專利名稱：：Ace抑制劑/利尿劑/葉酸聯(lián)用的藥物組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制劑/利尿劑/葉酸聯(lián)合應(yīng)用的藥物組合物及其用途，屬于藥學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：作為危害人類健康的常見病之一，原發(fā)性高血壓是引起嚴(yán)重的心腦血管疾病如心肌梗塞、腦卒中，以及腎臟疾病等的主要原因。治療高血壓的主要目的是最大限度地降低心血管病的死亡和病殘的總危險(xiǎn)，藥物降低血壓可以有效地降低心血管并發(fā)癥的發(fā)病率和死亡率，防止腦卒中、冠心病、心力衰竭和腎臟疾病的發(fā)生和發(fā)展。WHO和我國高血壓治療指南推薦的一線抗高血壓藥物分別是利尿劑、e-腎上腺素受體拮抗劑、鈣通道阻滯劑、ACE抑制劑、血管緊張素n受體拮抗劑，或者由上述藥物組成的固定劑量的復(fù)方降壓制劑。多數(shù)高血壓患者需要兩種或兩種以上的抗高血壓藥物來達(dá)到控制血壓目標(biāo)，兩種藥物可單獨(dú)處方或?yàn)楣潭▌┝康膹?fù)方制劑。國際大規(guī)模臨床試驗(yàn)證明合并用藥有其需要和價(jià)值，每種藥物的劑量不大，藥物的治療作用應(yīng)有協(xié)同或至少相加作用，其不良作用可以相互抵消或至少不重疊或相加。在美國高血壓預(yù)防、檢測、評估和治療全國聯(lián)合委員會第七次報(bào)告(JNC-7)、歐洲心臟病學(xué)會/歐洲高血壓學(xué)會(ESC/ESH)及中國高血壓防治指南推薦的高血壓聯(lián)合用藥中，半數(shù)以上的聯(lián)合用藥配伍中使用了利尿劑，其中主要是噻嗪類利尿劑氫氯噻嗪(Hydrochlorothiazide)。半個(gè)世紀(jì)以來，人們對利尿劑的使用較為波折。自50年代起，利尿劑就作為常見的抗高血壓藥應(yīng)用于臨床。1978年噻嗪類利尿劑即被世界衛(wèi)生組織列為一線降壓藥，常單獨(dú)應(yīng)用于治療輕、中度高血壓。但臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，長期使用噻嗪類利尿劑可引起低血鈉、低血鉀和低血氯，約30%的患者發(fā)生糖耐量異常。另外由于抑制碳酸酐酶，減少H+分泌使NH3排出減少，引起血氨升高。氫氯噻嗪長期使用可影響脂肪酶的活性，使甘油三脂分解代謝減少，甘油三脂升高，導(dǎo)致脂肪代謝紊亂，或引起輕度膽固醇增加。因此，隨著鈣通道阻滯劑、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑等新型抗高血壓藥的出現(xiàn)，利尿劑臨床使用量顯著減少。然而近十年來，人們重新發(fā)現(xiàn)以小劑量利尿劑作為基礎(chǔ)降壓藥物，能顯著降低老年高血壓患者的心血管疾病的患病率和死亡率；小劑量利尿劑同以前的劑量相比，降壓效果相似而不良反應(yīng)減少；利尿劑引起的有效血容量減少是對高血壓必要的治療，可能是其他降壓藥物治療的基礎(chǔ)；于是又開始重視利尿劑的使用。并且認(rèn)為利尿劑和e受體拮抗劑是目前唯一明確的能夠顯著降低心血管疾病(尤其對老年患者)患病率和致死率的藥物。如果無使用禁忌證，無使用其他降壓藥物的強(qiáng)烈指征，應(yīng)首選這兩類藥物。2005年歐洲心臟病學(xué)學(xué)會(ESC)學(xué)術(shù)大會公布ASCOT(Anglo-ScandinavianCardiocOutcomesTrial)的結(jié)果，ASCOT的研究對象為19257例高血壓(未治療者血壓》160/100mmHg;巳接受治療者血壓》140/90國Hg)患者，至少有其他3個(gè)或以上的心血管危險(xiǎn)因素，而無明確診斷的冠心病，ASCOT可作為針對臨床上常見的心血管中度危險(xiǎn)高血壓患者心血管一級預(yù)防的研究，主要終點(diǎn)為非致命性心肌梗死(MI)或致命性冠心病(CHD)。結(jié)果與阿替洛爾或聯(lián)用利尿劑(e受體阻斷劑和噻嗪類利尿劑配伍)對比，氨氯地平(或聯(lián)用培哚普利)組總死亡率下降11%(P=0.0247),心血管死亡減少24%(P=0.001)，腦卒中減少23%(P=0.0003)，冠心病事件減少16%(P<0.01)，新發(fā)生糖尿病減少30%(P〈0.01)。因此，具有心血管疾病中度危險(xiǎn)的高血壓患者采用以鈣通道阻滯劑為基礎(chǔ)必要時(shí)加用ACE抑制劑的治療方案，其療效優(yōu)于以阿替洛爾為基礎(chǔ)或加用噻嗪類利尿劑的療效，這一優(yōu)勢尤其在患者治療早期達(dá)標(biāo)時(shí)最為顯著?？梢姡琫受體阻斷劑聯(lián)用噻嗪類利尿劑不再是所有高血壓患者的一線治療藥物。ASCOT研究引起人們重新審視利尿劑在高血壓治療中的地位，使用噻嗪類利尿劑的利弊都十分突出。美國高血壓防治指南JNC-7中，強(qiáng)化了噻嗪類利尿劑作為抗高血壓一線治療藥物的重要地位，在6項(xiàng)強(qiáng)適應(yīng)癥中有4項(xiàng)(心力衰竭、冠心病高危、糖尿病和預(yù)防腦卒中復(fù)發(fā))列有噻嗪類利尿劑；并且從成本一效益角度分析，噻嗪類利尿劑列為最值得選擇的抗高血壓藥物。同時(shí)噻嗪類利尿劑的不良反應(yīng)多也是被人們所公認(rèn)的。如何能夠進(jìn)一步提高利尿劑或含有利尿劑的復(fù)方降壓藥對高血壓患者的靶器官保護(hù)作用，降低高血壓引起的心腦血管事件的風(fēng)險(xiǎn)性，減少利尿劑或含有利尿劑的復(fù)方降壓藥的不良反應(yīng)，無論從臨床意義還是社會意義上，都是值得研究或解決的問題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服含利尿劑的復(fù)方降壓藥存在的上述不足，提供一種在耙器官保護(hù)和降低心腦血管事件危險(xiǎn)性方面優(yōu)于含利尿劑的復(fù)方降壓藥，而副作用不增加的藥物組合物。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種藥物組合物，包括(1)藥用劑量的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑；(2)藥用劑量的利尿劑；(3)藥用劑量的葉酸類化合物；(4)藥劑學(xué)上可接受的載體。上述的"藥用劑量"是指參見《中國高血壓防治指南(2005年)》和《TheSeventhReportoftheJointNationalCommitteeonPrevention,Detection,Evaluation,andTreatmentofHighBloodPressure(JNC-7)》中相對應(yīng)的各種具體降壓藥的推薦劑量，或各藥品說明書規(guī)定的劑量范圍。上述藥用劑量的葉酸類化合物為葉酸、亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣，劑量為0.21.6mg，優(yōu)選0.41.0mg。上述ACE抑制劑選自依那普利、賴諾普利、培哚普利、咪達(dá)普利、苯那普利、雷米普利、卡托普利、莫昔普利、喹那普利、群多普利、西拉普利、或福辛普利中的一種，劑量為2.540mg。上述利尿劑選自氫氯噻嗪、吲達(dá)帕胺、依普利酮、或螺內(nèi)酯中的一種，劑量為2.550mg。上述藥用劑量的ACE抑制劑和利尿劑，其具體類別與劑量見下表，但不限于下表范圍。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>*可得到多種固定劑量的復(fù)方藥物。每種藥物的劑量均為rag上述藥用劑量的ACE抑制劑為依那普利540mg;藥用劑量的利尿劑為氫氯噻嗪12.525mg;葉酸類化合物為葉酸、亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣，劑量為0.21.6mg。