專利名稱：二價smac模擬物及其應用的制作方法
背景技術：
本申請要求2006年5月5日提交的美國臨時專利申請序列號60/798,018，和2007年4月13日提交的美國臨時專利申請序列號60/923,415的優(yōu)先權，其中每一篇在此整體引入供參考。
發(fā)明領域
本發(fā)明屬于藥物化學領域。特別地，本發(fā)明涉及作為細胞凋亡蛋白抑制劑的抑制劑而起作用的Smac的N-末端序列的二價模擬物。本發(fā)明還涉及這些模擬物在引起或使細胞對細胞凋亡的誘導敏感的應用。
相關技術
侵害性的癌細胞表型是導致胞內(nèi)信號傳導途徑失調的多種遺傳和漸成式改變的結果(Ponder，Nature 411336(2001))。然而，對所有癌細胞而言具有普遍性的是它們不能完成細胞凋亡程序，而因正常細胞凋亡機制的缺陷導致的缺乏適當?shù)募毎蛲鰹榘┌Y的標志(Lowe et al.，Carcinogenesis 21485(2000))。目前癌癥療法中的大部分，包括化療劑、放射和免疫療法均通過間接誘導癌細胞中的細胞凋亡起作用。因此，癌細胞因正常細胞凋亡機制中的缺陷而缺乏完成細胞凋亡程序的能力通常與對化療、放射或免疫療法誘導的細胞凋亡的耐性增加相關。不同來源的人體癌癥因細胞凋亡缺陷而對目前治療方案具有的原發(fā)性或獲得性抗性為目前癌癥療法中的主要問題(Lowe etal.，Carcinogenesis 21485(2000)；Nicholson，Nature 407810(2000))。因此，目前和未來對為改善癌癥患者存活期和生活質量而設計并且研發(fā)新分子靶-特異性抗癌療法的努力必須包括特異性地靶向于對細胞凋亡有耐受性的癌細胞的策略。在這方面，在直接抑制癌細胞中的細胞凋亡方面起重要作用的關鍵負調節(jié)物代表了用于新抗癌藥設計的非常富有前途的治療策略。

已經(jīng)鑒定了兩類細胞凋亡的中心負調節(jié)物。第一類調節(jié)物為Bcl-2族蛋白，以兩種有效的抗細胞凋亡分子Bcl-2和Bcl-XL蛋白為典型(Adams et al.，Science 2811322(1998)；Reed，Adv.Pharmacol.41501(1997)；Reed et al.，J.Cell.Biochem.6023(1996))。已經(jīng)廣泛綜述了在癌癥中靶向于Bcl-2和Bcl-XL以恢復癌細胞敏感性并且克服癌細胞對細胞凋亡的抗性的治療策略(Adams et al.，Science2811322(1998)；Reed，Adv.Pharmacol.41501(1997)；Reed et al.，J.Cell.Biochem.6023(1996))。幾個實驗室致力于設計Bcl-2和Bcl-XL的小分子抑制劑。

細胞凋亡的第二類中心負調節(jié)物為細胞凋亡蛋白抑制劑(IAP)(Deveraux et al.，Genes Dev.13239(1999)；Salvesen et al.，Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.3401(2002))。這一類別包括蛋白質例如XIAP、cIAP-1、cIAP-2、ML-IAP、HIAP、KIAP、TSIAP、NAIP、生存素、livin、ILP-2、apollon和BRUCE。IAP蛋白有效抑制相當多種細胞凋亡刺激，包括化療劑、放射和免疫療法在癌細胞中誘導的細胞凋亡。

X-連鎖的IAP(XIAP)為所有IAP成員中在抑制細胞凋亡方面最有效的抑制劑(Holcik et al.，Apoptosis 6253(2001)；LaCasseet al.，Oncogene 173247(1998)；Takahashi et al.，J.Biol.Chem.2737787(1998)；Deveraux et al.，Nature 388300(1997)；Sun et al.，Nature 401818(1999)；Deveraux et al.，EMBO J.185242(1999)；Asselin et al.，Cancer Res.611862(2001))。XIAP在死亡受體-介導的和線粒體-介導的兩種途徑中的細胞凋亡負調節(jié)中起關鍵作用。XIAP作為有效的內(nèi)源性細胞凋亡抑制劑通過直接結合和有效抑制半胱天冬酶家族酶中的三個成員半胱天冬酶-3、-7和-9起作用(Takahashi et al.，J.Biol.Chem.2737787(1998)；Deveraux et al.，Nature 388300(1997)；Sun et al.，Nature 401818(1999)；Deveraux et al.，EMBO J.185242(1999)；Asselin et al.，Cancer Res.611862(2001)；Riedl等Cell 104791(2001)；Chai et al.，Cell 104769(2001)；Huang et al.，Cell 104781(2001))。XIAP含有細胞凋亡重復(BIR)結構域的三個桿狀病毒抑制劑以及C-末端RING指狀結構。第三個BIR結構域(BIR3)選擇性靶向半胱天冬酶-9，即線粒體途徑中的起始物半胱天冬酶，而BIR1與BIR2之間的連接區(qū)抑制半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-7二者(Salvesen et al.，Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.3401(2002))。盡管與XIAP的結合可以防止所有三種半胱天冬酶活化，但是顯然與半胱天冬酶-9的相互作用對其抑制細胞凋亡而言最為關鍵(Ekert et al.，J.Cell Biol.152；483(2001)；Srinivasula et al.，Nature 410112(2001))。因為XIAP在下游效應期，即多個信號傳導途徑的匯集點阻斷細胞凋亡，所以靶向XIAP的策略可以證實對于克服癌細胞對細胞凋亡的抗性是尤其有效的(Fulda et al.，Nature Med.8808(2002)；Arnt et al.，J.Biol.Chem.27744236(2002))。

盡管XIAP在每種類型癌癥中的確切作用遠未得到完全了解，但是有證據(jù)確切地表明XIAP在許多類型的癌癥中廣泛得到過表達，并且可能在癌細胞對多種目前的治療劑的抗性中起重要作用(Holcik et al.，Apoptosis 6253(2001)；LaCasse et al.，Oncogene173247(1998))。

已發(fā)現(xiàn)XIAP蛋白在大部分NCI60人癌細胞系中表達(Tamm et al.，Clin.Cancer Res.61796(2000))。對在78位預先未治療的患者的腫瘤樣品的分析表明，那些具有低水平XIAP的患者顯然具有更長的存活期(Tamm et al.，Clin.Cancer Res.61796(2000))。已發(fā)現(xiàn)XIAP在人惡性膠質瘤中表達(Wagenknecht et al.，Cell Death Differ.6370(1999)；Fulda et al.，Nature Med.8808(2002))。發(fā)現(xiàn)XIAP在人前列腺癌細胞中表達，并且阻斷與Apo2配體/腫瘤壞死因子-相關的細胞凋亡，這種細胞凋亡在有線粒體活化存在下誘導配體介導的前列腺癌細胞細胞凋亡(McEleny et al.，Prostate 51133(2002)；Ng et al.，Mol.Cancer Ther11051(2002))。XIAP在患者的非小細胞肺癌(NSCLC)中超表達并且已發(fā)現(xiàn)與NSCLC發(fā)病機制有關(Hofmann etal.，J.Cancer Res.Clin.Ontcol.128554(2002))。XIAP的表達和使用順鉑治療時XIAP減量調節(jié)的缺乏與人卵巢癌的順鉑抗性有關(Li etal.，Endocrinology 142370(2001)；Cheng et al.，Drug Resist.Update5131(2002))。這些數(shù)據(jù)共同提示XIAP可能在幾種人癌對目前治療劑的抗性中起重要作用。

細胞凋亡不是單一過程，而是涉及許多不同，有時相互連接的導致細胞降解的信號路徑。細胞凋亡的特定形式中涉及的路徑取決于許多因素，例如引發(fā)該過程的損害。其它因素包括特定受體的活化或過度活化，例如由腫瘤壞死因子α(TNFα)、腫瘤壞死因子相關的細胞凋亡誘導的配體(TRAIL或Apo2L)或FAS配體引起的“死亡”受體的活化。另一個決定性因素是所涉及的細胞的類型，因為在Fas或TNFα受體活化之后所謂的類型I和類型II細胞顯示不同的信號路徑。

TRAIL(Apo2L)在與兩個前細胞凋亡TRAIL受體，即TRAIL-R1(或DR4)(Pan et al.，Science 276111(1997))或TRAIL-R2(KILLER，或DR5)(Wu et al.，Nat.Genet.17141-143(1997)；Pan etal.，Science 277815(1997)；Walczak et al.，EMBO J.165386(1997))結合后已經(jīng)顯示為癌細胞(而不是正常細胞)中細胞凋亡的選擇性和有效性誘導物。由TRAIL引起的前細胞凋亡性死亡受體的活化引起死亡誘導發(fā)信號復合體(DISC)的形成，該復合體由作為接合體的受體FADD(Kischkel et al.，Immunity 12611(2000)；Kuang et al.，J.Biol.Chem.27525065(2000))和作為引發(fā)劑半胱天冬酶的半胱天冬酶-8構成。一旦DISC形成，半胱天冬酶-8由誘導的親近自加工和活化(Medema et al.，EMBO J.162794(1997)；Muzio et al.，J.Biol.Chem.2732926(1998))。

TRAIL作為潛在癌癥治療已經(jīng)產(chǎn)生重要的利益(Frenchet al.，Nat.Med.5146(1999))，因為其對癌細胞的選擇性尋靶，而大多數(shù)正常細胞好象耐TRAIL(Ashkenazi et al.，Science 2811305(1998)；Walczak et al.，Nat.Med.5157(1999))。TRAIL的全身施用已經(jīng)證明安全和有效地殺死乳房或結腸異種移植的腫瘤和延長在小白鼠中的存活期(Walczak et al.，Nat.Med.5157(1999))。雖然TRAIL特別可以殺死許多類型癌細胞，但是許多其它顯示TRAIL耐性(Kimet al.，Clin.Cancer Res.6335(2000)；Zhang et al.，Cancer Res.592747(1999))。此外，癌細胞已經(jīng)被特別識別TRAIL-R1或TRAIL-R2的抗體(單克隆或多克隆)的施用殺死。

許多機理已經(jīng)確定為對TRAIL耐性負責的潛在因素。此種機理以許多水平存在，包括受體水平、線粒體水平、后線粒體水平和DISC水平。例如，半胱天冬酶-8表述的損失(Teitz et al.，Nat.Med.6529(2000)；Griffith et al.，J.Immunol.1612833(1998))或細胞FLICE抑制劑蛋白質(cFLIP)的高表述(Kim et al.，Clin.Cancer Res.6335(2000)；Zhang et al.，Cancer Res.5927471999；Kataoka et al.，J.Immunol.1613936(1998))使得癌細胞耐TRAIL。Yeh等已經(jīng)介紹cFLIP-有缺陷的初期小白鼠成纖維細胞尤其對受體介導的細胞凋亡敏感(Yeh et al.，Immunity 12533(2000))。cFLIP的若干縫接變體是已知的，包括短縫接變體cFLIP-S和長縫接變體cFLIP-L。已經(jīng)表明，由于cFLIP-S的逆轉錄病毒介導的轉導，cFLIP-有缺陷的初期小白鼠成纖維細胞變得耐TRAIL誘導的細胞凋亡(Bin et al.，F(xiàn)EBS Lett.51037(2002))。

雖然TRAIL代表腫瘤選擇性死亡受體活化的可能有希望的候選物(即，它優(yōu)先在腫瘤細胞而不是常規(guī)組織中引起細胞凋亡)，但是許多癌細胞耐上述細胞凋亡誘導藥物。結果，用此種藥物治療通常要求用輻射和/或細胞毒素化學品的共同治療以達到治療效果。然而，輻射和化療都具有顯著的副作用，并且如有可能一般加以避免。

因此，仍需要可以選擇性地和有效地使腫瘤細胞對選擇性細胞凋亡誘導藥物例如TRAIL或TRAIL受體抗體敏感，而仍不使周圍正常細胞敏感的試劑。此種試劑還將可用于降低或防止通常與使用受體介導的細胞凋亡癌癥藥物有關的抗藥性，從而改進它們的有效性和消除對組合治療的需要。

近來，將Smac/DIABLO(第二種線粒體衍生的半胱天冬酶激活物)鑒定為響應于細胞凋亡刺激物而從線粒體釋放入胞質溶膠的蛋白質(Budihardjo et al.，Annu.Rev.Cell Dev.Biol.15269(1999)；Du et al.，Cell 10233(2000))。使用在成熟為成熟多肽過程中通過蛋白水解除去的N-末端線粒體引導肽合成Smac。已證實Smac直接與XIAP和其它IAP發(fā)生相互作用并且破壞其與半胱天冬酶的結合，并促進半胱天冬酶活化。Smac為有效的XIAP內(nèi)源性抑制劑。

近來已經(jīng)確定了XIAP的BIR3結構域與Smac蛋白和肽相復合的高分辨率實驗性三維(3D)結構(Sun et al.，J.Biol.Chem.27536152(2000)；Wu et al.，Nature 4081008(2000))(附

圖1)。Smac的N-末端四肽(Ala-Val-Pro-Ile或AVPI(SEQ ID NO1))通過幾種氫鍵相互作用和范德瓦耳斯相互作用識別XIAP的BIR3結構域上的表面溝。還證實BIR3與半胱天冬酶-9之間的相互作用涉及半胱天冬酶-9小亞單位的氨基末端上的四個殘基(Ala-Thr-Pro-Phe或ATPF(SEQID NO2))到BIR3結構域上的同一表面溝。近來幾種研究已經(jīng)令人信服地證實Smac通過與半胱天冬酶-9競爭BIR3結構域表面上的相同結合溝而促進半胱天冬酶-9的催化活性(Ekert et al.，J.Cell Biol.152483(2001)；Srinivasula et al.，Nature 410112(2001))。

不同于大部分蛋白-蛋白相互作用，Smac-XIAP相互作用僅由Smac蛋白上的四個氨基酸殘基和XIAP的BIR3結構域上的明確確定的表面溝介導。Smac肽AVPI(SEQ ID NO1)與XIAP結合的Kd值(Kd＝0.4μM)基本上與成熟Smac蛋白相同(Kd＝0.42μM)。這種明確確定的相互作用位點對模擬Smac與XIAP之間結合的非肽藥物類小分子的設計而言是理想的。

近來證實，由與載體肽結合以促進胞內(nèi)遞送的Smac N-末端前四個氨基酸殘基組成的細胞可滲透性Smac肽(AVPI(SEQ IDNO1))可以在體外使不同腫瘤細胞和在體內(nèi)使惡性膠質瘤細胞對死亡受體連接或細胞毒性藥物誘導的細胞凋亡敏感(Fulda et al.，NatureMed.8808(2002))。重要的是，這種Smac肽強烈促進Apo2L/TRAIL在顱內(nèi)惡性膠質瘤的體內(nèi)異種移植物模型中的抗腫瘤活性。完全根除已建立的腫瘤和小鼠的存活僅在使用Smac肽類和Apo2L/TRAIL的聯(lián)合療法時得以實現(xiàn)。具有重要意義的是Smac肽對正常腦組織沒有可檢測到的毒性。

第二種近期的獨立研究還證實，由與不同載體肽結合的Smac N-末端前4-8個氨基酸殘基組成的肽促進了細胞凋亡的誘導和不同化療藥，包括紫杉醇、依托泊苷、SN-38和多柔比星在MCF-7和其它人乳腺癌細胞系中的長期抗增殖作用(Arnt et al.，J.Biol.Chem.27744236(2002))。該研究令人信服地證實了XIAP和cIAP-1為這些肽類在細胞中的主要分子靶。

第三種研究證實與聚精氨酸結合的前7個N-末端殘基的Smac肽在非小細胞肺癌H460細胞中可恢復凋亡體活性并且逆轉細胞凋亡抗性(Yang et al.，Cancer Res.63831(2003))。已證實XIAP與H460細胞中凋亡體活性的缺乏和半胱天冬酶活性的抑制有關。當與化療聯(lián)用時，細胞可滲透的Smac肽使小鼠體內(nèi)腫瘤生長退化，而對小鼠幾乎沒有毒性。這些近期獨立的研究共同強烈提示，有效的穩(wěn)定的細胞可滲透Smac肽模擬物可能對人乳腺癌和其它類型的癌癥具有顯著的治療潛能。

基于肽的抑制劑為闡明IAP的抗細胞凋亡功能和IAP在癌細胞對化療劑的響應方面的作用的有用工具。但基于肽的抑制劑作為可能有用的治療劑一般存在內(nèi)在局限性。這些限制包括其細胞滲透性差和體內(nèi)穩(wěn)定性差。實際上，在這三種公布的使用基于Smac的肽抑制劑的研究中，所述的肽類必須與載體肽類融合以使其具有相對的細胞滲透性。

美國公開申請?zhí)?005/0197403公開了以下通式I的二聚Smac模擬化合物
其中 R1和R1′選自氫，任選取代的甲基和羥基； R2和R2′選自任選取代的甲基和任選取代的乙基； R3和R3′選自CH2、NH、O和S； R4和R4′選自CH和N； R5-R8和R5′-R8′選自氫，任選雜化、任選取代的烷基，任選雜化、任選取代的烯基，任選雜化、任選取代的炔基，任選雜化、任選取代的芳基；和 L是以共價鍵方式將R2、R5、R6或R7與R2′、R5′、R6′或R7′連接的連接基， 或其藥學上可接受的鹽。

為了克服基于肽的抑制劑的內(nèi)在局限性，本發(fā)明涉及二價構象約束的Smac模擬物的設計。
發(fā)明概述
已普遍接受的是，癌細胞或其支持細胞不能響應于遺傳損害或對細胞凋亡誘導物(例如抗癌劑和輻射)的暴露而經(jīng)歷細胞凋亡是癌癥發(fā)作和發(fā)展的主要因素。認為誘導癌細胞或其支持細胞(例如腫瘤脈管系統(tǒng)中的新血管細胞)中的細胞凋亡是實際上市場上或當今實際應用的所有有效癌癥治療藥或放射療法的普遍作用機制。細胞不能進行細胞凋亡的一個原因在于IAP的表達和蓄積增加。

本發(fā)明認為，患有癌癥或與細胞凋亡的失調有關的其它過度增殖性病癥或疾病的動物接觸治療有效量的抑制IAP功能的藥物(例如小分子)將完全殺死癌細胞或支持細胞(其持續(xù)存活依賴于IAP的過度活性或過度表達的那些細胞)和/或使得這類細胞作為群體對癌癥治療藥或放療的細胞死亡誘導活性更敏感。本發(fā)明認為，IAP的抑制劑滿足了對治療多種癌癥類型的尚未得到滿足的需求，無論是作為單一療法進行施用以在依賴于IAP功能的癌細胞中誘導細胞凋亡，還是以時間關系與誘導細胞死亡的其它癌癥治療藥或放療組合施用，以使得與僅單獨使用癌癥治療藥或放療治療的動物中相應比例的細胞相比，更大比例的癌細胞或支持細胞對進行細胞凋亡程序敏感。

在本發(fā)明的某些實施方案中，使用治療有效量的本發(fā)明化合物和抗癌藥或放射療程對動物進行組合治療在這類動物中產(chǎn)生了與單獨使用所述化合物或抗癌藥/放射治療相比更大的腫瘤響應和臨床有益性。另一方面，因為所述的化合物可以降低表達IAP的所有細胞的細胞凋亡閾值，所以響應于抗癌藥/放射的凋亡誘導活性而成功進行細胞凋亡程序的細胞比例增加?；蛘?，使用本發(fā)明的化合物可以使得施用較低、因此為低毒性和更具耐受性的劑量的抗癌藥和/或放射，以產(chǎn)生與單獨常規(guī)劑量的抗癌藥/放射相同的腫瘤響應/臨床有益性。因為所有經(jīng)批準的抗癌藥和放療的劑量都是已知的，所以本發(fā)明關注它們與本發(fā)明化合物的各種組合。此外，因為本發(fā)明的化合物至少部分通過抑制IAP起作用，所以使癌細胞和支持細胞接觸治療有效量的這些化合物可以在時間上使細胞響應于抗癌藥或放療而執(zhí)行細胞凋亡程序的嘗試一致進行。因此，在某些實施方案中，施用本發(fā)明的組合物連同某些臨時的相關方案尤其提供了有效的治療實踐。

本發(fā)明涉及可用于抑制IAP蛋白活性并且增加細胞對細胞凋亡誘導物的敏感性的Smac模擬物。在一個特定的實施方案中，該Smac模擬物是通式II的化合物或其藥學上可接受的鹽或前藥
其中 A1和A1′獨立地選自氫、任選取代的烷基和Z； A2和A2′獨立地選自氫、任選取代的烷基和COR1，其中當V是O時不存在A2和當V′是O時不存在A2′； V和V′獨立地選自N、CH和O； W和W′獨立地選自CH和N； X和X′獨立地是任選取代的C1-3烷基； Y和Y′獨立地選自CONR1，C(O)O，(CR1R2)1-3，其中一個或多個CH2基團可以被O、S或NR1替代，任選取代的芳基和任選取代的雜芳基； D和D′獨立地選自任選取代的亞烷基(alkylenyl)和(CR1R2)n-R5a-(CR3R4)m； J和J′獨立地選自任選取代的亞烷基和(CR1R2)p-R5b-(CR3R4)q； T和T′獨立地選自C＝O、C＝S、C＝NR1、S、O、NR1、CR1R2、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基； U和U′獨立地選自氫、NR1R2、OR1、SR1、任選取代的烷基和任選取代的芳基； n、m、p和q獨立地是0-5； 每個R1選自氫、任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基和Z； 每個R2、R3和R4獨立地選自氫、任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基； R5a和R5b獨立地選自C＝O、C＝S、C＝NR1、S、O、NR1和CR1R2；和 Z是以共價鍵方式將A1、Y、D、J、T和U之一與A1′、Y′、D′、J′、T′和U′之一連接的連接基。

