專利名稱：番茄提取物的治療用途的制作方法
番茄提取物的治療用途 本發(fā)明涉及用于預(yù)防靜脈血栓形成的組合物。
背景技術(shù)：
靜脈血栓形成，即在靜脈中形成血塊，每年造成大量的死亡，并且代
表著世界范圍內(nèi)的重要的健康問題(Lopez, J. A., Kearon, C.， Lee, A. Y.Y. (2004). Deep Venous Thrombosis (深靜脈血栓形成).//emato/ogy (血液學(xué)) 2004: 439-456)。
涉及靜脈血栓形成的主要的臨床疾病包括深靜脈血栓形成(DVT)和肺 栓塞。DVT是這樣的疾病，其中在深靜脈中形成血塊，例如在腿或胳膊中 深靜脈或在下腹部的深靜脈中形成血塊。估計每年在英國每1000人中有 約1-3人發(fā)展了 DVT。在DVT的大多數(shù)情形中，所述血塊很小并且不會 引發(fā)任何癥狀。身體能夠分解這些血塊，因此不會存在長期問題。但是， 在許多情形中，血塊較大并且因此可以部分或完全的阻斷靜脈中的血流， 導(dǎo)致圍繞靜脈的肌肉(例如腓腸肌)的腫脹和肌肉的疼痛。在一些情形中， 血塊的塊可以分解，并且隨血流到肺中，在那里其形成肺栓塞阻斷肺中的 血流，這可能會導(dǎo)致胸痛，呼吸短促或甚至在嚴(yán)重的情形中引起死亡。
己經(jīng)充分意識到一些危險因子，其使DVT更可能在個體中發(fā)生并且 這些包括年老，持續(xù)很長時間的不運動，肥胖癥，最近的外科手術(shù)，傷害 如骨折，使用口服避孕藥物，激素替代療法，懷孕，產(chǎn)褥期，癌癥和治療 癌癥，抗磷脂綜合征，各種遺傳危險因子，和血漿(plasmatic)危險因子。 遺傳危險因子，主要涉及止血系統(tǒng)，包括在編碼抗凝血酶，蛋白質(zhì)C和蛋 白質(zhì)S的基因中的突變，和因子VLeiden和因子IIG20210A突變。血漿 (plasmatic)危險指示物包括hyperhomocysteinemia和升高濃度的因子II, VIII， IX， XI和血纖蛋白原。
血栓形成是由于止血系統(tǒng)的機能障礙或成分的不適合的激活導(dǎo)致的。 止血系統(tǒng)由兩個單獨的但是關(guān)聯(lián)的系統(tǒng)組成血小板和凝蛋白。其主要的功能是協(xié)調(diào)分子信號的網(wǎng)絡(luò)以確保血液的流動性，同時預(yù)防血液損失。如 果發(fā)生了血管損傷，血管系統(tǒng)的完整性由血液保持，其在由血小板啟動并 由凝蛋白增強的過程中，在損傷的位點被轉(zhuǎn)化為不可溶的凝膠。
靜脈和動脈血栓形成發(fā)生的機制以及在兩種類型的血栓中形成的血 塊的結(jié)構(gòu)明顯不同，并且為此原因，通常將靜脈和動脈血栓形成視為不同 的臨床實體。
在動脈血栓形成疾病如動脈粥樣硬化或事件如中風(fēng)或心肌梗塞中，血 小板涉及血栓形成的事件的起始。然而，在涉及靜脈血栓形成的疾病中， 疾病的發(fā)作通過起始凝固級聯(lián)所導(dǎo)致，并且血小板聚集所發(fā)揮的作用要少 得多。確實，發(fā)現(xiàn)血小板聚集抑制劑如阿司匹林在預(yù)防靜脈血栓形成中具 有極少的作用。
組織因子(TF)是跨膜糖蛋白，其是凝固級聯(lián)的主要起始物。在血管損 傷的過程中，發(fā)生血液暴露于內(nèi)皮下的TF。暴露的TF分別充當(dāng)用于因子 Vila (FVIIa)催化激活的因子IX (FIX)和因子X (FX)， tenase和凝血酶原酶復(fù) 合物的關(guān)鍵成分的輔因子。這導(dǎo)致FXa和凝血酶的快速形成。接著，凝血 酶接著將血纖蛋白原裂解成血纖蛋白，其隨后聚合形成血纖蛋白塊。
FVIIa/TF復(fù)合物涉及許多血栓形成疾病的病理機制，并且TF的循環(huán)水 平是血栓形成的危險因子。血液不適合的暴露于TF導(dǎo)致循環(huán)炎性細(xì)胞因子 的慢性上調(diào)，這又升高了急性階段炎性標(biāo)志物如C反應(yīng)性蛋白的循環(huán)水平。 所述炎性系統(tǒng)的這種方式的破壞可以導(dǎo)致在循環(huán)的單核細(xì)胞上的TF表達， 有助于凝固級聯(lián)中的持續(xù)的不平衡，并且溢出進入激活更廣泛的止血系 統(tǒng)。
盡管TF是通過血管損傷被釋放到血流中的，但是經(jīng)常在靜脈壁沒有任 何損傷的情況下發(fā)生DVT。在最近數(shù)年，越來越多的證據(jù)顯示TF在正常的 血漿中循環(huán)[見(l) Giesen等.Blood-bome tissue factor:another view of thrombosis.(血液產(chǎn)生的組織因子血栓形成的另一種觀點).Proc. Natl. Acad. Sci. USA.(美國國家科學(xué)院院報)1999; 96:2311-2315 (2) Koyama等, Determination of plasma tissue factor antigen and its clinical significance(確定 血漿組織因子抗原及其臨床意義).Br丄Haematol.(英國血液學(xué)雜志)1994; 87:343-347;和(3) Albrecht等.Dete乙力,ow o/ czVcw/油'wg" "m認(rèn)pctor朋c//actor F// fl "w7wa/ popM/a"ow(;在正常群體中檢測循環(huán)組織因子和因子 VII). T77rom6. HaemoW. 1996;75:772-777],兩者都與細(xì)胞衍生的膜微泡相 關(guān)，并且作為可溶的，可變剪接形式，發(fā)現(xiàn)具有內(nèi)源TF的微泡在體內(nèi)提睪 肌微循環(huán)中有助于實驗血栓形成(Falati等.M J f實'麥度學(xué)染/蟲J . 2003;197:1585-1598)， 并且己經(jīng)顯示在血友病小鼠中提高止血 (Hrachovinova等.」Va/1. Afe/. 2003;9:1020-1025)。在前面的文獻中所述的實 驗系統(tǒng)中，具有TF的微泡似乎通過在損傷的位點與血小板或激活的內(nèi)皮細(xì) 胞結(jié)合而參與血栓形成，該過程取決于在微泡上的P-選擇蛋白糖蛋白配體 -l(PSGL-l)和在激活的血小板上的P-選擇蛋白之間的相互作用。
