白或者其它蛋白質基質上除去乙?；哪芰?。優(yōu)選所述抑制作用是特異'〖生的，即組織蛋白脫乙?；敢种苿┮缘陀诋a生其它的、不相關的生物作用所需的抑制劑濃度的濃度降低組織蛋白脫乙酰基酶從組織蛋白或者其它蛋白質基質中除去乙?；哪芰?。術語"類別-I特異性HDAC抑制作用"或者"類別-I特異性HDAC抑制劑"用于鑒定以低于產生其它類型HDAC酶(比如，例如類別-IIa或者類別libHDACs)的抑制作用所需的抑制劑濃度的濃度降低類別-IHDAC族成員(HDAC1-3或者8)的酶活性的化合物。在此使用的術語"蛋白酶體"和"泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)"意圖是指UPS中所有組分的任何一種結構和功能，包括但不限于a)泛素(Ub)和泛素樣蛋白質(Ulp);f.e.SUMO、NEDD8和ISG15等等，b)泛素單體、K48-連接多泛素鏈和K63-連接多泛素鏈等等，c)El泛素-激活酶；f.e.Elub、ElSUMO、E1NEDD^。E1ISG15等等，d)El泛素-激活酶的亞單位；f.e.APPBP1、UBA3、SAE1和SAE2等等，e)E2泛素-偶聯(lián)酶；f.e.UBC9、UBC12和UBC8等等，f)E3泛素連接酶；f.e.RING隱fmgerE3s、simpleRING-fmgerE3s、cullm-基RING-fingerE3s、RBX1畫/RBX2陽依賴E3s、HECT-域E3s、U-boxE3s等等，g)SCF(SKPl畫Cullinl-F-box)E3泛素連接酶配合物，f.e.SCFSKP2、SCFB—tRcp和SCFFbw7等等，h)cullins,f.e.CUL1、CUL2、CUL3、CUL4和CUL5等等，i)F-box蛋白質，f.e.SKP2、B-TRCP蛋白質、FBW蛋白質等等，j)其他基質特異性接合體，f.e.BTB蛋白質、SOCS-box蛋白質、DDB1/2、VHL等等，k)蛋白酶體和它的組分等等，1)金屬異肽酶RPNll,蛋白酶體lid的亞單位，在它們纟皮破壞之前去泛素化UPS靶體，等等，m)金屬異肽酶CSN5，COP9-signalosome配合物的亞單位，負責從cullins中除去NEDD8,等等，n)通過E1泛素-激活酶進行的活化步驟，其中Ub/Ulp首先在它的C-末端甘氨酸殘基上進行腺普酸化，然后再在它的C-末端上被填充為碌u醇酯，o)Ub/Ulp/人E1泛素-激活酶向E2泛素偶4關酶的傳送，p)泛素-偶聯(lián)物的識別，q)基質-泛素配合物的傳送至蛋白酶體和與其結合，r)泛素除去，或者s)基質降解。術語"蛋白酶體抑制劑"和"泛素-蛋白酶體系統(tǒng)的抑制劑"用于鑒定能夠與UPS中的正常的、被改變的、過活化或者過表達的一種組分相互作用和抑制它的活性(更特別而言它的酶活性)的化合物。抑制UPS的酶活性意味著降低UPS組分實施其活性的能力。優(yōu)選所述抑制作用是特異性的，即蛋白酶體抑制劑以低于產生其它的、不相關的生物作用所需的抑制劑濃度的濃度降低UPS組分的活性。UPS組分活性的抑制劑包括但不限于a)通過阻斷Ub/Ulp訪問腺苦酸位置或者通過阻斷訪問ATP而抑制Ub或者Ulp的腺苷酰作用的抑制劑；f.e.伊馬替尼(Gleevec;Novartis)等等,b)E3或者E3-配合物與E2相互作用的干<1尤劑，c)基質和E3或者E3-配合物上的基質相互作用域之間相互作用的阻斷劑，比如阻斷p53(基質)和MDM2(RING-fingerE3)之間的相互作用，f.e.nutlins(通過結合MDM2)、RITA(通過結合p53的N末端)等等，d)E3連接酶配合物的阻斷劑，e)基質與泛素連接酶的人工召集，f.e.protacs等等，f)蛋白酶體和它的組分的抑制劑，f.e.硼替佐米、carfilzomib、NPI-0052、Bsc2118等等,g)泛素/Ulp除去抑制劑，比如金屬異肽酶RPN11和CSN5的抑制劑，或者h)修飾多泛素鏈，即ubistatins等等。如上文中所記載的藥學上可接受的酸加成鹽意指包括式(I)化合物能夠形成的治療活性的無毒酸加成鹽形式。通過用適當?shù)乃崽幚硭鰤A形式，可以將具有堿性性能的式(I)化合物轉化為它們藥學上可接受的酸加成鹽。適當?shù)乃岚?，例如，無機酸，比如氬卣酸(例如，氫氯酸或者氫溴酸)、硫酸、硝酸和磷酸等等；或者有機酸，比如，例如為乙酸、三氟乙酸、丙酸、羥基乙酸、乳酸、焦葡萄酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲石黃酸、乙磺酸、苯磺酸、對曱苯磺酸、環(huán)拉酸、水楊酸、對氨基水楊酸和樸酸等等。通過用適宜的有機或者無機堿處理所述酸形式，可以將具有酸性性能的式(I)化合物轉化成它們藥學上可接受的堿加成鹽。適當?shù)膲A鹽形式包括，例如，銨鹽、堿金屬和堿土金屬鹽(例如鋰、鈉、鉀、鎂和鈣鹽等等)，與有機堿形成的鹽，例如本乍生、N-曱基-D-葡糖胺、哈胺鹽，和與氨基酸，比如，例如精氨酸和賴氨酸等等形成的鹽。