本發(fā)明涉及通式II表示的化合物，它們?yōu)镮AP蛋白的抑制劑。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物誘導細胞中細胞凋亡的用途。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物用于使細胞對細胞凋亡誘導物敏感的應用。這些化合物可用于治療、改善或預防對細胞凋亡的誘導有反應性的疾病，例如以細胞凋亡的失調為特征的疾病，包括過度增殖性疾病，例如癌癥。在某些實施方案中，這些化合物可以用于治療、改善或預防特征在于對癌癥療法產(chǎn)生耐受性的癌癥(例如為化學抗性、放射抗性、激素抗性等的那些癌癥)。在其它實施方案中，這些化合物可以用于治療特征在于IAP的過表達的過度增殖性疾病。

本發(fā)明提供了包含通式II的化合物的藥物組合物，所述通式II化合物的存在量為誘導細胞中細胞凋亡或使細胞對細胞凋亡誘導物敏感的治療有效量。

本發(fā)明進一步提供了包含通式II的化合物和用于對動物施用所述化合物的說明書的試劑盒。這些試劑盒可以任選地包含其它治療劑，例如抗癌劑或細胞凋亡調節(jié)劑。
附圖簡述
圖1示出了Smac模擬物與XIAP BIR3蛋白的競爭性結合。

圖2示出了MDA-MB-231、MAMLE-3M、SK-OV-3和OVCAR-4細胞中由SH-164引起的細胞生長抑制。

圖3示出了MDA-MB-231、MAMLE-3M和OVCAR-4細胞中由SH-164引起的細胞死亡的誘導。

圖4A-4C示出了MDA-MB-231(A)、MDA-MB-453(B)和PC-3(C)細胞中由與TRAIL結合的SH-164引起的細胞生長的抑制。

圖5示出了MDA-MB-231細胞中由與順鉑或米托蒽醌結合的SH-164引起的細胞生長抑制。

圖6示出了MDA-MB-231乳癌細胞系中由SH-164引起的細胞凋亡的誘導。
發(fā)明詳述
本發(fā)明涉及由通式II表示的二價構象約束的化合物，它們?yōu)镾mac的模擬物并且作為IAP抑制劑起作用。通過抑制IAP，這些化合物使細胞對細胞凋亡誘導物敏感，并且在某些情況中，其自身誘導細胞凋亡。因此，本發(fā)明涉及使細胞對細胞凋亡誘導物敏感的方法和誘導細胞中細胞凋亡的方法，包括使所述的細胞接觸單獨的通式II的化合物或通式II化合物與細胞凋亡誘導物的組合。本發(fā)明進一步涉及治療、改善或預防動物中對誘導細胞凋亡有反應性的疾病的方法，包括對所述的動物施用通式II的化合物和細胞凋亡誘導物。這類疾病包括那些特征在于細胞凋亡失調的疾病和那些特征在于IAP過度表達的疾病。

本文所用的術語“IAP蛋白”指的是細胞凋亡蛋白家族抑制劑中的任意已知的成員，包括，但不限于XIAP、cIAP-1、cIAP-2、ML-IAP、HIAP、TSIAP、KIAP、NAIP、生存素、livin、ILP-2、apollon和BRUCE。

本文所用的術語“IAP過度表達”指的是細胞中與表達編碼IAP蛋白的mRNA基礎水平或具有IAP蛋白基礎水平的相應非病態(tài)細胞相比，編碼IAP蛋白的mRNA水平升高(例如異常水平)和/或IAP蛋白的水平升高。用于檢測細胞中編碼IAP蛋白的mRNA水平或IAP蛋白水平的方法包括，但不限于使用IAP蛋白抗體的蛋白質印跡、免疫組織化學法和核酸擴增或直接RNA檢測法。與細胞中IAP蛋白的絕對水平同樣重要的是測定它們過度表達IAP蛋白，故還有這類細胞中IAP蛋白與其他促細胞凋亡信號傳導分子(例如促細胞凋亡Bcl-2族蛋白)相比的相對水平。當這兩種分子的平衡處于若不是由于IAP蛋白水平、促細胞凋亡信號傳導分子將足以使細胞進行細胞凋亡程序并且死亡這種狀態(tài)時，所述的細胞將依賴于IAP蛋白才能存活。在這類細胞中，接觸抑制有效量的IAP蛋白抑制劑將足以使細胞進行細胞凋亡程序并且死亡。因此，術語“IAP蛋白的過度表達”還指因促細胞凋亡信號和抗-細胞凋亡信號的相對水平而導致細胞響應抑制IAP蛋白功能的抑制有效量的化合物發(fā)生細胞凋亡。

本文所用的術語“抗癌劑(anticancer agent)”和“抗癌藥(anticancer drug)”指的是用于治療過度增殖性疾病，例如癌癥(例如哺乳動物中)的任意治療劑(例如化療化合物和/或分子治療化合物)、放療或外科手術。

本文所用的術語“前藥”指的是需要在靶生理系統(tǒng)中發(fā)生生物轉化(例如自發(fā)或酶促)以將前體藥物釋放或轉化(例如通過酶、生理、機械、電磁方式)成活性藥物的母體“藥物”分子的藥物上無活性的衍生物。設計前體藥物是為了克服與穩(wěn)定性、毒性、缺乏特異性或有限的生物利用度相關的問題。示例性前藥包括活性藥物分子自身和化學掩蔽基團(例如可逆地抑制所述藥物活性的基團)。某些優(yōu)選的前藥為帶有在代謝條件下可裂解的基團的化合物的變型或衍生物。示例性前藥在它們在生理條件進行進行溶劑解或進行酶降解或其它生物轉化(例如磷酸化、氫化、脫氫、糖基化)時在體內(nèi)或體外變成具有藥學活性。前藥通常提供在哺乳動物體內(nèi)溶解度、組織相容性或延緩釋放的優(yōu)點(例如，參見Bundgard，Design of Prodrugs，pp.7-9，21-24，Elsevier，Amsterdam(1985)；和Silverman，The Organic Chemistryof Drug Design and Drug Action，pp.352-401，Academic Press，SanDiego，CA(1992))。常用的前藥包括酸性衍生物，例如通過使母體酸與合適的醇(例如低級鏈烷醇)反應制備的酯類，通過使母體酸與胺反應制備的酰胺類，或反應生成?；瘔A性衍生物的堿性基團(例如低級烷基酰胺)。

本文所用的術語“藥物上可接受的鹽”指的是在靶動物(例如哺乳動物)體內(nèi)為生理上耐受的本發(fā)明化合物的任意鹽(例如通過與酸或堿反應獲得)。本發(fā)明化合物的鹽可以來源于無機酸和堿或者有機酸和堿。酸的實例包括，但不限于鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富馬酸、馬來酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水楊酸、琥珀酸、對甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等。其它自身并非藥物上可接受的酸，例如草酸，可以用于制備用作獲得本發(fā)明化合物及其藥物上可接受的酸加成鹽的中間體。

堿的實例包括，但不限于堿金屬(例如鈉)氫氧化物、堿土金屬(例如鎂)氫氧化物、氨和通式NW4+的化合物，其中W為C1-4烷基，等。

鹽的實例包括，但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、氟庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一酸鹽等。鹽的其它實例包括與合適的陽離子諸如Na+、NH4+和NW4+(其中W為C1-4烷基)化合的本發(fā)明化合物的陰離子等。為了治療應用，關注藥物上可接受的本發(fā)明化合物的鹽。然而，例如，非藥物上可接受的酸和堿的鹽也可以應用于制備或純化藥物上可接受的化合物。

本文所用的術語“治療有效量”指的是足以使得疾病的一種或多種癥狀改善或者預防疾病進展或者導致疾病退化的治療劑用量。例如，就治療癌癥而言，治療有效量優(yōu)選指的是減小腫瘤生長率、減小腫瘤質量、減少轉移瘤的數(shù)量、增加腫瘤進展的時間或增加存活時間至少5％，優(yōu)選至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少35％，至少40％，至少45％，至少50％，至少55％，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少100％的治療劑用量。

本文所用的術語“致敏(sensitize)”和“敏化(sensitizing)”指的是通過給予第一種治療劑(例如通式II的化合物)使動物或動物體內(nèi)的細胞對第二種活性劑的生物作用(例如促進或阻滯細胞功能的方面，包括，但不限于細胞分裂、細胞生長、增殖、侵害、血管發(fā)生或細胞凋亡)更為敏感或更具響應性?？梢詫⒌谝辉噭Π屑毎闹旅粜栽谂c和不與第一試劑一起施用第二試劑時觀察到的指定生物作用(例如促進或阻滯細胞功能的方面，包括，但不限于細胞生長、增殖、侵害、血管發(fā)生或細胞凋亡)的差異來度量。致敏細胞的響應可以比在沒有第一試劑存在下的響應增加至少10％，至少20％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少100％，至少150％，至少200％，至少350％，至少300％，至少350％，至少400％，至少450％或至少500％。

本文所用的術語“細胞凋亡失調”指的是細胞通過細胞凋亡發(fā)生細胞死亡(例如傾向性)的能力上的任何異常。細胞凋亡失調與各種狀況相關或由它們誘導，包括例如自身免疫性疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、移植物抗宿主病、重癥肌無力或斯耶格侖綜合癥)、慢性炎癥狀況(例如銀屑病、哮喘或克羅恩病)、過度增殖性疾病(例如腫瘤、B細胞淋巴瘤或T細胞淋巴瘤)、病毒感染(例如皰疹、乳頭瘤或HIV)和其它狀況，例如骨關節(jié)炎和動脈粥樣硬化。應注意當這種失調由病毒感染誘導或與之相關時，在發(fā)生或觀察到失調時可能檢測到病毒感染，也可能未檢測到病毒感染。即病毒-誘導的失調甚至可能在病毒感染癥狀消失后發(fā)生。

本文所用的術語“過度增殖性疾病”指的是動物體內(nèi)的增殖細胞的局限化群體不受通常的正常生長限制的控制。過度增殖性疾病的實例包括但不局限于腫瘤、贅生物、淋巴瘤等。如果贅生物未發(fā)生侵害或轉移，那么認為贅生物為良性的；如果這兩種情況中發(fā)生一種，那么認為是惡性的?！稗D移”細胞指的是細胞可以侵入和破壞附近的身體結構。增生是細胞增殖的一種形式，包括組織或器官中的細胞數(shù)量增加，而結構或功能沒有顯著改變。組織變形是受控細胞生長的一種形式，其中一種類型的完全分化細胞取代了另一種類型的分化細胞。

活化淋巴樣細胞的病理性生長通常導致自身免疫性疾病或慢性炎癥疾病。本文所用的術語“自身免疫性疾病”指的是生物體產(chǎn)生識別生物體自身分子、細胞或組織的抗體或免疫細胞的任何疾病。自身免疫性疾病的非限制性實例包括自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、貝格爾病或IgA腎病、口炎性腹瀉、慢性疲乏綜合征、克羅恩病、皮肌炎、纖維肌痛、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、橋本甲狀腺炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜、扁平苔癬、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、銀屑病、風濕熱、風濕性關節(jié)炎、硬皮病、斯耶格倫綜合癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、1型糖尿病、潰瘍性結腸炎、白癜風等。

本文所用的術語“腫瘤性疾病”指的是為良性(非癌性)或惡性(癌性)的任何異常細胞生長。

本文所用的術語“抗腫瘤劑”指的是阻止被靶向的(例如惡性)贅生物增殖、生長或擴散的任意化合物。

本文所用的術語“預防(prevent、preventing和prevention)”指的是動物體內(nèi)病態(tài)細胞(例如過度增殖性或贅生性細胞)的出現(xiàn)減少。預防可以為完全性的，例如受試者體內(nèi)的病態(tài)細胞總體上不存在。預防還可以為部分的，使得受試者體內(nèi)出現(xiàn)的病態(tài)細胞少于未使用本發(fā)明出現(xiàn)的病態(tài)細胞。

本文所使用的術語“細胞凋亡調節(jié)劑”是指與細胞凋亡的調節(jié)(例如，抑制、減少、增加、促進)有關的試劑。細胞凋亡調節(jié)劑的實例包括包含死亡結構域的蛋白，例如但不限于Fas/CD95、TRAMP、TNF RI、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、FADD和RIP。細胞凋亡調節(jié)劑的其它實例包括但不限于，TNFα、Fas配體、Fas/CD95及其它TNF族受體的抗體、TRAIL(亦稱Apo2配體或Apo2L/TRAIL)、TRAIL-R1或TRAIL-R2的激動劑(例如，單克隆或多克隆主動抗體)、Bcl-2、p53、BAX、BAD、Akt、CAD、PI3激酶、PP1和半胱天冬酶蛋白。調節(jié)劑廣泛地包括TNF族受體和TNF族配體的激動劑和拮抗劑。細胞凋亡調節(jié)劑可以是可溶性的或膜結合的(例如配體或受體)。優(yōu)選的細胞凋亡調節(jié)劑是細胞凋亡誘導物，例如TNF或TNF相關的配體，尤其是TRAMP配體、Fas/CD95配體、TNFR-1配體或TRAIL。

本發(fā)明的IAP的抑制劑是具有以下通式II的化合物或其藥學上可接受的鹽或前藥
其中 A1和A1′獨立地選自氫、任選取代的烷基和Z； A2和A2′獨立地選自氫、任選取代的烷基和COR1，其中當V是O時不存在A2和當V′是O時不存在A2′； V和V′獨立地選自N、CH和O； W和W′獨立地選自CH和N； X和X′獨立地是任選取代的C1-3烷基； Y和Y′獨立地選自CONR1，C(O)O，(CR1R2)1-3，其中一個或多個CH2基團可以被O、S或NR1替代，任選取代的芳基和任選取代的雜芳基； D和D′獨立地選自任選取代的亞烷基和(CR1R2)n-R5a-(CR3R4)m； J和J′獨立地選自任選取代的亞烷基和(CR1R2)p-R5b-(CR3R4)q； T和T′獨立地選自C＝O、C＝S、C＝NR1、S、O、NR1、CR1R2、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基； U和U′獨立地選自氫、NR1R2、OR1、SR1、任選取代的烷基和任選取代的芳基； n、m、p和q獨立地是0-5； 每個R1選自氫、任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基和Z； 每個R2、R3和R4獨立地選自氫、任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基； R5a和R5b獨立地選自C＝O、C＝S、C＝NR1、S、O、NR1和CR1R2；和 Z是以共價鍵方式將A1、Y、D、J、T和U之一與A1′、Y′、D′、J′、T′和U′之一連接的連接基。

在另一個實施方案中，Z連接D與U′。在另一個實施方案中，Z連接D與D′。在另一個實施方案中，Z連接U與U′。在另一個實施方案中，n和m獨立地選自0-4，滿足n+m是3或4。在另一個實施方案中，p和q獨立地選自0和1，滿足p+q是1。在另一個實施方案中，n和m獨立地選自0-4，滿足n+m是3或4，并且p和q獨立地選自0和1，滿足p+q是1。在另一個實施方案中，T是C＝O。在另一個實施方案中，U是NR1R2。在另一個實施方案中，R5b是CH2。在另一個實施方案中，Y是CONH，W是CH，V是N。在另一個實施方案中，A2和A2′獨立地選自氫和任選取代的烷基。

在另一個特定的實施方案中，本發(fā)明的IAP的抑制劑是以下通式III的化合物或其藥學上可接受的鹽或前藥
其中A1、A2、V、W、X、Y、D、J、Z、A1′、A2′、V′、W′、X′、Y′、D′、J′和R2具有如上述的意義。

在另一個特定的實施方案中，本發(fā)明的IAP的抑制劑是以下通式IV的化合物或其藥學上可接受的鹽或前藥
其中A1、A2、V、W、X、Y、D、J、Z、T、U、A1′、A2′、V′、W′、X′、Y′、D′、J′、T′和U′具有如上述的意義。

在另一個特定的實施方案中，本發(fā)明的IAP的抑制劑是以下通式V的化合物或其藥學上可接受的鹽或前藥
其中A1、A2、V、W、X、Y、D、J、Z、A1′、A2′、V′、W′、X′、Y′、D′、J′、T′、U′和R2具有如上述的意義。

在另一個特定的實施方案中，可用于制備本發(fā)明IAP的中間體是以下通式XIII的化合物
其中 D＂是(CR1R2)n-R5c-(CR3R4)m； J選自任選取代的亞烷基和(CR1R2)p-R5b-(CR3R4)q； T選自C＝O、C＝S、C＝NR1、S、O、NR1、CR1R2、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基； U選自氫、NR1R2、OR1、SR1、任選取代的烷基和任選取代的芳基； n、m、p和q獨立地選自0-5； 每個R1、R2、R3和R4獨立地選自氫、任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基； R5c選自C＝O、C＝S、C＝NR1、S、O、NR1、CR1aR2a、NCOR8和NCO2R8； R1a和R2a獨立地選自氫、羥基、疊氮基、任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基； R5b選自O、S、NR1、CR1R2、C＝O、C＝S和C＝NR1； R7選自氫、CO2R7a和COCH(R7b)N(R7c)CO2R7a； R7a選自任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基； R7b是任選取代的C1-3烷基； R7c選自氫和任選取代的烷基；和 R8選自任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基。

在另一個實施方案中，R7a是叔丁基。在另一個實施方案中，n是1，m是2，R5c是NCO2R8且R8是芐基。在另一個實施方案中，R5c是CR1aR2a，R1a選自羥基、疊氮基和任選取代的雜芳基，R2a是氫。

有用的烷基包括直鏈或支化C1-18烷基，尤其是甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、仲丁基、3-戊基和3-己基。術語“亞烷基(alkylenyl)”是指含1、2、3或4個連接的亞甲基的二價烷基，由-(CH2)4-示例。

有用的烯基包括直鏈或支化C2-18烷基，特別是乙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基、異丁烯基和己烯基。

本文所使用的術語“亞烯基”是指衍生自烯烴的二價基，由-CH2CH＝CHCH2-示例。

有用的炔基是C2-18炔基，特別是乙炔基、丙炔基、丁炔基和2-丁炔基。

有用的環(huán)烷基是C3-8環(huán)烷基。典型的環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、金剛烷基和降冰片基。

有用的芳基包括C6-14芳基，特別是苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、甘菊環(huán)基、聯(lián)苯基、亞聯(lián)苯基和芴基。

有用的雜芳基包括噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2，3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、異苯并呋喃基、色烯基、呫噸基、吩呫噸基(phenoxanthenyl)、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、酞嗪基(phthalzinyl)、萘啶基、喹喔啉基(quinozalinyl)、噌啉基、蝶啶基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、咱啶基、菲咯啉基、吩嗪基、異噻唑基、吩噻嗪基、異噁唑基、呋咱基、吩噁嗪基、1，4-二氫喹喔啉-2，3-二酮、7-氨基香豆素、吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮、1，2-苯并異噁唑-3-基、苯并咪唑基、2-羥吲哚基和2-氧代苯并咪唑基。當雜芳基在環(huán)上含有氮原子，那么這類氮原子可以為N-氧化物形式，例如吡啶基N-氧化物、吡嗪基N-氧化物、嘧啶基N-氧化物等。

任選的取代基包括一個或多個烷基；鹵素；疊氮基；鹵代烷基；羥基；炔基；環(huán)烷基；雜烷基；雜炔基；任選被一個或多個低級烷基、鹵素、鹵代烷基或雜芳基取代的芳基；任選被一個或多個低級烷基、鹵代烷基或雜芳基取代的芳氧基；芳烷基；任選被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代的雜芳基；任選被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代的雜芳氧基；烷氧基；烷基硫；芳基硫；酰胺基；氨基；酰氧基；任選被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代的芳酰氧基；任選被一個或多個低級烷基、鹵素或鹵代烷基取代的二苯基氧膦基氧基；芳烷基；任選被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代的雜芳基；任選被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代的雜芳氧基；烷氧基；烷基硫；芳基硫；酰胺基；氨基；酰氧基；任選被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代的芳酰氧基；任選被一個或多個低級烷基、鹵素或鹵代烷基取代的二苯基氧膦基氧基；任選被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代的雜環(huán)；任選被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代的雜環(huán)烷氧基；任選被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代的部分不飽和雜環(huán)烷基；任選被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代的部分不飽和雜環(huán)烷氧基；和任何共價連接基(見下頁)。

有用的飽和或部分飽和碳環(huán)基是如上面所限定的環(huán)烷基，以及環(huán)烯基，例如環(huán)戊烯基、環(huán)庚烯基和環(huán)辛烯基。碳環(huán)基還包括具有稠環(huán)的任選取代的芳基的基團例如萘滿。

有用的鹵素包括氟、氯、溴和碘。

有用的烷芳基和烷雜芳基包括被任何上述C6-14芳基或雜芳基取代的任何上述C1-18烷基。有用的包括芐基、苯乙基和萘甲基。

有用的鹵代烷基包括被一個或多個氟、氯、溴或碘原子取代的C1-10烷基，例如氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、1，1-二氟乙基、氯代甲基、氯代氟代甲基和三氯甲基。

有用的雜烷基包括含一個或多個氮、氧或硫原子的C1-10烷基，例如-CH2CH2OCH3、-CH2OH、-CH2CH2NH2和-CH2CH2NHCH3。

有用的雜炔基包括含一個或多個氮、氧或硫原子的C2-18炔基，例如-CH2OCH2CCH。

有用的烷氧基包括被上述C1-10烷基之一取代的氧。

有用的烷基硫包括被上述C1-10烷基之一取代的硫。還包括此類烷基硫的亞砜和砜。

有用的酰氨基包括羰酰氨基以及與氨基氮連接的任何C1-6酰基(烷?；?，例如乙酸氨基、丙酰氨基、丁酰氨基、戊酰氨基、己酰氨基以及芳基-取代的C2-6取代的?；?br>
有用的酰氧基是與氧基(-O-)連接的任何C1-6?；?烷?；?，例如甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、戊酰氧基、己酰氧基等。

