專利名稱：：Hla肽療法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及肽療法，具體地但非唯一地，涉及肽免疫療法用于治療或預(yù)防同種異體移植物排斥的用途。本發(fā)明可擴(kuò)展到各種構(gòu)建體，以及使用這類構(gòu)建體治療移植患者的方法，例如治療患有終末期腎功能衰竭(ESRF)需要腎移植的患者。
背景技術(shù)：
：腎移植的效果在中短期時(shí)良好。然而，在長(zhǎng)期時(shí)，腎功能總是會(huì)由于慢性移植物(移植)腎病而喪失。這很大程度是由于兩種進(jìn)行中的現(xiàn)象(i)慢性排斥；和(ii)鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶抑制劑腎毒性。這兩種現(xiàn)象均會(huì)與預(yù)先存在的結(jié)果的決定因素相互影響，所述決定因素即在移植前和移植后的早期對(duì)腎實(shí)質(zhì)造成的慢性損傷。此外，在移植受體體內(nèi)進(jìn)行必須進(jìn)行的長(zhǎng)期免疫抑制會(huì)帶來(lái)不良后果，例如對(duì)感染和惡性腫瘤(malignancy)的易感性增加。作為對(duì)患有ESRF的患者的治療的移植的好處表現(xiàn)在生活質(zhì)量和增加的存活率這兩者上。然而，對(duì)移植的漫長(zhǎng)等待可能會(huì)使個(gè)體感到挫折感并且大大地影響長(zhǎng)期的結(jié)果。許多因素決定了等待時(shí)間，但是特別重要的是在移植受體體內(nèi)存在抗體，所述抗體顯示出針對(duì)存在于可能的供體器官上的被稱為人白細(xì)胞抗原(HLA)的多態(tài)分子的免疫特異性。由所述移植受體所產(chǎn)生的抗-HLA抗體可以導(dǎo)致非?？焖俚陌l(fā)病或者對(duì)所述移植器官的'超急性，排斥，因此必須在移植之前確定它們的存在。然后，拒絕所述可能的受體接受帶有相關(guān)HLA的移植物，且所述患者必須等待特定HLA抗原的器官，所述患者體內(nèi)會(huì)不產(chǎn)生針對(duì)所述HLA抗原的抗體?？?HLA抗體可能會(huì)被妊娠、輸血和移植所激發(fā)。紅細(xì)胞生成素的使用已經(jīng)減少了輸血，并且通過(guò)器官分配得以增強(qiáng)的HLA匹配已經(jīng)減少了由移植導(dǎo)致的對(duì)抗體合成的刺激。然而，抗-HLA抗體的產(chǎn)生——即"HLA致敏"——仍然是移植的一個(gè)明顯難題。這一點(diǎn)在患有長(zhǎng)期ESRF(通常從青年時(shí)期開(kāi)始)且累積大量接觸同種異體的(即外源HLA)的患者中特別明顯。由B淋巴細(xì)胞形成親和力成熟型轉(zhuǎn)換的抗-HLA抗體的過(guò)程需要存在T輔助細(xì)胞。用于抗體產(chǎn)生的T輔助細(xì)胞的存在意味著T細(xì)胞受體通過(guò)間接途徑銜接HLA。CD4+T淋巴細(xì)胞可以通過(guò)常規(guī)機(jī)制識(shí)別同種異體的HLA，所述機(jī)制為由自體抗原呈遞細(xì)胞吸收、加工成為肽并且在自身MHCn類中呈遞。這被稱為同種異體識(shí)別的間接途徑。除了其在抗體形成中的作用之外，人們認(rèn)為T(mén)細(xì)胞還在慢性排斥反應(yīng)中起到特別重要的作用。同種異體識(shí)別的直接途徑是自體-MHC的特異性T細(xì)胞受體與同種異體MHC(帶有相關(guān)肽)上的名義(nominal)外源肽的交叉反應(yīng)。人們認(rèn)為這在急性排斥反應(yīng)中特別重要。因此，本發(fā)明的發(fā)明人認(rèn)為用于最小化、預(yù)防或完全消除所述同種異體識(shí)別的間接途徑的治療方法能夠降低排斥反應(yīng)的可能性和抗-HLA抗體的合成，所以在接受移植物之前和之后均特別有價(jià)值。移植方面的免疫研究的長(zhǎng)期目標(biāo)是開(kāi)發(fā)免疫應(yīng)答的抗原特異性調(diào)節(jié)方法，所述免疫應(yīng)答會(huì)導(dǎo)致不必要的非特異性免疫抑制。盡管完全消除對(duì)免疫抑制的需求可能是不現(xiàn)實(shí)的，但是發(fā)明人意識(shí)到在特異性方面的任何進(jìn)步都將會(huì)是受歡迎的。非抗原特異性免疫抑制在調(diào)節(jié)慢性排斥反應(yīng)和抗-HLA抗體合成過(guò)程中似乎作用有限。然而，雖然發(fā)明人不希望受限于任何假說(shuō)，但他們相信間接呈遞的抗原特異性減少或抑制可以減少慢性排斥反應(yīng)和HLA抗體合成。通過(guò)與變態(tài)反應(yīng)領(lǐng)域中的證據(jù)進(jìn)行類比，發(fā)明人推測(cè)基于抗原片段(即肽)的治療方法將被證明是有益的。
發(fā)明內(nèi)容因此，發(fā)明人開(kāi)發(fā)了一種可以調(diào)節(jié)人體內(nèi)同種異體識(shí)別的間接途徑的肽免疫治療技術(shù)。他們相信這種治療技術(shù)具有對(duì)同種異體免疫應(yīng)答進(jìn)行抗原特異性調(diào)節(jié)的潛力。為了測(cè)試他們的假說(shuō)，他們研究了患者體內(nèi)的間接的同種異體識(shí)別，所述患者體內(nèi)存在特異性的間接同種異體應(yīng)答的證據(jù)。因此發(fā)明人選擇研究已經(jīng)產(chǎn)生了具有已知特異性的抗HLA抗體的患者，因?yàn)檫@意味著存在特異性的間接同種異體應(yīng)答。發(fā)明人的研究7是基于圖1中所示出的共同且有問(wèn)題的MHCI類抗原分子一一HLA-A2。發(fā)明人想準(zhǔn)確地理解是該抗原分子的哪一部分能夠通過(guò)所述間接途徑激發(fā)T淋巴細(xì)胞，并由此在這些患者體內(nèi)幫助抗-HLA-A2抗體合成。因此，使用生物信息學(xué)設(shè)計(jì)了一系列共60種重疊的15聚體肽，所述肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2分子的不同區(qū)域并且構(gòu)成了所述'表位圖語(yǔ)，的基礎(chǔ)。人們認(rèn)為這種對(duì)應(yīng)于HLA-A2的'圖鐠，在不同個(gè)體之間可能不同，這取決于基因控制元件例如HLA-DR,以及任何與HLA-A2的預(yù)先接觸的性質(zhì)，即致敏。令人吃驚的是，由于合成方法中的技術(shù)難題，所設(shè)計(jì)的60種重疊肽中有7種肽無(wú)法合成。發(fā)明人不希望受限于任何假說(shuō)，他們相信這是因?yàn)樗鰺o(wú)法合成的7種肽的極端疏水性的緣故。發(fā)明人研究了圖3中所列出的所述53種肽——命名為pl-p53——的生物化學(xué)特性，以觀察哪些肽最有可能通過(guò)與MHCn類分子特別是HLA-DR結(jié)合從而通過(guò)同種異體識(shí)別的間接途徑起到刺激因子的作用，所述53種肽是根據(jù)HLA-A2合成的。通過(guò)使用一種基于ELISA的系統(tǒng)，發(fā)明人測(cè)量了這53種重疊肽與各種純化的匪cn類分子的結(jié)合親和力。所測(cè)試的各種MHCII類分子包括DR1、DR3、DR4、DR7、DRll、DR13、DR15、DR51、DR52、DR53、DP0401和DP0402。發(fā)明人吃驚地發(fā)現(xiàn)，來(lái)源自HLA-A2分子上數(shù)個(gè)位置的肽會(huì)與MHCn類隨機(jī)結(jié)合。然后，發(fā)明人通過(guò)使用30種所述肽刺激來(lái)自于27個(gè)有記載的移植患者的外周血單核細(xì)胞(PBMC)進(jìn)行了體外研究，所述患者具有已知的抗體致敏病史。一些受測(cè)試的患者已經(jīng)凈皮HLA-A2預(yù)先致敏并因此確實(shí)可產(chǎn)生抗-HLA-A2抗體，另一些患者已經(jīng)被HLA-A2之外的其他HLA抗原預(yù)先致敏，并且另一些患者沒(méi)有抗-HLA-A2抗體。根據(jù)受試者自身的HLA-A2表達(dá)情況將其分組。因此，發(fā)明人希望系統(tǒng)地確定產(chǎn)生的間接同種異體免疫應(yīng)答所針對(duì)的肽表位。這些將構(gòu)成用于治療患者以回復(fù)和預(yù)防HLA-A2致敏的候選治療肽。為了對(duì)產(chǎn)生應(yīng)答的患者細(xì)胞的數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)，發(fā)明人使用了一種被稱為"Y-干擾素酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法"的技術(shù)檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞因子的產(chǎn)生。令發(fā)明人吃驚的是，他發(fā)現(xiàn)來(lái)源于并且對(duì)應(yīng)于HLA-A2分子某些區(qū)域的肽可能對(duì)移植患者有有益作用。令發(fā)明人更加吃驚的是，他發(fā)現(xiàn)來(lái)源于HLA-A2的ot3結(jié)構(gòu)域和/或跨膜結(jié)構(gòu)域的肽可能對(duì)移植患者有有益作用。因此，由于這些數(shù)據(jù)，發(fā)明人相信他們是最先發(fā)現(xiàn)和報(bào)道HLA-A2來(lái)源肽或者其衍生物或類似物的第一醫(yī)藥用途的。發(fā)明人選擇HLA-A2作為他們研究的靶抗原，因?yàn)镠LA-A2是人體內(nèi)最常見(jiàn)的類型(約50%)。他們假定抑制抗-HLA-A2特異性B細(xì)胞激活途徑中的T輔助細(xì)胞將會(huì)減少抗-HLA-A2抗體的合成。因此，發(fā)明人相信來(lái)源自HLA-A2的肽或者其衍生物或類似物將具有非常廣泛的治療用途。例如，這類治療用途包括，例如在需要反復(fù)進(jìn)行血小板輸注的患者中治療特征為同種異體致敏的醫(yī)學(xué)病癥。發(fā)明人還已經(jīng)證實(shí)了許多來(lái)源自HLA-A2的多肽也存在于其他MHCI類HLA蛋白中，特別是HLA-B中。因此，本發(fā)明提供了一種多肽或者其衍生物或類似物，所述多肽由不足30個(gè)來(lái)源自MHCI類人白細(xì)胞抗原(HLA)的oc3結(jié)構(gòu)域和/或跨膜結(jié)構(gòu)域的連續(xù)氨基酸構(gòu)成。本發(fā)明還提供了-一種編碼本發(fā)明的多肽，衍生物或類似物的核酸分子；-一種含有本發(fā)明的核酸分子的重組載體；-一種包含本發(fā)明的重組栽體的宿主細(xì)胞；-一種藥物組合物，包括治療有效量的本發(fā)明的多肽、衍生物或類似物或者本發(fā)明的核酸分子，以及任選地可藥用載體；-一種用于制備藥物組合物的方法，所述藥物組合物包括治療有效量的本發(fā)明的多肽、衍生物或類似物或者本發(fā)明的核酸分子，以及可藥用載體；-一種來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物，用作藥劑；——種編碼來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物的核酸分子，或者一種在嚴(yán)格條件下與編碼來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分子，用作藥劑；_下述物質(zhì)(a)至少一種來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其f;f生物或類似物；(b)至少一種編碼(a)的多肽、衍生物或類似物的核酸分子；或(c)至少一種在嚴(yán)格條件下與(b)的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分子；用于制備一種用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏的病癥的藥劑的用途。-一種用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏的病癥的方法，所述方法包括給予需要這種治療的受試者治療有效量的(a)至少一種來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物；(b)至少一種編碼(a)的多肽、衍生物或類似物的核酸分子；或(c)至少一種在嚴(yán)格條件下與(b)的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分子；和——種刺激T細(xì)胞的體外方法，所述方法包括在可刺激所述T細(xì)胞的條件下使所述T細(xì)胞接觸(a)—種來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物；(b)—種編碼(a)的多肽、衍生物或類似物的核酸分子；或(c)一種在嚴(yán)格條件下與(b)的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分從而刺激所述T細(xì)胞。圖l為人MHCI類HLA-A2的胞外部分的三維結(jié)構(gòu)示意圖，示出了al、oc2、oc3和跨膜結(jié)構(gòu)域，以及結(jié)合于該處的P2微球蛋白。圖2為HLA-A2的胞外部分的示意圖，示出了al、a2、a3和跨膜結(jié)構(gòu)域的氨基酸和DM序列。圖3為一張列出了53種涵蓋有多個(gè)HLA-A2區(qū)域的肽(pl-p53)、它們的分子量和它們的實(shí)際序列的表格。所述53種肽用于實(shí)施例1和實(shí)施例2中。圖4示出了由實(shí)施例1中的結(jié)合親和力研究得到的數(shù)據(jù)，所述結(jié)合親和力研究是對(duì)圖2中所示的53種肽與純化的MHCn分子DRl、DR3、DR4、DR7、DRll、DR13、DR15、DR51-DRB5、DR52-DRB4和DR53-DRB3進(jìn)行的。圖5為人MHCI類HLA-A2的胞外部分和肽p39(HLA-A2的192-206位殘基)的結(jié)構(gòu)示意圖。圖6為人MHCI類HLA-A2的胞外部分以及肽p50(HLA-A2的268-282位殘基)和p51(HLA-A2的270-284位殘基)的結(jié)構(gòu)示意圖。圖7為人MHCI類HLA-A2的胞外部分以及肽p52(HLA-A2的280-294位殘基)和p53(HLA-A2的282-296位殘基)的結(jié)構(gòu)示意圖。圖8為示出了單個(gè)患者體內(nèi)反應(yīng)細(xì)胞/500,000PBMC針對(duì)實(shí)施例1中所研究的肽的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)的柱狀圖。圖9示出了由實(shí)施例1中的結(jié)合親和力研究得到的數(shù)據(jù)，所述結(jié)合親和力研究是對(duì)圖2中所示的53種肽與純化的MHCn分子DRl、DR3、DR4、DR7、DRll、DR13、DR15、DR51-DRB5、DR52-DRB4和DR53-DRB3進(jìn)行的。對(duì)53種不同肽中的每一種來(lái)說(shuō)，以nM為單位的IC50是通過(guò)至少三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)評(píng)估得出的。生物素化的參照肽是HLA-DR分子的良好結(jié)合分子(binder)并且具有下述IC50:HA316-318(PKYVKQNTLKLAT)對(duì)HLA-DRB1*0101(1nM;pH6)、HLADRB1*0401(22nM;pH6)、HLA-DRB1*1101(19nM;pH5)和HLA-DRB5*0101(8nM;pH5.5);YKL(AAYAAAKAAALAA)對(duì)HLADRB1*0701(6nM;pH5);MT2-16(AKTIAYDEEARRGLE)對(duì)DRB1*0301(303nM;pH4.5);Bl21-36(TERVRLVTRHIY證E)對(duì)HLA-DRB1*1301(131nM;pH4.5);A3152-166(EAEQLRAYLDGTGVE)對(duì)HLA-DRB1*1501(59nM;pH4.5);LOL191-210(ESWGA雨IDTPDKLTGPFT)對(duì)HLA-DRB3木0101(20nM;pH5.5);和E2/E168(AGDLLAIETDKATI)對(duì)HLA-DRB4*0101(27nM;pH5)。*是指后續(xù)功能測(cè)定中組合4吏用的相鄰肽對(duì)。圖IO示出了實(shí)施例2中的研究受試者的年齡、性別、組織類型、移植、輸血和致敏歷史。根據(jù)受試者體內(nèi)是否存在HLA-A2以及他們是否產(chǎn)生抗HLA-A2或其他HLA的抗體來(lái)定義不同的患者組。組1:HLA-A2陰性且有抗HLA-A2的抗體；組2:HLA-A2陰性且有抗非A2類HLA的抗體；組3:HLA-A2陰性且無(wú)形成抗HLA抗體的歷史；組4:HLA-A2陽(yáng)性且有抗非A2類HLA的抗體；組5:HLA-A2陽(yáng)性且無(wú)形成抗HLA抗體的歷史。圖11為示出了單個(gè)患者體內(nèi)反應(yīng)細(xì)胞/500，000PBMC針對(duì)實(shí)施例2中所研究的肽的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)的條線圖。示出了一個(gè)受試者的在存在或不存在濃度不斷增加(l、10和50jig/ml)的抗MHCII類抗體(Tu39，BectonDickinson,Oxford,UnitedKingdom)的條件下培養(yǎng)的每孔中對(duì)應(yīng)細(xì)胞(5x105PBMC)的平均數(shù)目。在抗MHCII類的濃度最高時(shí)加入濃度為50lugmri的抗HLA-DR抗體(L243BectonDickinson)。將PBMC在下述條件下培養(yǎng)20jagml—i的肽(p39、p50/51或p52/53)、20Hgml—'的PPD、與Y-干擾素酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)板(Mabtech)—同提供的抗CD3陽(yáng)性對(duì)照或僅培養(yǎng)基。圖12示出了由一些圖2中的肽所導(dǎo)致的T細(xì)胞增殖。示出了應(yīng)答明顯高于本底的個(gè)體針對(duì)每個(gè)肽或肽對(duì)(x軸)的平均y-干擾素的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)頻率/5x105PBMC(y軸)。研究了濃度為20jigm廠i(如圖所示)或4jigmri的21種不同的肽或肽對(duì)。陽(yáng)性對(duì)照為10lagml—i的ppd或1ygml—1的破傷風(fēng)類毒素或者在一些后期的實(shí)驗(yàn)中為與y-干擾素酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)板(Mabtech)—同提供的抗CD3。括號(hào)中示出了HLA-DR類型的有效組(responder)。圖13為肽p39(HLA-A2的第192-206位殘基)的結(jié)構(gòu)示意圖。它還示出了p39與各種HLA-B等位基因中的對(duì)應(yīng)序列之間的差異。圖14為肽p40(HLA-A2的第202-216位殘基)的結(jié)構(gòu)示意圖。它還示出了p39與各種HLA-B等位基因中的對(duì)應(yīng)序列之間的差異。圖15為肽p50(HLA-A2的第268-282位殘基)和p51(HLA-A2的第270-284位殘基)的結(jié)構(gòu)示意圖。它還示出了p39與各種HLA-B等位基因中的對(duì)應(yīng)序列之間的差異。圖16為肽p52(HLA-A2的第280-294位殘基)和p53(HLA-A2的第282-296位殘基)的結(jié)構(gòu)示意圖。它還示出了p39與各種HLA-B等位基因中的對(duì)應(yīng)序列之間的差異。序列的說(shuō)明SEQIDN0:1示出了人MHCI類抗原HLA-A2(即所述HLA*020101等位基因)的全長(zhǎng)氨基酸序列。SEQIDN0:2示出了人MHCI類抗原HLA-A2(即所述HLA*020101等位基因)的成熟氨基酸序列。換言之，SEQIDN0:2示出了HLA-A2的序列且不具有其信號(hào)序列。SEQIDN0:2相當(dāng)于SEQIDNO:1的第25-365位殘基。SEQIDNO:3示出了編碼SEQIDNO:1中所示的全長(zhǎng)人MHCI類抗原HLA-A2(即所述HLA*020101等位基因)的核酸序列。SEQIDN0:4示出了圖2SEQIDNO:5示出了圖2SEQIDN0:6示出了圖2SEQIDN0:7示出了圖2SEQIDN0:8示出了圖2SEQIDN0:9示出了圖2SEQIDNO:IO示出了圖SEQIDNO:ll示出了圖SEQIDNO:12示出了圖SEQIDN0:13示出了圖SEQIDN0:14示出了圖SEQIDN0:15示出了圖SEQIDN0:16示出了圖SEQIDN0:17示出了圖SEQIDN0:18示出了圖SEQIDN0:19示出了圖SEQIDN0:20示出了圖SEQIDN0:21示出了圖SEQIDNO:22示出了圖SEQIDNO:23示出了圖SEQIDN0:24示出了圖SEQIDNO:25示出了圖SEQIDN0:26示出了圖SEQIDNO:27示出了圖SEQIDN0:28示出了圖SEQIDN0:29示出了圖SEQIDNO:30示出了圖SEQIDN0:31示出了圖SEQIDNO:32示出了圖SEQIDNO:33示出了圖SEQIDNO:34示出了圖SEQIDNO:35示出了圖中的pi的氨基酸序列。中的p2的氛基l亭列。中的p3的氨基酸序列。中的p4的氨基酸序列。中的p5的氨基酸序列。中的p6的氨基酸序列。2中的p7的氨基酸序列。2中的p8的氨基酸序列。2中的p9的氨基酸序列。2中的plO的氨基酸序列。2中的pll的氨基酸序列。2中的p12的氨基酸序列。2中的p13的氨基酸序列。2中的p14的氨基酸序列。2中的p15的氨基酸序列。2中的p16的氨基酸序列。2中的p17的氨基酸序列。2中的p18的氨基酸序列。2中的p19的氨基酸序列。2中的p20的氨基酸序列。2中的p21的氨基酸序列。