專利名稱：艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，屬于對藥品進行質(zhì)量控制的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
癌癥是嚴(yán)重威脅人類健康的一大類疾病，艾迪注射制劑主要由斑蝥、人參、黃芪和刺五加組成，具有清熱解毒、消瘀散結(jié)的作用，主要用于原發(fā)性肝癌，肺癌，直腸癌，惡性淋巴瘤，婦科惡性腫瘤等疾病。其中“艾迪注射液”刊登在中藥部頒標(biāo)準(zhǔn)第20冊。但是隨著社會的發(fā)展，對于藥品的質(zhì)量控制的要求越來越高，而且對于尋找快捷方便可控的檢測方法的需求也越來越迫切，本發(fā)明人經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有艾迪注射制劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中，產(chǎn)品性狀的描述不夠確切；對人參、黃芪的薄層鑒別中，供試品溶液的制備方法較繁瑣，上柱洗脫的操作方法時間較長；展開劑的選擇配比不夠理想，很難將各有效成份特別是人參皂苷Rg1和黃芪甲苷完全分開，同時展開劑有配置條件的限制，這些都易導(dǎo)致在鑒別過程中分離度不好，斑點顯色不夠清晰；另外原標(biāo)準(zhǔn)中未對薄層板厚度進行規(guī)定，但經(jīng)大量實現(xiàn)表明，人參對薄層板的要求很嚴(yán)，如果薄層板過薄，人參皂苷Rg1與黃芪甲苷很難分開，必須要厚板(500μm以上)才能將二者有效分離，同時濕度對其影響也很大，在展開過程中要嚴(yán)格控制濕度；故現(xiàn)有質(zhì)量控制方法不能有效控制艾迪注射制劑的質(zhì)量，從而將影響該制劑的臨床療效。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，該注射制劑包括凍干粉針劑、輸液劑和水針劑。本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，對這種艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法進行了研究，改進了斑蝥素的含量測定方法以及人參、黃芪的薄層鑒別方法，并增加了這種艾迪制劑的安全性指標(biāo)檢查項目，提高了艾迪注射制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，從而保證了該制劑的臨床療效。
本發(fā)明所述艾迪注射制劑是這樣構(gòu)成的按照重量組份計算它主要由斑蝥0.5-5、人參20-80、黃芪200-600、刺五加100-200制備而成。其制備方法為以上四味，人參切片，用20-85％乙醇加熱回流提取1-5次，合并提取液，濾過，回收乙醇，藥液備用；藥渣與其余斑蝥等三味加水煎煮1-6次，合并煎液，濾過，濾液與人參提取液合并，以石硫法沉淀處理1-3次，所得上清液加乙醇使含醇量達50-99％，靜置過夜，取上清液減壓回收乙醇至無醇味，再按照常規(guī)方法分別制成凍干粉針劑、輸液劑或水針劑。
本發(fā)明所述質(zhì)量控制方法主要包括性狀、鑒別、檢查以及含量測定項目中的部分或全部；其中鑒別包括α-萘酚顯色反應(yīng)、以人參皂苷Re、Rg1、Rb以及黃芪甲苷為對照對制劑中人參和黃芪的薄層色譜鑒別；含量測定是對制劑中人參所含人參皂苷Re、斑蝥所含斑蝥素的含量測定。
人參和黃芪的鑒別方法是以人參皂苷Re、Rg1、Rb以及黃芪甲苷為對照，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5為展開劑的薄層色譜方法。
人參和黃芪的鑒別方法還可以是以人參皂苷Re、Rg1、Rb以及黃芪甲苷為對照，以三氯甲烷∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10為展開劑的薄層色譜方法。
鑒別方法包括以下項目的部分或全部 (1)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加乙醇攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)方法一分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用三氯甲烷振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和正丁醇提取1-4次，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1-4次，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Re、Rg1、Rb1及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱，放置后再置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
方法二分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-4次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
具體的鑒別方法包括以下項目的部分或全部 (1)取凍干粉針400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至5-20ml、或取水針劑20-100ml濃縮至5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-4次，將沉淀物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)方法一取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml；置分液漏斗中，用10-50ml三氯甲烷振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和正丁醇提取1-4次，每次40-60ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1-4次，每次10-50ml，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb1及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，厚500μm及500μm以上；以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5為展開劑，在必要時控制濕度，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，放置1小時以上后再置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
方法二取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-4次，每次10-60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水1-10ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，內(nèi)徑0.5～2cm，長10-20cm，填充10-15cm的DA-201樹脂后，再填充1-5g中性氧化鋁；用水50-200ml洗滌，再用20-80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇0.5-5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
制劑中人參皂苷Re的含量測定方法是以人參皂苷Re對照品為對照的分光光度法。
制劑中斑蝥素的含量測定方法是以斑蝥素對照品為對照，以O(shè)V-17為固定液的氣相色譜法。
含量測定方法包括 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml。
(2)斑蝥素 方法一照中國藥典氣相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，以O(shè)V-17為固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷組成，涂漬量為0.5-3％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)60-120目。柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加入1-3mol/L硫酸溶液，再精密加入氯仿，振搖提取，靜置分層，必要時離心，取下層液即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
方法二照中國藥典氣相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合裝柱。柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500。
對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加入1-3mol/L硫酸溶液，用氯仿振搖提取1-5次，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容，即得。
測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
更具體的含量測定方法包括 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1-2mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱8-25分鐘，取出，用水冷卻1-3分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在400-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取輸液50-200ml濃縮至10-30ml、或取水針劑10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，每次2-10ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，每次40-60ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-5g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.3-0.6ml/min，棄去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml。
(2)斑蝥素 方法一照中國藥典氣相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，以O(shè)V-17為固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷組成，涂漬量為0.5-3％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)60-120目。柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.005-0.02mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取輸液30-100ml濃縮至約5-20ml、或取水針劑5-20ml；分別精密量取上述藥品，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-2ml，再精密加入0.5-2ml氯仿，振搖提取，靜置分層，必要時離心，取下層液即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2-12μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
方法二照中國藥典氣相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合裝柱。柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500。
對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.2mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml，加入1-3mol/L硫酸溶液2-10ml，用氯仿振搖提取1-5次，每次10-100ml，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容至2-8ml，即得。
測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
檢查項目包括以下項目的部分或全部 PH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1Kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 蛋白質(zhì)取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現(xiàn)渾濁； 鞣質(zhì)取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml，必要時，用0.45um微孔濾膜濾過，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀； 樹脂取凍干粉針50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液20-50ml濃縮至5ml、或取水針劑5ml；加鹽酸1滴，放置30分鐘，不得出現(xiàn)沉淀； 草酸鹽取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1-2，濾過，濾液調(diào)節(jié)PH值至5-6，加3％氯化鈣溶液2-3滴，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀； 鉀離子取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；蒸干，按照中國藥典鉀離子測定法測定，應(yīng)符合規(guī)定； 砷鹽取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；精密量取，于坩堝中蒸干，加2％的硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500-600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，照中國藥典砷鹽檢查法檢查；每1ml成品中含砷量不得過百萬分之二； 溶血與凝聚2％紅細胞混懸液的制備取兔血或羊血數(shù)毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液洗滌2-3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得； 供試品溶液的制備取凍干粉針100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液40-100ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；加生理氯化鈉溶液稀釋成50ml，混勻，即得； 試驗方法取試管6支，按下表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的供試品溶液，第6管為對照管，搖勻后，置37℃±0.5℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時； 按上法檢查，以第3管為準(zhǔn)，本品在3小時內(nèi)不得出現(xiàn)溶血和紅細胞凝聚； 異常毒性取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；按小鼠每只0.5ml，照中國藥典異常毒性檢查法檢查； 過敏物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按豚鼠致敏劑量為0.5ml/只，激發(fā)劑量為1.0ml/只；照中國藥典過敏物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 升壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按大鼠體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典升壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 降壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按貓體重1kg注射1ml的劑量，照中國藥典降壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 本發(fā)明所述質(zhì)量控制方法為 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加乙醇攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用三氯甲烷振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和正丁醇提取1-4次，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1-4次，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb1及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱，放置后再置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 pH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加入1-3mol/L硫酸溶液，用氯仿振搖提取1-5次，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容，即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