有用的芳酰氧基包括在上述任何酰氧基上取代的任何上述芳基，例如2，6-二氯苯甲酰氧基、2，6-二氟苯甲酰氧基和2，6-二-(三氟甲基)苯甲酰氧基。

有用的氨基包括-NH2、-NHR11和-NR11R11，其中R11和R12是C1-10烷基或如上面所限定的環(huán)烷基。

有用的飽和或部分飽和的雜環(huán)基包括四氫呋喃基、吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、奎寧環(huán)基、嗎啉基、異苯并二氫吡喃基、苯并二氫吡喃基、吡唑烷基、吡唑啉基、特窗?；?tetronoyl)和tetramoyl。

有用的亞芳基包括C6-14亞芳基，特別是 亞苯基、亞萘基、亞菲基、亞蒽基、亞茚基、亞薁基、亞聯(lián)苯基、biphenylenylene和亞芴基。

有用的雜亞芳基包括二取代的雜芳基例如2，5-亞噻吩基、2，4-亞咪唑基和1，3-亞三唑基。

在整個說明書中，基團、其任選的取代基經(jīng)選擇提供穩(wěn)定結構部分和化合物。

可以用于本發(fā)明的共價連接基包括任何二價共價連接基。在一些實施方案中，連接基是含5-50個原子的鄰接鏈。使用標準鍵長和角度，連接基通常具有約5埃-約100埃的長度。更優(yōu)選，連接基具有約10埃-約50埃的長度。在某些實施方案中，連接基包含至少一個芳基、雜芳基或雜環(huán)結構部分。在其它實施方案中，連接基是對稱的。在其它實施方案中，連接基是非對稱的。連接基可以是許多已知的均雙官能化和雜雙官能化連接基。參見例如美國專利號7,001,989、6,967,107、6,921,669、6,906,182、6,887,952、6,759,509、6,521,431、6,512,101、5,880,270、5,856,571、5,824,805、5,262,524、5,258,498、5,212,075、5,165,923、5,141,648，所述文獻中的每一篇整體引入供參考。

在另一個實施方案中，連接基可以包含與A1、Y、D、J、T或U中任一個和A1′、Y′、D′、J′、T′或U′中任一個鍵接的-COR9a-或-R9aCO-，其中R7a是O、S或NR10a，R10a是氫或低級烷基。在這個實施方案中，連接基還包含與第一基團的R9a-和第二基團的CO-鍵接的基團，其可以包括任選取代的亞烷基，其中該亞烷基的碳原子中任一個可以被一個或多個O、S、NR10a、亞芳基和雜亞芳基取代。此類連接基的實例包括但不限于




和

在另一個實施方案中，連接基可以包含與A1、Y、D、J、T或U中任一個和A1′、Y′、D′、J′、T′或U′中任一個鍵接的羰基，并且進一步包含與該羰基鍵接的亞烷基、聚亞烷基或芳烷基二醇基。此類二醇的實例包括聚氧化乙烯，聚氧丙烯，和聚氧化乙烯和聚氧化丙烯二醇的嵌段共聚物，二乙二醇，三乙二醇，四乙二醇，二丙二醇，硫代乙二醇，和五乙二醇、六乙二醇、七乙二醇、八乙二醇、九乙二醇和十乙二醇。這些二醇的具體實例包括乙二醇；1，2-丙二醇；1，3-丙二醇；2，4-二甲基-2-乙基己烷-1，3-二醇；2，2-二甲基-1，3-丙二醇；2-乙基-2-丁基-1，3-丙二醇；2-乙基-2-異丁基-1，3-丙二醇；1，3-丁二醇；1，4-丁二醇；1，5-戊二醇；1，6-己二醇；2，2-4-三甲基-1，6-己二醇；硫代二乙醇；1，2-環(huán)己烷二甲醇；1，3-環(huán)己烷二甲醇；1，4-環(huán)己烷二甲醇；2，2，4，4-四甲基-1，3-環(huán)丁烷二醇；對-苯二甲醇；2，3-萘二醇和2，7-萘二醇。二氨基化合物的實例包括1，3-雙-(2，4-二氨基苯氧基)丙烷；2，4-二氨基-5-甲基苯乙醚；2，4-二氨基-5-甲基苯氧基乙醇；2，4-二氨基二苯胺；2，4-二氨基苯酚；2，4-二氨基苯酚；2，4-二氨基苯氧基乙醇；2，6-雙(2-羥基乙氧基)-3，5-吡啶二胺；2，6-二氨基吡啶；2，6-二甲氧基-3，5-吡啶二胺；2-氯-5-硝基-正羥乙基對亞苯基二胺；2-氯-對亞苯基二胺；2-氨甲基-對氨基苯酚和4，5-二氨基-1-甲基吡唑。氨基-羥基化合物的實例包括2-氨基-3-羥基吡啶；2-氨基-3-硝基苯酚；2-氨基-4-羥乙基氨基茴香醚；2-氨基-4-羥乙基氨基茴香醚硫酸鹽和2-氨基-6-氯-4-硝基苯酚。

在另一個實施方案中，連接基可以包含與A1、Y、D、J、T或U中任一個和A1′、Y′、D′、J′、T′或U′中任一個鍵接的氧或氨基，并且進一步包含二酸，從而獲得二酯、二酰胺或酯酰胺。此類二酸的實例包括琥珀酸、富馬酸、肥酸等。

在另一個實施方案中，連接基包含1，2，3-三唑-4，5-烯基，它通過炔丙基與疊氮基的環(huán)加成引入。

連接基用來將兩種Smac模擬物化合物接合到二價結構中。接合在一起的Smac模擬物化合物可以相同或不同，并且可以是已知用來鍵接IAP和抑制IAP和半胱天冬酶的相互作用的任何Smac模擬物化合物。在一個實施方案中，Smac模擬物是構象約束的。在另一個實施方案中，Smac模擬物不含任何自然發(fā)生的氨基酸。在另一個實施方案中，Smac模擬物不含任何肽鍵?？捎米鞅景l(fā)明中的起始材料的已知的Smac模擬物化合物的實例包括以下
WO 2005/069888公開了以下通式VI的Smac肽模擬物化合物或其藥學上可接受的鹽或前藥
其中 R1是C1-2烷基或C1-2鹵代烷基； R2為支化或未支化烷基或環(huán)烷基或取代或未被取代的芳基、烷芳基、雜芳基或烷雜芳基； R3為支化或未支化烷基或環(huán)烷基或取代或未被取代的芳基、烷芳基、雜芳基或烷雜芳基； Y為(CH2)0-3，其中一個或多個碳可以被一個或多個選自氧、硫和氮的雜原子取代，并且CH2基團上的一個或多個氫可以被支化或未支化烷基或環(huán)烷基或取代或未取代的芳基、烷芳基、雜芳基或烷雜芳基取代；和 Z是CONH、CH2O、NHCO、(CH2)1-4、(CH2)1-3CONH(CH2)0-3、(CH2)1-3S(CH2)0-3、(CH2)1-3NH(CH2)0-3、(CH2)1-3NHCO(CH2)0-3、(CH2)1-3NHSO2(CH2)0-3、(CH2)1-3NHC(O)NH(CH2)0-3、(CH2)1-3NHC(S)NH(CH2)0-3或(CH2)1-3NR′(CH2)0-3，其中R′為支化或未支化烷基或環(huán)烷基或取代或未被取代的芳基、烷芳基、雜芳基或烷雜芳基。

WO 2005/069894公開了以下通式VII的Smac模擬物化合物或其藥物上可接受的鹽或前藥
其中 R1是C1-2烷基或C1-2鹵代烷基； R2為支化或未支化烷基或環(huán)烷基或取代或未被取代的芳基、烷芳基、雜芳基或烷雜芳基； X是CONH、CH2O、CH2NH、CH2S或(CH2)1-3； Y1為(CH2)1-5，其中一個或多個碳可以被一個或多個選自氧、硫和氮的雜原子取代，并且CH2基團上的一個或多個氫可以被支化或未支化烷基或環(huán)烷基或取代或未取代的芳基、烷芳基、雜芳基或烷雜芳基取代； Y2為(CH2)1-5，其中一個或多個碳可以被一個或多個選自氧、硫和氮的雜原子取代，并且CH2基團上的一個或多個氫可以被支化或未支化烷基或環(huán)烷基或取代或未取代的芳基、烷芳基、雜芳基或烷雜芳基取代；和 Z是CONH、CH2O、NHCO、(CH2)1-4、(CH2)1-3CONH(CH2)0-3、(CH2)1-3S(CH2)0-3、(CH2)1-3NH(CH2)0-3、(CH2)1-3NHCO(CH2)0-3、(CH2)1-3NHSO2(CH2)0-3、(CH2)1-3NHC(O)NH(CH2)0-3、(CH2)1-3NHC(S)NH(CH2)0-3或(CH2)1-3NR’(CH2)0-3，其中R’為支化或未支化烷基或環(huán)烷基或取代或未被取代的芳基、烷芳基、雜芳基或烷雜芳基。

WO 2006/010118公開了以下通式VIII的Smac模擬物化合物或其藥學上可接受的鹽或前藥
其中 A是NR1R2或N+R1R2R3； R1、R2和R3獨立地是氫或任選取代的C1-8烷基、C2-8烯基或C2-8炔基，其中一個或多個碳可以被C＝O、C＝S或選自O、S和N的雜原子替代，CH、CH2或CH3基中的一個或多個氫可以被氟、支化或未支化烷基或環(huán)烷基、任選取代的芳基、烷芳基、雜芳基或烷雜芳基、或OR4、SR4或NR4R5替代； R4和R5獨立地是氫或任選取代的C1-4烷基，C2-5烯基或C2-5炔基，其中一個或多個碳可以被選自O、S和N的雜原子替代，或任選取代的芳基，烷芳基，雜芳基或烷雜芳基；或 R1、R2和R3中的任兩個與和它們連接的氮一起形成雜環(huán)基，其中一個或多個碳原子可以被C＝O、C＝S或選自O、S和N的雜原子替代，條件是該雜原子與該氮原子被至少兩個碳隔開； B是任選取代的C1-4烷基、C2-4烯基或C2-4炔基，其中一個或多個氫可以被氟替代； U是CONH、C(O)O、C(S)O、C(S)NH、C(NH)NH或(CH2)1-5，其中一個或多個碳可以被選自O、S和N的雜原子替代； V和W獨立地是(CH2)1-5，其中一個或多個碳可以被C＝O、C＝S或選自O、S和N的雜原子替代，并且CH2基中的一個或多個氫可以被支化或未支化烷基或環(huán)烷基、任選取代的芳基、烷芳基、雜芳基或烷雜芳基，或OR4、SR4或NR4R5替代； X是任選取代的C1-18烷基、C2-18烯基、C2-18炔基、芳基或雜芳基，其中一個或多個碳可以被C＝O、C＝S或選自O、S和N的雜原子替代，并且CH、CH2或CH3基中的一個或多個氫可以被支化或未支化烷基或環(huán)烷基、任選取代的芳基、烷芳基、雜芳基或烷雜芳基，或OR4、SR4或NR4R5替代； Y是CH或N； Z是CH2、C＝O、C＝S、CHSR、CHOR或CHNR；和 R是氫或任選取代的C1-4烷基、C2-4烯基或C2-4炔基。

美國公開申請?zhí)?005/0234042公開了根據(jù)以下通式IX的化合物或其藥學上可接受的鹽
其中 R1是H；C1-C4烷基；C1-C4烯基；C1-C4炔基或C3-C10環(huán)烷基，它們是未取代或取代的； R2是H；C1-C4烷基；C1-C4烯基；C1-C4炔基或C3-C10環(huán)烷基，它們是未取代或取代的； R3是H；-CF3；-C2F5；C1-C4烷基；C1-C4烯基；C1-C4炔基；-CH2-Z或R2和R3與氮一同形成het環(huán)； Z是H；-OH；F；Cl；-CH3；-CF3；-CH2Cl；-CH2F或-CH2OH； R4是C1-C16直鏈或支化烷基；C1-C16烯基；C1-C16炔基或-C3-C10環(huán)烷基；-(CH2)1-6-Z1；-(CH2)0-6-芳基；和-(CH2)0-6-het；其中烷基、環(huán)烷基和苯基是未取代或取代的； Z1是-N(R8)-C(O)-C1-C10烷基；-N(R8)-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7環(huán)烷基；-N(R8)-C(O)-(CH2)0-6-苯基；-N(R8)-C(O)-(CH2)1-6-het；-C(O)-N(R9)(R10)；-C(O)-O-C1-C10烷基；-C(O)-O-(CH2)1-6-C3-C7環(huán)烷基；-C(O)-O-(CH2)0-6-苯基；-C(O)-O-(CH2)1-6-het；-O-C(O)-C1-C10烷基；-O-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7環(huán)烷基；-O-C(O)-(CH2)0-6-苯基；-O-C(O)-(CH2)1-6-het；其中烷基、環(huán)烷基和苯基是未取代或取代的； het是含1-4個選自N、O和S的雜原子的5-7元雜環(huán)，或8-12元稠環(huán)體系，該稠環(huán)體系包括至少一個含1、2或3個選自N、O和S的雜原子的5-7元雜環(huán)，該雜環(huán)或稠環(huán)體系在碳或氮原子上是未取代或取代的； R8是H；-CH3；-CF3；-CH2OH或-CH2Cl； R9和R10各自獨立地是H；C1-C4烷基；C3-C7環(huán)烷基；-(CH2)1-6-C3-C7環(huán)烷基；-(CH2)0-6-苯基；其中烷基、環(huán)烷基和苯基是未取代或取代的，或R9和R10與氮一同形成het； R5是H；C1-C10-烷基；芳基；苯基；C3-C7環(huán)烷基；-(CH2)1-6-C3-C7環(huán)烷基；-C1-C10烷基-芳基；-(CH2)0-6-C3-C7環(huán)烷基-(CH2)0-6-苯基；-(CH2)0-4CH-((CH2)1-4-苯基)2；-(CH2)0-6-CH(苯基)2；-茚滿基；-C(O)-C1-C10烷基；-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7-環(huán)烷基；-C(O)-(CH2)0-6-苯基；-(CH2)0-6-C(O)-苯基；-(CH2)0-6-het；-C(O)-(CH2)1-6-het；或R5是氨基酸的殘基，其中烷基、環(huán)烷基、苯基和芳基取代基是未取代或取代的； U如結構X所示
其中 n＝0-5； X是-CH或N； Ra和Rb獨立地是O、S或N原子或C0-8烷基，其中烷基鏈中的一個或多個碳原子可以被選自O、S或N的雜原子替代，和其中烷基可以是未取代或取代的； Rd選自(a)-Re-Q-(Rf)p(Rg)q或(b)Ar1-D-Ar2； Rc是H或Rc和Rd可以一同形成環(huán)烷基或het；其中如果Rd和Rc形成環(huán)烷基或het，則R5在C或N原子處與該形成的環(huán)連接； p和q獨立地是0或1； Re是C1-8烷基或烷叉基，并且Re可以是未取代或取代的； Q是N、O、S、S(O)或S(O)2； Ar1和Ar2是取代或未取代的芳基或het； Rf和Rg各自獨立地是H；-C1-C10烷基；C1-C10烷芳基；-OH；-O-C1-C10烷基；-(CH2)0-6-C3-C7環(huán)烷基；-O-(CH2)0-6-芳基；苯基；芳基；苯基-苯基；-(CH2)1-6-het；-O-(CH2)1-6-het；-OR11；-C(O)-R11；-C(O)-N(R11)(R12)；-N(R11)(R12)；-S-R11；-S(O)-R11；-S(O)2-R11；-S(O)2-NR11R12；-NR11-S(O)2-R12；S-C1-C10烷基；芳基-C1-C4烷基；het-C1-C4-烷基，其中烷基、環(huán)烷基、het和芳基是未取代或取代的；-SO2-C1-C2烷基；-SO2-C1-C2烷基苯基；-O-C1-C4烷基；或Rg和Rf形成選自het或芳基的環(huán)； D是-CO-；-C(O)-C1-7亞烷基或亞芳基；-CF2-；-O-；-S(O)r，其中r是0-2；1，3-二氧雜環(huán)戊烷(dioaxolane)；或C1-7烷基-OH；其中烷基、亞烷基或亞芳基可以未取代或被一個或多個鹵素、OH、-O-C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基或-CF3取代的；或D是-N(Rh)，其中Rh是H；C1-7烷基(未取代或取代的)；芳基；-O(C1-7環(huán)烷基)(未取代或取代的)；C(O)-C1-C10烷基；C(O)-C0-C10烷基-芳基；C-O-C1-C10烷基；C-O-C0-C10烷基-芳基或SO2-C1-C10-烷基；SO2-(C0-C10-烷芳基)； R6、R7、R′6和R′7各自獨立地是H；-C1-C10烷基；-C1-C10烷氧基；芳基-C1-C10烷氧基；-OH；-O-C1-C10烷基；-(CH2)0-6-C3-C7環(huán)烷基；-O-(CH2)0-6-芳基；苯基；-(CH2)1-6-het；-O-(CH2)1-6-het；-OR11；-C(O)-R11；-C(O)-N(R11)(R12)；-N(R11)(R12)；-S-R11；-S(O)-R11；-S(O)2-R11；-S(O)2-NR11R12；-NR11-S(O)2-R12；其中烷基、環(huán)烷基和芳基是未取代或取代的；和R6、R7、R′6和R′7可以聯(lián)合形成環(huán)系； R11和R12獨立地是H；C1-C10烷基；-(CH2)0-6-C3-C7環(huán)烷基；-(CH2)0-6-(CH)0-1(芳基)1-2；-C(O)-C1-C10烷基；-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7環(huán)烷基；-C(O)-O-(CH2)0-6-芳基；-C(O)-(CH2)0-6-O-芴基；-C(O)-NH-(CH2)0-6-芳基；-C(O)-(CH2)0-6-芳基；-C(O)-(CH2)1-6-het；-C(S)-C1-C10烷基；-C(S)-(CH2)1-6-C3-C7環(huán)烷基；-C(S)-O-(CH2)0-6-芳基；-C(S)-(CH2)0-6-O-芴基；-C(S)-NH-(CH2)0-6-芳基；-C(S)-(CH2)0-6-芳基；-C(S)-(CH2)1-6-het；其中烷基、環(huán)烷基和芳基是未取代或取代的；或R11和R12是促進分子越過細胞膜傳輸?shù)娜〈?；或R11和R12與氮原子一同形成het； 其中R11和R12的烷基取代基可以是未取代或被一個或多個選自C1-C10烷基、鹵素、OH、-O-C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基或-CF3的取代基取代的； R11和R12的取代的環(huán)烷基取代基被一個或多個選自C1-C10烯烴；C1-C6烷基；鹵素；OH；-O-C1-C6烷基；-S-C1-C6烷基或-CF3的取代基取代；和 R11和R12的取代的苯基或芳基被一個或多個選自鹵素；羥基；C1-C4烷基；C1-C4烷氧基；硝基；-CN；-O-C(O)-C1-C4烷基和-C(O)-O-C1-C4-芳基的取代基取代。

美國公開申請?zhí)?005/0261203公開了以下通式XI的化合物和其鹽和溶劑合物
其中 X1和X2獨立地是O或S； L是鍵、-C(X3)-、-C(X3)NR12或-C(X3)O-，其中X3是O或S，R12是H或R1； R1是烷基、碳環(huán)、碳環(huán)取代的烷基、雜環(huán)或雜環(huán)取代的烷基，其中各自任選取代有鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、鹵代烷基、烷氧基、烷基磺酰基、氨基、硝基、芳基和雜芳基； R2是烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或雜環(huán)烷基； R3是H或烷基； R4和R4，獨立地是H、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜芳基或雜芳烷基，其中各自任選取代有鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、烷氧基、氨基和硝基； R5和R5，各自獨立地是H或烷基； R6是H或烷基。

美國公開申請?zhí)?006/0014700公開了以下通式XII的化合物和其鹽和溶劑合物
其中 X1、X2和X3獨立地是O或S； Y是(CHR7)n、O或S；其中n是1或2，R7是H、鹵素、烷基、芳基、芳烷基、氨基、芳氨基、烷氨基、芳烷基氨基、烷氧基、芳氧基或芳烷氧基； A是含1-4個雜原子任選取代有以下基團的5-元雜環(huán)氨基、羥基、巰基、鹵素、羧基、脒基、胍基、烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、?；?、酰氧基、酰氨基、烷氧基羰基氨基、環(huán)烷基、烷基硫、烷基亞磺酰基、烷基磺?；?、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、烷基磺?；被螂s環(huán)；其中每個烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、?；?、酰氧基、酰氨基、環(huán)烷基和雜環(huán)取代基任選取代有羥基、鹵素、巰基、羧基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、氨基、硝基、氰基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)； R1是H或R1和R2一同形成5-8元環(huán)； R2是烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)或雜環(huán)烷基；各自任選取代有羥基、巰基、鹵素、氨基、羧基、烷基、鹵代烷基、烷氧基或烷基硫； R3是H或烷基； R4和R4′獨立地是H、羥基、氨基、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜芳基或雜芳烷基，其中每個烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜芳基和雜芳烷基任選取代有鹵素、羥基、巰基、羧基、烷基、烷氧基、氨基和硝基； R5和R5′各自獨立地是H或烷基； R6和R6′各自獨立地是H、烷基、芳基或芳烷基。

本發(fā)明化合物相信可以作為立體異構體(包括旋光異構體)存在。本發(fā)明包括所有立體異構體(既作為純的各立體異構體制劑和每種的富集制劑)，和這類立體異構體的外消旋混合物以及可以按照本領域技術人員眾所周知的方法分離的各對映體。

