專利名稱:遞送用于長效產(chǎn)生抗體的人絨毛膜促性腺激素(hCG)疫苗的方法
遞送用于長效產(chǎn)生抗體的人絨毛膜
促性腺激素(hCG)疫苗的方法
背景技術(shù):
由于缺少使很多新開發(fā)的疫苗有效和安全用于醫(yī)療用途的合適佐 劑/遞送系統(tǒng),它們的應(yīng)用受到阻礙。使用抗原分子的片斷或亞基開發(fā) 了很多新疫苗,使用重組DNA技術(shù)或肽合成制備所述的片斷或亞基, 已顯示當(dāng)對它們的免疫應(yīng)答充分時(shí),所述的新疫苗是有效的。在很多 情況下,引發(fā)充分的免疫應(yīng)答(抗體或細(xì)胞激活)的條件包括使用產(chǎn) 生在注射部位的不能接受的局部炎癥反應(yīng)或其他不期望的副作用的佐 劑或賦形劑。唯一被批準(zhǔn)在人疫苗中使用的佐劑是鋁鹽,其在被抗原 吸收時(shí),增強(qiáng)對抗原的免疫應(yīng)答。令人遺憾的是,這些佐劑僅僅對有 限數(shù)目的抗原充分地有效,并且對使用亞基或肽抗原的新疫苗很少有 用。 一般而言,這些疫苗是弱免疫原性的并且需要比鋁鹽提供的效果 更強(qiáng)的佐劑效果。當(dāng)使用其他一般可利用的佐劑,例如礦物油/水乳劑 時(shí),可以顯示功效,但是副作用,例如在注射部位的疼痛和組織炎癥, 經(jīng)常阻礙其在人中的一般用途。
對給定的抗原產(chǎn)生免疫庫答取決于一系列生物事件,包括抗原 遞送至可到達(dá)淋巴樣細(xì)胞的部位;這些細(xì)胞吸引到其中T淋巴細(xì)胞 (T-細(xì)胞)將抗原識別為異質(zhì)的微環(huán)境;抗原表位與淋巴細(xì)胞受體的結(jié) 合;以及由抗原呈遞細(xì)胞(APCs)、 T細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)(它 們是抗體-產(chǎn)生性細(xì)胞和/或細(xì)胞毒細(xì)胞的克隆擴(kuò)充所需要的)產(chǎn)生適 當(dāng)?shù)募?xì)胞因子。有很多天然的和合成的可以吸引并且刺激這些淋巴樣 細(xì)胞的分子。另外,持續(xù)的體液免疫需要通過保留與小結(jié)樹突細(xì)胞結(jié) 合的非降解的表位序列或通過從儲庫或微粒持續(xù)釋放抗原,將B細(xì)胞 持久暴露于抗原。這種抗原的持久性對保持高水平的抗體產(chǎn)生同時(shí)不 必使用頻繁的加強(qiáng)免疫來說是必要的。困惑。歷史上,將術(shù)語"佐劑"指定為當(dāng)與抗原一同給予時(shí),能夠刺 激比僅給予抗原時(shí)更強(qiáng)的對所述抗原的免疫應(yīng)答的任何物質(zhì)。通常, 由佐劑引起的非特異性刺激淋巴樣細(xì)胞而影響這種增強(qiáng)的應(yīng)答。很多
佐劑,例如對于人使用來說是不能接受的佐劑,弗氏(Freund)完全 佐劑(FCA),可以刺激很多較早涉及的生物學(xué)件,而其他佐劑僅僅顯 示這些活性中的一些。因此,隨著用于鑒定更好的免疫增強(qiáng)劑的研究 進(jìn)展,將這些化合物的性質(zhì)更精確地定義為例如細(xì)胞引誘劑、巨噬細(xì) 胞(APC)活化劑、T-細(xì)胞促分裂原、B-細(xì)胞促分裂原或抗原遞送系 統(tǒng)已成為必需的。已經(jīng)根據(jù)很多這些物質(zhì)的主要活性定義它們,盡管 它們可能產(chǎn)生多種生物效果。很多制劑和免疫方法顯示了活性的組合。 本發(fā)明集中在疫苗制劑方法,該方法被設(shè)計(jì)用于誘導(dǎo)升高的抗體水平 并且使用新型遞送系統(tǒng)保證持久供應(yīng)抗原并且因此在延長的期間內(nèi)維 持抗體產(chǎn)生,伴隨最少的副作用。
例如,幾個(gè)新開發(fā)的疫苗設(shè)計(jì)用于治療感染性疾病以外的醫(yī)學(xué)狀 況。為了避孕或治療癌癥,開發(fā)了至少兩種hCG疫苗。已經(jīng)使用這些 疫苗進(jìn)行了臨床試驗(yàn)并且已經(jīng)報(bào)道了結(jié)果(7Ww W, i7/7g力《尸a7W,
戶roc #a〃」cad Sc/ f美譚J W,《J"-(5", 和^ow/fo/ 〃#,
yos"力/力ara, 戶《 #a<so/7 / 《 iVerse/ 尸Z, 7>ozz/ 尸Z. Jcf/ye
C///7/ca/ C露er / esearc力《,廁4-旭J, ,2)。盡管這些疫苗中 有一些顯示有希望用于人,但經(jīng)常報(bào)道那些顯示效用的疫苗在注射部 位的疼痛和/或腫脹的高發(fā)病率或需要多重免疫。有時(shí)該副作用對某些 患者來說是無法忍受的。
本申請描述的hCG疫苗制劑的一個(gè)主要用途是治療癌癥。將hCG分類為癌胚抗原(一種在胚胎發(fā)育期間高表達(dá)的抗原),但是正常成
人組織表達(dá)的量可忽略不計(jì)。hCG在瘤組織中過度-表達(dá)。盡管僅僅 可能表達(dá)片斷,但目前沒有證據(jù)表明由瘤細(xì)胞表達(dá)的hCG是突變的。 從滋養(yǎng)層細(xì)胞/生殖細(xì)胞中產(chǎn)生的腫瘤(包括絨毛膜癌、水泡狀脂塊和 睪丸胚胎性瘤)產(chǎn)生hCG是這些疾病活性的必要標(biāo)記,并且其量度在這 些疾病的臨床處理中起到中心性作用。廣泛多種非-滋養(yǎng)層起源的腫瘤 也表達(dá)hCG,這也是眾所周知的。因此,滋養(yǎng)層癌和非-滋養(yǎng)層癌癥的 hCG表達(dá)鐠代表一組用于疫苗治療的可能靶點(diǎn)。
Braunstein (Braunstein GD: Placental proteins as tumor markers. In: Immunodiagnosis of Cancer. Herberman RB and Mercer DW (eds) Marcel Dekker, Inc.,紐約,pp 673-701, 1990) 在1990年綜述了癌癥細(xì)胞的hCG表達(dá),并且推測可以在大約18%患有 非-滋養(yǎng)層癌的患者的血清中顯示免疫反應(yīng)性hCG。最通常在患有子宮 頸癌(34%)、卵巢癌(29%)、胰腺癌(27%)、膀胱癌(23%)、肝癌(22%) 和胃癌(21%)的患者的血清中檢測到hCG。但是,大部分這些被綜述 的研究以由多克隆或單克隆抗體對hCG、 hCG-樣材料或游離的hCG亞 基的識別為基礎(chǔ),所述抗體不完全是特異性的或不完全具有高親和力。 最近,更靈敏的、對完整的hCG、 a-hCG、 p-hCG、 (3亞基的羧基末端肽 (CTP)和|3-核片斷具有高特異性的以單克隆為基礎(chǔ)的測定法已經(jīng)使研 究人員可以再評價(jià)腫瘤產(chǎn)生hCG。例如,使用高靈敏的時(shí)間分辨免疫 熒光測定法已經(jīng)在72%患有胰腺癌的患者以及在9%患有非-惡性疾病 的患者中發(fā)現(xiàn)升高的血清-hCG。已經(jīng)報(bào)道了在正常受試者的血清中由 免疫放射分析測定法測定的低-水平hCG和游離的a-hCG亞基是常見 的。但是,游離的p-hCG fe 100 pg/ml)胂瘤特異性更強(qiáng)并且在除了 大部分患有生殖細(xì)胞腫瘤的患者外,還在47%膀胱癌、32%胰腺癌以及 3 0%頸癌患者的血清中被檢測到。正常受試者具有的游離的(3-hCG血清 水平小于100 pg/ml。
