專利名稱：：冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑；另外，本發(fā)明還涉及該冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑的制備方法。技術(shù)背景納米載藥技術(shù)是納米技術(shù)和現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)結(jié)合的產(chǎn)物。載藥納米粒一般是指粒徑在10nm-1000nm之間的固態(tài)或膠態(tài)粒子，藥物通過溶解、包裹作用分布于粒子內(nèi)部或通過吸附作用位于粒子的表面。理想的納米載藥系統(tǒng)應(yīng)該具備以下性質(zhì):具有較高的載藥量和包封率、適當(dāng)?shù)牧胶土Ｐ巍⑤^長的體內(nèi)循環(huán)時間、藥物釋放的靶向性、載體材料的無毒、可降解等。納米粒由于其本身特有的性質(zhì)，使其在藥物輸送方面具有許多特有的優(yōu)點(diǎn)納米粒在生物體內(nèi)的分布具有特異性控制納米粒的大小，可以使納米粒到達(dá)特定的組織，起到靶向的作用。比如粒徑在100nm-1000nm的微球很快被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)的吞噬細(xì)胞從血液中清除，到達(dá)網(wǎng)狀內(nèi)皮組織豐富的肝、脾等組織中，而粒徑小于100nm的納米粒可到達(dá)骨髓等組織；對載藥納米粒表面進(jìn)行修飾，可以延長納米粒在血液中的半衰期，或者使納米粒到達(dá)某些特定的部位如以F-68包裹的聚氰基丙烯酸丁酯納米?？梢酝ㄟ^血腦屏障BBB，將藥物輸送到腦部。而PEG修飾的聚丙交酯-聚乙交酯納米粒在血液中的停留時間大大延長，從而可以減少給藥次數(shù)和給藥量，提高藥物的利用率；因?yàn)樗幬锸峭ㄟ^化學(xué)或物理的作用，分散于納米粒的內(nèi)部或吸附于納米的表面，因此載藥納米?？梢跃忈屗幬?，延長藥物的作用時間；可以提高藥物的穩(wěn)定性，避免藥物在達(dá)到病灶部位前被降解，這一點(diǎn)對基因藥物和具有生物活性的藥物特別重要。基于載藥納米粒以上的一些特點(diǎn)，載藥納米粒體系具有獨(dú)特優(yōu)勢的給藥體系，已經(jīng)成為藥劑學(xué)研究的熱點(diǎn)，擁有廣闊的發(fā)展前景。
發(fā)明內(nèi)容針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題之一是提供一種對光、熱、氧、水等性能穩(wěn)定，無污染，并便于操作、運(yùn)輸和儲藏，適用于大生產(chǎn)的冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題之二是提供上述冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑的制備方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑，它由下列組分按下述重量配比制成冬凌草甲素1-50份；兩親聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯ABA型嵌段共聚物10-200份；賦形劑20-1000份；注射用水10-500份。本發(fā)明上述凍干粉針劑，pH值在5.5-7.5之間，最好的pH值在6.0_7.0之間。另外，上述賦形劑最好選自甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖和右旋糖酐中的一種或一種以上的混合物。在本發(fā)明中兩親聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯(PCL-PEO-PCL)ABA型嵌段共聚物為載藥納米材料。本發(fā)明上述冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑的制備方法包括如下步驟將冬凌草甲素與兩親聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯(PCL-PEO-PCL)ABA型嵌段共聚物制備成載藥納米粒溶液(該步驟已由中國專利CN1711989A于2002年12月28日公開)；將賦形劑加入至載藥納米粒溶液中，攪拌使其溶解，以0.22um濾膜過濾除菌；按每瓶2ml的裝量分裝于玻璃西林瓶中，送入冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥，加蓋，即制得冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑。其中，冷凍干燥過程的凍干曲線如下<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑是以冷凍干燥原理制備的注射用無菌粉末，pH在6.0—7.0之間，具有以下優(yōu)點(diǎn)①凍干粉針劑水分含水量低于3%(W/W)，避免了冬凌草甲素載藥納米粒在水溶液中放置時間過長而產(chǎn)生絮狀沉淀的現(xiàn)象。②便于操作，適用于大生產(chǎn)。③降低了同劑量藥品的體積和重量，節(jié)約各經(jīng)營環(huán)節(jié)的運(yùn)輸成本，解決了寒冷和炎熱季節(jié)的運(yùn)輸和儲藏問題。圖1是本發(fā)明冬凌草甲素載藥納米溶液透射電鏡顯微圖(X20500);圖2是本發(fā)明載藥納米粒溶液的粒徑分布圖；圖3是兩親聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯(PCL-PEO-PCL)的DSC分析圖；圖4是冬凌草甲素的DSC分析圖；圖5是本發(fā)明冬凌草甲素載藥納米粒的DSC分析圖；圖6是兩親聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯(PCL-PEO-PCL)X-射線衍射分析圖；圖7是冬凌草甲素X-射線衍射分析圖；圖8是本發(fā)明冬凌草甲素載藥納米粒X-射線衍射分析圖；圖9是本發(fā)明藥效學(xué)初步實(shí)驗(yàn)小鼠H22瘤體大小比較圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖和實(shí)施例進(jìn)一步詳述本發(fā)明。實(shí)施例1本實(shí)施例的整個制備過程均在凈化臺上進(jìn)行。稱取冬凌草甲素l.Og,兩親聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯(PCL-PEO-PCL)ABA型嵌段共聚物10.0g，按照中國專利CN1711989A于2002年12月28日公開的方法制備2000ml載藥納米粒溶液。稱取甘露醇200g，分批加入到載藥納米粒溶液中，充分?jǐn)嚢枋谷芙猓?.22um濾膜過濾除菌，按每瓶2ml的裝量分裝于西林瓶中，共得1000瓶，送入冷凍干燥機(jī)凍干(見凍干曲線l)，加蓋，即制得冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑。凍干曲線h工序升溫速率時間(h)溫度(r)(1)預(yù)凍3室溫冷至-30'C—(2)保溫1.5-30。C—50°C(3)抽真空0.5-30°C—50°C(4)升溫5—10。C/小時6升溫至-5°C(5)升溫5—10。C/小時4-5'C升溫至0°C(6)升溫5—10'C/小時3(TC升溫至10°C(7)升溫5—1(TC/小時3l(TC升溫至25°C(8)保溫225°C實(shí)施例2本實(shí)施例的整個制備過程均在凈化臺上進(jìn)行。稱取冬凌草甲素0.5g，兩親聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯(PCL-PE0-PCL)ABA型嵌段共聚物10.0g,按照中國專利CN1711989A子2002年12月28日公開的方法制備1000ml載藥納米粒溶液。稱取乳糖300g，分批加入到載藥納米粒溶液中，充分?jǐn)嚢枋谷芙猓?.22iim濾膜過濾除菌，按每瓶2ml的裝量分裝于西林瓶中，共得500瓶，送入冷凍干燥機(jī)凍干(見凍干曲線2)，加蓋，即制得冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑。凍干曲線2:工序升溫速率時間(h)溫度(TC)(1)預(yù)凍1.5室溫冷至-30°C(2)保溫0.5-30。C——50°C(3)抽真空0.5-30°C—50°C(4)升溫5—10'C/小時5升溫至-5°C(5)升溫5—10'C/小時4-5。C升溫至0。C(6)升溫5—10。C/小時4(TC升溫至10°C(7)升溫5—10'C/小時3l(TC升溫至25°C(8)保溫225°C實(shí)施例3本實(shí)施例的整個制備過程均在凈化臺上進(jìn)行。稱取冬凌草甲素l.Og，兩親聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯(PCL-PEO-PCL)ABA型嵌段共聚物10.Og,按照中國專利CN1711989A于2002年12月28日公開的方法制備2000ml載藥納米粒溶液。