術語"酸或者堿加成鹽"還包括式(I)化合物能夠形成的水合物和溶劑加成形式。所述形式的實例為，例如水合物和醇化物等等。在上文使用的術語"式(I)化合物的立體化學異構形式"定義為式(I)化合物可能具有的所有由相同碳原子通過相同鍵接順序形成但是具有不可互變的不同立體結構的化合物。除非另作說明或者表明，化合物的合物。所述混合物可以含有基本分子結構的所述化合物的所有非對映異構體和/或對映異構體。式(I)化合物的所有立體化學異構形式(純形式或者相互混合的混合物形式)都意圖包括的本發(fā)明范圍之內。中未得到;確說明，但是i圖將這種形式包括在本i明范圍內。^無論在下文何時使用時，術語"式(i)化合物"都意圖還包括其藥學上可接受的酸或者堿加成鹽和所有立體異構形式。根據(jù)本發(fā)明，特別優(yōu)選的蛋白酶體抑制劑為硼替佐米。硼替佐米在市場上以商品名Velcade從Millennium購買到，并且可以例如如EP788360、EP1312609、EP1627880、US6066730和US6083903中所述或者通過與此類似的方法制備得到。本發(fā)明還涉及^f艮據(jù)本發(fā)明的用于醫(yī)療治療中的組合物，例如用于抑制胂瘤細胞生長。藥物組合物中的應用。本發(fā)明還涉及抑制人類對象中腫瘤細胞生長的方法，包括給藥對象有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合物。本發(fā)明進一步提供了通過給藥有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合物來抑制細胞異常生長的方法，包括變形的細胞。細胞的異常生長是指獨立于正常調節(jié)機制的細胞生長(例如，接觸性抑制的喪失)。這包括通過引起癌細胞生長停滯、成體終末分化和/或細胞程序死亡直接抑制肺瘤生長和通過抑制遷移、和肺瘤細胞存活或者肺瘤新血管形成間接抑制腫瘤生長。本發(fā)明還提供了通過給藥有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合物至需要所述治療的對象(并且更特別而言，為人類)而抑制腫瘤生長的方法。特別是，本發(fā)明提供了通過給藥有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合物而抑制腫瘤生長的方法。本發(fā)明特別適用于治療胰癌、淋巴樣系統(tǒng)的生血腫瘤(例如急性淋巴母細胞性白血病、急性髓性白血病、急性早幼粒細胞性白血病、急性骨髓性白血病、急性單核細胞性白血病、淋巴腺瘤、慢性B細胞血癌、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病急性變、伯基特氏腫瘤和多發(fā)性骨髓瘤)、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非霍金森氏淋巴腺瘤、黑素瘤、前列腺癌癥、乳腺癌和結腸癌。可以抑制的其它腫瘤的實例包括但不限于甲狀腺小嚢癌、脊髓發(fā)育不良綜合征(MDS)、間質源腫瘤(例如纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤)、畸胎癌、成神經(jīng)細胞瘤、膠質瘤、皮膚良性胂瘤(例如角化棘皮瘤)、腎癌、卯巢癌、膀胱癌和表皮癌。本發(fā)明還提供了通過給藥需要所述治療的哺乳動物(并且更特別是人類)有效量的式(I)組織蛋白去乙?；敢种苿┲委熂毙粤馨湍讣毎园籽?、急性髓性白血病、急性早幼粒細胞性白血病、急性骨髓性白血病、急性單核細胞性白血病、淋巴腺瘤、慢性B細胞血癌、慢性粒細胞性白血病、慢性粒細胞性白血病急性變、伯基特氏肺瘤和多發(fā)性骨髓瘤的方法。本發(fā)明還提供了通過給藥需要所述處理的對象(例如，哺乳動物(并且更特別是人類))有效量的單獨使用或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑的式(I)組織蛋白去乙酰基酶抑制劑來治療抗藥性肺瘤的方法，比如但不限于淋巴樣系統(tǒng)的生血性肺瘤，比如抗藥性急性淋巴母細胞性白血病、抗藥性急性髓性白血病、抗藥性急性早幼粒細胞性白血病、抗藥性骨髓性白血病、抗藥性急性單核細胞性白血病、抗藥性淋巴腺瘤、抗藥性慢性B細胞血癌、抗藥性慢性粒細胞性白血病、抗藥性慢性粒細胞性白血病急性變、抗藥性伯基特氏腫瘤和抗藥性多發(fā)性骨髓瘤。本發(fā)明特別適用于處理抗藥性多發(fā)性骨髓瘤，更特別是抗蛋白酶體抑制劑的多發(fā)性骨髓瘤，更特別是硼替佐米抵抗的多發(fā)性骨髓瘤的處理。術語"抗藥性多發(fā)性骨髓瘤"包括但不限于抗一種或者多種選自以下藥物的多發(fā)性骨髓瘤沙立度胺、地塞米松、來那度胺、阿霉素、長春新;咸、環(huán);壽酰胺、帕米膦酸、米爾法蘭、去纖苷、潑尼矛>、darinaparsin、belinostat、伏林司他、PD0332991、LBH589、LAQ824、MGCD0103、HuLuc63、AZD6244、帕唑帕尼、P276-00、plitidepsin、苯達莫司汀、坦螺旋霉素、enzastaurin、哌立福新、ABT-737或者RAD001。