專利名稱：獸用中藥新促孕液的半仿生提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種獸用中藥新促孕液的半仿生提取技術(shù)，屬于中獸藥液體制劑提取的新工藝。
背景技術(shù)：
新型中藥促孕灌注液(簡(jiǎn)稱新促孕液，NFPL)是本研究室研制成功的新中獸藥，專利號(hào)ZL200310106276.X，申請(qǐng)日2003.11.13。每1000ml新促孕液藥液的處方量藥材為黃柏600g，益母草500g，淫羊藿500g，紅花200g，硼砂100g，元明粉100g。其制備方法為，將前四味藥材飲片加10倍水煎煮兩次，每次1小時(shí)，合并煎液，過(guò)濾，將濾液濃縮，加入酒精使含醇量體積比達(dá)到75％，沉淀，抽濾，回收乙醇，加入蒸餾水稀釋，沖入硼砂、元明粉，攪拌溶解，靜置沉淀24小時(shí)以上，精濾，分裝，高壓滅菌。
新促孕液具有清熱燥濕、活血化瘀、補(bǔ)腎壯陽(yáng)、催情促孕等功效，用于防治母畜子宮內(nèi)膜炎、卵巢靜止和持久黃體性不孕癥效果可靠。該藥前四味組分藥原使用傳統(tǒng)的水煎醇沉法提取。近年來(lái)中藥提取又涌現(xiàn)出許多新技術(shù)，如半仿生提取法(Semi-bionic Extraction Method，SBE)。SBE法是從生物藥劑學(xué)角度，模擬口服給藥后藥物經(jīng)胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)、吸收而設(shè)計(jì)的一種新的提取工藝。主要是提取過(guò)程中采用不同pH值的水煎藥，以增加中藥成分的煎出率。有報(bào)道認(rèn)為，此法可以提高藥液中有效成分的含量。為進(jìn)一步提高新促孕液的有效成分含量和功效，本發(fā)明首次將半仿生提取法引入中獸藥液體制劑的制備，取得了理想的效果。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明針對(duì)獸用中藥提取現(xiàn)有技術(shù)中有效成分含量低的問(wèn)題，提供一種半仿生提取新工藝，達(dá)到有效地提高中獸藥液體制劑的有效成分含量和藥效的目的。
技術(shù)方案 獸用中藥新促孕液的半仿生提取工藝，包括按照每1000ml藥液的處方量藥材為黃柏600g，益母草500g，淫羊藿500g，紅花200g，硼砂100g，元明粉100g，將前四味藥材飲片加水煎煮，過(guò)濾煎液，將濾液濃縮，加入酒精，沉淀，抽濾，回收乙醇，加入蒸餾水稀釋，沖入硼砂、元明粉，攪拌溶解，靜置沉淀24小時(shí)以上，精濾，分裝，高壓滅菌獲得，其特征在于，分2組取黃柏加淫羊藿、益母草加紅花分別煎煮3次第一次加10倍量pH值為2.0的水煎煮1.5h，濾出藥液；第二次加8倍量pH值為7.5的水煎煮1.0h，濾出藥液；第三次加8倍量pH值為9.0的水煎煮1.0h，濾出藥液；合并上述2組的3次煎液，過(guò)濾濃縮至2000ml，加入酒精使含醇量體積比達(dá)到70％。
有益效果本發(fā)明首先以提取液中淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選了新促孕液半仿生提取的條件，發(fā)現(xiàn)第1、2、3煎水的pH值分別為2.0、7.5和9.0，煎煮時(shí)間分別為1.5h、1.0h和1.0h為最佳提取條件(表1～表2)。
將新促孕液的4種組分藥排列成15種組合，分別用半仿生法提取，以藥液中淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏的含量為指標(biāo)綜合判定提取效果。結(jié)果表明，以黃柏與淫羊藿合煎、益母草與紅花合煎、然后合并的組合方式最佳(表3)。
用上述條件半仿生提取新促孕液，比較60％、70％、80％三種醇沉濃度分別沉淀1次和2次對(duì)提取液中淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏含量的影響。結(jié)果表明，醇沉濃度為70％、沉淀1次的效果最佳(表4)。
比較了水提取(WE)、半仿生提取(SBE)、水提醇沉(WAE)和半仿生水提醇沉(SBAE)法提取對(duì)新促孕液提取液中淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏的含量的影響。結(jié)果表明，半仿生提取法優(yōu)于水提取法，半仿生水提醇沉法優(yōu)于水提醇沉法(表5)。
比較了分別用水提取(WE)、半仿生提取(SBE)、水提醇沉(WAE)和半仿生水提醇沉(SBAE)法提取的4種新促孕液提取液對(duì)子宮內(nèi)膜炎主要致病菌的抑菌作用。結(jié)果表明，半仿生提取法能提高新促孕液的藥理作用(表6)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)如下1.首次將半仿生提取新工藝引入獸用中藥液體制劑的制備，優(yōu)選了新促孕液的半仿生提取條件，改進(jìn)了新促孕液的制備工藝。
2.運(yùn)用半仿生提取新工藝制備新促孕液，有效地提高了新促孕液的有效成分淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏的含量和藥理作用。
3.倡導(dǎo)新技術(shù)在傳統(tǒng)中獸醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用，推動(dòng)中獸醫(yī)醫(yī)藥學(xué)現(xiàn)代化，社會(huì)效益顯著。
具體實(shí)施例方式
1.新促孕液半仿生提取工藝條件的優(yōu)選 以3煎用水的pH值和煎煮總時(shí)間兩個(gè)因素用均勻設(shè)計(jì)法設(shè)計(jì)了新促孕液半仿生提取的條件，分別用高效液相色譜法、分光光度法等測(cè)定提取液中淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏含量，數(shù)據(jù)用標(biāo)準(zhǔn)化處理(X’i，j＝(Xi，j-X)/Sj；Xi，j為樣品液i中4個(gè)成分j的相應(yīng)數(shù)值)和加權(quán)求和計(jì)算綜合評(píng)價(jià)Y值(Y＝(淫羊藿苷+小檗堿)×8+總生物堿×4+干浸膏×3)，比較提取效果。結(jié)果表明，以淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏含量為指標(biāo)，第1、2、3煎水的pH值分別為2.0、7.5和9.0，煎煮時(shí)間分別為1.5h、1.0h和1.0h時(shí)的綜合評(píng)價(jià)Y值最大，該條件最佳(表1～表2)。
表1UL(91*33)均勻設(shè)計(jì)表

