專(zhuān)利名稱：：用于預(yù)防或治療fxr介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的作為fxr配體的膽汁酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及可用于治療膽汁淤積疾病的法尼酯X受體(FarnesoidXreceptors,FXR)調(diào)節(jié)劑，尤其涉及膽汁酸中的(324羧基轉(zhuǎn)化為酰氨基、脲基或疏脲基的膽汁酸衍生物。
背景技術(shù)：
：法尼酯X受體(FXR)是最初從大鼠肝的cDNA文庫(kù)中鑒定得到的孤兒核受體(BM.Forman等，Ce〃81:687-693(1995))，其與昆蟲(chóng)蛻皮激素受體最為密切相關(guān)。FXR為包括類(lèi)固醇、類(lèi)維生素A及曱狀腺激素類(lèi)受體的配體活化轉(zhuǎn)錄因子的細(xì)胞核受體家族中的一員(D丄Mangelsdorf等，CW/83:841-850(1995))。RNA印跡及原位分析表明，F(xiàn)XR在肝、腸、腎及腎上腺最大量地表達(dá)(BM.Forman等，CW/81:687-693(1995)和W.Seol等，嵐五油cn'畫(huà)/.9:72-85(1995))。FXR和9-順式視黃酸受體(RXR)—起作為異源二聚體結(jié)合DNA。FXR/RXR異源二聚體優(yōu)先地結(jié)合由具有共有序列AG(G/T)TCA的兩個(gè)細(xì)胞核受體半位點(diǎn)組成的應(yīng)答元件，其中兩個(gè)共有序列構(gòu)成反向重復(fù)并被單一核苷酸分隔(IR-1基序)(BM.Forman等，Ce〃81:687_693(l"5))。一份早期的報(bào)告表明，大鼠FXR被樣i摩爾濃度的法尼酯類(lèi)如法尼醇和保幼激素激活(BM.Forman等，CW/81:687-693(1995))。然而，這些化合物不能激活小鼠及人類(lèi)FXR，這使得內(nèi)源性的FXR配體的性質(zhì)仍然不清楚。一些天然存在的膽汁酸在生理濃度下結(jié)合并激活FXR(PCTW000/37077，(2000年06月29日出版))。在其中討論的作為FXR配體的膽汁酸包括鵝脫氧膽酸(CDCA)、脫氧膽酸(DCA)、石膽酸(LCA)及這些月旦汁酸的?；撬帷⒏拾彼崤悸?lián)物。膽汁酸為膽固醇代謝物，其形成于肝并分泌到腸的十二指腸中，在十二指腸中對(duì)于飲食中的脂質(zhì)與維生素的溶解與吸收發(fā)揮重要的作用。大部分膽汁酸(~95%)隨后在回腸,皮再吸收并通過(guò)腸肝循環(huán)系統(tǒng)返回到肝臟。肝臟中膽固醇向膽汁酸的轉(zhuǎn)化受反饋調(diào)節(jié)膽汁酸下調(diào)細(xì)胞色素P4507a(CYP7a)基因的轉(zhuǎn)錄，CYP7a基因編碼催化膽汁酸生物合成中的限速步驟的酶。有數(shù)據(jù)表明，F(xiàn)XR參與膽汁酸對(duì)CYP7a表達(dá)的抑制，雖然確切的機(jī)制還不清楚(DW.Russell，CW/97:539-542(1999))。在回腸，膽汁酸誘導(dǎo)腸膽汁酸結(jié)合蛋白(IBABP)的表達(dá)，IBABP為一種以高親和力結(jié)合膽汁酸并可能參與它們的細(xì)胞攝取與運(yùn)輸?shù)陌麧{蛋白?，F(xiàn)已有兩個(gè)小組證明，膽汁酸通過(guò)FXR的激活調(diào)節(jié)它們對(duì)于IBABP表達(dá)的作用，F(xiàn)XR結(jié)合在人、大鼠及小鼠的IBABP基因啟動(dòng)子(14;17)中保守的IR-1型應(yīng)答元件。因此，F(xiàn)XR參與涉及膽汁酸與膽固醇的體內(nèi)平衡的靶基因的刺激(IBABP)和抑制(CYP7a)。EP1392714公開(kāi)了作為FXR激動(dòng)劑的3"，70-二羥基-60^乙基-5(3-膽烷-24-酸(下文也稱為6-乙基-鵝脫氧膽酸，6-EDAC)及其溶劑合物和氨基酸偶聯(lián)物，它們可用于制備預(yù)防或治療FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的藥物。EP1568796公開(kāi)了作為FXR激動(dòng)劑的6-乙基-熊去氧膽酸(6-EUDCA)衍生物及其在預(yù)防或治療FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的用途。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了通式(I)的化合物及其藥物可接受的鹽、溶劑合物或氨基酸偶聯(lián)物:其中，R,為氬或烷基；R2為氫或卣素、硝基、烷氧基、氨基或羧基；Y為亞曱基、氧或硫；n為l-4的整數(shù)。另一方面，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中，R^及R2為氬，Y為氧，n為l(式Ia)。另一方面，本發(fā)明提供了一種預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的方法，該方法包括給患FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的哺乳動(dòng)物施用治療有效量的式(I)或(Ia)的化合物。