術語"抗藥性多發(fā)性骨髓瘤"還包括再發(fā)或者難治的多發(fā)性骨髓瘤。術語"抗藥的"是指表明固有抗性或者獲得性抗性的狀態(tài)。"固有抗性"是指關鍵基因的癌細胞在相關途徑中的特征表達靠模，包括但不限于細胞程序死亡、細胞發(fā)展和DNA修復，同它們的正常對照相比，其促進癌細胞具有更快生長的能力。"獲得性抗性"是指在胂瘤形成和發(fā)展過程中產生的可以影響癌細胞對藥物敏感性的多因素現(xiàn)象。獲得性抗性可以由于數(shù)種機制，比如但不限于藥物-靶體的改變、降低的藥物累積、胞內藥物分布的變化、降低的藥物-靶體相互作用、增強的解毒響應、細胞-周期反調節(jié)作用、增強的損傷-DNA修復和降低的凋亡響應。所述機制中的數(shù)種可以同時存在和/或可以彼此相互作用。它們的活化和/或鈍化可以由于遺傳性或者次生性事件產生或者由于oncoviral蛋白質的存在而產生。獲得性抗性可以對單個藥物存在，但是還可以對多種具有不同化學結構和不同作用機制的藥物更廣泛的存在。這種抗性形式^C稱為多藥物抗性。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以用于其它治療學目的，例如a)在輻射腫瘤以治療癌癥之前、期間或者之后通過給藥才艮據(jù)本發(fā)明的化合物來促進肺瘤對放射治療的敏感性；b)治療關節(jié)病和骨病理學癥狀，比如風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、少年關節(jié)炎、痛風、多發(fā)性關節(jié)炎、牛皮癬關節(jié)炎、強直性脊柱炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡；c)抑制平滑肌細胞增殖，包括血管增殖疾病、動脈粥樣硬化癥和再狹窄；d)治療炎性癥狀和皮膚病，比如潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、過敏性鼻炎、移植對宿主疾病、結膜炎、哞喘、ARDS、貝切特氏病、移植排斥、蕁麻滲、過敏性皮炎、斑形脫發(fā)、硬皮癥、皮滲、濕滲、皮膚肌炎、粉刺、糖尿病、系統(tǒng)紅斑狼瘡、川崎氏疾病、多發(fā)性腦硬化、氣腫、嚢性纖維化和慢性支氣管炎；e)治療子宮內膜異位、子宮的纖維狀、功能性月經(jīng)失調和子宮內膜增生；f)治療眼睛血管形成，包括影響視網(wǎng)膜和脈絡膜血管的血管病變；g)治療心臟功能障礙；h)抑制免疫抑制癥狀；比如HIV感染的治療；i)治療腎功能障礙；j)4中制內分)必病癥；k)抑制糖原異生功能障礙；1)治療例如帕金森氏癥的神經(jīng)病理學或者導致認知障礙的神經(jīng)病理學，例如，阿爾茨海默氏病或者多谷酰胺相關的神經(jīng)元疾??；m)治療精神錯亂，例如精神分裂癥、雙相性精神障礙、抑郁癥、焦慮和津青神?。籲)抑制神經(jīng)fl肉病理學，例如力幾萎縮性側索硬化；o)治療脊髓性肌萎縮；p)治療其它通過加強基因表達能夠檢驗從而進行治療的病理學癥狀；q)增強基因療法；r)抑制脂肪生成；s)治療寄生蟲病，比如瘧疾。由此，本發(fā)明公開了用作藥品的以上所述組合物，以及單獨或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑的式(I)類別-I特異性HDAC抑制劑用于制造治療一種或者多種上述狀況的藥物的用途。'由此，本發(fā)明公開了單獨或者協(xié)同使用的式(I)類別-I特異性HDAC抑制劑用于制造治療急性淋巴母細胞性白血病、急性髓性白血病、急性早幼粒細胞性白血病、急性骨髓性白血病、急性單核細胞性白血病、淋巴腺瘤、慢性B細胞血癌、慢性粒細胞性白血病、慢性粒細胞性白血病急性變、伯基特氏腫瘤和多發(fā)性骨髓瘤的藥物的用途。本發(fā)明還公開了單獨或者協(xié)同使用的式(I)類別-I特異性HDAC抑制劑用于制造治療抗藥性腫瘤的藥物的用途，所述腫瘤比如但不限于淋巴樣系統(tǒng)的生血性腫瘤，例如抗藥性急性淋巴母細胞性白血病、抗藥性急性髓性白血病、抗藥性急性早幼粒細胞性白血病、抗藥性急性骨髓性白血病、抗藥性急性單核細胞性白血病、抗藥性淋巴腺瘤、抗藥性慢性B細胞血癌、抗藥性慢性粒細胞性白血病、抗藥性慢性粒細胞性白血病急性變、抗藥性伯基特氏肺瘤和抗藥性多發(fā)性骨髓瘤。本發(fā)明進一步公開了單獨或者協(xié)同使用的式(I)類別-I特異性HDAC抑制劑用于制造治療抗藥性多發(fā)性骨髓瘤的藥物的用途，更特別是抗蛋白酶體抑制劑的多發(fā)性骨髓瘤，更特別是硼替佐米抵抗性的多發(fā)性骨髓瘤。蛋白酶體抑制劑和式(I)的HDAC抑制劑可以同時(例如，在分離或者單元組合物中)或者以任何次序順序給藥。