膜相關(guān)hCG和/或亞基是培養(yǎng)的癌細(xì)胞系的共同特征。在臨床腫瘤 樣品的免疫組織化學(xué)研究中也經(jīng)常檢測到膜相關(guān)hCG。在Braunstein
13的概述中,在結(jié)腸直腸癌(52%)、肺癌(34%)、胰腺癌(31%)、食管 癌(28%)、乳腺癌(24%)和膀胱癌(21%)中,最頻繁地在腫瘤組織中 檢測到hCG。在大約8-19%胃癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮頸癌和子宮 內(nèi)膜癌中也報(bào)道了免疫組織化學(xué)檢測。另外,被報(bào)道的膜相關(guān)hCG的 表達(dá)發(fā)生變化,取決于研究的技術(shù)和患者人群。在癌癥,例如胃癌和 前列腺癌中的表達(dá)率可能大于最初考慮的表達(dá)率,即大于50%。在其 他研究中,當(dāng)使用特異性單克隆抗體進(jìn)行免痕組織化學(xué)檢測時(shí),由人 結(jié)腸直腸癌樣品表達(dá)的P-hCG CTP是85%。其他研究人員報(bào)道事實(shí)上 在所有癌細(xì)胞系的膜上檢測到了 hCG "cep^/o fr/c力eF; iT J, C,6e" /lcer油 ",&/, ,G Sw/To #/, ^a"雄ir i /.
5^6w3/^5" a/ d /Vs^7Z7e/ f5" cw/fi/Ted力wz/a/7 ca/ cer ce/7s. "腳r伙7《W-化"幼。
將完整的hCG激素用作疫苗抗原是不合適的,因?yàn)獒槍λa(chǎn)生的 抗體將與其他激素反應(yīng)。因此,已經(jīng)將對hCG有特異性的亞基或肽片 斷用作抗原。為了避孕(7Wfrar M, 57/7g/ 《戶a/W, C力a〃eryee ^ /3//<2/.尸,/ a力// & 爿p^cc//7e /7rere/7fs preg/7a/zc/ //z fro/se/L /Yoc ;Va〃 Jcsd5c/ (^萄J夕7.U"-《7"W和ao/ es附,/i/c^ i7, /"g 戶o『e// /, AracT/e7 /, / e/2力o7/z#we//er W, "http://TV;
戶",5Yere/^ 廠C.尸力sse / c///7/ca7 fr/ai 0/ a ^ r/cT ^ea/f力 (Zr^3/7/za〃o" ^'t^力co/7tro7 racc/'/ e. Za"ceL77.. 《,J夕《《)
和為了癌癥治療(#oi/"o/7 ^/, ros/ /力ara,尸《#aso/ /^, i>e"e/ 戶丄, 7>ozzi 戶Z. Jc">e i^ec/Z7c /邁/z7wz6^力era/ / / 一^"/ <2/2
lefaWa〃c Co/oTe"a7 Ca/7cer..爿/7〃6of//Ae5770/7se /4Moc/afed
20。2,和(Tr2'oz//尸Z, Coc力/70wr / , #arf//2 iT,力/cTr/c力^戶( 『e/// 0/7co/ 乂. /W7-W, 7"W,在人中檢測了使用這種抗原的疫 苗。在這些檢測中使用需要多次注射的鋁鹽和油包水乳劑。使用明礬 佐劑的疫苗需要頻繁給藥以保持有效的抗體水平,這使它不能實(shí)際使 用。同樣地,多次注射以乳劑為基礎(chǔ)的疫苗,盡管是更有效的,但有 時(shí)引起不期望水平的注射部位疼痛和腫脹。如果將這些hCG疫苗重新 配制以使用更合適的佐劑/遞送系統(tǒng)(使疫苗有效并且刺激更少),那 么廣泛應(yīng)用這些hCG疫苗中的任何一種是更可能的。
本申請描述的特異性hCG疫苗使用與白喉類毒素綴合的!3-hCG的 兩個(gè)肽區(qū)段CTP部分(殘基109-145)和代表氨基酸38-57區(qū)的第二 肽的綴合物。在本發(fā)明的這個(gè)實(shí)施方案中,使用38-57肽序列的類似 物,而不是天然序列。產(chǎn)生的結(jié)合免疫原更有效地誘導(dǎo)hCG反應(yīng)性抗 體,但是更重要的是,這些抗體在體外和體內(nèi)hCG生物中和中更有效 得多,這在某些應(yīng)用中可以是有價(jià)值的。
使用包含如上描述的綴合物的疫苗的免疫引起了患有轉(zhuǎn)移性結(jié)腸 直腸癌的患者的存活時(shí)間增加,但是沒有解決在注射部位的疼痛和腫 脹的問題。也沒有解決很多疫苗制劑需要多次注射以獲得高并且持久 的抗體應(yīng)答問題廣#。"/"/7 r。s力/力ara,尸《laso力"《iVei^e/7尸丄, 7>ozz2.尸丄.力cf/ye 5^ec/Z7c //zwz7w30fAera;77/ 一〃w/zza" C力or/o/ /c
6Wore"a/ Ca"cer .. J/ 〃6o^y Response J5^oc/afed v"力 Zffl/ /we^ 5^m'73厶 67//72'c" Ca/2cer Wesearc力 《.'M"-2^57,
,從
在最近二十年期間進(jìn)行了廣泛的研究,以鑒定更合適的遞送疫苗 的系統(tǒng)。通過使用脂質(zhì)體、生物可降解的聚合物微球體和用于點(diǎn)膜免 疫的制劑,取得了很多改善。這些系統(tǒng)中的一些正處于臨床試驗(yàn)中并 且可能被證明對將來的疫苗有用。最近開發(fā)了用于藥物遞送(包括疫 苗遞送)的另一種獨(dú)特的系統(tǒng),其為處于上述開發(fā)下的其他系統(tǒng)提供 了顯著優(yōu)勢。當(dāng)用于遞送疫苗時(shí),疫苗抗原被包埋在無機(jī)鹽/生物聚合 物基質(zhì)中,并且將固體基質(zhì)磨成用于所需用途的非常細(xì)的顆粒。為了給予疫苗接受者,將所述微粒懸浮在乳劑介質(zhì)中。這個(gè)方法(經(jīng)證實(shí)
可以用于遞送hCG疫苗制劑,該制劑引發(fā)非常有效的免疫應(yīng)答,伴隨 最少的副作用)構(gòu)成了本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明概述
本發(fā)明描述了制備以hCG為基礎(chǔ)的疫苗的新型方法,該方法包括 將一種或多種hCG肽/白喉類毒素(DT)或破傷風(fēng)類毒素(TT)綴合