國際專利申請WO 99/55350公開了將番茄的水溶性提取物用作血小 板聚集的抑制劑的應(yīng)用。番茄提取物(通過商標(biāo)名Cardioflow⑧或 Fmitflow 已知)的血小板聚集抑制性質(zhì)已經(jīng)受到了廣泛的媒體公開并且 在公眾出版物中提出所述提取物和來自其他來源的番茄提取物可以減少 DVT的危險-見例如，a)Vibrant Life, 1 January 2006(2006年1月1日)，ISSN: 0749-3509; Volume 22 (22巻);Issue 1 (第1期)；(b) Main Report - Health and Wealth Letter, Drinking Tomato Juice Protects The Heart(主要的矛艮道—〈建 康和財富通訊，飲用番茄汁保護心臟)，3 October 2005(2005年10月3日)；(c) Citywire, 18 February 2005 (2005年2月18日)；(d) Vema Noel Jones, Chicago Tribune(芝加哥論壇)，RESOURCES. Q, 16 January 2005 (2005年1 月16日)；(e) Lindsay Mcintosh, Aberdeen Press & Journal, 23 September 2004(2004年9月23日)；(f) The Express, 23 September 2004(2004年9月23 日)，City And Business (城市與商業(yè))編輯Stephen Kahn; (g) Citywire， 22 September 2004 (2004年9月22日);(h) The Sunday Mail(星期日郵箱)，5 September 2004 (2004年9月5日)；(i) ANSA - English Media Service, HEALTH: TOMATOES CAN PREVENT HEART DISEASES(ANSA —英語 媒體服務(wù)，健康番茄可以預(yù)防心臟病)，28 August 2004(2004年8月28 曰)；和類似文獻。
在每一個討論了提取物性質(zhì)的潛在基礎(chǔ)的前述文獻中，關(guān)于提取物在 減少DVT的危險中的潛在應(yīng)用的推測不可避免地基于提取物的已知的血 小板聚集抑制活性。然而，如上述討論，血小板聚集不引起開始的靜脈血栓形成，并且發(fā)現(xiàn)血小板聚集抑制劑如阿司匹林在預(yù)防DVT中作用極少。 在公眾出版物中關(guān)于番茄提取物可以通過它們的血小板聚集抑制性質(zhì)預(yù) 防DVT的報道被同時期的在醫(yī)藥雜志GP(Haymarket出版物，倫敦，英國) 中的文章，2004年4月5日，題為"GP Clinical-Behind The Headlines-Can tomato drink halt blood clots (GP臨床-在標(biāo)題之后-番茄飲料可以防止血液 凝塊嗎？)"所深入剖析。在所述文章中，作者得出結(jié)論，即普通醫(yī)師應(yīng)當(dāng) 告訴他們的患者-"飲料不能幫助防止DVT，因為抗血小板藥劑對靜脈系 統(tǒng)沒有太多作用"。
因此，直到申請人意識到之前，在目前的文獻中沒有證據(jù)顯示番茄提 取物在治療靜脈血栓形成中具有任何的益處。此外，在文獻中也沒有顯示 番茄提取物對起始靜脈血塊形成的凝固級聯(lián)中有任何的作用。
發(fā)明概述
目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由組織因子(TF)介導(dǎo)的事件受番茄的水溶性提取物的 影響，并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)提取物可以在體外減少血液、血漿(其中包括血小板的 血細(xì)胞已經(jīng)被去除)凝固的時間。到目前為止獲得的結(jié)果顯示番茄提取物應(yīng) 該在預(yù)防靜脈血栓形成的起始中是有用的。
因此，在第一個方面，本發(fā)明提供番茄提取物或其活性級分(fraction)
用于預(yù)防或抑制靜脈血栓形成的起始。
在另一個方面，本發(fā)明提供番茄提取物或其活性級分用于預(yù)防或抑制 靜脈中血纖蛋白凝塊形成的起始。
用于本文時，術(shù)語"活性級分"指從番茄提取物中分離的級分，所述 級分具有預(yù)防靜脈中血纖蛋白凝塊形成的起始或預(yù)防靜脈血栓形成起始 的能力。
本發(fā)明還提供
番茄提取物或其活性級分用于制備預(yù)防或抑制靜脈血栓形成的起始的藥 物的應(yīng)用。
番茄提取物或其活性級分用于制備預(yù)防或抑制靜脈中血纖蛋白凝塊形成 的起始的藥物的應(yīng)用。
一種包含番茄提取物或其活性級分的組合物，其用于預(yù)防或抑制靜脈血栓形成的起始。
一種包含番茄提取物或其活性級分的組合物，其用于預(yù)防或抑制靜脈 中血纖蛋白凝塊形成的起始。
一種預(yù)防或抑制哺乳動物如人中靜脈血栓形成的起始，所述方法包括 向哺乳動物施用有效量的番茄提取物或其活性級分。
一種預(yù)防或抑制靜脈中血纖蛋白凝塊形成的起始的方法，所述方法包 括向所述患者施用有效量的番茄提取物或其活性級分。
本發(fā)明的番茄提取物可以涉及預(yù)防或抑制患者中靜脈血栓形成的起 始(或抑制或預(yù)防靜脈中血纖蛋白凝塊的起始)，所述患者由于屬于下列處 于危險中的亞群體中的任何一個或多個(以任何組合)而比正常人遭受更大 的發(fā)生靜脈血栓形成的危險
-年齡超過50歲，例如超過60歲，或超過70歲或超過80歲的患者；
-經(jīng)過了長時間的不運動的患者，例如超過3,4,5,6,7, 8,9, 10, 11或12小
時，或超過l，或2，或3，或4，或5天的時期； -臨床上肥胖的患者；
-最近經(jīng)過外科手術(shù)的患者(例如在過去的這個月，或過去的21天，或過去
的14天，或過去的7天)
-遭受傷害如骨折的患者；
-口服避孕藥物的患者；
-用激素替代療法治療的患者；
-懷孕的患者；
-最近分娩的母親(產(chǎn)褥期)；
-患有癌癥的患者和接受癌癥治療的患者；
-患有抗磷脂綜合征的患者；
-具有遺傳危險因子的患者；和