在后一情形中，兩種化合物將在同一周期內和以足以確保有利的或者協(xié)同作用能夠實現(xiàn)的量和方式給藥。應當理解，優(yōu)選的給藥方法和次序以及各種組合組分的相應劑量和制度將取決于給藥的具體蛋白酶體抑制劑和HDAC抑制劑、組合的給藥途徑、進行治療的具體肺瘤和進行治療的具體主體。最優(yōu)的給藥方法和次序以及劑量和制度可以由本領域熟練技術人員利用常步見方法和考慮本文給出的信息輕易確定。本發(fā)明進一步涉及含有作為第一活性成分的式(I)HDAC抑制劑和作為笫二活性成分的蛋白酶體抑制劑的產品，該產品是在患有癌癥的患者治療中用于同時、分離或者順序應用的聯(lián)合制劑。本領域的熟練技術人員根據(jù)以下試驗結果可以4艮容易地確定其有效量。通常，預期式(I)化合物和蛋白酶體抑制劑的治療有效量為0.005mg/kg~100mg/kg體重，并且特別是0.005mg/kg~10mg/kg體重。在一天之中，可以適當?shù)貙⑺鑴┝恳赃m當?shù)拈g隔分為兩次、三次、四次或者更多次亞劑量給藥。可以將所述亞劑量配制成單位劑型，例如，每個單位劑型含有0.5~500mg活性成分，特別是10mg~500mg。鑒于它們的有效藥理學性能，可以將根據(jù)本發(fā)明的組合的組分，即蛋白酶體抑制劑和HDAC抑制劑配制成用于多種給藥目的的多種藥物形式?？梢詫⑦@些組分分離地配制在單個藥物組合物中或者含有這兩種組分的單元藥物組合物中。HDAC抑制劑可以通過本領域已知的方法制備和配制成藥物組合物，并且特別是根據(jù)在本文提及的公開和在此引入作為參考的專利說明書中描述的方法。因此，本發(fā)明還涉及含有蛋白酵體抑制劑和式(I)的HDAC抑制劑以及一種或者多種藥物載體的藥物組合物。為了制備根據(jù)本發(fā)明使用的藥物組合物，將有效量的為活性成分的堿或者酸加成鹽形式的具體化合物與藥學上可接受的載體合并成密混混合物，取決于期望給藥的制劑形式，所述載體可以為多種形式。這些藥物組合物合宜地為適宜的單元劑型，優(yōu)選用于口服給藥、直腸給藥、經(jīng)皮給藥或者經(jīng)腸胃外注射給藥的單元劑型。例如，在制備口服劑型的組合物中，可以使用任何常用的藥物介質，例如在口服液體制劑(例如懸浮液、糖漿劑、酏劑和溶液)的情況下，可以使用例如水、乙二醇、油和醇等等；或者在粉劑、丸劑、膠嚢和片劑的情況下，可使用固體載體，例如淀粉、糖、高嶺土、潤滑劑、結合劑和崩解劑等等。因為便于給藥，片劑和膠嚢表示最有利的口服劑量單位形式，在此情況下顯然使用固體藥物載體。對于胃腸外組合物，所述載體通常包括無菌水，至少含有大部分無菌水，不過也可以包含其它成分，例如，溶解輔助劑。例如，可以制成可注射液劑，其中載體包括鹽水溶液、葡萄糖溶液或者鹽水和葡萄糖溶液的混合物。還可以將其制成可注射混懸劑，在這種情況下可以使用適當?shù)囊后w載體和助懸劑等等。在適宜于經(jīng)皮給藥的組合物中，所述載體任選含有滲透增強劑和/或適宜的潤濕劑，任選與4支小比例的任何性質的適宜添加劑聯(lián)合使用，所述添加劑不能對皮膚產生任何顯著的有害作用。所述添加劑可以便于對皮膚的給藥和/或可以有助于制備期望的組合物。這些組合物可以以多種方法《合藥，例如，作為透皮貼片、作為spot-on或者作為膏劑。為了便于給藥和使劑量一致，將上述藥物組合物配制成單位劑型是特別有利的。在本發(fā)明說明書和權利要求書中使用的單位劑型是指適于用作單位劑量的物理分離單位，每個單位含有經(jīng)計算能產生期望的治療作用的預定量活性成分以及所需要的藥物載體。上述單位劑型的實施例是片劑(包含刻痕片劑或者糖衣片劑)、膠嚢、丸劑、粉劑包、紙嚢劑、注射溶液或者懸浮液、一茶匙容量的制劑和一湯匙容量的制劑等等，及其隔離的多重形式。在整個治療期間，可以適當?shù)貙⑺璧慕M合中各組分劑量以適當?shù)拈g隔分為兩次、三次、四次或者更多次亞劑量給藥?？梢詫⑺鰜唲┝颗渲瞥蓡挝粍┬停?，在所有情況下每個單位劑型獨立地含有0.01~500mg各活性成分，例如0.1~200mg和特別是1~100mg。術語"組織蛋白或者其他蛋白質的乙?；T導作用"表示誘導HDAC基質的乙酰化狀態(tài)，所述HDAC基質比如但不限于組織蛋白，例如組織蛋白3、組織蛋白4等等；微管蛋白，例如a-微管蛋白等等；熱震蕩蛋白質，例如Hsp90等等。術語"由所述乙?；δ苄哉{節(jié)的蛋白質的誘導作用，，表示比如但不限于誘導Hsp70、誘導p21等等的副作用。本發(fā)明還涉及表征單獨或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑的式(I)HDAC抑制劑的方法，包括測定樣品中組織蛋白或者其它蛋白質的乙?；T導量，或者通過所述乙?；δ苷{節(jié)的蛋白質誘導量。更特別是，本發(fā)明涉及表征單獨或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑的式(I)HDAC抑制劑的方法，包括測定樣品中的以下量a)組織蛋白3的乙?