專利名稱：：甜茶多酚的分離提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及從甜茶中分離提取甜茶多酚的方法。
背景技術(shù)：
：甜茶(RubussuavissimsS丄ee)系薔薇科懸鉤子屬多年生落葉灌木。甜茶野生資源分布在廣西的金秀、鹿寨、昭平、岑溪、蒼梧、藤縣、賀縣、桂平等縣市，生于海拔5001000m的丘陵山地常綠闊葉林或溝谷、林緣、灌木叢中，為廣西特有植物。甜茶葉在廣西民間應(yīng)用已有悠久歷史，長(zhǎng)期以來(lái)除當(dāng)茶葉飲用之外，甜茶還入藥用。甜茶性涼、無(wú)毒、有生津止咳、清熱解毒、利咽潤(rùn)肺、消炎降壓、降糖、減肥、抗過(guò)敏等功效。廖曼云等人對(duì)甜茶、甜茶素、甜茶水提物等作了毒理學(xué)研究，表明甜茶及其主要成分毒性低，安全性大，幾無(wú)蓄積性。鐘正賢等人利用甜茶提取物對(duì)小鼠作了咳嗽實(shí)驗(yàn)，表明甜茶具有止咳祛痰、抗炎、止痛和鎮(zhèn)靜作用。蘇學(xué)素等及日本三得利公司對(duì)甜茶進(jìn)行了抑制透明質(zhì)酸酶的實(shí)驗(yàn)，證明甜茶水提物有抑制透明質(zhì)酸酶的作用。田翠平等人的實(shí)驗(yàn)表明了甜茶提取物能極顯著地降低STZ致高血糖大鼠血糖，增強(qiáng)其抗氧化能力，同時(shí)能刺激胰島素的分泌。甜茶多酚是一類復(fù)雜的酚類化合物的總合，包括黃酮類和水解多酚類，其中以水解多酚中的鞣花多酚為主，具有抗過(guò)敏活性。日本Nakahara^koichi等人采用溶劑萃取、柱層析、凝膠色譜分離聯(lián)用的方法獲得了GOD多酚含量高于90。/。的甜茶多酚，并解析了甜茶GOD多酚的結(jié)構(gòu)，申請(qǐng)了關(guān)于含有抗過(guò)敏性成分GOD多酚的活性食品和藥品的專利。他們?cè)趯＠嘘U明了甜茶的有效成分是甜茶多酚，它具有明顯抑制柱狀肥大細(xì)胞釋放組胺的能力，從而具有抗炎、抗過(guò)敏的能力，對(duì)過(guò)敏性疾病如鼻炎、花粉癥、皮炎、氣喘等有明顯改善作用，同時(shí)證明了甜茶多酚還是透明質(zhì)酸酶良好的抑制物。雖然甜茶多酚在日本等國(guó)已得到應(yīng)用，但工業(yè)化的分離提取方法并未見報(bào)道，甜茶多酚的分離提純研究和工業(yè)化生產(chǎn)及應(yīng)用在國(guó)內(nèi)至今仍為空白。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種工藝簡(jiǎn)單、有機(jī)溶劑只用乙醇、可工業(yè)化制備具有抗過(guò)敏活性的甜茶多酚的方法。本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問(wèn)題-采用水提堿轉(zhuǎn)溶法或醇提水沉法從干甜茶葉獲得甜茶葉提取物，采用兩次超濾截留后濃縮、干燥可獲得含甜茶多酚》50%的甜茶粉產(chǎn)品。將兩次超濾截留后的茶汁通過(guò)層析柱經(jīng)吸附樹脂處理后進(jìn)行梯度洗脫，將70%乙醇洗脫液濃縮、干燥可獲得含甜茶多酚》90%的甜茶粉產(chǎn)品。用水提堿轉(zhuǎn)溶法提取甜茶葉得的茶汁，用Na0H溶液將茶汁的pH調(diào)整至8.5進(jìn)行轉(zhuǎn)溶后，濾去不溶物，用HCL或檸檬酸調(diào)整還原溶液pH至5.4后才進(jìn)行超濾處理。用醇提水沉法提取甜茶葉時(shí)，先將甜茶干葉與乙醇水溶液按重量比l:1030的比例進(jìn)行提取，需蒸發(fā)回收乙醇后才進(jìn)行超濾處理。茶汁超濾可以分別選用1萬(wàn)5萬(wàn)道爾頓分子量的有機(jī)高分子管式膜和1千5千道爾頓分子量的有機(jī)高分子管式膜進(jìn)行兩次超濾處理，取兩次超濾之中間段的超濾溶液進(jìn)行后處理。吸附樹脂可以是聚酰胺、大孔吸附樹脂或交換吸附纖維。