油包水為基礎(chǔ)的乳劑中的它們給予人。與類毒素綴合的hCG肽包括那 些代表P亞基序列109-145和38-57以及所述序列的類似物的hCG肽。 前面提到的基質(zhì)由硫酸鈣半水合物和硫酸葡聚糖組成。在將固體基質(zhì) 懸浮在用于遞送的乳劑前,將其磨成細(xì)粉。通過不同的標(biāo)準(zhǔn)篩網(wǎng)連續(xù) 地篩,得到需要的粒度的顆粒。 一種形式的懸浮乳劑可以由角鯊烯、 二縮甘露醇單油酸酯(MM)和磷酸鹽緩沖鹽水組成。在乳化前,可以將 合成的佐劑化合物,例如去甲(nor)-MDP摻入乳劑的含水部分。將多 個(gè)劑量的疫苗肌肉內(nèi)給予接受者。這類制劑和其變體的實(shí)例已經(jīng)顯示 在動物模型中從單次接種開始超過6個(gè)月的期間引發(fā)高水平的對 hCG有反應(yīng)性的抗體,沒有產(chǎn)生不能接受的在注射部位的局部組織反 應(yīng)。由這些制劑產(chǎn)生的抗體可以用于治療患有癌癥的患者并且可以用 于預(yù)防妊娠。
發(fā)明詳述
將hCG肽抗原摻入無機(jī)鹽/生物聚合物基質(zhì)是通過Royer描述的 方法(美國專利第6, 391,336、 6, 497, 901和6, 630, 486號,通過引 用將它們完整地并入本申請)完成的。為了用于本發(fā)明而使用的無機(jī)鹽
是硫酸鈣半水合物,并且使用的生物聚合物是硫酸葡聚糖,優(yōu)選的形 式具有的平均分子量是8000道爾頓。兩個(gè)被包埋的hCG肽抗原代表 以指定的肽比DT的比率與DT綴合的hCG P亞基序列109-145和 38-57或這些肽的類似物或這些綴合物的組合。可以用TT代替DT。按重量比例l-10份鹽比1份抗原,優(yōu)選的比率是4:1,將每個(gè)綴合物抗 原,優(yōu)選在干燥狀態(tài)下,分別與硫酸鈣半水合物混合。在徹底地混合 干燥成分以后,在連續(xù)的攪拌下,將一定體積的含水IO %硫酸葡聚 糖(wt/體積)加入適當(dāng)重量的干燥綴合物/鹽預(yù)混合物以形成漿,其中 所述綴合物均勻分散。記錄在濕狀態(tài)下的混合物重量。在室溫、使用 通風(fēng)的情況下,干燥混合物2-5天,直到觀察不到混合物重量的進(jìn)一 步變化。在使用研缽和研扦或機(jī)械研磨機(jī)將固體基質(zhì)磨成細(xì)粉前,記 錄最終的重量,并且測定所述粉末的水含量。將水含量加干燥產(chǎn)生的 水損失的量用于計(jì)算抗原在固體基質(zhì)中的濃度(質(zhì)量平衡)。通過一系 列標(biāo)準(zhǔn)篩網(wǎng)過篩,得到供使用的期望的微-粒度。用于疫苗制劑的顆粒 尺寸范圍是10-800微米,優(yōu)選的尺寸范圍是45-150微米。
干燥的包含抗原的顆粒通常在室溫下可以穩(wěn)定地長期保存,但是, 如果具體的抗原性質(zhì)期望或需要,可以在冷凍下保存。
為了制備疫苗,將包含抗原的基質(zhì)顆粒懸浮在具有足夠黏滯度的 液體介質(zhì)中以保持顆粒在整個(gè)混懸液中均勻分散。或者,只要顆???br>
以容易地在注射前再懸浮,可以使用較不黏滯的液體介質(zhì)??梢允褂?不同的液體賦形劑,例如油包水乳劑、水包油乳劑、0. 1-2. 0%羧曱基 纖維素、透明質(zhì)酸溶液、卵磷脂溶液或其他可接受的藥物賦形劑。一 種用于hCG綴合物抗原的優(yōu)選賦形劑是角篁烯和磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS)在比率為3份油相比2份PBS (v/v)的油包水乳劑。 一種可接 受的油是由4份角篁烯與1份MM的混合物提供的,其作為乳化劑起 作用并且穩(wěn)定乳劑。使用機(jī)械混合器或使用三路活栓連接的皮下注射 器由手制備乳劑。油相比PBS的其他比率可以用于其他抗原,取決于 疫苗需要的它們的溶解性和/或劑量。也可以使用其他油,例如角鯊?fù)椤?最弱的抗原,包括本發(fā)明使用的hCG綴合物,需要將佐劑化合物 與抗原一起給予以刺激期望的免疫應(yīng)答??梢栽谥苽浠|(zhì)時(shí),將這類 化合物加入基質(zhì)并且和抗原混合或在形成乳劑前,將這類化合物加入 乳劑的含水相。已經(jīng)顯示對于這個(gè)目的來說是有效的佐劑化合物包括 分支桿菌、細(xì)菌膜的合成片斷或這些的合成類似物、鋁鹽、鎂鹽、脂質(zhì)和很多其他化合物(Adams A. Synthetic Adjuvants. 紐約John Wiley & Sons, 1985)。本申請公開的用于本發(fā)明的優(yōu)選佐劑是細(xì)菌膜 的合成類似物,去曱胞壁酰二肽(nor MDP),在化學(xué)上將其定義為N-乙酰基-D-葡糖胺-3-y-L-丙氨酸-D-異谷氨酰胺鈉鹽。這個(gè)化合物非常 溶于水并且以不同濃度被加入角鯊烯/PBS乳劑的含水相以使最終的 乳劑具有的濃度是5-100微克/毫升。
為了疫苗的最終制劑,通過使油/含水混合物在注射器之間前后運(yùn) 動直到得到光滑、乳狀的乳劑,在雙注射器系統(tǒng)中首先形成PBS和油 乳劑。然后,分離包含乳劑的注射器,并且將其與包含干燥抗原顆粒 的新注射器再連接。然后通過前后混合直到在介質(zhì)中得到顆粒的均勻 混懸液,將選擇劑量的基質(zhì)顆粒(由在基質(zhì)中的抗原濃度和需要的抗原 重量測定)懸浮在遞送介質(zhì)。為了將單位劑量分散在無菌小瓶、安瓿、 注射器或其他合適的遞送工具中,可以在免疫時(shí)將干燥的基質(zhì)顆粒與 介質(zhì)混合或?qū)㈩w粒與大體積介質(zhì)分批混合。在乳劑中制備的疫苗優(yōu)選 在2-8 'C的溫度保存。
抗原在基質(zhì)中的濃度可以在12-24%重量變化,優(yōu)選的濃度是 16-18 %。用于人免疫的hCG綴合物的劑量可以是10-500微克并且 可以在0. 1-1. 5毫升中給予。將在適當(dāng)?shù)捏w積中的選擇的抗原和佐劑 劑量在醫(yī)學(xué)上可接受的部位肌肉內(nèi)注射給接受者。在人中,這通常是 在上臂、大腿或臀部。
當(dāng)顆粒懸浮在乳劑中時(shí),被包埋的抗原釋放比當(dāng)懸浮在含水介質(zhì) 中時(shí)慢得多(圖1)。
圖1說明了綴合物DT/ p亞基肽109-145 (CTP/DT)的體外釋 放速率的比較,所述綴合物包埋在無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)中,直接懸浮 在提取介質(zhì)(PBS)中或在首次使用角鯊烯/二縮甘露醇單油酸酯/PBS 乳劑以后。將顆?;蛉榛念w粒放在13 x100 mm含有等分1, 0 mL PBS 的一次性管中,通過渦旋混合并且在37 。C在培養(yǎng)箱中旋轉(zhuǎn)。以所示次數(shù),將管在低速(900 x g)離心5-7分鐘以沉淀顆粒或分配乳劑/ 油/PBS。使用微量移液管吸出上清PBS并且由勞里(Lowry)蛋白測 定方法檢測提取的綴合物的存在。將另一份1. Oml PBS加回至每個(gè)管, 將樣品通過渦旋混合然后如前所述地在37 。C旋轉(zhuǎn)。曲線顯示從直接 懸浮在PBS的顆粒(菱形)以及懸浮在乳劑然后同PBS混合的顆粒 (正方形)提取出的綴合物總量。