2中的p22的氨基酸序列。2中的p23的氨基酸序列。2中的p24的氨基酸序列。2中的p25的氨基酸序列。2中的p26的氨基酸序列。2中的p27的氨基酸序列。2中的p28的氨基酸序列。2中的p29的氨基酸序列。2中的p30的氨基酸序列。2中的p31的氨基酸序列。2中的p32的氨基酸序列。SEQIDNO:36示出了圖2中的p33的氨基酸序列。SEQIDNO:37示出了圖2中的p34的氨基酸序列。SEQIDNO:38示出了圖2中的p35的氨基酸序列。SEQIDNO:39示出了圖2中的p36的氨基酸序列。SEQIDNO:40示出了圖2中的p37的氨基酸序列。SEQIDNO:41示出了圖2中的p38的氨基酸序列。SEQIDNO:42示出了圖2中的p39的氨基酸序列。SEQIDNO:43示出了圖2中的p40的氨基酸序列。SEQIDNO:44示出了圖2中的p41的氨基酸序列。SEQIDNO:45示出了圖2中的p42的氨基酸序列。SEQIDNO:46示出了圖2中的p43的氨基酸序列。SEQIDNO:47示出了圖2中的p44的氨基酸序列。SEQIDNO:48示出了圖2中的p45的氨基酸序列。SEQIDNO:49示出了圖2中的p46的氨基酸序列。SEQIDNO:50示出了圖2中的p47的氨基酸序列。SEQIDNO:51示出了圖2中的p48的氨基酸序列。SEQIDNO:52示出了圖2中的p49的氨基酸序列。SEQIDNO:53示出了圖2中的p50的氨基酸序列。SEQIDNO:54示出了圖2中的p51的氨基酸序列。SEQIDNO:55示出了圖2中的p52的氨基酸序列。SEQIDNO:56示出了圖2中的p53的氨基酸序列。SEQIDNO:57示出了p50/51的氨基酸序列(SEQ268-282位和第270-284位的重疊氨基酸)。SEQIDNO:58示出了p52/53的氨基酸序列(SEQIDNO:2的第280-294位和第282-296位的重疊氨基酸)。SEQIDNO:59示出了p45/46的氨基酸序列(SEQIDNO:1的第239-253位和第241-256位的重疊氨基酸)。SEQIDNO:60示出了p39類似物1的氨基酸序列。SEQIDNO:61示出了p39類似物2的氨基酸序列。SEQIDNO:62示出了p39類似物3的氨基酸序列。SEQIDN0:63示出了p40類似物的氨基酸序列。SEQIDNO:64示出了p50/51類似物1的氨基酸序列。SEQIDNO:65示出了p52/53類似物1的氨基酸序列。SEQIDNO:66示出了p50/51類似物2的氨基酸序列。SEQIDNO:67示出了p50/51類似物3的氨基酸序列。SEQIDNO:68示出了p50/51類似物4的氨基酸序列。SEQIDNO:69示出了p52/53類似物2的氨基酸序列。SEQIDNO:70示出了p52/53類似物3的氨基酸序列。SEQIDNO:71示出了p52/53類似物4的氨基酸序列。SEQIDNO:72示出了p52/53類似物5的氨基酸序列。SEQIDNO:73示出了p45/46類似物1的氨基酸序列。SEQIDNO:74示出了p45/46類似物2的氨基酸序列。SEQIDNO:75示出了編碼pl的核酸序列。SEQIDNO:76示出了編碼p2的核酸序列。SEQIDNO:77示出了編碼p30的核酸序列。SEQIDNO:78示出了編碼p39的核酸序列。SEQIDNO:79示出了編碼p40的核酸序列。SEQIDNO:80示出了編碼p50的核酸序列。SEQIDNO:81示出了編碼p51的核酸序列。SEQIDNO:82示出了編碼p52的核酸序列。SEQIDNO:83示出了編碼p53的核酸序列。SEQIDNO:84示出了編碼p45的核酸序列。SEQIDNO:85示出了編碼p46的核酸序列。SEQIDNO:86示出了編碼p50/51的核酸序列。SEQIDNO:87示出了編碼p52/53的核酸序列。SEQIDNO:88示出了編碼p45/46的核酸序列。SEQIDNO:89示出了編碼p20的核酸序列。SEQIDNO:90示出了編碼p21的核酸序列。SEQIDNO:91示出了編碼p39類似物1的核酸序列。SEQIDNO:92示出了編碼p50/51類似物1的核酸序列。SEQIDNO:93示出了編碼p52/53類似物1的核酸序列。SEQIDNO:94示出了編碼p40類似物的核酸序列。SEQIDNO:95示出了編碼p45/46類似物1的核酸序列。SEQIDNO:96示出了編碼p45/46類似物2的核酸序列。具體實(shí)施方式多肽本發(fā)明提供了一種多肽或者其衍生物或類似物，所述多肽由不足30個(gè)來(lái)源自主要組織相容性復(fù)合物(MHC)I類人白細(xì)胞抗原(HLA)的ot3結(jié)構(gòu)域和/或跨膜結(jié)構(gòu)域的連續(xù)氨基酸構(gòu)成。本發(fā)明還考慮到來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物用作藥劑的用途。本文所用的術(shù)語(yǔ)"匪CI類HLA"是指在2005年第14屆國(guó)際HLA和免疫遺傳學(xué)研討會(huì)上定義為MHCI類HLA的任何基因產(chǎn)物(例如，標(biāo)記為SEQIDNO:1的蛋白)。所述基因產(chǎn)物與人MHCI類HLA等位基因(例如，標(biāo)記為SEQIDNO:3的)所編碼的基因產(chǎn)物和/或與來(lái)源自其他物種的人HLA同系物或者其變體或功能片段具有至少50%的同一性。更優(yōu)選地，MHCI類HLA基因產(chǎn)物與人MHCI類HLA等位基因所編碼的產(chǎn)物和/或與來(lái)源自其他物種的人HLA同系物或者其變體或功能片段具有至少60%、優(yōu)選70%、優(yōu)選80%、優(yōu)選90%、優(yōu)選95°/。和最優(yōu)選99%的同一性。所述HLA可以為HLA-A、HLA-B或HLA-C。發(fā)明人的研究是基于最常見(jiàn)的匪CI類抗原HLA-A2。MHCI類抗原HLA-A2的序列在本領(lǐng)域中是已知的，并可在公開(kāi)數(shù)據(jù)庫(kù)中找到，例如在http://www,ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgidb=nucleotide&val=37518361。例如，人MHCI類抗原HLA-A2(即所述HLA*020101等位基因)的全長(zhǎng)蛋白序列被標(biāo)記為SEQIDN0:1。例如，人匪CI類抗原HLA-A2(即所述HLA"20101等位基因)的成熟蛋白序列被標(biāo)記為SEQIDNO:2。此外，編碼人MHCI類抗原HLA-A2(即所述HLA，020101等位基因)的核酸序列凈皮標(biāo)記為SEQIDNO:3。所述被標(biāo)記為SEQIDNO:3的核酸序列包括8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子。這些可以定義如下外顯子l:200bp-272bp;內(nèi)含子1:237bp-402bp;外顯子2:403bp-672bp;內(nèi)含子2:673bp-913bp;外顯子3:914bp-1189bp;內(nèi)含子3:1190bp-1789bp;外顯子4:1790bp-2065bp;內(nèi)含子4:2066bp—2164bp;外顯子5:2165bp-2281bp;內(nèi)含子5:2282bp-2719bp;外顯子6:2720bp-2752bp;內(nèi)含子6:2753bp-2894bp;外顯子7:2895bp-2942bp;內(nèi)含子7:2493bp-3111bp;和外顯子1:3112bp-3116bp。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述HLA為HLA-A2。本文所用的術(shù)語(yǔ)"HLA-A2"是指在2005年第14屆國(guó)際HLA和免疫遺傳學(xué)研討會(huì)上定義為HLA-A2的任何基因產(chǎn)物(例如，標(biāo)記為SEQIDN0:1或2的蛋白)。所述基因產(chǎn)物與人HLA-A2等位基因(例如，標(biāo)記為SEQIDNO:3的)所編碼的基因產(chǎn)物和/或與來(lái)源自其他物種的人HLA-A2同系物或者其變體或功能片段具有至少50%的同一性。更優(yōu)選地，HLA-A2基因產(chǎn)物與人HLA-A2等位基因所編碼的產(chǎn)物和/或與來(lái)源自其他物種的人HLA-A2同系物或者其變體或功能片段具有至少60°/。、優(yōu)選70%、優(yōu)選80%、優(yōu)選90°/。、優(yōu)選95%和最優(yōu)選99%的同一性。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述HLA具有SEQIDN0:1或SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。術(shù)語(yǔ)"來(lái)源自MHCI類HLA"是指多肽、衍生物或類似物，它包括形成MHCI類抗原HLA的的氨基酸序列并且是其衍生物、類似物或修飾。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，來(lái)源自MHCI類HLA的多肽為MHCI類HLA的片段或截短。令人吃驚的是，來(lái)源自HLA的肽或多肽或衍生物或類似物已經(jīng)被證明具有治療活性，并且具體而言，已經(jīng)被證明可用于預(yù)防或最小化同種異體移植物衰竭或排斥。術(shù)語(yǔ)"來(lái)源自HLA-A2"是指多肽、衍生物或類似物，它包括形成MHCI類抗原HLA-A2的的氨基酸序列并且是其衍生物、類似物或修飾。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，來(lái)源自HLA-A2的多肽為HLA-A2的片段或截短。令人吃驚的是，來(lái)源自HLA-A2的肽或多肽或衍生物或類似物已經(jīng)被證明具有治療活性，并且具體而言，已經(jīng)被證明可用于預(yù)防或最小化同種異體移植物衰竭或排斥。SEQIDNO:1、2和4-73全部為來(lái)源自HLA-A2的多肽。術(shù)語(yǔ)"其衍生物或類似物"是指來(lái)源自MHCI類HLA蛋白的多肽的氨基酸殘基可以被具有相似側(cè)鏈或肽骨架性質(zhì)的殘基(天然氨基酸、非天然氨基酸或氨基酸模擬物)置換。此外，這類肽的末端可以被具有與乙?；蝓０坊鶊F(tuán)類似性質(zhì)的N-或C-末端保護(hù)基團(tuán)所保護(hù)。類似地，術(shù)語(yǔ)"其衍生物或類似物"是指來(lái)源自HLA-A2蛋白的多肽的氨基酸殘基可以被具有相似側(cè)鏈或肽骨架性質(zhì)的殘基(天然氨基酸、非天然氨基酸或氨基酸模擬物)置換。此外，這類肽的末端可以被具有與乙酰基或酰胺基團(tuán)類似性質(zhì)的N-或C-末端保護(hù)基團(tuán)所保護(hù)。衍生物和類似物可以通過(guò)對(duì)所述來(lái)源自MHCI類HLA蛋白(或HLA-A2)的多肽序列進(jìn)行一或兩個(gè)突變來(lái)形成。所述突變可以是氨基酸的置換、缺失或插入。衍生物或類似物可以與所述多肽相差至少l個(gè)氨基酸，但與SEQIDNO:1或2所示的序列相差不到5、10、20、50、100、150、200或250個(gè)氨基酸。f汴生物和類似物的實(shí)例包括下文中更加詳細(xì)討論的所有截短、類似物、變體、片段和同種異體抗原。多肽的衍生物或類似物——例如來(lái)源自MHCI類抗原或來(lái)源自HLA-A2的多肽的衍生物或類似物一一與MHCn類HLA結(jié)合并且激活特異性針對(duì)該多肽的T細(xì)胞。換言之，多肽的衍生物或類似物將會(huì)與匪Cn類HLA結(jié)合并且激活帶有特異性針對(duì)該多肽的T細(xì)胞受體的T細(xì)胞。例如，來(lái)源自HLA-A2的多肽的衍生物或類似物將會(huì)與匪CII類HLA結(jié)合并且激活帶有特異性針對(duì)所述來(lái)源自HLA-A2的多肽的受體的T細(xì)胞。如果通過(guò)使一種T細(xì)胞與一種多肽接觸來(lái)對(duì)其進(jìn)行篩選或克隆，則所述T細(xì)胞為特異性針對(duì)該多肽的或帶有特異性針對(duì)該多肽的T細(xì)胞受體。用于篩選或克隆T細(xì)胞的方法是本領(lǐng)域所乂>知的。例如，Lambda/.,J.Exp.Biol.，1983;157:1434-1447中描述了一種適合的方法。MHCI類HLA包括5個(gè)結(jié)構(gòu)域，即otl結(jié)構(gòu)域、ct2結(jié)構(gòu)域、ot3結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。由SEQIDNO:1可以看出，全長(zhǎng)人I類組織相容性分子HLA-A2蛋白由365個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成。由SEQIDNO:2可以看出成熟人I類組織相容性分子一一HLA-A2蛋白由341個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成。圖1示出了HLA-A2的胞外部分的結(jié)構(gòu)示意圖。可以看出HLA-A2包括oc1結(jié)構(gòu)域、oc2結(jié)構(gòu)域、a3結(jié)構(gòu)域，還有跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域，后兩個(gè)結(jié)構(gòu)域未在圖中示出。將會(huì)理解的是，al和a2結(jié)構(gòu)域限定了HLA-A2分子的一個(gè)基本上多態(tài)性的區(qū)域，并且oc3結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域限定了HLA-A2分子的一個(gè)基本上無(wú)多態(tài)性的區(qū)域。此外，P-2-微球蛋白(P2m)的分子與ocl和a2結(jié)構(gòu)域的連接部分結(jié)合，并且通過(guò)非共價(jià)相互作用與a3結(jié)構(gòu)域結(jié)合。未在圖1中示出的是存在以非共價(jià)方式結(jié)合在al和a2結(jié)構(gòu)域的a螺旋之間的溝中的短肽。將會(huì)理解的是，所述肽與a螺旋臨近部分的組合構(gòu)成了可被CD8+T細(xì)胞識(shí)別的表位。所述關(guān)于HLA-A2中5個(gè)結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)和功能的討論也適用于其他MHCI類HLA,例如HLA-B或HLA-C。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明可以使用基本上來(lái)源自全長(zhǎng)MHCI類HLA的多肽、其衍生物或類似物。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明可以使用多肽、其衍生物或類似物，它們基本上來(lái)源自全長(zhǎng)HLA-A2蛋白分子，基本上如SEQIDN0:1或2所限定的那樣。因此，本發(fā)明中所用的MHCI類HLA或HLA-A2分子可以包括所述ocl結(jié)構(gòu)域、所述cx2結(jié)構(gòu)域、所述oc3結(jié)構(gòu)域、所述跨膜結(jié)構(gòu)域和所述胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。所述全長(zhǎng)HLA-A2分子包括365個(gè)氨基酸(SEQIDNO:1)。然而，發(fā)明人已經(jīng)證明了本發(fā)明還可以使用來(lái)源自所述HLA-A2蛋白分子(即不足365個(gè)氨基酸)的多肽或衍生物或類似物。因此，本發(fā)明所用的多肽、其衍生物或類似物可能會(huì)包括全長(zhǎng)MHCI類HLA的截短。優(yōu)選地，本發(fā)明所用的多肽、其衍生物或類似物包括全長(zhǎng)HLA-A2的截短。下文中關(guān)于截短的討論集中于HLA-A2的截短。然而，這類討論也適用于其他MHCI類HLA，例如HLA-B或HLA-C。術(shù)語(yǔ)"截短"是指相當(dāng)于所述HLA-A2蛋白的一個(gè)區(qū)域或片段，但是通過(guò)移除氨基酸減小了其長(zhǎng)度的多肽。氨基酸的減少可以通過(guò)移除所述肽的C-或N-末端的殘基或者是通過(guò)缺失所述HLA-A2分子核心(即SEQIDNO:l的第2-364位氨基酸)內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸來(lái)實(shí)現(xiàn)的。例如，所述肽可能會(huì)包括從所述全長(zhǎng)HLA-A2分子上缺失5、10、15、20或25個(gè)氨基酸殘基。更優(yōu)選地，所述肽可能會(huì)包括從所述全長(zhǎng)HLA-A2分子上缺失50、75、100、125、150、200、225或150個(gè)氨基酸殘基。適合地，所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物包括不足約100個(gè)氨基酸，更加適合地不足約74個(gè)氨基酸，并且甚至更適合地不足50個(gè)氨基酸。優(yōu)選地，所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物包括不足30個(gè)氨基酸，并且更優(yōu)選地不足20個(gè)氨基酸，并且最優(yōu)選地約15個(gè)氨基酸。發(fā)明人相信在仍舊具有治療作用的情況下減小HLA-A2的大小將會(huì)有助于對(duì)正在治療的受試者進(jìn)行治療性給藥。由于T淋巴細(xì)胞根據(jù)蛋白的與MHC分子結(jié)合的短肽形式的一級(jí)序列來(lái)識(shí)別該蛋白，發(fā)明人相信本發(fā)明的肽、衍生物或類似物可用于特異性地脫敏T細(xì)胞應(yīng)答，同時(shí)沒(méi)有與'整個(gè)，抗原接觸的風(fēng)險(xiǎn)。這是特別優(yōu)選的，因?yàn)槿L(zhǎng)抗原或具備二級(jí)和/或三級(jí)結(jié)構(gòu)的至少大部分的該抗原自身可能會(huì)導(dǎo)致致敏。此外，在這類所述肽療法中觀察到的另一項(xiàng)臨床效益是來(lái)源自MHCI類HLA(例如HLA-A2)的肽、其衍生物或類似物可能會(huì)誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，所述調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能夠?qū)γ庖呦到y(tǒng)產(chǎn)生抗原特異性、顯性負(fù)相作用。使用肽的另一項(xiàng)顯著優(yōu)勢(shì)是它們能夠被容易地遞送而不會(huì)誘發(fā)危險(xiǎn)信號(hào)，這將會(huì)促進(jìn)所述正在治療的受試者體內(nèi)的生產(chǎn)性免疫。因此，所述來(lái)源自MHCI類HLA蛋白的多肽或者其衍生物或類似物可能來(lái)源自一個(gè)獨(dú)立地選自ocl結(jié)構(gòu)域；a2結(jié)構(gòu)域；cc3結(jié)構(gòu)域；跨膜結(jié)構(gòu)域；胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域；或它們的任意組合的結(jié)構(gòu)域。例如，所述多肽或類似物可能來(lái)源自HLA-A2的a1結(jié)構(gòu)域和/或a2結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選地，所述多肽或類似物可能來(lái)源自MHCI類HLA的a3結(jié)構(gòu)域和/或跨膜結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明具體地提供了一種多肽或其衍生物或類似物，所述多肽由不足30個(gè)來(lái)源自MHCI類HLA的a3結(jié)構(gòu)域和/或跨膜結(jié)構(gòu)域的連續(xù)氨基酸構(gòu)成。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多肽由不足20個(gè)或約15個(gè)來(lái)源自MHCI類HLA的a3結(jié)構(gòu)域和/或跨膜結(jié)構(gòu)域的連續(xù)氨基酸構(gòu)成。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述衍生物或類似物與所述肽中的至少9個(gè)連續(xù)氨基酸具有超過(guò)65%的序列同一性。本發(fā)明所提供的具體序列(SEQIDNO:42、43、48、49和53-74)在下文中有更加詳細(xì)的討論。類似地，來(lái)源自HLA-A2蛋白的多肽或者其衍生物或類似物可能來(lái)源自一個(gè)獨(dú)立地選自HLA-A2結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域，所述HLA-A2結(jié)構(gòu)域包括al結(jié)構(gòu)域；a2結(jié)構(gòu)域；a3結(jié)構(gòu)域；跨膜結(jié)構(gòu)域；胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域；或它們的任意組合。例如，所述肽或類似物可能來(lái)源自HLA-A2的a1結(jié)構(gòu)域和/或a2結(jié)構(gòu)域?；蛘撸鲭幕蝾愃莆锟赡軄?lái)源自HLA-A2的a3結(jié)構(gòu)域和/或跨膜結(jié)構(gòu)域。在HLA-A2中，所述al結(jié)構(gòu)域是由外顯子2(即SEQIDNO:3的第403-672位核苷酸)編碼的。因此，所述多肽、衍生物或類似物可能包括基本上SEQIDNO:2的第1-90位殘基所限定的氨基酸序列，并且可能是由SEQIDNO:3的第403-672位核苷酸編碼的。所述a2結(jié)構(gòu)域是由外顯子3(即SEQIDNO:3的第914-1189位核苷酸)編碼的。因此，所述多肽、衍生物或類似物可能包括基本上SEQIDNO:2的第91-182位殘基所限定的氨基酸序列，并且可能是由SEQIDNO:3的第914-1189位核苷酸編碼的。