稱取甘露醇150g，右旋糖酐50g，分批加入到載藥納米粒溶液中，充分?jǐn)嚢枋谷芙猓?.22mn濾膜過濾除菌，按每瓶2ml的裝量分裝于西林瓶中，共得1000瓶，送入冷凍干燥機(jī)凍干(見凍干曲線3)，加蓋，即制得冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑。凍干曲線3:工序升溫速率時間(h)溫度(x:)(1)預(yù)凍2窒溫冷至-30'C—(2)保溫1-30'C—50°C(3)抽真空0.5-30。C——50°C(4)升溫5—10'C/小時5升溫至-5。C(5)升溫5—10'C/小時5-5'C升溫至0°C(6)升溫5—10。C/小時3O'C升溫至10°C(7)升溫5—10'C/小時3IO'C升溫至25°C(8)保溫225。C實(shí)施例4本實(shí)施例的整個制備過程均在凈化臺上進(jìn)行。稱取冬凌草甲素1.Og，兩親聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯(PCL-PEO-PCL)ABA型嵌段共聚物10.Og，按照中國專利CN1711989A于2002年12月28日公開的方法制備2000ml載藥納米粒溶液。稱取葡萄糖150g，右旋糖酐50g，分批加入到載藥納米粒溶液中，充分?jǐn)嚢枋谷芙猓?.22um濾膜過濾除菌，按每瓶2ml的裝量分裝于西林瓶中，共得1000瓶，送入冷凍干燥機(jī)凍干(見凍干曲線4)，加蓋，即制得冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑。凍干曲線4:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>(6)升溫5—10'C/小時3(TC升溫至10°C(7)升溫5—10。C/小時310'C升溫至25。C(8)保溫225。C為進(jìn)一步說明本發(fā)明，我們對冬凌草納米溶液、載體材料、藥物以及載藥納米粒進(jìn)行了表征，并對制劑的藥效學(xué)進(jìn)行了初步試驗(yàn)，具體過程如下1、納米溶液的形態(tài)與粒徑分布將上述任一實(shí)施例制備的樣品用適量的水稀釋后，2.0%磷鎢酸負(fù)染，于透射電鏡下觀察。結(jié)果見圖l，由透射電鏡照片可見，其外觀圓整，大小均一。將納米溶液用超純水稀釋，未經(jīng)濾過直接測定。測定溫度25°C，所用激光波長372nm，入射角90°，每個樣品的穩(wěn)定時間為3分鐘。結(jié)果見圖2，其平均粒徑為118.2nm。2、物相分析將兩親(PCL-PE0-PCL)、冬凌草甲素、分別做DSC分析和X-射線衍射分析，結(jié)果如圖3-圖8所示。如圖所示的結(jié)果證明冬凌草甲素載藥納米粒的物相和聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯、冬凌草甲素是不相同的，形成了一種新的物相，說明載藥納米粒已經(jīng)形成。3、藥效學(xué)初步試驗(yàn)動物和瘤株正常昆明小鼠34只，雄性，清潔級，6-8周齡，體重18-22g。瘤株為小鼠肝癌H22小鼠肝癌移植模型的建立將凍存的腹水型肝癌細(xì)胞株H22復(fù)蘇，體外培養(yǎng)至對數(shù)生長期時，離心，PBS沖洗后，制成lX107個/ml細(xì)胞濃度，每只0.5ml接種于小鼠后肢皮下，共6只。分組和給藥6天后，將小鼠隨機(jī)分為四組生理鹽水組(25ml/kg，每次0.5ml，尾靜脈注射，1次/天)；空白納米組(25ml/kg);冬凌草甲素組(冬凌草8mg/kg，每次0.5ml，尾靜脈注射，1次/天)；冬凌草納米組(冬凌草納米，含藥8mg/kg，每次0.5ml，尾靜脈注射，1次/天)，連續(xù)給藥7天。收集腫瘤標(biāo)本末次給藥24h后，處死小鼠，剖取腫瘤組織并稱重，用量筒測量腫瘤體積。按以下公式計(jì)算抑瘤率。抑瘤率(％)=(對照組平均瘤重一治療組平均瘤重)/對照組平均瘤重X100%統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用〗士s表示，數(shù)據(jù)處理用單因素方差分析，均數(shù)間兩兩比較采用q檢驗(yàn)。