本發(fā)明還提供了式(I)或(Ia)的化合物用于制備預(yù)防或治療FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的藥物的用途。在某些實(shí)施方式中，F(xiàn)XR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)為肝病或狀態(tài)、胃腸疾病或狀態(tài)、腎病或狀態(tài)、心血管疾病或狀態(tài)或代謝疾病或狀態(tài)。在某些實(shí)施方式中，肝病或狀態(tài)為原發(fā)性膽汁肝硬化(PBC)、原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)、藥物誘發(fā)的膽汁淤積、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥、腸胃外營(yíng)養(yǎng)相關(guān)性膽汁淤積(PNAC)、細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)或敗血癥相關(guān)的膽汁淤積、自身免疫性肝炎、病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、移植物抗宿主病、移植肝再生、先天性肝纖維化、膽總管結(jié)石病、肉芽腫肝病、肝內(nèi)或肝外惡性腫瘤、干燥綜合癥、結(jié)節(jié)病、肝豆?fàn)詈俗冃圆?、葡糖腦苷脂沉積病、血色素沉著病或a廣抗胰蛋白酶缺乏癥。在某些實(shí)施方式中，胃腸疾病或狀態(tài)為炎癥性腸病(IBD)(包括局限性回腸炎和潰瘍性結(jié)腸炎)、腸易激綜合征(IBS)、細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)、吸收障石爭(zhēng)、放射后結(jié)腸炎或顯微鏡性結(jié)腸炎。在某些實(shí)施方式中，腎病或狀態(tài)為糖尿病性腎病、局灶節(jié)段性腎小球硬化癥(FSGS)、高血壓性腎硬化、慢性腎小球腎炎、慢性移植腎小球病、慢性間質(zhì)性腎炎或多嚢腎病。在某些實(shí)施方式中，心血管疾病或狀態(tài)為動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈硬化、血脂異常、高膽固醇血癥或高甘油三酯血癥。在某些實(shí)施方式中，代謝疾病或狀態(tài)為胰島素抵抗、糖尿病或肥胖。另一方面，本發(fā)明提供了一種藥物制劑，包含式(I)或(Ia)的化合物，及藥物可接受的載體或稀釋劑。本發(fā)明還提供了包含與藥物可接受的載體和/或稀釋劑混合的式(I)或(Ia)的化合物的藥物組合物。另一方面，本發(fā)明提供了放射標(biāo)記的式(I)或(Ia)的化合物。在另一實(shí)施方式中，式(I)或(Ia)的化合物為用氚標(biāo)記的。附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明圖l顯示了化合物Ia對(duì)于選擇的基因的作用效果。人類(lèi)肝細(xì)胞林HepG2用于這些研究。細(xì)胞與IO(iM的CDCA、6-ECDCA及化合物(Ia)接觸18小時(shí)，并通過(guò)qRT-PCR測(cè)量CYP7Al、SHP、BSEP、SREPB-1C及FAS的表達(dá)。本圖報(bào)告了顯示出同樣模式的4個(gè)實(shí)驗(yàn)中的1個(gè)的結(jié)果。發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明涉及通式(I)的化合物及其藥物可接受的鹽、溶劑合物或氨基酸偶聯(lián)物其中，R,為氬或烷基；R2為氫或卣素、硝基、烷氧基、氨基或羧基；Y為亞甲基、氧或硫；n為l-4的整數(shù)。本申請(qǐng)的目的中，"烷基"意味著含有l(wèi)-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基鏈，"卣素"意味著選自氟、氯、溴和碘的鹵素原子。本發(fā)明的合適的藥物可接受的鹽可由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定，且包括，例如堿鹽，如由鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉及鋅制成的金屬鹽，或由N,N'-二芐基乙二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、葡曱胺(N-甲基葡萄糖胺)及普魯卡因制成的有機(jī)鹽。式(I)化合物的這些鹽可以用常規(guī)技術(shù)由式(I)的化合物來(lái)制備，例如將式(I)的化合物與適當(dāng)?shù)膲A反應(yīng)。當(dāng)用于藥物時(shí)，式(I)化合物的鹽應(yīng)該是藥物可接受的，但是藥物不可接受的鹽可以便利地用于制備相應(yīng)的游離堿或其藥物可接受的鹽。