專利名稱：：用作抗癌藥物的6-[(取代的)苯基]三唑并嘧啶類的二聚體和加合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及某些6-[(取代的)苯基-三唑并嘧啶化合物的加合物和二聚體或其可藥用鹽，以及包含所述化合物或其可藥用鹽的組合物，其中所述化合物是用于治療哺乳動物癌癥、治療或預(yù)防表現(xiàn)出多藥抗藥性(MDR)或者由于MDR而抗藥的癌性胂瘤的抗癌藥物，還涉及在需要這類治療的哺乳動物中通過促進(jìn)微管聚合來治療或抑制癌性腫瘤細(xì)胞生長和相關(guān)疾病的方法，以及通過施用有效量的本發(fā)明化合物或其可藥用鹽來治療或抑制對化療中所用的化療藥物并且特別是抗有絲分裂藥物具有遺傳性或獲^f尋性抗藥性的哺乳動物中癌性肺瘤生長的方法。
背景技術(shù)：
：由于DNA是開發(fā)化療藥物的首要靶點因此目前所用的多數(shù)細(xì)胞抑DNA的模板功能。不幸的是，抑制DNA生物合成的重要前體的形成或者阻斷DNA多聚酶或者干擾DNA的模板功能也對正常組織有效?？刮⒐芩幬锸且活愔匾目拱┧幬?Rowinsky，E.K.，和Tolcher，A.W.Antimicrotubuleagents.In:V.T.Devita，Jr"S.Hellman，以及S.A.Rosenberg(編輯)，CancerPrinciplesandPractice,第6版，pp.431-452.Philadelphia:LippincottWilliamsandWilkins，2001)。它們通過干擾細(xì)胞微管、特別是有絲分裂紡錘體的功能來起作用。正常紡錘體功能的中斷導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。目前，共有三種主要類型的抗微管藥理學(xué)藥物。其各自在P-微管蛋白上具有不同的結(jié)合位點并對微管功能具有不同作用。這些類型是l)促進(jìn)微管形成和穩(wěn)定微管的紫杉烷-位點藥物；2)長春花生物堿/肽-位點藥物，其使微管不穩(wěn)定并且經(jīng)常誘導(dǎo)異常聚合物的形成或在高濃度下聚集；和3)秋水仙素-位點藥物，其同樣使微管不穩(wěn)定并且通常不誘導(dǎo)形成其它聚合物(Hamel，E.Antimitoticnaturalproductsandtheirinteractionswithtubulin.Med.Res.Rev.，16:207-231，1996)。這三類位點的大多數(shù)配體都是天然產(chǎn)物或天然產(chǎn)物的半合成衍生物。紫杉醇及其半合成衍生物多西紫杉醇(Taxotere⑧)干擾微管形成并穩(wěn)定微管。紫杉醇(Taxo鵬)是從太平洋紅豆杉(Western(Pacific)yew)，即短葉紅豆杉(rfl;c附6"v,/o/Ztf)的樹皮中分離出的二萜，是具有紫杉烷環(huán)系統(tǒng)的新一類治療藥物的代表。此外還發(fā)現(xiàn)在紅豆杉科的其它成員包括在加拿大東部的Gaspesia發(fā)現(xiàn)的加拿大紅豆杉(r似附awifl&"w》以及在歐洲發(fā)現(xiàn)的歐洲紅豆杉(rox附6flccfl似)的針葉中包含紫杉醇及類似物，因此提供了紫杉醇及其衍生物的新來源。在20世紀(jì)60年代中第一次檢測了該粗提取物的活性，于1971年分離出其有效成分并鑒定化學(xué)結(jié)構(gòu)(M.C.Wani等人，J.Am.Chem.Soc"93，2325(1971))。此外，通過其他試驗顯示出對黑色素瘤細(xì)胞、白血病、多種癌、肉瘤和非霍奇金淋巴瘤以及大量的動物實體瘤廣泛的活性。紫杉醇及其類似物通過從紅豆杉針葉和小枝中獲得的前體10-去乙酰漿果赤霉素III的半合成和通過全合成(Holton等人，J.Am.Chem.Soc.116:1597-1601(1994)和Nicolaou等人，Nature367:630-634(1994))來制備。已經(jīng)證實紫杉醇具有抗腫瘤活性。近來，已發(fā)現(xiàn)紫杉醇的抗胂瘤活性源于對微管聚合的促進(jìn)作用(Kumar，N.，J.Biol.Chem.56:10435-10441(1981);Rowinsky等人，J.Natl.CancerInst"82:1247-1259(19卯)；和Schiff等人，Nature,277:665-667(1979))?，F(xiàn)在在臨床試驗中已經(jīng)證實紫杉醇對多種人類肺瘤有效(McGuire等人，Ann.Int.Med.，111:273-279(1989);Holmes等人，J.Natl.CancerInst"83:1797-1805(1991);Kohn等人，J.Natl.CancerInst"86:18-24(1994);和A.Bicker等人，Anti-CancerDrugs,4,141-148(1993))。兩種紫杉烷-位點藥物(紫杉醇和多西紫杉醇)以及三種長春花生物堿/肽-位點藥物(長春堿、長春新堿和長春瑞濱)在臨床上用于治療多種人類癌癥。已經(jīng)證實紫杉烷類比長春花生物堿更多地用于對抗實體瘤(例如肺、乳腺、卵巢腫瘤)，說明促進(jìn)微管形成的藥物可能在臨床上強(qiáng)于那些使微管不穩(wěn)定的藥物。秋水仙素-位點的藥物沒有用在治療上。盡管紫杉醇和多西紫杉醇在臨床上廣泛應(yīng)用，但這些藥物具有一些局限性，從而產(chǎn)生了改良藥物的需要。首先，許多腫瘤是遺傳性抗藥的(例如結(jié)腸腫瘤)或在多個治療療程后變?yōu)榭顾幍?，至少部分原因是由于位于癌?xì)胞膜上將藥物泵出胞外的藥物轉(zhuǎn)運蛋白的表達(dá)，從而降低了它們的效能(Gottesman，M.M.Mechanismsofcancerdrugresistance.Annu.Rev.Med.，53:615-627，2002)。這些轉(zhuǎn)運蛋白中最熟知的就是P-糖蛋白。因此需要這類新藥，其對微管聚合具有紫杉烷樣(taxane-like)的作用，而且又不是P-糖蛋白或其它這類泵的底物，由此克服患者對紫杉烷抗藥的這種成因。其次，紫杉醇和多西紫杉醇水溶性差，并且紫杉醇必須在聚氧乙烯蓖麻油(CremophorEL)中配制，CremophorEL是導(dǎo)致嚴(yán)重超敏反應(yīng)的溶媒(Li，C丄.，Newman,R.A"和Wallace,S.Reformulatingpaclitaxel.Science&Medicine,Jan/Feb:38-47，1999)?；颊咄ǔＴ谑┯米仙即贾跋仁┯闷べ|(zhì)激素類和抗組胺藥物以使這些毒性最小化。因此，需要對微管聚合具有紫杉烷樣的作用并且可以在生理鹽水或其它合適無毒溶媒中進(jìn)行給藥的高水溶性的新藥。第三，紫杉醇是具有高度復(fù)雜結(jié)構(gòu)的天然產(chǎn)物，多西紫杉醇是密切相關(guān)的半合成衍生物。