具體的質(zhì)量控制方法為 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)取凍干粉針400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至5-20ml、或取水針劑20-100ml濃縮至5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-4次，將沉淀物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml；置分液漏斗中，用10-50ml三氯甲烷振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和正丁醇提取1-4次，每次40-60ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1-4次，每次10-50ml，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb1及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，厚500μm及500μm以上；以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5為展開劑，在必要時控制濕度，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，放置1小時以上后再置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 pH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1-2mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱8-25分鐘，取出，用水冷卻1-3分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在400-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取輸液50-200ml濃縮至10-30ml、或取水針劑10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，每次2-10ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，每次40-60ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-5g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.3-0.6ml/min，棄去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.2mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml，加入1-3mol/L硫酸溶液2-10ml，用氯仿振搖提取1-5次，每次10-100ml，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容至2-8ml，即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
本發(fā)明所述質(zhì)量控制方法還可為 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加乙醇攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-4次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 PH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1Kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 蛋白質(zhì)取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現(xiàn)渾濁； 鞣質(zhì)取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml，必要時，用0.45um微孔濾膜濾過，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀； 樹脂取凍干粉針50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液20-50ml濃縮至5ml、或取水針劑5ml；加鹽酸1滴，放置30分鐘，不得出現(xiàn)沉淀； 草酸鹽取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1-2，濾過，濾液調(diào)節(jié)PH值至5-6，加3％氯化鈣溶液2-3滴，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀； 鉀離子取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；蒸干，按照中國藥典鉀離子測定法測定，應(yīng)符合規(guī)定； 砷鹽取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；精密量取，于坩堝中蒸干，加2％的硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500-600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，照中國藥典砷鹽檢查法檢查；每1ml成品中含砷量不得過百萬分之二； 溶血與凝聚2％紅細胞混懸液的制備取兔血或羊血數(shù)毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液洗滌2-3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得； 供試品溶液的制備取凍干粉針100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液40-100ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；加生理氯化鈉溶液稀釋成50ml，混勻，即得； 試驗方法取試管6支，按下表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的供試品溶液，第6管為對照管，搖勻后，置37℃±0.5℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時； 按上法檢查，以第3管為準(zhǔn)，本品在3小時內(nèi)不得出現(xiàn)溶血和紅細胞凝聚； 異常毒性取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；按小鼠每只0.5ml，照中國藥典異常毒性檢查法檢查； 過敏物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按豚鼠致敏劑量為0.5ml/只，激發(fā)劑量為1.0ml/只；照中國藥典過敏物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 升壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按大鼠體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典升壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 降壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按貓體重1kg注射1ml的劑量，照中國藥典降壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加入1-3mol/L硫酸溶液，用氯仿振搖提取1-5次，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容，即得 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
具體的質(zhì)量控制方法為 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)取凍干粉針400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至5-20ml、或取水針劑20-100ml濃縮至5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-4次，將沉淀物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-4次，每次10-60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水1-10ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，內(nèi)徑0.5～2cm，長10-20cm，填充10-15cm的DA-201樹脂后，再填充1-5g中性氧化鋁；用水50-200ml洗滌，再用20-80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇0.5-5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 PH值立為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1Kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 蛋白質(zhì)取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現(xiàn)渾濁； 鞣質(zhì)取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml，必要時，用0.45um微孔濾膜濾過，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀； 樹脂取凍干粉針50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液20-50ml濃縮至5ml、或取水針劑5ml；加鹽酸1滴，放置30分鐘，不得出現(xiàn)沉淀； 草酸鹽取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1-2，濾過，濾液調(diào)節(jié)PH值至5-6，加3％氯化鈣溶液2-3滴，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀； 鉀離子取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；蒸干，按照中國藥典鉀離子測定法測定，應(yīng)符合規(guī)定； 砷鹽取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；精密量取，于坩堝中蒸干，加2％的硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500-600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，照中國藥典砷鹽檢查法檢查；每1ml成品中含砷量不得過百萬分之二； 溶血與凝聚2％紅細胞混懸液的制備取兔血或羊血數(shù)毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液洗滌2-3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得； 供試品溶液的制備取凍干粉針100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液40-100ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；加生理氯化鈉溶液稀釋成50ml，混勻，即得； 試驗方法取試管6支，按下表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的供試品溶液，第6管為對照管，搖勻后，置37℃±0.5℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時； 按上法檢查，以第3管為準(zhǔn)，本品在3小時內(nèi)不得出現(xiàn)溶血和紅細胞凝聚； 異常毒性取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；按小鼠每只0.5ml，照中國藥典異常毒性檢查法檢查； 過敏物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按豚鼠致敏劑量為0.5ml/只，激發(fā)劑量為1.0ml/只；照中國藥典過敏物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 升壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按大鼠體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典升壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 降壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按貓體重1kg注射1ml的劑量，照中國藥典降壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1-2mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱8-25分鐘，取出，用水冷卻1-3分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在400-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取輸液50-200ml濃縮至10-30ml、或取水針劑10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，每次2-10ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，每次40-60ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-5g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.3-0.6ml/min，棄去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.2mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml，加入1-3mol/L硫酸溶液2-10ml，用氯仿振搖提取1-5次，每次10-100ml，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容至2-8ml，即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
本發(fā)明所述質(zhì)量控制方法還可為 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加乙醇攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-4次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 pH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，以O(shè)V-17為固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷組成，涂漬量為0.5-3％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)60-120目；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加入1-3mol/L硫酸溶液，再精密加入氯仿，振搖提取，靜置分層，必要時離心，取下層液即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
具體的質(zhì)量控制方法為 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)取凍干粉針400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至5-20ml、或取水針劑20-100ml濃縮至5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-4次，將沉淀物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-4次，每次10-60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水1-10ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，內(nèi)徑0.5～2cm，長10-20cm，填充10-15cm的DA-201樹脂后，再填充1-5g中性氧化鋁；用水50-200ml洗滌，再用20-80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇0.5-5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 pH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1-2mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40 80℃水浴中加熱8-25分鐘，取出，用水冷卻1-3分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在400-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取輸液50-200ml濃縮至10-30ml、或取水針劑10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，每次2-10ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，每次40-60ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-5g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.3-0.6ml/min，棄去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，以O(shè)V-17為固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷組成，涂漬量為0.5-3％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)60-120目；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.005-0.02mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取輸液30-100ml濃縮至約5-20ml、或取水針劑5-20ml；分別精密量取上述藥品，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-2ml，再精密加入0.5-2ml氯仿，振搖提取，靜置分層，必要時離心，取下層液即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2-12μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