上述藥用劑量的ACE抑制劑為賴諾普利540mg;藥用劑量的利尿劑為氫氯噻嗪12.525mg;葉酸類化合物為葉酸、亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣，劑量為0.21.6rag。上述藥用劑量的ACE抑制劑為培哚普利28mg;藥用劑量的利尿劑為氫氯噻嗪12.525mg;葉酸類化合物為葉酸、亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣，劑量為0.2L6mg。上述藥用劑量的ACE抑制劑為咪達(dá)普利510mg;藥用劑量的利尿劑為吲達(dá)帕胺2.55mg;葉酸類化合物為葉酸、亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣，劑量為0.21.6mg。上述藥用劑量的ACE抑制劑為苯那普利520mg;藥用劑量的利尿劑為螺內(nèi)酯2550mg;葉酸類化合物為葉酸、亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣，劑量為0.21.6mg。我們運(yùn)用本發(fā)明藥物對高血壓治療的研究過程中，著重針對靶器官保護(hù)和降低心腦血管事件危險(xiǎn)性方面。這是因?yàn)槿舾哐獕翰贿M(jìn)行有效控制，持續(xù)幾年后可引起全身細(xì)小動脈硬化，變得僵硬且缺乏彈性，管腔變窄，輸送至組織的血流速度減慢，造成心、腦、腎、眼等重要臟器損害。高血壓引起的靶器官損害，包括左室肥厚、良性小動脈性腎硬化癥、惡性小動脈性腎硬化癥、腎功能衰竭、視網(wǎng)膜動脈硬化、或高血壓眼底病變。當(dāng)上述這些靶器官損害仍不能給予有效控制，則發(fā)展成為更嚴(yán)重的后果，即心腦血管事件的發(fā)生，心腦血管事件包括心絞痛、心肌梗死、心力衰竭、腦梗塞、或腦出血，其中腦梗塞和腦出血統(tǒng)稱為腦卒中。因此，治療高血壓病人的主要目的是最大限度地降低心腦血管病的死亡和病殘的總危險(xiǎn)，降壓與耙器官保護(hù)并舉是高血壓治療的核心。研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的藥物組合物不僅具有降壓作用還具有靶器官保護(hù)作用。當(dāng)將ACE抑制劑/利尿劑與葉酸類化合物合用時(shí)，還能協(xié)同增強(qiáng)靶器官保護(hù)作用，且其保護(hù)作用強(qiáng)于僅應(yīng)用ACE抑制劑/利尿劑二聯(lián)復(fù)方降壓藥，也強(qiáng)于單用葉酸類化合物，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5因此，本發(fā)明提供了上述藥用劑量的ACE抑制劑/利尿劑和藥用劑量的葉酸類化合物組成的藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療或延緩高血壓的藥物中的用途；本發(fā)明提供該藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療或延緩高血壓引起的靶器官損害的藥物中的用途，高血壓引起的耙器官損害，包括左室肥厚、良性小動脈性腎硬化癥、惡性小動脈性腎硬化癥、腎功能衰竭、視網(wǎng)膜動脈硬化、或高血壓眼底病變。進(jìn)一步，在實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)，當(dāng)將ACE抑制劑/利尿劑與葉酸類化合物合用時(shí)，能協(xié)同降低心腦血管事件危險(xiǎn)性，且作用強(qiáng)于僅應(yīng)用ACE抑制劑/利尿劑二聯(lián)復(fù)方降壓藥，也強(qiáng)于單用葉酸類化合物，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)而，本發(fā)明還提供該藥物組合物在制備用于降低高血壓引起的心腦血管事件危險(xiǎn)性的藥物中的用途；其中降低心腦血管事件危險(xiǎn)性是指降低心絞痛、心肌梗死、心力衰竭、腦梗塞、或腦出血的發(fā)生率，降低心腦血管事件危險(xiǎn)性還指降低腦卒中的發(fā)生率。該藥物組合物中還含有藥劑學(xué)可接受的載體，可制成普通口服制劑，包括普通片劑、膠囊、顆粒劑等，制成口服制劑時(shí)所述藥學(xué)上可接受的載體包括有助于將活性化合物配制成藥用制劑的賦形劑和輔藥，如淀粉、微晶纖維素、無機(jī)鹽類、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、半胱氨酸、檸檬酸和亞硫酸鈉等的一種或幾種物質(zhì)的組合物，屬于本領(lǐng)域常識。該藥物組合物的劑型包括但不限于普通片劑、雙層片劑、多層片劑、緩釋片劑、單室控釋片劑、雙室控釋片劑、微孔型控釋片劑、舌下含片、口腔速崩片、分散片、腸溶片、顆粒劑、丸劑、腸溶膠囊、延遲釋放片、定時(shí)/位釋放片、普通膠囊、緩釋膠囊、控釋膠囊、含有微丸或小片的膠囊、含有微丸或小片的pH依賴型膠囊、顆粒劑、口服液、膜劑或貼劑等劑型，其中優(yōu)選片劑、膠囊或顆粒劑。根據(jù)本發(fā)明，藥物組合物也可以是指含有兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立藥物的藥盒。當(dāng)"藥物組合物"是指含有兩個(gè)獨(dú)立藥物的藥盒時(shí)，上述"組合藥盒"是一種盒狀容器，內(nèi)置多種劑量形式的藥物組合，及其服用說明書，"組合藥盒"更適用于個(gè)體化用藥；第一個(gè)藥物為含有ACE抑制劑/利尿劑，第二個(gè)藥物為含有葉酸類化合物。當(dāng)"藥物組合物"是指含有三個(gè)獨(dú)立藥物的藥盒時(shí)，上述"組合藥盒"是一種盒狀容器，內(nèi)置多種劑量形式的藥物組合，及其服用說明書；第一個(gè)和第二個(gè)藥物分別含有ACE抑制劑和利尿劑，第三個(gè)藥物中含有葉酸類化合物。該藥盒中的兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立的藥物可以伴隨給藥，也可以在同一種藥物制劑中或者在不同的藥物制劑中按順序給藥。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供的藥物組合物具有明顯協(xié)同作用，其協(xié)同作用在于能協(xié)同降低高血壓引起的靶器官損害，協(xié)同降低高血壓引起的心腦血管事件危險(xiǎn)性。因此，本發(fā)明提供了上述藥用劑量的ACE抑制劑/利尿劑和藥用劑量的葉酸類化合物組成的藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療或延緩高血壓、高血壓引起的靶器官損害或高血壓相關(guān)疾病的藥物中的用途；進(jìn)一步，本發(fā)明提供了上述藥物組合物在制備用于降低高血壓引起的心腦血管事件危險(xiǎn)性的藥物中的用途。通過本發(fā)明的實(shí)施，提供給患者這種特定用途的藥物組合物可以提高患者依從性，使患者服藥方便，降低醫(yī)療費(fèi)用，具有較好市場前景。下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，藥理作用的實(shí)驗(yàn)支持詳見以下具體實(shí)施方式。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:賴諾普利/氫氯噻嗪+葉酸對卒中易感型自發(fā)性高血壓大鼠(SHR印)耙器官損害的保護(hù)作用1012周齡SHR印分別購自上海市高血壓病研究所、阜外醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動物中心，飼養(yǎng)在室溫(23土2)。C，相對濕度(50±10)%，光照明暗各12h，自由攝食標(biāo)準(zhǔn)詞料。