因此，需要容易通過合成獲得的、與紫杉烷類在結(jié)構(gòu)上不同并且對微管聚合具有紫杉烷樣作用的化合物。因此，在本領(lǐng)域中仍然需要用于癌癥治療的細(xì)胞毒藥物。具體而言，需要抑制或治療腫瘤生長的細(xì)胞毒藥物，其具有與紫杉醇類似的作用并且干擾微管形成的過程。此外，本領(lǐng)域中需要加速微管蛋白聚合并且穩(wěn)定已聚合微管的藥物。因此，提供新化合物是有利的，其通過施用具有紫杉醇樣抗癌活性的化合物來提供治療或抑制哺乳動物中細(xì)胞增殖、肺瘤生長和惡性腫瘤生長的方法。另外，提供新化合物是有利的，其提供了治療或抑制表現(xiàn)出多藥抗藥性(MDR)或由于MDR而抗藥的癌性腫瘤生長的方法。此外，提供新化合物是有利的，其提供了治療或抑制對化療藥物和特別是抗有絲分裂藥具有遺傳性或獲得性抗藥性的哺乳動物中癌性腫瘤生長的方法。取代的三唑并嘧啶化合物的制備方法及其作為殺真菌劑在農(nóng)業(yè)方面的用途在本領(lǐng)域中已有描述，如美國專利號5,593,996;5,756,509;5,948,783;5,981,534;5,612,345;5，994，360;6，020，338;5,985,883;5,854,252;5,808,066;5，817，663;5,955,252;5，965，561;5，986，135;5,750,766;6,117,865;6，U7，876;6,124,301;6,204,269;6,255,309;6,268,371;6,277,856;6,284,762;6,297,251;6，387，848;美國專利申請?zhí)朥S2002/0045631A1;US2002/0061882A1;US20030055069A1和國際或歐洲乂^布號WO98/46607;WO98/46608;W099/48893;W099/41255;WO00/18227;WO01/35738A2;WO02歷95Al;WO02腺679Al;WO02/083676A1;EPO834513A2;EPO782997A2;EPO550113B1;FR2784381A1;EPO989130A1;W098/41496;WO94/20501;EPO945453A1;EPO562615A1;EPO562615B1;EP550113A2;EP943241B1;EP988790B1，其具有以下通式在國際公布號WO02/02563中公開了三唑并嘧咬化合物作為抗癌藥物的用途。本發(fā)明化合物是滿足上文所述需要的新一類紫杉烷樣作用的藥物，并且其與之前已知的幾類抗微管化合物具有顯著差異。本發(fā)明化合物結(jié)合在P-微管蛋白的長春花生物堿位點上，然而它們具有類似紫杉烷而不同于長春花生物堿-位點藥物的特性。具體而言，本發(fā)明化合物以類似于紫杉醇和多西紫杉醇的方式，在GTP的存在下以化合物:微管蛋白的低摩爾比值增強(qiáng)富含微管相關(guān)蛋白(MAP)的微管蛋白的聚合。在合適的實驗條件下，在GTP存在下，本發(fā)明化合物還導(dǎo)致高純度的微管蛋白的聚合，這種活性是紫杉烷類藥物的標(biāo)志。本發(fā)明化合物對許多培養(yǎng)的人類癌細(xì)胞系(包括過表達(dá)膜轉(zhuǎn)運蛋白MDR(P-糖蛋白)、MRP和MXR的細(xì)胞系)具有有效的細(xì)胞毒作用，因此其對于抗紫杉醇和長春新堿的細(xì)胞系有活性。具體而言，本發(fā)明的代表性實例具有高水溶性，并且可以在鹽水中進(jìn)行配制。本發(fā)明的代表性實例作為抗腫瘤藥物對生長著人類肺癌和結(jié)腸癌、黑素瘤和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的腫瘤異種移植物的無胸腺小鼠進(jìn)行靜脈或口服給藥時有效。例如，本發(fā)明化合物已經(jīng)顯示出對人類非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、結(jié)腸癌、乳腺癌、黑素瘤和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的體內(nèi)異種移植物模型(包括抗紫杉烷類或其它微管活性化合物的抗藥模型)具有廣泛的抗腫瘤活性。例如，當(dāng)通過靜脈或口服途徑按每周一次的方案給藥時，這些化合物是有效的。在2004年9月24日提交的美國申請?zhí)?0/950,543中公開了6-[(取代的)苯基三唑并嘧啶化合物，其在2005年4月28號以美國專利公布號US2005/00卯508A1公布，在2005年4月7號以國際專利公布號WO2005/030775公布。在已公布的申請中對這些化合物的描述以及制備和使用它們的方法均整體引入本文作為參考。對于本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在特定條件下可以形成6-[(取代的)苯基l三唑并嘧啶的酸加合物和二聚體。此類化合物也用于在GTP存在下、以化合物:微管蛋白的低摩爾比值增強(qiáng)富含微管相關(guān)蛋白(MAP)的微管蛋白的聚合，并且用于在合適的實驗條件下、在GTP存在下引發(fā)高純度的微管蛋白的聚合。這些化合物還對許多培養(yǎng)的人類癌細(xì)胞系具有有效的細(xì)胞毒作用，所述細(xì)胞系包括過表達(dá)膜轉(zhuǎn)運蛋白MDR(P-糖蛋白)、MRP和MXR的細(xì)胞系，而且對人類非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、結(jié)腸癌、乳腺癌、黑素瘤和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的體內(nèi)異種移植物模型(包括抗紫杉烷類或其它微管活性化合物的抗藥模型)具有廣泛的抗腫瘤活性。發(fā)明簡述本發(fā)明提供了式(i)所表示的化合物，或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>或任選地被rS取代的-(C6-Q)-環(huán)烷基；n是2、3或4的整數(shù)；X是-C1、-F或-Br;Y是-O-、-S-、-CH24NR4-;iJ和L2各自獨立地是-H、-F、-Cl、-Br或-CF3;r3是-CF3或-C2Fs;R4、R5和R6各自獨立地是-H或-(d-C3)-烷基；R7是—ZR9，其中Z是一CO-、-NO-、S02-或—P02H-;并且r9是一H、-oh、-(<:1-<:5)-烷基或-(<:2-<:5)-鏈烯基，所述烷基或鏈烯基任選地被一個或多個下述基團(tuán)所取代-O-、卣素、-OH、-NH2或者五或六元飽和、部分飽和或不飽和的環(huán)烷基，其中1-3個環(huán)碳原子任選地獨立地被N、O或S原子所代替并且所述環(huán)烷基任選地被-CH3、-OH或鹵素所取代；且rs是(C廣C3)-烷基。