本發(fā)明甜茶多酚的分離提取方法突出優(yōu)點(diǎn)是1、采用了超濾和樹脂吸附分離技術(shù)相結(jié)合的方法優(yōu)化甜茶多酚的分離工藝，本方法操作簡(jiǎn)單，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。2、生產(chǎn)過(guò)程不使用除了乙醇之外的有機(jī)溶劑，符合環(huán)保要求。產(chǎn)品符合食品和藥品原料的要求。3、本發(fā)明以廣西甜茶為原料，通過(guò)調(diào)節(jié)生產(chǎn)工藝及參數(shù)，以Folin-Ciocalteau法分析總酚含量，可以生產(chǎn)出甜茶多酚含量分別大于50%和90%的產(chǎn)品，滿足市場(chǎng)需要。4、本發(fā)明的甜茶多酚產(chǎn)品，通過(guò)透明質(zhì)酸酶抑制率體外實(shí)驗(yàn)和小鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)、二硝基氯苯所致遲發(fā)型皮膚過(guò)敏反應(yīng)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明具有明顯的抗過(guò)敏活性。表l甜茶多酚的透明質(zhì)酸酶抑制率<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>表2甜茶多酚的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注與對(duì)照組比較*P<0.01,***P<0.001。圖l是本發(fā)明甜茶多酚的分離提取方法工藝流程圖。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的甜茶多酚的分離提取方法包括將甜茶干葉用水或60%(重量％,以下同)乙醇水溶液抽提、過(guò)濾、兩次超濾、濃縮、柱層析、濃縮、干燥等步驟。水抽提的具體工藝是水抽提后過(guò)濾去除粗渣，再用"/。NaOH溶液調(diào)整茶汁pH至8.5,并加熱煮沸，冷卻過(guò)濾后用HCL或檸檬酸將濾液pH值調(diào)整至5.4左右得到水提取液。乙醇水溶液抽提的具體工藝是先將甜茶十葉與60%乙醇水溶液按1:1030的重量比進(jìn)行提取，提取液過(guò)濾后回收乙醇，將其濃縮液加2倍水稀釋后過(guò)濾，濾液即為醇提取液。將用上述方法得到的水提取液或醇提取液先進(jìn)行1萬(wàn)5萬(wàn)截留分子量的有機(jī)膜過(guò)濾，取其透過(guò)液再進(jìn)行10005000截留分子量的有機(jī)膜過(guò)濾，其截留液即為兩次超濾之中間段的超濾溶液。將此超濾溶液濃縮后噴霧干燥或冷凍干燥，可得到含甜茶多酚》50%的甜茶粉產(chǎn)品。將用上述方法得到的兩次超濾中間段的超濾溶液濃縮后進(jìn)行柱層析吸附，分別采用水、30%乙醇、70%乙醇進(jìn)行梯度洗脫，去除雜質(zhì)，收集70%乙醇洗脫相進(jìn)行濃縮，噴霧或冷凍干燥后即可得到含甜茶多酚》90%的甜茶粉產(chǎn)品。柱層析填料可以用聚酰胺、大孔吸附樹脂或交換吸附纖維等材料。實(shí)施例h甜茶干葉100克，加3000ml蒸餾水，95'C抽提20min,過(guò)濾除渣得茶汁。茶汁冷卻后用mNaOH溶液調(diào)整pH至8.5，然后將茶汁加熱煮沸并冷卻，離心去除不溶物得2750ml清亮茶汁，用WHCL溶液調(diào)整茶汁pH至5.4。取截留分子量分別為50000和5000的有機(jī)膜進(jìn)行兩次超濾，取介于5000和50000之間的截留液進(jìn)行濃縮，冷凍干燥即得甜茶粉16.l克，甜茶多酚含量為50.2%。實(shí)施例2:甜茶干葉100克，力aiOOOml蒸餾水如實(shí)施例l進(jìn)行抽提，轉(zhuǎn)溶，超濾得截留液并濃縮，然后采用LSA-21層析柱進(jìn)行吸附，用乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集70%洗脫液進(jìn)行濃縮，冷凍干燥得甜茶粉1.9克，甜茶多酚含量為90.2%。