試驗(yàn)前測定血壓，根據(jù)血壓數(shù)值，將S冊sp分成模型組、賴諾普利/氫氯噻嗪(1mg/kg+1.25mg/kg)組、賴諾普利/氫氯噻嗪+葉酸(1mg/kg+1.25呢/kg+0.04呢/kg)組，另設(shè)WKY對照組，每組30只。灌胃給藥，每天1次，每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)20周。觀察指標(biāo)(1)每日觀察動物飲食、存活情況及行為活動，記錄各組動物腦卒中發(fā)作數(shù)及首次發(fā)作時(shí)間。(2)病理學(xué)觀察所有大鼠均取腦組織，切片、HE染色，觀察腦出血、腦梗塞或混合性腦卒中，計(jì)算各組大鼠腦卒中發(fā)生率。(3)大鼠麻醉后行主動脈插管，2.5%戊二醛灌注固定，斷頭取腦，分離顱底動脈環(huán)及腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的小動脈和細(xì)動脈，2.5%戊二醛固定，包埋、切片，甲苯胺藍(lán)染色。計(jì)算機(jī)病理圖像分析系統(tǒng)測定血管的中膜厚度、管腔內(nèi)徑徑，計(jì)算中膜厚度/管腔內(nèi)徑的比值，每張切片測IO條血管。結(jié)果在試驗(yàn)觀察期內(nèi)，模型組大鼠總計(jì)發(fā)生腦卒中12只，病理組織學(xué)觀察，總計(jì)發(fā)生腦卒中24只，其中腦出血12只，腦梗死9只，混合性中風(fēng)3只。腦卒中灶及周圍均可見小動脈透明變性或纖維素樣壞死，管壁增厚，管腔狹窄，有的管腔內(nèi)可見微血栓形成，管周滲血。賴諾普利/氫氯噻嗪組、賴諾普利/氫氯噻嗪+葉酸組大鼠腦卒中發(fā)生率均顯著降低，發(fā)作時(shí)間延遲。賴諾普利/氫氯噻嗪+葉酸組腦卒中發(fā)生率進(jìn)一步降低，見表l。表1賴諾普利/氫氯噻嗪+葉酸連續(xù)給藥20周對卒中易感型自發(fā)性高血壓大鼠腦卒中的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與正常組比較，**P<0.01;與模型組比較，AP<0.05;"P〈0.Q1高血壓引起的腦血管改變，主要表現(xiàn)為管壁中層增厚、內(nèi)膜玻璃樣變，內(nèi)皮細(xì)胞增生，血管壁厚度/管腔比值減小。與正常組大鼠比較，模型組大鼠腦動脈中膜厚度增加，管腔內(nèi)徑減小，中膜厚度/管腔內(nèi)徑比增加。與高血壓組比較，賴諾普利/氫氯噻嗪組大鼠腦動脈中膜厚度、中膜厚度/管腔內(nèi)徑比降低，賴諾普利/氫氯噻嗪+葉酸組腦動脈中膜厚度、中膜厚度/管腔內(nèi)徑比進(jìn)一步降低，與賴諾普利/氫氯噻嗪組比較有顯著性差異。見表2。表2賴諾普利/氫氯噻嗪+葉酸連續(xù)給藥20周對卒中易感型自發(fā)性高血壓大鼠腦動脈的影響(3f士s)劑量動物中膜厚度管腔內(nèi)徑中膜厚度/管腔內(nèi)(mg/kg)數(shù)_(,)_(,)_徑(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與正常組比較，，〈0.01;與模型組比較，"P〈0.01;與賴諾普利/氫氯噻嗪組比較，**P〈0.01實(shí)施例2:依那普利/氫氯噻嗪+葉酸對卒中易感型自發(fā)性高血壓大鼠(SHRsp)耙器官損害的保護(hù)作用采用1012周齡SHRsp，根據(jù)血壓數(shù)值，將S冊sp分成模型組、依那普利/氫氯噻嗪(l+1.25mg/kg)組、依那普利/氫氯噻嗪+葉酸(l+1.25+0.08mg/kg)組，另設(shè)WKY對照組，每組30只。灌胃給藥，每天1次，連續(xù)20周。每日觀察動物飲食、存活情況及行為活動，記錄各組動物腦卒中發(fā)作數(shù)。大鼠麻醉后行主動脈插管，2.5%戊二醛灌注固定，斷頭取腦，分離顱底動脈環(huán)及腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的小動脈和細(xì)動脈，2.5%戊二醛固定，包埋、切片，甲苯胺藍(lán)染色。計(jì)算機(jī)病理圖像分析系統(tǒng)測定血管的中膜厚度、管腔內(nèi)徑徑，計(jì)算中膜厚度/管腔內(nèi)徑的比值，每張切片測10條血管。所有存活動物及死亡后可取得病理組織的大鼠均取腦組織，切片、HE染色，觀察腦出血、腦梗塞或混合性腦卒中，計(jì)算各組大鼠腦卒中發(fā)生率。結(jié)果(1)一般觀察實(shí)驗(yàn)過程中，模型組大鼠卒中后出現(xiàn)明顯精神萎靡，嗜睡，毛發(fā)蓬松、干枯或脫落、無光澤，體重下降，主動活動明顯減少，行動遲緩，肢體呈不同程度癱瘓，部分大鼠發(fā)病同時(shí)伴有抽搐、腹瀉、小便失禁、眼球出血等癥狀，病情嚴(yán)重者數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡。治療組的大部分動物神經(jīng)功能缺損較模型組輕微，精神狀態(tài)明顯優(yōu)于模型組，自主活動增加，主動覓食、飲水，體重下降不明顯，毛發(fā)也較模型組順滑有光澤。(2)腦卒中發(fā)生率正常組有1只發(fā)生腦卒中，模型組30只大鼠中1只給藥不當(dāng)意外死亡，14只發(fā)生腦卒中，除3只動物外，其他27只動物均進(jìn)行了病理組織學(xué)觀察，共22只有腦卒中發(fā)生，其中腦出血10只，腦梗死6只，混合性中風(fēng)6只。腦卒中灶及周圍均可見小動脈透明變性或纖維素樣壞死，管壁增厚，管腔狹窄，有的管腔內(nèi)可見微血栓形成，管周滲血。依那普利/氫氯噻嗪組30只大鼠有9只發(fā)生腦卒中；病理組織學(xué)觀察共15只有腦卒中發(fā)生，與模型組比較有顯著差異(P<0.05)。依那普利/氫氯噻嗪+葉酸組30只大鼠中，有5只發(fā)生腦卒中；病理組織學(xué)觀察29只中有7只發(fā)生腦卒中，且與模型組比較差異具有顯著性(P<0.05)，與依那普利/氫氯噻嗪組比較，依那普利/氫氯噻嗪+葉酸組大鼠腦卒中發(fā)生率進(jìn)一步降低。見表3。表3依那普利/氫氯噻嗪+葉酸連續(xù)給藥20周對SHRsp大鼠腦卒中的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>乂2檢驗(yàn)，與正常組比較，*'P<0.01;與模型組比較，AP〈0.05，"P<0.05與依那普利/氫氯噻嗪組比較，*P<0.05(3)對SHRsp大鼠腦動脈的影響高血壓引起的腦血管改變，主要表現(xiàn)為管壁中層增厚、內(nèi)膜玻璃樣變，內(nèi)皮細(xì)胞增生，血管壁厚度/管腔比值減小。與正常組大鼠比較，模型組大鼠腦動脈中膜厚度增加，管腔內(nèi)徑減小，中膜厚度/管腔內(nèi)徑比增加。與模型組比較，依那普利/氫氯噻嗪組大鼠腦動脈中膜厚度、中膜厚度/管腔內(nèi)徑比降低，依那普利/氫氯噻嗪+葉酸組腦動脈中膜厚度、中膜厚度/管腔內(nèi)徑比進(jìn)一步降低，與依那普利/氫氯噻嗪組比較有顯著性差異。見表4。表4依那普利/氫氯噻嗪+葉酸連續(xù)給藥20周對卒中易感型自發(fā)性高血壓大鼠_腦動脈的影響(7±s)_<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與正常組比較，"P<0.01;與高血壓組比較，"P〈0.01;與依那普利/氫氯噻嗪組比較，**P〈0.01實(shí)施例3:培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸對腎性高血壓大鼠的降壓及靶器官損害的保護(hù)作用用0.2mm銀夾狹窄Wistar大鼠左腎動脈，810周后大鼠血壓升高超過140mmHg以上為高血壓動物模型。