圖2說明了在單次注射在1. Oml角鯊烯/PBS乳劑中包含1. Omg 綴合物DT/hCG P亞基肽109-145 (CTP/DT)的基質(zhì)顆粒以后在4只兔 中得到的平均抗體水平,所述乳劑包含0.025 mg去曱-MDP佐劑。
圖3說明了在單次注射在l. 0ml角鯊烯/PBS乳劑中包含1. 0mg 綴合物DT/ P亞基肽38-57類似物(Loop/DT)的基質(zhì)顆粒以后在4只 兔中得到的平均抗體水平,所述乳劑包含0.025 mg去甲-MDP佐劑。
圖4說明了在注射(a) 3次接種不含被包埋在基質(zhì)顆粒中的綴合 物的疫苗(菱形)或(b)單次接種含有被包埋在基質(zhì)顆粒中的綴合物的 疫苗(正方形)以后在兩組兔(4-8只兔/組)中得到的平均抗體水平,其 中每個(gè)制劑包含等量綴合物DT/ P亞基肽109-145 (CTP/DT)和38-57 類似物(Loop/DT)。所有劑量在包含0. 025 mg去曱-MPD佐劑的角篁烯 /PBS乳劑中給予。每次接種包括O. 05mg綴合物并且被施用給兔。對 于接受包含基質(zhì)的疫苗的組,在第1天(左箭頭)給予單劑量在0.5 ml乳劑中的疫苗并且沒有給予進(jìn)一步的注射。對于接受不含基質(zhì)顆粒 的疫苗的組,在第l天(左箭頭)給予在1. Oml乳劑中的劑量并且在 第3周和第6周(中間和右箭頭)再次進(jìn)行給藥。
圖5說明了在使用在第1天和在24周給予每只兔的0.045、 0. 090或0. 135 mg的組合劑量,注射包含等量綴合物DT/ P亞基肽 109-145 (CTP/DT)和38-57類似物(Loop/DT)的基質(zhì)顆粒以后在3組 兔(4-8只兔/組)的平均抗體水平。在包含O. 025 mg去曱-MPD佐劑的 0.5 ml角鯊烯/PBS乳劑中給予所有劑量。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例I
為了考察免疫原從無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)的釋放,發(fā)展了體外方法
以確定釋放速率。將綴合物DT/ P亞基肽109-l45 (CTP/DT)包埋在 無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)中,然后直接懸浮在提取介質(zhì)(PBS)中,或首先 在預(yù)先形成的角篁烯/MM/PBS乳劑中懸浮顆粒后懸浮在PBS中。然后 將顆粒或乳化的顆粒放在含有等分1. 0 mL PBS的13 x 100 mm —次 性管中,由渦旋混合,然后在培養(yǎng)箱在37 。C旋轉(zhuǎn)。以指定的次數(shù), 將管在低速(900 x g)離心5-7分鐘以沉淀顆?;蚍峙淙閯?油 /PBS。使用微量移液管吸出上清PBS并且由勞里蛋白測定方法檢測提 取出的綴合物的存在。然后將另一份1. 0 ml PBS加回每個(gè)管,通過渦 旋混合樣品,然后如前所述地在37 。C旋轉(zhuǎn)。
得到的提取曲線顯示在圖1。在兩個(gè)例子中,無機(jī)/生物聚合物基 質(zhì)保留顯著量的綴合物并且將其在若干天期間內(nèi)釋放。但是,從直接 懸浮在PBS中的顆粒(菱形)比從懸浮在乳劑中然后與PBS混合的顆 粒(正方形)更快得多地提取出綴合物。綴合物的這些較慢釋放速率可 能是在免疫研究中觀察到的高滴定度以及滴定度的長持續(xù)時(shí)間的原因 (下列實(shí)施例II和III),因?yàn)橐阎獜淖⑸洳课宦尫旁鰪?qiáng)對疫苗的免 疫應(yīng)答。以由乳化的顆粒引起的綴合物較強(qiáng)保留為基礎(chǔ),進(jìn)一步的研 究集中在綴合物的這個(gè)制劑。
實(shí)施例II
使用兔作為疫苗接受者進(jìn)行與被摻入無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)的DT (CTP/DT)綴合的抗原P hCG肽109-145的免疫原性檢驗(yàn)。4只兔各自 被注射給予包含在1. 0 ml角篁烯/PBS (60%/40% v/v)乳劑中的1. 0 mg 綴合物的制劑,所述乳劑包含0.025 mg去曱MDP。每周使用放射免 疫測定法測量抗體水平并且將其表達(dá)為nM/L結(jié)合能力。到注射以后 兩周,單次肌肉內(nèi)注射引起了增加的抗體的產(chǎn)生。到7周達(dá)到大于 1,500 nM/L的抗體峰水平并且?guī)讉€(gè)月保持在高于100 nM/L的水平。這 些水平比在結(jié)腸癌患者中提供來自治療的益處所需要的水平高40-100倍(圖2)。
這個(gè)研究顯示所述制劑是非常有效的。與以前在使用相同量的綴 合物但是其中綴合物沒有被包埋在基質(zhì)顆粒中的接種中得到結(jié)果相 比,該數(shù)據(jù)顯示可以使用比使用非基質(zhì)-包埋的制劑更低劑量的包埋在 基質(zhì)中的抗原,以得到治療必需的抗體水平。
實(shí)施例III
除了使用與DT (Loop/DT)綴合的P hCG 38-57類似物肽作為抗 原以外,使用同實(shí)施例II中相同的條件進(jìn)行另一個(gè)試驗(yàn)。得到非常 相似的結(jié)果(圖3)。與以前在使用相同量的綴合物但是其中綴合物沒 有被包埋在基質(zhì)顆粒中的接種中得到結(jié)果相比,該數(shù)據(jù)顯示對于在疫 苗中使用來說,更低劑量的包埋在基質(zhì)中的抗原比非基質(zhì)-包埋的制劑 更有效。
實(shí)施例IV
使用兔作為疫苗接受者,進(jìn)行除了存在或不存在無機(jī)/生物聚合物 基質(zhì)以外是相同的疫苗功效對比。對4只兔各自肌肉內(nèi)注射給予制劑, 在所述制劑中兩個(gè)綴合物(同上述實(shí)施例II和III 一樣的CTP/DT和 Loop/DT)各自為0. 5mg,所述綴合物在0. 5 ml角篁烯/PBS (60%/錫) 乳劑中,所述乳劑包含0.025 mg去甲MDP。每周使用放射免疫測定 法測量抗體水平并且將其表達(dá)為nM/L結(jié)合能力。將單次肌肉內(nèi)注射 包含無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)的疫苗與3次注射缺少無機(jī)/生物聚合物 基質(zhì)的疫苗相比,以獲得近似相同的效果。圖4顯示兩種接種疫苗方 案到注射以后兩周都引起了增加的抗體的產(chǎn)生。但是,與來自缺少無 機(jī)/生物聚合物基質(zhì)的疫苗的那些滴定度相比,從包含無機(jī)/生物聚合 物基質(zhì)的疫苗的注射得到的滴定度達(dá)到了顯著更高的水平并且保持更 高水平,盡管缺少無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)的疫苗被注射3次而包含無機(jī) /生物聚合物基質(zhì)的疫苗被注射1次。