這里所用的術(shù)語(yǔ)"溶劑合物"為包含式(I)化合物或其藥物可接受的鹽及化學(xué)計(jì)算量的或非化學(xué)計(jì)算量的溶劑的結(jié)晶形式。溶劑，舉例來(lái)說(shuō)，包括水、甲醇、乙醇或乙酸。在下文，提及式(I)的化合物，是指該化合物的任何物理形態(tài)，除非特別指明為其特定的形態(tài)、鹽或'溶劑合物。這里所用的術(shù)語(yǔ)"氨基酸偶聯(lián)物"，是指式(I)化合物與任何合適的氨基酸的偶聯(lián)物。優(yōu)選地，這種合適的式(I)化合物的氨基酸偶聯(lián)物具有額外的增加在膽汁或腸液中的穩(wěn)定性的優(yōu)勢(shì)。合適的氨基酸包括但不限于甘氨酸和?；撬?。本發(fā)明的化合物能夠通過(guò)有機(jī)合成領(lǐng)域所熟知的方法制備得到。其中Y為亞曱基的式(I)的化合物可通過(guò)將鵝脫氧膽酸(II)的C24羧基轉(zhuǎn)化為氨基，然后將此氨基衍生物與活化的式(III)羧酸反應(yīng)制備得到，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中，x為羧基活化基團(tuán)。其中Y為氧或硫的式(I)的化合物可通過(guò)將鵝脫氧膽酸(II)的C24羧基轉(zhuǎn)化為異氰酸酯基，然后將此異氰酸酯衍生物與合適的式(IV)的醇或硫醇反應(yīng)制備得到，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中，Y為氧或碌"該合成途徑下文簡(jiǎn)要地概述，并以式(Ia)的化合物(其中，R,及R2為氫，Y為氧，及n為l)的反應(yīng)路線l來(lái)圖示說(shuō)明，這是本發(fā)明最優(yōu)選的實(shí)施方式。3a，7oc-二甲?；?鵝脫氧膽酸(CDCA)(V)按照Goto,J.等CA綴尸/z畫(huà).M/.1979,27，1402-141l報(bào)道的方法獲得，通過(guò)先用乙二酰氯、再用疊氮化鈉水溶液處理而經(jīng)由酰氯中間體轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的?；B氮化合物。粗的?；B氮混合物然后通過(guò)庫(kù)爾提斯重排反應(yīng)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的異氰酸酯(VI)。中間體(VI)然后與肉桂醇(或另一種合適的醇IV)反應(yīng)，得到3a，7a-雙保護(hù)的CDCA氨基甲酸酯類(lèi)似物，其經(jīng)堿水解后，給出預(yù)期的化合物(Ia)。反應(yīng)路線l如在實(shí)驗(yàn)部分所詳細(xì)解釋的，在無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)中及利用人肝細(xì)胞抹測(cè)試化合物(Ia)。該化合物(Ia)顯示，在激活FXR方面比鵝脫氧膽酸(CDCA)強(qiáng)大約20倍，并且產(chǎn)生FXR調(diào)控的基因及膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)子一BSEP(膽鹽輸出泵)一13倍的誘導(dǎo)。與如CDCA的天然的FXR配體相反，化合物(Ia)并不會(huì)誘導(dǎo)'j、異源二聚體伴侶(SHP，缺乏DNA結(jié)合功能域的非典型核受體)，且對(duì)于SREPB-lc及脂肪酸合酶(FAS)沒(méi)有作用，因而表明本發(fā)明的化合物引起的FXR的激活使得能夠選"t奪性地調(diào)節(jié)參與膽汁酸分泌的基因，而對(duì)于涉及脂質(zhì)、膽固醇及葡萄糖代謝的基因無(wú)作用。因此，式(I)化合物作為膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)子BSEP的選擇性調(diào)節(jié)劑發(fā)揮作用，且在沒(méi)有誘導(dǎo)SHP的情況下增加肝臟中膽汁酸的流量；由于這個(gè)原因，它們能夠用于預(yù)防或治療FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)，包括肝病或狀態(tài)(涉及膽汁淤積、脂肪變性、炎癥、纖維化及肝硬化中的一種或多種)、胃腸疾病或狀態(tài)、腎病或狀態(tài)、心血管疾病或狀態(tài)及4戈i射疾病或狀態(tài)?？梢允褂檬?I)的化合物預(yù)防或治療的肝病或狀態(tài)包括但不限于原發(fā)性膽汁肝硬化(PBC),原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC),藥物誘發(fā)的膽汁淤積，妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥，腸胃外營(yíng)養(yǎng)相關(guān)性膽汁淤積(PNAC),細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)或敗血癥相關(guān)的膽汁淤積，自身免疫性肝炎，病毒性肝炎，酒精性肝病，非酒精性脂肪肝病(NAFLD),非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，移植物抗宿主病，移植肝再生，先天性肝纖維化，膽總管結(jié)石病，肉芽腫肝病，肝內(nèi)或肝外惡性腫瘤，干燥綜合癥，結(jié)節(jié)病，肝豆?fàn)詈俗冃圆。