在本發(fā)明的某些實施方案中，通式II的化合物選自








和
或其游離堿或其另一種藥學上可接受的鹽。

可以使用本領域技術人員公知的方法制備本發(fā)明的化合物。特別地，可以如實施例中的示例性反應所述制備具有通式II的化合物。

本發(fā)明的一個重要方面在于通式II的化合物可誘導細胞凋亡并且還強化誘導細胞凋亡作為對細胞凋亡誘導信號的反應。因此，關注這些化合物使細胞對細胞凋亡誘導物敏感，包括對這類誘導物產(chǎn)生抗性的細胞。本發(fā)明的IAP抑制劑可以用于誘導可以通過誘導細胞凋亡進行治療、改善或預防的任何疾病中的細胞凋亡。因此，本發(fā)明提供了靶向于特征為過度表達IAP蛋白的動物的組合物和方法。在某些實施方案中，所述的細胞(例如癌細胞)與非病理性樣品(例如非癌細胞)相比IAP蛋白的表達水平升高。在其它實施方案中，所述的細胞通過響應于抑制有效量的通式I化合物進行細胞凋亡程序和死亡而可操作地表現(xiàn)出IAP蛋白的表達水平升高，所述的反應至少部分因這類細胞中其存活對IAP蛋白功能的依賴性而發(fā)生。

在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及調節(jié)細胞凋亡相關的狀態(tài)，該狀態(tài)與一種或多種細胞凋亡調節(jié)劑有關。細胞凋亡調節(jié)劑的實例包括例如但不限于Fas/CD95、TRAMP、TNF RI、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、FADD、RIP、TNFα、Fas配體、TRAIL、TRAIL-RI或TRAIL-R2的抗體、Bcl-2、p53、BAX、BAD、Akt、CAD、PI3激酶、PP1和半胱天冬酶蛋白。還包括細胞凋亡的引發(fā)、決定和退化階段中涉及的其它試劑。細胞凋亡調節(jié)劑的實例包括其活性、存在或濃度改變可以調節(jié)受試者的細胞凋亡的試劑。優(yōu)選的細胞凋亡調節(jié)劑是細胞凋亡誘導物，例如TNF或TNF相關的配體，尤其是TRAMP配體、Fas/CD95配體、TNFR-1配體或TRAIL。

在某些實施方案中，本發(fā)明的組合物和方法用于治療動物(例如哺乳動物受試者，包括，但不限于人和獸類動物)中患病細胞、組織、器官或病理情況和/或疾病狀態(tài)。在這方面，各種疾病和病理情況易于使用本發(fā)明的方法和組合物進行治療或預防。這些疾病和情況的非限制性示例性明細包括，但不限于乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤、皮膚癌、胰腺癌、結腸癌、黑素瘤、惡性黑素瘤、卵巢癌、腦癌、原發(fā)性腦癌、頭-頸癌、神經(jīng)膠質瘤、成膠質細胞瘤、肝癌、膀胱癌、非-小細胞肺癌、頭或頸癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、小細胞肺癌、維爾姆斯腫瘤、宮頸癌、睪丸癌、膀胱癌、胰腺癌、胃癌、結腸癌、前列腺癌、泌尿生殖器癌、甲狀腺癌、食道癌、骨髓瘤、多發(fā)性骨髓瘤、腎上腺癌、腎細胞癌、子宮內(nèi)膜癌、腎上腺皮質癌、惡性胰腺胰島素瘤、惡性類癌瘤、絨毛膜癌、蕈樣真菌病、惡性血鈣過多、宮頸超常增生、白血病、急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性髓細胞性白血病、慢性粒細胞性白血病、急性粒細胞性白血病、毛細胞性白血病、成神經(jīng)細胞瘤、橫紋肌肉瘤、卡波西肉瘤、真性紅細胞增多、原發(fā)性血小板增多、何杰金病、非何杰金淋巴瘤、軟組織肉瘤、骨肉瘤、原發(fā)性巨球蛋白血癥和視網(wǎng)膜母細胞瘤等；T和B細胞介導的自身免疫??；炎性疾病；感染；過度增殖性疾??；AIDS；變性疾病、血管疾病等。在某些實施方案中，正治療的癌細胞為轉移性的。在其它實施方案中，正治療的癌細胞對抗癌劑有抗性。

在某些實施方案中，適合于用本發(fā)明組合物和方法治療的感染包括，但不限于因病毒、細菌、真菌、支原體、骯病毒等導致的感染。

本發(fā)明的某些實施方案提供了給予有效量的通式I化合物和至少一種額外的治療劑(包括，但不限于化療抗腫瘤藥、細胞凋亡調節(jié)劑、抗菌藥、抗病毒藥、抗真菌藥和消炎劑)和/或治療技術(例如外科手術和/或放療)的方法。

預計許多合適的抗癌藥可用于本發(fā)明方法。實際上，本發(fā)明關注，但不限于大量抗癌劑的施用，諸如誘導細胞凋亡的試劑；多核苷酸(例如反義，核酶，siRNA)；多肽類(例如酶和抗體)；生物模擬物(例如棉酚或BH3模擬物)；與Bcl-2族蛋白，例如Bax結合(例如寡聚化或復合)的試劑；生物堿類；烷化劑；抗腫瘤抗生素；抗代謝物；激素；鉑化合物；單克隆或多克隆抗體(例如與抗癌藥、毒素、防御素綴合的抗體)、毒素；放射性核素；生體應答修飾物(例如干擾素(例如IFN-α)和白細胞介素(例如IL-2))；過繼免疫治療劑；造血生長因子；誘導腫瘤細胞分化的試劑(例如全反式視黃酸)；基因療法試劑(例如反義療法試劑和核苷酸)；腫瘤疫苗；血管生成抑制劑；蛋白體抑制劑；NF-KB調節(jié)劑；抗-CDK化合物；HDAC抑制劑等。適合于與披露的化合物共同施用的化療化合物和抗癌療法的大量其它實例為本領域技術人員公知的。

在優(yōu)選的實施方案中，抗癌劑包括誘導或刺激細胞凋亡的試劑。誘導細胞凋亡的活性劑包括，但不限于放射(例如X-射線、γ射線、UV)；腫瘤壞死因子(TNF)相關的因子(例如，TNF族受體蛋白、TNF族配體、TRAIL、TRAIL-R1或TRAIL-R2的抗體)；激酶抑制劑(例如表皮生長因子受體(EGFR)激酶抑制劑、血管生長因子受體(VGFR)激酶抑制劑、成纖維細胞生長因子受體(FGFR)激酶抑制劑、血小板衍生生長因子受體(PDGFR)激酶抑制劑和Bcr-Abl激酶抑制劑(諸如GLEEVEC))；反義分子；抗體(例如HERCEPTIN、RITUXAN、ZEVALIN和AVASTIN)；抗雌激素藥(例如雷洛昔芬和他莫昔芬)；抗雄激素藥(例如氟他胺、比卡魯胺、非那雄胺、氨魯米特、酮康唑和皮質類固醇)；環(huán)加氧酶2(COX-2)抑制劑(例如塞來考昔、美洛昔康、NS-398和非類固醇抗炎藥(NSAID))；消炎藥(例如保泰松、DECADRON、DELTASONE、地塞米松、dexamethasone intensol、DEXONE、HEXADROL、羥氯喹、METICORTEN、ORADEXON、ORASONE、羥布宗、PEDIAPRED、保泰松、PLAQUENIL、潑尼松龍、潑尼松、PRELONE和TANDEARIL)；和癌癥化療藥(例如伊立替康(CAMPTOSAR)、CPT-11、氟達拉濱(FLUDARA)、達卡巴嗪(DTIC)、地塞米松、米托蒽醌、MYLOTARG、VP-16、順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、5-FU、多柔比星、吉西他濱、硼替佐米、吉非替尼、貝伐珠單抗、TAXOTERE或TAXOL)；細胞信號傳導分子；神經(jīng)酰胺類和細胞因子；星孢素等。

在其它實施方案中，本發(fā)明的組合物和方法提供了通式II的化合物和至少一種選自烷化劑、抗代謝物和天然產(chǎn)物(例如草藥和其它植物和/或動物衍生的化合物)的抗-過度增殖藥或抗腫瘤劑。

適用于本發(fā)明組合物和方法的烷化劑包括，但不限于1)氮芥類(例如氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、美法侖(L-沙可來新)；和苯丁酸氮芥)；2)氮丙啶類和甲基蜜胺類(例如六甲蜜胺和塞替派)；3)磺酸烷基酯類(例如白消安)；4)亞硝基脲類(例如卡莫司汀(BCNU)；洛莫司汀(CCNU)；司莫司汀(賽氮芥)；和鏈佐星(鏈唑霉素))；和5)三氮烯類(例如達卡巴嗪(DTIC；二甲基三嗪并咪唑甲酰胺)。

在某些實施方案中，適用于本發(fā)明組合物和方法的抗代謝物包括，但不限于1)葉酸類似物(例如甲氨蝶呤(氨甲蝶呤))；2)嘧啶類似物(例如氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶；5-FU)、氟尿苷(氟脫氧尿苷；FudR)和阿糖胞苷(阿糖胞苷))；和3)嘌呤類似物(例如巰嘌呤(6-巰嘌呤；6-MP)、硫鳥嘌呤(6-硫鳥嘌呤；TG)和噴司他丁(2′-脫氧柯福霉素))。

在其它實施方案中，適用于本發(fā)明組合物和方法的化療劑包括，但不限于1)長春花生物堿(例如長春堿(VLB)、長春新堿)；2)表鬼臼毒素(例如依托泊苷和替尼泊苷)；3)抗生素(例如更生霉素(放線菌素D)、柔紅霉素(道諾霉素；柔毛霉素)、多柔比星、博來霉素、普卡霉素(光輝霉素)和絲裂霉素(絲裂霉素C))；4)酶(例如L-天冬酰胺酶)；5)生物響應調節(jié)劑(例如干擾素-α)；6)鉑配位復合物(例如順鉑(順式-DDP)和卡鉑)；7)蒽二酮類(例如米托蒽醌)；8)取代的脲類(例如羥基脲)；9)甲基肼衍生物(例如丙卡巴肼(N-甲基肼；MIH))；10)腎上腺皮質抑制劑(例如米托坦(o，p′-DDD)和氨魯米特)；11)腎上腺皮質類固醇類(例如潑尼松)；12)黃體酮(例如己酸羥孕酮、醋酸甲羥孕酮和醋酸甲地孕酮)；13)雌激素(例如己烯雌酚和炔雌醇)；14)抗雌激素藥(例如他莫昔芬)；15)雄激素(例如丙酸睪酮和氟甲睪酮)；16)抗雄激素藥(例如氟他胺)；和17)促性腺激素釋放激素類似物(例如亮丙瑞林)。

常用于癌癥療法的任何溶瘤劑可應用于本發(fā)明的組合物和方法中。例如，美國食品與藥品監(jiān)督管理局維持了批準用于美國的溶瘤劑配方集。U.S.F.D.A.的國際合作機構維持了相似的配方集。表1中提供了批準用于美國的典型抗腫瘤藥的實例。本領域技術人員可以理解，對所有美國批準的化療藥所需的“產(chǎn)品標簽”描述了所列舉的活性劑被批準的適應征、給藥信息、毒性數(shù)據(jù)等。









抗癌劑還包括已經(jīng)確定具有抗癌劑活性但是目前沒有經(jīng)美國食品和藥物管理局或其它對應機構批準的或正在進行新用途評價的化合物。實例包括但不限于，3-AP、12-O-十四酰佛波醇(tetradecanoylphorbol)-13-乙酸鹽、17AAG、852A、ABI-007、ABR-217620、ABT-751、ADI-PEG 20、AE-941、AG-013736、AGRO100、丙氨菌素、AMG 706、抗體G250、坑瘤酮、AP23573、阿帕齊醌、APC8015、阿替莫德、ATN-161、阿曲生坦、阿扎胞苷、BB-10901、BCX-1777、貝伐珠單抗、BG00001、比卡魯胺、BMS247550、硼替佐米、苔蘚抑素-1、布舍瑞林、鈣三醇、CCI-779、CDB-2914、頭孢克肟、西妥昔單抗、CG0070、西侖吉肽、氯法拉濱、康普瑞汀A4磷酸鹽、CP-675，206、CP-724，714、CpG7909、姜黃素、地西他濱、DENSPM、度骨化醇、E7070、E7389、海鞘素743、乙法昔羅、依氟鳥氨酸、EKB-569、恩扎啕林、厄洛替尼、依昔舒林、芬維A胺、黃酮吡多、氟達拉濱、氟他胺、福莫司汀、FR901228、G17DT、加利昔單抗、吉非替尼、高金雀花堿、葡磷酰胺、GTI-2040、組氨瑞林、HKI-272、高粗榧堿、HSPPC-96、hu14.18-干擾白細胞素-2融合蛋白、HuMax-CD4、伊洛前列素、咪喹莫德、英利昔單抗、白介素-12、IPI-504、依羅夫文、依沙匹隆、拉帕替尼、來妥替尼、亮丙立德、LMB-9免疫毒素、氯那法尼、luniliximab、馬磷酰胺、MB07133、MDX-010、MLN2704、單克隆抗體3F8、單克隆抗體J591、莫特沙芬、MS-275、MVA-MUC1-IL2、尼魯米特、硝基喜樹堿、諾拉曲塞二鹽酸鹽、諾瓦得士、NS-9、O6-芐基鳥嘌呤、奧利美生鈉、ONYX-015、奧戈伏單抗、OSI-774、帕尼單抗、伯爾定、PD-0325901、培美曲塞、PHY906、吡格列酮、吡非尼酮、匹蒽醌、PS-341，PSC 833，PXD101，吡唑啉吖啶、R115777、RAD001、豹蛙酶、若貝霉素類似物、rhuAngiostatin蛋白、rhuMab 2C4、羅格列酮、盧比替康、S-1、S-8184、沙鉑、SB-、15992、SGN-0010、SGN-40、索拉非尼、SR31747A、ST1571、SU011248、N-(辛二?；?苯胺羥肟酸、蘇拉明、他波司他、他侖帕奈、他立喹達、坦羅莫司、TGFa-PE38免疫毒素、瑟利德米、胸腺法新、替匹法尼、替拉扎明、TLK286、曲貝替定、三甲曲沙葡糖醛酸脂、TroVax、UCN-1、丙戊酸、長春氟寧、VNP40101M、伏洛昔單抗、伏林司他、VX-680、ZD1839、ZD6474、齊留通和佐舒喹達三鹽酸鹽。

就抗癌劑和其它治療劑的更詳細描述而言，本領域技術人員可以參考任何數(shù)量的說明性手冊，包括，但不限于Physician′sDesk Reference以及Goodman和Gilman的＂Pharmaceutical Basis ofTherapeutics＂第10版Eds.Hardman et al.，2002。

本發(fā)明提供了施用通式II的化合物與放療的方法。本發(fā)明并不限于用于將治療劑量的放射傳遞給動物的類型、用量或遞送和給藥系統(tǒng)。例如，動物可以接受光子放療、粒子束放療、其它類型的放療及其組合。在某些實施方案中，使用線性加速器將放射遞送給動物。在還有的其它實施方案中，使用γ刀遞送放射。

放射源可以在動物的內(nèi)部或外部。外部放射治療最為常用并且包括使用例如線性加速器使高能輻射束通過皮膚定向于腫瘤部位。盡管射束局限于腫瘤部位，但是幾乎不可能避免接觸正常健康組織。然而，外放射通常為患者充分耐受。內(nèi)放射療法包括在體內(nèi)腫瘤部位處或接近腫瘤部位處植入輻射發(fā)射源，諸如珠、金屬線、丸粒、膠囊、顆粒等，包括使用特異性靶向癌細胞的遞送系統(tǒng)(例如使用與癌細胞結合配體結合的顆粒)。這類植入物可以在治療后除去或在體內(nèi)保持失活狀態(tài)。內(nèi)放射療法的類型包括，但不限于近距離放射療法、間質內(nèi)放射、腔內(nèi)放射、放射免疫療法等。

動物可以可選地接受放射致敏劑(例如甲硝唑、米索硝唑、動脈內(nèi)溴甙、靜脈內(nèi)碘苷(IudR)、硝基咪唑、5-取代的-4-硝基咪唑類、2H-異吲哚二酮類、[[(2-溴乙基)-氨基]甲基]-硝基-1H-咪唑-1-乙醇、硝基苯胺衍生物、DNA-親合性低氧選擇性細胞毒素、鹵化DNA配體、1，2，4苯并三嗪氧化物、2-硝基咪唑衍生物、含氟的硝基吡咯衍生物、苯甲酰胺、煙酰胺、吖啶-嵌入劑、5-硫代四唑衍生物、3-硝基-1，2，4-三唑、4，5-二硝基咪唑衍生物、羥基化texaphrins、順鉑、絲裂霉素、tiripazamine、亞硝基脲、巰基嘌呤、氨甲蝶呤、氟尿嘧啶、博來霉素、長春新堿、卡鉑、表柔比星、多柔比星、環(huán)磷酰胺、長春地辛、依托泊苷、紫杉醇、熱(過熱)等)、輻射防護劑(例如半胱胺、氨基烷基二氫硫代磷酸酯、氨磷汀(WR2721)、IL-1、IL-6等)。放射致敏劑促進殺死腫瘤細胞。輻射防護劑防止健康組織受到放射的有害作用。

可以對患者施用任意類型的放射，只要患者耐受放射劑量而沒有不可接受的負面副作用即可。合適類型的放療包括例如，電離(電磁)放療(例如X-射線或γ射線)或粒子束放療(例如高線性能量放射)。將電離放射定義為包括具有產(chǎn)生電離，即得到或失去電子的足夠能量的粒子或光子的放射(例如，如US 5,770,581中所述，將該文獻的全部內(nèi)容引入本文作為參考)。放射的作用至少部分可以受到臨床醫(yī)師控制。為最大限度地接觸靶細胞并且降低毒性，優(yōu)選將放射劑量分次給予。

對動物施用的總放射劑量優(yōu)選約為.01戈瑞(Gy)-約100Gy。更優(yōu)選，在治療期過程中施用約10Gy-約65Gy(例如約15Gy，20Gy，25Gy，30Gy，35Gy，40Gy，45Gy，50Gy，55Gy或60Gy)。盡管在某些實施方案中，可以在1天過程中施用完整劑量的放射，但是理想的是將總劑量分次并且在幾天內(nèi)給予。理想的是在至少約3天過程中給予放療，例如至少5、7、10、14、17、21、25、28、32、35、38、42、46、52或56天(約1-8周)。因此，每日放射劑量包括約1-5Gy(例如約1Gy，1.5Gy，1.8Gy，2Gy，2.5Gy，2.8Gy，3Gy，3.2Gy，3.5Gy，3.8Gy，4Gy，4.2Gy或4.5Gy)，優(yōu)選1-2Gy(例如1.5-2Gy)。每日放射劑量應足以誘導破壞被靶向的細胞。如果延長超過一定期限，那么并不優(yōu)選每天給予放射，從而使動物休息并且實現(xiàn)該療法的作用。例如，對每周治療而言，理想的是連續(xù)5天給予放射，并且有2天不給予，由此每周有2天休息。然而，可以1天/周，2天/周，3天/周，4天/周，5天/周，6天/周或所有7天/周給予放射，這取決于動物的反應性和任何可能的副作用。可以在治療期中的任意時間時啟動放療。優(yōu)選在第1周或第2周啟動放射并且在該治療期的剩余期限內(nèi)給予。例如，在包括6周治療例如實體瘤的治療期間，在第1-6周或第2-6周內(nèi)給予放射?；蛘?，在包括5周治療期的第1-5周或第2-5周內(nèi)給予放射。然而，本發(fā)明并不限于這些示例性的放療施用方案。

抗菌治療劑也可以用作本發(fā)明中的治療劑。可以使用可以殺傷、抑制或者減弱微生物功能的任意活性劑以及預計具有這類活性的任意試劑?？咕鷦┌ǎ幌抻谔烊缓秃铣傻目股?、抗體、抑制蛋白(例如防御素)、反義核酸、膜破裂劑等，可以單獨使用或以組合方式使用。實際上，可以使用任何類型的抗生素，包括，但不限于抗細菌劑、抗病毒劑、抗真菌劑等。

在本發(fā)明的某些實施方案中，在下列條件中的一種或多種下對動物施用通式II的化合物和一種或多種治療劑或抗癌劑以不同的周期性；以不同的期限；以不同的濃度；通過不同的給藥途徑等。在某些實施方案中，在施用治療劑或抗癌劑之前施用所述的化合物，例如在施用抗癌藥之前0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小時，1、2、3、4、5或6天，1、2、3或4周施用該化合物。在某些實施方案中，在施用治療劑或抗癌劑之后施用所述的化合物，例如在施用抗癌藥之后0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小時，1、2、3、4、5或6天，1、2、3或4周施用該化合物。在某些實施方案中，同時施用所述的化合物和治療劑或抗癌劑，但使用不同的日程表，例如每日施用所述的化合物，而每周1次、每2周1次、每3周1次或每4周1次施用所述的治療劑或抗癌劑。在其它實施方案中，每周1次施用所述的化合物，而每日、每周1次、每2周1次、每3周1次或每4周1次施用所述的治療劑或抗癌劑。

本發(fā)明范圍內(nèi)的組合物包括以有效實現(xiàn)其指定目的的量包含本發(fā)明化合物的所有組合物。盡管個體需要可變，但是確定每種成分的有效量的最佳范圍屬于本領域技術人員的范圍。一般來說，對哺乳動物，例如人而言，口服給藥0.0025-50mg/kg/天為對誘導細胞凋亡有反應性的疾病而治療的哺乳動物體重的劑量的化合物或等量的其藥物上可接受的鹽。優(yōu)選口服給藥約0.01-約25mg/kg以治療、改善或預防這類疾病。就肌內(nèi)注射而言，劑量一般為口服劑量的約一半。例如，合適的肌內(nèi)劑量為約0.0025-約25mg/kg，最優(yōu)選約0.01-約5mg/kg。

單位口服劑量可以包括約0.01-約1000mg，優(yōu)選約0.1-約100mg的化合物。每天可以將單位劑量作為一片或多片片劑或者一粒或多粒膠囊給予一次或多次，所述的片劑或膠囊各自含有約0.1-約10，適宜地是約0.25-50mg化合物或其溶劑合物。

在局部用制劑中，化合物的存在濃度約為0.01-100mg/克載體。在優(yōu)選的實施方案中，化合物的存在濃度約為0.07-1.0mg/ml，更優(yōu)選約0.1-0.5mg/ml，最優(yōu)選約0.4mg/ml。