本發(fā)明質(zhì)量控制方法是經(jīng)過大量的篩選試驗得到的最佳方案，以下實驗研究為本發(fā)明的優(yōu)選過程 一、斑蝥素含量測定方法研究 斑蝥素為艾迪注射制劑中抗癌的有效成份，本發(fā)明斑蝥素含量測定方法二為原有標(biāo)準(zhǔn)中所用的方法，是用氣相色譜法測定其含量，但其含量測定方法一直以來都受到限制，而且K-D濃縮器購買較為困難，這對測定該項目造成障礙，為了解決該問題，我們對斑蝥素含量測定的方法學(xué)進行了研究。
1.儀器 島津GC-14C氣相色譜儀，色譜柱玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，OV-17(50％甲基50％苯基聚硅氧烷)固定液的涂漬量為0.5-3％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)60-120目；檢測器FID氫火焰離子化檢測器，超純氮氣(80KPa)，氫氣(60KPa)，空氣(50KPa)；柱溫160℃，進樣口溫度240℃，檢測器溫度240℃，威瑪瓏工作站；微量進樣器(10μl)。
2.試藥硫酸、氯仿均為分析純；供含量測定用斑蝥素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。
3.色譜條件玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，OV-17(50％甲基50％苯基聚硅氧烷)固定液的涂漬量為0.5-3％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)60～120目。柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計，應(yīng)不低于1500。
因方法二中所用固定相色譜峰形不好，故將固定相改為OV-17(50％甲基50％苯基聚硅氧烷)固定液的涂漬量為0.5-3％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)60～120目。在照原標(biāo)準(zhǔn)的色譜條件進行檢測后發(fā)現(xiàn)，樣品在4.07min出峰，從獲得的色譜圖中可以看出，該主峰未落在基線處，前面還有一小峰未與之完全分離。通過試驗，在把柱溫降低到160℃時，樣品分離度大于1.5，故將柱溫改為160℃。
4.系統(tǒng)適用性試驗 分別取斑蝥素對照品、供試品液、缺斑蝥素的陰性供試品液4μl注入氣相色譜儀，斑蝥素對照品保留時間為8.33分鐘，而陰性樣品在8分鐘時無吸收，樣品在該時間分離度2.16，大于1.5，理論塔板數(shù)1904，故確定理論塔板數(shù)以斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500。
5.對照品溶液的制備精密稱取斑蝥素對照品適量，加氯仿制成每1ml含0.01mg的溶液，作為對照品溶液。
6.供試品溶液的制備精密量取本品10ml，置具塞試管中，加入1.8mol/L硫酸溶液1ml，再精密加入1ml氯仿，密塞，振搖3分鐘，靜置分層，必要時離心，取下層液即得。
7、精密度試驗 1)精密量取對照品溶液(C＝0.01088mg/ml)4ul，重復(fù)進樣5次，結(jié)果見下表 從結(jié)果可以看出，對照品重復(fù)進樣5次，RSD％為1.4％，說明精密度良好。
2)重復(fù)性試驗取同一批號藥品，按供試品處理方法同時處理6份供試品，結(jié)果見下表 從結(jié)果可以看出，6份重復(fù)性樣品含量平均值為0.010945mg/支，RSD％為2.2％，說明該法重復(fù)性良好。
8、穩(wěn)定性試驗 取本制劑，按供試品處理方法處理成供試品液，結(jié)果見下表 從結(jié)果可以看出，本品8小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
9、準(zhǔn)確度試驗 本品準(zhǔn)確度試驗按加樣回收率計算 樣品含量測定精密量取本品水針劑10ml，共取2份，置具塞試管中，分別加入1.8mol/L硫酸溶液1ml，再分別精密加入1ml氯仿，密塞，振搖3分鐘，靜置分層，離心，取下層液即得。再分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各4μl，注入氣相色譜儀，計算，即得。
對照品結(jié)果表 供試品結(jié)果表 回收率測定精密量取本品水針劑5ml，共取6份，置具塞試管中，分別加入1.8mol/L硫酸溶液1ml，再分別精密加入1ml斑蝥素對照品溶液(C＝0.01088mg/ml)，密塞，振搖3分鐘，靜置分層，離心，取下層液即得。再分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各4μl，注入氣相色譜儀，計算，即得。結(jié)果見下表 從結(jié)果可以看出，平均回收率為100.4％，RSD％為1.0％，說明該方法回收率良好，準(zhǔn)確度高。
10.范圍考察 根據(jù)本發(fā)明制劑中斑蝥素的含量限度，其含量小于1％，考察的范圍為±50％。取同一批樣品，分別精密量取6份，兩份5ml、兩份10ml、兩份15ml，按供試品處理方法處理成供試品液，結(jié)果見下表 從結(jié)果可以看出，6份樣品斑蝥素含量測定平均值為0.01149mg/支，RSD為1.2％，說明范圍試驗良好。
11.耐用性試驗 取本發(fā)明制劑，按供試品處理方法處理成供試品液，通過改變柱溫和檢測器溫度，結(jié)果見下表 從上表可以看出，柱溫對保留時間影響較大，檢測器溫度對保留時間無影響，但改變柱溫和檢測器溫度都能保證樣品含量基本不變，說明該法耐用性良好。
由上述方法研究結(jié)果可知，采用本發(fā)明所述斑蝥素的含量測定方法，準(zhǔn)確度高，試驗精密、穩(wěn)定、耐用，方法重現(xiàn)性好，是艾迪制劑理想的含量測定方法。
二、人參、黃芪薄層鑒別研究 以人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品鑒別制劑中人參、黃芪藥材 供試品溶液制備方法一取藥品，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取2次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用40％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；同法制備缺人參、黃芪的陰性供試液。
供試品溶液制備方法二取藥品，置分液漏斗中，用三氯甲烷振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和正丁醇提取2次，合并正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；同法制備缺人參、黃芪的陰性供試液。
供試品溶液制備方法三取藥品，置分液漏斗中，用乙醚振搖提取，棄去乙醚液，水層用水飽和正丁醇提取2次，合并正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；同法制備缺人參、黃芪的陰性供試液。
展開劑選擇分別以氯仿、醋酸乙酯、甲醇和水不同比例的混合溶液；環(huán)己烷、醋酸乙酯不同比例的混合溶液；三氯甲烷、甲醇和水不同比例的混合溶液；醋酸乙酯、丙酮、水不同比例的混合溶液為展開劑。
研究發(fā)現(xiàn)，采用方法二制備供試品溶液，在水飽和正丁醇萃取的基礎(chǔ)上經(jīng)過了兩次除雜過程，能有效除掉雜質(zhì)，操作簡單，省時省力；以三氯甲烷∶甲醇∶水為展開劑，一方面減少了一個組份醋酸乙酯，另一方面不需要在10℃以下放置，使操作簡單化且使有效成份完全分開；使用厚度為500μm以上的薄層板，同時控制濕度，達到人參皂苷Rg1與黃芪甲苷有效分離的目的；原標(biāo)準(zhǔn)中顯色后是直接置紫外光燈下檢視，但經(jīng)多次試驗發(fā)現(xiàn)，薄層板在噴顯色劑烘出斑點后，放置上一段時間(至少一小時)后再置紫外燈下檢視，樣品斑點更清晰。經(jīng)過多次試驗，采用本發(fā)明的薄層鑒別方法重現(xiàn)性好，專屬性強，陰性無干擾。
結(jié)果采用方法二制備供試品溶液，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5為展開劑，其分離度好，斑點顯色清晰，陰性對照無干擾，方法重現(xiàn)性最好，最佳展開劑為三氯甲烷∶甲醇∶水＝15∶6∶1。
三、檢查項下安全性指標(biāo)的確定 為配合國家提高中藥注射劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，同時也是為更好的控制這種艾迪注視制劑的質(zhì)量，我們對艾迪注射制劑增加以下蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、草酸鹽、鉀離子、砷鹽、溶血與凝聚、過敏反應(yīng)物質(zhì)、降壓物質(zhì)、升壓物質(zhì)、異常毒性、滲透壓等項目的檢查。
1.蛋白質(zhì)的檢查照中國藥典進行試驗。
方法1取艾迪產(chǎn)品水針劑1ml，加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，觀察結(jié)果； 方法2取艾迪產(chǎn)品水針劑1ml，加鞣酸試液1～3滴，觀察結(jié)果。
通過對10批樣品采用以上兩種方法進行試驗，結(jié)果均未出現(xiàn)渾濁，故將方法1收入成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
2.鞣質(zhì)的檢查照中國藥典進行試驗。
方法1取艾迪產(chǎn)品水針劑1ml，加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml〔必要時，用微孔濾膜(0.45um)濾過)〕，放置10分鐘，觀察結(jié)果。
方法2取艾迪產(chǎn)品水針劑1ml，加稀醋酸1滴，再加氯化鈉明膠試液4～5滴，觀察結(jié)果。
通過對10批樣品采用以上兩種方法進行試驗，結(jié)果均未出現(xiàn)渾濁或沉淀，故將方法1收入成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
3.樹脂的檢查照中國藥典進行試驗。
方法1取艾迪產(chǎn)品水針劑5ml，加鹽酸1滴，放置30分鐘，觀察結(jié)果。
方法2取艾迪產(chǎn)品水針劑5ml，加三氯甲烷10ml振搖提取，分取三氯甲烷液，置水浴上蒸干，殘渣加冰醋酸2ml使溶解，置具塞試管中，加水3ml，混勻，放置30分鐘，觀察結(jié)果。
通過對10批樣品采用以上兩種方法進行試驗，結(jié)果均未出現(xiàn)沉淀，故將方法1收入成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
4.草酸鹽的檢查照中國藥典進行試驗。取艾迪產(chǎn)品水針劑2ml，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，濾過，濾液調(diào)節(jié)pH值至5～6，加3％氯化鈣溶液2～3滴，放置10分鐘，通過對10批樣品進行試驗，結(jié)果均未出現(xiàn)渾濁或沉淀，故將草酸鹽的檢查納入成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
5.鉀離子的檢查照中國藥典進行試驗。取艾迪產(chǎn)品水針劑2ml，蒸干，先用小火熾灼至炭化，再在500～600℃至完全灰化，加稀醋酸2ml使溶解，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，作為供試品溶液。取10ml納氏比色管兩只，甲管中精密加入標(biāo)準(zhǔn)鉀離子溶液0.8ml，加堿性甲醛溶液0.6ml、3％乙二胺四醋酸二鈉溶液2滴、3％四苯硼鈉溶液0.5ml，加水稀釋成10ml；乙管中精密加入供試品溶液1ml，與甲管同時依法操作，搖勻。甲、乙兩管同置黑紙上，自上向下透視。通過對10批樣品進行試驗，結(jié)果供試品管濁度均淺于標(biāo)準(zhǔn)管，故將鉀離子檢查納入成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
6.砷鹽檢查艾迪注射制劑含有有機物對砷鹽可能存在吸附、絡(luò)合等作用影響檢出，因此在實驗中先加入硝酸鎂乙醇溶液對本品進行有機破壞，照中國藥典進行試驗。根據(jù)“中藥注射劑研究的技術(shù)要求”的“附件2質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容及項目要求”砷鹽的檢查規(guī)定“按《中國藥典》現(xiàn)行版方法檢查，暫定不得過百萬分之二?！保吨袊幍洹犯戒汭X F砷鹽檢查法中關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備是取用濃度為1ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml。由此我們可以按下式計算樣品的取樣量為1ml 具體操作方法為取艾迪產(chǎn)品水針劑1ml于坩堝中，蒸干，加2％的硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500～600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫5滴，在室溫放置10分鐘，加鋅粒2g照藥典附錄砷鹽檢查法第一法檢查。用10個批號的成品按上法進行試驗，均未出現(xiàn)砷斑。故將砷鹽檢查納入成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
7.溶血與凝聚檢查人參萜三醇及齊墩果酸為苷元的人參皂苷具有顯著的溶血作用，為提高藥品的安全性，根據(jù)藥典附錄中藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則對艾迪注射制劑做溶血與凝聚檢查。取試管6支，按下表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的供試品溶液(根據(jù)艾迪注射液用法用量“成人一次50～100ml，加0.9％的氯化鈉注射液400～450ml中靜脈滴注”，故選用取本品10ml，加生理氯化鈉溶液稀釋成50ml，混勻，作為供試品溶液；第6管為對照管)，搖勻后，置37℃±0.5℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時。
用10個批號的成品按上法進行試驗，均未出現(xiàn)溶血與凝聚現(xiàn)象。故將溶血與凝聚檢查納入成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
8.異常毒性檢查、過敏物質(zhì)檢查、升壓物質(zhì)檢查、降壓物質(zhì)檢查經(jīng)試驗研究，結(jié)果表明艾迪注射液異常毒性檢查、過敏物質(zhì)檢查、升壓物質(zhì)檢查、降壓物質(zhì)檢查均符合要求，故將其檢測方法納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。具體檢測方法為 異常毒性檢查取艾迪注射制劑，按小鼠每只0.5ml，照中國藥典方法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。
過敏物質(zhì)檢查取艾迪注射制劑，以原藥濃度，按豚鼠致敏劑量為0.5ml/只，激發(fā)劑量為1.0ml/只；照中國藥典方法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。
升壓物質(zhì)檢查取艾迪注射制劑，以原藥濃度，按大鼠體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典方法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。
降壓物質(zhì)檢查取艾迪注射制劑，以原藥濃度，按貓體重1kg注射1ml的劑量，照中國藥典方法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。
9.滲透壓的檢查因滲透壓項目缺乏檢測的儀器設(shè)備未能完成。
通過安全性指標(biāo)結(jié)果顯示，本品安全性是可靠的；研究試驗表明，各有關(guān)物質(zhì)檢查也是可行的。故將蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、草酸鹽、鉀離子、砷鹽、溶血與凝聚、異常毒性檢查、過敏反應(yīng)物質(zhì)、降壓物質(zhì)、升壓物質(zhì)項列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；而滲透壓因缺乏儀器設(shè)備未能完成，故未能將滲透壓納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明質(zhì)量控制方法提供了α-萘酚顯色反應(yīng)、以人參皂苷Re、Rg1、Rb以及黃芪甲苷為對照對制劑中人參和黃芪的薄層色譜鑒別，對制劑中所含人參皂苷Re、和斑蝥素的含量測定方法；以及對PH值、重金屬、熱原、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等安全性指標(biāo)的檢查；以上質(zhì)量控制方法可有效控制艾迪注射制劑的質(zhì)量，從而確保其臨床療效。