咸悄X普脂沉積病，血色素沉著病及a,-抗胰蛋白酶缺乏癥?？梢証f吏用式(I)的化合物預(yù)防或治療的胃腸疾病或狀態(tài)包括但不限于炎癥性腸病(IBD)(包括局限性回腸炎和潰瘍性結(jié)腸炎)、腸易激綜合征(IBS)、細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)、吸收障礙、放射后結(jié)腸炎及顯微鏡性結(jié)腸炎。可以尿病性腎病、局灶節(jié)段性腎小球硬化癥(FSGS)、高血壓性腎硬化、慢性腎小球腎炎、慢性移植腎小球病、慢性間質(zhì)性腎炎及多嚢腎病?？梢允褂檬?I)的化合物預(yù)防或治療的心血管疾病或狀態(tài)包括但不限于動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈硬化、血脂異常、高膽固醇血癥及高甘油三酯血癥?？梢允褂檬?I)的化合物預(yù)防或治療的代謝疾病或狀態(tài)包括但不限于胰島素抵抗、糖尿病及肥胖。本發(fā)明的方法包括施用治療有效量的式(I)化合物的步驟。這里所用的術(shù)語(yǔ)"治療有效量"，是指足夠產(chǎn)生規(guī)定效果的式(I)化合物的量。因此，用于預(yù)防或治療FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的方法中的式(I)化合物的治療有效量，是足夠預(yù)防或治療FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的量。所以，例如，用于預(yù)防或治療膽汁淤積肝病或增加膽汁流量的方法中的式(I)化合物的治療有效量，是足夠增加膽汁向腸的流量的量。產(chǎn)生預(yù)期的生物效應(yīng)所需的式(I)化合物的量取決于諸如預(yù)期的用途、施用方法和接受者的許多因素，且最終由負(fù)責(zé)的醫(yī)師或獸醫(yī)來(lái)判斷。一般地，治療FXR介導(dǎo)的疾病和狀態(tài)的典型日劑量可以預(yù)期為在例如大約0.01-大約100mg/kg的范圍內(nèi)。這個(gè)劑量可以以單一的單位劑量或幾個(gè)獨(dú)立的單位劑量或者通過(guò)連續(xù)輸注施用。所以，另外一方面，本發(fā)明提供了包括作為活性成分的式(I)化合物及至少一種藥用的載體或稀釋劑，和/或式(I)的化合物與至少一種藥用的載體或稀釋劑混合的藥物組合物。這些藥物組合物可用于預(yù)防和治療前述的疾病或狀態(tài)。載體必須是藥物可接受的，而且必須與組合物中的其他成分相容，即對(duì)于組合物中的其他成分不具有有害作用。載體可以為固體或液體，且優(yōu)選配制成單位劑量制劑，例如，可能含有0.05-95重量%的活性成分的片劑。如果需要，其它生理活性成分也可以加入本發(fā)明的藥物組合物中?？赡艿闹苿┌切┻m于口服、舌下、口腔、腸胃外(例如皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi))、直腸、包括經(jīng)皮的局部給藥、鼻內(nèi)和吸入施用的制劑。對(duì)于一個(gè)特定的病人，最適合的施用方式將取決于需治療疾病或狀態(tài)的性質(zhì)和嚴(yán)重程度或所用治療方法的性質(zhì)及取決于活性化合物的性質(zhì)，但是可能的話，口服給藥對(duì)于預(yù)防和治療FXR介導(dǎo)的疾病和狀態(tài)是優(yōu)選的。適于口服給藥的制劑可以形成非連續(xù)的單元，如各含有預(yù)定量的活性化合物的片劑、膠嚢劑、扁嚢劑、錠劑，形成粉劑或顆粒劑，形成水性的或非水性液體的溶液或懸浮液，或形成水包油或油包水型乳液。適于舌下或口腔給藥的制劑包括，含有活性化合物及通常含有如糖、阿拉伯膠或黃耆膠的調(diào)味基質(zhì)的錠劑，和在如明膠和甘油或蔗糖阿拉伯膠的惰性基質(zhì)中含有活性化合物的軟錠劑。適于腸胃外給藥的制劑通常包括含有預(yù)定濃度的活性化合物的無(wú)菌水溶液，該溶液優(yōu)選與預(yù)定接受者的血液等滲。適于腸胃外給藥的其它制劑包括含有生理上適合的助溶劑和/或絡(luò)合劑(如表面活性劑和環(huán)糊精)的制劑。水包油型乳液也是適于腸胃外給藥的制劑。盡管這些溶液優(yōu)選靜脈給藥，它們也可以通過(guò)皮下或肌內(nèi)注射給藥。適于直腸給藥的制劑優(yōu)選形成為在一個(gè)或多個(gè)形成栓劑基質(zhì)的固體載體(如可可脂)中含有活性成分的單位劑量的栓劑。適于局部或鼻內(nèi)給藥的制劑包括軟膏劑、乳劑、洗劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑和油劑。適于這些制劑的載體包括凡士林油、羊毛脂、聚乙二醇、醇類(lèi)及其組合。本發(fā)明的制劑可通過(guò)任何合適的方法制備，典型地通過(guò)按所需的比例將活性化合物與液體或細(xì)碎的固體載體或與這二者均一地、密切地混合，然后，如果需要的話，將產(chǎn)生的混合物形成所需的形狀。