；T導量，組織蛋白4的乙?；T導量，或者p21的誘導量和b)a-微管蛋白的乙酰化誘導量，Hsp90的乙酰化誘導量，或者Hsp70的誘導量。最具體而言，本發(fā)明涉及以上方法，其中獲得a)下的誘導所需的濃度低于獲得b)下誘導所需的濃度。測定樣品中組織蛋白或者其它蛋白質的乙?；T導量或者通過所述乙酰化功能化調節(jié)的蛋白質的誘導量可以包括確定響應處理的患者和由此可以對人類癌癥的治療具有有益作用。測定樣品中組織蛋白或者其它蛋白質的乙酰化誘導量或者通過所述乙?；δ芑{節(jié)的蛋白質的誘導量可以包括監(jiān)控對患者治療的效力和由此可以對人類癌癥的治療具有有益作用。測定樣品中組織蛋白或者其它蛋白質的乙?；T導量或者通過所述乙酰化功能化調節(jié)的蛋白質誘導量可以包括預測對所述處理的治療學響應和由此可以對人類癌癥的治療具有有益作用。測定樣品中組織蛋白或者其它蛋白質的乙酰化誘導量或者通過所述乙?；δ芑{節(jié)的蛋白質的誘導量可以包括確定響應處理的患者、監(jiān)控患者中所述治療的效力和預測對處理的治療學響應，并且由此可以對人類癌癥的治療具有有益作用。由此，本發(fā)明還涉及單獨或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑的式(I)類別-I特異性HDAC,f制劑的用途，其中組織蛋白或者其它蛋白質的過乙酰化誘導作用或通過所述乙醜化功能化調節(jié)的蛋白質的誘導作用對人類癌癥的治療具有有益作用。樣品可以來源于已經(jīng)用所述HDAC抑制劑或者所述組合處理過的細月包。樣品還可以來源于受病癥影響的組織和/或用式(I)HDAC抑制劑或者蛋白酶體抑制劑和式(I)HDAC抑制劑的組合處理的個體。細胞可以是已經(jīng)與所述HDAC抑制劑或者所述組合接觸的培養(yǎng)細可以將所述抑制劑或者所述組合加入到細胞的生長培養(yǎng)基中。細月包還可以來源于組織和/或用所述抑制劑或者所述組合處理的個胞體優(yōu)選所述表征方法僅僅包括體外進行的步驟。因此，根據(jù)該實施方通常將細胞進行處理成適于所用方法、確定組織蛋白或者其它蛋白質的乙?；T導作用或通過所述乙?；δ芑{節(jié)的蛋白質誘導作用的狀態(tài)。所述處理可以包括均化作用、提取、固定、洗滌和/或透性化。處理方法主要取決于用于測定組織蛋白或者其它蛋白質的乙?；T導作用或通過所述乙?；δ芑{節(jié)的蛋白質的誘導作用的方法。樣品可以是來源于專利的活組織檢查。可以對所述活組織檢查進行進一步處理，從而得到處于適于用于確定組織蛋白或者其它蛋白質的乙酰化誘導作用或通過所述乙?；δ芑{節(jié)的蛋白質的誘導作用的方法的狀態(tài)的樣品。蛋白質的乙?；炕蛘哒T導蛋白量可以利用抗體確定。在此使用的術語"抗體"表示免疫球蛋白或者具有相同結合專一性的其衍生物。根據(jù)本發(fā)明使用的抗體可以是單克隆抗體或者來源于或者包含于多克隆抗血清的抗體。術語"抗體"進一步表示比如Fab、F(ab，)2、Fv或者scFv片l殳的書f生物。抗體或者其衍生物可以來源于天然來源或者可以(半)合成生產?？梢?吏用本領域通常已知的Western印跡法。可以對細月包材料或者組織進行均質化和用變性和/或還原劑處理，從而獲得樣品?？梢詫悠坟撦d在聚丙烯酰胺凝膠上以分離蛋白質，隨后將其轉到薄膜或者直接在固相上進行點樣。然后，使抗體與樣品接觸。在一個或者多個洗滌步驟之后，結合的抗體利用本領域已知的工藝檢測。在對組織材料e例如實體舯瘤力t切-片)-iM"齒定和透性化之后，可以應用免疫組織化學，然后抗體用樣品培養(yǎng)，和在一個或者多個洗滌步驟之后對結合抗體進行檢測。組織蛋白或者其它蛋白質的乙?；T導量或通過所述乙?；δ芑{節(jié)的蛋白質的誘導量可以通過ELISA進行確定?？梢栽O計多種ELISA形式。在一種形式中，將抗體固定在比如微孔板的固相上，隨后阻斷非特異結合位點和用樣品進行培養(yǎng)。在另一形式中，樣品首先與固相接觸從而固定包含于樣品中的乙?；鞍踪|和/或誘發(fā)的蛋白質。在阻斷和任選洗滌之后，使抗體與固定的樣品接觸。組織蛋白或者其它蛋白質的乙?；T導量或通過所述乙?；δ芑{節(jié)的蛋白質的誘導量可以通過流式細胞計進行確定。對細胞，比如細胞培養(yǎng)細胞或者血細胞或者來自于骨髓的細胞進行固定和透性化，從而使得抗體達到乙?；暮?或誘發(fā)的蛋白質。在任選的洗滌和阻斷步驟之后，使抗體與細胞接觸。為了測定具有與乙?；暮?或誘發(fā)的蛋白質結合的抗體的細胞，根據(jù)本領域已知的方法進行流細胞計數(shù)法。為了測定HDAC抑制劑或者蛋白酶體抑制劑和式(I)的HDAC抑制劑的組合是否具有它的活性，可以確定參照樣品中蛋白質的乙酰化量或者蛋白質的誘導量，其中參照樣品來源于未經(jīng)所述HDAC抑制劑或者所述組合處理的細胞。樣品和參照樣品中蛋白質的乙酰化量和/或誘導蛋白的量的測定可以平行進行。