具體實施例方式以下通過實施例進一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。
本發(fā)明實施例1 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)取凍干粉針1000mg加注射用水20ml使溶解、或取輸液500ml濃縮至20ml、或取水針劑100ml濃縮至20ml；分別取上述藥品，加乙醇20ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1次，將沉淀物用蒸餾水10ml溶解，取0.5ml置試管中，微熱后加入2％α-萘酚乙醇溶液2滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)取凍干粉針1000mg加注射用水100ml使溶解、或取輸液500ml濃縮至100ml、或取水針劑100ml；置分液漏斗中，用50ml三氯甲烷振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和正丁醇提取1次，每次60ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌4次，每次10ml，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb1及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，厚800μm；以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10∶9∶5為展開劑，在必要時控制濕度，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，放置1小時以上后再置紫外光燈500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 pH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針300mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加10％香草醛冰醋酸溶液0.05ml、高氯酸0.5ml，搖勻，置80℃水浴中加熱8分鐘，取出，用水冷卻1分鐘，加冰醋酸2ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針400mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1次，每次30ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1次，每次2ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取5次，每次40ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉5g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.6ml/min，棄去洗液，用90％乙醇100ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為20％和10％，2∶0.5混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針1000mg加注射用水20ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至20ml、或取水針劑20ml，加入3mol/L硫酸溶液10ml，用氯仿振搖提取1次，每次100ml，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容至8ml，即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
本發(fā)明實施例2 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)取凍干粉針400mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至5ml、或取水針劑20ml濃縮至5ml；分別取上述藥品，加乙醇100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌4次，將沉淀物用蒸餾水2ml溶解，取3ml置試管中，微熱后加入10％α-萘酚乙醇溶液10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)取凍干粉針400mg加注射用水20ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至20ml、或取水針劑20ml；置分液漏斗中，用10ml三氯甲烷振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和正丁醇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1次，每次50ml，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb1及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，厚1000μm；以三氯甲烷∶甲醇∶水＝50∶1∶0.5為展開劑，在必要時控制濕度，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，放置1小時以上后再置紫外光燈200nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 pH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針20mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 2mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2％香草醛冰醋酸溶液1ml、高氯酸1.5ml，搖勻，置40℃水浴中加熱25分鐘，取出，用水冷卻3分鐘，加冰醋酸10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在400nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針200mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液50ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取5次，每次10ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌4次，每次10ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1次，每次60ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.3ml/min，棄去洗液，用40％乙醇70ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5％和10％，0.5∶0.5混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針1000mg加注射用水100ml使溶解、或取輸液500ml濃縮至100ml、或取水針劑100ml，加入1mol/L硫酸溶液2ml，用氯仿振搖提取5次，每次10ml，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容至2ml，即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
本發(fā)明實施例3 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)取凍干粉針750mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液400ml濃縮至10ml、或取水針劑50ml濃縮至10ml；分別取上述藥品，加乙醇50ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌2次，將沉淀物用蒸餾水5ml溶解，取1ml置試管中，微熱后加入5％α-萘酚乙醇溶液5滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.5ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)取凍干粉針750mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液400ml濃縮至500ml、或取水針劑50ml；置分液漏斗中，用30ml三氯甲烷振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和正丁醇提取2次，每次50ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb1及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5-10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，厚500μm；以三氯甲烷∶甲醇∶水＝15∶6∶1為展開劑，在必要時控制濕度，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，放置1小時以上后再置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 pH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針30mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液10ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針500mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1.6mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，用水冷卻2分鐘，加冰醋酸5ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在544nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針300mg加注射用水20ml使溶解、或取輸液100ml濃縮至20ml、或取水針劑20ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次20ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌2次，每次5ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取3次，每次50ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉3g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.4ml/min，棄去洗液，用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為10％和5％，1∶1混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針800mg加注射用水50ml使溶解、或取輸液450ml濃縮至50ml、或取水針劑50ml，加入1.8mol/L硫酸溶液5ml，用氯仿振搖提取3次，分別為50ml、30ml、30ml，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容至5ml，即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各5μl，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
本發(fā)明實施例4 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)取凍干粉針1000mg加注射用水20ml使溶解、或取輸液500ml濃縮至20ml、或取水針劑100ml濃縮至20ml；分別取上述藥品，加乙醇20ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1次，將沉淀物用蒸餾水10ml溶解，取0.5ml置試管中，微熱后加入2％α-萘酚乙醇溶液2滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)取凍干粉針1000mg加注射用水100ml使溶解、或取輸液500ml濃縮至100ml、或取水針劑100ml；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1次，每次60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水10ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，內(nèi)徑0.5～2cm，長10cm，填充10cm的DA-201樹脂后，再填充5g中性氧化鋁；用水50ml洗滌，再用80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1∶15∶10∶1，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈200nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 PH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1Kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 蛋白質(zhì)取凍干粉針20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現(xiàn)渾濁； 鞣質(zhì)取凍干粉針20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml，必要時，用0.45um微孔濾膜濾過，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀； 樹脂取凍干粉針100mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液50ml濃縮至5ml、或取水針劑5ml；加鹽酸1滴，放置30分鐘，不得出現(xiàn)沉淀； 草酸鹽取凍干粉針40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1-2，濾過，濾液調(diào)節(jié)PH值至5-6，加3％氯化鈣溶液2-3滴，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀； 鉀離子取凍干粉針40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；蒸干，按照中國藥典鉀離子測定法測定，應(yīng)符合規(guī)定； 砷鹽取凍干粉針20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；精密量取，于坩堝中蒸干，加2％的硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500-600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，照中國藥典砷鹽檢查法檢查；每1ml成品中含砷量不得過百萬分之二； 溶血與凝聚2％紅細胞混懸液的制備取兔血或羊血數(shù)毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液洗滌2-3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得； 供試品溶液的制備取凍干粉針200mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液100ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；加生理氯化鈉溶液稀釋成50ml，混勻，即得； 試驗方法取試管6支，按下表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的供試品溶液，第6管為對照管，搖勻后，置37℃±0.5℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時； 按上法檢查，以第3管為準(zhǔn)，本品在3小時內(nèi)不得出現(xiàn)溶血和紅細胞凝聚； 異常毒性取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；按小鼠每只0.5ml，照中國藥典異常毒性檢查法檢查； 過敏物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按豚鼠致敏劑量為0.5ml/只，激發(fā)劑量為1.0ml/只；照中國藥典過敏物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 升壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按大鼠體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典升壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 降壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按貓體重1kg注射1ml的劑量，照中國藥典降壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加10％香草醛冰醋酸溶液0.05ml、高氯酸0.5ml，搖勻，置80℃水浴中加熱8分鐘，取出，用水冷卻1分鐘，加冰醋酸2ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針400mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1次，每次30ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1次，每次2ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取5次，每次40ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉5g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.6ml/min，棄去洗液，用90％乙醇100ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為20％和10％，2∶0.5混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針1000mg加注射用水20ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至20ml、或取水針劑20ml，加入3mol/L硫酸溶液10ml，用氯仿振搖提取1次，每次100ml，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容至8ml，即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