注三次煎提的時(shí)間比為1.5∶1∶1。
表29種提取液中淫羊藿苷和小檗堿的含量(％)和綜合評(píng)價(jià)Y值


2.新促孕液半仿生提取分煎合煎方式的優(yōu)選將新促孕液的4種組分藥排列成15種組合，分別用半仿生法提取，用高效液相色譜法、分光光度法等測(cè)定成品藥液中淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏的含量，同上法計(jì)算綜合評(píng)價(jià)Y值，比較提取效果。結(jié)果表明，以成品藥液中淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏的含量為指標(biāo)，黃柏與淫羊藿合煎、益母草與紅花合煎、然后合并的綜合評(píng)價(jià)Y值最大，該組合方式最佳(表3)。
表315種樣品液中各指標(biāo)成分含量(％)和綜合評(píng)價(jià)Y值

*“+”號(hào)為分煎后合并煎液。
3.新促孕液半仿生提取醇沉濃度的優(yōu)選 用上述條件半仿生提取新促孕液，以60％、70％、80％三種醇沉濃度分別沉淀1次和2次，用高效液相色譜法、分光光度法等測(cè)定成品藥液中淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏的含量，同上法計(jì)算綜合評(píng)價(jià)Y值，比較提取效果。結(jié)果表明，以成品藥液中淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏的含量為指標(biāo)，醇沉濃度為70％、沉淀1次時(shí)的綜合評(píng)價(jià)Y值最大，效果最佳(表4)。
表46種提取液中各成分的含量(％)和綜合評(píng)價(jià)Y值

*×1表示醇沉1次，×2表示醇沉2次。
4.半仿生提取對(duì)新促孕液有效成分含量的影響 分別采用水提取(WE)、半仿生提取(SBE)、水提醇沉(WAE)和半仿生水提醇沉(SBAE)法提取制備新促孕液，用高效液相色譜法、分光光度法等測(cè)定藥液中淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏的含量，同上法計(jì)算綜合評(píng)價(jià)Y值，比較4種提取方法的提取效果。結(jié)果，4種方法提取液中淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏含量的綜合評(píng)價(jià)Y值的排序?yàn)镾BE法＞W(wǎng)E法，SBAE法＞W(wǎng)AE法。表明，半仿生提取法優(yōu)于水提取法，半仿生水提醇沉法優(yōu)于水提醇沉法(表5)。
表54種提取液中各成分的含量(％)和綜合評(píng)價(jià)Y值

5.半仿生提取對(duì)新促孕液抑菌效果的影響分別用水提取(WE)、半仿生提取(SBE)、水提醇沉(WAE)和半仿生水提醇沉(SBAE)法提取制備新促孕液，用抑菌試驗(yàn)法比較了4種提取液對(duì)子宮內(nèi)膜炎主要病原菌的體外抑制作用。結(jié)果表明，4種提取方法的抑菌效果排序?yàn)镾BE法＞W(wǎng)E法，SBAE法＞W(wǎng)AE法，表明SBAE法能提高新促孕液的藥理作用(表6)。
表64種提取液對(duì)4種病原菌的抑菌圈直徑(mm)