一具有血漿危險因子的患者。
對于具有遺傳危險因子的患者，所述危險因子可以是下列各項中的任 何一項或多項(以任何組合)
-編碼抗凝血酶的基因中的突變； -編碼蛋白質(zhì)C的基因中的突變；-編碼蛋白質(zhì)S的基因中的突變；
-因子VLeiden突變；和 -因子IIG20210 A突變。
對于具有血漿Oplasmatic)危險因子的患者，危險因子可以是下列各項 中的任何一種或多種(以任何組合) -hyperhomocysteinemia
-升高濃度的因子n; -升高濃度的因子vm;
-升高濃度的因子IX; -升高濃度的因子XI;和 -升高水平的血纖蛋白原。
因此，在另一個方面中，本發(fā)明提供番茄提取物或其活性級分用于 預(yù)防患者中靜脈血栓形成，所述患者處于如本文定義的處于危險中的亞群 體的任何一個或多個(以任何組合)。
本發(fā)明還提供番茄提取物或其活性級分用于制備預(yù)防患者中靜脈血 栓形成的組合物(例如藥物)的應(yīng)用，所述患者處于如本文定義的處于危險 中的亞群體的任何一個或多個(以任何組合)。
本發(fā)明還提供預(yù)防患者(例如哺乳動物患者如人患者)中靜脈血栓形成 的方法，所述患者處于如本文定義的處于危險中的亞群體的任何一個或多 個(以任何組合)，所述方法包括向所述患者施用有效量的番茄提取物或其 活性級分。
在另一個方面，本發(fā)明提供應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或用于應(yīng) 用的組合物，其中所述患者是遭受靜脈血栓形成復(fù)發(fā)，如深靜脈血栓形成 復(fù)發(fā)的人的亞群體中的成員。
用于本文時，術(shù)語"有效量"指的是賦予患者治療效果的量。所述治 療效果可以是客觀的(即由一些測試或標(biāo)記物可測量的)或者主觀的(即，患 者給出效果的指示或感受)。
本發(fā)明的另外方面和實施方案陳述在下面和后附于此的權(quán)利要求中。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的番茄提取物以數(shù)種方式發(fā)揮作用來預(yù)防或抑制組 織因子(TF)的活性。首先，己經(jīng)發(fā)現(xiàn)番茄提取物影響血漿凝固時間(PT,TCT,aPTT)，由此 顯示對凝血因子的可能的調(diào)節(jié)。
其次，己經(jīng)發(fā)現(xiàn)番茄提取物減少在活化的血小板上的p-選擇蛋白的表 達。如上述討論，認(rèn)為具有組織因子的微泡與在血小板和內(nèi)皮細(xì)胞表面上 的p-選擇蛋白的結(jié)合涉及凝固級聯(lián)的起始。
第三，己經(jīng)發(fā)現(xiàn)提取物阻斷TF與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC細(xì)胞)表面 上的PAR2受體的相互作用。所述PAR2受體是TF/FVIIa復(fù)合物和FXa的底
基于上述的三個發(fā)現(xiàn)，認(rèn)為本發(fā)明的番茄提取物和活性級分在抑制靜 脈血栓形成的起始和血纖蛋白凝塊的形成中是有效的。
提取物的制備和表征
盡管完整的番茄或已經(jīng)被切過或分割但未被級分的番茄可以用于本 發(fā)明的目的，優(yōu)選使用番茄的水性提取物。
這樣的提取物可以通過如下制備勻漿有或者沒有皮的番茄果肉，然 后過濾所述勻漿物以除去固體。優(yōu)選地，例如通過離心和/或過濾基本上除 去全部水不溶性固體。
備選地，可以將市場上可買到的番茄醬(tomato paste)用作制備所述提 取物的原材料。 一般將所述番茄醬用水稀釋，然后例如通過離心和/或過濾 除去水不溶性固體，以產(chǎn)生基本上澄清的溶液。
在每種情況中，所述固體的除去具有除去含有番茄紅素的表皮部分的 作用。由此，本發(fā)明的優(yōu)選番茄提取物是基本上不含番茄紅素的水溶性提 取物。
可以將水濾液進行另外的分級分離以提供含有負(fù)責(zé)本文所述的生物 學(xué)或治療效果的一種或多種化合物的活性級分。備選地，可以蒸發(fā)濾液以 產(chǎn)生干燥的水溶性提取物。
番茄勻漿物的過濾可以在單一階段或在一系列過濾步驟中實現(xiàn)，起始 用相對粗濾或離心步驟以除去較大的番茄皮顆粒和/或番茄果肉的其它水 不溶部分。然后可以進行另外的過濾歩驟以產(chǎn)生基本澄清的溶液，例如在 不損失固體情況下經(jīng)過0.2 li過濾器的溶液。由此，在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述番茄提取物是基本上不
含番茄紅素并且能在不損失固體情況下經(jīng)過0.2 u過濾器的水溶性提取物。
在一個實施方案中，從番茄提取物中去除天然糖。去除糖的優(yōu)勢是提 取物的活性被濃縮并且提取物傾向于粘性更小并且更易于以固體形式處 理。
在制備提取物用的原材料是番茄醬的情況下，優(yōu)選地是，通過"冷破 碎(cold-break)"方法而不是"熱破碎(hot-break)"方法而產(chǎn)生。術(shù)語"冷 破碎"和"熱破碎"在番茄加工領(lǐng)域是眾所周知的并且市場上可買到的番 茄醬一般是作為熱破碎或冷破碎醬而銷售。冷破碎醬可以通過包括番茄勻 漿,接著是熱加工歩驟的方法制備，其中將番茄加熱到至多約6(TC的溫度， 與之相反，熱破碎醬，其中勻漿的番茄在約95"C的溫度經(jīng)受熱加工，參見 例如，Anthon 等，J.Agric.Food Chem.(農(nóng)業(yè)食品化學(xué)雜 志)2002,50,6153-6159。
在備選方法中，番茄或番茄醬的水性提取物可以通過下列步驟產(chǎn)生 酶促消化勻漿的果實或醬中的果膠和淀粉，接著從所述勻漿物中去除懸浮 的固體，并以微量過濾或超濾去除較大分子量蛋白質(zhì)和余下的多糖。提取 物可以通過去除簡單糖，例如葡萄糖，果糖和蔗糖來進行提純，留下濃縮 的水溶性提取物，其包含多種低分子量(〈1000Da)的非糖番茄成分。去除 簡單糖可以通過結(jié)晶進行，例如使用低溫超聲波輔助的結(jié)晶，或結(jié)晶的葡 萄糖和果糖的乙醇沉淀進行。備選地，簡單糖可以通過色譜法，例如將來 自水溶液的生物活性提取物成分選擇性吸附到基于聚苯乙烯的樹脂材料 上，使葡萄糖，果糖和蔗糖在廢棄物流中選擇性去除，來從其它提取物成 分進行分離。接著，將吸附的非糖化合物通過用乙醇洗脫，隨后通過蒸發(fā) 去除乙醇而從吸附的樹脂材料中回收?？梢詫⒎翘堑某煞滞ㄟ^噴霧干燥或 轉(zhuǎn)鼓式干燥干燥為水溶性粉末或備選地重懸于水中以得到水性糖漿。以這 種方式制備的水性提取物代表本發(fā)明的另一個方面。