表1比較了免疫得到的組織反應(yīng)。對于沒有被包埋在無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)中的疫苗來說,如在實(shí)施例VI中測量的在注射部位的組織反應(yīng)在所有動物中是最小至適度,但是平均反應(yīng)(損害得分)是1.4,實(shí)質(zhì)上高于臨床上可接受的1.0水平。相反,包含無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)的疫苗的組織反應(yīng)是可以忽略不計(jì)的,并且完全在臨床上可接受的極限內(nèi)。
表1.在注射部位的組織反應(yīng)
不含基質(zhì)含有基質(zhì)兔ABCDEFGH
損害得分*0. 51. 02. 02. 00. 00. 00. 00. 0
組平均值1. 40. 0*按照實(shí)施例VI中的描述進(jìn)行測量
實(shí)施例V
一系列使用單獨(dú)的綴合物的測試顯示每個(gè)被摻到基質(zhì)中的hCG綴合物的安全和有效的劑量在0. OIO和0. 10mg之間。然后開始研究,其中得到等比例CTP/DT和Loop/DT抗原的組合的劑量反應(yīng)。檢測包含共O. 045-0.135 mg組合的綴合物(50/50的比率,w/w)的劑量在兔中引起hCG-特異性抗體產(chǎn)生的能力。在從首次注射起的第l天和在24周進(jìn)行注射。來自這個(gè)研究的抗體性質(zhì)顯示在圖5中。抗體水平,甚至在研究的最低劑量,比足以供臨床使用的水平更高。
按照實(shí)施例VI中測量的組織反應(yīng)在最低劑量時(shí)是最小限度的并且在使用的最高劑量時(shí)是適度的,但是可接受的。
實(shí)施例VI肉眼評價(jià)在注射部位的組織反應(yīng)。
為了評價(jià)在注射測試材料以后大腿肌肉的大體(肉眼)外觀,通過造成橫向的和縱向的切口然后剝離皮膚,將安樂死的動物剝離檢查的大腿的皮膚。小心進(jìn)行與肌肉組織干凈利落的分離,不損傷肌肉組織。使用鋒利的柳葉刀,切開每個(gè)注射部位以暴露大腿肌肉的內(nèi)部。如果為了保證完全的病理學(xué)觀察和評估是必需的,那么制造附加的切口 。
活檢標(biāo)本保存在10%緩沖的福爾馬林中。用于評價(jià)大體外觀的量表0:正常組織
沒有可見的病理現(xiàn)象。在肌肉組織中的炎癥完全溶解以后有時(shí)出現(xiàn)黃色脂肪狀的/纖維狀的組織。不將這種變化評定為病理學(xué)的。1: 最小限度的病理現(xiàn)象
典型的外觀包括小的(<3 mm直徑)硬的小結(jié),其代表包裹的并且分辨的無菌膿肺或炎癥的部位。需要這類病變的組合體積小于總大腿肌肉體積的5%。
2: 適度的病理現(xiàn)象
小結(jié)更大(直徑3-10mm)并且包括接觸時(shí)為硬的(老的纖維質(zhì)生成)或軟的(更最近包裹的)病變。在擠這類病變時(shí),有時(shí)擠出膿或注射物質(zhì)。偶爾觀察到游離的(非包裹的)物質(zhì)。在那種例子中,病變的縱向直徑需要不大于10 mm。病變的組合體積需要在總大腿肌肉體積的5-10°/。之間。
3: 嚴(yán)重的病理現(xiàn)象
大的、包裹的或非包裹的病變,縱向的直徑大于10 mm。通常,病變包含膿(無菌膿腫)或注射物質(zhì)(乳劑)。病變的總體積大于總大腿肌肉體積的10%。
中間等級
當(dāng)病變沒有明確地落入某個(gè)等級定義中時(shí),將中間等級指定為0-1、 1-2或2-3。為了計(jì)算組平均值,將中間等級指定為半值(例如將0-1指定為值0.5)。
權(quán)利要求
1. 一種遞送抗原的方法,該抗原有效引發(fā)針對人絨毛膜促性腺激素(hCG)的抗體,該方法包括將所述抗原摻入無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)中,將摻入了抗原的基質(zhì)懸浮在包含佐劑的油包水乳劑中,并且將含有摻入了抗原的基質(zhì)的乳劑注射到人體中,用于治療患有癌癥的患者。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其中所述抗原是載體蛋白例如白喉類 毒素和hCG p亞基序列109-145的肽或hCG P亞基序列109-145的類 似物肽的綴合物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其中所述抗原是載體蛋白和hCG p 單位序列38-57的肽或hCG |3單位序列38-57的類似物肽的綴合物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其中所述抗原是以下綴合物的任意組合載體蛋白和hCG P亞基序列109-145的肽的綴合物, 載體蛋白和hCG P亞基序列109-145的類似物肽的綴合物, 栽體蛋白和hCG ^單位序列38-57的肽的綴合物, 載體蛋白和hCG P單位序列38-57的類似物肽的綴合物,或 載體蛋白和hCG p亞基的肽的綴合物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其中所述無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)包括 硫酸鉀半水合物/硫酸葡聚糖基質(zhì),或磷酸鈣/硫酸葡聚糖基質(zhì)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其中所述油包水乳劑包含角篁烯和磷 酸鹽緩沖鹽水(PBS)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6的方法,其中所述乳劑進(jìn)一步包含乳化劑。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7的方法,其中所述乳化劑是二縮甘露醇單油酸酯。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8的方法,其中所述角鯊烯和二縮甘露醇單油酸 酯以4:1的比率混合。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9的方法,其中所述角鯊烯二縮甘露醇單油酸 酯混合物用作所述乳劑的油相。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10的方法,其中所述乳劑的油相是乳劑體積的 60%并且PBS是40 0/。。