本發(fā)明實施例5 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)取凍干粉針400mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至5ml、或取水針劑20ml濃縮至5ml；分別取上述藥品，加乙醇100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌4次，將沉淀物用蒸餾水2ml溶解，取3ml置試管中，微熱后加入10％α-萘酚乙醇溶液10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)取凍干粉針400mg加注射用水20ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至20ml、或取水針劑20ml；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次，每次10ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水1ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，內(nèi)徑0.5～2cm，長20cm，填充15cm的DA-201樹脂后，再填充1g中性氧化鋁；用水200ml洗滌，再用20％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝10∶2∶1∶10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 PH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針20mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針300mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1Kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 蛋白質(zhì)取凍干粉針10mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現(xiàn)渾濁； 鞣質(zhì)取凍干粉針10mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml，必要時，用0.45um微孔濾膜濾過，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀； 樹脂取凍干粉針50mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液20ml濃縮至5ml、或取水針劑5ml；加鹽酸1滴，放置30分鐘，不得出現(xiàn)沉淀； 草酸鹽取凍干粉針20mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1-2，濾過，濾液調(diào)節(jié)PH值至5-6，加3％氯化鈣溶液2-3滴，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀； 鉀離子取凍干粉針20mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；蒸干，按照中國藥典鉀離子測定法測定，應(yīng)符合規(guī)定； 砷鹽取凍干粉針10mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；精密量取，于坩堝中蒸干，加2％的硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500-600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，照中國藥典砷鹽檢查法檢查；每1ml成品中含砷量不得過百萬分之二； 溶血與凝聚2％紅細胞混懸液的制備取兔血或羊血數(shù)毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液洗滌2-3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得； 供試品溶液的制備取凍干粉針100mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液40ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；加生理氯化鈉溶液稀釋成50ml，混勻，即得； 試驗方法取試管6支，按下表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的供試品溶液，第6管為對照管，搖勻后，置37℃±0.5℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時； 按上法檢查，以第3管為準(zhǔn)，本品在3小時內(nèi)不得出現(xiàn)溶血和紅細胞凝聚； 異常毒性取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；按小鼠每只0.5ml，照中國藥典異常毒性檢查法檢查； 過敏物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按豚鼠致敏劑量為0.5ml/只，激發(fā)劑量為1.0ml/只；照中國藥典過敏物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 升壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按大鼠體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典升壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 降壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按貓體重1kg注射1ml的劑量，照中國藥典降壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 2mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2％香草醛冰醋酸溶液1ml、高氯酸1.5ml，搖勻，置40℃水浴中加熱25分鐘，取出，用水冷卻3分鐘，加冰醋酸10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在400nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針200mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液50ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取5次，每次10ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌4次，每次10ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1次，每次60ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.3ml/min，棄去洗液，用40％乙醇70ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5％和10％，0.5∶0.5混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針1000mg加注射用水100ml使溶解、或取輸液500ml濃縮至100ml、或取水針劑100ml，加入1mol/L硫酸溶液2ml，用氯仿振搖提取5次，每次10ml，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容至2ml，即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
本發(fā)明實施例6 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)取凍干粉針750mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液400ml濃縮至10ml、或取水針劑50ml濃縮至10ml；分別取上述藥品，加乙醇50ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌2次，將沉淀物用蒸餾水5ml溶解，取1ml置試管中，微熱后加入5％α-萘酚乙醇溶液5滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.5ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)取凍干粉針700mg加注射用水50ml使溶解、或取輸液400ml濃縮至50ml、或取水針劑50ml；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水3ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，內(nèi)徑1～1.5cm，長15cm，填充12cm的DA-201樹脂后，再填充2g中性氧化鋁；用水100ml洗滌，再用40％甲醇液50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝4∶8∶3∶4，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 PH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針30mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液10ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針500mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1Kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 蛋白質(zhì)取凍干粉針15mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液6ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現(xiàn)渾濁； 鞣質(zhì)取凍干粉針15mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液8ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml，必要時，用0.45um微孔濾膜濾過，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀； 樹脂取凍干粉針80mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液40ml濃縮至5ml、或取水針劑5ml；加鹽酸1滴，放置30分鐘，不得出現(xiàn)沉淀； 草酸鹽取凍干粉針30mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液10ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1-2，濾過，濾液調(diào)節(jié)PH值至5-6，加3％氯化鈣溶液2-3滴，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀； 鉀離子取凍干粉針30mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液15ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；蒸干，按照中國藥典鉀離子測定法測定，應(yīng)符合規(guī)定； 砷鹽取凍干粉針15mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液8ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；精密量取，于坩堝中蒸干，加2％的硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500-600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，照中國藥典砷鹽檢查法檢查；每1ml成品中含砷量不得過百萬分之二； 溶血與凝聚2％紅細胞混懸液的制備取兔血或羊血數(shù)毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液洗滌2-3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得； 供試品溶液的制備取凍干粉針150mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液80ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；加生理氯化鈉溶液稀釋成50ml，混勻，即得； 試驗方法取試管6支，按下表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的供試品溶液，第6管為對照管，搖勻后，置37℃±0.5℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時； 按上法檢查，以第3管為準(zhǔn)，本品在3小時內(nèi)不得出現(xiàn)溶血和紅細胞凝聚； 異常毒性取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；按小鼠每只0.5ml，照中國藥典異常毒性檢查法檢查； 過敏物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按豚鼠致敏劑量為0.5ml/只，激發(fā)劑量為1.0ml/只；照中國藥典過敏物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 升壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按大鼠體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典升壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 降壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按貓體重1kg注射1ml的劑量，照中國藥典降壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1.6mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，用水冷卻2分鐘，加冰醋酸5ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在544nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針300mg加注射用水20ml使溶解、或取輸液100ml濃縮至20ml、或取水針劑20ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次20ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌2次，每次5ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取3次，每次50ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉3g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.4ml/min，棄去洗液，用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為10％和5％，1∶1混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針800mg加注射用水50ml使溶解、或取輸液450ml濃縮至50ml、或取水針劑50ml，加入1.8mol/L硫酸溶液5ml，用氯仿振搖提取3次，分別為50ml、30ml、30ml，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容至5ml，即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各5μl，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