無糖番茄提取物，例如在上述討論的那些，典型地包含多種分子量< 1000Da的化合物并且表示用于根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的優(yōu)選的提取物。
本發(fā)明人還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)番茄提取物如果不具有或具有低含量的核苷，則它們是有功效的。因此，優(yōu)選的提取物在其中不具有核苷，或具有少于
10nM的核苷。
本發(fā)明的番茄提取物包含許多生物活性成分。優(yōu)選的提取物包含選自
下列各項中的生物活性成分酚化合物，氨基酸和氨基酸綴合物，和番茄 香味化合物。
所述提取物優(yōu)選地包含酚化合物，其選自黃酮類化合物和黃酮類化合 物衍生物，例如櫟皮酮，山奈素和柚皮素的衍生物；羥基肉桂酸和衍生物， 例如阿魏酸，香豆酸和它們的綴合物；苯甲酸和衍生物如苯甲酸，羥基苯 甲酸，沒食子酸，水楊酸和綴合物。
提取物優(yōu)選地包含選自酪氨酸，羥基酪氨酸，苯丙氨酸，谷氨酰胺和 它們的綴合物的氨基酸。
所述香味化合物可以選自已醛衍生物，二甲基硫化物，b-大馬酮，3-甲 基丁酸，丁子香酮和methional。
基于極性，番茄提取物可以通過HPLC進行亞分級分離以得到三個亞 級分，AF1, AF2和AF3。在下面的實驗部分中，將未分級分離的提取物(tAF) 和級分AF1- 3用于進行體外實驗。
藥物和營養(yǎng)品制劑
可以配制提取物或其活性級分用于口服。因而，例如，可以將它們 配制為溶液、混懸劑、糖漿劑、片劑、膠囊、錠劑和小吃棒(snackbars)、 插入物和貼片?？梢砸勒毡旧肀娝苤姆椒ㄖ苽溥@樣的劑型。
例如，在選自糖、維生素、調(diào)味劑、著色劑、防腐劑和增稠劑的一種 或多種賦形劑存在下，可以將提取物或活性級分形成糖漿劑或其它用于經(jīng) 口施用的溶液，例如保健飲料。
可以加入張力調(diào)節(jié)劑諸如氯化鈉或糖以提供特定滲透強度的溶液，例 如等張溶液。還可以將一種或多種pH調(diào)節(jié)劑諸如緩沖劑用于調(diào)節(jié)pH至 特定值，并且優(yōu)選將它保持在那個值。緩沖劑的實例包括檸檬酸鈉/檸檬酸 緩沖液和磷酸鹽緩沖液。備選地，例如可以通過噴霧干燥或冷凍干燥千燥提取物或其活性級 分，并且干燥產(chǎn)物以固體或半固體劑型配制，例如作為片劑、錠劑、膠囊、 散劑、粒劑或凝膠形式配制。
簡單的干燥提取物可以在不加入任何另外的成分的情況下進行制備。 備選地，可以通過吸附到固體載體上制備干燥提取物；例如糖諸如蔗糖、 乳糖、葡萄糖、果糖、甘露糖或糖醇諸如木糖醇、山梨糖醇或甘露糖醇； 或纖維素衍生物。其它特別有用的吸附劑包括基于淀粉的吸附劑諸如谷類 面粉例如小麥粉和玉米粉。對于片劑形成，所述干燥提取物一般與稀釋劑 混合，所述稀釋劑諸如糖，例如蔗糖和乳糖，以及糖醇諸如木糖醇、山梨 糖醇和甘露糖醇；或改性纖維素或纖維素衍生物諸如粉末狀纖維素或微晶 纖維素或羧甲基纖維素。所述片劑也將典型含有選自成粒劑、粘合劑、潤 滑劑和崩解劑的一種或多種賦形劑。崩解劑的實例包括淀粉和淀粉衍生 物，及其它可膨脹的聚合物，例如交聯(lián)聚合的崩解劑諸如交聯(lián)羧甲基纖維 素，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和淀粉甘醇酸酯。潤滑劑的實例包括硬脂酸化合 物諸如硬脂酸鎂和硬脂酸。粘合劑和成粒劑的實例包括聚乙烯吡咯烷酮。 在所述稀釋劑不是天然非常甜的情況下，可以加入甜味劑，例如甘草酸銨 (ammonium glycyrrhizinate)或人工甜味劑諸如阿斯巴甜、或糖精鈉。
還可以將干燥提取物配制為裝入膠囊的散劑、粒劑或半固體。當(dāng)以散 劑形式使用時，所述提取物可以連同以上限定的與片劑有關(guān)的任何一種或 多種賦形劑配制，或者可以以未稀釋的形式存在。對于以半固體形式的存 在，所述干燥提取物可以溶解或懸浮在粘性液體或半固體載體諸如聚乙二 醇，或者液體載體諸如二醇例如丙二醇或甘油，或者植物油或魚油例如選 自橄欖油、向日葵油、紅花油、月見草油、豆油、鱈魚肝油、鯡魚油等的 油中。這樣的提取物可以填充到硬明膠或軟明膠類型或者由硬或軟明膠等 價物制成的膠囊中，對于粘性液體或半固體填料，軟明膠或明膠等價物膠 囊是優(yōu)選的。
還可以以散劑形式提供干燥提取物，用于結(jié)合到小吃食品棒例如水果 棒、堅果棒、和谷物棒中。對于以小吃食品棒形式的提供，可以將所述干 燥提取物與選自干果諸如曬干番茄、葡萄干和蘇丹葡萄(sultanas)、落花生 或谷類諸如燕麥和小麥的任何一種或多種組分混合。可以以散劑形式提供干燥提取物，用于再生為溶液。因而它們還可以 含有可溶賦形劑諸如糖，緩沖劑諸如檸檬酸鹽和磷酸鹽緩沖液，和由碳酸 鹽形成的泡騰劑，例如碳酸氫鹽如碳酸氫鈉或碳酸氫銨，和固體酸，例如 檸檬酸或酸性檸檬酸鹽。
在一個優(yōu)選實施方案中，以散劑形式任選連同優(yōu)選的固體(例如粉末狀) 賦形劑提供干燥提取物用于結(jié)合到膠囊例如硬明膠膠囊中。
在另一個實施方案中，干燥提取物是其中去除了基本上所有的天然糖 的干燥提取物。
本發(fā)明的固體或半固體劑型可以含有高達約1000 mg的干燥提取物， 例如高達約800 mg。
所述提取物可以作為食品增補劑或食品添加劑存在，或者可以結(jié)合到 食品例如功能性食品或營養(yǎng)制品中。
本發(fā)明的組合物可以以含有限定濃度的提取物或其活性級分的單位 劑型的形式存在?？梢赃x擇這樣的單位劑型以便實現(xiàn)所需水平的生物活 性。例如，單位劑型可以含有高達1000 mg(干重)的量的提取物或活性級 分，更典型地是高達800 mg，例如50 mg至800 mg，例如100 mg至500 mg。可以包括在單位劑型中的提取物或活性級分的特定量可以選自50 mg、 ]OOmg、 150 mg、 200 mg、 250 mg、 300 mg、 350 mg、 400 mg、 450 mg、 550 mg、 600 mg、 650 mg、 700 mg、 750 mg禾口 800 mg。