例如，片劑可以通過(guò)壓制含有活性成分的粉末或顆粒及一種或多種任選的如粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑或表面活性分散劑的成分的密切混合物，或模制粉狀活性成分和惰性液體稀釋劑的密切混合物獲得。適于吸入給藥的制劑包括可由各種類(lèi)型的定量的加壓按鈕式噴霧器、霧化器或吹入器產(chǎn)生的細(xì)小顆粒粉塵或噴霧。對(duì)于通過(guò)口腔的肺部給藥來(lái)說(shuō)，粉末或小滴的粒徑范圍典型地在0.5-10[im，優(yōu)選l-5|am,以確保藥物輸送到支氣管樹(shù)。對(duì)于鼻內(nèi)給藥來(lái)說(shuō)，粒徑范圍優(yōu)選10-500]Lim，以確保藥物保留在鼻腔中。定量吸入器為典型地在液化推進(jìn)劑中含有活性成分的懸浮液或溶液制劑的加壓噴霧器。在使用時(shí)，這些設(shè)備通過(guò)適于輸送定量體積(通常為10-150^1)的閥釋放制劑，以產(chǎn)生含有活性成分的微粒噴霧。合適的推進(jìn)劑包括某些氯氟烴化合物，如二氯二氟甲烷、三氯氟曱烷、二氯四氟乙烷及其混合物。制劑還可以含有一種或多種助溶劑(例如乙醇)，表面活性劑(如油酸或脫水山梨糖醇三油酸酯)，抗氧化劑及合適的調(diào)味劑。霧化器為可商購(gòu)的設(shè)備，其通過(guò)使壓縮氣體(典型地為空氣或氧氣)經(jīng)窄的文氏噴管加速或通過(guò)超聲攪拌將活性成分的溶液或懸浮液轉(zhuǎn)化為治療的氣溶膠薄霧。適用于霧化器的制劑由分散于液體載體中且占到制劑的最多40重量％,優(yōu)選低于20重量％的活性成分組成。載體典型地為水或稀釋的含水醇溶液，優(yōu)選通過(guò)加入例如氯化鈉使而其與體液等滲。任選的添加劑包括如羥基苯曱酸曱酯的防腐劑(如果制劑不是無(wú)菌制備的)、抗氧化劑、調(diào)味劑、揮發(fā)油、緩沖劑及表面活性劑。適于通過(guò)吹入法給藥的制劑包括可以通過(guò)吹入器輸送或以鼻吸入的方式進(jìn)入鼻腔的細(xì)細(xì)粉碎的粉末。在吹入器中，粉末包含于典型地由明膠或塑料制成的嚢或藥筒中，嚢或藥筒在原位穿通或打開(kāi)，且粉末通過(guò)吸入時(shí)吸？I流過(guò)裝置的空氣輸送或借助于手動(dòng)泵輸送。吹入器所用的粉末或者由單獨(dú)的活性成分組成，或由含有活性成分、適當(dāng)?shù)娜缛樘堑姆勰┫♂寗┘叭芜x的表面活性劑的粉末混合物組成。活性成分典型地占制劑的0.1-100w/w。除上面特別提到的成分之外，本發(fā)明的制劑可能包括藥學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的其它試劑，與涉及的制劑的類(lèi)型有關(guān)。例如，適于口服給藥的制劑可能包括調(diào)味劑，而適于鼻內(nèi)給藥的制劑可能包括香料。因而，根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了式(I)的化合物在制備預(yù)防或治療FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的藥物中的用途。本發(fā)明的方法一般用于哺乳動(dòng)物的治療，一般且尤其用于人類(lèi)。下文的實(shí)驗(yàn)部分將更詳細(xì)地舉例說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例化學(xué)性質(zhì)熔點(diǎn)使用Buchi535電熱裝置測(cè)定，且不進(jìn)4亍才交正。使用BrukerAC200MHz或400MHz光譜儀測(cè)定NMR譜，化學(xué)位移以百萬(wàn)分率(ppm)表示。所用的縮寫(xiě)如下s,單峰；bs,寬單峰；d，雙峰；dd,雙雙峰；m,多重峰。用JascoDip-360數(shù)字旋光儀測(cè)定比旋光度。使用Merck硅膠60(0.040-0.063mm)進(jìn)行快速柱層析。使用以硅膠60F-254(Merck)預(yù)涂覆的薄層層析板進(jìn)行薄層層析。通過(guò)使用磷鉬酸鹽試劑(5%乙醇溶液)染色和加熱來(lái)目測(cè)斑點(diǎn)。所有反應(yīng)在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行。3a，7ot-二甲酰氧基-5卩-膽烷-24-酸(V)的合成將CDCA(II)(15.0g,38.27mmol)溶于83ml四氫呋喃，并用18滴70%HC104處理。然后在40分鐘內(nèi)逐滴加入曱酸(50ml)，獲得的混合物在54。C反應(yīng)8小時(shí)。然后在真空下濃縮混合物，并將殘余物放于水中。過(guò)濾白色沉淀物，用水洗幾遍，于5。C在水中研磨20分鐘，并于高真空下干燥獲得16.5g(36.83mmol,96%)純化合物(V)。'H-NMR(CDC13)5:0.54(s,3H,18-CH3),0.80-0.84(6H,19-CH3和21-CH3)，2.24-2.57(m,2H，23-CH2),4.52-4.76(m,1H，3畫(huà)CH),4.91(m,1H,7-CH)，7.92(s，1H，CHO),7.97(s，1H,CHO)?