本發(fā)明實施例7 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)取凍干粉針1000mg加注射用水20ml使溶解、或取輸液500ml濃縮至20ml、或取水針劑100ml濃縮至20ml；分別取上述藥品，加乙醇20ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1次，將沉淀物用蒸餾水10ml溶解，取0.5ml置試管中，微熱后加入2％α-萘酚乙醇溶液2滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)取凍干粉針1000mg加注射用水100ml使溶解、或取輸液500ml濃縮至100ml、或取水針劑100ml；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1次，每次60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水10ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，內(nèi)徑0.5～2cm，長10cm，填充10cm的DA-201樹脂后，再填充5g中性氧化鋁；用水50ml洗滌，再用80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1∶15∶10∶1，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈200nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；檢查 pH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針300mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加10％香草醛冰醋酸溶液0.05ml、高氯酸0.5ml，搖勻，置80℃水浴中加熱8分鐘，取出，用水冷卻1分鐘，加冰醋酸2ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針400mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1次，每次30ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1次，每次2ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取5次，每次40ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉5g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.6ml/min，棄去洗液，用90％乙醇100ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，以O(shè)V-17為固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷組成，涂漬量為3％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)120目；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.02mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針100g加注射用水20ml使溶解、或取輸液100ml濃縮至約20ml、或取水針劑20ml；分別精密量取上述藥品，加入3mol/L硫酸溶液2ml，再精密加入2ml氯仿，振搖提取，靜置分層，必要時離心，取下層液即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml； 本發(fā)明實施例8 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)取凍干粉針400mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至5ml、或取水針劑20ml濃縮至5ml；分別取上述藥品，加乙醇100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌4次，將沉淀物用蒸餾水2ml溶解，取3ml置試管中，微熱后加入10％α-萘酚乙醇溶液10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)取凍干粉針400mg加注射用水20ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至20ml、或取水針劑20ml；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次，每次10ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水1ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，內(nèi)徑0.5～2cm，長20cm，填充15cm的DA-201樹脂后，再填充1g中性氧化鋁；用水200ml洗滌，再用20％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝10∶2∶1∶10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 pH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針20mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 2mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2％香草醛冰醋酸溶液1ml、高氯酸1.5ml，搖勻，置40℃水浴中加熱25分鐘，取出，用水冷卻3分鐘，加冰醋酸10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在400nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針200mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液50ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取5次，每次10ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌4次，每次10ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1次，每次60ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.3ml/min，棄去洗液，用40％乙醇70ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，以O(shè)V-17為固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷組成，涂漬量為0.5％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)60目；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.005mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針30g加注射用水50ml使溶解、或取輸液30ml濃縮至約5ml、或取水針劑5ml；分別精密量取上述藥品，加入1mol/L硫酸溶液0.5ml，再精密加入0.5ml氯仿，振搖提取，靜置分層，必要時離心，取下層液即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各12μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml； 本發(fā)明實施例9 性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物； 對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體； 鑒別 (1)取凍干粉針750mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液400ml濃縮至10ml、或取水針劑50ml濃縮至10ml；分別取上述藥品，加乙醇50ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌2次，將沉淀物用蒸餾水5 ml溶解，取1ml置試管中，微熱后加入5％α-萘酚乙醇溶液5滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.5ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)； (2)取凍干粉針700mg加注射用水50ml使溶解、或取輸液400ml濃縮至50ml、或取水針劑50ml；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水3ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，內(nèi)徑1～1.5cm，長15cm，填充12cm的DA-201樹脂后，再填充2g中性氧化鋁；用水100ml洗滌，再用40％甲醇液50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝4∶8∶3∶4，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 檢查 pH值應(yīng)為3.0-6.5； 重金屬取凍干粉針30mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液10ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五； 熱原取凍干粉針500mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液200ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定； 其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定； 含量測定 (1)人參皂苷Re 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1.6mg，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，用水冷卻2分鐘，加冰醋酸5ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在544nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 供試品溶液的制備取凍干粉針300mg加注射用水20ml使溶解、或取輸液100ml濃縮至20ml、或取水針劑20ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次20ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌2次，每次5ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取3次，每次50ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉3g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.4ml/min，棄去洗液，用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml； (2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，以O(shè)V-17為固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷組成，涂漬量為1.5％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)80-100目；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500； 對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.01mg的溶液，作為對照品溶液； 供試品溶液的制備取凍干粉針70g加注射用水10ml使溶解、或取輸液80ml濃縮至約10ml、或取水針劑10ml；分別精密量取上述藥品，加入1.8mol/L硫酸溶液1ml，再精密加入1ml氯仿，振搖提取，靜置分層，必要時離心，取下層液即得； 測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各4μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml；
權(quán)利要求
1.一種艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，所述注射制劑為凍干粉針劑、輸液劑或水針劑，其特征在于所述質(zhì)量控制方法主要包括性狀、鑒別、檢查以及含量測定項目中的部分或全部；其中鑒別包括α-萘酚顯色反應(yīng)、以人參皂苷Re、Rg1、Rb以及黃芪甲苷為對照對制劑中人參和黃芪的薄層色譜鑒別；含量測定是對制劑中人參所含人參皂苷Re、斑蝥所含斑蝥素的含量測定。
2.按照權(quán)利要求1所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于人參和黃芪的鑒別方法是以人參皂苷Re、Rg1、Rb以及黃芪甲苷對照品為對照，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5為展開劑的薄層色譜方法。
3.按照權(quán)利要求2所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于人參和黃芪的鑒別方法為分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用三氯甲烷振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和正丁醇提取1-4次，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1-4次，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb1及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱，放置后再置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
4.按照權(quán)利要求3所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于人參和黃芪的鑒別方法為取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml；置分液漏斗中，用10-50ml三氯甲烷振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和正丁醇提取1-4次，每次40-60ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1-4次，每次10-50ml，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb1及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，厚500μm及500μm以上；以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5為展開劑，在必要時控制濕度，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，放置1小時以上后再置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
5.按照權(quán)利要求1所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于制劑中斑蝥素的含量測定方法是以斑蝥素對照品為對照，以O(shè)V-17為固定液的氣相色譜法。
6.按照權(quán)利要求5所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于制劑中斑蝥素的含量測定方法為照中國藥典氣相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，以O(shè)V-17為固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷組成，涂漬量為0.5-3％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)60-120目；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500；
對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，作為對照品溶液；
供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加入1-3mol/L硫酸溶液，再精密加入氯仿，振搖提取，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；
測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
7.按照權(quán)利要求6所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于制劑中斑蝥素的含量測定方法為照中國藥典氣相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，以O(shè)V-17為固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷組成，涂漬量為0.5-3％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)60-120目；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500；
對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.005-0.02mg的溶液，作為對照品溶液；