根據(jù)大鼠血壓水平，將高血壓大鼠隨機(jī)分為模型組、培哚普利/氫氯噻嗪(0.4+1.25mg/kg)組、培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸(0.4+1.25+0.04mg/kg)組、培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸(0.4+1.25+0.08mg/kg)組、葉酸(0.08mg/kg)組，另設(shè)正常對照組，每組20只，灌胃給藥，每天1次，每周稱體重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)26周。觀察指標(biāo)(1)測定給藥前和給藥后不同時(shí)間血壓，計(jì)算降壓幅度(=給藥前收縮壓一給藥后收縮壓)。(2)內(nèi)皮細(xì)胞功能26周末，取血按試劑盒說明書測定血漿一氧化氮(N0)、內(nèi)皮素(ET)水平。(3)腎功能26周末，收集尿液，湖'j24h尿肌酐、尿蛋白、24h尿al微球蛋白；取血，測定血肌酐、血尿素氮(BUN)，血清計(jì)算肌酐清除率(Ccr)。(4)血流動力學(xué)末次給藥后l小時(shí)，20%烏拉坦(lg/kgip)麻醉，仰位固定，分離右側(cè)頸總動脈，插入一充滿肝素生理鹽水導(dǎo)管至左心室，通過壓力換能器，連接RM6240BD型多導(dǎo)生理信號采集處理系統(tǒng)，穩(wěn)定10min，記錄藥后3小時(shí)左室峰壓平均值(LVSP)、左室舒張期末壓(LVEDP)、左室最大變化速率(士dp/dtraax)。(5)左室重指數(shù)測定心功能后，取大鼠心臟，用預(yù)冷生理鹽水洗凈，分離左心室(包括室間隔)，稱重，計(jì)算左室重指數(shù)(左心室mg/體重g)。(6)心肌羥脯氨酸測定大鼠處死后，取左室心肌組織約50mg，采用Bergman法測定羥脯氨酸含量，并計(jì)算膠原含量。膠原含量二8.2X羥脯氨酸含量(mg/g)。統(tǒng)計(jì)分析計(jì)量資料用元土s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。結(jié)果與正常組大鼠比較，高血壓組大鼠收縮壓顯著升高；與高血壓組比較，葉酸組大鼠收縮壓有所改善，培哚普利/氫氯噻嗪組及培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸(0.04、0.08mg/kg)組大鼠收縮壓均顯著降低，但與培哚普利/氫氯噻嗪組比較，培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸(0.04、0.08mg/kg)組降壓幅度沒有顯著差異。與正常組大鼠比較，高血壓組大鼠血漿NO水平降低，ET水平升高，與高血壓組比較，葉酸組、培哚普利/氫氯噻嗪組大鼠血漿NO升高、ET降低，培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸(0.04、0.08mg/kg)組大鼠血漿N0進(jìn)一步升高，ET進(jìn)一步降低，且與培哚普利/氫氯噻嗪組比較有顯著差異。表明腎性高血壓大鼠出現(xiàn)顯著的血管內(nèi)皮細(xì)胞功能降低，培哚普利/氫氯噻嗪、葉酸對大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞功能具有保護(hù)作用，兩者合用對血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用顯著增強(qiáng)。見表5。表5培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸灌胃給藥，連續(xù)26周對腎性高血壓大鼠血壓、血清NO、ET水平的影響(元土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與正常組比較，"P〈0.01;與高血壓組比較，<0.05，"P〈0.01;與培哚普利/氫氯噻嗪組比較，*P<0.05與正常組大鼠比較，高血壓組大鼠尿24hd1-微球蛋白、尿蛋白、BUN顯著升高，Ccr明顯降低。與高血壓組比較，培哚普利/氫氯噻嗪組、培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸(0.04、0.08mg/kg)組大鼠尿24hci1-微球蛋白、尿蛋白降低，Ccr升高。葉酸單用對腎性高血壓大鼠腎功能無明顯影響。培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸(0.04、0.08mg/kg)組大鼠尿24ha1-微球蛋白、尿蛋白進(jìn)一步降低，Ccr進(jìn)一步升高，且與培哚普利/氫氯噻嗪組比較有顯著性差異。表明腎性高血壓大鼠出現(xiàn)早期腎功能損害，培哚普利/氫氯噻嗪對腎性高血壓大鼠的腎功能損害具有保護(hù)作用，葉酸與培哚普利/氫氯噻嗪合用，對腎性高血壓大鼠的腎功能保護(hù)作用顯著增強(qiáng)。見表6。表6培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸連續(xù)給藥26周對腎性高血壓大鼠尿a1-微球蛋白、尿蛋白、血肌苷清除率、血尿素氮的影響(哭土s)組別劑量數(shù)量24ha,-微球尿蛋白(mg/d)CcrBUN(mg/kg)(n)蛋白"g/d)(ml/min)(咖ol/U正常組—183.2±2.42.3±0.80.35±0.107.14±1.32高血壓_1625.7±6.廣9.3±3.廣0.12±0.03**10.20±3.05**培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸0.4+1.25+0.041615.0±2.6"*5.6±1.0.22±0.04"*8.25±2.12培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸0.4+1.25+0.081714.8±3.2"*5.3±1.4""0.24±0,04"**8.10±1.62培哚普利/氫氯噻嗪0.4+1.251718.5±4.1"6.9±1.6"0.19±0.03"7.97±1.60葉酸0.081621.8±3.97.8±1.80.30±0.048.67±1.96與正常組比較，"P〈0.01;與高血壓組比較，"<0.05,"P〈0.01;與培哚普利/氫氯噻嗪組比較，*P〈0.05，**P<0.01與正常組比較，高血壓組大鼠左室重指數(shù)明顯增高；與高血壓組比較，葉酸單用對腎性高血壓大鼠左心重和室重指數(shù)無明顯影響，培哚普利/氫氯噻嗪組、培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸組大鼠室重指數(shù)均顯著降低；與培哚普利/氫氯噻嗪組比較，培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸組無明顯差異。表明高血壓組大鼠出現(xiàn)左心室心肌肥厚。培哚普利/氫氯噻嗪、培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸組長期給藥可以預(yù)防大鼠心肌肥厚，聯(lián)合用藥組改善左心室肥厚的作用更強(qiáng)。心室重構(gòu)是高血壓的重要病理變化，主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞增殖、肥大及間質(zhì)纖維化，羥脯氨酸為膠原纖維所特有，其含量可反映纖維化程度。與正常組比較，高血壓組大鼠心肌膠原蛋白含量顯著升高。與高血壓組比較，培哚普利/氫氯噻嗪組大鼠心肌膠原蛋白含量顯著降低，培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸組大鼠心肌膠原蛋白含量進(jìn)一步降低，與培哚普利/氫氯噻嗪組比較有顯著性差異。見表7。與正常組大鼠比較，高血壓組大鼠LVSP、LVEDP顯著升高，士dp/dtmax下降。與高血壓組比較，培哚普利/氫氯噻嗪組、培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸組大鼠LVSP、LVEDP顯著降低，土dp/dtmax升高。