在細胞培養(yǎng)細胞的情形中，提供兩種細胞組合物，其中之一用所述HDAC抑制劑或者所述組合處理，而另一個未經(jīng)處理。隨后對兩種組合物進行進一步處理和對蛋白質的乙?；亢?或誘導蛋白量分別進行確定。另外地，為了確定HDAC抑制劑或者蛋白酶體抑制劑和式(I)的HDAC抑制劑的組合是否具有它的活性，可以測定對細胞增殖的抑制作用。在患者的情形中，樣品來源于已經(jīng)用式(I)HDAC抑制劑或者蛋白酶體抑制劑和式(I)HDAC抑制劑的組合處理的患者。參照樣品來源于患有相同病癥的未用所述HDAC抑制劑或者所述組合處理的另一患者或者來源于健康個體。參照樣品來源的組織相應于樣品來源的組織。例如，如果樣品來源于乳腺癌患者的肺瘤組織，參照樣品同樣來源于乳腺癌患者的腫瘤組織或者健康個體的乳房組織。還可以規(guī)定樣品和參照樣品來源于相同的個體。在這種情形中，參照樣品來源的組織由個體中得的后效果。試驗部分A.藥理學實施例對于對A2780肺瘤細胞確定的式(I)化合物的細胞活性，利用測定細胞毒性或者存活的比色定量法(MosmannTim,JournalofImmunologicalMethods65:55-63,1983),參考EP1485365的試驗部分。HDAC抑制劑的抗增殖作用已經(jīng)與由HDAC家族成員1-3和8組成的類別1HDACs的抑制作用相關聯(lián)。當與JNJ26481585、SAHA、LBH-589和LAQ-824相比時，R306465對由A2780細胞免疫沉淀的HDAC1的活性和它的效能可以發(fā)現(xiàn)于實施例A.l中。當與JNJ26481585、SAHA、LBH-589和LAQ-824相比時，R306465對HDAC8人類重組細胞酶的活性和它的效能可以發(fā)現(xiàn)于實施例A.2.中。進一步研究R306465是否調節(jié)HDAC1基質組織蛋白3(H3)和組織蛋白4(H4)的乙?；癄顟B(tài)。同樣還要研究對A2780卵巢癌細胞中的細胞周期蛋白依賴的激酶抑制劑p2rafl'"pl的誘導作用。由于組織蛋白乙酰化作用的結果，P2iwaf"^被再壓縮，和在響應HDAC抑制劑的細胞周期停滯誘導作用中起著關鍵作用(參見實施例A.3.)。為了評價HDAC6的抑制作用，和化合物對HDAC1與HDAC6的相對效能，對它的基質微管蛋白的乙?；饔靡约盀镠sp90乙酰化作用結果的Hsp70的誘導作用進行監(jiān)控(參見實施例A.3.)。實施例A:式(I)化合物的類別-I特異性和乙酰化作用實施例A.1:由A2780細胞免疫沉淀的HDAC1酶的抑制作用對于HDAC1活性測定，HDAC1由A2780細l包溶解產物中免疫沉淀，并按照所示的HDAC抑制劑的濃度曲線，和與H4肽的[3H]乙酰基-標記的片段(50.000cpm)[生物素-(6-氨基己?；?hexanoic))Gly-Ala-(乙醜基[3H]Lys-Arg-His-Arg-Lys畫Val-NH2](AmershamPharmaciaBiotech,Piscataway，NJ)—起培養(yǎng)。對HDAC活性進行評價，測量釋放的游離乙?；τ枞齻€獨立試i^，緒果表示為平均IC知值士SD。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>實施例A.2:HDAC8人類重組細胞酶的抑制作用對于人類重組細胞HDAC8的抑制作用，使用HDAC8Colorimetric/FlourimetricActivityAssay/DrugDiscoveryKit(Biomol;Cat.nr.AK-508)。對于三個獨立試馬全，結果表示為平均ICso值(nM)±SD。測定按一式兩份進行，和IC5o的標準誤差使用GraphpadPrism(GraphpadSoftware)計算。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>實施例A.3:細胞HDAC1基質的乙酰化作用和p2lwafl'Mpl的誘導作用人類A2780卵巢癌細胞用0、1、3、10、30、100、300、1000和3000nM的化合物培養(yǎng)24h。制備全細胞溶解產物和通過SDS-PAGE進行分析。乙?；腍3和H4組織蛋白水平、H3蛋白質的全水平和p2iwan'c^蛋白質的水平使用兔多克隆和鼠單克隆抗體的適當稀釋物檢測，和隨后進行增強的化學發(fā)光(ECL)檢測。乙?；腍3和H4的水平使用得自于UpstateBiotechnology的抗體(Cat.nr.06-299和06-866)檢測，H3蛋白質的全水平使用得自于Abeam的抗體(Cat.nr.abl791)檢測，和？2廣我叫]蛋白質的水平4吏用得自于TransductionLaboratories的抗體(Cat.nr.C24420)檢測?？贵w在室溫下培養(yǎng)1-2h或者在4。C培養(yǎng)過夜。為了控制相同的負載，對斑點進行汽提和用鼠單克隆抗肌動蛋白IgM(Ab-l,OncogeneResearchProducts)進行再探針檢測。