供試品溶液的制備取凍干粉針30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取輸液30-100ml濃縮至約5-20ml、或取水針劑5-20ml；分別精密量取上述藥品，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-2ml，再精密加入0.5-2ml氯仿，振搖提取，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；
測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2-12μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
8.按照權(quán)利要求1所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于檢查項目包括
PH值應(yīng)為3.0-6.5；
重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；
熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1Kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
蛋白質(zhì)取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現(xiàn)渾濁；
鞣質(zhì)取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml，必要時，用0.45um微孔濾膜濾過，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀；
樹脂取凍干粉針50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液20-50ml濃縮至5ml、或取水針劑5ml；加鹽酸1滴，放置30分鐘，不得出現(xiàn)沉淀；
草酸鹽取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1-2，濾過，濾液調(diào)節(jié)PH值至5-6，加3％氯化鈣溶液2-3滴，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀；
鉀離子取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；蒸干，按照中國藥典鉀離子測定法測定，應(yīng)符合規(guī)定；
砷鹽取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；精密量取，于坩堝中蒸干，加2％的硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500-600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，照中國藥典砷鹽檢查法檢查；每1ml成品中含砷量不得過百萬分之二；
溶血與凝聚2％紅細胞混懸液的制備取兔血或羊血數(shù)毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液洗滌2-3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得；
供試品溶液的制備取凍干粉針100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液40-100ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；加生理氯化鈉溶液稀釋成50ml，混勻，即得；
試驗方法取試管6支，按下表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的供試品溶液，第6管為對照管，搖勻后，置37℃±0.5℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時；
按上法檢查，以第3管為準(zhǔn)，本品在3小時內(nèi)不得出現(xiàn)溶血和紅細胞凝聚；
異常毒性取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；按小鼠每只0.5ml，照中國藥典異常毒性檢查法檢查；
過敏物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按豚鼠致敏劑量為0.5ml/只，激發(fā)劑量為1.0ml/只；照中國藥典過敏物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
升壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按大鼠體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典升壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
降壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按貓體重1kg注射1ml的劑量，照中國藥典降壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定。
9.按照權(quán)利要求1所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于本發(fā)明所述質(zhì)量控制方法為
性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物；
對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體；
對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體；
鑒別
(1)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加乙醇攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；
(2)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用三氯甲烷振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和正丁醇提取1-4次，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1-4次，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb1及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱，放置后再置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
檢查
pH值應(yīng)為3.0-6.5；
重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；
熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定；
含量測定
(1)人參皂苷Re
對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得；
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml；
(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500；
對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，作為對照品溶液；
供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加入1-3mol/L硫酸溶液，用氯仿振搖提取1-5次，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容，即得；
測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
10.按照權(quán)利要求9所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于具體的質(zhì)量控制方法為
性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物；
對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體；
對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體；
鑒別
(1)取凍干粉針400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至5-20ml、或取水針劑20-100ml濃縮至5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-4次，將沉淀物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；
(2)取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml；置分液漏斗中，用10-50ml三氯甲烷振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和正丁醇提取1-4次，每次40-60ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌1-4次，每次10-50ml，棄去氨試液，正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb1及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，厚500μm及500μm以上；以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5為展開劑，在必要時控制濕度，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，放置1小時以上后再置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
檢查
pH值應(yīng)為3.0-6.5；
重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；
熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定；
含量測定
(1)人參皂苷Re
對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1-2mg，搖勻，即得；
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱8-25分鐘，取出，用水冷卻1-3分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在400-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
供試品溶液的制備取凍干粉針200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取輸液50-200ml濃縮至10-30ml、或取水針劑10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，每次2-10ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，每次40-60ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-5g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.3-0.6ml/min，棄去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml；
(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500；
對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.2mg的溶液，作為對照品溶液；
供試品溶液的制備取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml，加入1-3mol/L硫酸溶液2-10ml，用氯仿振搖提取1-5次，每次10-100ml，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容至2-8ml，即得；
測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
11.按照權(quán)利要求1所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于本發(fā)明所述質(zhì)量控制方法為
性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物；
對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體；
對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體；
鑒別
(1)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加乙醇攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；
(2)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-4次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
檢查
PH值應(yīng)為3.0-6.5；
重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；
熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1Kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
蛋白質(zhì)取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現(xiàn)渾濁；
鞣質(zhì)取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml，必要時，用0.45um微孔濾膜濾過，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀；
樹脂取凍干粉針50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液20-50ml濃縮至5ml、或取水針劑5ml；加鹽酸1滴，放置30分鐘，不得出現(xiàn)沉淀；
草酸鹽取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1-2，濾過，濾液調(diào)節(jié)PH值至5-6，加3％氯化鈣溶液2-3滴，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀；
鉀離子取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；蒸干，按照中國藥典鉀離子測定法測定，應(yīng)符合規(guī)定；
砷鹽取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；精密量取，于坩堝中蒸干，加2％的硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500-600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，照中國藥典砷鹽檢查法檢查；每1ml成品中含砷量不得過百萬分之二；
溶血與凝聚2％紅細胞混懸液的制備取兔血或羊血數(shù)毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液洗滌2-3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得；
供試品溶液的制備取凍干粉針100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液40-100ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；加生理氯化鈉溶液稀釋成50ml，混勻，即得；
試驗方法取試管6支，按下表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的供試品溶液，第6管為對照管，搖勻后，置37℃±0.5℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時；
按上法檢查，以第3管為準(zhǔn)，本品在3小時內(nèi)不得出現(xiàn)溶血和紅細胞凝聚；
異常毒性取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；按小鼠每只0.5ml，照中國藥典異常毒性檢查法檢查；
過敏物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按豚鼠致敏劑量為0.5ml/只，激發(fā)劑量為1.0ml/只；照中國藥典過敏物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
升壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按大鼠體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典升壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
降壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按貓體重1kg注射1ml的劑量，照中國藥典降壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定；
含量測定
(1)人參皂苷Re
對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得；