所述a3結(jié)構(gòu)域是由外顯子4(即SEQIDNO:3的第1790-2065位核普酸)編碼的。因此，所述多肽、衍生物或類似物可能包括基本上SEQIDNO:2的第183-274位殘基所限定的氨基酸序列，并且可能是由SEQIDNO:3的第1790-2065位核苷酸編碼的。所述跨膜結(jié)構(gòu)域是由外顯子5(即SEQIDNO:3的第2165-2281位核苷酸)編碼的。因此，所述多肽、衍生物或類似物可能包括基本上SEQIDNO:2的第275-314位殘基所限定的氨基酸序列，并且可能是由SEQIDNO:3的第2165-2281位核苷酸編碼的。令人驚奇的是，實(shí)施例1和2中所討論的結(jié)合研究的結(jié)果表明存在相當(dāng)多的可以與MHCII類相對(duì)'隨機(jī)地(promiscuously)'結(jié)合的多肽。所述肽中的一些來(lái)源自HLA-A2的超變區(qū)或多態(tài)區(qū)(即所述ocl和oc2結(jié)構(gòu)域)。例如，肽p20(SEQIDN0:23)來(lái)源自HLA-A2(SEQIDN0:2)的第105-119位氨基酸殘基，并且肽p21(SEQIDNO:24)來(lái)源自第107-121位殘基。兩種肽均相當(dāng)于一種來(lái)源自DR1的17個(gè)氨基酸的肽。發(fā)明人觀察到在15名已經(jīng)產(chǎn)生了抗HLA-A2的患者中有10名患者體內(nèi)產(chǎn)生了陽(yáng)性應(yīng)答。因此，無(wú)論哪種MHCn類，單獨(dú)一個(gè)可與MHCII類分子隨機(jī)結(jié)合的17個(gè)氨基酸的肽即可實(shí)現(xiàn)該區(qū)域中的多數(shù)免疫原性。因此，發(fā)明人相信治療方案中可以使用單獨(dú)一種肽(或兩種緊密重疊的肽)。因此，本發(fā)明所用的多肽、衍生物或類似物可能來(lái)源自MHCI類HLA分子的一個(gè)相當(dāng)多態(tài)的區(qū)域，并且更優(yōu)選地來(lái)源自其oc1和/或a2結(jié)構(gòu)域。因此，本發(fā)明所用的多肽、衍生物或類似物可能來(lái)源自MHCI類HLA分子的一個(gè)相當(dāng)多態(tài)的區(qū)域，并且更優(yōu)選地來(lái)源自其al和/或a2結(jié)構(gòu)域。因此，本發(fā)明所用的優(yōu)選的多肽包括基本上下述氨基酸序列(a)HSMRYFFTSVSRPGR(SEQIDNO:4)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDNO:2)的第3-17位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的a1結(jié)構(gòu)域.該肽在本文中被命名為pl，分子量為1827.1。(b)MRYFFTSVSRPGRGE(SEQIDNO:5)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDNO:2)的第5-19位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的a1結(jié)構(gòu)域。該肽在本文中被命名為p2,分子量為1789。(c)HKWEAAHVAEQLRAY(SEQIDNO:33)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第145-159位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的a2結(jié)構(gòu)域。該肽在本文中被命名為p30，分子量為1808。21(d)SDWRFLRGYHQYAYD(SEQIDNO:23)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第105-119位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的a2結(jié)構(gòu)域。該肽在本文中被命名為p20，分子量為1976.1。(e)WRFLRGYHQYAYDGK(SEQIDNO:24)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第107-121位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的ct2結(jié)構(gòu)域。該肽在本文中被命名為p21，分子量為1959.2。應(yīng)該理解的是，所述肽(a)-(e)中的每一種均來(lái)源自HLA-A2的多態(tài)區(qū)。然而，發(fā)明人吃驚地發(fā)現(xiàn)相當(dāng)多的個(gè)體也會(huì)對(duì)來(lái)源自HLA-A2分子中其他區(qū)域的肽產(chǎn)生應(yīng)答，所述其他區(qū)域特別是具有有限多態(tài)性的HLA-A2的區(qū)域，例如oc3結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域。發(fā)明人相信，到目前為止尚沒(méi)有關(guān)于對(duì)肽產(chǎn)生免疫應(yīng)答的報(bào)道，并且因而沒(méi)有關(guān)于它們用在基于肽的療法中的報(bào)道或計(jì)劃，所述肽來(lái)源自HLA-A2的至少具有有限多態(tài)性或基本上無(wú)多態(tài)性的區(qū)域——特別是HLA-A2的oc3和跨膜結(jié)構(gòu)域_一或任何其他HLA分子。發(fā)明人還相信，使用來(lái)源自HLA-A2的非多態(tài)性區(qū)域的肽可能具有比那些來(lái)源自HLA-A2的多態(tài)性并且因而是獨(dú)特性區(qū)域的肽更廣泛的應(yīng)用。因?yàn)檫@些肽具有有限的多態(tài)性，所以它們可作為不同HLA分子之間的潛在交叉作用的位點(diǎn)。因此，本發(fā)明的優(yōu)選多肽、其衍生物或類似物均來(lái)源自MHCI類HLA的基本有限多態(tài)性或無(wú)多態(tài)性區(qū)域，例如oc3和/或跨膜結(jié)構(gòu)域。特別優(yōu)選地是，本發(fā)明所用的多肽、其衍生物或類似物來(lái)源自HLA-A2分子的基本有限多態(tài)性或無(wú)多態(tài)性區(qū)域。優(yōu)選地，所述多肽、其衍生物或類似物來(lái)源自HLA-A2的a3和/或跨膜結(jié)構(gòu)域。因此本發(fā)明所用的最優(yōu)選的肽包括基本上下述氨基酸序列(f)HAVSDHEATLRCWAL(SEQIDNO:42)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第192-206位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的a3結(jié)構(gòu)域。該肽在本文中被命名為p39，分子量為1708。(g)RCWALSFYPAEITLT(SEQIDNO:43)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第202-216位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的a3結(jié)構(gòu)域。該肽在本文中被命名為p40，分子量為1770。(h)KPLTLRWEPSSQPTI(SEQIDN0:53)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第268-282位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的a3結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域。該肽在本文中被命名為p50,分子量為1752。(i)LTLRWEPSSQPTIPI(SEQIDNO:54)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第270-284位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的ot3結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域。該肽在本文中被命名為p51，分子量為1737。(j)PTIPIVGIIAGLVLF(SEQIDNO:55)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第280-294位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的跨膜結(jié)構(gòu)域。該肽在本文中被命名為p52,分子量為1522。(k)IPIVGIIAGLVLFGA(SEQIDNO:56)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第282-296位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的跨膜結(jié)構(gòu)域。該肽在本文中被命名為p53，分子量為1452。(1)GTFQKWAAVVVPSGQEQR(SEQIDNO:48)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第239-253位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的oc3結(jié)構(gòu)域。該肽在本文中被命名為p45,分子量為1574。(m)FQKWAAVVVPSGQEQR(SEQIDNO:49)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第241-256位氨基酸，并且來(lái)源自HLA-A2分子的oc3結(jié)構(gòu)域。該肽在本文中被命名為p46，分子量為1829。應(yīng)該理解的是，所述肽(f)-(m)中的每一種均來(lái)源自HLA-A2的基本無(wú)多態(tài)性區(qū)域。發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)來(lái)源自HLA-A2的非多態(tài)性區(qū)域(即ot3和跨膜結(jié)構(gòu)域)的肽在已經(jīng)產(chǎn)生抗HLA-A2抗體的患者體內(nèi)引發(fā)令人吃驚地高頻率應(yīng)答并且在一些其他患者體內(nèi)引發(fā)顯著應(yīng)答。發(fā)明人相信這些肽之前尚未被定義為T(mén)細(xì)胞表位，并且是重要的因?yàn)樗鼈兙哂杏邢薜亩鄳B(tài)性。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)多肽、衍生物或類似物——它們包括本文所公開(kāi)的任何具有治療作用且顯示出令人吃驚的效能的優(yōu)選肽的重疊區(qū)域一一用于治療特征為同種異體致敏(例如同種異體移植物衰竭或排斥)的病癥的用途。因此，來(lái)源自MHCI類HLA(例如HLA-A2)的非多態(tài)性區(qū)域的多肽、其衍生物或類似物優(yōu)選地包括重疊部分或區(qū)域。因此，本發(fā)明所用的更加優(yōu)選的多肽包括基本上下述氨基酸序列(n)KPLTLRWEPSSQPTIPI(SEQIDNO:57)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第268-282位和第270-284位重疊氨基酸。該肽在本文中被命名為p50/51。(o)PTIPIVGIIAGLVLFGA(SEQIDNO:58)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第280-294位和第282-296位重疊氨基酸。該肽在本文中被命名為p52/53。(p)GTFQKWAAVVVPSGQEQR(SEQIDNO:59)。該肽對(duì)應(yīng)于HLA-A2蛋白(即SEQIDN0:2)的第239-253位和第241-256位重疊氨基酸。該肽在本文中4皮命名為p45/46。通過(guò)與抗-HLA抗體類比，發(fā)明人相信來(lái)源自a3和跨膜結(jié)構(gòu)域的優(yōu)選肽可以被稱為'公共，T細(xì)胞表位。這關(guān)系到傳播(spreading)針對(duì)不同HLA的免疫應(yīng)答的進(jìn)化，以及設(shè)計(jì)具有治療潛力的肽及其混合物。例如，如圖5和13中所示，肽p39的序列即SEQIDN0:42(它來(lái)源自HLA-A2的第192-206位氨基酸)還存在于下述HLA分子的序列中HLA-A2、HLA-A25、HLA-A26、HLA-A29、HLA-A31、HLA-A32、HLA-A33、HLA-A34、HLA-A43、HLA-A66、HLA-A68、HLA-A69和HLA-A74。因此，當(dāng)將肽p39或者其衍生物或類似物給予患者時(shí)，發(fā)明人相信它能夠調(diào)節(jié)針對(duì)帶有任何這類HLA分子的移植物的免疫應(yīng)答，而不僅僅限于HLA-A2。將會(huì)理解的是，在療法中使用這種肽、衍生物或類似物是一個(gè)顯著的進(jìn)步，因?yàn)樗哂卸喾N作用，從而可預(yù)防帶有各種HLA抗原的同種異體移植物的排斥或衰竭。此外，類似地，存在一種由圖5和13中所示的全部其他HLA-A分子HLA-Al、HLA-A3、HLA-All、HLA-A23、HLA-A24、HLA-A30、HLA-A36、HLA-A80和大多數(shù)HLA-B分子表達(dá)的p39序列(SEQIDN0:2)的變體。該變體被稱為p39類似物1并且在SEQIDN0:60中示出。因此，當(dāng)給予肽p39及其一種具有SEQIDN0:60的序列(其中193位的丙氨酸殘基被置換為脯氨酸，且194位的纈氨酸殘基被置換為異亮氨酸)的類似物時(shí)，發(fā)明人相信這種組合具有調(diào)節(jié)針對(duì)帶有所有HLA-A分子和大多數(shù)HLA-B分子的移植物的免疫應(yīng)答的潛力。此外，類似地，存在一種由圖13中所示的其他HLA-B分子HLA-B51、HLA-B52、HLA-B53、HLA-B58、HLA-B78表達(dá)的p39序列(SEQIDNO:42)的變體。該變體被稱為p39類似物2并且在SEQIDNO:61中示出。因此，當(dāng)給予肽p39及其一種具有SEQIDNO:61的序列(其中193位的丙氨酸殘基被置換為脯氨酸)的類似物時(shí)，發(fā)明人相信這種組合具有調(diào)節(jié)針對(duì)帶有各種HLA-A分子和一些HLA-B分子的移植物的免疫應(yīng)答的潛力。此外，類似地，存在一種由圖13中所示的HLA-B44表達(dá)的p39序列(SEQIDNO:42)的變體。該變體被稱為p39類似物3并且在SEQIDN0:62中示出。因此，當(dāng)給予肽p39及其一種具有SEQIDN0:62的序列(其中193位的丙氨酸殘基被置換為脯氨酸，且199位的丙氨酸殘基被置換為纈氨酸)的類似物時(shí)，發(fā)明人相信這種組合具有調(diào)節(jié)針對(duì)帶有各種HLA-A分子和HU-B44的移植物的免疫應(yīng)答的潛力。通過(guò)另一個(gè)實(shí)例，如圖13中所示，肽p40的序列即SEQIDNO:43(它來(lái)源自HLA-A2的第202-216位氨基酸)還存在于下述HLA分子的序列中HLA-A2、HLA-A25、HLA-A26、HLA-A29、HLA-A31、HLA-A32、HLA-A33、HLA-A34、HLA-A43、HLA-A66、HLA-A68、HLA-A69、HLA-A74和HLA-A74。因此，當(dāng)將肽p40或者其衍生物或類似物給予患者時(shí)，發(fā)明人相信它能夠調(diào)節(jié)針對(duì)帶有任何這類HLA分子的移植物的免疫應(yīng)答，而不僅僅限于HLA-A2。將會(huì)理解的是，在療法中使用這種肽、衍生物或類似物是一個(gè)顯著的進(jìn)步，因?yàn)樗哂卸喾N作用，從而可預(yù)防帶有各種HLA抗原的同種異體移植物的排斥或衰竭。此外，類似地，存在一種由圖14中所示的其他HLA-A分子HLA-A1、HLA-A3、HLA-All、HLA-A23、HLA-A24、HLA-A30、HLA-A36和大多數(shù)HLA-B分子表達(dá)的p40序列(SEQIDNO:43)的變體。該變體被稱為p40類似物并且在SEQIDNO:63中示出。因此，當(dāng)給予肽p40及其一種具有SEQIDNO:63的序列(其中207位的絲氨酸殘基被置換為甘氨酸)的類似物時(shí)，發(fā)明人相信這種組合具有調(diào)節(jié)針對(duì)帶有各種HLA-A分子和HLA-B分子的移植物的免疫應(yīng)答的潛力。此外，如圖6和15中所示，來(lái)源自第268-282位氨基酸的肽p50(SEQIDNO:53)和來(lái)源自第270-284位氨基酸的肽p51(SEQIDNO:54)包括僅偏移2個(gè)氨基酸的序列，并且因此跨距長(zhǎng)17個(gè)氨基酸。類似地，如圖7和16中所示，來(lái)源自第280-294位氨基酸的肽p52(SEQIDNO:55)和來(lái)源自第282-296位氨基酸的肽p53(SEQIDNO:56)包括僅偏移2個(gè)氨基酸的序列，并且因此跨距長(zhǎng)17個(gè)氨基酸。在兩種情況下，所標(biāo)記的肽不僅存在于HLA-A2中，還存在于HLA-A25、HLA-A26、HLA-A29、HLA-A31、HLA-A32、HLA-A33、HLA-A43、HLA-A66、HLA-A68、HLA-A69、HLA-A74和HLA-A80中。p51(SEQIDNO:54)和p52(SEQIDNO:55)還存在HLA-B15、HLA-B18、HLA-B35、HLA-B37、HLA-B45、HLA-B48、HLA-B49、HLA-B50、HLA-B51、HLA-B52、HLA-B53、HLA-B54、HLA-B55、HLA-B58、HLA-B59、HLA-B73、HLA-B78、HLA-B82和HLA-B95于中(圖14)。此外，其中第276位的脯氨酸殘基被置換為亮氨酸(對(duì)于17聚體268-284;SEQIDNO:64)或其中第294位的苯丙氨酸被置換為亮氨酸(對(duì)于17聚體280-296;SEQIDNO:65)這兩種序列的類似物將會(huì)提供這樣的肽序列，即所述肽序列可以由大多數(shù)HLA-A分子以一種與所述用于p39的方式類似的方式表達(dá)，唯一的實(shí)質(zhì)性差異為HLA-A23和HLA-A24。下表1中描述了p50/51和p52/53的其他類似物。表l-p50/51和p52/53的其他類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>因此，當(dāng)將多肽p50、p51、52和p53，或者它們的衍生物或類似物的組合給予患者時(shí)，發(fā)明人相信它能夠調(diào)節(jié)針對(duì)帶有任何這類HLA分子的移植物的免疫應(yīng)答。顯而易見(jiàn)的是，p39、p40、p50、p51、p50/51、p52、p53和/或p52/53與一種或多種上文所討論的它們的類似物的特定組合具有調(diào)節(jié)針對(duì)帶有所有HLA-A分子和所有HLA-B分子的移植物的免疫應(yīng)答的潛力。其優(yōu)勢(shì)在于使用盡可能少的多肽來(lái)調(diào)節(jié)所述針對(duì)帶有任何HLA-A或HLA-B分子的移植物的免疫應(yīng)答。因此，根據(jù)前文應(yīng)該理解的是，優(yōu)選的來(lái)源自HLA-A2的非多態(tài)性區(qū)域的多肽、其衍生物或類似物也可由許多其他HLA-A分子一一而不僅僅由HLA-A2——通過(guò)作為不同HLA分子之間的潛在交叉作用的位點(diǎn)來(lái)加以表達(dá)。因此，令人驚奇地，發(fā)明人相信在本發(fā)明的方法中使用這類肽，特別是用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏的病癥(具體而言同種異體移植物排斥和同種異體抗體合成)的好處比單獨(dú)使用HLA-A2抗原要多得多。因此，發(fā)明人相信他們的發(fā)現(xiàn)不僅涉及幫助抗體產(chǎn)生，還涉及自身移植物排斥的免疫機(jī)制，并且其涉及范圍比目標(biāo)HLA-A2要大得多，擴(kuò)展至對(duì)一般移植抗原的應(yīng)答。本發(fā)明所用的多肽可以是同種異體抗原，或者來(lái)源于其的多肽或其衍生物或類似物。優(yōu)選地，所述同種異體抗原，或者來(lái)源于其的多肽或其衍生物或類似物可能獨(dú)立地選自HLA-A2、HLA-A25、HLA-A26、HLA-A29、HLA-A31、HLA-A32、HLA-A33、HLA-A34、HLA-A43、HLA-A66、HLA-A68、HLA-A69、HLA-A74、HLA-A1、HLA-A3、HLA-All、HLA-A24、HLA-A30、HLA-A36、HLA-A80、HLA-A1、HLA-A3、HLA-A11和HLA-A23,或者它們的組合。優(yōu)選的來(lái)源自所述同種異體抗原的多肽可以包括p39(SEQIDNO:42)、p50/51(SEQIDNO:57)、p52/53(SEQIDNO:58)、p50(SEQIDNO:53)、p51(SEQIDNO:54)、p52(SEQIDNO:55)和p53(SEQIDN0:56)或者衍生物或類似物，或者它們的組合。應(yīng)該理解的是，這些多肽全部來(lái)源自HLA-A2。此外，任何本文所定義的多肽的有效衍生物或類似物也可以用在本發(fā)明中。例如，可以使用來(lái)源自其他MHCI類抗原(例如HLA-B和HLA-C)的對(duì)應(yīng)多肽。