除將化合物作為原料化學品給藥外，還可以將本發(fā)明的化合物作為藥物制劑的組成部分施用，所述的藥物制劑含有合適的藥物上可接受的載體，包括有利于將所述化合物加工成可以在藥學上使用的制劑的賦形劑和助劑。優(yōu)選所述的制劑含有約0.01-99％，優(yōu)選約0.25-75％的活性化合物與賦形劑，特別是那些可以口服或局部給藥并且可以用于優(yōu)選給藥類型的制劑，例如片劑、錠劑、緩釋錠劑和膠囊、口腔清洗劑和口腔洗劑、凝膠、液體混懸液、洗發(fā)劑、發(fā)膠、洗發(fā)香波；還有可以通過直腸給藥的制劑，諸如栓劑；以及通過靜脈內(nèi)注入、注射、局部或口服給藥的合適的溶液。

可以將本發(fā)明的藥物組合物對可以經(jīng)歷本發(fā)明化合物有益作用的任意動物給藥。在這類動物中位于最前列的是哺乳動物，例如人，不過，本發(fā)明并不限于此。其它動物包括獸類動物(牛、綿羊、豬、馬、狗、貓等)。

可以通過實現(xiàn)指定目的的任意方式施用所述的化合物及其藥物組合物。例如，可以通過非腸道、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、透皮、口含、鞘內(nèi)、顱內(nèi)、鼻內(nèi)或局部途徑給藥。或者可以通過口服途徑給藥，或同時進行口服給藥。給藥劑量取決于接受者的年齡、健康情況和體重、并行治療的種類(如果有的話)、治療頻率和所需效果的性質。

按照自身公知的方式，例如通過常規(guī)的混合、制粒、制錠、溶解或凍干方法制備本發(fā)明的藥物制劑。因此，可以通過下列步驟獲得口服使用的藥物制劑將活性化合物與固體賦形劑合并，可選地研磨所得混合物并且如果需要或必要，在添加合適的助劑后加工顆?；旌衔铮瑥亩玫狡净蝈V芯。

具體來說，合適的賦形劑為填充劑，例如糖類，例如乳糖或蔗糖、甘露糖醇或山梨醇；纖維素制品和/或磷酸鈣，例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣；以及粘結劑，例如淀粉糊，例如使用玉米淀粉、小麥淀粉、稻淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可以加入崩解劑，例如上述淀粉和羧甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或其鹽，例如藻膠鈉。助劑尤其是流動調節(jié)劑和潤滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸或其鹽，例如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣，和/或聚乙二醇。如果需要，可以給錠芯包上耐胃液的合適的包衣材料。為了這一目的，可以使用濃糖溶液，它可以可選地含有阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液和合適的有機溶劑或溶劑混合物。為了生產(chǎn)耐胃液的包衣材料，使用合適的纖維素制品，例如鄰苯二酸乙酰纖維素或鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素的溶液。例如，為了鑒別或為了表征活性化合物劑量的組合，可以向片劑或錠劑包衣層中加入染料或色素。

可以口服使用的其它藥物制劑包括由明膠制成的推入-配合式膠囊以及由明膠和增塑劑諸如甘油或山梨醇制成的密封軟膠囊。推入-配合式膠囊可以含有顆粒形式的活性化合物，所述的顆粒中可以混合有諸如乳糖這類填充劑、例如淀粉這類粘合劑和/或諸如滑石粉或硬脂酸鎂這類潤滑劑以及任選地，穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，優(yōu)選將活性化合物溶于或懸浮于合適的液體中，例如脂肪油或液體石蠟。此外，可以加入穩(wěn)定劑。

可以通過直腸使用的可能的藥物制劑包括例如由一種或多種活性化合物與栓劑基質的組合組成的栓劑。合適的栓劑基質例如為天然或合成的甘油三酯類或鏈烷烴類。此外，還能夠使用由活性化合物與基質組合組成的直腸用膠囊?？赡艿幕|材料包括例如液體甘油三酯類、聚乙二醇類或鏈烷烴類。

用于非腸道給藥的合適的制劑包括水溶性形式的活性化合物，例如水溶性鹽和堿性溶液的水溶液。此外，可以將活性化合物的混懸液以合適的油性注射混懸液形式給藥。合適的親脂性溶劑或媒介物包括脂肪油，例如芝麻油；或合成的脂肪酸酯類，例如油酸乙酯或甘油三酯類或聚乙二醇-400。含水的注射混懸液可以含有增加該混懸液粘度的物質，包括例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/或葡聚糖。該混懸液中還可以任選地含有穩(wěn)定劑。

優(yōu)選通過選擇合適的載體將本發(fā)明的局部用組合物配制成油劑、霜劑、洗劑、軟膏劑等。合適的載體包括植物油或礦物油、白凡士林(白軟石蠟)、支鏈脂肪或油、動物脂肪和高分子量醇(大于C12)。優(yōu)選的載體為那些活性組分在其中可溶的載體。還可以包括乳化劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑和抗氧化劑，并且如果需要，還可以包括賦予顏色或香味的試劑。另外，透皮促進劑可以用于這些局部用制劑中。這類促進劑的實例可以在美國專利US 3,989,816和US 4,444,762中找到。

優(yōu)選由礦物油、自乳化蜂蠟和水的混合物配制霜劑，在該混合物中混合了混合溶于少量油諸如杏仁油的活性組分。這類霜劑的典型實例為一種包括約40份水、約20份蜂蠟、約40份礦物油和約1份杏仁油的霜劑。

可以通過將活性組分在植物油諸如杏仁油中的溶液與溫熱的軟石蠟混合并且使該混合物冷卻而配制軟膏劑。這類軟膏劑的典型實例為一種包括按重量計約30％杏仁油和約70％白軟石蠟的軟膏劑。

可以通過將活性組分溶于合適的高分子量醇例如丙二醇或聚乙二醇而便利地制備洗劑。

下列實施例用于解釋本發(fā)明的方法和組合物，而非起限定作用。在臨床療法中通常遇到并且對本領域技術人員顯而易見的對條件和參數(shù)的其它合適的修改和改變屬于本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)。
實施例1 二價Smac模擬物的合成
一般方法在300MHz的質子頻率下獲得NMR光譜。用Me4Si(0.00ppm)、CHCl3(7.26ppm)、CD2HOD(3.31ppm)或DHO(04.79ppm)作為內(nèi)標物報道1H化學位移。用CDCl3(77.00ppm)、CD3OD(49.00ppm)或1，4-二氧雜環(huán)己烷(67.16ppm)作為內(nèi)標物報道13C化學位移。在室溫下測量旋光度。
一般程序A(縮合)
在0℃下，在攪拌下向兩種底物在CH2Cl2(20mg/mL，對于小底物)中的溶液中添加EDC(1.1當量/氨基)、HOBt(1.1當量/氨基)和N，N-二異丙基乙基胺(4當量/氨基)。在室溫下攪拌該混合物八小時然后濃縮。通過層析純化該殘余物而獲得產(chǎn)物。
一般程序B(點擊化學)
向CuSO4的溶液(10mg/mL)中添加L-抗壞血酸(+)-鈉(2當量)。震蕩該混合物直到顏色變成亮黃。向該兩種底物在乙腈或2-甲基丙醇(20mg/mL，對于小底物)的溶液中添加CuSO4-L-抗壞血酸鈉(0.1當量CuSO4/當量該小底物)的預制得的混合物。在室溫下攪拌該混合物一整夜然后用二氯甲烷萃取三時間。用鹽水洗滌合并的有機層，在Na2SO4上干燥并濃縮。通過層析純化該殘余物而獲得產(chǎn)物。
一般程序C(Boc的去保護)
向底物在甲醇中的溶液(20mg/mL)中添加HCl在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的溶液(4M，10-20當量/Boc)。在室溫下攪拌該溶液一整夜然后濃縮而獲得產(chǎn)物。
實施例2 DQ-24、SH-143、SH-155和SH-142的合成
根據(jù)方案I合成化合物DQ-24、SH-143、SH-155和SH-142。
方案I
試劑和條件(a)i.三氟乙酸酐，Et3N，CH2Cl2，rt；ii.NaHCO3，MeOH，95％；(b)NaH，炔丙基溴，DMF，92％；(c)i.MsCl，Et3N；ii.NaN3，DMF，100℃，85％經(jīng)過兩步；(d)i.3，CuSO4，(+)-L-抗壞血酸鈉，CH3CN-H2O 3:1；ii.2N LiOH，1，4-二氧雜環(huán)己烷-H2O 1:1，74％經(jīng)過兩步；(e)i.NaH，芐基2-溴代乙基醚；ii.10％ Pd-C，H2，MeOH；iii.MsCl，Et3N；iv.NaN3，DMF，65％，經(jīng)過四步；(f)i.3，CuSO4，(+)-L-抗壞血酸鈉，CH3CN-H2O 3:1；ii.2N LiOH，1，4-二氧雜環(huán)己烷-H2O 1:1，72％經(jīng)過兩步；(g)炔丙基醚(5eq)，CuSO4，(+)-L-抗壞血酸鈉，CH3CN-H2O3:1，69％；(h)i.8，CuSO4，(+)-L-抗壞血酸鈉，CH3CN-H2O 3:1；ii.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，MeOH，95％；(i)NaH，炔丙基溴，DMF，82％；(j)i.8(2.2eq)，CuSO4，(+)-L-抗壞血酸鈉，CH3CN-H2O 3:1；ii.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，MeOH，62％經(jīng)過兩步。

用三氟乙酸酐選擇性保護L-苯甘氨醇1中的氨基獲得醇2。用溴丙塊烷基化2產(chǎn)生炔烴3。2與甲烷磺酰氯反應接著用NaN3置換所得的甲磺酸酯提供疊氮化物4。3和4在CuSO4-(+)-鈉-L-抗壞血酸鹽下的環(huán)加成接著除去三氟乙?；峁┒?。

用芐基2-溴代甲基醚烷基化2接著使芐基保護基水解提供醇。該醇與甲烷磺酰氯反應接著用NaN3置換所得的甲磺酸酯提供疊氮化物6。6與3在CuSO4-(+)-鈉-L-抗壞血酸鹽下的環(huán)加成接著除去三氟乙?；峁┒?。

根據(jù)我們預先報道的方法(Sun et al.，TetrahedronLetters，467015(2005))合成化合物8?；衔?與過量炔丙基醚(5-10當量)的環(huán)加成產(chǎn)生炔烴9。9和8在CuSO4-(+)-鈉-L-抗壞血酸鹽下的環(huán)加成接著除去Boc保護基提供二胺10。

根據(jù)我們預先報道的方法(Sun et al.，TetrahedronLetters，467015(2005))合成化合物11。用溴丙塊烷基化11產(chǎn)生炔烴12。2.2當量8與1當量12在CuSO4-(+)-鈉-L-抗壞血酸鹽的催化下的環(huán)加成接著除去Boc保護基提供二胺13。
方案II
試劑和條件(a)10％ Pd-C，MeOH，H2，100％；(b)i.二胺，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；ii.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4NHCl，MeOH；iii.L-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；iv.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl。

根據(jù)文獻報道的方法(Duggan et al.，Org.Biomol.Chem.，32287(2005))(方案II)合成化合物14。化合物14中C-C雙鍵的縮減和芐基酯的水解產(chǎn)生酸15。2.2當量15分別與上述二胺縮合接著除去Boc保護基獲得四種銨鹽。這些鹽分別與L-N-Boc-N-甲基丙氨酸的縮合接著Boc保護基的去保護提供二價Smac模擬物DQ-24、SH-143、SH-142和SH-155。每種化合物的合成方案的效率在表2中示出。
表2

1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.50(s，1H)，7.38-7.20(m，3H)，7.28-7.20(m，2H)，7.26-7.05(m，5H)，4.98-4.75(m，2H)，4.23(s，2H)，4.36(m，2H)，3.50(m，2H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 143.78，133.54，132.53，130.26，129.97，129.70，129.62，127.47，127.10，126.40，69.89，63.23，54.67，54.60，52.40。


1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.59(s，1H)，7.32-7.22(m，3H)，7.22-7.13(m，5H)，7.12-7.05(m，2H)，4.55-4.29(m，6H)，3.85-3.75(m，1H)，3.75-3.56(m，5H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ143.51，133.88，133.63，129.83，129.61，129.52，129.38，127.36，127.32，125.59，70.89，70.20，69.25，63.42，54.62，54.39，50.49。


1H NMR(300HMz，CDCl3)δ 7.55(s，1H)，7.40-7.08(m，9H)，5.90(brs，1H)，5.24(brs，1H)，4.74(s，2H)，4.34(t，J＝7.1Hz，2H)，4.23(d，J＝2.4Hz，1H)，2.96(t，J＝7.3Hz，2H)，2.49(t，J＝2.4Hz，1H)，2.22(m，2H)，1.43(brs，9H)；13C NMR(75HMz，CDCl3)δ 154.93，144.26，141.98，140.15，139.04，128.54，128.50，127.36，127.22，127.07，122.56，79.67，79.16，74.89，62.91，58.06，57.37，49.37，31.94，31.44，28.25。



1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.52(s，2H)，7.38-7.12(m，10H)，7.08-6.99(m，4H)，6.92-6.79(m，4H)，5.42(s，2H)，4.40(s，4H)，4.02(m，4H)，2.18(m，4H)，1.78(m，4H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ144.10，139.59，137.31，132.04，131.80，131.72，129.70，129.64，127.47，65.29，60.60，52.51，34.08，33.18。


1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.40-7.18(m，5H)，7.15(brs，4H)，6.45(brs，1H)，4.24(d，J＝2.4Hz，2H)，3.90(d，J＝1.9Hz，2H)，3.55(t，J＝6.3Hz，2H)，2.72(dd，J＝8.9，7.4Hz，2H)，2.77(t，J＝2.4Hz，1H)，2.04(t，J＝1.9Hz，1H)，1.92(m，2H)，1.43(brs，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 155.17，140.92，139.85，136.99，128.76，128.53，128.40，128.22，127.22，80.68，80.58，79.86，74.19，70.26，69.16，58.01，34.75，31.79，30.99，28.23。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.50(s，1H)，7.33(s，1H)，7.23-7.03(m，17H)，6.99-6.92(m，6H)，6.80-6.68(m，4H)，5.38(s，1H)，5.34(s，1H)，5.10(s，1H)，4.08(s，2H)，4.08(t，J＝6.8Hz，1H)，3.99(s，2H)，3.92(t，J＝6.8Hz，2H)，3.02(t，J＝6.2Hz，2H)，2.30(t，J＝7.3Hz，2H)，2.17(t，J＝7.3Hz，2H)，2.11(t，J＝7.3Hz，2H)，1.89-1.80(m，2H)，1.78-1.62(m，2H)，1.48-1.35(m，2H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 163.46，162.99，144.04，143.16，141.81，141.56，137.61，137.05，134.70，129.75，129.64，129.57，129.54，129.41，129.28，127.64，127.45，127.28，127.16，126.49，125.00，118.54，114.67，68.74，65.33，62.55，58.06，50.20，49.98，40.52，31.70，31.60，30.98，30.67，30.42，29.96。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.77(s，1H)，7.78-7.21(m，10H)，5.32(m，1H)，4.91(m，1H)，4.75-4.56(m，4H)，4.50(s，2H)，4.33(m，1H)，4.17(m，3H)，3.79(m，2H)，3.60(m，2H)，2.55(s，3H)，2.53(s，3H)，2.25-1.80(m，4H)，1.79-1.61(m，7H)，1.60-1.45(m，9H)，1.40-1.38(m，4H)，1.37(d，J＝7.5Hz，3H)，1.33(d，J＝7.2Hz，3H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 173.82，173.65，172.34，172.29，144.94，138.64，137.46，129.41，129.25，128.87，128.23，126.91，126.88，125.73，72.14，63.14，62.15，61.16，60.96，57.28，54.14，53.64，53.34，51.10，35.94，32.94，32.33，31.31，27.95，25.86，21.99，15.60。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.50(s，1H)，7.30-7.08(m，10H)，4.95-4.80(m，3H)，4.75(m，1H)，4.47(s，2H)，4.39(m，2H)，4.32-4.10(m，4H)，4.35-4.08(m，4H)，3.66-3.50(m，4H)，2.55(s，6H)，2.22-1.43(m，24H)，1.39(m，6H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 173.71，172.30，169.52，143.92，138.73，129.07，128.18，126.96，125.53，72.87，72.32，68.99，63.36，62.21，62.14，61.05，57.20，53.40，53.24，51.14，50.42，35.96，32.99，32.32，31.32，27.89，25.08，21.94，15.63。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.29(s，2H)，7.10-6.92(m，10H)，6.85(d，J＝8.0Hz，4H)，6.58(d，J＝8.0Hz，4H)，5.78(s，2H)，4.65(m，2H)，4.38(s，4H)，4.22(m，2H)，4.08(m，2H)，3.95-3.73(m，6H)，2.55(s，6H)，2.21-1.28(m，36H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 179.33，172.64，172.07，144.32，141.56，140.08，139.74，129.15，127.99，127.69，127.53，124.85，63.13，62.04，61.01，57.48，57.30，51.12，49.98，36.03，33.27，32.47，31.77，31.44，31.22，27.87，25.25，21.99，15.78。
SH-142(游離胺)

1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.92(brd，J＝8.4Hz，2H)，7.82(brd，J＝8.4Hz，2H)，7.49(s，1H)，7.45-7.06(m，28H)，6.21(s，1H)，6.19(s，1H)，4.90(m，2H)，4.85(s，1H)，4.75(m，2H)，4.62(s，2H)，4.33(t，J＝7.1Hz，4H)，4.20(m，2H)，3.82(s，2H)，3.49(t，J＝7.1Hz，2H)，3.06(m，2H)，2.70-2.55(m，8H)，2.38(s，6H)，2.30-1.35(m，28H)，1.30(d，J＝6.9Hz，6H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 174.16，172.05，169.69，145.37，141.64，140.60，139.70，139.15，139.11，128.60，128.56，128.50，127.59，127.47，127.32，127.29，127.27，127.02，122.22，121.52，69.87，66.39，64.35，60.15，59.75，59.18，56.78，53.41，49.41，49.26，42.65，36.71，35.97，35.12，32.03，31.59，31.55，31.09，24.91，24.06，23.20，19.44。
實施例3 SH-156、SH-158、SH-159、SH-164、SH-165、SH-166和SH-167的合成
根據(jù)方案III合成化合物SH-156、SH-158、SH-159、SH-164、SH-165、SH-166和SH-167。
方案III
試劑和條件(a)i.17，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；ii.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，MeOH；iii.L-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，CH2Cl2，78％經(jīng)過三步；(b)i.二疊氮化物，CuSO4，(+)-L-抗壞血酸鈉，t-BuOH-H2O 3:1；ii.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4NHCl，MeOH。

根據(jù)文獻報道的方法由化合物16制備手性胺17[Messina et al.，J.Org.Chem.，643767(1999)]。酸15與手性胺17的縮合接著用HCl在甲醇中去保護Boc保護基產(chǎn)生銨鹽。該鹽與L-N-Boc-N-甲基丙氨酸的縮合提供中間體18。18與分別相應的二疊氮化物在CuSO4-(+)-鈉-L-抗壞血酸鹽的催化下環(huán)加成接著Boc保護基的去保護獲得設計的二價Smac模擬物SH-156、SH-158、SH-159、SH-164、SH-165、SH-166和SH-167。每種化合物的合成方案的效率在表3中示出。
表3