本發(fā)明還提供了式(II)的化合物及其可藥用鹽或立體異構(gòu)體，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>或任選地被RS取代的-(C6-Cs)-環(huán)烷基；n是2、3或4的整數(shù)；X是-C1、-F或-Br;Y是-O國、-S畫、-CH24-NR4-;1^和1各自獨立地是-H、-F、-Cl、Br或-CF3;r3是-CF3或-C2Fs;R2、R4、R5、R6和R9各自獨立地是-H或-(C廣C3)-烷基；r8是-(d-C3)-烷基。本發(fā)明還提供了在需要這類治療的哺乳動物中通過施用有效量的式(I)化合物及其可藥用鹽來治療或抑制癌性腫瘤細(xì)胞生長和相關(guān)疾病的方法。本發(fā)明還提供了在需要這類治療的哺乳動物中通過與微管蛋白和微管的相互作用促進(jìn)孩￡管聚合來治療或預(yù)防癌性腫瘤細(xì)胞生長和相關(guān)疾病的方法，該方法包括向所述哺乳動物施用有效量的式(I)或(II)的化合物或其可藥用鹽。還提供了在需要這類治療的哺乳動物中治療或預(yù)防表現(xiàn)出多藥抗藥性(MDR)或由于MDR而抗藥的腫瘤的方法，該方法包括向所述哺乳動物施用有效量的這類化合物或其可藥用鹽。本發(fā)明還提供了通過將所述包含微管蛋白的系統(tǒng)與有效量的式(I)或(II)化合物或其可藥用鹽接觸來促進(jìn)包含微管蛋白的系統(tǒng)中微管蛋白聚合的方法。另外，本發(fā)明提供了通過將所述包含微管蛋白的系統(tǒng)與有效量的式(I)或(II)化合物或其可藥用鹽接觸而在包含微管蛋白的系統(tǒng)中穩(wěn)定微管的方法。還提供了在需要這種治療的哺乳動物中治療、抑制肺瘤生長或根除肺瘤的方法，其中所述腫瘤對至少一種化療藥物抗藥，該方法包括向所述哺乳動物施用有效量的式(I)或(II)的化合物或其可藥用鹽。在另一方面，本發(fā)明提供了與可藥用載體組合或混合的式(I)化合物。具體而言，本發(fā)明提供了包含有效量的式(I)化合物與可藥用載體的藥物組合物。本發(fā)明的說明性實施方案詳述(a)定義術(shù)語"烷基"是指直鏈或支鏈的烴鏈基團(tuán)，優(yōu)選1-3個碳原子。如本文所用的術(shù)語"r-BOC"是指叔丁氧基羰基。術(shù)語"氨基烷氧基"是指下式的基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>術(shù)語"氨基烷基"是指下式的基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>術(shù)語"氨基烷硫基"是指下式的基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>術(shù)語"氨基烷基氨基"是指下式的基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>術(shù)語"羥基烷氧基"是指下式的基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>術(shù)語"堿金屬氫氧化物"包括氫氧化鋰、氫氧化鉀或氫氧化鈉。術(shù)語"堿金屬碳酸鹽"包括碳酸鋰、碳酸鉀或碳酸鈉。術(shù)語"堿金屬氫化物"包括氫化鋰、氫化鉀或氫化鈉。術(shù)語"強(qiáng)堿"是指堿金屬氫氧化物、堿金屬碳酸鹽和堿金屬氫化物(例如氫化鈉)。如本文所用的術(shù)語"(d-Cs)-烷基"是指具有1-5個碳原子、優(yōu)選1-3個碳原子的直鏈或支鏈的飽和烴。代表性的(d-Cs)-烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基和新戊基。在一個實施方案中，(d-Cs)-烷基被一個或多個下列基團(tuán)所取代卣素、-N3、-N02、畫CN、曙OR，、-SR'、-S02R，、-S02N(R，)2、-N(R,)2、-COR，、-C02R，、-NR，C02R，、-NR，COR，、NR，CONR，或-CO翠，)2，其中R，各自獨立地是氫或未取代的(CrCs)-烷基。如本文所用的術(shù)語"(CVC5)-鏈烯基"是指具有2-5個碳原子并且具有至少一個碳碳雙鍵的直鏈或支鏈的烴。在一個實施方案中，(CrCs)-鏈烯基具有一個或兩個雙鍵。(C2-Cs)-鏈烯基基團(tuán)可以以E或Z的構(gòu)象存在并且本發(fā)明化合物包括這兩種構(gòu)象。代表性的(QrCs)-鏈烯基基團(tuán)包括但不限于乙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基、仲丁烯基、叔丁烯基、戊烯基、異戊烯基和新戊烯基。在一個實施方案中，(C2-Cs)-鏈烯基基團(tuán)被一個或多個下述基團(tuán)所取代卣素、-N3、-N02、畫CN、-OR'、-SR'、-S02R，、-S02N(R，)2、-N(R，)2、國COR，、-C02R，、-NR，C02R，、NR，COR，、-NR'CONR*CON(R，)2,其中R，各自獨立地是氫或未取代的(d-Cs)-烷基。如本文所用的術(shù)語"給藥"或"施用"是指直接向動物施用化合物或其可藥用鹽或組合物，或者向動物施用該化合物的前藥^t生物或類似物或所述化合物的可藥用鹽或組合物，其可以在動物體內(nèi)形成等量的活性化合物。如本文所用的術(shù)語"動物"包括但不限于人類、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、貓、馬、牛、豬、猴、猩猩、狒狒或恒河猴。在一個實施方案中，所述動物是哺乳動物。在另一個實施方案中，所述動物是人類。如本文所用的術(shù)語"芳基"是指包含1-3個稠合或鍵合的芳環(huán)的芳香基團(tuán)。在一個實施方案中，芳基基團(tuán)被一個或多個下述基團(tuán)所取代-V，-囟素、-V，N3、-V,-N02、畫V，-CN、-V，訓(xùn)OR，、-V，-SR'、-V，-S02R，、V，S02N(R，)2、-V，-N(R，)2、V，-COR，、-V，-C02R，、-V，-NR，C02R，、V，-NR，COR，、V，-NR，CONR，或-V，-CON(R，)2，其中R，各自獨立地是氫或未取代的(CrC6)-烷基；并且其中V，獨立地是鍵或(d-C6)-烷基。如本文所用的術(shù)語"有效的條件，，是指對合成有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的合成反應(yīng)條件。如本文所用的術(shù)語"環(huán)基團(tuán)"包括環(huán)烷基基團(tuán)和雜環(huán)基團(tuán)。