發(fā)明人還相信任何所述優(yōu)選的多肽的各種類似物可能也可有效預(yù)防或最小化同種異體移植物衰竭或排斥，如下面的比對(duì)中所示p39(SEQIDNO:42)HAVSDHEATLRCWAL(q)p39類似物1(SEQCDNO:60)HPISDHEATLRCWALp50(SEQIDNO:53)KPLTLRWEPSSQPTIp51(SEQE)NO:54)LTLRWEPSSQPTIPI(r)類似物l17聚體(SEQIDNO:64)KPLTLRWELSSQPTIPIp52(SEQEDNO:55)PTIPIVG11AGLVLFp53(SEQIDNO:56)IPIVGIIAGLVLFGA(s)類似物l17聚體(SEQIDNO:65)PTIPIVGIIAGLVLLGAp40(SEQIDNO:43)RCWALSFYPAEITLT(t)p40類似物(SEQIDNO:63)RCWALGFYPAEITLTGTFQKWAAVVVPSGQEQRGTFQKWAAVVVPSGEEQR(v)p45/46類似物2GTFQKWASVVVPSGQEQR(SEQIDNO:74)因此，本發(fā)明所用的優(yōu)選的多肽包括基本上下述氨基酸序列(q)HPISDHEATLRCWAL(SEQIDNO:60)。該類似物衍生自肽p39(SEQIDN0:42),并且來(lái)源自HLA-A2分子的ot3結(jié)構(gòu)域，除了其中丙氨酸殘p45/46(SEQIDNO:59)(u)p45/46類似物1(SEQIDNO:73)28基被置換為脯氨酸殘基并且纈氨酸殘基被置換為異亮氨酸殘基。該肽在本文中被命名為"p39類似物l"。(r)KPLTLRWELSSQPTIPI(SEQIDNO:64)。該類似物矛汙生自肽p50(SEQIDNO:53)和p51(SEQIDNO:54),并且來(lái)源自HLA-A2分子的oc3結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域，除了第276位的脯氨酸殘基被置換為亮氨酸殘基。該肽在本文中被命名為"p50/51類似物1"。(s)PTIPIVGIIAGLVLLGA(SEQIDNO:65)。該類似物矛汙生自肽p52(SEQIDNO:55)和p53(SEQIDNO:56)，并且來(lái)源自HLA-A2分子的跨膜結(jié)構(gòu)域，除了第294位的苯丙氨酸殘基被置換為亮氨酸殘基。該肽在本文中被命名為"p52/53類似物1"。(t)RCWALGFYPAEITLT(SEQIDNO:63)。該類似物書(shū)f生自肽p40(SEQIDNO:43),并且來(lái)源自HLA-A2分子的oc3結(jié)構(gòu)域，除了第207位的絲氨酸殘基被置換為甘氨酸殘基。該肽在本文中被命名為"p40類似物"。(u)GTFQKWAAVVVPSGEEQR(SEQIDNO:73)。該類似物f汙生自肽p45/46(SEQIDN0:59),并且來(lái)源自HLA-A2分子的a3結(jié)構(gòu)域，除了谷氨酰胺殘基被置換為谷氨酸殘基。該肽在本文中被命名為"p45/46類似物1"。(v)GTFQKWASVVVPSGQEQR(SEQIDNO:74)。該類似物f汴生自肽p45/46(SEQIDNO:59)，并且來(lái)源自HLA-A2分子的a3結(jié)構(gòu)域，除了丙氨酸殘基被置換為絲氨酸殘基。該肽在本文中被命名為"p45/46類似物2"。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明涉及任何來(lái)源自MHCI類HLA的多肽、其衍生物或類似物的用途，所述多肽、其衍生物或類似物包括基本上任何本文所述序列的氨基酸序列，包括功能變體或其片段。還應(yīng)該理解的是，本發(fā)明涉及任何來(lái)源自HLA-A2的多肽、其衍生物或類似物的用途，所述多肽、其衍生物或類似物包括基本上任何本文所述序列的氨基酸序列，包括功能變體或其片段。術(shù)語(yǔ)"基本上的氨基酸/多核苷酸/多肽序列"、"功能變體"和"功能片段"是指與任一本文所述序列的氨基酸/多核苷酸/多肽序列具有至少40%序列同一性的序列，例如與標(biāo)記為SEQIDNO:2的力/a-a^基因具有40%的同一性或者與標(biāo)記為SEQIDNO:1或2的HLA-A2蛋白具有40%的同一性。還考慮到了與任何本文所述序列具有高于65%、更優(yōu)選地高于70%、甚至更優(yōu)選地高于75%和更加優(yōu)選地高于80%的序列同一性的氨基酸/多核苷酸/多肽序列。優(yōu)選地，所述氨基酸/多核苷酸/多肽序列與任何本文所述的序列具有85%的同一性，更優(yōu)選地與任何本文所述的序列具有90°/。的同一性、甚至更優(yōu)選92%的同一性、甚至更優(yōu)選95°/。的同一性、甚至更優(yōu)選97%的同一性、甚至更優(yōu)選98%的同一性和最優(yōu)選99%的同一性?？梢詫?duì)任意長(zhǎng)度的氨基酸/多核苷酸/多肽序列進(jìn)行兩種氨基酸/多核苷酸/多肽序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)的測(cè)定。例如，可以測(cè)定全長(zhǎng)序列的同一性?；蛘?，可以測(cè)定部分序列的同一性。這種部分可以為至少350、至少300、至少250、至少200、至少250、至少150、至少100、至少50、至少30、至少20、至少15、至少I(mǎi)O或至少9個(gè)連續(xù)氨基酸/核苷酸。技術(shù)人員將會(huì)理解如何計(jì)算兩種氨基酸/多核苷酸/多肽序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)，例如，如http://wikiomics.org/wiki/Percentage—identity中所述。為了計(jì)算兩種氨基酸/多核苷酸/多肽序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)，必須首先對(duì)所述兩種序列進(jìn)行比對(duì)，然后計(jì)算序列同一性的值。兩種序列的同一性百分?jǐn)?shù)可能會(huì)出現(xiàn)不同的值，這取決于(i)用于比對(duì)所述序列的方法，例如ClustalW、BLAST、FASTA、Smith-Waterman(通過(guò)不同的程序?qū)崿F(xiàn))或根據(jù)3D比較得出的結(jié)構(gòu)比對(duì)；(ii)所述比對(duì)方法所采用的參數(shù)，例如局部比對(duì)或者全局比對(duì)、所用的配對(duì)-打分矩陣(例如BL0SUM62、PAM250、Gonnet等)和空位罰分，例如功能形式(functionalform)和常數(shù)。已經(jīng)進(jìn)行比對(duì)之后，存在許多不同的用于計(jì)算所述兩種序列之間同一性百分?jǐn)?shù)的方式。例如，技術(shù)人員可以把同一性的數(shù)值除以(i)最短序列的長(zhǎng)度；(ii)比對(duì)的長(zhǎng)度；(iii)序列的平均長(zhǎng)度；(iv)非空位位置的數(shù)目；或(iv)除突出之外的等價(jià)位置的數(shù)目。此外，應(yīng)該理解的是同一性百分?jǐn)?shù)具有很強(qiáng)的長(zhǎng)度依賴性。因此，一對(duì)序列越短，則可預(yù)期碰巧產(chǎn)生的所述序列同一性將會(huì)越高。因此，應(yīng)該理解的是，蛋白或DNA序列的準(zhǔn)確比對(duì)是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。流4亍的多重比對(duì)程序ClustalW(Tho邁psonetal.，1994,NucleicAcidsResearch,22，4673-4680;Thompsonetal.，1997，NucleicAcidsResearch,24，4876-4882)是一種優(yōu)選的用于對(duì)本發(fā)明的蛋白或DNA進(jìn)行多重比對(duì)的方法。適合的ClustalW參數(shù)如下對(duì)于DM比對(duì)空位開(kāi)放罰分=15.0、空位延伸罰分=6.66且矩陣4dentity。對(duì)于蛋白比對(duì)空位開(kāi)放罰分=10.0、空位延伸罰分=0.2且矩陣-Gonnet。對(duì)于DNA和蛋白比對(duì)ENDGAP=-1且GAPDIST=4。本領(lǐng)域才支術(shù)人員將會(huì)注意到有必要改變這些和其他參數(shù)以實(shí)現(xiàn)最優(yōu)序列比對(duì)。優(yōu)選地，兩種氨基酸/多核苷酸/多肽序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)的計(jì)算是按照如(N/T)"00這樣的比對(duì)進(jìn)行的，其中N為所述序列中共享相同殘基的位置的數(shù)目，并且T為所比較的位置的總數(shù)目，包括空位但排除突出。因此，最優(yōu)選的用于計(jì)算兩種序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)的方法包括(i)利用使用一組適合參數(shù)(例如,如上文所述的參數(shù))的ClustalW程序進(jìn)行序列比對(duì)；和(ii)將N和T值插入下述公式內(nèi)序列同一性=(N/T)*100。衍生物和類似物還可以包括保守性置換?？梢园凑毡?進(jìn)行保守性置換。第二欄中同一塊內(nèi)的氨基酸，以及優(yōu)選地，第三欄中同一排中氨基酸可以相互置換。表2-可用于本發(fā)明的保守性置換脂肪族非極性GAPILV極性不帶電CSTMNQ極性帶電DEKR芳族磨Y可以對(duì)所述來(lái)源自MHCI類HLA的所肽或者其衍生物或類似物的氨基酸進(jìn)行修飾。還應(yīng)該理解的是，可以用修飾過(guò)的氨基酸和許多本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的氨基酸變體代替HLA-A2來(lái)源的肽或者其衍生物或類似物以形成更優(yōu)選的本發(fā)明的衍生物或類似物。這類衍生物或類似物肽將會(huì)具有抗-同種異體移植物排斥的活性，只要所述修飾沒(méi)有明顯改變其化學(xué)特性。例如，R或K的側(cè)鏈胺上的氫可以被亞曱基基團(tuán)置換(-NH2—NH(Me)或-N(Me)2)。此外，可以通過(guò)使所述肽的N末端氨基基團(tuán)與羧酸反應(yīng)來(lái)對(duì)其加以保護(hù)，并且可以通過(guò)使所述肽的c末端羧基基團(tuán)與胺反應(yīng)來(lái)對(duì)其加以保護(hù)。其他實(shí)例包括糖基化和磷酸化。本發(fā)明的肽的類似物還可能包括可延長(zhǎng)或縮短所述肽的體內(nèi)半衰期的肽變體。能夠延長(zhǎng)本發(fā)明所用肽的半衰期的類似物的實(shí)例包括所述肽的類肽類似物、所述肽的D-氨基酸衍生物和肽-類肽雜合物?？梢岳迷S多方法(例如生物系統(tǒng)中的蛋白酶活性)對(duì)本發(fā)明所用的多肽進(jìn)行降解。這類降解可能會(huì)限制所述多肽的生物利用度，并且因此限制所述多肽實(shí)現(xiàn)其生物功能的能力。存在多種成熟的技術(shù)，利用這些技術(shù)可以設(shè)計(jì)并且生產(chǎn)出在生物環(huán)境中具有增強(qiáng)的穩(wěn)定性的多肽類似物或衍生物。由于對(duì)蛋白酶介導(dǎo)的降解的抗性增強(qiáng)，這類多肽衍生物可能會(huì)具有改良的生物利用度。優(yōu)選地，適合用于本發(fā)明的多肽衍生物或類似物的蛋白酶抗性高于其來(lái)源的多肽。多肽衍生物及其來(lái)源多肽的蛋白酶抗性可以利用公知的蛋白降解測(cè)定法來(lái)評(píng)估。然后比較所述肽衍生物和肽的蛋白酶抗性相對(duì)值。根據(jù)本發(fā)明所用多肽的結(jié)構(gòu)的相關(guān)知識(shí)可以很容易地設(shè)計(jì)出所述多肽的類肽類似物或衍生物?？梢允褂檬惺鄣能浖凑粘墒斓姆桨竵?lái)開(kāi)發(fā)類肽衍生物。反類肽(其中所有的氨基酸均被類肽殘基以倒序方式置換)也能夠模擬MHCI類HLA來(lái)源肽或HLA-A2來(lái)源肽，或者其衍生物或類似物。人們預(yù)計(jì)與含有一個(gè)類肽殘基的多肽或類肽-肽雜合物相比，反類肽會(huì)以相反方向結(jié)合在所述配體結(jié)合溝中。因此，所述類肽殘基的側(cè)鏈為方向與原始肽中的側(cè)鏈方向相同的能點(diǎn)(ablepoint)。本發(fā)明所用多肽的類似物的另一個(gè)實(shí)施方案包括所述多肽的D-氨基酸形式。使用D-氨基酸而非L-氨基酸制備多肽可極大地減少由正常代謝過(guò)程所導(dǎo)致的這類藥劑的任何不需要的分解，減少藥劑的必要給藥量及其給藥頻率。本發(fā)明所用的多肽、衍生物或類似物可以通過(guò)合成方法或重組方法來(lái)制備。例如，可以通過(guò)用表達(dá)載體轉(zhuǎn)染培養(yǎng)物中的細(xì)胞、培養(yǎng)所述細(xì)胞、提取并純化由該細(xì)胞產(chǎn)生的多肽來(lái)產(chǎn)生重組多肽，所述表達(dá)載體中包含與適合調(diào)控序列有效連接的編碼所述肽的核苷酸序列。用于所述多肽的重組生產(chǎn)的方法在本領(lǐng)域中是7>知的(例如Sambrooka人，2001MolecularCloning:alaboratorymanual,3rdedition,ColdHarbourLaboratoryPress)。#虔》、于本發(fā)明涉及提供編碼上述多肽、衍生物或類似物的核酸。所述核酸分子可以編碼多肽，所述多肽構(gòu)成了一個(gè)獨(dú)立地選自MHCI類HLA的ccl結(jié)構(gòu)域、oc2結(jié)構(gòu)域、a3結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域或者它們的任何組合的MHCI類HLA結(jié)構(gòu)域。例如，所述核酸分子可以編碼MHCI類HLA的ctl結(jié)構(gòu)域和/或a2結(jié)構(gòu)域。或者，所述核酸分子可以編碼MHCI類HLA的a3結(jié)構(gòu)域和/或跨膜結(jié)構(gòu)域。所述核酸分子可以編碼多肽，所述多肽構(gòu)成了一個(gè)獨(dú)立地選自HLA-A2的al結(jié)構(gòu)域、a2結(jié)構(gòu)域、a3結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域或者它們的任何組合的HLA-A2結(jié)構(gòu)域。例如，所述核酸分子可以編碼HLA-A2的ocl結(jié)構(gòu)域和/或a2結(jié)構(gòu)域?；蛘撸龊怂岱肿涌梢跃幋aHLA-A2的oc3結(jié)構(gòu)域和/或跨膜結(jié)構(gòu)域。所述HLA-A2基因的核酸序列被標(biāo)記為SEQIDN0:3。因此，優(yōu)選地，所述核酸分子包括基本上可由SEQIDNO:3所代表的序列(即編碼標(biāo)記為SEQIDN0:1的全長(zhǎng)HLA-A2蛋白或者SEQIDNO:2中所示的成熟HLA-A2)。所述ocl結(jié)構(gòu)域的核酸序列可由SEQIDNO:3的第403-672位核苷酸表示。因此，所述核酸分子可能包括基本上可由SEQIDNO:3的第403-672位核苷酸所代表的序列。所述a2結(jié)構(gòu)域的核酸序列可由SEQIDN0:3的第914-1189位核苷酸表示。因此，所述核酸分子可能包括基本上可由SEQIDNO:3的第914-1189位核苷酸所代表的序列。所述a3結(jié)構(gòu)域的核酸序列可由SEQIDNO:3的第1790-2065位核苷酸表示。因此，所述核酸分子可能包括由SEQIDNO:3的第1790-2065位核苷酸所代表的序列。所述跨膜結(jié)構(gòu)域的核酸序列可由SEQIDNO:3的第2165-2281位核苷酸表示。因此，所述核酸分子可以被標(biāo)記為SEQIDNO:3的第2165-2281位核苷酸。優(yōu)選的核酸分子編石馬獨(dú)立地選自pl、p2、p20、p21、p30、p39、p40、p50、p51、p52、p53、p45、p46、p50/51、p52/53和p45/46的肽因此，優(yōu)選的核酸分子包括基本上下述核苷酸序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>(1)5，-CCCATC-3'(SEQIDNO:86)。該核酸分子編碼肽p50/51,(m)5'-GAGCT-3'(SEQIDNO:87)。該核酸分子編碼肽p52/53。(n)5，-GAGCAGAGA-3'(SEQIDNO:88)。該核酸分子編碼肽p45/46TTTG10(o)TACGAC-3'(SEQIDNO:89)。該核酸分子編碼肽p20。(p)5'-TGGCGCTTCCTCCGCGC5GTACCACCAGTACGCCTACGAC15GGCAAG-3'(SEQEDNO:90)。該核酸分子編碼肽p21。20此外，優(yōu)選的核酸分子編碼肽類似物p39類似物l、p50/5類似物、p52/53類似物l、p40類似物、p45/P46類似物1或p45/46類似物2。因此，所用的優(yōu)選的核酸分予包括基本上下述核苦酸序列25(q)5，-3'(SEQIDNO:91)。該核酸分子編碼肽類似物-p39類似物1(r)5，-CCCATC-3'(SEQIDNO:92)。該核酸分子編碼肽類似物-p50/51類似物130(s)5，-GGAGCT-3'(SEQIDNO:93)。該核酸分子編碼肽類似物-p52/53類似物1。-3'(SEQEDNO:94)。該核酸分子編碼肽類似物-p40類似物。(U)5,-GAGCACJAGA-3'(SEQIDNO:95)。該核酸分子編碼肽類似物-p45/46類似物l,(v)5'GAGCAGAGA-3'(SEQEDNO:鄰)。該核酸分子編碼肽類似物-p45/46類似物21該核酸分子可以包括分離的或純化的核酸分子。該核酸分子可以包括DM序列。該核酸分子還可以包括能夠調(diào)控和/或增強(qiáng)其表達(dá)的元件。該核酸分子可以被包含在適合的載體中以構(gòu)成重組載體。所述載體可以是例如質(zhì)粒、粘粒或噬菌體。其他適合的載體對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。這一方面的其他實(shí)例請(qǐng)參考Sambrook"a/，2001，MolecularCloning:alaboratorymanual,3rdedition,ColdHarbourLaboratoryPress。這類重組載體可被用在所述用于使用核酸分子轉(zhuǎn)化細(xì)胞的遞送系統(tǒng)中。因此，本發(fā)明提供了一種包含載體的宿主細(xì)胞，所述載體包含任何本文所公開(kāi)的核酸。例如，本發(fā)明提供了一種包含栽體的宿主細(xì)胞，所述載體包含編碼來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的核酸分子。重組栽體還可以包括其他功能元件。例如，可以將重組載體設(shè)計(jì)成會(huì)使得所述載體能在細(xì)胞內(nèi)自主復(fù)制。在這種情況下，所述重組栽體中可能會(huì)需要有能誘導(dǎo)核酸復(fù)制的元件?；蛘撸梢詫⑺鲋亟M載體設(shè)計(jì)成會(huì)使得所述載體和重組核酸分子能整合進(jìn)細(xì)胞基因組中。在這種情況下，需要有利于定向整合(例如通過(guò)同源重組)的核酸序列。重組載體還可以包括編碼可在克隆過(guò)程中用作篩選標(biāo)記的基因的DNA。所述重組載體還可以進(jìn)一步包括啟動(dòng)子或調(diào)節(jié)子以便根據(jù)需要調(diào)控所述基因的表達(dá)。所述核酸分子可以(但非必須)被引入到正在接受治療的受試者的細(xì)胞DNA中。未分化的細(xì)胞可被穩(wěn)定地轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致產(chǎn)生基因修飾過(guò)的子細(xì)胞(此時(shí)需要使用特定的轉(zhuǎn)錄因子或基因激活子調(diào)節(jié)所述受試者體內(nèi)的表達(dá))?；蛘?，可以將所述遞送系統(tǒng)設(shè)計(jì)成有利于對(duì)正在接受治療的受試者體內(nèi)的分化細(xì)胞進(jìn)行不穩(wěn)定或暫時(shí)的轉(zhuǎn)化。在這種情況下，表達(dá)的調(diào)節(jié)會(huì)變得不那么重要，因?yàn)楫?dāng)該轉(zhuǎn)化細(xì)胞死亡或停止表達(dá)所述蛋白時(shí)(理想地當(dāng)所需治療效果已經(jīng)實(shí)現(xiàn)時(shí))DM分子的表達(dá)將會(huì)停止。所述遞送系統(tǒng)可為該受試者提供所述核酸分子，且不必將其合并到載體中。例如，所述核酸分子可以被摻入脂質(zhì)體或病毒顆粒中?；蛘撸梢岳眠m合的方法(例如直接內(nèi)吞吸收)將"棵，，核酸分子插入到受試者的細(xì)胞內(nèi)?？梢酝ㄟ^(guò)轉(zhuǎn)染、感染、顯微注射、細(xì)胞融合、原生質(zhì)體融合或彈道轟擊(ballisticbombardment)的方法用所述核酸分子轉(zhuǎn)染所要治療的受試者的細(xì)胞。例如，通過(guò)使用包被金顆粒、含有所述核酸分子的脂質(zhì)體、病毒載體(例如腺病毒)的彈道轉(zhuǎn)染以及通過(guò)直接施加所述核酸分子來(lái)產(chǎn)生直接核酸吸收(例如內(nèi)吞)的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)所述轉(zhuǎn)移。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知用于鑒別相似序列的備選方法。本發(fā)明涉及使用一種核酸分子，所述核酸分子與一種編碼來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交。優(yōu)選地，本發(fā)明涉及使用這樣一種核酸分子，所述核酸分子與一種編碼來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交。例如，一種可在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:3中所示序列或它們的互不序列雜交的序列將可以編碼基本上類似的核苷酸序列。嚴(yán)格條件是指在大約45"C下使所述核苷酸與濾膜結(jié)合(filter-bound)的DNA或RM在3x氯化鈉或檸檬酸鈉(SSC)中雜交，然后在大約20-65'C下用0.2xSSC/0.1%SDS沖洗至少一次。