1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.75(brd，J＝8.5Hz，1H)，7.50-7.44(m，2H)，7.38-7.23(m，3H)，6.90(brs，1H)，5.95(dd，J＝8.5，2.4Hz，1H)，4.80(m，1H)，4.64(dd，J＝8.4，6.2Hz，1H)，4.60(brm，1H)，4.15(m，1H)，2.88(s，3H)，2.62(m，1H)，2.53(d，J＝2.4Hz，1H)，2.20-1.70(m，5H)，1.51(brs，9H)，1.56-1.05(m，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 171.99，170.95，169.73，138.96，129.03，128.55，127.53，82.13，73.25，60.03，59.47，50.32，45.21，36.94，36.30，32.36，30.48，28.80，25.29，24.42，23.45，14.16。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.58(s，2H)，7.29-7.13(m，10H)，6.08(s，2H)，4.70(m，2H)，4.38(m，4H)，4.27(m，2H)，4.22(m，2H)，3.85(m，2H)，3.73(m，4H)，3.32(m，4H)，3.25(m，4H)，2.58(s，6H)，2.25-1.48(m，22H)，1.40(d，J＝7.0Hz，6H)，1.39(m，2H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 173.36，172.32，169.56，148.12，139.21，129.32，128.54，127.40，124.51，69.98，69.75，68.97，62.07，61.07，57.20，51.13，50.46，50.41，35.94，33.01，32.35，31.31，27.81，25.07，21.92，15.63。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.56(s，2H)，7.29-7.13(m，10H)，6.05(s，2H)，4.70(m，2H)，4.38-4.14(m，8H)，3.85(m，2H)，3.63(m，4H)，3.35(s，4H)，2.55(s，6H)，2.22-1.45(m，22H)，1.42(d，J＝7.1Hz，6H)，1.40(m，2H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 173.31，172.28，169.54，148.15，139.23，129.30，128.53，127.38，124.45，69.85，68.90，62.05，61.05，57.20，51.12，50.39，35.93，33.03，32.34，31.32，27.78，25.07，21.93，15.63。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.51(s，2H)，7.28-7.04(m，10H)，6.04(s，2H)，4.70(m，2H)，4.39-4.15(m，8H)，3.82(m，2H)，3.70(m，4H)，2.56(s，6H)，2.20-1.45(m，22H)，1.40(d，J＝6.9Hz，6H)，1.38(m，2H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 173.28，172.22，169.52，148.14，139.30，129.31，128.48，127.33，124.36，68.99，62.04，61.06，57.21，51.10，50.42，50.35，35.93，33.06，32.35，31.32，27.81，25.09，21.93，15.64。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.40(s，2H)，7.15-6.85(m，10H)，6.65(s，4H)，6.08(s，2H)，4.65(m，2H)，4.32(m，2H)，4.08(m，2H)，3.92-3.74(m，6H)，2.84(m，4H)，2.54(s，6H)，2.28-1.04(m，38H)；13CNMR(75MHz，D2O)δ 172.24，171.83，169.34，148.50，139.56，139.41，129.07，128.53，127.43，122.92，61.70，60.72，57.20，51.23，50.86，50.15，36.08，34.96，34.64，31.34，29.61，28.63，28.57，28.20，27.60，25.20，15.71。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.55(s，2H)，7.19-7.05(m，10H)，6.85(s，4H)，5.98(s，2H)，5.15(s，4H)，4.65(m，2H)，4.25(t，J＝7.2Hz，2H)，4.10(m，2H)，3.82(m，2H)，2.54(s，6H)，2.12-1.20(m，30H)；13CNMR(75MHz，D2O)δ 173.04，172.16，169.49，148.55，139.08，135.38，129.27，128.82，128.51，127.40，123.90，62.92，60.92，57.19，53.62，51.05，50.39，35.88，33.05，32.28，31.32，27.66，25.06，21.91，15.64。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.59(s，2H)，7.28-7.10(m，10H)，6.02(s，2H)，4.65(m，2H)，4.29(m，2H)，4.22-4.08(m，6H)，3.82(m，2H)，2.53(s，6H)，2.20-1.42(m，26H)，1.40(d，J＝7.1Hz，6H)，1.35(m，2H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 173.35，172.29，169.53，148.20，139.07，129.31，128.54，127.36，124.06，62.05，61.03，57.19，51.11，50.32，50.05，35.92，33.02，32.33，31.31，27.76，26.68，25.06，21.93，15.63。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.62(s，2H)，7.28-7.12(m，10H)，6.07(s，2H)，4.65(m，2H)，4.30(t，J＝8.8Hz，2H)，4.25-4.10(m，6H)，3.84(m，2H)，2.55(s，6H)，2.23-1.95(m，4H)，1.95-1.45(m，22H)，1.40(d，J＝7.0Hz，6H)，1.35(m，2H)，1.05-0.85(m，8H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 173.33，172.28，169.55，148.22，139.18，129.30，128.54，127.43，123.96，62.04，61.02，57.18，51.10，50.72，50.44，35.94，33.03，32.34，31.32，29.35，27.86，25.40，25.09，21.90，15.64。
實施例4 SH-153和SH-172的合成
根據(jù)方案IV和V合成化合物SH-153和SH-172。
方案IV
試劑和條件(a)9-BBN，THF，然后H2O2(在水中35％)，3N NaOH；(b)戴斯-馬丁氧化劑(Dess-Martin periodinane)，CH2Cl2，對20的產(chǎn)率為33％，對21的產(chǎn)率為62％；(c)戴斯-馬丁氧化劑，CH2Cl2，96％；(d)NaBH3CN，MeOH，H2SO4(cata.)，94％。

化合物14中的C-C雙鍵通過用9-BBN處理而硼氫化接著通過堿性H2O2氧化所得的硼烷獲得四種醇的混合物?？梢酝ㄟ^層析將醇19與其它三種異構體分離并通過X射線分析確認它的結構。通過戴斯-馬丁氧化劑氧化其它三種異構體的混合物產(chǎn)生兩種酮20和21，它們可以通過層析分離。在催化量H2SO4存在下通過NaBH3CN還原酮20提供為單一異構體的醇22。通過戴斯-馬丁氧化劑氧化醇19獲得酮20，所以也確認醇22的結構。
方案V
試劑和條件(a)i.10％，Pd-C，H2，MeOH；ii.(R)-(-)-1，2，3，4-四氫-1-萘胺，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；iii.MsCl，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；iv.NaN3，DMF；(b)炔丙基醚(5eq)，CuSO4，(+)-L-抗壞血酸鈉，AcCN:t-BuOH:H2O，2:2:1，rt；(c)23或24，CuSO4，(+)-L-抗壞血酸鈉，t-BuOH:H2O，1:1，rt；(d)i.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，MeOH；ii.L-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；iii.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，MeOH。

19和22中的芐基酯的水解接著所得的酸與(R)-(-)-1，2，3，4-四氫-1-萘胺縮合產(chǎn)生兩種酰胺(方案V)。這兩種酰胺與甲烷磺酰氯反應接著用NaN3置換所得的兩種甲磺酸酯提供兩種疊氮化物23和24。這兩種疊氮化物與過量炔丙基醚在CuSO4-(+)-鈉-L-抗壞血酸催化下的環(huán)加成獲得兩種炔烴25和26。23和24分別與這兩種炔烴的環(huán)加成提供化合物27和28。這兩種化合物中的Boc保護基的除去接著與L-N-Boc-N-甲基丙氨酸縮合產(chǎn)生兩種酰胺。這兩種酰胺中Boc保護基的除去分別獲得SH-153和SH-172。


向化合物14(1.25g，3mmol)在50mL干THF中的溶液中添加9mL 9-BBN溶液(0.5M，在THF中，4.5mmol)。在回流該溶液12h之后，在0℃下逐滴添加1.5mL 3M NaOH溶液和2mL H2O2溶液(35％，在水中)。在回暖到室溫并攪拌2h之后，用乙酸乙酯萃取該混合物三次。在Na2SO4上干燥合并的有機層然后濃縮。通過層析純化殘余物而獲得化合物19(330mg，25％)和三種其它異構體的混合物(580mg，45％)。

化合物19的化學數(shù)據(jù)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.40-7.28(m，5H)，5.43(brd，J＝7.8Hz，1H)，5.28，5.18(ABq，J＝Hz，2H)，4.67(t，J＝8.4Hz，1H)，4.65(m，1H)，4.20(m，1H)，3.96(m，1H)，2.45-1.60(m，10H)，1.38(brs，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 172.38，170.83，155.13，135.39，128.58，128.40，128.34，79.70，70.63，67.14，60.13，56.16，50.70，45.22，32.67，31.70，28.35，27.34。


在室溫下向上面獲得的三種異構體的混合物(570mg，1.3mmol)在15mL CH2Cl2中的溶液中添加戴斯-馬丁氧化劑(660mmol，1.56mmol)。在相同溫下攪拌該混合物2h然后濃縮。通過層析純化該殘余物而獲得化合物20(160mg，28％)和21(330mg，58％)?？梢园聪嗤椒▽⒒衔?9氧化成化合物20。

化合物20的化學數(shù)據(jù)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.40-7.28(m，5H)，5.42(brd，J＝8.2Hz，1H)，5.28，5.18(ABq，J＝12.2Hz，2H)，4.62(t，J＝8.4Hz，1H)，4.37(m，1H)，3.13(m，1H)，3.02(t，1H)，2.50-1.98(m，8H)，1.83(m，1H)，1.60(m，1H)，1.38(brs，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 211.37，172.20，170.94，154.92，135.23，128.56，128.41，128.22，79.81，67.17，60.53，56.06，53.39，52.88，36.79，32.36，30.18，28.22，27.00。

化合物21的化學數(shù)據(jù)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.40-7.20(m，5H)，5.49(brd，J＝7.7Hz，1H)，5.17(s，2H)，5.09(m，1H)，4.52(t，J＝8.5Hz，1H)，4.22(m，1H)，3.08(dd，J＝12.7，4.5Hz，1H)，2.92(m，1H)，2.60(m，2H)，2.36-1.72(m，6H)，1.43(brs，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 207.72，170.93，170.15，154.74，135.58，128.37，128.30，128.14，80.00，66.67，60.10，59.74，52.13，48.52，39.65，34.18，32.36，28.21，26.90。


在-15℃下向化合物20(160mg，0.37mmol)在15mL甲醇中的溶液中添加NaBH3CN(120mg，1.9mmol)和3滴H2SO4(98％)。在相同溫度下攪拌4h之后，添加10mL水并用乙酸乙酯(30mL×4)萃取該混合物。在Na2SO4上干燥合并的有機層然后濃縮。通過層析純化該殘余物而獲得化合物22(147mg，92％)。

1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.30(brs，5H)，5.45(brd，J＝8.4Hz，1H)，5.20，5.10(ABq，J＝14.1Hz，2H)，4.85(m，1H)，4.48(m，2H)，4.13(m，1H)，3.16(brs，1H)，2.42-1.45(m，10H)，1.38(brs，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 172.30，171.03，155.06，135.43，128.49，128.27，128.15，79.36，67.70，66.87，59.74，54.00，51.65，43.62，32.12，31.82，29.30，28.29，27.11。


向化合物19(170mg，0.39mmol)在10mL CH2Cl2中的溶液中添加甲烷磺酰氯(0.05mL，0.6mmol)。將該溶液冷卻到0℃然后逐滴添加0.2mL N，N-二異丙基乙胺。在室溫下攪拌該混合物4h然后濃縮。通過層析純化該殘余物而獲得甲磺酸酯。向該甲磺酸酯在10mL甲醇中的溶液中添加50mg 10％Pd-C。在室溫下在H2下攪拌該混合物3h之后，濾出催化劑并將過濾物濃縮而產(chǎn)生酸。將該酸溶于10mLCH2Cl2。隨后向這一溶液中添加(R)-(-)-1，2，3，4-四氫-1-萘胺(60mg，0.4mmol)、EDC(77mg，0.4mmol)、HOBt(55mg，0.4mmol)和0.3mLN，N-二異丙基乙胺。在室溫下攪拌該溶液一整夜然后濃縮。通過層析純化該殘余物而提供酰胺。向該酰胺在5mL DMF中的溶液中添加0.2g NaN3。在110℃下攪拌該混合物6h然后在60mL乙酸乙酯和15mL鹽水之間分配。在Na2SO4上干燥合并的有機層然后濃縮。通過層析純化殘余物而獲得化合物23(132mg，經(jīng)過四個步驟68％)。

1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.30(m，1H)，7.20-7.03(m，3H)，6.81(brd，J＝8.2Hz，1H)，5.50(brd，J＝8.4Hz，1H)，5.18(m，1H)，4.65(m，1H)，4.48(m，1H)，4.35(m，1H)，3.84(m，1H)，2.80(m，2H)，2.45(m，1H)，2.30-1.78(m，13H)，1.45(brs，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 171.19，170.26，154.87，137.18，136.41，129.07，128.73，127.28，126.16，79.56，60.47，59.30，54.47，50.79，47.57，40.40，33.19，32.56，29.83，29.02，28.32，27.82，25.43，19.74。


按與對化合物6相同的程序由化合物22合成化合物24(63％，經(jīng)過四個步驟)。

1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.32(m，1H)，7.15(m，2H)，7.06(m，1H)，6.77(brd，J＝8.3Hz，1H)，5.43(brd，J＝8.2Hz，1H)，5.16(m，1H)，4.54(m，1H)，4.48(t，J＝7.5Hz，1H)，4.25(m，1H)，3.52(m，1H)，2.80(m，2H)，2.48-1.50(m，14H)，1.42(brs，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 171.02，170.07，154.94，137.11，136.33，128.98，128.76，127.20，126.23，79.76，61.17，60.35，56.99，49.85，47.47，42.20，32.74，29.84，29.14，29.01，28.25，26.08，19.76。


向20mg CuSO4在2mL水中的溶液中添加40mg(+)-鈉L-抗壞血酸鹽。震蕩該混合物直到顏色變成亮黃。在室溫下將這一混合物逐滴添加到化合物23(120mg，0.24mmol)和0.2mL炔丙基醚在3mL乙腈和3mL t-BuOH中的溶液中。在相同溫度下攪拌該混合物一整夜然后在60mL CH2Cl2和15mL鹽水之間分配。在Na2SO4上干燥合并的有機層然后濃縮。通過層析純化該殘余物而獲得化合物25(105mg，74％)。

1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.64(s，1H)，7.39(m，1H)，7.18(m，2H)，7.07(m，1H)，6.50(brd，J＝8.3Hz，1H)，5.83(brd，J＝7.1Hz，1H)，5.19(m，1H)，4.76(m，1H)，4.70(s，2H)，4.55-4.32(m，3H)，4.23(d，J＝2.4Hz，2H)，2.80(m，2H)，2.50(t，J＝2.4Hz，1H)，2.46-1.63(m，14H)，1.48(brs，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 170.63，170.48，154.79，143.58，137.35，136.30，129.11，128.59，127.36，126.41，122.65，79.71，79.31，74.87，62.96，60.83，59.13，57.49，54.65，53.29，47.84，41.98，34.53，32.49，31.26，30.15，29.10，28.34，25.81，20.06。


按對化合物25相同的方法由化合物24合成化合物26(產(chǎn)率73％)。

1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.59(s，1H)，7.36(m，1H)，7.13(m，2H)，7.04(m，1H)，6.68(brd，J＝8.2Hz，1H)，5.48(brd，J＝8.3Hz，1H)，5.15(m，1H)，4.89(m，1H)，4.72(m，1H)，4.70(s，2H)，4.56-4.35(m，2H)，4.14(d，J＝2.3Hz，1H)，2.80(m，2H)，2.58-1.55(m，15H)，1.43(brs，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 170.83，170.60，155.02，144.76，137.22，136.29，129.03，128.79，127.31，126.32，120.18，79.86，79.18，74.97，62.97，61.36，60.02，57.52，57.22，49.65，47.76，43.81，32.84，32.72，30.50，29.92，29.01，28.29，26.56，19.86。


向化合物23和25在3mL乙腈和3mL t-BuOH中的溶液中添加20mg CuSO4和40mg(+)-鈉L-抗壞血酸鹽在2mL水中的混合物。在室溫下攪拌該混合物一整夜然后在60mL CH2Cl2和15mL鹽水之間分配。在Na2SO4上干燥合并的有機層然后濃縮。通過層析純化該殘余物而獲得化合物27(79％)。

1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.70(s，2H)，7.40(m，2H)，7.19(m，4H)，7.11(m，2H)，6.54(brd，J＝8.3Hz，2H)，5.79(brd，J＝7.1Hz，2H)，5.19(m，2H)，4.75(m，2H)，4.67(s，4H)，4.47(m，4H)，4.35(t，J＝8.5Hz，2H)，2.79(m，4H)，2.45-1.60(m，28H)，1.43(brs，18H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ 170.57，170.48，154.78，143.89，137.31，136.32，129.06，128.62，127.31，126.39，122.60，79.66，63.66，60.80，59.06，54.65，53.27，47.80，41.93，34.49，32.49，30.13，29.21，29.09，28.32，25.78，20.03。


按對化合物27相同的方法由化合物24和26合成化合物28。

1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.61(s，2H)，7.38(m，1H)，7.20-6.99(m，6H)，6.60(brd，J＝8.0Hz，2H)，5.48(brd，J＝8.1Hz，2H)，5.16(m，2H)，4.89(m，2H)，4.73(m，2H)，4.70(s，4H)，4.52-4.33(m，4H)，2.78(m，4H)，2.56-1.58(m，28H)，1.43(brs，18H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 170.89，170.51，155.01，137.22，136.25，129.03，128.81，127.33，126.35，120.21，79.87，63.85，61.38，60.03，57.27，49.65，47.75，43.86，32.85，32.73，30.51，29.21，29.03，28.30，26.54，19.84。


向化合物27在5mL甲醇中的溶液添加1mL HCl溶液(4N，在1，4-二氧雜環(huán)己烷中)。在室溫下攪拌該溶液一整夜然后濃縮。將該殘余物懸浮在5mL CH2Cl2中。向該混合物中添加L-N-甲基-N-Boc-丙氨酸、EDC、HOBt和N，N-二異丙基乙胺。在室溫下攪拌該混合物一整夜然后濃縮。通過層析純化該殘余物而產(chǎn)生酰胺。向該酰胺在5mL甲醇中的溶液添加1mL HCl溶液(4N，在1，4-二氧雜環(huán)己烷中)。在室溫下攪拌該溶液一整夜然后濃縮而產(chǎn)生為HCl鹽的粗SH-172。通過HPLC純化該化合物而產(chǎn)生純產(chǎn)物。在25min內(nèi)梯度從75％溶劑A(含0.1％TFA的水)和25％溶劑B(含0.1％TFA的乙腈)運行到55％溶劑A和45％溶劑B。分析性HPLC顯示純度超過95％。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.85(s，2H)，7.22-7.02(m，8H)，4.98-4.79(m，4H)，4.80-4.60(m，4H)，4.52(s，4H)，4.28(t，J＝8.7Hz，2H)，3.82(m，2H)，2.72-2.50(m，10H)，2.48-1.55(m，28H)，1.45(d，J＝7.0Hz，6H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 173.57，171.59，169.27，138.30，136.14，129.54，128.56，127.82，126.61，124.46，62.79，61.98，59.66，57.28，55.45，53.24，48.38，41.25，31.93，31.32，31.11，29.86，28.81，27.24，20.27，15.64。


按與對SH-172相同的程序由化合物28合成SH-153。

1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.95(s，2H)，7.20-6.95(m，8H)，4.92-4.74(m，6H)，4.59(s，4H)，4.55(m，2H)，4.27(m，2H)，3.86(m，2H)，2.78-2.52(m，12H)，2.42-2.08(m，8H)，1.99-1.55(m，18H)，1.45(d，J＝7.0Hz，6H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 172.99，171.58，169.78，138.23，136.07，129.46，128.57，127.78，126.57，123.39，62.82，62.56，60.59，58.14，57.13，50.49，48.38，42.62，32.49，31.30，29.84，29.53，28.78，27.86，20.20，15.61。
實施例5 SH-146的合成
根據(jù)方案VI合成化合物SH-146。
方案VI
試劑和條件(a)i.2N LiOH，1，4-二氧雜環(huán)己烷:H2O 1:1；ii.15，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2，88％經(jīng)過兩步；(b)i.24，CuSO4，(+)-L-抗壞血酸鈉，t-BuOH--H2O，1:1；ii.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，MeOH；iii.L-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；iv.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，MeOH，55％經(jīng)過四步。

除去化合物3中的三氟乙?；Ｗo基接著使所得的胺與酸15縮合獲得酰胺29。疊氮化物24與炔烴29在CuSO4-(+)-鈉-L-抗壞血酸鹽的催化下的環(huán)加成接著除去Boc保護基提供銨鹽。在該鹽與L-N-Boc-N-甲基丙氨酸縮合之后，通過用在甲醇中的HCl處理使該Boc保護基裂解而提供二價Smac模擬物SH-146。


1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.75(brs，J＝7.4Hz，1H)，7.32-7.15(m，5H)，5.53(brd，J＝7.1Hz，1H)，5.08(m，1H)，4.73(t，J＝6.6Hz，1H)，4.60(m，1H)，4.19(brs，2H)，4.12(m，1H)，3.80(m，2H)，2.62(m，1H)，2.45(t，J＝2.3Hz，1H)，2.23-1.65(m，4H)，1.55-1.10(m，16H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ 172.20，169.94，155.03，139.45，128.37，127.46，127.05，79.59，79.23，74.91，72.23，59.76，59.27，58.34，52.96，51.08，36.44，32.00，28.37，24.93，24.12，23.08。


1H NMR(300MHz，D2O)δ 7.84(s.1H)，7.40-7.25(m，6H)，7.24-7.02(m，3H)，4.98-4.85(m，4H)，4.74(m，2H)，4.53(s，2H)，4.30(m，2H)，4.27(m，1H)，3.97-3.80(m，2H)，3.78-3.65(m，2H)，2.92(m，2H)，2.56(s，3H)，2.55(s，3H)，2.35-1.45(m，26H)，1.43(d，J＝7.0Hz，3H)，1.38(d，J＝7.0Hz，3H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 173.88，173.59，172.24，171.57，169.52，169.26，143.92，138.65，138.31，136.20，129.51，129.12，128.48，128.17，127.80，126.95，126.60，124.24，72.30，63.35，62.21，61.98，61.05，59.61，57.27，57.19，55.46，53.35，53.20，51.12，48.41，41.21，35.95，33.00，32.34，31.30，29.83，28.80，27.94，25.08，21.91，20.30，15.62。
實施例6 YP-317、YP-381、YP-383和YP-385的合成
根據(jù)方案VII合成化合物YP-317。

試劑和條件(a)叔丁基二甲基甲硅烷基氯，N，N-二異丙基乙基胺，二氯甲烷；(b)10％ Pd-C，甲醇，H2，經(jīng)過兩步88％；(c)Boc-Dap(Z)-OH，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，二氯甲烷；(d)在四氫呋喃中的1M四丁基氟化銨，四氫呋喃，經(jīng)過兩步87％；(e)戴斯-馬丁氧化劑，二氯甲烷，96％；(f)10％ Pd-C，甲醇，H2，64％；(g)氯甲酸芐基酯，碳酸氫鈉，1，4-二氧雜環(huán)己烷，95％；(h)亞硫酰氯，甲醇；(i)Boc酸酐，碳酸氫鈉，1，4-二氧雜環(huán)己烷，經(jīng)過兩步71％；(j)在H2O中的2M氫氧化鋰，1，4-二氧雜環(huán)己烷-H2O；(k)氨基二苯甲烷，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，二氯甲烷，經(jīng)過兩步74％；(l)在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4M氯化氫，甲醇；(m)L-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，二氯甲烷，經(jīng)過兩步78％；(n)10％Pd-C，甲醇，H2，90％；(o)α，α’-二溴-對二甲苯，碳酸氫鈉，1，4-二氧雜環(huán)己烷；(p)化合物21，碳酸氫鈉，1，4-二氧雜環(huán)己烷；(q)在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4M氯化氫，甲醇，經(jīng)過三步34％。