為了控制核酸蛋白的提取效率，對斑點進行汽提和用抗核纖層蛋白Bl(Zymed;Cat.nr.33.2000)進行再探針檢測。然后，根據(jù)廠商說明書，通過化學發(fā)光(PierceChemicalCo)或者熒光(Odyssey)使蛋白質-抗體配合物可視化。實驗進行三次。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>實施例A.4.微管蛋白的乙?；饔煤虷sp70的誘導作用人類A2780卵巢癌細胞用0、1、3、10、30、100、300、1000和3000nM的化合物培養(yǎng)24h。制備全細胞溶解產物和通過SDS-PAGE進行分析?？偟暮鸵阴；奈⒐艿鞍椎乃绞褂玫米杂赟igmacloneDM1A(Cat.nr.T9026)和clone6-lllB(Cat.nr.T6793)的抗體檢測。Hsp70蛋白質使用來自于Stressgen的抗體(Cat.nr.SPA-810)檢測，隨后進行ECL檢測?？贵w的適當稀釋物在室溫下培養(yǎng)l-2h或者在4。C培養(yǎng)過j復。為了控制相同的負載，對斑點進行汽提和用鼠單克隆抗肌動蛋白IgM(Ab陽l,OncogeneResearchProducts)進^t再^果4十才全測。為了4空制核蛋白的提取效率，對斑點進行汽提和用抗核纖層蛋白Bl(Zymed;Cat.nr.33.2000)進行再探針檢測。然后，根據(jù)廠商說明書，通過化學發(fā)光(PierceChemicalCo)或者焚光(Odyssey)使蛋白質-抗體配合物可牙見化。實驗進行三次。<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>實施例B:人類血液學肺瘤細l包增殖的抑制作用人類血液學肺瘤細^5包系的盤內的R306465的抗增殖活性的評1介在Oncodesign(Dijon,France)進行外包。在濕潤的5%(302培養(yǎng)器中，在37°C下，作為在相應的適當培養(yǎng)介質中的細胞懸液使肺瘤細胞生長。將無類菌質體肺瘤細胞播種于96-孔平底微量滴定板中和在含有10%FCS的培養(yǎng)介質中，在37°C下培養(yǎng)24小時。然后，將腫瘤細胞暴露于載體(對照)或者升高濃度的R306465(5種不同的濃度*)、硼替佐米(5種不同的濃度*)或者多種比例的兩種藥物的組合。然后，將細胞另外培養(yǎng)72小時?；衔锏募毎舅鼗钚酝ㄟ^標準MTS測定，通過測量在490nm下的吸光率測得?；衔锵嗷プ饔?協(xié)同、相加或者拮抗作用)通過多重藥效分析進行計算和通過根據(jù)Chou&Talalay所述的方法學的中值方程原理進行[Chou等人(1984)Adv.EnzymeRegul.22:27-55;Chou等人(1991)inEncyclopaediaofhumanBiology.AcademicPress.2:371-379;Chou等人(1991)inSynergismandantagonisminchemotherapy.AcademicPress:61-102;Chou等人(1994)J.Natl.CancerInst.86:1517-1524]。*:基于作為單個試劑使用的各種藥物的抗增殖活性的預測定，在各個選定的細胞系中，選擇濃度使得不超過50%抑制作用。實施例B.l.:R306465的人類血液學肺瘤細胞增殖抑制作用。表F.l:結果表示為平均ICzw值(即，以nM表示的濃度需要達到40%的細胞增殖抑制作用)土SD(由3次獨立的可靠試-驗確定)。<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>實施例B.2.:硼替佐米對人類血液學肺瘤細胞增殖的抑制作用。表F.2:結果表示為平均1(34()值(即，以nM表示的濃度需要達至'-40%的細胞增殖抑制作用)±SD(由3次獨立的可靠試-驗確定)。<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>實施例B.3:R306465協(xié)同硼替佐米對人類血液學肺瘤細胞增殖的抑制作用。表3:結果表示為各個單獨研究中的中值CI值的平均復合指數(shù)(CI士SD)(3次獨立的可靠試驗)和由各個單獨組合比例計算。低于0.9的CI表示為協(xié)同'Synergy，(淡灰)，0.91~1.09的CI表示為加和'Additivity'(白色)；和高于1.1的CI表示為拮抗'Antagonism'(暗灰色)。<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>權利要求1.一種蛋白酶體抑制劑和式(I)的組織蛋白脫乙?