葉酸單用對腎性高血壓大鼠血流動力學(xué)無明顯影響。培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸(0.04、0.08mg/kg)組大鼠LVSP、LVEDP進(jìn)一步降低，±dp/dtmax進(jìn)一步升高，與培哚普利/氫氯噻嗪組比較有顯著差異。表明腎性高血壓大鼠心臟前負(fù)荷、后負(fù)荷增加，心臟收縮、舒張功能障礙，培哚普利/氫氯噻嗪對腎性高血壓大鼠的心功能損害具有保護(hù)作用，葉酸與培哚普利/氫氯噻嗪合用，對腎性高血壓大鼠的心功能保護(hù)作用顯著增強(qiáng)。見表8。表7培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸連續(xù)給藥26周對腎性高血壓大鼠左心室重、室重指數(shù)、心肌膠原蛋白含量的影響(天土s)組別劑量數(shù)量左心室重量室重指數(shù)心肌膠原含量(mg/kg)(n)(mg)(mg/g)(mg/g)正常組—18670.7±88.91.63±0.351.03±0.33高血壓16936.4±136.7"2.55±0.42**1.96±0.43"培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸fi.4+1.25+0.0416748.8±106.4"1.92±0.34"1.38±0.24森"培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸0.4+1.25+0.0817736.3±126.6"1.85±0.32"1.42±0.18"*培哚普利/氫氯噻唉0.417799.1±159.1"2.ll土O.39"1.62±0.22"葉酸0.0816885.2±218.62.30±0.451.88±0.41與正常組比較，"P〈0.01;與高血壓組比較，"P〈0.01;與培哚普利/氫氯噻嗪組比較，*P<0.05表8培哚普利/氫氯噻嗪+葉酸連續(xù)給藥26周對腎性高血壓大鼠血流動力學(xué)的影響(X土s)劑量數(shù)量LVSPLVEDP+dp/dtmax一dp/dtmax祖別(mg/kg)(n)(mmHg)(隱Hg)(mmHg/sX103)(mmHg/sX103)正常組一16129±13一2±812.4±2.58.7±1.2高血壓—16188士3(T29±14"7.3±2.1**5.0±1.5"培哚普利/氫0.4+1.2514142±17"—0±6"**11.5±2.4"*7.3±1.4"氯噻嗪+葉酸+0.04培哚普利/氫0.4+1.2515137±19"2±5""11.5±2.7.7±1.3"*氯噻嗪+葉酸+0.08培哚普利/氫0.4+1.2515152±23"10±3"9.5±1.9"6.6±1.1"氯噻嗪葉酸0,0816177±2620±98.8±2.25.6±1.6與正常組比較，"P〈0.01;與高血壓組比較，"P〈0.01;與培哚普利/氫氯噻嗪組比較，，<0.05，"P〈0.01實(shí)施例4:咪達(dá)普利/卩引達(dá)帕胺+葉酸對自發(fā)性高血壓大鼠降壓及靶器官損害的保護(hù)作用自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)分別購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司(許可證號SCXK(滬)2003—0003)，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司(許可證號SCXK(京)2002—0003)，并在本室詞養(yǎng)繁殖，備用。810周齡后大鼠血壓升高，測定大鼠血壓l周(第l、6天)，取血壓穩(wěn)定的大鼠用于實(shí)驗(yàn)。高血壓大鼠分組和給藥劑量見表7,另設(shè)WKY正常對照組，每組20只。灌胃給藥，每天1次，每周稱體重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)26周。觀察指標(biāo)(1)測定給藥前和給藥后不同時(shí)間血壓，計(jì)算降壓幅度=給藥前收縮壓一給藥后收縮壓。(2)內(nèi)皮細(xì)胞功能26周末，取血按試劑盒說明書，測定血清一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)水平。(3)腎功能收集尿液，用磺基水楊酸法在分光光度計(jì)測定尿蛋白濃度，計(jì)算24h尿蛋白量。放免法測定24h尿al微球蛋白，按照試劑盒說明書測定尿肌酐；取血，測定血肌酐、血尿素氮(BUN)，計(jì)算肌酐清除率(Ccr)。(4)左心室重和室重指數(shù)取大鼠心臟，用預(yù)冷生理鹽水洗凈，分離左心室(包括室間隔)，稱左心室重，計(jì)算室重指數(shù)(左心室mg/體重g)。(5)心肌羥脯氨酸測定大鼠處死后，取左室心肌組織約50mg，采用Bergman法測定羥脯氨酸含量，并計(jì)算膠原含量。膠原含量二8.2X羥脯氨酸含量(mg/g)。(6)心肌病理學(xué)檢査心肌組織常規(guī)切片，天狼星紅-苦味酸染色，測量心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)。CVF為膠原面積與心肌總面積的比值，其中膠原面積不包括血管周圍膠原面積，隨機(jī)分析5個(gè)視野，取其均值。PVCA為每一標(biāo)本測量4支呈橫切面的壁內(nèi)小動脈的周圍面積與管腔面積的比值，取其均值。(7)腸系膜動脈的組織學(xué)觀察處死大鼠后，取腸系膜上動脈第二級分枝5mm(從回盲部倒數(shù)，第二根腸系膜上動脈分枝的第二級分枝中間5mm)，置10%中性福爾馬林中固定，常規(guī)脫水、包埋，切片厚5um，HE染色，每條動脈切5個(gè)橫切面，選取標(biāo)準(zhǔn)橫切面的切片進(jìn)行光鏡觀察，利用計(jì)算機(jī)圖像采集系統(tǒng)與分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，在統(tǒng)一放大10X40倍的顯微鏡下，測量小血管中膜厚度、內(nèi)徑，計(jì)算中膜厚度/管腔內(nèi)徑(W/L)比。統(tǒng)計(jì)分析計(jì)量資料用義士s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。結(jié)果與正常組大鼠比較，高血壓組大鼠血壓顯著升高；與高血壓組比較，葉酸組大鼠血壓有所改善、咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組及咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸(0.04、0.08mg/kg)組大鼠血壓均顯著降低；與咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組比較，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸(0.08mg/kg)組大鼠收縮壓的降壓幅度有顯著性差異。內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)作為心血管損害的早期標(biāo)志受到廣泛關(guān)注，內(nèi)皮細(xì)胞活性標(biāo)志物(一氧化氮及其代謝產(chǎn)物，內(nèi)皮素等)研究可作為一種檢測內(nèi)皮功能的簡單方法。與正常組大鼠比較，高血壓組大鼠血清NO水平顯著降低，ET水平顯著升高，與高血壓組比較，葉酸組、咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組大鼠血漿NO升高、ET降低，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸(0.04、0.08mg/kg)組大鼠血漿NO進(jìn)一步升高，ET進(jìn)一步降低，與咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組比較有顯著性差異。