環(huán)基團(tuán)的任何合適的環(huán)位置都可以共價連接到所定義的化學(xué)結(jié)構(gòu)上。在一個實施方案中，環(huán)基團(tuán)被一個或多個下述基團(tuán)所取代-V，-卣素、-V，-N3、-V，-N02、-V，畫CN、V，誦OR，、-V，-SR，、-V，S02R,、-V，-S02N(R，)2、V，-翠，)2、V，-COR，、-V，-C02R，、-V，-NR，C02R，、畫V，-NR，COR，、V，畫NR，CONR，或-V，-CON(R，)2，其中R，各自獨立地是氫或未取代的(d-C6)-烷基；并且其中V，獨立地是鍵或(d-C6)-烷基。如本文所用的術(shù)語"環(huán)烷基"是指3-7元飽和或部分不飽和的碳環(huán)。環(huán)烷基基團(tuán)的任何合適的環(huán)位置都可以共價連接到所定義的化學(xué)結(jié)構(gòu)上。示例性的環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。在一個實施方案中，環(huán)烷基基團(tuán)被一個或多個下述基團(tuán)所取代-V，-卣素、-V，-N3、-V，-N02、-V,畫CN、V，-OR，、畫V，畫SR，、-V，-S02R，、V，-S02N(R，)2、V，-翠，)2、V,-COR，、-V,-C02R，、-V，-NR，C02R，、-V，-NR，COR，、V，-NR，CONR，或-V，-CON(R，)2,其中R，各自獨立地是氬或未取代的(CrC6)-烷基；并且其中V，獨立地是鍵或(d-C6)-烷基。如本文所用的術(shù)語"苯基"是指取代或未取代的苯基基團(tuán)。在一個實施方案中，苯基基團(tuán)被一個或多個下述基團(tuán)所取代國V，畫卣素、-V，-N3、-V，-N02、-V，誦CN、誦V，漏OR，、-V，-SR，、-V，-S02R，、-V，-S02N(R，)2、V，-N(R，)2、V，-COR，、-V，-C02R，、-V，-NR，C02R，、誦V，國NR，COR，、-￥，^[11，<:0~11，或-￥，-(:0]\(11，)2，其中R，各自獨立地是氫或未取代的(CVC6)-烷基；并且其中V，獨立地是鍵或(C廣C6)-烷基。如本文所用的術(shù)語"卣素"是指氟、氯、溴和碘。如本文所用的術(shù)語"雜環(huán)基"是指3-7元飽和、部分飽和或不飽和的環(huán)烷基，其中l(wèi)-4個環(huán)碳原子獨立地被N、O或S原子所代替。雜環(huán)基基團(tuán)的任何合適的環(huán)位置都可以共價連接到所定義的化學(xué)結(jié)構(gòu)上。示例性的雜環(huán)基基團(tuán)包括但不限于氮雜環(huán)庚烷基、氮雜環(huán)丁烷基、氮丙啶基、呋喃基、呋咱基、高哌嗪基、咪唑烷基、咪唑啉基、異噻唑基、異哺、唑基、嗎啉基、噁二唑、噁唑烷基、噁唑基、，懲唑烷基、嘧咬基、菲啶基、菲咯啉基、哌嚷基、哌啶基、吡喃基、吡嚷基、吡唑烷基、p比峻啉基、吡哇基、噠喚基、吡啶并巧悉唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡咬基、嗜咬基、吡咯烷基、吡咯啉基、奎寧環(huán)基、四氫呋喃基、噻二噪基、噻二唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并巧惡唑基、瘞吩并咪唑基、硫嗎啉基、噻吩基、三溱基和三唑基。在一個實施方案中，雜環(huán)基基團(tuán)被一個或多個下述基團(tuán)所取代-V，畫囟素、-V，-N3、-V，-N02、-V，-CN、曙V，-OR，、隱V，-SR，、-V，S02R，、-V，S02N(R，)2、V，陽N(R，)2、V，-COR，、-V，-C02R，、-V，-NR，C02R，、V，-NR，COR，、V，-NR，CONR，或-V，-CON(R，)2，其中R，各自獨立地是氬或未取代的(d-C6)-烷基；并且其中V，獨立地是鍵或(d-C6)-烷基。本文所用的術(shù)語"有效量"是指當(dāng)對動物給藥時，對于預(yù)防、至少部分地改善或治愈動物罹患或者懷疑罹患的病癥有效的化合物或化合物的可藥用鹽的量。如本文所用的術(shù)語"載體"包括載體、賦形劑和稀釋劑。如本文所用的術(shù)語"前藥"是指在體內(nèi)可通過代謝途徑(例如通過水解)轉(zhuǎn)化為式(i)或式(n)化合物的化合物。如本文所用的術(shù)語"分離并純化，，是指將一種組分從反應(yīng)混合物或天然來源的其它組分中分離。在某些實施方案中，所述分離物包含占分離物重量的至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約98%的所述化合物或其可藥用鹽。本文所用的術(shù)語"可藥用鹽"是指酸與本發(fā)明化合物的堿性氮原子的鹽。示例性的鹽包括但不限于硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、鹽酸化物、溴化物、氫溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸性磷酸鹽、異煙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸性檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、鞣酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽(gentisinate)、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、蔗糖鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對曱苯磺酸鹽、樟腦磺酸鹽、萘磺酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、蘋果酸鹽、鄰苯二甲酸鹽和樸酸鹽。如本文所用的術(shù)語"可藥用鹽"還指具有酸性官能團(tuán)如羧酸官能團(tuán)的本發(fā)明的化合物與堿形成的鹽。示例性的堿包括但不限于堿金屬包括鈉、鉀和鋰的氫氧化物；堿土金屬如鈣和鎂的氫氧化物；其它金屬如鋁和鋅的氫氧化物；氨、有機(jī)胺例如未取代的或輕基取代的單-、二-或三烷基胺、二環(huán)己基胺；三丁基胺；吡啶；N-甲基、N-乙基胺；二乙胺；三乙胺；單-、二-或三誦(2-OH-(C廣C6)-烷基胺)，例如N，N-二甲基-N-(2-羥基乙基)胺或三-(2-羥基乙基)胺；N-甲基-D-葡萄糖胺；嗎啉；硫嗎啉；哌啶；吡咯烷；以及氨基酸例如精氨酸、賴氨酸等。