；敢种苿┑慕M合其藥學上可接受的酸或者堿加成鹽和立體化學異構形式，其中id="icf0002"file="A2007800341790002C2.tif"wi="13"he="9"top="76"left="34"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>是選自以下的基團R5選自氫；噻吩基；被二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或者C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基取代的噻吩基；呋喃基；苯基；被一個獨立地選自二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基或者C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基的取代基取代的苯基。2.權利要求1中要求的組合，其中式(I)的組織蛋白脫乙?；?中制劑選自4t合辟勿No.6(R306465)、No.100、No.104、No.128、No.144、No.124、No.154、No.125、No.157、No.156、No.159、No.163、No.164、No.168、No.169、No.127、No.171、No.170、No.172和No.173<table>tableseeoriginaldocumentpage2</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>其中的Co.No.表示化合物編號。3.權利要求1或者權利要求2中要求的組合，其中式(I)的組織蛋白脫乙?；敢种苿镽306465(化合物No.6)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>4.權利要求1~3任一項要求的組合，其中蛋白酶體抑制劑為硼替佐米(Bortezomib)。5.權利要求1~4任一項要求的組合，為含有蛋白酶體抑制劑和式(I)的組織蛋白脫乙?；敢种苿┮约耙环N或者多種藥物載體的藥物組合物的形式。6.權利要求5中要求的組合，用于同時、分離或者順序使用。7.權利要求15任一項要求的組合，用于醫(yī)療治療學。8.權利要求1~5任一項要求的組合用于制造抑制腫瘤細胞生長的藥物的用途。9.組織蛋白脫乙?；敢种苿┯糜谥圃熘委熂毙粤馨湍讣毎园籽　⒓毙运栊园籽?、急性早幼粒細胞性白血病、急性骨髓性白血病、急性單核細胞性白血病、淋巴腺瘤、慢性B細胞血癌、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病急性變、伯基特氏肺瘤和多發(fā)性骨髓瘤的藥物的用途，其中所述組織蛋白脫乙?；敢种苿槭?I)化合物其藥學上可接受的酸或者堿加成鹽和立體化學異構形式，其中是選自以下的基團(a-l)(a-2)RS選自氫；噻吩基；被二(d—6烷基)氨基Cw烷基或者d—6烷基哌嗪基Cw烷基取代的噻吩基；呋喃基；苯基；被一個獨立地選自二(d.4烷基)氨基Cw烷氧基、二(Cw烷基)氨基、二(d-4烷基)氨基d—4烷基、二(d-4烷基)氨基d-4烷基(Cw烷基)氨基d-4烷基、吡咯烷基Cw烷基、吡咯烷基C,-4烷氧基或者C!-4烷基哌。秦基C!-4烷基的取代基取代的苯基。10.權利要求9要求的用途，其中所述藥物用于治療抗藥性急性淋巴母細胞性白血病、抗藥性急性髓性白血病、抗藥性急性早幼粒細胞性白血病、抗藥性急性骨髓性白血病、抗藥性急性單核細月包性白血病、抗藥性淋巴腺瘤、抗藥性慢性B細胞血癌、抗藥性慢性骨髓性白血病、抗藥性慢性骨髓性白血病急性變、抗藥性伯基特氏肺瘤和抗藥性多發(fā)性骨髓瘤。11.權利要求9和IO要求的用途，其中所述藥物用于治療硼替佐米抵抗多發(fā)性骨髓瘤。12.權利要求8~11任一項要求的用途，其中組織蛋白或者其它蛋白質的過乙酰化誘導作用或者通過所述乙?；δ苄哉{節(jié)的蛋白質的誘導作用對于人類癌癥的治療具有有益的作用。13.—種表征單獨或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑使用的如權利要求1~3任一項所定義的式(I)的組織蛋白脫乙?；敢种苿┑姆椒?，包括確定樣品中組織蛋白或者其它蛋白質的乙?；T導量，或者通過所述乙?；δ苄哉{節(jié)的蛋白質的誘導量。一種表征單獨或者協(xié)同蛋白酶體抑制劑使用的如權利要求1~3任一項所定義的式(I)組織蛋白脫乙?；敢种苿┑姆椒?，包括測定樣品中的以下量a)組織蛋白3的乙酰化誘導量，組織蛋白4的乙?；T導量，或者p21的誘導量和b)a-微管蛋白的乙酰化誘導量，Hsp90的乙酰化誘導量，或者Hsp70的誘導量。全文摘要本發(fā)明涉及用于抑制腫瘤細胞生長的蛋白酶體抑制劑和類別-I特異性組織蛋白脫乙?；敢种苿┑慕M合，其可用于癌癥的治療中。文檔編號A61K45/06GK101516375SQ200780034179公開日2009年8月26日申請日期2007年9月11日優(yōu)先權日2006年9月15日發(fā)明者J·阿茨,M·J·帕格,M·M·F·賈尼科特,P·W·J·赫爾曼斯申請人:詹森藥業(yè)有限公司