12. 根據(jù)權(quán)利要求l的方法,其中所述佐劑是N-乙?;?D-葡糖胺 _3-y-L-丙氨酸-D-異谷氨酰胺鈉鹽(nor MDP)。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,通過該方法配制用于治療患有結(jié)腸癌 的患者的疫苗。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,通過該方法配制用于治療患有胰腺癌 的患者的疫苗。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,通過該方法配制用于治療患有膀胱癌 的患者的疫苗。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,通過該方法配制用于治療患有前列腺 癌的患者的疫苗。
17. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,通過該方法配制用于治療患有卵巢癌 的患者的疫苗。
18. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,通過該方法配制用于治療患有肺癌的 患者的疫苗。
19. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,通過該方法配制用于治療患有宮頸癌 的患者的疫苗。
20. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,通過該方法配制用于治療患有乳腺癌 的患者的疫苗。
21. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,通過該方法配制用于治療患有腎癌的 患者的疫苗。
22. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,通過該方法配制用于治療患有肝癌的 患者的疫苗。
23. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法,通過該方法配制用于治療患有黑素瘤 癌的患者的疫苗。
24. —種遞送抗原的方法,該抗原有效引發(fā)針對人絨毛膜促性腺激素(hCG)的抗體,該方法包括將所述抗原摻入無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)中,將摻入了抗原的基質(zhì)懸浮在包含佐劑的油包水乳劑中,并且將含有摻入了抗原的基質(zhì)的乳劑注射到人體中,用于治療患有激素相關(guān)疾病的患者或預(yù)防激素相關(guān)狀況,其中所述激素相關(guān)疾病選自水泡狀脂塊、異位妊娠和癌癥。
25. 根據(jù)權(quán)利要求24的方法,其中所述抗原是載體蛋白例如白喉 類毒素和hCG 「亞基序列109-145的肽或hCG |3亞基序列109-145的 類似物肽的綴合物。
26. 根據(jù)權(quán)利要求24的方法,其中所述抗原是載體蛋白例如白喉 類毒素和hCG (3單位序列38-57的肽或hCG P單位序列38-57的類似 物肽的綴合物。
27. 根據(jù)權(quán)利要求24的方法,其中所述抗原是以下綴合物的任意 組合栽體蛋白和hCG (3亞基序列109-145的肽的綴合物, 載體蛋白和hCG P亞基序列109-145的類似物肽的綴合物, 載體蛋白和hCG ^單位序列38-57的肽的綴合物, 載體蛋白和hCG P單位序列38-57的類似物肽的綴合物,或 載體蛋白和hCG P亞基的肽的綴合物。
28. 根據(jù)權(quán)利要求24的方法,其中所述被預(yù)防的激素相關(guān)狀況是 妊娠。
29. 根據(jù)權(quán)利要求24的方法,其中所述無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)包括 硫酸4丐半水合物/硫酸葡聚糖基質(zhì),或磷酸鉀/硫酸葡聚糖基質(zhì)。
30. 根據(jù)權(quán)利要求24的方法,其中所述油包水乳劑包含角鯊烯和 磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。
31. 根據(jù)權(quán)利要求24的方法,其中所述乳劑進(jìn)一步包含乳化劑。
32. 根據(jù)權(quán)利要求31的方法,其中所述乳化劑是二縮甘露醇單油3曰,
33.根據(jù)權(quán)利要求32的方法,其中所述角鯊烯和二縮甘露醇單油酸酯以4: 1的比率混合。
34. 根據(jù)權(quán)利要求33的方法,其中所述角簠烯二縮甘露醇單油酸 酯混合物用作所述乳劑的油相。
35. 根據(jù)權(quán)利要求34的方法,其中所述乳劑的油相是乳劑體積的 60%并且PBS是400/。。
36. 根據(jù)權(quán)利要求24的方法,其中所述佐劑是N-乙?;?D-葡糖 胺-3-y-L-丙氨酸-D-異谷氨酰胺鈉鹽(nor MDP)。
37. —種遞送抗原的方法,該抗原有效引發(fā)針對人絨毛膜促性腺激 素(hCG)的抗體,該方法包括將抗原摻入無機(jī)鹽/生物聚合物基質(zhì),將摻入了抗原的基質(zhì)懸浮在包含佐劑的油包水乳劑中,并且 將含有摻入了抗原的基質(zhì)的乳劑注射到人體中,用于治療患有hCG 相關(guān)疾病的患者或預(yù)防hCG相關(guān)狀況。
38. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,其中所述無機(jī)鹽/生物聚合物基質(zhì)包 括硫酸鉀半水合物/硫酸葡聚糖基質(zhì)。
39. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,其中所述無機(jī)鹽選自硫酸4丐半水合 物、硫酸釣和磷酸釣,并且所述生物聚合物選自透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素、 蛋白質(zhì)、糖胺聚糖、葡聚糖、硫酸葡聚糖、淀粉、黃原膠、殼聚糖、纖 維素和纖維素衍生物。
40. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,其中所述抗原是載體蛋白例如白喉 類毒素和hCG P亞基序列109-145的肽或hCG P亞基序列109-145的 類似物肽的綴合物。
41. 根據(jù)權(quán)利要求—3了的方法,其中所迷抗原是載體蛋白例如白喉 類毒素和hCG P單位序列38-57的肽或hCG P單位序列38-57的類似 物肽的綴合物。
42. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,其中所述抗原是以下綴合物的任意 組合載體蛋白和hCG |3亞基序列109-145的肽的綴合物, 載體蛋白和hCG P亞基序列109-145的類似物肽的綴合物,載體蛋白和hCG P單位序列38-57的肽的綴合物, 載體蛋白和hCG P單位序列38-57的類似物肽的綴合物,或 載體蛋白和hCG P亞基的肽的綴合物。
43. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,其中所述被預(yù)防的激素相關(guān)狀況是 妊娠。
44. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,其中所述無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)是硫 酸鉤半水合物/硫酸葡聚糖基質(zhì),或磷酸鈣/硫酸葡聚糖基質(zhì)。
45. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,其中所述油包水乳劑包含角鯊烯和 磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。
46. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,其中所述乳劑進(jìn)一步包含乳化劑。
47. 根據(jù)權(quán)利要求46的方法,其中所述乳化劑是二縮甘露醇單油 酸酯。
48. 根據(jù)權(quán)利要求47的方法,其中所述角鯊烯和二縮甘露醇單油 酸酯以4: 1的比率混合。
49. 根據(jù)權(quán)利要求48的方法,其中所述角鯊烯二縮甘露醇單油酸 酯混合物用作所述乳劑的油相。
50. 根據(jù)權(quán)利要求49的方法,其中所述乳劑的油相是乳劑體積的 60%并且PBS是40 0/。。
51. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,其中所述佐劑是N-乙酰基-D-葡糖 胺-3-y-L-丙氨酸-D-異谷氨酰胺鈉鹽(nor MDP)。
52. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,通過該方法配制用于治療患有結(jié)腸癌的患者的疫苗。
53. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,通過該方法配制用于治療患有胰腺癌的患者的疫苗。
54. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,通過該方法配制用于治療患有膀胱癌的患者的疫苗。
55. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,通過該方法配制用于治療患有前列腺癌的患者的疫苗。
56. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法,通過該方法配制用于治療患有卵巢癌的患者的疫苗。
57. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法 的患者的疫苗。
58. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法癌的患者的疫苗。
59. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法 癌的患者的疫苗。
60. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法 的患者的疫苗。
61. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法的患者的疫苗。
62. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法 瘤癌的患者的疫苗。
63. 根據(jù)權(quán)利要求37的方法 脂塊、異位妊娠和癌癥。
64. —種遞送抗原的方法,該抗原有效引發(fā)針對人絨毛膜促性腺激 素(hCG)的抗體,該方法包括將肽抗原與載體綴合以形成綴合的抗原,將所述綴合的抗原摻入無機(jī)/生物聚合物基質(zhì),其中所述綴合的抗 原與硫酸鈣半水合物和硫酸葡聚糖混合,由此將其包埋在硫酸鈣半水合 物/硫酸葡聚糖基質(zhì)中,干燥所述包埋了綴合的抗原的基質(zhì),將干燥的基質(zhì)懸浮在包含佐劑的油包水或水包油乳劑中,并且 將含有包埋了綴合的抗原的基質(zhì)的乳劑注射到人體中,用于治療患 有hCG相關(guān)疾病的患者或預(yù)防hCG相關(guān)狀況。
65. 權(quán)利要求64的方法,其中所述hCG相關(guān)疾病選自水泡狀脂塊, 異位妊娠和癌癥。
66. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,其中所述抗原是載體蛋白例如白喉 類毒素和hCG fi亞基序列109-145的肽或hCG P亞基序列109-145的,通過該方法配制用于治療患有肺癌 ,通過該方法配制用于治療患有宮頸 ,通過該方法配制用于治療患有乳腺 ,通過該方法配制用于治療患有腎癌 ,通過該方法配制用于治療患有肝癌 ,通過該方法配制用于治療患有黑素 ,其中所述hCG相關(guān)疾病選自水泡狀類似物肽的綴合物。
67. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,其中所述抗原是載體蛋白例如白喉 類毒素和hCG P單位序列38-57的肽或hCG P單位序列38-57的類似 物肽的綴合物。
68. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,其中所述抗原是以下綴合物的任意 組合載體蛋白和hCG P亞基序列109-145的肽的綴合物, 載體蛋白和hCG P亞基序列109-145的類似物肽的綴合物, 載體蛋白和hCG P單位序列38-57的肽的綴合物, 載體蛋白和hCG p單位序列38-57的類似物肽的綴合物,或 載體蛋白和hCG P亞基的肽的綴合物。
69. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,其中所述被預(yù)防的激素相關(guān)狀況是 妊娠。
70. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,其中所述無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)包括 硫酸鈣半水合物/硫酸葡聚糖基質(zhì),或磷酸鈣/硫酸葡聚糖基質(zhì)。
71. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,其中所迷油包水乳劑包含角鯊烯和 磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。
72. 根據(jù)權(quán)利要求71的方法,其中所迷乳劑進(jìn)一步包含乳化劑。
73. 根據(jù)權(quán)利要求72的方法,其中所述乳化劑是二縮甘露醇單油 酸酯。