；衔?VI)的合成用乙二酰氯(7.0ml)處理3a,7a-二曱酰氧基-5(3-膽烷-24-酸(V)(6.0g，13.37mmol),并于35。C在氮?dú)夥罩蟹磻?yīng)3小時(shí)。通過(guò)蒸發(fā)去除乙二酰氯產(chǎn)生相應(yīng)的酰氯，它可溶于無(wú)水丙酮(50ml)。將NaN3(5.2g，80.25mmol)溶于水(25ml)的溶液在0-5。C加入上述溶液中，產(chǎn)生的反應(yīng)混合物在同樣的溫度下再攪拌3小時(shí)。去除溶劑，將殘余物倒入冷水(100ml)中，并用乙醚(3x100ml)萃取。將合并的有機(jī)相用無(wú)水Na2S04干燥，濃縮得到相應(yīng)的酰疊氮化合物(IR:2134和2267cm—。。然后將產(chǎn)生的酰疊氮化合物中間體在無(wú)水甲苯(60ml)中回流5小時(shí)。在真空下濃縮混合物，產(chǎn)生5.1g異氰酸酯衍生物3(11.37mmol,85%，IR:2271cm"),該產(chǎn)物不經(jīng)純化用于下一步。23-N-肉桂氧羰基-3a,7a-二羥基-5P-降膽烷胺(Ia)的合成異氰酸酯(VI)(5.0g,11.25ml)溶于無(wú)水曱苯(25ml)，然后于卯。C在氮?dú)夥障屡c肉桂醇(1.2當(dāng)量)反應(yīng)。用薄層色譜(TLC)檢測(cè)反應(yīng)終點(diǎn)。然后將反應(yīng)混合物倒入水(50ml)中，分離有機(jī)相，并用乙酸乙酯(3x25ml)萃取水相。將合并的有機(jī)相用鹽水洗，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并真空濃縮。然后將粗的23-:^羧基-3a，7ot-二甲酰氧基-5p-降膽烷胺衍生物用飽和的K2C03曱醇溶液(25ml)在室溫下處理過(guò)夜。蒸發(fā)溶劑后，殘余物溶于水(35ml),用2NHC1酸化，并用二氯曱烷(3x25ml)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾，真空濃縮，并以二氯曱烷/甲醇混合物作為洗脫劑，經(jīng)硅膠快速色譜純化，以好的收率(72%)產(chǎn)生預(yù)期化合物(Ia)。mp:79-84。C。'H畫(huà)NMR(CDC13)S:0.67(s，3H，18-CH3)，0.92(s，3H，19-CH3)，0.98-0.99(d，3H,21-CH3),3.09-3,22(m,1H，23-CH2),3.23-3.31(m,1H,23-CH2),3.46-3.57(m,1H,3-CH)，3.86(s，1H,7-CH)，4.73-4.74(d，2H,-OC//2CH),6.28-6.35(m,1H,-OCH2C//)，6.63-6.68(d，1H,-C//Ph),7.25-7.41(m,5H,Ph).13C-NMR(CDC13)S:11,64，18.52,20.46，22.66,23.58，28.24，30.50,32.73，33.67，34.47,34.94,35.21，36.08,38.59,39.30，39.51，39.70，41.36，42.62,50.34，55.91,65.20，68.41,71.92,123.96,126.49,127.83，128.46，133.47，136.28,153.43.生物活性首先，進(jìn)行試驗(yàn)證明與鵝脫氧膽酸(CDCA)相比，化合物(la)是否調(diào)節(jié)FXR調(diào)控的基因。CDCA為作為法尼酯X受體(FXR;NR1H4)的內(nèi)源性配體發(fā)揮作用主要膽汁酸。首先使用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)技術(shù)經(jīng)體外試驗(yàn)測(cè)試化合物(la)對(duì)于FXR活性的生物活性。該技術(shù)(無(wú)細(xì)胞試驗(yàn))在PellicciariR.等，JMedChem.200215;45:3569-72中有描述。在使用FRET的無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)中，在化合物(la)的濃度幾乎低于天然的FXR配體CDCA所需的濃度20倍時(shí)，F(xiàn)XR的一種共激活因子Scr-l的募集出現(xiàn)。表l使用FRET測(cè)量的化合物(la)對(duì)于人類(lèi)FXR的活性<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>1SCR1肽對(duì)FXR的相對(duì)募集率，其中，CDCA=100%。所有數(shù)據(jù)為均值士標(biāo)準(zhǔn)誤，n=4。另外，以使用人肝細(xì)胞林(HepG2)的細(xì)胞試驗(yàn)來(lái)判斷化合物Ia)是否調(diào)節(jié)FXR調(diào)控的基因。在使用HepG2細(xì)胞抹的細(xì)胞轉(zhuǎn)染試驗(yàn)中，化合物(Ia)證明是一種有效的FXR配體。接觸lnM化合物(la)的HepG2細(xì)胞反式激活FXR。