本發(fā)明的組合物可以連同施用說明書一起包括在容器、包裝物或分樣 器中。
對于用于預(yù)防或抑制靜脈血栓形成的起始中，每天施用至患者的提取 物或活性級分的量將取決于提取物的濃度、在治療下的特定病癥或疾病以 及它的嚴(yán)重性，并且最終它將按照醫(yī)師的判斷而定。然而施用的量將典型 地是有效帶來所需要結(jié)果的非毒性量。
例如，對于處于遭受靜脈血栓形成的潛在危險中的人患者，典型每日 劑量方案可以是每公斤體重0.0001至0.1，優(yōu)選0.001至0.05克。當(dāng)分離 并施用活性級分時，可以減少施用的固體材料的量，所述減少的量與級分
藥物用途增加的純度一致。典型地，每天將至少100mg(干重或干重等價物)并優(yōu)選 至少200mg，并且更通常是至少500 mg的所述提取物施用至人類患者。
可以以每天單一或多個劑量單位施用所述組合物，例如每天一至四 次，優(yōu)選每天 一或兩次。
本發(fā)明的提取物可以以固體、液體或半固體形式施用。例如，可以以 番茄汁或其濃縮物形式單獨或與其它果汁諸如橙汁混合的形式施用所述 提取物。
附圖簡述
現(xiàn)在將通過下列實施例并參考


來舉例說明本發(fā)明，但其不限
制本發(fā)明，其中
圖l是顯示將本發(fā)明的番茄提取物(tAF)亞分級分離為三個亞級分AFl-AF3的HPLC色譜圖，這如實施例2中所討論。
圖2顯示，如在實施例3中所討論的，AF1 - AF3對體外凝固時間參數(shù) 的影響。tAF的亞級分(AFl- AF3)在用PT, TCT或aPTT試劑起始凝結(jié)之前， 與血漿進行了預(yù)溫育。將所有的抑制劑溶液以0.08g/L的最終濃度進行使
圖3顯示，如在實施例4中所討論，在將全血與番茄提取物活性級分， tAF及其亞級分AFl- AF3進行預(yù)先溫育后，對血小板活化標(biāo)志物p-選擇蛋 白的ADP誘導(dǎo)的表達的抑制。將所有的抑制劑以0.05g/L的最終濃度進行使 用；對于每次測量，n=5。所有的抑制劑顯示與對照的顯著不同0^0.001)。
圖4顯示，如在實施例4中所討論，對于tAF抑制p-選擇蛋白在活化的 血小板中的表達(在圖3中顯示)觀察到的劑量反應(yīng)關(guān)系。
圖5說明與本發(fā)明的番茄提取物的預(yù)溫育減少了由人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 (HUVEC細(xì)胞)產(chǎn)生的白介素-6和白介素-8的水平。在圖中顯示與對照(con -) 的顯著差異，并且在實施例5中進行討論。
實施例1
番茄提取物的制備利用市場上可買到的28-30°白利糖度(即28-30%固體，重量/重量) 的具有褐變指數(shù)(browningindex)(褐變指數(shù)定義為12.5 g溶解性固體/L濃 度的溶液在420 nm的吸光度)<0.350 AU的冷破碎(cold-break)番茄醬作 為原材料制備本發(fā)明治療方法中使用的番茄提取物。將醬用超純水稀釋 ( 1: 5)并用離心過濾除去大的顆粒物質(zhì)，接著利用Westfalia MSB-14分 離器(離心圓盤澄清器)在室溫下澄清。然后用微量過濾在不超過45。C的溫 度除去較小的顆粒物質(zhì)，以產(chǎn)生不含有不溶的沉淀下來(spin down)的固體 的并且能在不損失可溶性固體情況下經(jīng)過0.2 U過濾器的澄清草色 (straw-coloured)溶液。利用仔細(xì)受控條件和不超過80°C的溫度，通過蒸 發(fā)將該溶液濃縮成62-65°白利糖度的糖漿劑，以限制非酶促褐變反應(yīng)的 進行。將快速巴氏滅菌法步驟O^105'C， 3秒)結(jié)合在蒸發(fā)程序的開始。最 終產(chǎn)品特征在于褐變指數(shù)<0.600 AU，以及微生物總平板計數(shù)為<1000。 可以將濃縮的提取物加入橙汁基質(zhì)中以施用于患者。
實施例2
番茄提取物及其亞級分的備選制備
通過將新鮮的番茄(番茄(Aycopem'cow6^CM/e"&m)，當(dāng)?shù)貋碓?勻漿， 離心，并通過超濾(超濾膜，MW截斷值1000 Da,密理博(Millipore )(英 國)Ltd.，沃特福德，UK)澄清得到的草色液體來制備來自成熟番茄果實的 水性提取物。分析顯示番茄水性提取物主要由可溶性糖組成(85 - 90 %的 干物質(zhì))。這些成分用苯乙烯二乙烯基苯(SDVB)柱體(JT Baker， Mallinckrodt Baker BV, Deventer, Holland),在pH 2.5使用固相分離去除。 非糖成分保留在柱體中，并在甲醇中洗脫。分離的非糖物質(zhì)(總活性級分, tAF)占水性提取物干物質(zhì)的約4 %。將半制備HPLC用于將tAF組分亞分級 分離成三個寬纟且(broad groups)(Synergy Polar- RP， 4 u , 250 x 10 mm禾口 Luna CI8(2), 3 U ， 250 x 10 mm柱，菲尼克斯(Phenomenex) , Macclesfield, 英國乙腈/0.05。/。TFA梯度)。將這三個組根據(jù)減少的極性的順序標(biāo)記為
'AF1， ， 'AF2，禾。'AF3，，顯示在圖1中的HPLC色譜圖中。將分離的 tAF和亞級分AFl - AF3在磷酸鹽緩沖液(PBS,西格瑪-奧爾德里奇
(Sigma-Aldrich),普爾，英國)中重構(gòu)為已知的濃度，并將溶液pH調(diào)節(jié)到7.4，之后用于體外實驗。 實施例3
番茄提取物中的成分抑制凝固時間
在前面已經(jīng)顯示了番茄提取物成分在體外和離體抑制血小板聚集(見 我們以前的專利申請WO 99/55350)。血小板代表止血系統(tǒng)的一個部分，與 凝固級聯(lián)協(xié)同作用從而平衡血液流動性和血液凝固。設(shè)計該實驗來檢驗番 茄提取物是否還能夠影響凝固級聯(lián)，而與其對血液血小板的已知作用無 關(guān)。將血漿凝固時間(在去除了血小板的血漿中測量)用于提供反映凝固級 聯(lián)狀態(tài)的測量，這與血小板功能無關(guān)。使用凝血酶原和凝血酶凝固時間 (分別為PT和TCT)來提供對外部系統(tǒng)的充足性的特定測量，結(jié)合因子I (血纖蛋白原),II(凝血酶原),V, VII和X的凝固能力。必須從外部來源加入 組織因子從而容許外部系統(tǒng)(extrinsic system)發(fā)揮功能。使用活化的部分促 凝血酶原激酶時間(aPTT)限定內(nèi)部系統(tǒng)(intrinsic system),并且檢驗因子XII, XI,IX，V和VIII的凝固能力，所述因子在正常情況下全部存在于血漿中。