表明自發(fā)性高血壓大鼠出現(xiàn)顯著的血管內(nèi)皮細(xì)胞功能損害，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺、葉酸對大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞功能具有保護(hù)作用，兩者合用保護(hù)作用顯著增強(qiáng)。見表9。24小時(shí)尿a1微球蛋白是反映早期近曲小管損害的標(biāo)記物，蛋白尿除作為一種腎臟損害標(biāo)志外，更是一種促進(jìn)腎臟病進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。與正常組比較，高血壓組大鼠尿24ha1-微球蛋白、尿蛋白顯著升高，Ccr明顯降低，BUN升高，與高血壓組比較，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組、咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸(0.04、0.08mg/kg)組大鼠尿24hal-微球蛋白、尿蛋白降低、Ccr升高、BUN降低，葉酸單用對自發(fā)性高血壓大鼠腎功能損害無明顯影響。咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸(0.04、0.08mg/kg)組大鼠尿24ha1-微球蛋白、尿蛋白進(jìn)一步降低，Ccr進(jìn)一步升高，與咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組比較有顯著性差異。表明自發(fā)性高血壓大鼠出現(xiàn)早期腎功能損害，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺對自發(fā)性高血壓大鼠的腎功能損害具有保護(hù)作用，葉酸與咪達(dá)普利/U引達(dá)帕胺合用，對自發(fā)性高血壓大鼠的腎功能保護(hù)作用顯著增強(qiáng)。見表10表9咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸灌胃給藥連續(xù)26周對自發(fā)性高血壓大鼠血壓、血清NO、ET的影響(天士s)<table>complextableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與正常組比較，"P〈0.01;與高血壓組比較，AP〈0.05,"P〈0.01;與咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組比較，*P<0.05，"P<0.01表10咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸連續(xù)給藥26周對自發(fā)性高血壓大鼠尿a廣微球蛋白、尿蛋白、血肌苷清除率、血尿素氮的影響(S土s)<table>complextableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>正常組高血壓咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺葉酸1+0.25+0.041+0.25+0.081+0.250.08與正常組比較，"P〈0.01;與高血壓組比較，AP<0.05，"P〈0.01;與咪達(dá)普利/叼l達(dá)帕胺組比較，<0.05，**P<0.01與正常組比較，高血壓組大鼠左心重和室重指數(shù)明顯增加；葉酸單用對自發(fā)性高血壓大鼠左心重和室重指數(shù)有減輕的趨勢，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組、咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸組大鼠左心重和室重指數(shù)均顯著降低，與高血壓組比較有顯著差異；與咪達(dá)普利/剛達(dá)帕胺組比較，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸組大鼠左心重和室重指數(shù)進(jìn)一歩降低。表明高血壓組大鼠出現(xiàn)左心室心肌肥厚，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組、咪達(dá)普利/剛達(dá)帕胺+葉酸組長期給藥可以預(yù)防大鼠心肌肥厚，聯(lián)合用藥組改善左心室肥厚的作用更強(qiáng)。見表ll。心室重構(gòu)是高血壓的重要病理變化，主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞增殖、肥大及間質(zhì)纖維化，羥脯氨酸為膠原纖維所特有，其含量可反映纖維化程度。與正常組比較，高血壓組大鼠心肌膠原蛋白含量顯著升高。與高血壓組比較，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組大鼠心肌膠原蛋白含量顯著降低，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸組大鼠心肌膠原蛋白含量進(jìn)一步降低，與咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組比較有顯著性差異。見表ll。表11咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸連續(xù)給藥26周對自發(fā)性髙血壓大鼠左心室重、室重指數(shù)、心肌膠原蛋白含量的影響(Jf土s)劑量動物左心室重量室重指數(shù)心肌膠原含量(mg/kg)數(shù)_(mg)(mg/g)(mg/g)正常組—17820.3±156.22.12±0.323.18±0.47高血壓—151102.4±215.廣3.73±0.44"6.39±1.26"咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸1+0.25+0.0418842.6±156.2"3.03±0.32"4.75±0.38"*瞇達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸1+0.25+0.0816828.5±127.9"2.86±0.38"4.59土0.45"*咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺1+0.2517867.8±145.6"3.12±0.43"5.26±0.73"葉酸0.0816965.8±167.43.33±0.466.07±1.18與正常組比較，"P〈0.01;與高血壓組比較，"P〈0.01;與咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組比較，*P<0.05與正常組大鼠比較，高血壓組大鼠心肌間質(zhì)纖維化指標(biāo)CVF、心肌血管周圍纖維化指標(biāo)PVCA均顯著增加，CVF與PVCA升高幾乎同步，表明心肌間質(zhì)纖維化參與了SHR心臟重構(gòu)的病理過程。與高血壓組比較，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組大鼠心肌CVF、PVCA均顯著降低，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸組大鼠心肌CVF、PVCA進(jìn)一步降低，與咪達(dá)普利/B引達(dá)帕胺組比較有顯著性差異。見表12。