術(shù)語"可藥用鹽"還包括本發(fā)明化合物的7jc合物。如本文所用的術(shù)語"基本上不含其相反的對映異構(gòu)體"是指化合物包含不超過約10%重量的其相反的對映異構(gòu)體。在其它實施方案中，基本上不含其相反的對映異構(gòu)體的所述化合物包含不超過約5%、不超過約1%、不超過約0.5%或不超過約0.1%重量的其相反的對映異構(gòu)體?；旧喜缓湎喾吹膶τ钞悩?gòu)體的對映異構(gòu)體包括已經(jīng)進(jìn)行了分離純化的化合物或者已經(jīng)制備為基本上不含其相反的對映異構(gòu)體的化合物。(b)本發(fā)明的化合物及其可藥用鹽本發(fā)明提供了由式(I)表示的化合物及其可藥用鹽或立體異構(gòu)體:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>(I)其中R，是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>或任選地被RS取代的-(C6-Cs)-環(huán)烷基；X是畫C1、-F或-Br;Y是-O畫、-S-、CH2-或-NR4-;U和l2各自獨立地是-H、-F、-Cl、-Br或-CF3R3是-CF3或-C2Fs;R4、R5和R6各自獨立地是-H或-(d-C3)-烷基；議7是—zr9，其中z是一co-、誦no畫、-S02-或-P02H國；并且r9是-H、-oh、-(0(:5)-烷基或-(<:2-(:5)-鏈烯基，所述烷基或鏈烯基任選地被一個或多個下述基團(tuán)所取代-O-、g素、-OH、-NH2或者五或六元飽和、部分飽和或不飽和的環(huán)烷基，其中1-3個環(huán)碳原子任選地獨立地被N、O或S原子所代替并且所述環(huán)烷基任選地被-CH3、-OH或卣素取代；且RS是(C廣C3)-烷基。本發(fā)明還提供了式(H)的化合物或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>或任選地被RS取代的-(C6-Q)-環(huán)烷基；n是2、3或4的整數(shù)；X是-C1、畫F或-Br;Y是O-、畫S國、CH2-或畫NR4畫；!^和l2各自獨立地是-H、-F、-Cl、-Br或-CF3;R3是-CF3或-QjF5;R2、R4、R5R6和R9各自獨立地是-H或-(C廣C3)-烷基；R8是一(C廣C3)—烷基。在式(I)和(II)的化合物中，W優(yōu)選是-(d-C3)-烷基，甚至更優(yōu)選是-CH3。在式(I)化合物中，W優(yōu)選是-ZR9,其中Z是-CO-或-NO-;且R9是-(d-C5)-烷基或-(CVC5)-鏈烯基，其任選地被一個或多個下述基團(tuán)所取代O、卣素、-OH、-]\112或者五或六元飽和、部分飽和或不飽和的環(huán)烷基，其中l(wèi)-3個環(huán)碳原子任選地獨立地被N、O或S原子所代替并且所述環(huán)烷基任選地被-CH3、-oh或卣素取代。更優(yōu)選的是，Z是-CO-并且rS是具有c02h基團(tuán)的-c2-C4烷基或-(c2-Cj)-鏈烯基。特別優(yōu)選的式(I)化合物，其中R1是！^r5cH-NH-(其中！^和rS如上文所定義)，并且W是包含共3-6個碳原子的羧基烷基羰基或包含共4-6個碳原子的羧基鏈烯基羰基(優(yōu)選包含共3-6個碳原子的羧基烷基羰基，例如-CO-(ch2)2-c02h)并且Y是-O-。還優(yōu)選式(i)或(ii)的化合物，其中r1是！^rSCH-NH-(其中113和議5如上文所定義)，X是-Cl，1^和1是-F，n是3，r2是H或-(d-Q)烷基，RG是-(CVC3)烷基(優(yōu)選-CH3)，且Y是-O-。對于式(I)化合物而言，這些化合物優(yōu)選R7為包含共3-6個碳原子的羧基烷基羰基或包含共4-6個碳原子的羧基鏈烯基羰基(優(yōu)選包含共3-6個碳原子的羧基烷基羰基，例如-CO-(CH2)2-C02H)。在優(yōu)選的式(I)和式(II)化合物中，R1是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>優(yōu)選的式(I)和式(II)的化合物包括R3為-CF3和/或R5為-d-C3烷基。優(yōu)選的U和I取代基各自獨立地是-F、-Cl或-Br。更優(yōu)選地是，L和I^各自是-F。在式(I)和式(II)的化合物中，是畫C1。特別優(yōu)選的式(I)化合物是Y優(yōu)選是-O-，n優(yōu)選是3和/或X優(yōu)選<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>進(jìn)一步優(yōu)選的本發(fā)明的式(I)化合物是:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>進(jìn)一步優(yōu)選的式(I)化合物還包括<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>)其中r是0-5的整數(shù)，包括端值,優(yōu)選的式(II)化合物包括<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>更特別優(yōu)選的式(II)化合物是:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>從這些化合物中顯而易見，本發(fā)明化合物可以包含不對稱碳原子，本發(fā)明的一些化合物可以包含一個或多個不對稱中心并且可以由此形成立體異構(gòu)體，例如對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體。本發(fā)明的立體異構(gòu)體根據(jù)Cahn-Ingold-Prelog系統(tǒng)來命名。盡管沒有對立體化學(xué)方面進(jìn)行展示，但是本發(fā)明包含所有單個的可能的立體異構(gòu)體；以及外消旋混合物和其它R和S立體異構(gòu)體的混合物(比例混合物(scalemicmixture),其為不等量的對映異構(gòu)體的混合物)及其可藥用鹽。包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的是具有手性中心的通式(I)和(II)化合物的(R)和(S)異構(gòu)體及其外消旋物。本發(fā)明包括所述化合物的全部立體異構(gòu)體，無論其是不含其它立體異構(gòu)體的還是與其它立體異構(gòu)體以任何比例混合的，并因此包括例如對映異構(gòu)體的外消旋混合物和異構(gòu)體的非對映異構(gòu)的混合物。任何化合物的絕對構(gòu)型可以通過常規(guī)的X-射線晶體學(xué)方法來確定。