由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，所以很明顯的是，可以對(duì)任何核酸序列進(jìn)行變化或改變以其功能性變體，同時(shí)基本上不會(huì)影響其所編碼的蛋白的序列。適合的核苷酸變體為那些具有通過(guò)用不同密碼子進(jìn)行置換而改變的序列的核香酸變體，所述不同的密碼子在該序列中編碼相同的氨基酸，因此未產(chǎn)生變化。其他適合的變體為那些具有同源核苷酸序列但是通過(guò)用不同密碼子進(jìn)行置換而改變了全部或部分序列，所述不同密碼子編碼側(cè)鏈的生物物理學(xué)性質(zhì)與其所置換的氨基酸類似的氨基酸，以產(chǎn)生保守性變化。例如，小的非極性、疏水氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、脯氨酸和曱硫氨酸。大的非極性、疏水氨基酸包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。極性、中性氨基酸包括絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。正電(堿性)氨基酸包括賴氨酸、精氨酸和組氨酸、負(fù)電(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。因此，應(yīng)該理解哪些氨基酸可能會(huì)被具有類似生物物理學(xué)性質(zhì)的氨基酸置換，并且技術(shù)人員將會(huì)知道編碼這些氨基酸的核苷酸序列。也參考了上文中的表2。#法本發(fā)明還涉及在療法中使用本文所述的多肽、衍生物、類似物和核酸。具體而言，本發(fā)明提供了一種來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物，用作藥劑。本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明的多肽、衍生物或類似物的核酸分子，或者一種在嚴(yán)格條件下與編碼本發(fā)明的多肽、衍生物或類似物的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分子，用作藥劑。本發(fā)明還提供了下述物質(zhì)(a)至少一種來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物；(b)至少一種編碼(a)的多肽、衍生物或類似物的核酸分子；或(c)至少一種在嚴(yán)格條件下與(b)的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分子；用于制備一種用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏的病癥的藥劑的用途?？梢允褂萌魏紊衔乃龅亩嚯?、衍生物、類似物和核酸分子。本發(fā)明還提供了一種來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物，用作藥劑。本發(fā)明還提供了一種來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物用于制備一種用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏的病癥的藥劑的用途。本發(fā)明還提供了一種用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏的病癥的方法，所述方法包括給予需要這種治療的受試者治療有效量的來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物。因此，在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供了一種來(lái)源HLA-A2的oc3結(jié)構(gòu)域或跨膜結(jié)構(gòu)域的多肽或者其衍生物或類似物，用作藥劑。此外，在另一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供了一種來(lái)源自HLA-A2的oc3結(jié)構(gòu)域或跨膜結(jié)構(gòu)域的多肽或者其衍生物或類似物用于制備一種用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏的病癥的藥劑的用途。特別優(yōu)選的是，所述藥劑為用于治療或預(yù)防同種異體移植物排斥。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明所用的來(lái)源HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物還代表了能夠利用多種技術(shù)來(lái)給藥的良好藥劑，所述技術(shù)包括編碼這類分子的核酸序列的細(xì)胞表達(dá)。這類細(xì)胞表達(dá)方法特別適合于醫(yī)療用途，其中需要所述HLA-A2來(lái)源的肽或者其衍生物或類似物的治療作用持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間。因此，本發(fā)明還提供了一種編碼來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的核酸分子，用作藥劑。此外，本發(fā)明還提供了一種編碼來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物用于制備一種用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏的病癥的藥劑的用途。優(yōu)選地，所述藥劑為用于治療或預(yù)防同種異體移植物衰竭或排斥。術(shù)語(yǔ)"同種異體致敏"是指發(fā)展出抗外源抗原的抗體，這會(huì)導(dǎo)致許多疾病病癥。通?；加羞@類病癥的患者需要反復(fù)進(jìn)行輸血。然而，同種異體致敏通常能夠使得患者幾乎不能接受輸血，并且會(huì)危及生命。因此，特征為同種異體致敏的病癥包括地中海貧血和輸血。已知HLA-A2是移植器官排斥中的一個(gè)重要因素，移植器官排斥是發(fā)明人特別感興趣的一個(gè)醫(yī)療問(wèn)題，因此發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HLA-A2來(lái)源的肽或者其衍生物或類似物對(duì)于治療或預(yù)防同種異體移植物排斥特別有用。術(shù)語(yǔ)"同種異體移植物，，是指這樣一種移植過(guò)程，其中從一個(gè)個(gè)體(即供體)身上取出一種組織或器官并且置入另一個(gè)遺傳上不相同的個(gè)體體內(nèi)(即受體)。所述供體和受體均為相同物種的成員。術(shù)語(yǔ)"同種異體移植物"還可用于描述所述被抑制的組織或器官。術(shù)語(yǔ)"組織"是指一組經(jīng)過(guò)特化以進(jìn)行類似的功能的類似的細(xì)胞，例如肌肉、神經(jīng)、骨骼、軟骨、皮膚或結(jié)締組織。術(shù)語(yǔ)"器官"是指含有經(jīng)過(guò)組織化以實(shí)現(xiàn)身體特定功能的不同組織的身體結(jié)構(gòu)，例如心臟、肺、腦、皮膚、肝臟等。然而發(fā)明人不希望受限于任何假說(shuō)，他們相信使用來(lái)源自HLA-A2或其他MHCI類HLA(例如HLA-B或HLA-C)的多肽或者其矛汴生物或類似物將會(huì)對(duì)移植結(jié)果產(chǎn)生有益作用，所述作用不僅是通過(guò)抑制抗-HLA抗體的。這種作用不僅通過(guò)直接抑制某些效應(yīng)細(xì)胞的激活而且通過(guò)激活可抑制這些效應(yīng)細(xì)胞的調(diào)控細(xì)胞來(lái)產(chǎn)生，所述效應(yīng)細(xì)胞會(huì)損傷同種異體移植物或器官移植物。因此發(fā)明人相信，所述關(guān)于來(lái)源自HLA-A2或者其衍生物或類似物的反應(yīng)模式的令人吃驚的發(fā)現(xiàn)表明，這類肽或類似物被用在一種用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏(例如輸血)的病癥的方法中。發(fā)明人相信所述關(guān)于來(lái)源自HLA-A2或者其衍生物或類似物的反應(yīng)模式的令人吃驚的發(fā)現(xiàn)還表明這類肽或其類似物可以被用在一種用于治療或預(yù)防移植患者體內(nèi)的同種異體移植物排斥的方法中，不僅當(dāng)存在匹配HLA-A2的器官時(shí)而且存在于大多數(shù)移植病例中。這同樣適用于來(lái)源自其他匪CI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物。因此，特別優(yōu)選的是該方法被用于治療同種異體移植物排斥。發(fā)明人相信對(duì)這類基于肽的表位的鑒定使得可以開(kāi)發(fā)出基于肽的療法，所述療法包括給予受試者一種肽的混合物，所述混合物可以被用在許多具有不同MHCn類表位的個(gè)體體內(nèi)。因此，優(yōu)選的是本發(fā)明的方法包括給予需要治療的受試者治療有效量的至少一種多肽或者其衍生物或類似物，并且優(yōu)選許多來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物。來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物的結(jié)合物或混合物可以被給予所述受試者?？梢越o予任何上文所述多肽的結(jié)合物或混合物。因此，特別優(yōu)選的是本發(fā)明的方法包括給予需要治療的受試者治療有效量的至少一種多肽或者其衍生物或類似物，并且優(yōu)選許多來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物。來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的結(jié)合物或混合物可以被給予所述受試者。所述至少一種多肽、衍生物或類似物或者多種多肽、衍生物或類似物可以被給予致敏的患者，即已經(jīng)產(chǎn)生抗-HLA抗體的患者?；蛘撸鲋辽僖环N多肽、衍生物或類似物或者其混合物可以被給予個(gè)體，然后進(jìn)行移植或輸血以便消除對(duì)HLA的致敏?？紤]到脫敏時(shí)，技術(shù)人員可以預(yù)期到肽p39(SEQIDNO:42)、p50/51(SEQIDN0:57)和p52/53(SEQIDNO:58)會(huì)有益于自身那些沒(méi)有表達(dá)這些序列的個(gè)體，即表達(dá)了HLA-A1、HLA-A3、HLA-All、HLA-A23、HLA-A24、HLA-A30或HLA-A36并且隨后接受了(或者之前已經(jīng)接受了)表達(dá)HLA-A2、HLA-A25、HLA-A26、HLA-A29、HLA-A31、HLA-A32、HLA-A33、HLA-A34、HLA-A43、HLA-A66、HLA-A68、HLA-A69、HLA-A74的不匹配移植物(或輸血)的受試者。因此，根據(jù)前文應(yīng)該理解的是，優(yōu)選的來(lái)源自HLA-A2的非多態(tài)性區(qū)域的多肽、其衍生物或類似物也可由許多其他HLA-A分子——而不僅僅由HLA-A2——通過(guò)作為不同HLA分子之間的潛在交叉作用的位點(diǎn)來(lái)加以表達(dá)。因此，令人驚奇地，發(fā)明人相信在本發(fā)明的方法中使用這類肽，特別是用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏的病癥(具體而言同種異體移植物排斥和同種異體抗體合成)的好處比單獨(dú)使用HLA-A2抗原要多得多。因此，發(fā)明人相信他們的發(fā)現(xiàn)不僅涉及幫助抗體產(chǎn)生，還涉及自身移植物排斥的免疫機(jī)制，并且其涉及范圍比目標(biāo)HLA-A2要大得多，擴(kuò)展至對(duì)一般移植抗原的應(yīng)答。因此，在另一個(gè)方面中，提供了一種同種異體抗原或者來(lái)源于其的多肽或者其衍生物或類似物用于制備一種用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏的病癥的藥劑的用途。優(yōu)選地，所述藥劑為用于治療同種異體移植物排斥。優(yōu)選地，所述同種異體抗原，或者來(lái)源于其的多肽或其衍生物或類似物可能獨(dú)立地選自HLA-A2、HLA-A25、HLA-A26、HLA-A29、HLA-A31、HLA-A32、HLA-A33、HLA-A34、HLA-A43、HLA-A66、HLA-A68、HLA-A69、HLA-A74、HLA-A1、HLA-A3、HLA-All、HLA-A24、HLA-A30、HLA-A36、HLA-A80、HLA-A1、HLA-A3、HLA-All和HLA-A23，或者它們的組合。優(yōu)選的來(lái)源自所述同種異體抗原在上文中有所討論。在所述受試者已經(jīng)接受了同種異體移植物或移植物或輸血之后，可以給予所述受試者治療有效量的來(lái)源自MHCI類HLA(例如HLA-A2)的多肽或者其衍生物或類似物。然而，最優(yōu)選的是先將其給予所述受試者，然后給予該受試者同種異體移植物或移植物或輸血。因此，優(yōu)選地，將所述藥劑給予受試者，然后使其與抗原接觸，例如在進(jìn)行所列出的移植或輸血時(shí)。因此，所述方法優(yōu)選地包括給予疫苗或所謂的'陰性疫苗，，所述疫苗包括治療有效量的來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物。所述方法優(yōu)選地還包括給予疫苗或所謂的'陰性疫苗'，所述疫苗包括治療有效量的來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物。因此，提供了一種包括來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或41類似物的疫苗。還提供了一種包括來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的疫苗。發(fā)明人相信可以在大約1-6個(gè)月的過(guò)程中，通過(guò)約每周(但是可以是例如每天、每隔一天)使用越來(lái)越高劑量的所述'陰性疫苗，進(jìn)行治療過(guò)程。所給予的多肽、衍生物或類似物的量的范圍為約1jag-10mg。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明為用于預(yù)防或治療特征為同種異體致敏、同種異體移植物排斥或者輸血后繼發(fā)的同種異體免疫的病癥。將來(lái)自供體受試者的移植組織或器官移植到受體受試者體內(nèi)是通行的做法。因此，本發(fā)明擴(kuò)展到治療或預(yù)防任何組織(例如肌肉、神經(jīng)、骨骼、骨髓、軟骨、皮膚或結(jié)締組織)或任何器官(例如心臟、肺、腦、皮膚、肝臟等)的衰竭或排斥或者輸血后繼發(fā)的同種異體免疫。然而，發(fā)明人的研究著眼于患有終末期腎功能衰竭的患者。因此，特別優(yōu)選的是所述藥劑可以被用于治療或預(yù)防腎移植的排斥，或者進(jìn)行這類腎移植后繼發(fā)的或進(jìn)行輸血前的同種異體免疫。此外，正在用本發(fā)明的方法進(jìn)行治療的受試者可能患有腎移植物排斥。因此，優(yōu)選地是所述同種異體移植物或移植物包括腎或其一部分。下述討論設(shè)計(jì)單一療法、組合療法、給藥時(shí)間、組合物、給藥途徑、釋放裝置，以及來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的劑量。然而，這也適用于來(lái)源自其他MHCI類HLA(例如HLA-B或HLA-C)的多肽、其衍生物或類似物，以及編碼它們的核酸。應(yīng)該理解的是，所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物，或者編碼HLA-A2或其多肽、衍生物或類似物的核酸分子可以被用在單一療法中(即單獨(dú)使用來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物，或者編碼它們的核酸來(lái)預(yù)防和/或治療同種異體移植物衰竭或排斥)?；蛘?，來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其^f生物或類似物，或者編碼它們的核酸可以被用作添加劑(adjunct),或者與用于治療特征為同種異體致敏的病癥(例如同種異體移植物排斥)或使用鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶抑制劑、TOR制)的'^知方^法組^^吏用:'、、5'在所述受試者已經(jīng)接受了同種異體移植物或移植物之后，可以給予所述受試者治療有效量的所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物，或者編碼來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的核酸分子?；蛘撸梢灶A(yù)防性地給予受試者所述至少一種肽或其混合物，即減弱對(duì)HLA的應(yīng)答。然而發(fā)明人不希望受限于任何假說(shuō)，他們相信如果所述減弱機(jī)制包括顯性負(fù)相調(diào)節(jié)，那么這可能也會(huì)減弱對(duì)其他不匹配抗原的應(yīng)答，例如當(dāng)植入HLA-A2不匹配移植物時(shí)。因此，優(yōu)選的是在所述受試者已經(jīng)接受了同種異體移植物或移植物之前，給予所述受試者治療有效量的所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物，或者編碼來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的核酸分子，即與疫苗接種類似。發(fā)明人設(shè)想給予受試者至少一種，且優(yōu)選多種來(lái)源自HLA-A2的肽或者其衍生物或類似物。他們相信所述或者每種肽、其衍生物或類似物可以被用于下調(diào)所述對(duì)同種異體抗原的應(yīng)答，并且因此改善移植的結(jié)果和/或使得已經(jīng)產(chǎn)生抗-HLA抗體的患者脫敏。所述來(lái)源自HLA-A2的肽或者其衍生物或類似物，或者編碼來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的核酸分子可以被組合成具有許多不同形式的組合物，這主要取決于使用所述組合物的方式。例如，所述組合物可以為粉末、片劑、膠嚢、液體、軟膏劑、乳膏、凝膠、水凝膠、氣凝膠、噴霧、微團(tuán)、透皮貼劑、脂質(zhì)體或任何其他可以被給予需要治療的受試者的適合形式。應(yīng)該理解的是，所述本發(fā)明的組合物的載體應(yīng)該可以被接受它的受試者良好地耐受，并且優(yōu)選地使得所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物，或者編碼來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其^f生物或類似物的核酸分子可以凈皮遞送到免疫系統(tǒng)中。所述本發(fā)明的組合物的載體應(yīng)該可以被接受它的受試者良好地耐受，并且優(yōu)選地使得所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物，或者編碼來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其^f生物或類似物的核酸分子可以被遞送到免疫系統(tǒng)中?？梢砸远喾N方式使用本發(fā)明所用的包括來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物，或者編碼來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的核酸分子的組合物。例如，當(dāng)所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子被包含在可以例如以片劑、膠嚢或液體形式經(jīng)口服攝入的組合物中時(shí)，可能需要口服給藥。所述包括來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子的組合物可以通過(guò)吸入(例如經(jīng)鼻內(nèi))給藥。組合物可以被配制為用于局部應(yīng)用。例如，可43以將軟膏劑施加到皮膚上。還可以將所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子摻入到緩釋或延釋裝置中。這類裝置可以，例如被插入到皮膚上或者置于皮膚之下，并且所述組合物可以被持續(xù)釋放數(shù)周或則甚至數(shù)月。但是當(dāng)需要使用本發(fā)明所用的來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子進(jìn)行長(zhǎng)期治療時(shí)并且通常需要頻繁給藥(例如至少每天注射)時(shí)，這類裝置可能特別有利。然而，在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)注射到血流中來(lái)將所述包括來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子的組合物給予需要這種治療的受試者。注射可以是靜脈的(快速推注或滴注)或皮下的(快速推注或滴注)或真皮內(nèi)的(快速推注或滴注)。應(yīng)該理解的是，所需的來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子的量可以通過(guò)其生物學(xué)活性和生物利用度來(lái)確定，所述生物學(xué)活性和生物利用度又取決于給藥模式、所采用的來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子的物理化學(xué)性質(zhì)，以及所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子是否可被用在單一療法或組合療法中。