實(shí)施例3:甜茶干葉100克，加3000ml的60n/。乙醇水溶液，60'C抽提60min，過(guò)濾除渣，蒸發(fā)回收乙醇后得茶汁600ml。將1200ml蒸餾水加入茶汁中，攪拌后過(guò)濾，取清汁進(jìn)行兩次超濾，濾膜的截留分子量分別為1OOOO和1OOO。取介于1000和10000之間的截留液進(jìn)行濃縮，冷凍干燥即得甜茶粉16.7克，甜茶多酚含量為52.1%。實(shí)施例4:甜茶干葉100克，如例l進(jìn)行水抽提，超濾，得超濾截留液并濃縮，然后采用聚酰胺層析柱進(jìn)行吸附，用乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集70%洗脫液進(jìn)行濃縮，冷凍干燥得甜茶粉2.2克，甜茶多酚含量為91.1%。權(quán)利要求1、一種甜茶多酚的分離提取方法，其特征是采用水提堿轉(zhuǎn)溶法或醇提水沉法從干甜茶葉獲得茶葉提取物，采用兩次超濾截留后濃縮、干燥可獲得含甜茶多酚≥50％的甜茶粉產(chǎn)品。2.如權(quán)利要求l所述的甜茶多酚的分離提取方法，其特征是將兩次超濾截留后的茶汁通過(guò)層析柱進(jìn)行梯度洗脫，將70%乙醇洗脫液濃縮、干燥可獲得含甜茶多酚》90%的甜茶粉產(chǎn)品。3.如權(quán)利要求1或2所述的甜茶多酚的分離提取方法，其特征是采用水提堿轉(zhuǎn)溶法或醇提水沉法從干甜茶葉獲得甜茶葉提取物的提取溫度為6095'C。4.如權(quán)利要求1或2所述的甜茶多酚的分離提取方法，其特征是用水提堿轉(zhuǎn)溶法得的茶汁，用NaOH將溶液的pH調(diào)整至8.5進(jìn)行轉(zhuǎn)溶后，濾去不溶物，用HCL或檸檬酸調(diào)整還原溶液pH至5.4后才進(jìn)行超濾處理。5.如權(quán)利要求1或2所述的甜茶多酚的分離提取方法，其特征是用醇提水沉法提取甜茶葉時(shí)，先將甜茶干葉與乙醇水溶液按重量比l:1030的比例進(jìn)行提取，需蒸發(fā)回收乙醇后才進(jìn)行超濾處理。6.如權(quán)利要求1或2所述的甜茶多酚的分離提取方法，其特征是茶汁超濾分別選用1萬(wàn)5萬(wàn)道爾頓分子量的有機(jī)高分子管式膜和1千5千道爾頓分子量的有機(jī)高分子管式膜進(jìn)行兩次超濾處理，取兩次超濾之中間段的超濾溶液進(jìn)行后處理。7.如權(quán)利要求1或2所述的甜茶多酚的分離提取方法，其特征是吸附樹脂是聚酰胺、大孔吸附樹脂或交換吸附纖維。全文摘要一種甜茶多酚的分離提取方法，采用了超濾和樹脂吸附分離技術(shù)相結(jié)合的方式，生產(chǎn)過(guò)程只使用了乙醇作為有機(jī)溶劑，優(yōu)化了甜茶多酚的分離工藝，不僅操作簡(jiǎn)單、可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，而且生產(chǎn)過(guò)程符合環(huán)保要求，產(chǎn)品符合食品和藥品原料要求。本發(fā)明以廣西甜茶為原料生產(chǎn)出的產(chǎn)品甜茶多酚含量分別大于50％和90％，通過(guò)透明質(zhì)酸酶抑制率體外實(shí)驗(yàn)和小鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)、二硝基氯苯所致遲發(fā)型皮膚過(guò)敏反應(yīng)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明具有明顯的抗過(guò)敏活性。文檔編號(hào)A61K36/185GK101190276SQ200710051050公開日2008年6月4日申請(qǐng)日期2007年12月14日優(yōu)先權(quán)日2007年12月14日發(fā)明者寧夏,滕建文,韋保耀,麗黃申請(qǐng)人:廣西大學(xué)