光學(xué)異構(gòu)體可以通過標(biāo)準(zhǔn)分離技術(shù)或?qū)τ钞悩?gòu)體的特異性合成方法以純形式獲得。因此可以獲得基本上不含其相反的對映異構(gòu)體的式(I)或式(II)的化合物。本發(fā)明化合物的多晶型物、水合物和溶劑合物也包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括式(i)和(n)的化合物及其可藥用鹽的所有晶體和水合形式。本發(fā)明化合物的可藥用鹽衍生自下述的形成可藥用鹽的有機(jī)或無機(jī)酸乳酸、檸檬酸、醋酸、酒石酸、富馬酸、琥珀酸、馬來酸、丙二酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、曱磺酸、苯磺酸、L-天冬氨酸、R或S-扁桃酸、棕櫚酸以及類似的已知的可藥用酸。另外的鹽是三氟乙酸鹽(TFA)。具體而言，優(yōu)選鹽酸鹽、富馬酸鹽和琥珀酸鹽。將式(I)或(II)化合物與適宜形成可藥用鹽的酸反應(yīng)以形成所述的鹽。作為形成可藥用鹽的代表性實例，將5-氯-6-{2，6-二氟-4-[3-(甲基氨基)丙氧基1苯基)-N-[(lS)-2，2,2-三氟-l-甲基乙基[l，2，41三唑并[l，5-aj嘧啶-7-胺的鹽酸鹽用堿金屬氫氧化物水溶液或堿金屬碳酸鹽水溶液中和，并進(jìn)一步與上文所述的適宜形成可藥用鹽的酸在適宜溶劑中反應(yīng)。可以使用的適宜溶劑包括水、甲醇、乙醇、異丙醇或其組合等。優(yōu)選的溶劑是水?？梢詢?yōu)選在適宜的溶劑中、在約30-100。C、優(yōu)選約65-75。C下通過加熱式(I)或(II)的化合物直至形成澄清溶液來形成可藥用鹽。一旦冷卻，可以收集并干燥該化合物?？梢酝ㄟ^在室溫下進(jìn)一步與約80-100%相對濕度的水汽接觸約24小時來形成二水合物。本發(fā)明化合物可以通過以下材料來制備(a)市售的原料；(b)可以按照文獻(xiàn)所述方法制備的已知原料或(C)在本文的反應(yīng)流程和實驗方法中所述的新中間體。行。有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解，存在于分子上的多種官能團(tuán)必須符合計劃進(jìn)行的化學(xué)轉(zhuǎn)化。這使得對于合成步驟的次序判斷成為必需。必須對反應(yīng)性官能團(tuán)的保護(hù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)目紤]以避免不期望的副反應(yīng)。原料中的取代基可能與一些反應(yīng)條件不相容。與反應(yīng)條件相容的取代基的這類限制對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。在適宜情況下，反應(yīng)在惰性氣體中進(jìn)行。制備式(I)和(II)化合物的原料包括式(III)化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>其中取代基如上文所定義，并且W優(yōu)選是-h。按照于2004年9月24日提交的美國申請?zhí)?0/950,543、2005年4月28日公布的美國專利公布號us2005/0090508a1和2005年4月7日公布的國際專利公布號wo2005/030775中所公開的方法來制備所述化合物，所述文獻(xiàn)中化合物及制備方法的內(nèi)容整體《1入本文作為參考。第二種原料是式hozr9的化合物，其中z是-co-、-no-、so2-或-po2H-;且r9是-h、oh、-(<:1-<:5)-烷基或-(<:2-<:5)-鏈烯基，所述烷基或鏈烯基任選地被一個或多個下述基團(tuán)所取代o、卣素、-oh、-]\112或者五或六元飽和、部分飽和或不飽和的環(huán)烷基，其中1-3個環(huán)碳原子任選地獨立地被n、o或s原子所代替并且所述環(huán)烷基任選地被-CH3、-oh或卣素取代。制備具體的式(I)化合物的反應(yīng)例子如下:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>其中r是0-5的整數(shù)?；蛘撸诙N原料是下式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>其中p是1或2;q是0或1;x是1、2或3;Z1和義2各自獨立地是-CH2-、-CO-、-NO-、S02-或國P02H-;且A是-O畫、-S-或-N-原子。例如，具體的式(I)化合物可以通過下述反應(yīng)進(jìn)行制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>為了制備式(I)的化合物，將兩種原料在醚溶劑(包括但不限于四氫吹喃(THF)、乙醚、曱基叔丁基醚和二巧悉烷)存在下、在適宜條件下混合。將原料混合持續(xù)足以生成式(I)化合物的時間。在必要時可以加熱該混合物以促進(jìn)反應(yīng)。式(II)化合物通過以下方法制備，包括在適宜的溶劑系統(tǒng)中加熱含有式(III)化合物的混合物至某一溫度，并持續(xù)足以生成式(II)化合物的時間<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>(C)藥物組合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>本發(fā)明相應(yīng)地提供了包含本發(fā)明化合物與可藥用載體組合或混合的藥物組合物。具體而言，本發(fā)明提供了包含有效量的本發(fā)明化合物和可藥用載體的藥物組合物。根據(jù)本文所述的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實驗方法的結(jié)果，本發(fā)明的化合物作為在需要這類治療的哺乳動物中治療、抑制或控制癌性腫瘤細(xì)胞生長和相關(guān)疾病的藥物是有效的。本發(fā)明化合物作為在需要這類治療的哺乳動物中通過與微管蛋白和微管相互作用并促進(jìn)微管聚合來治療、抑制或控制癌性腫瘤細(xì)胞生長和相關(guān)疾病的藥物是有效的。本發(fā)明化合物還用于治療或預(yù)防表現(xiàn)出多藥抗藥性(MDR)或由于MDR而抗藥的癌性腫瘤。具體而言，當(dāng)將包含微管蛋白的系統(tǒng)與有效量的式(I)或(II)化合物接觸時，導(dǎo)致促進(jìn)微管聚合并進(jìn)一步穩(wěn)定微管，并且所述式(I)和(II)化合物通過促進(jìn)微管聚合和穩(wěn)定微管，用作治療、抑制或控制癌性腫瘤細(xì)胞生長和相關(guān)疾病的藥物是有效的。