實驗細(xì)節(jié)按照生產(chǎn)商所指定的方法，在CoaData 4001血凝度計(Helena生 物科學(xué)(Helena Biosciences),英國)上進行凝固時間測量。簡而言之，從 Helena生物科學(xué)(Helena Biosciences)獲得PT, TCT和aPTT試劑以及 Norm-Trol質(zhì)量控制血漿，并且使用來自相同供應(yīng)商的校準(zhǔn)試劑盒將血凝 度計校準(zhǔn)到。/。PT/TCT/aPTT。將加溫到37。C的檸檬酸鹽化的血漿與對照(鹽 水)或處理(見下)溶液一起溫育15分鐘。接著，將處理的血漿與PT/TCT /aPTT試劑一起溫育，伴隨攪拌，并且通過血凝度計一式二份地記錄在凝 塊形成之前所用的時間。接受差異系數(shù)少于5%的一式二份的測量。將 Norm-TrolQC血漿用作對照。
處理將如實施例2中所述的番茄提取物AF1, AF2, AF3用作處理。制備 所有的處理溶液以得到80 u g/ mL血漿的最終濃度。將生理鹽水(0.9% NaCl) 用作對照。在使用前，將所有的對照和處理溶液調(diào)節(jié)到pH 7.4并加溫到37 。C。結(jié)果獲得的數(shù)據(jù)顯示與對照血漿相比，在處理的血漿中凝塊形成發(fā)生的 時間的量增加。圖2顯示與對照值相比，以％抑制凝固時間表示的獲得的結(jié)
果。番茄提取物級分AF1和AF2顯示對凝固吋間參數(shù)最明顯的作用。與內(nèi) 部途徑相比，外部途徑(通過PT和TCT測量)更加強烈地受到影響。
結(jié)論獲得的結(jié)果顯示在體外，番茄提取物的一些成分能夠與在一起構(gòu)成 了凝固級聯(lián)的血液因子相互作用，并且當(dāng)考慮止血系統(tǒng)的總體功能時，這 種效果是令人感興趣的。對外部系統(tǒng)的增加的影響顯示組織因子介導(dǎo)的凝 固途徑通過使用本發(fā)明的番茄提取物可以被有利地抑制，所述組織因子介 導(dǎo)的凝固途徑已知對于靜脈血栓形成是特別重要的。
實施例4
研究番茄提取物對ADP-誘導(dǎo)的血小板p-選擇蛋白表達的影響 設(shè)計下列的實驗以進一歩研究血液凝固可被番茄提取物成分改變的 機制。血小板活化導(dǎo)致前凝血劑信號傳導(dǎo)分子從活化的血小板的表面的釋 放。隨后與血管壁的相互作用導(dǎo)致凝固級聯(lián)的活化。這些前凝血劑血小板 衍生的信號傳導(dǎo)分子的最主要的一個是p-選擇蛋白。在該實驗中，我們使 用針對p-選擇蛋白的熒光標(biāo)記的抗體來測量p-選擇蛋白在活化的血小板表 面的表達。通過流式細(xì)胞術(shù)來定量p-選擇蛋白衍生的熒光的水平。接著， 定量番茄提取物成分對p-選擇蛋白表達的影響。
實驗細(xì)節(jié)將用HEPES-Mg緩沖液(pH 7.4)稀釋1: 10的新鮮取出的全血與處 理溶液(見下)或?qū)φ杖芤?HEPES-Mg緩沖液)一起預(yù)溫育10分鐘。為了誘 導(dǎo)p-選擇蛋白在血小板上的表達，接著將這些混合物的等分試樣(40 ^L)與 或不與ADP (最終濃度為3 )imol/L) —起在Falcon聚苯乙烯試管(BD Biosciences(BD生物科學(xué))，Cowley， UK)中，在室溫溫育5分鐘。接著，將 10)LiL的飽和濃度的兩種熒光標(biāo)記的單克隆抗體加入溫育試管中。將異硫氰 酸熒光素標(biāo)記的抗-CD61(抗-CD61-FITC)加入以陽性鑒定測試樣品中的 所有的血小板(CD61是血小板特異性的蛋白質(zhì)，不由其它的血細(xì)胞表達)。將藻紅蛋白標(biāo)記的抗-p-選擇蛋白(抗-CD62P-PE)加入以結(jié)合表達在血小板 表面上的p-選擇蛋白。將FITC & PE標(biāo)記的小鼠IgG抗體用作同種型對照。 將溫育在室溫，黑暗中進行溫育20分鐘。接著，加入冰冷的磷酸鹽緩沖液 (2ml)并用CellQuest軟件(BD生物科學(xué)(BD Biosciences) , Cowley,英國)， 在FACSCalibur流式細(xì)胞儀上分析所述樣品。將活化的血小板定義為共表 達CD62P受體的CD61-陽性事件的百分比。
處理將如在實施例2中所述的番茄提取物tAF和AFl- AF3用作處理。制 備所有的處理溶液以得到50 pg/mL的最終濃度。將HEPES-Mg緩沖液用作 對照。將所有的對照和處理溶液在使用前調(diào)整為pH 7.4并加溫到37t:。對 于每次測量，n = 5。
結(jié)果在用3 |imol/L ADP刺激后，在對照樣品中記錄41.2 - 68.2 % p-選擇蛋 白陽性的血小板，其中中位值為51.1%。實驗偏差低于5%。與對照值比較 (P < 0.001,圖3)將稀釋的全血與tAF禾口AF1 - AF3—起預(yù)溫育導(dǎo)致活化誘 導(dǎo)的p-選擇蛋白表達的顯著抑制。tAF對p-選擇蛋白表達的影響顯著不同于 亞級分AF1 - AF3的每一種的效果，盡管在個體亞級分之間沒有檢測到任 何差異。在tAF抑制p-選擇蛋白中觀察到劑量反應(yīng)(范圍O - 100叱/mL終濃 度，圖4)。
結(jié)論獲得的結(jié)果顯示在體外，番茄提取物防止p-選擇蛋白在血小板表面 上的表達，減少響應(yīng)于ADP激動劑的血小板活化。這種效果對于凝固級聯(lián) 是相當(dāng)顯著的。p-選擇蛋白在活化的血小板上的表達導(dǎo)致將p-選擇蛋白釋 放到血流中(可溶性的p-選擇蛋白，或sP-選擇蛋白)，導(dǎo)致了在己經(jīng)抑制了 血小板活化后可以持續(xù)的蛋白質(zhì)的來源。更高水平的可溶性p-選擇蛋白與 靜脈血栓形成疾病相關(guān)，這是由于其作為在血小板和單核細(xì)胞之間結(jié)合的 調(diào)節(jié)劑的功能和其與組織因子相互作用以提供在血小板活化和凝固級聯(lián) 之間的關(guān)聯(lián)。我們的結(jié)果顯示這種與凝固級聯(lián)的關(guān)聯(lián)可以由于番茄提取物 對p-選擇蛋白表達的正向作用而被打破；因此，番茄提取物通過減少血小 板結(jié)合和循環(huán)p-選擇蛋白，可以潛在地減少靜脈血栓形成的危險。實施例5