表12咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸連續(xù)給藥26周對自發(fā)性高血壓大鼠心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)的影響(叉士s)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)CVF(o/o)PVCA(%)WKY組—171.ll土O.240.84±0.17高血壓組—153.48±0.60**2.68±0.47"咪達(dá)普利+吲達(dá)帕胺+葉酸1+0.25+0.04182.44±0,36A"*1.89±0.30"咪達(dá)普利+吲達(dá)帕胺+葉酸1+0.25+0.08162.53±0.42在"1.83±0.2""咪達(dá)普利+吲達(dá)帕胺1+0.25172.94±0.38"2.17±0.36"葉酸0.08163.24±0.362.50±0.48與正常組比較，"P〈0.01;與高血壓組比較，"P〈0.01;與咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組比較，*P<0.05，"P〈0.01高血壓引起的血管改變，主要表現(xiàn)為血管壁外膜的纖維化，管壁中層增厚(由平滑肌細(xì)胞增生、肥厚和細(xì)胞間質(zhì)增多所致)；內(nèi)膜玻璃樣變，內(nèi)皮細(xì)胞增生，上述變化使血管壁厚度/管腔比值減小，舒張功能受限，冠脈的儲備功能下降。與正常組大鼠比較，高血壓組大鼠腸系膜動脈中膜厚度增加，內(nèi)徑減小，中膜/內(nèi)徑比增加。與高血壓組比較，咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組大鼠腸系膜動脈中膜厚度和中膜/內(nèi)徑比均降低，咪達(dá)普利/B引達(dá)帕胺+葉酸組大鼠腸系膜動脈中膜厚度和中膜/內(nèi)徑比均進(jìn)一步降低，與咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組比較有顯著性差異。見表13。表13咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺+葉酸連續(xù)給藥26周對自發(fā)性高血壓大鼠腸系膜動脈的影響(X土s)組別劑量動物中膜厚度血管內(nèi)徑中膜厚度/內(nèi)徑(mg/kg)數(shù)(l-im)(%)正常組_1735.2±7.6278.6±46.813.0±3.2高血壓—1554.5±10.5**188.3±28.6**30.6±6.廣咪達(dá)普利/吲1+0.25+1840.2±6.5"243.8±32.4"16.2±3.3""達(dá)帕胺+葉酸0.04咪達(dá)普利/剛1+0.25+1637.7±6.1"*257.4±26.9"14.8±2.9"**達(dá)帕胺+葉酸0.08咪達(dá)普利/吲1+0.251744.6±8.3"220.6±33.9"20.6±3.9"達(dá)帕胺葉酸0.081650.6±10.3205.4±27.225.4±5.2與正常組比較，"P〈0.01;與高血壓組比較，"P〈0.01;與咪達(dá)普利/吲達(dá)帕胺組比較，"<0.05，"P〈0.01實(shí)施例5:苯那普利/螺內(nèi)酯+左旋亞葉酸鈣對自發(fā)性高血壓大鼠靶器官損害的保護(hù)作用自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)810周齡后大鼠血壓升高，測定大鼠血壓l周，取血壓穩(wěn)定的大鼠用于實(shí)驗(yàn)。根據(jù)血壓數(shù)值，將SHR分成模型組、苯那普利/螺內(nèi)酯(l+4mg/kg)組、苯那普利/螺內(nèi)酯+左旋亞葉酸鈣(1+4+0.02mg/kg)、苯那普利/螺內(nèi)酯+左旋亞葉酸鈣(1+4+0.04mg/kg)組、左旋亞葉酸鈣組(0.04mg/kg)，另設(shè)WKY正常對照組，每組20只，灌胃給藥，每天1次，連續(xù)26周。26周末，取血測定血清一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)水平；收集尿液，測定24h尿ctl微球蛋白、尿肌酐、血肌酐，計(jì)算肌酐清除率(Ccr);取大鼠心臟，測定左心重和室重指數(shù)；測定羥脯氨酸含量和計(jì)算膠原含量；心肌組織常規(guī)切片，天狼星紅-苦味酸染色，測量心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA);腸系膜動脈二級分支切片，測量小動脈內(nèi)徑、中膜厚度，計(jì)算中膜厚度/內(nèi)徑比。計(jì)量資料用又土s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。結(jié)果與高血壓組比較，左旋亞葉酸鈣組、苯那普利/螺內(nèi)酯組大鼠血漿N0升高、ET降低，苯那普利/螺內(nèi)酯(1+4mg/kg)+左旋亞葉酸鈣(0.02、0.04mg/kg)組大鼠血漿N0進(jìn)一步升高，ET進(jìn)一步降低，與苯那普利/螺內(nèi)酯組比較有顯著差異；與高血壓組比較，苯那普利/螺內(nèi)酯組、苯那普利/螺內(nèi)酯+左旋亞葉酸鈣(0.02、0.04mg/kg)組大鼠尿2仆"-微球蛋白、尿蛋白降低、Ccr升高，苯那普利/螺內(nèi)酯+左旋亞葉酸鈣(0.02、0.04mg/kg)組大鼠尿24hcil-微球蛋白、尿蛋白進(jìn)一步降低，Ccr進(jìn)一步升高；與高血壓組比較，苯那普利/螺內(nèi)酯組、苯那普利/螺內(nèi)酯+左旋亞葉酸鈣大鼠左心重、室重指數(shù)、心肌膠原蛋白含量、CVF、PVCA均顯著降低，與苯那普利/螺內(nèi)酯組比較，苯那普利/螺內(nèi)酯+左旋亞葉酸鈣組大鼠上述心肌相關(guān)參數(shù)進(jìn)一步降低；與高血壓組比較，苯那普利/螺內(nèi)酯組大鼠腸系膜動脈中膜厚度和中膜/內(nèi)徑比均降低，苯那普利/螺內(nèi)酯+左旋亞葉酸組大鼠腸系膜動脈中膜厚度和中膜厚度/內(nèi)徑比進(jìn)一步均降低，與苯那普利/螺內(nèi)酯組比較有顯著性差異。上述結(jié)果表明，苯那普利/螺內(nèi)酯、左旋亞葉酸鈣對高血壓大鼠內(nèi)皮細(xì)胞功能、腎功能、心肌結(jié)構(gòu)具有保護(hù)作用，兩者合用對保護(hù)作用顯著增強(qiáng)。實(shí)施例6賴諾普利10mg/氫氯噻嗪12.5mg/葉酸1.6mg片的制備處方賴諾普利10.0g氫氯噻嗪12.5g葉酸1.6g淀粉20.0g微晶纖維素40.0g羧甲基淀粉鈉15,0g泊洛薩姆F68l.Og水適量硬脂酸鎂適量制成1000片制備工藝葉酸過120目篩，其他原、輔料分別過IOO目篩后75t:干燥2小時(shí)，備用；精密稱定處方量的賴諾普利、氫氯噻嗪、乳糖、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和微晶纖維素過篩混勻，備用；取處方量的葉酸和泊洛薩姆F68充分混合均勻后，與預(yù)混好的賴諾普利、乳糖、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和微晶纖維素采用等量遞增》昆勻，加入適量的水制軟材，30目篩制粒，6(TC干燥3h，整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，含量測定后壓片，包裝。實(shí)施例7賴諾普利10mg/氫氯噻嗪12.5mg/葉酸0.8mg片的制備處方賴諾普利10.0g氫氯噻嗪12.5g葉酸0.8g乳糖20.0g微晶纖維素40.0g羧甲基淀粉鈉10.0g泊洛薩姆F68l.Og水適量硬脂酸鎂適量制成1000片制備工藝同實(shí)施例6。