包含微管蛋白的系統(tǒng)可以存在于肺瘤細(xì)胞中，因而通過施用有效量的本發(fā)明中所述的化合物來抑制腫瘤性疾病?？梢詫Σ溉閯游锊⑶姨貏e是人類進(jìn)行治療。此外，所述包含孩i管蛋白的系統(tǒng)也可以存在于患者體內(nèi)。在癌癥治療的情況中，可以相信的是許多腫瘤例如白血病、肺癌、結(jié)腸癌、甲狀腺癌、卵巢癌、腎癌、前列腺癌和乳腺癌可以通過有效地施用有效量的式(I)或(II)化合物來治療。此外，式(I)和(II)化合物用于治療或預(yù)防表現(xiàn)出多藥抗藥性(MDR)或由于MDR而抗藥的癌性腫瘤。如本文所用，癌癥是指所有類型的癌癥或腫瘤或者良性或惡性肺瘤。使用本文所提供方法進(jìn)行治療的優(yōu)選的癌癥包括癌瘤、肉瘤、淋巴瘤或白血病。癌瘤是指良性或惡性上皮細(xì)胞瘤，包括但不限于乳腺癌、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌、黑色素瘤、卵巢癌或腎癌。優(yōu)選的宿主是人類。所用活性成分的有效劑量可以根據(jù)所用的具體化合物、給藥模式和所治療病癥的嚴(yán)重性而變化。但是，一般來說每天以約0.10至約100mg/kg體重的量施用本發(fā)明化合物時獲得滿意的結(jié)果。最佳結(jié)果的優(yōu)選方案是每天約lmg至約20mg/kg體重，并且使用這類劑量單位，其對于約70kg體重的個體而言在24小時內(nèi)的總量為約70mg至約1400mg的活性化合物。用于治療哺乳動物的劑量方案可以進(jìn)行調(diào)整以提供最佳的治療效應(yīng)。例如，可以每天施用幾個分份劑量，或者可以根據(jù)治療狀況的緊迫性所示按比例地減少劑量。一種明確的實用優(yōu)勢是這些活性化合物可以以任何方便的方式來給藥，例如通過口服、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑給藥。本發(fā)明的活性化合物可以優(yōu)選口服給藥，例如與惰性稀釋劑或與可同化的食用栽體一起口服，或者可以將它們封裝在硬或軟殼的明膠膠嚢中、或?qū)⑺鼈儔褐瞥善瑒⒒驅(qū)⑵渲苯訐饺腼嬍车氖澄镏羞M(jìn)行給藥。對于口服治療給藥，這些活性化合物可以與賦形劑摻合，并以可攝取的片劑、含片、糖錠劑、膠嚢劑、酏劑、混懸劑、糖漿劑、華夫餅等形式使用。所述組合物和制劑應(yīng)當(dāng)包含至少0.1%的活性化合物。當(dāng)然，組合物和制劑的百分比可以是不同的，可以方便地為約2%至約60%的單位重量之間。在這類治療有效的組合物中活性化合物的量是能獲得合適劑量的量。本發(fā)明優(yōu)選的組合物或制劑制備為包含10-1000mg的活性化合物的口服劑量單位形式。所述片劑、糖錠劑、丸劑、膠嚢劑等還可以包含以下成分粘合劑，例如西黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑，如磷酸二鉀；崩解劑，例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸等；潤滑劑，如硬脂酸鎂；并且可以加入甜^^木劑如蔗糖、乳糖或糖精，或者矯味劑如薄荷、冬青油或櫻杉^調(diào)味料。當(dāng)劑量單位是膠囊時，除上述類型的材料之外，其還可以包含液體載體?？梢源嬖诙喾N其它材料，例如包衣或其它改變劑量單位的物理形式的材料。例如，片劑、丸劑或膠嚢劑可以用紫膠、糖或兩者共同來包衣。糖漿劑或酏劑可以包含活性化合物、蔗糖(作為甜味劑)、對羥基苯甲酸甲酯和丙酯(作為防腐劑)、著色劑和矯味劑如櫻桃或橙調(diào)味料。當(dāng)然，用于制備任何劑量單位形式的任何材料都應(yīng)該是藥學(xué)上純的并且在所用量上基本無毒。此外，可以將這些活性化合物摻入緩釋制劑或劑型中。這些活性化合物還可以經(jīng)胃腸外或腹膜內(nèi)給藥。這些游離堿或可藥用鹽形式的活性化合物的溶液劑或混懸劑可以在水中適宜地與表面活性劑如羥丙基纖維素混合來制備。還可以在甘油、液態(tài)聚乙二醇及它們在油中的混合物中制備分散液。在普通條件下貯存和使用時，這些制劑包含防止微生物生長的防腐劑。適合于注射使用的藥物形式包括無菌的水溶液或分散液以及用于臨時制備無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。在所有情況下，該藥物形式必須是無菌的并且必須有易于注射程度的流動性。其在制備和貯存條件下必須穩(wěn)定，并且必須制備成抵抗樣i生物如細(xì)菌或真菌的污染作用的藥物形式。載體可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇)、其合適的混合物和植物油的溶劑或分散介質(zhì)。靜脈內(nèi)給藥是本發(fā)明化合物優(yōu)選的給藥方式。靜脈內(nèi)給藥的非限定性的適宜載體的實例包括生理鹽水、抑制細(xì)菌的水、Cremophor⑧ELTM(巴斯夫公司(BASF)，Parsippany，N.J.)或磷酸鹽緩沖液(PBS)。該組合物必須是無菌的并且必須有易于注射程度的流動性。其在制備和貯存條件下必須穩(wěn)定，并且必須制備成抵抗微生物如細(xì)菌或真菌的污染作用的藥物形式。載體可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇)及其合適的混合物的溶劑或*介質(zhì)。防止微生物作用可以通過多種抗菌劑和抗真菌劑來完成，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等。在許多情況下，該組合物中優(yōu)選包含等滲試劑，例如糖類、多元醇例如甘露醇和山梨醇以及氯化鈉。通過在組合物中包含延遲吸收的試劑例如單硬脂酸鋁和明膠，可以實現(xiàn)可注射組合物的延長吸收。如本發(fā)明所用的術(shù)語"提供有效量的化合物"是指直接施用所述化合物或施用在體內(nèi)將形成有效量的所述化合物的前藥、衍生物或類似物。除上述用途之外，本發(fā)明的一些化合物用于制備本發(fā)明的其它化合物。(d)標(biāo)準(zhǔn)的藥理學(xué)實驗方法在一些標(biāo)準(zhǔn)的藥理學(xué)實驗方法中對本發(fā)明的實施例進(jìn)行了評價，其顯示出本發(fā)明化合物作為微管聚合的促進(jìn)劑具有顯著活性并且是抗腫瘤藥。根據(jù)下述的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實驗方法中的活性，本發(fā)明化合物因此用作抗癌藥物。相關(guān)的癌癥選自乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、前列腺癌、黑色素瘤、上皮癌、白血病、腎癌、膀胱癌、口腔癌、喉癌、食道癌、胃癌、印巢癌、胰腺癌、肝癌、皮膚癌和腦癌。