在培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC細(xì)胞)中研究提純的番茄提取物 及其亞級分對TF誘導(dǎo)的細(xì)胞因子釋放的作用
實施例4證明，番茄提取物由于其對p-選擇蛋白在血小板上的表達的抑 制而可以潛在地有利于防止靜脈血栓形成的起始。P-選擇蛋白是組織因子 介導(dǎo)的凝固級聯(lián)起始的整合部分，所述凝固級聯(lián)被認(rèn)為是對靜脈血栓形成 的起始階段負(fù)責(zé)的途徑。我們假定通過減少p-選擇蛋白在活化的血小板或 內(nèi)皮細(xì)胞的表面上的表達，番茄提取物可以防止攜帶組織因子的微泡粘附 于內(nèi)皮細(xì)胞，并出此預(yù)防對于凝血酶產(chǎn)生和凝塊形成所需要的緊密接觸。
為了證明在存在番茄提取物的情況下可以抑制組織因子對內(nèi)皮細(xì)胞 的作用，我們設(shè)計了涉及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC細(xì)胞)的實驗。HUVEC 細(xì)胞表達蛋白酶激活的受體PAR1和PAR2。 PAR2是TF/FVIIa和FXa的底 物，并且當(dāng)激活時，刺激促炎性細(xì)胞因子IL-6和IL-8的釋放。由此，通過 測量TF-介導(dǎo)的IL-6和IL-8的產(chǎn)生，可以評估用番茄提取物成分預(yù)溫育的作 用。
實驗細(xì)節(jié)將HUVEC細(xì)胞培養(yǎng)(至多5代)在BGM-2培養(yǎng)基中。將細(xì)胞血清-饑餓5小時，接著在存在或不存在番燕提取物成分的情況下，用25 nM TF/10nM FVIIa和lOO nM FX處理(處理在下面詳細(xì)解釋)。將處理的細(xì)胞溫 育20小時，在所述時間后，收集上清液并且在-80。C冷凍直到通過EL:SA分 析IL陽6和L-8。
處理將用作"基礎(chǔ)"處理的番茄提取物活性成分(如在實施例2中所述的 tAF)的濃度計算為在正常個體(血液體積5.5L)的循環(huán)中可獲得的最大濃 度，所述個體消耗了2.5個新鮮番茄，假定其充分吸收了全部的成分。對于 tAF，這種量是43 mg/L。還以反映了AFl, AF2和AF3在干重基礎(chǔ)上對tAF 的貢獻的濃度，即對于AFl, AF2和AF3分別為13.6 mg/L, 5.5 mg/L和23.4 mg/L測試了如在實施例2中所述的tAF的三種亞級分，AF1-AF3 。所有的 4種處理在這些基礎(chǔ)濃度上測試，并且也在基礎(chǔ)濃度的2倍和10倍。將鹽水用作對照處理。
結(jié)果用番燕提取物成分進行預(yù)溫育減少了由HUVECs產(chǎn)生的IL-6的水平 達多到12%，減少其所產(chǎn)生的IL8的水平達10 - 50% (見圖5)。這顯示 了已知抑制p-選擇蛋白表達的番茄提取物的成分也通過PAR受體減少了 TF誘導(dǎo)在內(nèi)皮細(xì)胞中的信號傳導(dǎo)級聯(lián)的能力。
AF2和AF3成分比AFl成分更有效-這是由p-選擇蛋白抑制的結(jié)果所反 映的。所用的最高濃度是效果最低的，這可能反映了在溫育階段中更高的 壓力(發(fā)生明顯的細(xì)胞死亡)。IL8產(chǎn)生明顯地比IL6產(chǎn)生更受影響，盡管這 可能是由于在用所用的TF濃度誘導(dǎo)兩種細(xì)胞因子的容易性上的差異。
結(jié)論該實驗的結(jié)果顯示水性番茄提取物減少了 TF與內(nèi)皮細(xì)胞的相互作 用。我們認(rèn)為(見實施例4)，這至少部分是通過其對p-選擇蛋白表達的作 用而發(fā)生的。在內(nèi)皮細(xì)胞中對TF-介導(dǎo)的事件的影響提示作為TF/VIIa與 內(nèi)皮細(xì)胞或活化的血小板相互作用的結(jié)果的凝血酶的產(chǎn)生將被減少，防止 了凝固級聯(lián)的活化和凝塊形成。這是由在實施例3中給出的結(jié)果所支持的， 其中我們顯示番茄提取物成分可以抑制通過外部系統(tǒng)的血漿凝固。我們認(rèn) 為番茄提取物可能對影響靜脈血栓形成的關(guān)鍵機制具有有益影響，并且此 外，對更廣泛的炎性系統(tǒng)具有有益影響。對IL-6的影響顯示肝CRP合成 可以潛在地在體內(nèi)被降低。CRP是對于動脈粥樣硬化和CVD的獨立的危 險因子。對IL-8的影響顯示還可以由番茄提取物成分抑制嗜中性粒細(xì)胞活 化。
實施例6 制劑
(i)膠囊制劑
通過冷凍干燥如實施例1中所描述的番茄提取物并且將得到的冷凍干 燥粉末填充到硬明膠膠囊殼中以產(chǎn)生每膠囊800 mg的膠囊內(nèi)含物來制備 膠囊制劑。(ii) 含有稀釋的番茄提取物的膠囊
向?qū)嵤├?的番茄的水性提取物添加選自蔗糖、乳糖和山梨糖醇的稀 釋劑。然后將得到的混合物冷凍干燥而產(chǎn)生填充到硬明膠膠囊殼中的粉
末，產(chǎn)生每一膠囊800 mg的膠囊內(nèi)含物(200 mg番茄提取物和600 mg稀 釋劑)。
(iii) 水果飲料
可以將實施例1的水性提取物加入到橙汁基質(zhì)中，例如新鮮壓榨的 橙汁中以得到50 mL和200 mL體積的飲料，其每一種包含18 g番茄提取 物的果汁，其等價于在6個新鮮番茄中得到的番茄提取物的量(總的 500g 果肉重量)。
提出上述實施例是為了說明本發(fā)明，并且不應(yīng)當(dāng)理解為對于本發(fā)明的 范圍施加任何限制。將顯而易見的是，可以對上述和在實施例中說明的本 發(fā)明特定實施方案進行許多修改和改變，而不背離本發(fā)明有關(guān)的原則。意 欲將全部這樣的修改由本申請所包含。
權(quán)利要求
1. 番茄提取物或其活性級分用于制備藥物的應(yīng)用，所述藥物用于預(yù)防或抑制靜脈血栓形成的起始。