實(shí)施例8賴諾普利10mg/氫氯噻嗪12.5mg/葉酸0.4mg片的制備處方賴諾普利10.0g氫氯噻嗪12.5g葉酸0.4g乳糖20.0g微晶纖維素40.0g羧甲基淀粉鈉20.0g十二烷基硫酸鈉5.0g水適量硬脂酸鎂適量制成1000片制備工藝同實(shí)施例6。實(shí)施例9賴諾普利10mg/氫氯噻嗪25mg/亞葉酸鈣0.2mg膠囊的制備處方賴諾普利10g氫氯噻嗪25g亞葉酸鈣(以亞葉酸計(jì))0.2g淀粉40.0g微晶纖維素16.0g羧甲基淀粉鈉16.0g5%聚維酮k-30水溶液適量微粉硅膠適量制成1000粒制備工藝將處方量的賴諾普利、氫氯噻嗪、亞葉酸鈣、微晶纖維素、淀粉、羧甲基淀粉鈉粉碎、過篩后混合均勻，與適量的5%聚維酮k-30水溶液混合制成軟材后制粒、干燥、加入微粉硅膠混合均勻，按常規(guī)方法裝膠囊1000粒即得。實(shí)施例10馬來酸依那普利10mg/氫氯噻嗪12.5mg/葉酸0.4mg膠囊的制備處方馬來酸依那普利(按依那普利計(jì))10g氫氯噻嗉12.5g葉酸0.4g淀粉40.0g微晶纖維素20.0g羧甲基淀粉鈉20.0g5%聚維酮k-30水溶液適量<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>制備工藝同實(shí)施例9。實(shí)施例11培哚普利4mg/氫氯噻嗪12.5mg/葉酸0.4mg片的制備處方培哚普利4g氫氯噻嗪12.5g葉酸0.4g微晶纖維素45.0g乳糖25.0g羧甲基淀粉鈉15.0g水適量硬脂酸鎂0.5g制成1000片制備工藝取處方量的培哚普利、氫氯噻嗪、葉酸過100目篩后按等量遞增法混合均勻備用；其他輔料分別過100目篩后75'C干燥2小時(shí)；按處方量的乳糖、羧甲基淀粉鈉混勻后再與混好的原料藥等量遞增法混合均勻；加入水適量制軟材，24目篩制粒、整粒，4045°C干燥；干顆粒加入適量硬脂酸鎂混勻，含量測定后壓片。實(shí)施例12培哚普利4mg/氫氯噻嗪12.5mg/葉酸0.8mg片的制備處方培哚普利4g氫氯噻嗪12.5g葉酸0.8g微晶纖維素45.Og乳糖25.Og羧甲基淀粉鈉15.Og水適量硬脂酸鎂0.5g制成1000片制備工藝同實(shí)施例ll。實(shí)施例13咪達(dá)普利10mg/吲達(dá)帕胺2.5mg/葉酸0.4mg膠嚢的制備處方咪達(dá)普利10g吲達(dá)帕胺葉酸淀粉微晶纖維素羧甲基淀粉鈉5%聚維酮k-30水溶液微粉硅膠2.5g0.4g25.0g15.0g15.0g適量適量制成1000粒制備工藝將處方量的咪達(dá)普利、吲達(dá)帕胺、葉酸、微晶纖維素、淀粉、羧甲基淀粉鈉粉碎、過篩后混合均勻，與適量的5%聚維酮k-30水溶液混合制成軟材后制粒、干燥、加入微粉硅膠混合均勻，按常規(guī)方法裝膠囊1000粒即得。實(shí)施例14咪達(dá)普利10mg/吲達(dá)帕胺2.5mg/葉酸0.8mg膠囊的制備處方咪達(dá)普利10g吲達(dá)帕胺2.5g葉酸0.8g淀粉25.0g微晶纖維素15.0g羧甲基淀粉鈉15.0g5%聚維酮k-30水溶液適量微粉硅膠適量制成1000粒制備工藝同實(shí)施例13。實(shí)施例15苯那普利10mg/螺內(nèi)酯40mg/左旋亞葉酸鈣0.2mg片的制備處方苯那普利10.0g螺內(nèi)酯40.0g左旋亞葉酸鈣(按左旋亞葉酸計(jì))0.2g微晶纖維素35.0g乳糖20.0g羧甲基淀粉鈉15.0g水適量硬脂酸鎂0.5g制成1000片制備工藝同實(shí)施例ll。實(shí)施例16苯那普利10mg/螺內(nèi)酯40mg/左旋亞葉酸鈣0.4mg片的制備處方苯那普利10.Og螺內(nèi)酯40.Og左旋亞葉酸鈣(按左旋亞葉酸計(jì))0.4g微晶纖維素35.Og乳糖20.Og羧甲基淀粉鈉15.Og水適量硬脂酸鎂0.5g制成1000片制備工藝同實(shí)施例ll。權(quán)利要求1.一種藥物組合物，包括(1)藥用劑量的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑；(2)藥用劑量的利尿劑；(3)藥用劑量的葉酸類化合物；(4)藥劑學(xué)上可接受的載體。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑選自依那普利、賴諾普利、培哚普利、咪達(dá)普利、苯那普利、雷米普利、卡托普利、莫昔普利、喹那普利、群多普利、西拉普利、或福辛普利中的一種，劑量為2.540mg。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的藥物組合物，其特征在于所述利尿劑選自氫氯噻嗪、吲達(dá)帕胺、依普利酮、或螺內(nèi)酯中的一種，劑量為2.550mg。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的藥物組合物，其特征在于所述藥用劑量的葉酸類化合物為葉酸、亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣，劑量為0.21.6mg。5.根據(jù)權(quán)利要求14中任一所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物的制藥劑型為口服制劑，包括片劑、膠囊或顆粒劑。6.權(quán)利要求14中任一所述的藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療或延緩高血壓的藥物中的用途。7.權(quán)利要求14中任一所述的藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療或延緩高血壓引起的靶器官損害的藥物中的用途。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于所述的靶器官損害包括左室肥厚、良性小動脈性腎硬化癥、惡性小動脈性腎硬化癥、腎功能衰竭、視網(wǎng)膜動脈硬化、或高血壓眼底病變。9.根據(jù)權(quán)利要求14中任一所述的藥物組合物在制備用于降低高血壓引起的心腦血管事件危險(xiǎn)性的藥物中的用途。10.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于所述降低高血壓引起的心腦血管事件危險(xiǎn)性是指降低心絞痛、心肌梗死、心力衰竭、腦梗塞、或腦出血的發(fā)生率。11.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于所述降低高血壓引起的心腦血管事件危險(xiǎn)性是指降低腦卒中的發(fā)生率。全文摘要本發(fā)明涉及血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑/利尿劑/葉酸聯(lián)合應(yīng)用的藥物組合物及其用途。該組合物包括藥用劑量的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、藥用劑量的利尿劑、藥用劑量的葉酸類化合物、和藥劑學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明提供了該藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療或延緩高血壓、高血壓引起的靶器官損害或高血壓相關(guān)疾病的藥物中的用途；本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備用于降低高血壓引起的心腦血管事件危險(xiǎn)性的藥物中的用途。通過本發(fā)明的實(shí)施，提供給患者該藥物組合物，可以提高療效，增加患者依從性，降低醫(yī)療費(fèi)用。文檔編號A61K45/00GK101176788SQ200710165778公開日2008年5月14日申請日期2007年11月3日優(yōu)先權(quán)日2006年11月11日發(fā)明者劉海鵬,呂紅霞,徐希平,康曹,莉李,段炎炎,段玉光,王琳琳,胡容峰,陳光亮申請人:深圳奧薩醫(yī)藥有限公司;安徽省生物醫(yī)學(xué)研究所