給藥頻率還將會(huì)受到上述因素的影響，并且具體地受到該正在接受治療的受試者體內(nèi)的所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子的半衰期的影響。所要給予的最佳劑量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)決定，并且將會(huì)隨著具體使用的來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子、制品強(qiáng)度、給藥模式和疾病狀況的進(jìn)展而變化。取決于正在接受治療的具體受試者的其他因素將會(huì)導(dǎo)致需要改變劑量，包括受試者年齡、體重、性別、飲食和給藥時(shí)間。已知的方法——例如那些通常被制藥工業(yè)所采用的(例如體內(nèi)實(shí)驗(yàn)、臨床試驗(yàn)等)——可以被用于確定本發(fā)明所用的來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子的具體劑型，以及精確的治療方案(例如所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子的每日劑量和給藥頻率)。通常，可以是使用每千克體重0.001ng-100ng來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子的每日劑量來(lái)預(yù)防和/或治療同種異體移植物衰竭或排斥，每日劑量取決于所使用的來(lái)源自HLA-A2的具體多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子。更優(yōu)選地，所述每日劑量為每千克體重0.01pg-10jag，并且最優(yōu)選地為每千克體重0.01pg-l"g。每曰劑量可以為單次給藥(例如每日注射一次)?；蛘?，需要在一天中給予兩次或多次所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子。作為一個(gè)實(shí)例，可以以0.07pg-7000/ag(即假設(shè)體重為70kg)的每日兩次(或多次，取決于病癥的嚴(yán)重程度)劑量來(lái)給予來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子。接受治療的患者可以在蘇醒時(shí)服用第一劑量，然后在晚上或者在其后的3或4個(gè)小時(shí)的間隔時(shí)服用第二劑量(如果是兩次劑量方案)?；蛘撸梢允褂镁忈屟b置來(lái)為患者提供最佳劑量，而不必反復(fù)給藥。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，包括治療有效量的本發(fā)明的多肽、衍生物或類似物或者本發(fā)明的核酸分子，以及任選地可藥用載體。優(yōu)選地，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，包括治療有效量的來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物，或者編碼來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的核酸分子，以及任選地可藥用栽體。所述組合物可以包括上文所述多肽、；時(shí)生物、類似物或核酸中的一種或多種。本發(fā)明還提供了一種用于制備藥物組合物的方法，包括將治療有效量的本發(fā)明的多肽、衍生物或類似物或者本發(fā)明的核酸分子與可藥用栽體相組合。優(yōu)選地，本發(fā)明提供了一種用于制備藥物組合物的方法，包括將治療有效量的來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物，或者編碼來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的核酸分子與可藥用栽體相組合。下述關(guān)于給藥量、給藥載體和給藥途徑的討論涉及來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物。然而，這也適用于來(lái)源自其他匪CI類HLA(例如HLA-B或HLA-C)的多肽、其f汙生物或類似物，以及編碼它們的核酸。所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子的量可以為約0.Olpg-約800jug,并且優(yōu)選地為0.01mg-約500yg。優(yōu)選的是，所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子的量為約0.01mg-約250mg，更優(yōu)選約0.1mg-約60mg,并且最優(yōu)選約0.1mg-約20mg。"治療有效量"是指當(dāng)將來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子給予受試者時(shí)可預(yù)防和/或治療特征為同種異體致敏的病癥(同種異體移植物衰竭或排斥)的上述物質(zhì)的任何劑量。"受試者"可以是脊推動(dòng)物、哺乳動(dòng)物或家畜，并且優(yōu)選地是人。本文所述的"可藥用栽體"是指任何本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的可用于配制藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述可藥用栽體可以是固體，并且所述組合物可以是粉末或片劑的形式。固體可藥用載體可以包括一種或多種還可以作為調(diào)味劑、潤(rùn)滑劑、溶解劑、助懸劑、填充劑、助流劑、壓縮助劑、粘合劑或片劑-崩解劑的物質(zhì)；它還可以是一種封裝材料。在粉末中，所述載體是一種細(xì)分散的固體，所述固體與細(xì)分散的來(lái)源自HLA-A2的活性多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子混合。在片劑中，將所述來(lái)源自HLA-A2的活性多肽或者其^f生物或類似物或者核酸分子與一種具有所必需的壓縮性質(zhì)的載體以適合的比例混合并且壓縮成所需形狀和大小。優(yōu)選地，所述粉末和片劑含有最高達(dá)99%的所述來(lái)源自HLA-A2的活性多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子。適合的固體載體包括，例如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石、糖類、乳糖、糊精、淀粉、明膠、纖維素、聚乙烯吡咯烷、低熔點(diǎn)蠟和離子交換樹(shù)脂。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物載體可以是凝膠，并且所述組合物可以為霜?jiǎng)┑刃问健Ｈ欢?，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述藥物載體為液體，并且所述藥物組合物為溶液形式。液體載體可以用于制備溶液、懸液、乳液、糖漿、酏劑和壓縮的組合物。可以將所述來(lái)源自HLA-A2的活性多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子溶解或懸浮到可藥用的液體載體中，例如水、有機(jī)溶劑、兩者的混合物或者可藥用油或脂肪。所述液體載體可以包含其他適合的藥物添加劑，例如溶解劑、乳化劑、緩沖液、防腐劑、甜味劑、調(diào)味劑、助懸劑、稠化劑、著色劑、粘度調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑或滲透壓調(diào)節(jié)劑。用于口服和非消化道給藥的液體栽體的適合實(shí)例包括水(部分含有上述添加劑，例如纖維素衍生物，優(yōu)選羧曱基纖維素鈉溶液)、醇類(包括單羥基醇和多羥基醇，例如二醇)及它們的衍生物，以及油(例如分餾的椰子油和花生油)。對(duì)于非消化道給藥，所述載體還可以為油酯，例如油酸乙酯和異丙基肉豆蔻酸酯。無(wú)菌液體載體可用在無(wú)菌液體形式的組合物中以進(jìn)行非消化道給藥。用于壓縮組合物的液體載體可以為卣化烴或其他可藥用推進(jìn)劑。無(wú)菌溶液或懸液形式的液體藥物組合物可以通過(guò)例如肌內(nèi)注射、鞘內(nèi)注射、硬膜外注射、腹膜內(nèi)注射、靜脈注射，特別是皮下注射、腦內(nèi)注射或腦室內(nèi)注射來(lái)加以利用?？梢詫⑺鰜?lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子制備成無(wú)菌固體組合物，所述組合物在給藥時(shí)可以被溶于或懸浮于無(wú)菌水、鹽水或其它適當(dāng)?shù)臒o(wú)菌注射介質(zhì)中。載體意在包括必需的且惰性的粘合劑、助懸劑、潤(rùn)滑劑、調(diào)味劑、甜味劑、防腐劑、染料和包衣。所述來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子可以以無(wú)菌溶液或懸液形式經(jīng)口服給藥，所述無(wú)菌溶液或懸液含有其他溶質(zhì)或助懸劑(例如，足夠的鹽水或葡萄糖以產(chǎn)生等滲溶液)、膽汁鹽、阿拉伯膠、明膠、山梨聚糖、單油酸酯、多山醇酯80(山梨糖醇的油酸酯和它的與環(huán)氧乙烷共聚的酸酐)等。本發(fā)明所用的來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物或者核酸分子還可以以液體或固體組合物形式經(jīng)口服給藥。適合于口服給藥的組合物包括固體形式，例如丸劑、膠嚢、顆粒劑、片劑和粉末；液體形式，例如溶液、糖漿、酏劑和懸液。用于非消化道給藥的形式包括無(wú)菌溶液、乳液和懸液。應(yīng)該理解的是來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的治療作用可能會(huì)受到某些試劑的"間接"調(diào)節(jié)，所述試劑可增加這類肽或類似物的活性。因此，本發(fā)明還提供了這類試劑的第一醫(yī)療用途。因此，本發(fā)明還提供了一種能夠增加來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的生物學(xué)活性的試劑，用作藥劑。能夠增加來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的生物學(xué)活性的試劑可以通過(guò)許多方式來(lái)實(shí)現(xiàn)其作用。例如，這類試劑可能會(huì)增加來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的表達(dá)?？蛇x地或附加地，這類試劑可能會(huì)延長(zhǎng)來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物在生物系統(tǒng)中的半衰期，例如通過(guò)減少來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物的周轉(zhuǎn)。由于它們的生物學(xué)活性增強(qiáng)，所以來(lái)源自HLA-A2的多肽或者其衍生物或類似物可被用作抗-同種異體移植物排斥的試劑。本發(fā)明還提供了一種刺激T細(xì)胞的體外方法，所述方法包括在可刺激所述T細(xì)胞的條件下使所述T細(xì)胞接觸(a)—種來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其矛;f生物或類似物；(b)—種編碼(a)的多肽、衍生物或類似物的核酸分子；或(c)一種在嚴(yán)格條件下與(b)的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分子；從而刺激所述T細(xì)胞。在該方法中可以4吏用任何上文所述的多肽、；肝生物、類似物和核酸。適合用于刺激T細(xì)胞的條件在本領(lǐng)域中是已知的。本發(fā)明的方法具有多種用途。例如，可以在取自正在經(jīng)歷移植物慢性排斥的移植患者的T細(xì)胞樣品進(jìn)行所述方法。所述患者的T細(xì)胞對(duì)所述HLA來(lái)源多肽的陽(yáng)性應(yīng)答表明所述慢性排斥涉及免疫系統(tǒng)成員。所述患者的T細(xì)胞對(duì)所述HLA來(lái)源多肽的陰性應(yīng)答表明所述慢性排斥是由于基于非免疫系統(tǒng)的機(jī)制，例如環(huán)孢菌素的中毒性腎損害。在任何組合中，本文所述的所有性質(zhì)(包括任何所附權(quán)利要求、摘要和附圖)，和/或所公開(kāi)的任何方法或工藝的所有步驟均可能會(huì)與上述任何方面結(jié)合，除了其中至少一些這類性質(zhì)和/或步驟相互排斥的組合之外。為了更好地理解本發(fā)明并且為了顯示相同的實(shí)施方案如何生效，將會(huì)參考下述實(shí)施例。實(shí)施例無(wú)迷發(fā)明人認(rèn)識(shí)到抗-HLA抗體的存在表明腎移植不當(dāng)，并且移植術(shù)后會(huì)伴隨同種異體移植物衰竭。此外，HLA特異性抗體的獲得暗示在間接同種異體識(shí)別過(guò)程中存在T輔助細(xì)胞，并且該途徑還會(huì)在并不依賴于同種異體抗體合成的排斥中起作用。因此，發(fā)明人系統(tǒng)地研究了對(duì)單個(gè)MHCI類分子HLA-A2的應(yīng)答，所述HLA-A2在等待器官移植的致敏患者(即已48經(jīng)產(chǎn)生HLA-A2抗體的患者)體內(nèi)是共同的靶抗原。在實(shí)施例l和2中，發(fā)明人設(shè)計(jì)了一系列共60種重疊的15聚體肽，所述肽4黃跨了HLA*020101的一級(jí)序列。然而，4吏用F-moc^支術(shù)僅可以合成53種肽(pl-p53)。然后利用ELISA研究了這53種肽對(duì)13種不同MHCI類分子的結(jié)合親和力。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)來(lái)源自HLA-A2分子上數(shù)個(gè)位置的肽會(huì)與MHC隨機(jī)結(jié)合。然后，使用所述與MHCn類結(jié)合的30種肽刺激取自40名有記載的移植患者的外周血單核細(xì)胞(PBMC),所述患者具有已知的抗體致敏病史。利用Y-干擾素酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法評(píng)估應(yīng)答，并且在下文中總結(jié)了所述研究結(jié)果。在實(shí)施例3中，發(fā)明人對(duì)所述一些來(lái)源自HLA-A2的15聚體肽的序列和其他HLA多肽中的序列進(jìn)行了比較以尋找相關(guān)的其他序列。實(shí)施例1材料和方法i;^絲裙甜在豫浙為了使所要用直接匪C-肽結(jié)合測(cè)定法篩選的肽的數(shù)目最少并且使可能的目的區(qū)域的區(qū)別最大，采用了一種系統(tǒng)的方法，包括對(duì)所述HLA-A*0201分子(即HLA-A2)的基本氨基酸序列進(jìn)行基于計(jì)算機(jī)的初步評(píng)估。將所述HLA-A2的DNA序列標(biāo)記為SEQIDNO:3并且將所述氨基酸序列標(biāo)記為SEQIDNO:1和2。參考圖1，示出了人I類組織相容性分子HLA-A2的胞外部分的三維結(jié)構(gòu)示意圖。P構(gòu)象的伸展用寬箭頭表示(從N末端指向C末端)。ot螺旋區(qū)域以螺旋帶形式示出。圓球?qū)Υ矶驑?。P-2-微球蛋白(p2m)的分子與otl和ot2結(jié)構(gòu)域的連接部分結(jié)合，并且僅通過(guò)非共價(jià)相互作用與ot3結(jié)構(gòu)域結(jié)合。未在圖1中示出的是存在以非共價(jià)方式結(jié)合在ocl和a2結(jié)構(gòu)域的a螺旋之間的溝中的短肽。肽與ct螺旋相鄰部分的結(jié)合構(gòu)成了可被CD8+T細(xì)胞識(shí)別的表位。HLA-A2的跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域未示出，但是應(yīng)該理解的是所述跨膜結(jié)構(gòu)域從約第283位氨基酸殘基開(kāi)始向前延伸。使用廣泛應(yīng)用的算法TEPITOPE(Sturniolo，T.，etal.，Generationoftissue—specificandpromiscuousHLAliganddatabasesusingDNAmicroarraysandvirtualHLAclassIImatrices.NatBiotechnol，1999.17(6):p.555-61)實(shí)施對(duì)所述HLA-A2分子的一級(jí)氨基酸序列的分析。使用該程序來(lái)鑒定與先前鑒定并且表征的表位共享HLA結(jié)合基序的序列。然而，因?yàn)檫@類計(jì)算機(jī)輔助方法可能會(huì)遺漏那些沒(méi)有形成標(biāo)準(zhǔn)基序的表位，發(fā)明人進(jìn)行了額外的文獻(xiàn)和數(shù)據(jù)庫(kù)搜索以便鑒定出所有已經(jīng)報(bào)道過(guò)的來(lái)源自HLA-A2分子的MHCn類結(jié)合序列。"y絲賄《吏用預(yù)測(cè)性的差、于計(jì)算機(jī)的算法(例如EXPASY(www.expasy.org/))評(píng)估那些經(jīng)預(yù)測(cè)認(rèn)為會(huì)與MHCn類分子結(jié)合的序列的可溶性。發(fā)明人相信這類可溶性分析是物理結(jié)合測(cè)定法的一個(gè)重要前導(dǎo)(precursor),因?yàn)樗梢澡b定出任何含有重要的、天然加工的、名義上不可溶的MHC-結(jié)合核心基序。通常，可以通過(guò)加上各種在天然情況下存在于所述源蛋白中的側(cè)翼殘基來(lái)使得這類表位可溶。該方法避免了某些耗時(shí)且昂貴的肽合成，所述肽在MHC結(jié)合測(cè)定過(guò)程中不會(huì)產(chǎn)生數(shù)據(jù)，并且因此最終對(duì)臨床干預(yù)幾乎沒(méi)有用處。"炎合^設(shè)計(jì)了一系列共60種重疊的15聚體肽，所迷肽的跨距長(zhǎng)為HLA*020101的一級(jí)序列。然而，只能合成53種肽(pl-p53)。因此，利用標(biāo)準(zhǔn)的Fmoc化學(xué)方法生成了HC1鹽形式的一系列共53種僅偏移2-5個(gè)殘基的合成的重疊15聚體一一對(duì)應(yīng)于可溶的MHCn類結(jié)合基序一一并且將其制成凍干成粉末(NeoMPSSA，Strasbourg,France)。將肽用10—4MHC1復(fù)原。參考圖2,示出了全部53種肽的詳細(xì)情況，命名為pl-p53。圖2示出了每種肽的位置、分子量和序列。W^謬,/^遂必W^^》、f潛合^農(nóng)所述肽-MHC結(jié)合測(cè)定法為一種竟?fàn)幮詼y(cè)定法，其中將"查詢"肽滴定到含有固定的純化的MHC分子和已知濃度的生物素化的參照肽的孔中，已知所述肽會(huì)以高親和力與所研究的分子結(jié)合。用于研究的MHC分子包括DRB1*0101(DR1)、DRB1*0301(DR3)、DRB1*0401(DR4)、DRB1*0701(DR7)、DRB1*1101(DR11)、DRB1*1301(DR13)、DRB1*1501(DR15);DRB3*0101(DRB3)、HLA-DRB4*0101(DRB4)50和HLA-DRB5*0101(DRB%);HLA-DPA1*0103/DPB1*0401(DP401)和HLA-DPA1*0103/DPB1*0402(DP402)。這些都是在CEA-Saclay研究中心進(jìn)行的，使用其實(shí)驗(yàn)室中成熟的用于分析其他抗原的技術(shù)(Texier，C，etal.，HLA-DRrestrictedpeptidecandidatesforbeevenomimmunotherapy.JImmunol,2000.164(6):p.3177-84)。將結(jié)合實(shí)驗(yàn)獨(dú)立的隨機(jī)重復(fù)三次以確認(rèn)結(jié)果。將結(jié)果表達(dá)為nmIC50;和與以已知的高親和力與每種特定MHC等位基因結(jié)合的參照肽(也用所述測(cè)定法篩選)相比，每種肽的結(jié)合率。認(rèn)為結(jié)合率低于20的為高親和力結(jié)合分子，結(jié)合率為21-100的那些為中等的結(jié)合分子。在先的數(shù)據(jù)表明重要的T細(xì)胞表位很少具有超出這些窗口的結(jié)合親和力，但是存在例外。參考圖4,示出了所產(chǎn)生的結(jié)合研究數(shù)據(jù)。這些數(shù)據(jù)表明與50%結(jié)合濃度的對(duì)照肽相比，50。yi抑制濃度(IC50)的測(cè)試肽與所研究的MHCn類分子的比率。5)體外功能分析-外周血單核細(xì)胞的免疫應(yīng)答上述研究鑒定出了各種各樣的與至少一種MHCn類分子結(jié)合的肽，但是少數(shù)表現(xiàn)出隨機(jī)結(jié)合。基于這些研究，用于進(jìn)行進(jìn)一步研究的肽的數(shù)目由53降至30。未對(duì)與MHCn類幾乎沒(méi)有或沒(méi)有明顯結(jié)合的23種肽——它們的結(jié)合親和力與對(duì)照的結(jié)合親和力的比例〉100——進(jìn)行進(jìn)一步研究。進(jìn)行該研究以便限制每名被研究患者所需的血量。使用Y干擾素酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法確定是否存在特異性抗任何給定肽的淋巴細(xì)胞，所述Y干擾素酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法使用500，000個(gè)外周血單核細(xì)胞/孔，重復(fù)四次。簡(jiǎn)言之，外周血單核細(xì)胞(PBMC)是通過(guò)密度離心從肝素化的全血中分離出來(lái)的。將這些細(xì)胞沖洗并且重懸于完全培養(yǎng)基中(含有10%的ab血清)。