通過公開的方法(Zhang et al.，Org.Lett.，44029-4032(2002)；(b)Polyak et al.，J.Org，Chem.635937-5949(1998))按六個步驟由焦谷氨酸(化合物30)制備化合物31。用TBS保護化合物31中的羥基而產(chǎn)生化合物32。通過催化氫化除去該芐基保護基而產(chǎn)生胺33，將它與Boc-Dap(Z)-OH偶合而產(chǎn)生酰胺34。通過四氫呋喃中的1M四丁基氟化銨除去化合物34中的TBS保護基而產(chǎn)生醇35，然后通過戴斯-馬丁氧化劑將它氧化成醛36。通過催化氫化除去化合物36中的Cbz保護基，所需胺與醛的分子內(nèi)縮合隨后還原所得的烯胺在一個鍋中進行而獲得二環(huán)化合物37。用Cbz保護基保護胺37而產(chǎn)生化合物38。除去化合物38中的Boc保護基并通過用甲醇中的亞硫酰氯處理將叔丁基酯轉變成甲基酯而獲得化合物39。用Boc保護基保護胺基而產(chǎn)生化合物40。將甲基酯40轉化成羧酸41，使它與氨基二苯甲烷縮合而形成酰胺42。除去化合物42中的Boc保護基而獲得游離胺43，將它與L-N-Boc-N-甲基丙氨酸偶合而產(chǎn)生酰胺44。通過催化氫化除去化合物44中的Cbz保護基而獲得胺45，用α，α’-二溴-對二甲苯處理該胺45而產(chǎn)生化合物46。用化合物45和碳酸氫鈉處理化合物46而獲得受保護的二聚物47，除去它的Boc保護基而形成所需二聚物YP-317。

1H NMR(D2O)δ 9.23-9.26(m，1H)，7.18-7.22(m，8H)，7.06-7.08(m，4H)，6.02-6.05(m，1H)，5.30-5.36(m，1H)，4.59(m，1H)，4.52(m，1H)，4.27(s，2H)，3.78-3.86(m，2H)，3.53-3.58(m，2H)，2.99(t，J＝2Hz，1H)，2.56(s，3H)，2.32(m，1H)，1.84-1.92(m，1H)，1.67-1.75(m，4H)，1.35-1.37(d，J＝7Hz，3H)；13C NMR(D2O)δ 173.93，170.13，167.90，163.54，163.07，140.74，140.62，132.39，130.59，129.39，129.26，128.40，128.13，127.85，127.58，118.58，114.72，62.98，61.07，59.03，58.25，57.10，56.42，55.26，54.18，47.98，31.65，31.24，30.98，27.01，15.42；HRMS發(fā)現(xiàn)[M+H]+1057.6057(計算1057.6028)。

按類似的方式經(jīng)由化合物45的酰化合成YP-381、YP-383和YP-385。


1H NMR(300MHz，CD3OD，TMS)δ 8.94-8.91(d，J＝7.9Hz，1H)，7.37-7.24(m，10H)，6.17-6.14(d，J＝8.2Hz，1H)，4.58-4.55(m，1H)，4.24(br，1H)，3.99-3.90(m，2H)，3.50-3.38(m，1H)，2.70(s，3H)，2.65-2.40(m，2H)，2.31(m，1H)，2.09-1.78(m，6H)，1.61(m，2H)，1.56-1.53(d，J＝7.0Hz，3H)，1.32(s，4H)。13CNMR(75MHz，CD3OD)δ176.5，175.9，173.2，169.6，143.0，129.6，128.8，128.2，62.7，58.2，53.7，34.4，33.4，32.3，31.8，30.3，28.3，26.1，16.2.HRMS計算m/z[M+Na]+1143.6371；發(fā)現(xiàn)1143.6387。


1H NMR(300MHz，CD3OD，TMS)δ 7.35-7.27(m，10H)，6.16(s，1H)，4.59-4.52(m，1H)，4.24(br，1H)，4.02-3.99(m，1H)，3.97-3.92(m，1H)，3.90-3.87(m，1H)，3.58-3.48(m，2H)，2.70(s，3H)，2.56-2.34(m，2H)，2.34-2.32(m，1H)，2.06-1.19(m，6H)，1.56-1.53(d，J＝7.0Hz，3H)，1.30(s，6H)。13CNMR(75MHz，CD3OD)δ 176.5，175.9，173.2，169.6，143.0，129.6，128.8，128.2，62.7，58.2，53.7，34.4，33.4，31.7，30.6，30.4，28.3，26.3，16.1.HRMS計算m/z[M+Na]+1171.6684；發(fā)現(xiàn)1171.6680。


1H NMR(300MHz，CD3OD，TMS)δ 8.95-8.93(d，J＝8.1Hz，1H)，7.37-7.24(m，10H)，6.17-6.14(d，J＝8.0Hz，1H)，4.58-4.56(m，1H)，4.24(br，1H)，3.99-3.92(m，2H)，3.82-3.70(m，1H)，2.70(s，3H)，2.62-2.40(m，2H)，2.33(m，1H)，2.04-1.75(m，6H)，1.60-1.56(m，2H)，1.55-1.52(d，J＝7.0Hz，3H)，1.34-1.30(m，2H)。13CNMR(75MHz，CD3OD)δ 176.5，175.8，173.3，169.7，143.0，129.6，128.8，128.2，62.7，58.2，53.7，34.5，33.4，31.7，30.2，28.3，26.2，16.1.HRMS計算m/z[M+Na]+1115.6058；發(fā)現(xiàn)1115.6055。
實施例7 Smac模擬物中間體的合成 方案VIII
試劑和條件(a)i.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，甲醇；ii.Boc-Dap(Z)-OH，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2，52％經(jīng)過兩步；(b)O3，然后PPh3，CH2Cl2，90％；(c)H2，10％ Pd-C，i-PrOH，41％；(d)9-BBN(2eq)，THF，回流，12h，然后3N NaOH(2eq)，35％，H2O2(2.5eq)，0℃-rt，85％；(e)i.戴斯-馬丁氧化劑，CH2Cl2；ii.H2，10％ Pd-C，i-PrOH，50％經(jīng)過兩步。

中間體51和53的合成在方案VIII中示出?？梢愿鶕?jù)報道的方法(參見(1)Zhang，J.；Xiong，C.；Wang，W.；Ying，J.；Hruby，V.，J.Org.Lett.，2002，4(23)，4029-4032和(2)Polyak，F(xiàn).and Lubell，W.D.J.Org，Chem.1998，63，5937-5949)按五個步驟由焦谷氨酸30制備化合物48，為兩種非對映異構體的混合物，其中R形式異構體為主要產(chǎn)物(比例為約4:1)。除去48中的Boc基接著與N-α-(叔丁氧基羰基)-N-β-(苯甲氧基羰基)-L-二氨基-丙酸(Boc-Dap(Z)-OH)縮合獲得酰胺49。49中的C-C雙鍵的臭氧氧化產(chǎn)生醛50。4中Cbz基的裂解，所得的胺與醛基的分子內(nèi)縮合和隨后還原該烯胺在一個鍋中進行而獲得化合物51。在這一轉換中，僅獲得化合物51并且沒有檢測到其異構體，表明小異構體的氨基醛在這些條件下沒有環(huán)化。

用9-BBN將49中的C-C雙鍵硼氫化接著將所得的硼烷堿性氧化提供醇52。用戴斯-馬丁氧化劑氧化52提供兩種醛的混合物，按與對化合物51相同的程序將該混合物環(huán)化而獲得化合物53。與51相似，在這一轉化期間僅獲得一種異構體。

化合物51的分析數(shù)據(jù)[α]20D-30.2(c＝1.7，CHCl3)；1HNMR(300MHz，CDCl3，TMS)δ 5.45(brd，J＝8.0Hz，1H)，4.67(m，1H)，4.52(t，J＝9.0Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.74(s，3H)，3.20(m，2H)，2.94(m，1H)，2.74(dd，J＝13.6，10.9Hz，1)，2.35(m，1H)，2.14(m，1H)，1.99(m，1H)，1.86-1.74(m，3H)，1.66(m，1H)，1.43(brs，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3，TMS)δ 173.42，170.60，155.16，79.68，59.46，58.39，54.92，52.44，46.72，37.45，32.15，29.64，28.29，26.98。

化合物53的分析數(shù)據(jù)[α]20D-23.2(c＝1.0，CHCl3)；1HNMR(300MHz，CDCl3，TMS)δ 5.23(brd，J＝8.0Hz，1H)，4.79(m，1H)，4.65(dd，J＝9.7，8.2Hz)，4.22(m，1H)，3.74(s，3H)，3.02-2.80(m，4H)，2.38-1.70(m，9H)，1.43(brs，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3，TMS)δ173.38，171.59，155.09，79.68，62.03，59.82，53.72，53.15，52.48，50.09，34.66，34.55，29.47，28.31，27.33。
實施例8 SH-188、189和190的合成 方案IX
試劑和條件(a)EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；(b)i.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，MeOH；ii.(S)-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；iii.10％ Pd-C，H2，MeOH；(c)硫光氣或三光氣，CH2Cl2；ii.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，MeOH。

酸15與胺54或55的縮合分別產(chǎn)生酰胺56和57(方案IX)。56或57中的Boc保護基的除去接著所得的銨與(S)-N-Boc-N-甲基丙氨酸的縮合產(chǎn)生兩種酰胺。這兩種酰胺中的Cbz保護基的除去提供胺58和59。58或59與0.5當量三光氣的縮合提供兩種脲。這兩種脲中的Boc保護基的除去分別提供SH-188和SH-190。58與0.5當量硫光氣的縮合產(chǎn)生硫脲。這種硫脲中的Boc保護基的除去產(chǎn)生SH-189。
實施例9 SH-202的合成 方案X
試劑和條件(a)i.NaH(2.5eq)，1，12-二溴代十二烷，DMF；ii.3NLiOH，1，4-二氧雜環(huán)己烷；(b)酸15(2.2eq)，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；(c)i.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，MeOH；ii.(S)-N-Boc-N-甲基丙氨酸，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；iii.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，MeOH。

用1，12-二溴十二烷置換衍生自化合物60的醇鈉接著除去三氟乙酰基獲得二胺61。61與2當量酸15的縮合產(chǎn)生酰胺62。62中的Boc保護基的除去接著與(S)-N-Boc-N-甲基丙氨酸縮合提供酰胺。這一酰胺中的Boc保護基的除去提供SH-202。
實施例10 Smac模擬物中間體的合成 方案XI
試劑和條件(a)i.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，甲醇；ii.Boc-Dap(Z)-OH，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；(b)O3，然后PPh3，CH2Cl2；(c)H2，10％ Pd-C，i-PrOH；(d)i.CbzCl，NaHCO3，1，4-二氧雜環(huán)己烷；ii.3N LiOH，1，4-二氧雜環(huán)己烷，然后1N HCl；(e)i.胺，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；ii.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，甲醇；iii.(S)-N-保護的氨基酸，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；(f)i.二酸(0.5eq)，EDC，HOBt，N，N-二異丙基乙基胺，CH2Cl2；ii.在1，4-二氧雜環(huán)己烷中的4N HCl，MeOH。

關鍵中間體41的新型和有效的合成方法在方案XI中提供?？梢愿鶕?jù)報道的方法(參見(1)Zhang，J.；Xiong，C.；Wang，W.；Ying，J.and Hruby，V.，J.Org.Lett.，2002，4(23)，4029-4032和(2)Polyak，F(xiàn).and Lubell，W.D.J.Org，Chem.1998，63，5937-5949)按五個步驟由焦谷氨酸30制備化合物48，為兩種非對映異構體的混合物，其中R形式異構體為主要產(chǎn)物(比例為約4:1)。除去48中的Boc基接著與N-α-(叔丁氧基羰基)-N-β-(苯甲氧基羰基)-L-二氨基-丙酸(Boc-Dap(Z)-OH)縮合獲得酰胺49。49中C-C雙鍵的臭氧氧化接著用PPh3還原產(chǎn)生醛50。50中Cbz基的裂解，所得的胺與醛基的分子內(nèi)縮合和隨后還原該烯胺在一個鍋中進行而獲得所需化合物51。保護氨基接著將51中的甲基酯水解提供酸41。

41與不同二胺的縮合獲得一系列酰胺。這些酰胺中的Boc保護基的除去接著所得的銨鹽與(S)-N-保護的氨基酸縮合產(chǎn)生一系列酰胺63。這些酰胺中的保護基的除去提供我們設計的二價Smac模擬物64。
實施例11 二價SMAC模擬物

SH-1731H NMR(300HMz，CDCl3)δ 8.70(s，2H)，8.32(d，J＝8.0Hz，2H)，7.60(d，J＝7.4Hz，2H)，7.40-6.80(m，26H)，6.47(d，J＝7.9Hz，2H)，6.25(d，J＝8.0Hz，2H)，4.81(m，2H)，4.70(m，2H)，4.50(m，2H)，4.27(t，J＝7.1Hz，4H)，3.95(m，2H)，3.30-3.08(m，4H)，2.60(t，J＝2.61Hz，4H)，2.45-2.25(m，2H)，2.12-1.20(m，36H)；13C NMR(75HMz，CDCl3)δ 170.78，170.41，170.14，169.88，148.00，140.45，138.98，136.19，128.53，128.44，127.68，127.56，127.28，123.70，121.67，121.55，119.13，118.57，111.29，110.25，59.98，59.06，54.01，50.40，50.20，50.01，47.76，35.93，34.61，31.74，29.53，29.09，28.08，24.83，23.30，22.95，20.82。


SH-1751H NMR(300HMz，D2O)δ 7.87(s，1H)，7.71(s，2H)，7.30-7.11(m，10H)，6.05(s，2H)，4.64(m，2H)，4.35-4.16(m，10H)，3.81(m，2H)，2.60(t，J＝6.2Hz，2H)，2.54(s，6H)，2.10(m，2H)，1.98(m，2H)，1.75-1.42(m，34H)；13C NMR(75HMz，D2O)δ 175.85，174.79，172.08，150.63，147.37，141.60，131.85，131.09，129.93，128.50，126.79，64.57，63.53，59.73，54.54，53.66，52.90，52.59，38.49，35.57，34.90，33.93，31.29，30.32，28.96，28.65，27.63，27.38，25.24，24.49，18.22。


SH-1761H NMR(300MHz，D2O)δ 7.48(s，2H)，7.10-6.67(20H)，5.84(s，2H)，4.65(m，2H)，4.55(m，2H)，4.42-4.16(m，8H)，3.80(m，2H)，2.53(s，6H)，2.25-1.30(m，26H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 172.72，171.00，169.10，143.67，141.49，141.30，129.07，127.96，127.58，127.39，124.10，62.76，61.24，59.43，57.67，57.27，55.00，53.20，41.26，32.12，31.31，26.98，24.69，15.62。


SH-1771H NMR(300MHz，D2O)δ 7.62(s，2H)，7.15-6.90(20H)，5.90(s，2H)，4.75(m，4H)，4.43(s，4H)，4.39(m，4H)，3.83(m，2H)，2.80(s，6H)，2.46(m，2H)，2.22-1.90(m，8H)，1.75-1.43(m，10H)，1.36(d，J＝8.4Hz，6H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 175.14，173.74，172.25，146.86，144.06，143.66，131.72，131.66，130.55，130.21，129.97，125.60，65.46，64.63，62.98，60.36，59.70，52.87，45.02，34.98，33.87，32.30，30.26，18.17。


SH-1781H NMR(300MHz，D2O)δ 7.88(s，2H)，7.46-7.30(m，10H)，6.19(s，2H)，4.78(m，6H)，4.42(m，2H)，4.30(m，2H)，3.90(m，2H)，3.74(m，4H)，3.60(m，4H)，3.52(m，2H)，3.28(m，2H)，2.64(s，6H)，2.40-1.56(m，24H)，1.49(d，J＝7.0Hz，6H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 176.14，174.90，172.10，151.28，141.51，131.90，131.19，130.01，127.32，64.64，63.61，59.73，58.06，53.68，52.96，52.05，47.49，38.50，35.53，34.90，33.89，30.35，27.61，24.48，18.18。


SH-1791H NMR(300MHz，D2O)δ 7.87(s，2H)，7.40-7.22(m，10H)，6.19(s，2H)，4.74(m，6H)，4.42(m，2H)，4.30(m，2H)，4.05(m，2H)，3.79(t，J＝5.1Hz，4H)，3.71(t，J＝5.1Hz，4H)，3.53(brs，8H)，3.10(m，4H)，2.40-1.60(m，24H)，1.50(d，J＝7.0Hz，6H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 176.15，174.92，172.00，151.25，141.51，131.90，131.19，130.07，127.28，64.64，63.60，59.57，58.60，58.06，53.69，52.95，52.14，50.67，47.56，38.49，35.53，34.89，30.34，27.60，24.47，18.46。


SH-1801H NMR(300MHz，D2O)δ 7.60(s，2H)，7.30-7.10(m，10H)，6.68(s，4H)，6.15(s，2H)，4.74(m，2H)，4.52-4.30(m，4H)，4.20(m，2H)，4.19-4.02(m，8H)，3.80(m，2H)，3.13(m，2H)，2.40-1.12(m，42H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 172.79，170.36，169.39，148.33，139.54，129.24，128.55，127.41，123.46，61.91，60.88，60.28，57.02，56.06，50.99，50.38，49.08，48.13，35.98，34.26，33.10，32.32，29.20，27.85，25.11，21.95，16.84。


SH-1811H NMR(300MHz，D2O)δ 7.87(s，2H)，7.31(m，4H)，7.08(m，4H)，6.16(s，2H)，4.82-4.72(m，6H)，4.50(m，2H)，4.26(m，2H)，3，88(m，2H)，3.78(m，4H)，3.68(brs，8H)，2.61(s，6H)，2.36-1.53(m，24H)，1.50(t，J＝7.0Hz，6H)；13C NMR(75MHz，D2O)δ 176.03，174.85，172.05，163.45，151.16，137.40，131.90，127.33，118.51，64.59，63.58，59.73，58.02，53.64，52.30，51.87，47.26，38.48，35.53，34.86，33.85，30.27，27.60，24.47，18.16。


SH-1821H NMR(300MHz，D2O)δ 7.61(s，2H)，7.23(m，4H)，6.78(m，4H)，6.53(m，4H)，6.12(s，2H)，4.70(m，2H)，4.32(m，2H)，4.18(m，2H)，4.10-3.83(m，6H)，2.61(s，6H)，2.22-1.03(m，42H)；13CNMR(75MHz，D2O)δ 172.53，171.92，169.39，160.60，148.31，139.38，134.84，129.40，128.42，115.60，61.76，60.78，57.20，50.94，50.27，49.59，35.99，34.42，33.22，32.32，31.33，29.41，27.95，25.14，21.99，15.66。


SH-1831H NMR(300HMz，D2O)δ 7.87(s，2H)，7.38-7.22(m，4H)，7.12-6.99(m，4H)，6.17(s，2H)，4.85-4.74(m，6H)，4.34(m，2H)，4.27(m，2H)，3.98(m，2H)，3.80-3.65(m，8H)，3.55(s，8H)，3.10(m，2H)，2.37-1.40(m，30H)。


SH-1841H NMR(300MHz，D2O)δ 7.62(s，2H)，7.20(m，4H)，6.90-6.70(m，4H)，6.69-6.50(brs，4H)，6.19(s，2H)，4.72(m，2H)，4.50-4.28(m，4H)，4.20-3.80(m，6H)，3.12(m，4H)，2.22-0.98(m，42H)。


SH-1851H NMR(300HMz，D2O)δ 7.67(s，2H)，7.26-7.10(m，10H)，6.07(s，2H)，4.73(m，2H)，4.28(m，2H)，4.25-4.10(m，6H)，3.83(m，2H)，2.54(s，6H)，2.20-1.92(m，4H)，1.86-1.30(m，34H)，0.98-0.80(m，12H)；13C NMR(75HMz，D2O)δ 177.43，173.05，172.22，148.26，139.29，129.28，128.50，127.43，123.81，62.00，60.99，57.20，51.08，50.76，50.40，36.00，33.06，32.36，31.32，29.52，28.62，28.26，27.77，25.76，25.10，21.93，15.65。



SH-1861H NMR(300HMz，D2O)δ 7.58(s，2H)，7.20-6.90(m，10H)，6.61(s，4H)，6.08(s，2H)，4.72(m，2H)，4.30(m，2H)，4.10(m，2H)，3.95(m，4H)，3.80(m，2H)，2.52(s，6H)，2.25-1.05(m，36H)，1.02-0.75(m，14H)；13C NMR(75HMz，D2O)δ 174.88，174.40，171.91，151.04，142.52，142.31，131.63，130.92，130.00，125.57，125.09，64.30，63.24，59.74，53.42，52.90，38.63，38.20，35.90，34.85，34.28，33.87，32.69，32.05，31.73，30.20，29.07，27.76，24.49，18.23。


SH-1871H NMR(300HMz，D2O)δ 7.56(s，2H)，7.40-7.05(m，16H)，7.02(m，2H)，6.90(m，2H)，6.78(m，4H)，6.11(s，2H)，4.75(m，2H)，4.49(m，2H)，4.25(m，4H)，4.20(m，2H)，3.98(m，2H)，3.84(m，2H)，2.49(s，6H)，2.38(m，4H)，2.24-1.22(m，36H)。


SH-1881H NMR(300HMz，D2O)δ 7.10-6.92(m，10H)，6.85(m，4H)，6.70(m，4H)，5.85(s，2H)，4.65(m，2H)，4.32(m，2H)，4.06(m，2H)，3.82(m，2H)，2.74(m，4H)，2.54(s，6H)，2.15(m，4H)，2.02-1.20(m，34H)；13C NMR(75HMz，D2O)δ 172.36，171.92，169.41，160.17，141.40，141.15，139.27，129.01，127.66，127.46，61.88，60.87，57.18，50.94，39.72，35.99，33.20，32.49，31.60，31.33，27.79，25.19，21.91，15.69。


SH-1891H NMR(300HMz，D2O)δ 7.18-6.99(m，10H)，6.95(m，4H)，6.80(m，4H)，5.90(s，2H)，4.72(m，2H)，4.36(m，2H)，4.13(m，2H)，3.89(m，2H)，3.30(brm，4H)，2.63(s，6H)，2.30(m，4H)，2.12-1.18(m，34H)。