在使用以攜帶FXR基因的病毒構(gòu)建體或其它克隆到熒光素酶基因上游的細(xì)胞核受體轉(zhuǎn)染的肝細(xì)胞的其它試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)化合物(Ia)在小鼠、大鼠及人類(lèi)肝細(xì)胞中作為一種選擇性的FXR配體發(fā)揮作用。對(duì)于這些方法的詳細(xì)描述見(jiàn)于以下文獻(xiàn)FiomcciS.等Gastroenterology2004。在HepG2細(xì)胞中化合物(Ia)對(duì)于FXR靶基因表達(dá)的調(diào)控為了確定化合物(Ia)是否為FXR調(diào)節(jié)劑并表現(xiàn)出有差別的活性，用人HepG2細(xì)胞接觸化合物(Ia)，CDCA(天然的FXR配體)及其6-乙基衍生物6-ECDCA,其為有效的FXR配體。然后用定量反轉(zhuǎn)錄PCR(qRT-PCR)測(cè)定這些配體對(duì)于FXR響應(yīng)基因的作用。盡管與這些配體中的任何一個(gè)接觸都沒(méi)有觀察到直接的細(xì)胞毒性，但是，HepG2細(xì)胞接觸CDCA及其6-ECDCA衍生物產(chǎn)生了2-3倍SHP(一種FXR調(diào)控的基因)誘導(dǎo)。相反，盡管化合物(Ia)為FXR配體(見(jiàn)上)，但它未刺激SHP的表達(dá)。所有測(cè)試的FXR配體，即CDCA、6-ECDCA和化合物(Ia)，對(duì)于CYP7ocl產(chǎn)生了相同的作用(所有的試劑導(dǎo)致CYP7cdmRNA的表達(dá)減少60-700/0)。另夕卜，接觸化合物(Ia)對(duì)于BSEPmRNA的表達(dá)產(chǎn)生了有效的誘導(dǎo)(大約13倍誘導(dǎo))?；衔?Ia)的這種效應(yīng)明顯要比其它FXR配體顯著得多。而且，同與其它配體類(lèi)似，與化合物(Ia)的接觸使得對(duì)于SREPB-ic及FASmRNA的表達(dá)產(chǎn)生了類(lèi)似的抑制活性?？傊?，這些數(shù)據(jù)表明，化合物(Ia)為作為有效的FXR配體發(fā)揮作用的FXR調(diào)節(jié)劑，且出乎意料地改變了FXR調(diào)控的基因，從而引起膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)子(如BSEP)的明顯誘導(dǎo)，而沒(méi)有誘導(dǎo)SHP。另外，化合物(Ia)抑制了Cyp7al(—種重要地參與從膽固醇合成膽汁酸的過(guò)程的基因)的表達(dá)。這些FXR耙基因的調(diào)控證明化合物(Ia)為一種基因選擇性的FXR配體，它可以抑制通過(guò)經(jīng)典途徑的膽汁酸的生物合成，同時(shí)增加肝細(xì)胞分泌膽汁酸，而沒(méi)有介入SHP的表達(dá)。這種效應(yīng)是令人滿意的，因?yàn)樗沟眠@些FXR配體的藥理活性變窄，且可以阻止通常與SHP誘導(dǎo)相關(guān)的代謝活化。這些試驗(yàn)的結(jié)果總結(jié)于表2，且圖示于圖l中。表2化合物(Ia)的體外藥理學(xué)研究<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>權(quán)利要求1.式(I)化合物及其藥物可接受的鹽、溶劑合物或氨基酸偶聯(lián)物，其中R1為氫或烷基；R2為氫或鹵素、硝基、烷氧基、氨基或羧基；Y為CH2、氧或硫；及n為1-4的整數(shù)。2.式(I)的化合物，其中，R,及R2為氫，Y為氧，及n為l。3.預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的方法，包括給患FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的哺乳動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求1或2的化合物。4.按照權(quán)利要求3的方法，其中，所述FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)選自肝病或狀態(tài)、胃腸疾病或狀態(tài)、腎病或狀態(tài)、心血管疾病或狀態(tài)及代謝疾病或狀態(tài)。5.按照權(quán)利要求4的方法，其中，所述肝病或狀態(tài)選自原發(fā)性膽汁肝硬化(PBC)、原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)、藥物誘發(fā)的膽汁淤積、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥、腸胃外營(yíng)養(yǎng)相關(guān)性膽汁淤積(PNAC)、細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)或敗血癥相關(guān)的膽汁淤積、自身免疫性肝炎、病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、移植物抗宿主病、移植肝再生、先天性肝纖維化、膽總管結(jié)石病、肉芽腫肝病、肝內(nèi)或肝外惡性腫瘤、干燥綜合癥、結(jié)節(jié)病、肝豆?fàn)詈俗冃圆?