結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖10和表1所示，試驗(yàn)結(jié)果表明冬凌草甲素、冬凌草納米對小鼠皮下移植性腫瘤具有較好的抑制效果，給藥后瘤體的重量和體積與生理鹽水組，空白納米組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中，冬凌草納米組與生理鹽水組和空白納米組相比統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著(P<0.01)，另外冬凌草納米組的瘤重和瘤體積與冬凌草甲素組相比也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而空白納米組的瘤重和瘤體積與生理鹽水組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)過程中，給藥后斯生理鹽水組、空白納米組部分小鼠出現(xiàn)腹水，少動，毛散亂，無光澤。其余兩組上述情況則不明顯。表1.各組小鼠尾靜脈給藥后七天體積和重量比較表組別劑量瘤體積瘤重抑瘤率(mg/kg)(始/終)(cm3)(g)(%)NS組—7/71.3±0.51.2±0.6空白納米組27/61.0±0.20.9±0.125.00冬凌草甲素47/70.6±0.20.6±0.150.00組冬凌草納米含藥47/70.5±0.10.4±0.166.67組注與NS組相比冬凌草甲素組P〈0.05，冬凌草納米組P〈0.01與空白納米組相比冬凌草甲素組P<0.01，冬凌草納米組P<0.01與冬凌草甲素組相比冬凌草納米組p<0.0權(quán)利要求1.一種冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑，其特征在于，它由下列組分按下述重量配比制成冬凌草甲素1-50份；兩親聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯ABA型嵌段共聚物10-200份；賦形劑20-1000份；注射用水10-500份；其中，上述凍干粉針劑的pH值為5.5-7.5。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑，其特征在于，所述賦形劑選自甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖和右旋糖酐中的一種或一種以上的混合物。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑，其特征在于，pH值為6.0-7.0。4、權(quán)利要求1-3中任何一項(xiàng)權(quán)利要求所述的冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟將冬凌草甲素與兩親聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯ABA型嵌段共聚物制備成載藥納米粒溶液；將賦形劑加入至載藥納米粒溶液中，攪拌使其溶解，以0.22um濾膜過濾除菌；按每瓶2ml的裝量分裝于玻璃西林瓶中，送入冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥，加蓋；其中，冷凍干燥過程的凍干曲線如下工序升溫速率時間(h)溫度(r)(1)預(yù)凍1-5室溫冷至-30。C——50°C(2)保溫0.5-3-30°C—50°C(3)抽真空0.5-30°C——50°C(4)升溫5—1(TC/小時2.5-9升溫至-5。C(5)升溫5—10。C/小時2-6-5。C升溫至0。C(6)升溫5—10'C/小時2-60'C升溫至10'C(7)升溫5—1(TC/小時2-510'C升溫至25。C(8)保溫2-525°C。全文摘要本發(fā)明公開了一種冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑，旨在提供一種對光、熱、氧、水等性能穩(wěn)定，無污染，并便于操作、運(yùn)輸和儲藏，適用于大生產(chǎn)的冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑。該凍干粉針劑的pH值為5.5-7.5，并由下列組分按下述重量配比制成冬凌草甲素1-50份，兩親聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚酯內(nèi)酯ABA型嵌段共聚物10-200份，賦形劑20-1000份，注射用水10-500份。本發(fā)明凍干粉針劑適用于抗腫瘤病癥的治療，具有很好的抑制效果。另外，本發(fā)明還公開了上述冬凌草甲素載藥納米粒凍干粉針劑的制備方法。文檔編號A61K31/352GK101229151SQ20071003687公開日2008年7月30日申請日期2007年1月26日優(yōu)先權(quán)日2007年1月26日發(fā)明者馮年平,曉況,劉召林,南藝?yán)?琦李,李淞明,梅映昊,炎王,田俊峰申請人:上海中醫(yī)藥大學(xué)