將細(xì)胞與各種肽在96孔y干擾素酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)板(Mabtech，NackaStrand,Sweden)的100p1完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，肽的濃度為4pg和20jig/ml。利用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法評(píng)估產(chǎn)y干擾素細(xì)胞的頻率，如圖7中所示的單個(gè)示例患者的。然后比較致敏和未致敏組中個(gè)體的肽特異性應(yīng)答的頻率和特異性。6)招募用于研究的受試者受試患者招募自伯明翰大學(xué)醫(yī)院的腎移植候補(bǔ)名單。首先找到在伯明翰大學(xué)醫(yī)院進(jìn)行透析的患者，然后獲得當(dāng)?shù)匮芯總惱砦瘑T會(huì)的批準(zhǔn)書(shū)。排除目前正在接受免疫抑制或血紅蛋白低于10g/dl的受試者。在已經(jīng)獲得完全知情同意的情況下，在進(jìn)行常規(guī)靜脈切開(kāi)術(shù)時(shí)收集50ml靜脈血。通過(guò)中英格蘭西輸血服務(wù)免疫遺傳實(shí)驗(yàn)室(WestMidlandsBloodTransfusionServiceImmunogeneticsLaboratory)的常規(guī)臨床評(píng)估,可以獲得每名受試者的所述利用標(biāo)準(zhǔn)分子技術(shù)確定的HLA類型。該實(shí)驗(yàn)室使用標(biāo)準(zhǔn)的基于流式細(xì)胞術(shù)的技術(shù)(包括在常規(guī)臨床實(shí)踐環(huán)境中使用單特異性珠)表征抗-HLA抗體的特異性，并且提供了關(guān)于各個(gè)受試者的抗體特異性的相關(guān)歷史信息。潛,發(fā)明人檢查了下表中所總結(jié)的5組患者。表3-患者組患者抗-HLA抗體狀況患者HLA類型A2+A2-致敏的且?guī)в锌?HLAA212/15(組1)致敏的且不帶有抗-HLAA20/6(組2)1/5(組3)未致敏的1/6(組4)2/8(組5)^吏用標(biāo)準(zhǔn)的固相的基于流式細(xì)胞術(shù)的4支術(shù)('Luminex，)確定存在抗體與否。每組中的分母表示所研究的患者的數(shù)目，分子為每組中對(duì)至少1種肽產(chǎn)生應(yīng)答的患者的數(shù)目。在組1中，有10名患者對(duì)肽p20/21產(chǎn)生應(yīng)答。所述肽來(lái)源自HLA-A2的高度多態(tài)性區(qū)域。緊密重疊的肽來(lái)源自人B淋巴細(xì)胞HLADR1，即已經(jīng)證明它是'天然加工的，和呈遞的內(nèi)源蛋白。還已經(jīng)鑒定出在排斥A2陽(yáng)性腎的患者體內(nèi)含有這些序列的較大肽為DR15限制性表位。在組l中有IO名患者對(duì)來(lái)源自oc3和跨膜結(jié)構(gòu)域的肽產(chǎn)生應(yīng)答，所述結(jié)構(gòu)域具有非常有限的多態(tài)性。這些肽中最常見(jiàn)的是p39(192-206)、p50/51(268-284)和p52/53(280-296),但是少量的其他位點(diǎn)也會(huì)導(dǎo)致應(yīng)答，包括p40(202-216)和p45/46(239-256)。先前并沒(méi)有報(bào)道過(guò)這些肽是T細(xì)胞表位。在其中的兩名患者中，所述ot3/跨膜肽中的一些為自身表位，例如患者1為A68陽(yáng)性，并且因此與HLA-A2共享p39、p52/p53的序列。參考圖5,示出了p39的序列。左側(cè)的圓圈示出了其中所述同源區(qū)域的序列與HLA-A2共享的HLA類型，并且右側(cè)的圓圏示出了那些其中所述同源區(qū)域與HLA-A2不同的HLA類型和所相差的兩個(gè)氨基酸(193位的丙氨酸被置換為脯氨酸，且194位的纈氨酸被置換為異亮氨酸)。參考圖6，示出了p50和p51的序列。左側(cè)的圓圏示出了其中所述同源區(qū)域的序列與HLA-A2共享的HLA類型，并且其他圓圈示出了那些其中所述同源區(qū)域與HLA-A2不同的HLA類型和所相差的氨基酸(對(duì)于A3、All、A30、A36等，276位的脯氨酸被置換為亮氨酸)。參考圖7，示出了p52和p53的序列。左側(cè)的圓圈示出了其中所述同源區(qū)域的序列與HLA-A2共享的HLA類型，并且其他圓圏示出了那些其中所述同源區(qū)域與HLA-A2不同的HLA類型和所相差的氨基酸(對(duì)于Al、A3、All、A30、A36等，294位的苯丙氨酸被置換為亮氨酸)。在組2中沒(méi)有應(yīng)答。在組3中1/5的患者對(duì)來(lái)源自所述ot3和跨膜結(jié)構(gòu)域的肽產(chǎn)生應(yīng)答。這再次符合下述假說(shuō)，即非HLA-A2的其他HLA-A致敏的患者可能會(huì)對(duì)所共享的來(lái)源自所述ct3和跨膜結(jié)構(gòu)域的序列產(chǎn)生應(yīng)答。在組4中1/6的患者產(chǎn)生應(yīng)答。這是對(duì)p39、p50/51、p52/53和pll的自發(fā)應(yīng)答。在1/6的'未透析，的正常對(duì)照中也已經(jīng)觀察到這類應(yīng)答。在組4中2/8的患者對(duì)p39或p50/51和p52/53產(chǎn)生應(yīng)答。這些患者之前已經(jīng)接受輸血并且因此已經(jīng)在T淋巴細(xì)胞水平被致敏，但未產(chǎn)生抗-HLA抗體。參考圖8,示出了肽反應(yīng)細(xì)胞/500，000PBMC的Elispot計(jì)數(shù)。肽濃度為20ng/ml。數(shù)據(jù)表明該個(gè)體一一在先前妊娠和輸血的背景下，她已產(chǎn)生高水平的抗-HLA抗體達(dá)將近IO年之久——產(chǎn)生對(duì)p20、p39以及p52和p53的混合物的高頻率應(yīng)答。她的組織類型為A1、68;B37、44;C6、7;DRIO、11。因此，該患者對(duì)高度多態(tài)性區(qū)域特別是對(duì)所述位于覆蓋p20和21的第105-121位HLA-A2序列殘基中的序列產(chǎn)生應(yīng)答，發(fā)53明人已證明所述序列會(huì)與MHCII類隨機(jī)結(jié)合。她還對(duì)來(lái)源自HLA-A2的oc3和跨膜區(qū)域的肽產(chǎn)生應(yīng)答，它們的性質(zhì)如上文所述。其實(shí)在她這種情況下，這些應(yīng)答是自身反應(yīng)性的，因?yàn)檫@些序列是與HLA-A68共享的。陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)答是針對(duì)結(jié)核分枝桿菌的純化蛋白衍生物(PPD)的，并且陰性對(duì)照是針對(duì)培養(yǎng)基的。,g潛總而言之，結(jié)果顯示來(lái)源自a3和跨膜結(jié)構(gòu)域的具有有限多態(tài)性的肽通常會(huì)誘發(fā)免疫應(yīng)答。其特異性通常是同種異體的，但是有時(shí)是自身免疫的。對(duì)這些肽的應(yīng)答與HLA-A2致敏之間的關(guān)聯(lián)意p未著它們與抗-HLA抗體形成有關(guān)。它們還會(huì)構(gòu)成間接呈遞的表位，所述表位可能會(huì)通過(guò)T細(xì)胞介導(dǎo)的損傷機(jī)制來(lái)驅(qū)動(dòng)慢性排斥。隨著這些肽被廣泛地表達(dá)，它們是進(jìn)行治療性脫敏的理想靶標(biāo)。此外，本文所公開(kāi)的含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸置換的肽類似物幾乎可以完全代表HLA-A。此外，本發(fā)明的每種優(yōu)選的肽可以利用許多其他HLA-A分子來(lái)表達(dá)，而不僅僅是HLA-A2。因此，發(fā)明人相信在本發(fā)明的方法中使用這類肽一一特別是用于治療或預(yù)防同種異體移植物衰竭或排斥一一和/或經(jīng)HLA-A2抗原要多得多。因此，發(fā)明人相信他們的發(fā)現(xiàn)不僅涉及抗體產(chǎn)生，還涉及自身移植物衰竭或排斥的免疫機(jī)制，并且其涉及范圍比目標(biāo)HLA-A2要大得多，擴(kuò)展至對(duì)一般移植抗原的應(yīng)答。然而，發(fā)明人不希望受限于任何假說(shuō)，他們相信本發(fā)明的肽、衍生物或類似物的混合物或"雞尾酒"可被用于下調(diào)對(duì)同種異體抗原的應(yīng)答，并且因此改善移植的結(jié)果和/或允許脫敏已經(jīng)產(chǎn)生抗-HLA抗體的患者。本發(fā)明的新穎性不僅在于限定了HLA-A2的準(zhǔn)確肽序列(即表位)，還在于所述令人吃驚的發(fā)現(xiàn)，即這些序列可能是'公共的，；目前為止該術(shù)語(yǔ)僅適用于B細(xì)胞表位，因?yàn)門(mén)細(xì)胞尚無(wú)法識(shí)別它們。因此，這一令人吃驚的發(fā)現(xiàn)使得可以使用含有有限數(shù)量的肽的混合物或雞尾酒，所述肽具有潛在地廣泛療效。實(shí)施例2設(shè)計(jì)60種重疊肽——15或16個(gè)氨基酸長(zhǎng)——以便給出HLA-A*020101對(duì)假定T細(xì)胞表位的最佳覆蓋范圍，使用程序Tepitope(33)。^吏用www.expasy.org的程序預(yù)測(cè)肽的可溶性。4吏用如前所述的Fmoc化學(xué)方法合成肽(NeoMPS，Strasbourg,France),但是所設(shè)計(jì)的這些肽中僅可以合成53種。對(duì)照肽的生物素化是通過(guò)與所述分子仰2末端的生物素基-6-氨基己酸(FlukaChimie,St.QuentinFallavier，F(xiàn)rance)反應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。所有的肽均是通過(guò)在C18Vydac柱上利用反相HPLC純化的，并且它們的質(zhì)量是利用電噴霧質(zhì)譜和分析HPLC來(lái)加以評(píng)估的。脂-朋為、僧遂化如前文所述(Texier""，JImmunol2000;164(6):3177—84)，HLA-DR分子是通過(guò)使用單克隆抗-DR抗體L-243的親和層析從HLA-純合EBV細(xì)胞中純化出來(lái)的，所述單克隆抗-DR抗體L-243與蛋白A-瓊脂糖CL4B凝膠偶聯(lián)(AmershamPharmaciaBiotech,0rsay，F(xiàn)rance)。肌爿-ZW炎潛合浙;t使用如前所述的竟?fàn)幮詼y(cè)定法(Texier""，EurJImmunol2001;31(6):1837-46)測(cè)定肽與不同HLA-DR分子的結(jié)合。使用生物素化的對(duì)照肽(參見(jiàn)圖9),所述肽是所研究的匪cn類分子的良好結(jié)合分子，并且使用純化且固定的MHCn類測(cè)試用所述結(jié)合測(cè)定法滴定的肽。最大結(jié)合通過(guò)在不存在竟?fàn)巹┑那闆r下將所述生物素化的肽與MHCn類分子共同孵育來(lái)確定的。將數(shù)據(jù)表達(dá)為可防止所標(biāo)記的肽的50%結(jié)合(IC50)的肽濃度。認(rèn)為小于20的對(duì)照肽與測(cè)定肽的IC50比為高親和力結(jié)合，并且20-100為中等親和力。被乂舉該研究是在南伯明翰研究道德委員會(huì)(SouthBirminghamresearchethicscommittee)的許可下進(jìn)行的。所有的受試者都是在伯明翰大學(xué)醫(yī)院或里茲的圣詹姆士醫(yī)院進(jìn)行透析的。血液樣品是在進(jìn)行常規(guī)靜脈切開(kāi)術(shù)時(shí)從透析患者身上收集的。HLA基因型是在英國(guó)伯明翰國(guó)家血液服務(wù)實(shí)驗(yàn)室使用標(biāo)準(zhǔn)分子技術(shù)確定的一一由此可以獲得每名受試者的同種異體抗體形成的歷史一一并且是利用標(biāo)準(zhǔn)生物毒性、流式細(xì)胞術(shù)和固相測(cè)定進(jìn)行篩選的。排除患有貧血的患者或者在研究的3個(gè)月內(nèi)接受了免疫抑制藥物的患者。根據(jù)組織類型和抗-HLA抗體合成的歷史將受試者分為5組(參見(jiàn)表4)。表4-患者組組1HLA-A2陰性且具有抗HLA-A2抗體組2HLA-A2陰性且具有抗非-A2HLA抗體組3HLA-A2陰性且不具有抗HLA抗體形成的歷史組4HLA-A2陽(yáng)性且具有抗非-A2HLA抗體組5HLA-A2陽(yáng)性不具有抗HLA抗體形成的歷史雜聯(lián)i^^歡諒乂聘定PBMC是在使用前利用Ficoll密度梯度離心前從外周血中分離出來(lái)的?；罴?xì)胞是利用臺(tái)盼藍(lán)拒染法計(jì)數(shù)的按照生產(chǎn)商的說(shuō)明書(shū)(Mabtech,NackaStrand,Sweden)使用y-干擾素斑點(diǎn)測(cè)定法。將總計(jì)5xl()5個(gè)PBMC加入到每個(gè)孔中，終體積為100jul的'完全培養(yǎng)基，、95%RPMI1640培養(yǎng)基(Sigma，Poole，UK)/5%人AB血清(PAAlaboratories，Somerset,UK)、L-谷氨酰胺和青霉素/鏈霉素(Sigma)，以及終濃度為4jagml—1或20/agml—i的肽。單獨(dú)使用肽，或者成對(duì)使用一些序列偏移2個(gè)氨基酸的肽。陰性對(duì)照孔僅含有應(yīng)答PBMC的培養(yǎng)基。陽(yáng)性對(duì)照孔含有終濃度為10|igml—丄的PPD(SSI，Copenhagen,Denmark)、lpgml4的破傷風(fēng)類毒素(Calbiochem，MerckBiosciences,UKL)或者近來(lái)由所述Elispot領(lǐng)'J定的制造商提供的陽(yáng)性對(duì)照(基于抗-CD3)。將所述PBMC在37t:下在5%的C02培養(yǎng)48小時(shí)，然后棄去并且將該板用PBS清洗6次。然后，將板在室溫下用一步檢測(cè)試劑(堿性磷酸酶-綴合的檢測(cè)單克隆抗體7-B6-l，通過(guò)用過(guò)濾的含有0.5%胎牛血清(Sigma)的PBS稀釋至1:200制備的)孵育。然后將其棄去并且將板用PBS清洗5次。加入生產(chǎn)商提供的過(guò)濾待用的產(chǎn)色性堿性磷酸酶底物(氮藍(lán)四唑/5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯(BCIP/NBT-plus))至體積為100n1/孔。使該板繼續(xù)反應(yīng)，并且在出現(xiàn)斑點(diǎn)時(shí)終止反應(yīng)。將板用大量自來(lái)水清洗，然后在黑暗中空氣干燥至少12小時(shí)，單后進(jìn)行分析。然后使用AIDElispot板讀數(shù)器(Strassberg，56Germany)對(duì)每個(gè)孔中的斑點(diǎn)數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)。將對(duì)測(cè)試肽的陽(yáng)性應(yīng)答定義為利用ANOVA法算出每個(gè)孔中斑點(diǎn)的數(shù)目明顯高于對(duì)照。#類戎沐命斧//《凝^^#并#力瘦^^通過(guò)將抗MHCn類單克隆抗體(Tu39，BectonDickinson,Oxford,UnitedKingdom)和抗-DR單克隆抗體(L243，BectonDickinson)的混合物加入到細(xì)胞培養(yǎng)物中來(lái)研究對(duì)肽的MHC限制性應(yīng)答。柳C艦辨教在37C下以1()S細(xì)胞/ml的濃度將PBMC重懸到溫RPMI中，在所述RPMI中加入CFSE至終濃度為10mM。將其在37t:下在5%0)2中培養(yǎng)且間歇地?cái)嚢?0分鐘，加入AB血清(Sigma)以終止標(biāo)記，然后將細(xì)胞清洗兩次。在不存在或存在終濃度為4jagml—i或20ligm廠i的測(cè)試肽或10jigml—的PPD的情況下，將細(xì)胞以2.5xl()S細(xì)胞/ml的濃度重懸到96孔圓底培養(yǎng)板的200jal完全培養(yǎng)基中，然后在371C下在5%002中培養(yǎng)10天。將細(xì)胞從3個(gè)或多個(gè)孔中回收出來(lái)，清洗2次并且用抗CD4(SK3-PerCP，BectonDickinson)或CD8(SKl-PerCP，BectonDickinson)抗體或者同種型對(duì)照(IgGl-PerCP，BectonDickinson)染色。通過(guò)使用Winmdi2.8軟件(ScrippsResearch)的FACSCalibur流式細(xì)胞儀(BectonDickinson)對(duì)樣本進(jìn)行分析，獲得總計(jì)50,000個(gè)活細(xì)胞的信息。結(jié)果肽結(jié)合研究證實(shí)了與HLA-DR隨機(jī)結(jié)合的多個(gè)區(qū)域。設(shè)計(jì)了總計(jì)60種跨距長(zhǎng)為HLA-A2的15聚體肽并且制備了53種。其他7種肽__多數(shù)來(lái)源自所述跨膜區(qū)域_一是不可溶的并且因此無(wú)法被令人滿意地合成出來(lái)。肽與HLA-DR的親和力在圖9中示出。數(shù)據(jù)表明幾種肽可與許多HLA-DR隨機(jī)結(jié)合。這些包括對(duì)應(yīng)于在先報(bào)道的來(lái)源自實(shí)驗(yàn)的序列的肽20(105-119)、緊密重疊肽21(107-121)和肽7(31-45)，在所述實(shí)驗(yàn)中肽來(lái)源自MHCn類。顯然大量來(lái)源自HLA-A2的不同表位會(huì)與具有不同特異性的匪Cn類結(jié)合(圖9)。這特別值得注意，因?yàn)樵谧陨鞰HCn類環(huán)境中呈遞的自身來(lái)源的MHC肽的復(fù)合表位是一種可用于定義自身的可靠方法。肽20和21還對(duì)應(yīng)于可被DR15T細(xì)胞克隆識(shí)別的表位(92-120)，57所述dr15t細(xì)胞是由具有衰竭的hla-a2不匹配腎移植物的受體產(chǎn)生的。根據(jù)所述關(guān)于與mhcii類以高或中度親和力結(jié)合的較常見(jiàn)的發(fā)現(xiàn)，利用功能實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步評(píng)估30種肽。以兩個(gè)肽的混合物的形式使用少數(shù)偏移兩個(gè)氨基酸的肽，以便優(yōu)化pbmc的利用。^"吝f采源《瓜J-^^炎Wk-f挽'^W,i所招募的受試者的詳情在圖10中示出。與(不匹配)的健康對(duì)照337(40-885)/106pbmc相比，在已經(jīng)產(chǎn)生了同種異體抗體的透析患者體內(nèi)應(yīng)答于ppd:143(15-422)/106pbmc而產(chǎn)生y-干擾素的細(xì)胞的數(shù)目明顯較低。=0.007)。在這些受試者中培養(yǎng)基對(duì)照的變化范圍為0-9/106pbmc,并且對(duì)肽的最大應(yīng)答為122/106pbmc。利用y-干擾素elispot估算出的所述對(duì)至少一種肽產(chǎn)生應(yīng)答的患者的數(shù)目在表5中示出。示出了每組患者組中所述對(duì)至少一種hla-a2來(lái)源肽產(chǎn)生應(yīng)答的患者的數(shù)目。產(chǎn)生抗-HLA-A2抗體的患者可能明顯多于對(duì)HLA-A2來(lái)源肽產(chǎn)生間接應(yīng)答的其他患者。表5-所述5組中每組結(jié)果的概述<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>在大多數(shù)患者體內(nèi)，使用濃度為20jigm"的肽時(shí)應(yīng)答細(xì)胞數(shù)目最高，但是少數(shù)肽的最佳濃度為4jigml—1。在圖1中示出了每個(gè)個(gè)體對(duì)20Hgml—i的肽的應(yīng)答。在受試者組1中，14/18的患者會(huì)對(duì)至少一種來(lái)源自hla-a2的肽產(chǎn)生應(yīng)答，如圖la中所示。組1中產(chǎn)生應(yīng)答的患者的數(shù)目在統(tǒng)計(jì)學(xué)上明顯高于其他組(P<0.0001)(盡管單獨(dú)與組2相比，才艮據(jù)Fisherexact檢驗(yàn)，差異沒(méi)有達(dá)到顯著性p=0.08)。對(duì)HLA-A2的間接同種異體免疫應(yīng)答與特異性抗HLA-A2抗體的形成之間的關(guān)聯(lián)符合同種異體抗體形成的動(dòng)物模型(Lovegrovee"/，JImmunol2001;167(8):4338-44)。較出乎預(yù)期的發(fā)現(xiàn)是這樣一個(gè)觀察結(jié)果，即盡管有12名'組l，受試者對(duì)來(lái)源自a1和oc2超變區(qū)的肽(最常見(jiàn)的是p20或p21)產(chǎn)生應(yīng)答，但是這些受試者中有8名受試者還會(huì)對(duì)其他來(lái)源自a3和早跨膜區(qū)的肽產(chǎn)生應(yīng)答；而且還有兩名受試者會(huì)單獨(dú)對(duì)這些產(chǎn)生應(yīng)答。據(jù)我們所知，在人或動(dòng)物研究中尚未有關(guān)于對(duì)來(lái)源自這些區(qū)域的肽的應(yīng)答的報(bào)道。這些序列具有非常有限的多態(tài)性，它們可由表6中所示的各種等位基因所表達(dá)。表6-對(duì)在p39、40、50、51、52和53的區(qū)域中與HLA-A2共享序列的HLA類型的說(shuō)明<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table>此外，3名'組l，患者會(huì)對(duì)來(lái)源自oc3結(jié)構(gòu)域的肽產(chǎn)生顯著應(yīng)答，所述肽為HLA-A2與自身HLA-A68(患者1.1會(huì)對(duì)p39和p52/53產(chǎn)生應(yīng)答)之間所共享的、HLA-A2與自身HLA-A33(患者1.10會(huì)對(duì)p52/53產(chǎn)生應(yīng)答)之間所共享的或者HLA-A2與自身HLA-A32(患者1.17會(huì)對(duì)p39和p52/53產(chǎn)生應(yīng)答)之間所共享的。