74. 根據(jù)權(quán)利要求73的方法,其中所述角鯊烯和二縮甘露醇單油 酸酯以4: 1的比率混合。
75. 根據(jù)權(quán)利要求74的方法,其中所述角鯊烯二縮甘露醇單油酸 酯混合物用作所述乳劑的油相。
76. 根據(jù)權(quán)利要求75的方法,其中所述乳劑的油相是乳劑體積的 60%并且PBS是40 0/。。
77. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,其中所述佐劑是N-乙?;?D-葡糖 胺-3-y-L-丙氨酸-D-異谷氨酰胺鈉鹽(nor MDP)。
78. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,通過該方法配制用于治療患有結(jié)腸癌的患者的疫苗。
79. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,通過該方法配制用于治療患有胰腺癌的患者的疫苗。
80. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,通過該方法配制用于治療患有膀胱癌的患者的疫苗。
81. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,通過該方法配制用于治療患有前列腺癌的患者的疫苗。
82. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,通過該方法配制用于治療患有卵巢癌的患者的疫苗。
83. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,通過該方法配制用于治療患有肺癌的患者的疫苗。
84. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,通過該方法配制用于治療患有宮頸癌的患者的疫苗。
85. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,通過該方法配制用于治療患有乳腺癌的患者的疫苗。
86. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,通過該方法配制用于治療患有腎癌的患者的疫苗。
87. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,通過該方法配制用于治療患有肝癌 的患者的疫苗。
88. 根據(jù)權(quán)利要求64的方法,通過該方法配制用于治療患有黑素瘤癌的患者的疫苗。
89. —種疫苗-無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)組合物,它包含(a) hCG P亞基的片段,(b) 鉤鹽,以及(c) 基質(zhì)聚合物,其中所述片段基本上被包埋在由鈣鹽和基質(zhì)聚合物形成的無機(jī)/生 物聚合物基質(zhì)中。
90. 根據(jù)權(quán)利要求89的疫苗-無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)組合物,其中所述抗原是以下綴合物的任意組合載體蛋白和hCG P亞基序列109-145的肽的綴合物, 載體蛋白和hCG P亞基序列109-145的類似物肽的綴合物, 載體蛋白和hCG P單位序列38-57的肽的綴合物, 載體蛋白和hCG (3單位序列38-57的類似物肽的綴合物,或 載體蛋白和hCG p亞基的肽的綴合物。
91. 根據(jù)權(quán)利要求89的疫苗-無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)組合物,其中 所述鈣鹽選自硫酸鈣半水合物、硅酸鈣、鋁酸鹽、氫氧化物、磷酸鹽和 磷酸鉀。
92. 根據(jù)權(quán)利要求89的疫苗-無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)組合物,其中 所述基質(zhì)聚合物選自葡聚糖、硫酸葡聚糖、透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素、蛋 白質(zhì)、糖胺聚糖、殼聚糖、淀粉、黃原膠、纖維素、纖維素衍生物、膠 原蛋白、纖維蛋白原、聚谷氨酸、聚天冬氨酸、聚核苷酸、陽離子型多 肽和脫脂白蛋白。
93. 根據(jù)權(quán)利要求89的疫苗-無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)組合物,其中 所述鉤鹽是硫酸釣半水合物。
94. 根據(jù)權(quán)利要求89的疫苗-無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)組合物,其中 所述釣鹽是硫酸4丐。
95. 根據(jù)權(quán)利要求89的疫苗-無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)組合物,其中 所述釣鹽是磷酸4丐。
96. 根據(jù)權(quán)利要求89的疫苗-無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)組合物,其中 所述基質(zhì)聚合物是葡聚糖。
97. 根據(jù)權(quán)利要求89的疫苗-無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)組合物,其中所述基質(zhì)聚合物是硫酸葡聚糖。
98. 根據(jù)權(quán)利要求89的疫苗-無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)組合物,其中所 述無機(jī)/生物聚合物基質(zhì)是硫酸4丐半水合物/疏酸葡聚糖基質(zhì),或磷酸鉤 /硫酸葡聚糖基質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明包括免疫方法,其中使用簡單的制備方法將人絨毛膜促性腺激素(hCG)疫苗抗原摻入無機(jī)鹽/生物聚合物絡(luò)合物。以微粒的形式將產(chǎn)生的固體基質(zhì)給予人受試者。該方法包括將微粒懸浮在包含適于人使用的佐劑化合物的天然油和水的乳劑中以及肌肉內(nèi)注射藥物劑量的懸浮液。疫苗抗原是hCG β亞基的肽片斷與載體蛋白,白喉類毒素的綴合物。本制劑中遞送的疫苗抗原在接受者中引發(fā)抗體用于治療癌癥或激素相關(guān)的疾病中是有效的。
文檔編號A61K39/00GK101466403SQ200780021850
公開日2009年6月24日 申請日期2007年5月2日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月4日
發(fā)明者G·P·羅耶 申請人:羅耶生物醫(yī)藥公司