2. 番茄提取物或其活性級分用于制備藥物的應(yīng)用，所述藥物用于預(yù)防或抑 制靜脈中血纖蛋白凝塊形成的起始。
3. 番茄提取物或其活性級分，其用于預(yù)防或抑制靜脈血栓形成的起始。
4. 番茄提取物或其活性級分，其用于預(yù)防或抑制靜脈中血纖蛋白凝塊形成 的起始。
5. —種用于預(yù)防或抑制靜脈血栓形成的起始的組合物，其包含番茄提取物 或其活性級分。
6. —種用于預(yù)防或抑制靜脈中血纖蛋白凝塊形成的起始的組合物，其包含 番茄提取物或其活性級分。
7. —種預(yù)防或抑制哺乳動物如人中的靜脈血栓形成的起始的方法，所述方 法包括向所述哺乳動物施用有效量的番茄提取物或其活性級分。
8. —種預(yù)防或抑制靜脈中血纖蛋白凝塊形成的起始的方法，所述方法包括 向所述患者施用有效量的番茄提取物或其活性級分。
9. 如前述權(quán)利要求中任一項所定義的應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或組 合物，其中所述番茄提取物是水性提取物。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9的應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或組合物，其中所 述番茄提取物基本上不含番茄紅素。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9或權(quán)利要求10的應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或 組合物，其中所述水性番茄提取物基本不含水不溶性的顆粒物質(zhì)。
12. 根據(jù)權(quán)利要求9-11中任一項的應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或組合 物，其中所述水性番茄提取物基本上不含顆粒物質(zhì)。
13. 根據(jù)權(quán)利要求9-12中任一項的應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或組合 物，其中所述水性番燕提取物能夠通過0.2ii的過濾器而不損失固體。
14. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或組合 物，其中所述番茄提取物已經(jīng)被脫水以得到水溶性的干燥提取物。
15. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或組合 物，其中從完整的番茄或冷破碎的番茄醬制備番茄提取物。
16. 根據(jù)前述權(quán)利耍求中任一項的應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或組合 物，其中所述番茄提取物基本上不含天然糖。
17. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或組合 物，其中所述應(yīng)用是預(yù)防或抑制患者中靜脈血栓形成的起始(或預(yù)防或抑制 靜脈中血纖蛋白凝塊形成的起始)，所述患者由于屬于下列處于危險中的亞 群體中的任何一個或多個(以任何組合)而比正常人遭受更大的發(fā)生靜脈血栓形成的危險(a) 年齡超過50歲，例如超過60歲，或超過70歲或超過80歲的患者；(b) 經(jīng)過了長時間的不運動的患者，例如超過3， 4， 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11或12 小時，或超過l，或2，或3，或4，或5天的時期；(c) 臨床上肥胖的患者；(d) 最近經(jīng)過外科手術(shù)的患者(例如在過去的這個月，或過去的21天，或過 去的14天，或過去的7天)；(d) 遭受傷害如骨折的患者；(e) 口服避孕藥物的患者；(f) 用激素替代療法治療的患者；(g) 懷孕的患者；(h) 最近分娩的母親(產(chǎn)褥期)；(i) 患有癌癥的患者和接受癌癥治療的患者；(D患有抗磷脂綜合征的患者； (k)具有遺傳危險因子的患者；和Cl)具有血漿危險因子的患者。
18. 根據(jù)權(quán)利要求7的應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或組合物，其中所 述患者具有遺傳危險因子，所述危險因子可以是下列各項中的任何一項或 多項(以任何組合)(k-i)編碼抗凝血酶的基因中的突變； Ck-ii)編碼蛋白質(zhì)C的基因中的突變； (k-iii)編碼蛋白質(zhì)S的基因中的突變；(k-iv)因子VLeiden突變；禾口 (k-v)因子II G20210 A突變。
19. 根據(jù)權(quán)利要求17的應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或組合物，其中所 述患者具有血漿危險因子，所述危險因子可以是下列各項中的任何一種或多種(以任何組合)(l-i) hyperhomocysteinemia(l-ii)升高濃度的因子U;(l-iii)升高濃度的因子VIII;(1-iv)升高濃度的因子IX;(l-v)升高濃度的因子XI;禾口(l-vi)升高水平的血纖蛋白原。
20. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的應(yīng)用，用于應(yīng)用的提取物，方法或組合 物，其用于在患者中預(yù)防或抑制靜脈血栓形成的起始(或預(yù)防或抑制靜脈中 血纖蛋白凝塊形成的起始)，所述患者是遭受靜脈血栓形成的復(fù)發(fā)，如深靜 脈血栓形成的復(fù)發(fā)的人的亞群體的成員。
全文摘要
本發(fā)明涉及番茄提取物或其活性級分用于預(yù)防或抑制靜脈血栓形成的起始和靜脈中血纖蛋白凝塊形成的起始。
文檔編號A61K36/81GK101460186SQ200780020435
公開日2009年6月17日 申請日期2007年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月2日
發(fā)明者宋炫周, 尼亞姆·奧肯尼迪 申請人:普魯維克斯天然產(chǎn)物有限公司