實(shí)施例半仿生水提醇沉法制備1000ml新促孕液處方量藥材為黃柏600g，益母草500g，淫羊藿500g，紅花200g，硼砂100g，元明粉100g。
分別取黃柏600g加淫羊藿500g、益母草500g加紅花200g各煎煮3次，第一次加10倍量pH值為2.0的水煎煮1.5h，濾出藥液；第二次加8倍量pH值為7.5的水煎煮1.0h，濾出藥液；第三次加8倍量pH值為9.0的水煎煮1.0h，濾出藥液；合并2組的3次煎液，濃縮至2000ml，緩慢加入95％乙醇使含醇量達(dá)到70％，攪勻，靜置24h，抽濾，回收乙醇，加入蒸餾水稀釋，沖入硼砂、元明粉，攪拌溶解，靜置沉淀24小時(shí)以上，精濾，加注射用水稀釋至1000ml，分裝，滅菌，獲得新促孕液。
用高效液相色譜法、分光光度法等測(cè)定上述方法制備的新促孕液的有效成分淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏的含量，數(shù)據(jù)用標(biāo)準(zhǔn)化處理和加權(quán)求和計(jì)算綜合評(píng)價(jià)Y值。結(jié)果，4種有效成分含量的綜合評(píng)價(jià)Y值(-4.0980)明顯大于傳統(tǒng)的水提醇沉法的Y值(-19.9953)。表明半仿生水提醇沉法明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的水提醇沉法，能明顯提高新促孕液的有效成分含量。
用抑菌試驗(yàn)法測(cè)定上述方法制備的新促孕液對(duì)子宮內(nèi)膜炎的主要病原菌金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、乳房鏈球菌和無(wú)乳鏈球菌的抑菌作用。結(jié)果，半仿生水提醇沉法制備的新促孕液對(duì)以上病菌的抑菌圈直徑在6.0～10.9mm，明顯大于傳統(tǒng)的水提醇沉法制備的新促孕液的抑菌圈直徑(5.5～10.3mm)。表明，半仿生水提醇沉法優(yōu)于傳統(tǒng)的水提醇沉法，能提高新促孕液的藥理作用。
權(quán)利要求
1.獸用中藥新促孕液的半仿生提取工藝，包括按照每1000ml藥液的處方量藥材為黃柏600g，益母草500g，淫羊藿500g，紅花200g，硼砂100g，元明粉100g，將前四味藥材飲片加水煎煮，過(guò)濾煎液，將濾液濃縮，加入酒精，沉淀，抽濾，回收乙醇，加入蒸餾水稀釋，沖入硼砂、元明粉，攪拌溶解，靜置沉淀24小時(shí)以上，精濾，分裝，高壓滅菌獲得，其特征在于，分2組取黃柏加淫羊藿、益母草加紅花分別煎煮3次第一次加10倍量pH值為2.0的水煎煮1.5h，濾出藥液；第二次加8倍量pH值為7.5的水煎煮1.0h，濾出藥液；第三次加8倍量pH值為9.0的水煎煮1.0h，濾出藥液；合并上述2組的3次煎液，過(guò)濾濃縮至2000ml，加入酒精使含醇量體積比達(dá)到70％。
全文摘要
本發(fā)明為一種獸用中藥新促孕液的半仿生提取新工藝，屬于獸用中藥液體制劑的制備領(lǐng)域。按照新促孕液配方分別取黃柏加淫羊藿、益母草加紅花各煎煮3次第一次加10倍量pH值為2.0的水煎煮1.5h，濾出藥液；第二次加8倍量pH值為7.5的水煎煮1.0h，濾出藥液；第三次加8倍量pH值為9.0的水煎煮1.0h，濾出藥液；合并2組的3次煎液，濃縮，加入95％乙醇使含醇量體積比達(dá)到70％，攪勻，靜置，抽濾，回收乙醇，加注射用水稀釋，滅菌獲得。本發(fā)明能有效地提高新促孕液的有效成分淫羊藿苷、小檗堿、總生物堿和干浸膏的含量，顯著提高對(duì)子宮內(nèi)膜炎主要病原菌的抑制作用。
文檔編號(hào)A61K33/22GK101019955SQ20071001934
公開(kāi)日2007年8月22日 申請(qǐng)日期2007年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月17日
發(fā)明者胡元亮, 周淑貞, 張寶康, 王德云 申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)