在受試者'組2，中，3名患者對(duì)許多HLA-A2來(lái)源肽產(chǎn)生應(yīng)答(結(jié)果未示出)。例如，受試者2.l對(duì)許多不同HLA-A中存在的肽p30、p40、P45/46、p50/51和p52/53(表5)產(chǎn)生應(yīng)答，包括超變區(qū)肽p30。在受試者2.2和2.3體內(nèi)觀察到與同時(shí)對(duì)超變區(qū)、a3區(qū)和跨膜區(qū)產(chǎn)生的應(yīng)答類似的模式。這些肽對(duì)于HLA-A2來(lái)說(shuō)不是唯一的，所以該發(fā)現(xiàn)仍然符合抗體產(chǎn)生的歷史。在受試者2.2體內(nèi)，對(duì)與自身HLA-A68共享的序列p39和p52/53產(chǎn)生應(yīng)答。在'組3，中，3名受試者會(huì)對(duì)HLA-A2來(lái)源的肽產(chǎn)生顯著應(yīng)答。受試者3.3對(duì)p39產(chǎn)生應(yīng)答、受試者3.1對(duì)p1/2和p39產(chǎn)生應(yīng)答并且受試者3.7對(duì)p19和p52/53產(chǎn)生應(yīng)答。盡管這些患者沒(méi)有產(chǎn)生在現(xiàn)有或歷史血清中可檢測(cè)的抗-HLA抗體，所有患者均經(jīng)歷過(guò)多次輸血并且因此所有患者均可被這些肽所初免而不會(huì)產(chǎn)生體液性應(yīng)答。在患者'組4，中，患者4.9_—他在測(cè)試前17個(gè)月時(shí)由于Banffffl排斥而迅速失去了腎移植物(A3，11)——會(huì)對(duì)p39、p50/51、p52/53以及p20產(chǎn)生自身免疫應(yīng)答，所述p20對(duì)HLA-A2來(lái)說(shuō)是獨(dú)特的。'組5，的患者5.1也會(huì)對(duì)肽p39、p50/51和p52/53產(chǎn)生自身免疫應(yīng)答。還測(cè)試了一個(gè)具有15名正常對(duì)照的組(命名為組6)，所述正常對(duì)照不具有已知的在先致敏事件。一名雄性(6.3)患者對(duì)HLA-A2來(lái)源的肽(包括p39、p50/51和p52/53)產(chǎn)生免疫應(yīng)答。該個(gè)體為HLA-A32陽(yáng)性，因此這些應(yīng)答為自身免疫的。沒(méi)有其他的正常對(duì)照產(chǎn)生任何可檢測(cè)的應(yīng)答。^吝f瓜J-^炎^y-"f挽'f矽Z^會(huì)菱J5/戎^)^所述應(yīng)答的n類限制是根據(jù)3名個(gè)體體內(nèi)抗匪Cn類抗體對(duì)干擾素產(chǎn)生的抑制推斷得出的。代表性實(shí)驗(yàn)在圖11中示出。^吝f庶摩,j#c"/r勿^，崖研究了'正常對(duì)照，體內(nèi)的增殖與Y-干擾素產(chǎn)生之間的對(duì)應(yīng)性利用elispot估算的對(duì)肽p39和p52/53產(chǎn)生應(yīng)答的6.3。如圖12中所示，在存在這些肽且不存在對(duì)照肽的情況下存在CD4+細(xì)胞的增殖，所述對(duì)照肽不會(huì)刺激干擾素產(chǎn)生。討論在各種移植的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，間接同種異體識(shí)別對(duì)于排斥的貢獻(xiàn)是公知的(例如BenichouefW，JExpMed1992;175(1):305-8)。在臨床研究中，已經(jīng)將間接同種異體識(shí)別與對(duì)腎、心臟和肺的慢性排斥關(guān)聯(lián)起來(lái)。這些臨床研究中所用的抗原包括凍融裂解的細(xì)胞、跨距為HLA-DR的P1結(jié)構(gòu)域的肽和來(lái)源自I類HLA的a1結(jié)構(gòu)域的肽。所述間接同種異體識(shí)別已經(jīng)可以利用elispot通過(guò)IL2產(chǎn)生、細(xì)胞增殖(在原代或繼代培養(yǎng)物中)或細(xì)胞因子的產(chǎn)生來(lái)加以檢測(cè)。在實(shí)驗(yàn)和臨床研究中，經(jīng)常會(huì)有報(bào)道稱存在單個(gè)的'免疫顯性，表位，但是這些發(fā)現(xiàn)可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來(lái)確定，例如在體外使用繼代培養(yǎng)物來(lái)檢測(cè)T淋巴細(xì)胞初步擴(kuò)增之后的應(yīng)答。事實(shí)上，許多表位均可以在移植后的不同時(shí)間點(diǎn)時(shí)使用上述方法來(lái)加以檢測(cè)。此外，在移植的動(dòng)物模型中，顯然可能會(huì)識(shí)別出除'增殖性免疫顯性，表位之外的許多表位；并且這些應(yīng)答可能包括'自隱性的'。使用e1ispot技術(shù)可以檢測(cè)出以較低頻率存在于原代培養(yǎng)物中的抗原特異性T淋巴細(xì)胞。它使得我們可以對(duì)腎移植候補(bǔ)名單上的患者體內(nèi)的間接同種異體識(shí)別進(jìn)行評(píng)估。具體而言，我們分析了患者的免疫應(yīng)答，所述患者產(chǎn)生了具有已知的抗HLA-A2特異性的同種異體抗體。我們所觀察到的應(yīng)答頻率與通過(guò)干擾素Y-elispot估算的在腎移植受體體內(nèi)所觀察到的應(yīng)答頻率一致，所述受體是使用來(lái)源自供體HLA-DR的20聚體肽刺激的。這些頻率與下述頻率具有相同的數(shù)量級(jí)，所述頻率為利用有限稀釋分析DNA合成估算的由供體PBMC溶胞產(chǎn)物刺激的腎移植受體體內(nèi)的頻率以及利用有限稀釋DNA合成估算的由一種或多種oc1結(jié)構(gòu)域肽(來(lái)源自Al、A2、B8和B44)刺激的患有閉塞性細(xì)支氣管炎的肺移植受體體內(nèi)的頻率(SivaSaiefa/，Transplantation1999;67(8):1094-8)。在Sivasai及其同事的報(bào)道中，使用了來(lái)源自HLA-A2的ot1結(jié)構(gòu)域的25聚體肽60-84,但是我們僅在一名患者體內(nèi)觀察到了對(duì)該區(qū)域的應(yīng)答。我們的結(jié)果證明盡管與文獻(xiàn)中所預(yù)計(jì)的一樣，對(duì)超變區(qū)肽的應(yīng)答較常見(jiàn)，但是卻意外地發(fā)現(xiàn)了對(duì)來(lái)源自cx3和跨膜區(qū)域的肽的應(yīng)答。如表6中所示，諸如p39、p40、p50/51和p52/53的肽序列廣泛地存在于HLA-A類型的單或ti基i多態(tài)性:因此上述肽可以被描述成'公共T細(xì)J!^表位，，其含義是與一種HLA分子接觸可以導(dǎo)致會(huì)對(duì)許多其他HLA-A家族成員產(chǎn)生應(yīng)答的T淋巴細(xì)胞的初免，或者反之亦然。由于這些表位與那些可被抗體識(shí)別的表位不同，所以這是致敏患者體內(nèi)同種異體移植物存活率下降的一種潛在機(jī)制，不考慮對(duì)供體特異性抗體的檢測(cè)。類似地，這表明存在這樣一種機(jī)制，即輸血可以籍此影響記憶抗體應(yīng)答，不考慮是否存在識(shí)別的B細(xì)胞表位。由于HLA-A2中被標(biāo)記為'公共T細(xì)胞表位，的序列僅具有非常有限的多態(tài)性，所以部分同種異體應(yīng)答可能會(huì)與自身肽交叉反應(yīng)，Benichou及其同事已經(jīng)報(bào)道了小鼠體內(nèi)對(duì)MHCI類肽的免疫應(yīng)答(Tame"/，JImmunol1996;156(10):3765-71);目前正在研究這種可能性。事實(shí)上，許多圖2中所述的應(yīng)答是自身免疫性的，因?yàn)樗隹舍槍?duì)其產(chǎn)生應(yīng)答的肽的序列為HLA-A2與自身之間共享的?；颊?.1、1.10和1.17對(duì)此進(jìn)行了舉例說(shuō)明。這與Lovegrove及其同事所觀察到的大鼠模型中的對(duì)隱性自身表位的應(yīng)答類似，所述大鼠模型為與同種異體抗原形成有關(guān)的排斥的模型(Lovegrovee"/，JImmunol2001;167(8):4338-44)。'公共T細(xì)胞表位，的發(fā)現(xiàn)還與輸血效應(yīng)機(jī)制有關(guān)在大范圍使用鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶抑制劑之前通常會(huì)觀察到預(yù)輸血有益于腎移植物存活。輸血效應(yīng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ妥C實(shí)了對(duì)特異性針對(duì)間接呈遞的同種異體抗原的調(diào)節(jié)T細(xì)胞的誘導(dǎo)(Kishimoto"a/，JAmSocNephrol2004;15(9):2423-8)。盡管通常報(bào)道供體抗原特異性耐受，但是現(xiàn)在存在這樣的模型一_試圖模擬臨床情況一一其中隨機(jī)輸血會(huì)誘導(dǎo)抵御排斥的調(diào)控細(xì)胞(Bushella/，Transplantation2003;76(3):449-55)同時(shí)顯然不會(huì)對(duì)免疫應(yīng)答進(jìn)4亍非特異性抑制(Bushel1Wa/,JImmunol2005;174(6):3290)。在人類中，所述輸血效應(yīng)要求血液供體和受體之間共享至少一種HLA-DR和較小量的輸注以產(chǎn)生最大的益處。這沒(méi)有考慮受體可能遇見(jiàn)的各種同種異體抗原。這可以通過(guò)自身限制性調(diào)控細(xì)胞的誘導(dǎo)來(lái)加以說(shuō)明，特異性針對(duì)在許多供體中很常見(jiàn)的同種異體表位。上文所述的'公共T細(xì)胞表位，不必一定來(lái)源自MHC，此時(shí)它們也具有必需用于說(shuō)明許多現(xiàn)有證據(jù)的性質(zhì)。許多來(lái)源自HLA-A2的肽表位的第二性質(zhì)為它們?cè)谝欢ǔ潭壬吓cMHCn類隨機(jī)結(jié)合，并且相應(yīng)地在較高比例的致敏患者體內(nèi)誘導(dǎo)應(yīng)答。HLA-A2獨(dú)特表位和'公共T細(xì)胞表位，均具有這種性質(zhì)。這部分地使得我們可以從僅對(duì)55名未就HLA類型進(jìn)行篩選的受試者進(jìn)行的研究中得出結(jié)論。雖然與這類肽在脫敏方案中的潛在應(yīng)用相比，所述含義要廣泛得多。人們對(duì)調(diào)節(jié)同種異體抗原來(lái)源肽導(dǎo)致的排斥一直有濃厚的興趣。上述作用通常是抗原特異性的，所述作用如果被轉(zhuǎn)換到臨床中則會(huì)限制這類方法的有效性。因此，那些已經(jīng)激發(fā)起濃厚興趣的HLA來(lái)源肽會(huì)對(duì)不依賴于常規(guī)的TCR基抗原識(shí)別的途徑產(chǎn)生影響。這與許多關(guān)于肽誘導(dǎo)的耐受的動(dòng)物模型不同，其中通過(guò)誘導(dǎo)調(diào)控T細(xì)胞證明了抗原特異性。來(lái)源自ot3和跨膜結(jié)構(gòu)域的表位所表現(xiàn)出的性質(zhì)一一公共的且隨機(jī)的一一可鑒定出理想的可用于探索移植的肽免疫療法的候選藥劑。例如，已經(jīng)報(bào)道了在使用肽脫敏方法治療過(guò)的過(guò)敏患者體內(nèi)存在對(duì)調(diào)控T細(xì)胞活性的誘導(dǎo)。總而言之，對(duì)來(lái)源自MHCI類的ot3和跨膜區(qū)域的間接同種異體識(shí)別的鑒定對(duì)于同種異體免疫應(yīng)答、其調(diào)節(jié)和抗原特異性療法的開(kāi)發(fā)具有重要的意義。實(shí)施例3發(fā)明人將實(shí)施例1和2中所鑒定的一些15聚體同種異體表位的序列與其他HLA多肽中的對(duì)應(yīng)序列進(jìn)行了比較。由此發(fā)明人鑒定了其他的同種異體表位。結(jié)果在圖13-16中示出。6權(quán)利要求1.一種多肽或者其衍生物或類似物，所述多肽由不足30個(gè)來(lái)源自主要組織相容性復(fù)合物(MHC)I類人白細(xì)胞抗原(HLA)的α3結(jié)構(gòu)域和/或跨膜結(jié)構(gòu)域的連續(xù)氨基酸構(gòu)成。2.權(quán)利要求l的多肽、衍生物或類似物，其中所述多肽由不足20個(gè)或約15個(gè)來(lái)源自MHCI類HLA的a3結(jié)構(gòu)域和/或跨膜結(jié)構(gòu)域的連續(xù)氨基酸構(gòu)成。3.權(quán)利要求1或2的多肽、衍生物或類似物，其中所述衍生物或類似物與MHCn類HLA結(jié)合并激活特異性針對(duì)所述多肽的T細(xì)胞。4.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多肽、」肝生物或類似物，其中所述衍生物或類似物與所述多肽中的至少9個(gè)連續(xù)氨基酸具有超過(guò)65%的序列同一性。5.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多肽、衍生物或類似物，其中所述HLA為HLA-A、HLA-B或HLA-C。6.權(quán)利要求5的多肽、衍生物或類似物，其中所述HLA為HLA-A2。7.權(quán)利要求6的多肽、衍生物或類似物，其中所述多肽由不足30個(gè)來(lái)源自SEQIDNO:2的殘基183-274和/或殘基275-314的連續(xù)氨基酸構(gòu)成。8.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多肽、衍生物或類似物，其中所述多肽由SEQIDNO:42、43、48、49和53至74的任一序列構(gòu)成。9.一種編碼權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的多肽、衍生物或類似物的核酸分子。10.權(quán)利要求9的核酸分子，其中所述核酸分子包括SEQIDNO:78至88和91至96的任一序列。11.一種核酸分子，其中所述核酸分子在嚴(yán)格條件下與權(quán)利要求9或10所述的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交。12.—種重組栽體，含有權(quán)利要求9至11任一項(xiàng)所述的核酸分子。13.權(quán)利要求12的重組載體，其中所述栽體為質(zhì)粒、粘?；蚴删w。14.一種宿主細(xì)胞，包含權(quán)利要求13所述的重組栽體。15.—種藥物組合物，包括治療有效量的權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的多肽、衍生物或類似物或者權(quán)利要求9至11任一項(xiàng)所述的核酸分子，以及任選地包括可藥用載體。16.—種用于制備藥物組合物的方法，包括將治療有效量的權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的多肽、衍生物或類似物或者權(quán)利要求9至11任一項(xiàng)所述的核酸分子與可藥用載體相組合。17.—種來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物，用作藥劑。18.權(quán)利要求17的多肽、衍生物或類似物，其中所述衍生物或類似物與MHCII類HLA結(jié)合并激活特異性針對(duì)所述來(lái)源自該HLA的多肽的T細(xì)胞。19.權(quán)利要求17或18的多肽、衍生物或類似物，其中所述衍生物或類似物與所述來(lái)源自該HLA的多肽具有超過(guò)65%的序列同一性。20.權(quán)利要求17-19任一項(xiàng)的多肽、衍生物或類似物，其中所述HLA為HLA-A、HLA-B或HLA-C。21.權(quán)利要求20的多肽、衍生物或類似物，其中所述HLA-A為HLA-A2。22.權(quán)利要求17-21任一項(xiàng)的多肽、衍生物或類似物，其中所述來(lái)源自該HLA的多肽包括不足30個(gè)該HLA的連續(xù)氨基酸。23.權(quán)利要求22的多肽、衍生物或類似物，其中所述不足30個(gè)該HLA的連續(xù)氨基酸來(lái)源自該HLA的ot1結(jié)構(gòu)域或oc2結(jié)構(gòu)域。24.權(quán)利要求23的多肽、衍生物或類似物，其中所述來(lái)源自該HLA的多肽包括SEQIDNO:4、5、23、24和33的任一氨基酸序列。25.權(quán)利要求22的多肽、衍生物或類似物，其中所述不足30個(gè)該HLA的連續(xù)氨基酸來(lái)源自該HLA的a3結(jié)構(gòu)域或跨膜結(jié)構(gòu)域。26.權(quán)利要求25的多肽、衍生物或類似物，其中所述衍生物或類似物包括SEQIDNO:42、43、48、49和53至74的任一氨基酸序列。27.權(quán)利要求17-26任一項(xiàng)的多肽、衍生物或類似物，其中所述多肽、衍生物或類似物如權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所限定。28.—種編碼權(quán)利要求17-27任一項(xiàng)所限定的多肽、衍生物或類似物的核酸分子，或者一種在嚴(yán)格條件下與編碼權(quán)利要求17-27任一項(xiàng)所限定的多肽、衍生物或類似物的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分子，用作藥劑。29.權(quán)利要求28的核酸分子，其中所述核酸分子如權(quán)利要求9至11任一項(xiàng)所限定。30.下述物質(zhì)(a)至少一種來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物；(b)至少一種編碼(a)的多肽、衍生物或類似物的核酸分子；或(c)至少一種在嚴(yán)格條件下與(b)的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分子；用于制備一種用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏的病癥的藥劑的用途。31.權(quán)利要求30的用途，其中所述衍生物或類似物與MHCn類HLA結(jié)合并激活帶有特異性針對(duì)所述來(lái)源自該HLA的多肽的受體的T細(xì)胞。32.權(quán)利要求30或31的用途，其中所述衍生物或類似物與所述來(lái)源自該HLA的多肽具有超過(guò)65%的序列同一性。33.權(quán)利要求30至32任一項(xiàng)的用途，其中所述HLA為HLA-A、HLA-B或HLA-C。34.權(quán)利要求33的用途，其中所述HLA-A為HLA-A2。35.權(quán)利要求30至34任一項(xiàng)的用途，其中所述來(lái)源自該HLA的多肽包括不足30個(gè)該HLA的連續(xù)氨基酸。36.權(quán)利要求35的用途，其中所述不足30個(gè)該HLA的連續(xù)氨基酸來(lái)源自該HLA的oc1結(jié)構(gòu)域或oc2結(jié)構(gòu)域。37.權(quán)利要求36的用途，其中所述衍生自該HLA的多肽包括SEQIDNO:4、5、23、24和33的任一氨基酸序列。38.權(quán)利要求35的用途，其中所述不足30個(gè)該HLA的連續(xù)氨基酸來(lái)源自該HLA的a3結(jié)構(gòu)域或跨膜結(jié)構(gòu)域。39.權(quán)利要求38的用途，其中所述衍生物或類似物包括SEQIDNO:X至Y的任一氨基酸序列。40.權(quán)利要求30至38任一項(xiàng)的用途，其中所述多肽、衍生物或類似物如權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所限定，或者所述核酸分子如權(quán)利要求9至ll任一項(xiàng)所限定。41.權(quán)利要求30至40任一項(xiàng)的用途，其中所述藥劑為用于治療或預(yù)防同種異體移植物排斥。42.—種用于治療或預(yù)防特征為同種異體致敏的病癥的方法，所述方法包括給予需要這種治療的受試者治療有效量的(a)至少一種來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物；(b)至少一種編碼(a)的多肽、衍生物或類似物的核酸分子；或(c)至少一種在嚴(yán)格條件下與(b)的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分子。43.—種刺激T細(xì)胞的體外方法，所述方法包括在可刺激所述T細(xì)胞的條件下使所述T細(xì)胞接觸(a)—種來(lái)源自MHCI類HLA的多肽或者其衍生物或類似物；(b)—種編碼(a)的多肽、衍生物或類似物的核酸分子；或(c)一種在嚴(yán)格條件下與(b)的核酸分子或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分子；從而刺激所述T細(xì)胞。全文摘要本發(fā)明提供了來(lái)源于主要組織相容性復(fù)合物(MHC)I類人白細(xì)胞抗原(HLA)例如HLA-A2的多肽，以及其衍生物或類似物。所述多肽、衍生物和類似物可以用于治療或預(yù)防同種異體致敏，例如治療或預(yù)防同種異體移植物排斥。文檔編號(hào)A61K39/00GK101484183SQ200780024777公開(kāi)日2009年7月15日申請(qǐng)日期2007年5月9日優(yōu)先權(quán)日2006年5月9日發(fā)明者S·鮑爾申請(qǐng)人:伯明翰大學(xué)