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml；
(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500；
對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，作為對照品溶液；
供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加入1-3mol/L硫酸溶液，用氯仿振搖提取1-5次，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容，即得；
測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
12.按照權(quán)利要求11所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于具體的質(zhì)量控制方法為
性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物；
對于輸液劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體；
對于水針劑，產(chǎn)品為淺黃色至淺棕色的澄明液體；
鑒別
(1)取凍干粉針400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至5-20ml、或取水針劑20-100ml濃縮至5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-4次，將沉淀物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；
(2)取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-4次，每次10-60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水1-10ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，內(nèi)徑0.5～2cm，長10-20cm，填充10-15cm的DA-201樹脂后，再填充1-5g中性氧化鋁；用水50-200ml洗滌，再用20-80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇0.5-5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
檢查
PH值應(yīng)為3.0-6.5；
重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；
熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1Kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
蛋白質(zhì)取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現(xiàn)渾濁；
鞣質(zhì)取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml，必要時，用0.45um微孔濾膜濾過，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀；
樹脂取凍干粉針50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液20-50ml濃縮至5ml、或取水針劑5ml；加鹽酸1滴，放置30分鐘，不得出現(xiàn)沉淀；
草酸鹽取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1-2，濾過，濾液調(diào)節(jié)PH值至5-6，加3％氯化鈣溶液2-3滴，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀；
鉀離子取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8 20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；蒸干，按照中國藥典鉀離子測定法測定，應(yīng)符合規(guī)定；
砷鹽取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；精密量取，于坩堝中蒸干，加2％的硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500-600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，照中國藥典砷鹽檢查法檢查；每1ml成品中含砷量不得過百萬分之二；
溶血與凝聚2％紅細胞混懸液的制備取兔血或羊血數(shù)毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液洗滌2-3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得；
供試品溶液的制備取凍干粉針100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液40-100ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；加生理氯化鈉溶液稀釋成50ml，混勻，即得；
試驗方法取試管6支，按下表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的供試品溶液，第6管為對照管，搖勻后，置37℃±0.5℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時；
按上法檢查，以第3管為準(zhǔn)，本品在3小時內(nèi)不得出現(xiàn)溶血和紅細胞凝聚；
異常毒性取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；按小鼠每只0.5ml，照中國藥典異常毒性檢查法檢查；
過敏物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按豚鼠致敏劑量為0.5ml/只，激發(fā)劑量為1.0ml/只；照中國藥典過敏物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
升壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按大鼠體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典升壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
降壓物質(zhì)檢查取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按貓體重1kg注射1ml的劑量，照中國藥典降壓物質(zhì)檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定；
含量測定
(1)人參皂苷Re
對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1-2mg，搖勻，即得；
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱8-25分鐘，取出，用水冷卻1-3分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在400-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
供試品溶液的制備取凍干粉針200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取輸液50-200ml濃縮至10-30ml、或取水針劑10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，每次2-10ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，每次40-60ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-5g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.3-0.6ml/min，棄去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml；
(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500；
對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.2mg的溶液，作為對照品溶液；
供試品溶液的制備取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml，加入1-3mol/L硫酸溶液2-10ml，用氯仿振搖提取1-5次，每次10-100ml，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容至2-8ml，即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
13.按照權(quán)利要求1所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于本發(fā)明所述質(zhì)量控制方法為
性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺棕色的疏松塊狀物；
對于輸液劑，產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；
對于水針劑，產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；
鑒別
(1)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加乙醇攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；
(2)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-4次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
檢查
pH值應(yīng)為3.0-6.5；
重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；
熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定；
含量測定
(1)人參皂苷Re
對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得；
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml；
(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，以O(shè)V-17為固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷組成，涂漬量為0.5-3％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)60-120目；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500；
對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，作為對照品溶液；
供試品溶液的制備分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加入1-3mol/L硫酸溶液，再精密加入氯仿，振搖提取，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；
測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
14.按照權(quán)利要求13所述艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于具體的質(zhì)量控制方法為
性狀對于凍干粉針劑，產(chǎn)品為淺棕色的疏松塊狀物；
對于輸液劑，產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；
對于水針劑，產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；
鑒別
(1)取凍干粉針400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至5-20ml、或取水針劑20-100ml濃縮至5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-4次，將沉淀物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；
(2)取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-4次，每次10-60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水1-10ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，內(nèi)徑0.5～2cm，長10-20cm，填充10-15cm的DA-201樹脂后，再填充1-5g中性氧化鋁；用水50-200ml洗滌，再用20-80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇0.5-5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
檢查
pH值應(yīng)為3.0-6.5；
重金屬取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；
熱原取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
其他應(yīng)符合中國藥典注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定；
含量測定
(1)人參皂苷Re
對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re 1-2mg，搖勻，即得；
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱8-25分鐘，取出，用水冷卻1-3分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在400-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
供試品溶液的制備取凍干粉針200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取輸液50-200ml濃縮至10-30ml、或取水針劑10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，每次2-10ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，每次40-60ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-5g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.3-0.6ml/min，棄去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml；
(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗玻璃色譜柱1-2m×3mm i d，以O(shè)V-17為固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷組成，涂漬量為0.5-3％，擔(dān)體Shimalite W(AW-DMCS)60-120目；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計算，應(yīng)不低于1500；
對照品溶液的制備取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.005-0.02mg的溶液，作為對照品溶液；
供試品溶液的制備取凍干粉針30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取輸液30-100ml濃縮至約5-20ml、或取水針劑5-20ml；分別精密量取上述藥品，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-2ml，再精密加入0.5-2ml氯仿，振搖提取，靜置分層，必要時離心，取下層液即得；
測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2-12μl，注入氣相色譜儀，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
全文摘要
本發(fā)明提供了艾迪注射制劑的質(zhì)量控制方法，所述質(zhì)量控制方法主要包括性狀、鑒別、檢查以及含量測定項目中的部分或全部；其中鑒別包括α-萘酚顯色反應(yīng)、以人參皂苷Re、Rg1、Rb以及黃芪甲苷為對照對制劑中人參和黃芪的薄層色譜鑒別；含量測定是對制劑中人參所含人參皂苷Re、斑蝥所含斑蝥素的含量測定；檢查包括對pH值、重金屬、熱原、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等安全性指標(biāo)的檢查；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明質(zhì)量控制方法可有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，從而確保其臨床療效。
文檔編號A61K36/481GK101181339SQ200710078008
公開日2008年5月21日 申請日期2007年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月19日
發(fā)明者竇啟玲, 葉湘武, 瓊 湯 申請人:貴州益佰制藥股份有限公司