SH-1901H NMR(300HMz，D2O)δ 13C NMR(75HMz，D2O)δ 7.15-6.93(m，10H)，6.95(m，4H)，6.79(m，4H)，6.85(s，2H)，4.74(m，2H)，4.36(m，2H)，4.13(m，2H)，3.88(m，2H)，2.80(m，4H)，2.58(s，6H)，2.36-1.08(m，42H)。


SH-1911H NMR(300HMz，D2O)δ 7.75(s，2H)，7.40-7.20(m，10H)，6.16(s，2H)，4.74(m，2H)，4.36(m，2H)，4.32-4.20(m，6H)，3.89(m，2H)，2.95(t，J＝6.6Hz，4H)，2.64(s，6H)，2.32-1.20(m，38H)。


SH-1981H NMR(300HMz，D2O)δ 7.70(s，2H)，7.30-7.12(m，10H)，6.07(s，2H)，4.65(m，2H)，4.32(m，2H)，4.25-4.10(m，6H)，3.84(m，2H)，3.10(m，4H)，2.55(s，6H)，2.20-1.20(m，38H)，0.98(m，2H)；13C NMR(75HMz，D2O)δ 173.17，172.22，169.53，148.15，139.16，129.32，128.54，127.40，124.04，70.20，69.63，62.01，60.98，57.19，51.10，50.82，50.63，50.35，35.97，33.06，32.36，31.37，29.29，28.17，27.77，26.48，25.80，25.10，22.58，21.95，15.67。


SH-1991H NMR(300HMz，D2O)δ 7.73(s，2H)，7.20-7.02(m，10H)，6.05(s，2H)，4.65(m，2H)，4.30(m，2H)，4.22-4.08(m，6H)，3.84(m，2H)，3.08(m，4H)，2.52(s，6H)，2.25-0.90(m，42H)；13CNMR(75HMz，D2O)δ 173.02，172.13，169.49，147.91，139.07，129.31，128.55，127.41，124.14，70.25，66.87，61.93，60.90，57.18，50.97，50.22，36.01，33.08，32.37，31.40，29.33，28.23，27.74，25.11，22.62，21.97，15.70。


SH-2001H NMR(300HMz，D2O)δ 7.77(s，2H)，7.22-7.08(m，10H)，6.05(s，2H)，4.65(m，2H)，4.37-4.22(m，6H)，4.16(m，2H)，3.82(m，2H)，3.48(m，4H)，3.08(m，4H)，2.52(s，6H)，2.16-1.42(m，30H)，1.01(m，4H)；13C NMR(75HMz，D2O)δ 173.11，172.16，169.49，148.01，139.10，129.32，128.56，127.38，124.62，70.59，68.39，66.87，61.96，60.95，57.19，50.73，50.24，35.98，33.09，32.36，31.40，27.77，25.43，25.12，21.96，15.69。


SH-2011H NMR(300HMz，D2O)δ 7.60(s，2H)，7.40-6.70(m，20)，6.16(s，2H)，4.75(m，2H)，4.49(m，2H)，4.25(m，4H)，4.20(m，2H)，3.98(m，2H)，3.84(m，2H)，2.49(s，6H)，2.40-1.20(m，48H)。


SH-2021H NMR(300HMz，D2O)δ 7.35-7.16(m，10H)，5.02(m，2H)，4.74(m，2H)，4.39(m，2H)，4.27(m，2H)，3.92(m，2H)，3.55(m，4H)，3.34(m，4H)，2.64(s，6H)，2.28-1.20(m，54H)；13C NMR(75HMz，D2O)δ 175.35，174.62，172.04，141.98，131.60，130.66，129.70，75.84，73.59，64.68，63.33，59.74，55.57，53.55，38.93，35.65，35.05，33.93，32.55，32.31，30.64，28.86，27.85，24.68，18.29。


SH-2061H NMR(300HMz，D2O)δ 7.44(s，2H)，7.30-6.80(m，10H)，6.49(s，4H)，5.99(s，2H)，4.63(m，2H)，4.28(m，2H)，4.06(m，2H)，3.92(m，2H)，3.80(m，4H)，2.55(s，6H)，2.28-0.95(m，42H)；13C NMR(75HMz，D2O)δ 175.04，174.33，171.97，150.65，143.08，141.97，131.63，131.00，130.59，129.60，126.25，64.31，63.33，59.74，53.47，52.92，38.47，36.87，35.85，34.86，33.87，31.85，30.42，27.65，24.52，18.26。


SM-4101H NMR(MeOH-d4，300MHz)δ 8.91(m，2H)，7.37-7.13(m，24H)，6.16(m，2H)，4.73(m，2H)，4.53(m，2H)，4.06-3.73(m，8H)，3.37-3.27(m，6H)，2.92(m，6H)，2.68(m，6H)，2.30(m，2H)，2.05-1.81(m，10H)，1.55(m，6H)；13C NMR(MeOH-d4，300MHz)δ174.4，172.3，169.3，168.6，142.2，142.0，139.3，129.1，128.7，128.5，127.8，127.5，127.3，61.8，57.3，52.6，51.8，46.6，34.9，32.4，31.4，30.9，27.3，15.3。
實施例12 抑制劑與XIAP BIR3的結合
為了試驗二價Smac模擬物與IAP蛋白的結合能力，使用熒光偏振(FP)基方法的敏感和定量體外結合試驗被開發(fā)和用來測定Smac模擬物與XIAP蛋白的結合親合性(Nikolovska-Coleska et al.，Anal.Biochem.332261-73(2004))。對于這一試驗，將5-羧基熒光素(5-Fam)與突變的Smac肽AbuRPF-K-(5-Fam)-NH2(稱作SM5F)的賴氨酸側鏈耦合。SM5F肽與XIAP BIR3蛋白的結合的Kd值測定為17.92nM，表明該肽與具有高親合性的XIAP蛋白的表面袋結合。與His-標記物稠環(huán)的人XIAP(殘基241-356)的重組XIAP BIR3蛋白是穩(wěn)定和可溶的，并且用于FP基結合試驗。

采用試驗化合物在DMSO中的連續(xù)稀釋進行劑量依賴性結合實驗。在Dynex 96孔黑色圓底板(Fisher Scientific)中添加在試驗緩沖物(100mM磷酸鉀，pH值7.5；100μg/ml牛丙球蛋白；0.02％疊氮化鈉，從InvitrogenTM Life Technology購買)中的試驗樣品和預培養(yǎng)的XIAP BIR3蛋白質(30nM)和SM5F肽(5nM)的5μl樣品以產(chǎn)生125μl的最終體積。對于每一試驗，包括含重組XIAP BIR3蛋白和SM5F(相當于0％抑制)的結合肽對照物和僅含游離SM5F(相當于100％抑制)的游離肽對照物。當結合達到平衡時在3小時培養(yǎng)之后使用ULTRAREADER(Tecan U.S.Inc.，Research Triangle Park，NC)測量偏振值。使用非線性最小二乘分析由曲線測定IC50值，即替換50％結合肽時的抑制劑濃度。使用GRAPHPAD PRISM軟件(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)進行曲線擬合。
實施例13 對XIAP蛋白的熒光偏振基結合試驗
用人XIAP蛋白(殘基120-356)(10nM)和熒光標記的Smac基二價肽(稱作Smac2-F)(0.5nM)作為示蹤劑在試驗緩沖物(100mM磷酸鉀，pH值7.5；100μg/ml牛丙球蛋白；0.02％疊氮化鈉)中在Dynex 96孔黑色圓底板(Fisher Scientific)中培養(yǎng)Smac模擬物。確定Smac2-F與XIAP結合，其中Kd值為1.2nM。對于每一試驗，對照物包括XIAP和Smac2-F肽(相當于0％抑制)，和僅包括Smac-2F(等于100％抑制)。在2小時培養(yǎng)之后，使用Ultra平臺閱讀器測量偏振值。使用非線性最小二乘分析由該曲線測定IC50值，即替換50％結合的示蹤劑時的抑制劑濃度。使用GraphPad

軟件進行曲線擬合。


當在結合試驗中試驗時，二價Smac模擬物SH-164具有1.9±0.5nM的IC50(圖1)。這比一價Smac模擬物SH-122的結合親合性好大于500倍并且比天然Smac肽AVPI(SEQ ID NO1)有效>5000倍。這些數(shù)據(jù)表明二價Smac模擬物將充當IAP活性的有效抑制劑。其它二價Smac模擬物的結合親合性在表4中給出。
表4 實施例14 通過二價Smac模擬物的細胞生長抑制
試驗SH-164對各種癌細胞系的生長的影響。將細胞與試驗化合物以3000細胞/孔的密度一起接種在96-孔平底細胞培養(yǎng)臺上并將細胞在37℃下在95％氣和5％CO2的氣氛中培養(yǎng)4天。使用WST-8試劑和(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4二磺苯基)-2H-四唑一鈉鹽；Dojindo Molecular Technologies，Inc.，Gaithersburg，Maryland)測定在用不同濃度化合物處理之后的細胞生長抑制率。在10％的最終濃度下將WST-8添加到每一孔中，然后在37℃下培養(yǎng)該平臺2-3小時。使用ULTRA Tecan閱讀器(Molecular Device)在450nm下測量樣品的吸光率。通過比較未處理的細胞中的和用試驗化合物處理過的細胞中的吸光率計算所試驗化合物的抑制細胞生長50％(IC50)的濃度。

當相對MDA-MB-231人乳癌細胞系和MAMEL-3M黑素瘤細胞系試驗時，SH-164顯示1.4nM的IC50(圖2)。此外，SH-164在若干其它癌細胞系中也是強烈的(圖2)。
實施例15 二價Smac模擬物誘導細胞死亡
使用臺盼藍細胞生存性試驗測試SH-164誘導各種癌細胞系中細胞死亡的能力。將0.3×106細胞接種在6-孔平臺中并在37℃下在95％空氣和5％CO2的氣氛中在有或沒有試驗化合物的情況下培養(yǎng)2天。0.4％臺盼藍(Invitrogen Corporation)的1:1稀釋液用來測定細胞生存性。當用MDA-MB-231、MAMLE-3M和OVCAR-4細胞培養(yǎng)時，SH-164顯示是有效的細胞死亡誘導物(圖3)。在每種情況下，SH-164在100nM的濃度下引起至少70％細胞死亡。
實施例16 二價Smac模擬物及其它試劑的結合物對細胞生長抑制的影響
為了試驗二價Smac模擬物使癌細胞對其它試劑的生長抑制作用敏感的能力，單獨地或與增加劑量的二價Smac模擬物結合地采用各種試劑進行細胞生長抑制試驗。將MDA-MB-231(2LMP)乳癌細胞僅暴露在TRAIL中得到2.2ng/ml的IC50(圖4A)。TRAIL和SH-164的結合顯著地降低TRAIL的IC50，其中在100nM SH-164存在下TRAIL具有0.008ng/ml的IC50。采用MDA-MB-453乳癌細胞看到類似的結果，其中單獨的TRAIL具有>1000ng/ml的IC50，TRAIL和100nM SH-164的結合具有16ng/ml的IC50(圖4B)。當使用PC-3人前列腺癌細胞時，單獨的TRAIL具有>300ng/ml的IC50，而在100nMSH-164存在下TRAIL具有2ng/ml的IC50(圖4C)。SH-122具有類似但是更低效力的效果，其中TRAIL和1000nM SH-122的結合具有30ng/ml的IC50。相反，500nM SH-149不降低TRAIL的IC50。

還試驗SH-164提高化療劑順鉑和米托蒽醌的生長抑制效果的能力。當對MDA-MB-231(2LMP)人乳癌細胞試驗時，在100nM的濃度下SH-164使該細胞對由兩種試劑引起的生長抑制敏感(圖5)。這些數(shù)據(jù)表明二價Smac模擬物能夠使細胞對各種癌癥治療劑的生長抑制效果敏感。
實施例17 細胞凋亡試驗
使用細胞凋亡檢測試劑盒(BioVision Research Products，Mountain View，CA)根據(jù)廠家的規(guī)程進行細胞凋亡分析。簡要地，用Smac模擬物處理細胞12小時，采集并用冰冷PBS洗滌。在室溫下在黑暗中用膜聯(lián)蛋白V-FITC和碘化丙啶(P.I.)染色細胞15分鐘并立即通過FACS calibur流式細胞儀(Becton Dickinson，Erembodegem，Belgium)分析。被染色的細胞膜聯(lián)蛋白V(+)和P.I.(-)認為是早期細胞凋亡細胞。染色細胞膜聯(lián)蛋白V(+)和P.I.(+)認為是晚期細胞凋亡細胞并且染色細胞膜聯(lián)蛋白V(-)和P.I.(+)認為是壞死細胞(圖6)。
實施例18 對XIAP的結合親合性和在細胞生長抑制中的活性
Smac模擬物對XIAP的結合親合性和在細胞生長抑制中的活性在表5中給出。
表5
上面已經(jīng)完整地描述了本發(fā)明，本領域技術人員將能夠理解，可以在廣泛和等同條件、配方和其它參數(shù)的范圍內(nèi)實施本發(fā)明，而不會影響本發(fā)明的范圍或其任何實施方案。將本文引述的所有專利、專利申請和出版物的全部內(nèi)容完整地引入本文作為參考。
權利要求
1.具有以下通式II的化合物或其藥學上可接受的鹽或前藥
其中
A1和A1′獨立地選自氫、任選取代的烷基和Z；
A2和A2′獨立地選自氫、任選取代的烷基和COR1，其中當V是O時不存在A2和當V′是O時不存在A2′；
V和V′獨立地選自N、CH和O；
W和W′獨立地選自CH和N；
X和X′獨立地是任選取代的C1-3烷基；
Y和Y′獨立地選自CONR1，C(O)O，(CR1R2)1-3，其中一個或多個CH2基團可以被O、S或NR1替代，任選取代的芳基和任選取代的雜芳基；
D和D′獨立地選自任選取代的亞烷基和(CR1R2)n-R5a-(CR3R4)m；
J和J′獨立地選自任選取代的亞烷基和(CR1R2)p-R5b-(CR3R4)q；
T和T′獨立地選自C＝O、C＝S、C＝NR1、S、O、NR1、CR1R2、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基；
U和U′獨立地選自氫、NR1R2、OR1、SR1、任選取代的烷基和任選取代的芳基；
n、m、p和q獨立地是0-5；
每個R1選自氫、任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基和Z；
每個R2、R3和R4獨立地選自氫、任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基；
R5a和R5b獨立地選自C＝O、C＝S、C＝NR1、S、O、NR1和CR1R2；和
Z是以共價鍵方式將A1、Y、D、J、T和U之一與A1′、Y′、D′、J′、T′和U′之一連接的連接基。
2.權利要求1的化合物，其中z連接D與U′。
3.權利要求1的化合物，其中Z連接D與D′。
4.權利要求1的化合物，其中Z連接U與U′。
5.權利要求1的化合物，其中n和m獨立地選自0-4，滿足n+m是3或4。
6.權利要求1的化合物，其中p和q獨立地選自0和1，滿足p+q是1。
7.權利要求1的化合物，其中n和m獨立地選自0-4，滿足n+m是3或4，并且p和q獨立地選自0和1，滿足p+q是1。
8.權利要求7的化合物，其中T是C＝O。
9.權利要求8的化合物，其中U是NR1R2。
10.權利要求9的化合物，其中R5b是CH2。
11.權利要求1的化合物，其中Y是CONH，W是CH并且V是N。
12.權利要求1的化合物，選自
或其游離堿或其另一種藥學上可接受的鹽。
13.具有以下通式XIII的化合物
其中
D′′是(CR1R2)n-R5c-(CR3R4)m；
J選自任選取代的亞烷基和(CR1R2)p-R5b-(CR3R4)q；
T選自C＝O、C＝S、C＝NR1、S、O、NR1、CR1R2、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基；
U選自氫、NR1R2、OR1、SR1、任選取代的烷基和任選取代的芳基；
n、m、p和q獨立地選自0-5；
每個R1、R2、R3和R4獨立地選自氫、任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基；
R5c選自C＝O、C＝S、C＝NR1、S、O、NR1、CR1aR2a、NCOR8和NCO2R8；
R1a和R2a獨立地選自氫、羥基、疊氮基、任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基；
R5b選自O、S、NR1、CR1R2、C＝O、C＝S和C＝NR1；
R7選自氫、CO2R7a和COCH(R7b)N(R7c)CO2R7a；
R7a選自任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基；
R7b是任選取代的C1-3烷基；
R7c選自氫和任選取代的烷基；和
R8選自任選取代的烷基、任選取代的碳環(huán)、任選取代的雜環(huán)、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基。
14.權利要求13的化合物，其中R7a是叔丁基。
15.權利要求13的化合物，其中n是1，m是2，R5c是NCO2R8且R8是芐基。
16.權利要求13的化合物，其中R5c是CR1aR2a，R1a選自羥基、疊氮基和任選取代的雜芳基，且R2a是氫。
17.權利要求13的化合物，選自
和
18.藥物組合物，包含權利要求1的化合物和藥學上可接受的載體。
19.誘導細胞中細胞凋亡的方法，包括使所述的細胞接觸權利要求1的化合物。
20.使細胞對細胞凋亡誘導物敏感的方法，包括使所述的細胞接觸權利要求1的化合物。
21.權利要求20的方法，進一步包括使該細胞與細胞凋亡誘導物接觸。
22.權利要求21的方法，其中所述細胞凋亡誘導物是化療劑。
23.權利要求21的方法，其中所述細胞凋亡誘導物是輻射。
24.權利要求21的方法，其中所述細胞凋亡誘導物是腫瘤壞死因子(TNF)、TNF相關配體或TRAIL-R1或TRAIL-R2的激動劑。
25.權利要求24的方法，其中所述TNF相關配體選自TRAMP配體、Fas/CD95配體、TNFR-1配體和TRAIL。
26.權利要求25的方法，其中所述TNF相關配體是TRAIL。
27.權利要求25的方法，其中所述TRAIL-R1或TRAIL-R2的激動劑是抗體。
28.治療、改善或預防對動物中細胞凋亡的誘導有反應性的疾病的方法，包括對所述動物施用治療有效量的權利要求1的化合物。
29.權利要求28的方法，進一步包括施用細胞凋亡誘導物。
30.權利要求28的方法，其中所述細胞凋亡誘導物是化療劑。
31.權利要求29的方法，其中所述細胞凋亡誘導物是輻射。
32.權利要求29的方法，其中所述細胞凋亡誘導物是TNF、TNF相關配體或TRAIL-R1或TRAIL-R2的激動劑。
33.權利要求32的方法，其中所述TNF相關配體選自TRAMP配體、Fas/CD95配體、TNFR-1配體和TRAIL。
34.權利要求33的方法，其中所述TNF相關配體是TRAIL。
35.權利要求32的方法，其中所述TRAIL-R1或TRAIL-R2的激動劑是抗體。
36.權利要求28的方法，其中所述對細胞凋亡的誘導有反應性的疾病為過度增殖性疾病。
37.權利要求36的方法，其中所述過度增殖性疾病是癌癥。
38.權利要求28的方法，其中在所述的細胞凋亡誘導物之前施用權利要求1的所述化合物。
39.權利要求28的方法，其中在所述的細胞凋亡誘導物之后施用權利要求1的所述化合物。
40.權利要求28的方法，其中與所述的細胞凋亡誘導物同時施用權利要求1的所述化合物。
41.治療、改善或預防動物中過度增殖性疾病的方法，包括對所述動物施用治療有效量的權利要求1的化合物。
42.權利要求41的方法，進一步包括施用細胞凋亡誘導物。
43.權利要求42的方法，其中所述細胞凋亡誘導物是化療劑。
44.權利要求42的方法，其中所述細胞凋亡誘導物是輻射。
45.權利要求42的方法，其中所述細胞凋亡誘導物是TNF、TNF相關配體或TRAIL-R1或TRAIL-R2的激動劑。
46.權利要求45的方法，其中所述TNF相關配體選自TRAMP配體、Fas/CD95配體、TNFR-1配體和TRAIL。
47.權利要求46的方法，其中所述TNF相關配體是TRAIL。
48.權利要求45的方法，其中所述TRAIL-R1或TRAIL-R2的激動劑是抗體。
49.權利要求41的方法，其中所述過度增殖性疾病是癌癥。
50.權利要求49的方法，其中在所述的細胞凋亡誘導物之前施用權利要求1的所述化合物。
51.權利要求49的方法，其中在所述的細胞凋亡誘導物之后施用權利要求1的所述化合物。
52.權利要求49的方法，其中與所述的細胞凋亡誘導物同時施用權利要求1的所述化合物。
53.包含權利要求1的化合物和對動物施用所述化合物的說明書的試劑盒。
54.權利要求53的試劑盒，還包含細胞凋亡誘導物。
55.權利要求54的試劑盒，其中所述細胞凋亡誘導物是化療劑。
56.權利要求55的試劑盒，其中所述細胞凋亡誘導物是TNF、TNF相關配體或TRAIL-R1或TRAIL-R2的激動劑。
57.權利要求56的試劑盒，其中所述TNF相關配體選自TRAMP配體、Fas/CD95配體、TNFR-1配體和TRAIL。
58.權利要求57的試劑盒，其中所述TNF相關配體是TRAIL。
59.權利要求56的試劑盒，其中所述TRAIL-R1或TRAIL-R2的激動劑是抗體。
60.權利要求53的試劑盒，其中所述說明書為對患有過度增殖性疾病的動物施用所述化合物的說明書。
61.權利要求60的試劑盒，其中所述過度增殖性疾病是癌癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及Smac的二價模擬物，它用作細胞凋亡蛋白抑制劑的抑制劑。本發(fā)明還涉及這些模擬物用于誘導細胞凋亡和使細胞對細胞凋亡誘導物敏感的用途。
文檔編號A61K31/00GK101484151SQ200780024757
公開日2009年7月15日 申請日期2007年5月4日 優(yōu)先權日2006年5月5日
發(fā)明者王少萌, 孫海鷹, 秦東光, Z·尼克洛夫斯卡-克萊斯卡, 呂建鋒, 肅 邱, 鵬越峰, 倩 蔡 申請人:密執(zhí)安州立大學董事會