、葡糖腦苷脂沉積病、血色素沉著病和a廠抗胰蛋白酶缺乏癥。6.按照權(quán)利要求4的方法，其中，所述胃腸疾病或狀態(tài)選自炎癥性腸病(IBD)、腸易激綜合征(IBS)、細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)、吸收障礙、放射后結(jié)腸炎及顯微鏡性結(jié)腸炎。7.按照權(quán)利要求4的方法，其中，所述腎病或狀態(tài)選自糖尿病性腎病、局灶節(jié)段性腎小球硬化癥(FSGS)、高血壓性腎硬化、慢性腎小球腎炎、慢性移植腎小球病、慢性間質(zhì)性腎炎及多嚢腎病。8.按照權(quán)利要求4的方法，其中，所述心血管疾病或狀態(tài)選自動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈硬化、血脂異常、高膽固醇血癥及高甘油三酯血癥。9.按照權(quán)利要求4的方法，其中，所述代謝疾病或狀態(tài)選自胰島素抵抗、糖尿病及肥胖。10.—種藥物制劑，包含權(quán)利要求1或2的化合物及藥物可接受的載體或稀釋劑。11.權(quán)利要求1或2的化合物，其中，所述的化合物為放射標(biāo)記的。12.權(quán)利要求ll的化合物，其中，所述的化合物為用氚標(biāo)記的。13.權(quán)利要求1或2的化合物用于制備預(yù)防或治療FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的藥物組合物的用途。14.權(quán)利要求1或2的化合物用于制備預(yù)防或治療FXR介導(dǎo)的疾病的藥物組合物的用途，所述FXR介導(dǎo)的疾病選自肝病或狀態(tài)、胃腸疾病或狀態(tài)、腎病或狀態(tài)、心血管疾病或狀態(tài)及^j射疾病或狀態(tài)。15.權(quán)利要求1或2的化合物用于制備預(yù)防或治療肝病或狀態(tài)的藥物組合物的用途，所述肝病或狀態(tài)選自原發(fā)性膽汁肝硬化(PBC)、原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)、藥物誘發(fā)的膽汁淤積、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥、腸胃外營(yíng)養(yǎng)相關(guān)性膽汁淤積(PNAC)、細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)或敗血癥相關(guān)的膽汁淤積、自身免疫性肝炎、病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、移植物抗宿主病、移植肝再生、先天性肝纖維化、膽總管結(jié)石病、肉芽肺肝病、肝內(nèi)或肝外惡性胂瘤、千燥綜合癥、結(jié)節(jié)病、肝豆?fàn)詈俗冃圆?、葡糖腦苷脂沉積病、血色素沉著病及a,-抗胰蛋白酶缺乏癥。16.權(quán)利要求1或2的化合物用于制備預(yù)防或治療胃腸疾病或狀態(tài)的藥物組合物的用途，所述胃腸疾病或狀態(tài)選自炎癥性腸病(IBD)、腸易激綜合征(IBS)、細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)、吸收障礙、放射后結(jié)腸炎及顯微鏡性結(jié)腸炎。17.權(quán)利要求1或2的化合物用于制備預(yù)防或治療腎病或狀態(tài)的藥物組合物的用途，所述腎病或狀態(tài)選自糖尿病性腎病、局灶節(jié)段性腎小球硬化癥(FSGS)、高血壓性腎硬化、慢性腎小球腎炎、慢性移植腎小球病、慢性間質(zhì)性腎炎及多嚢腎病。18.權(quán)利要求1或2的化合物用于制備預(yù)防或治療心血管疾病或狀態(tài)的藥物組合物的用途，所述心血管疾病或狀態(tài)選自動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈硬化、血脂異常、高膽固醇血癥及高甘油三酯血癥。19.權(quán)利要求1或2的化合物用于制備預(yù)防或治療代謝疾病或狀態(tài)的藥物組合物的用途，所述代謝疾病或狀態(tài)選自胰島素抵抗、糖尿病及肥胖。20.含有與藥物可接受的載體和/或稀釋劑混合的權(quán)利要求1或2的化合物的藥物組合物。全文摘要本發(fā)明涉及用于治療FXR介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的式(I)化合物及其藥物可接受的鹽、溶劑合物或氨基酸偶聯(lián)物，其中，R₁為氫或烷基；R₂為氫或鹵素、硝基、烷氧基、氨基或羧基；Y為CH₂、氧或硫；n為1-4的整數(shù)。文檔編號(hào)A61K31/56GK101395170SQ200780007338公開(kāi)日2009年3月25日申請(qǐng)日期2007年2月14日優(yōu)先權(quán)日2006年2月14日發(fā)明者M(jìn)·普魯贊斯基,R·佩爾利克西亞里,S·菲奧魯西申請(qǐng)人:英特塞普特藥品公司