具體而言，本發(fā)明的化合物具有類似于紫杉醇的作用。材料與方法細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑培養(yǎng)基是含有L-谷氨酰胺的RPMI-1640，補(bǔ)充了10%熱滅活的胎牛血清、100U/ml的青霉素和100|Lig/ml的鏈霉素(基比克公司(Gibco)，GrandIsland,NY)。富含微管相關(guān)蛋白(MAP)的微管蛋白，其包含約70%微管蛋白和30%的MAP(#ML113)，以及高純度的微管蛋白(純度>99%，#TL238)，兩者均來自牛腦，購自細(xì)胞骨架公司(Cytoskeleton，Inc.),Denver,CO。PEM緩沖液(80mM的哌喚-N，N，-二[2-乙磺酸，pH6.9，lmM的乙二醇-二(P-氨基乙基醚)-N，N，N，，N，-四乙酸，lmM氯化鎂)和5，-三磷酸鳥苷(GTP)也購自細(xì)胞骨架公司。卩H紫杉醇(比活性14.7Ci/mmol)購自莫拉瑞克生物化學(xué)公司(MoravekBiochemicals)(Brea，CA)。卩H長春堿(比活性9.60Ci/mmol)和MicroSpinG-50柱購自安瑪西亞公司(AmershamBiosciences)(Piscataway，NJ)。卩HI秋水仙素(比活性76.5Ci/mmol)購自新英格蘭核公司(NewEnglandNuclear)(Boston，MA)。其它試劑購自西格瑪乂/^司(Sigma)(St.Louis，MO)。1.細(xì)胞系除非另有說明，人類癌細(xì)胞系均獲自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)(Rockville，MD)。下述對藥物敏感的親代細(xì)胞系及其衍生的抗藥副本都獲自發(fā)明者，列舉如下(a)Sl(來自人類結(jié)腸癌細(xì)胞系LS174T的亞克隆的親代細(xì)胞系)和衍生的表達(dá)MXR藥物轉(zhuǎn)運蛋白的Sl-Ml-3.2(本文稱為Sl-Ml)，由惠氏研究所(WyethResearch)的L.Greenberger博士提供(Rabindran，S.K.，He,H.，Singh,M.，Brown,E.,Collins,K.I.，Annable,T.和Greenberger,L.M.ReversalofanovelmultidrugresistancemechanisminhumancoloncarcinomacellsbyfumitremorginC.CancerRes.，58:5850-5858，1998);(b)HL-60人類前髓細(xì)胞性白血病親代細(xì)l包系和衍生的表達(dá)MRP1藥物轉(zhuǎn)運蛋白的HL-60/ADR，由堪薩斯大學(xué)的M.Center博士(McGrath，T.和Center,M.S.AdriamycinresistanceinHL60cellsintheabsenceofdetectableP-glycoprotein.Biochem.Biophys.Res.Commun.,145:1171-1176，1987)經(jīng)由惠氏研究所的L.Greenberger博士提供；和(c)親代KB-3-1(本文稱為KB,從人類表皮樣癌克隆)和衍生的細(xì)胞系KB-8-5和KB-VI，其分別表達(dá)中等和極高水平的MDRl(P-糖蛋白)藥物轉(zhuǎn)運蛋白，由國家癌癥研究所(NationalCancerInstitute)的M.Gottesman博士(Shen，D.W.，Cardarelli，C.，Hwang,J.，Cornwell，M,，Richert，N.，Ishii，S.，Pastan，I.和Gottesman,M,M.Multipledrug-resistanthumanKBcarcinomacellsindependentlyselectedforhigh-levelresistancetocholchicine,adriamycin,orvinblastineshowchangesinexpressionofspecificproteins.J.Biol.Chem.，261:7762-7770，1986)經(jīng)由惠氏研究所的L.Greenberger博士提供。2.細(xì)胞毒性的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實驗方法該試驗采用由普洛麥格公司(Promega)出售的非放射性細(xì)胞增殖檢驗試齊寸盒(Madison，WI;CellTiter96AQueousNon-RadioactiveCellProliferationAssay),是根據(jù)活細(xì)胞而非死細(xì)胞將四唑備肯鹽MTS(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-甲酸基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑錄鹽，內(nèi)鹽)轉(zhuǎn)化為水溶性的有色的甲臢，其可以通過分光光度法檢測。將化合物在九個濃度下檢測以測定ICso值。在試驗方法中，將細(xì)胞通過胰蛋白酶消化(或者對于非貼壁細(xì)胞通過簡單的重懸浮)來收集，洗滌，計數(shù)并以每孔200^L培養(yǎng)基中1000個細(xì)胞分配在96孔平底微量滴定板的孔中。此外，在單獨的板上的一排孔內(nèi)按上述加入細(xì)胞("0時"板)。所有的板在37。C下于潮濕的5。/。C02的空氣中孵育約24小時。第二天，將待測化合物稀釋并加入各孔中。化合物以10mg/mL的濃度溶于DMSO中。在DMSO中制備每個化合物的九個系列的2倍稀釋液。將IO^iL在DMDO中的各稀釋液移至lOO^L培養(yǎng)基中，混合均勻，然后將5pL該稀釋液、一式四份轉(zhuǎn)移至含細(xì)胞的孔中。最終每個化合物的高濃度通常為5^M。將板子放回培養(yǎng)箱中孵育三天。在將藥物加入實驗板時，MTS試驗在"0時"板上開始進(jìn)行。這就產(chǎn)生了"0時的MTS值"，其與藥物加入時每孔的活細(xì)胞數(shù)有關(guān)。與實驗化合物一起培養(yǎng)三天后(共5天)，完成實驗板的所有孔中的MTS實驗。將四份重復(fù)的樣品孔的吸收值平均后除以"O時"值的平均值。將沒有藥物的對照孔的平均值除以"0時"值的平均值，得到由于最后三天培養(yǎng)期間細(xì)胞生長的MTS生色量的最大相對升高值。具有高藥物濃度的對照孔的平均值除以"0時"值，得到由于細(xì)胞被全部殺死的最小相對生色量。將每個化合物的九個值對濃度繪圖，產(chǎn)生最大和最小相對生色量之間一半的濃度作為ICso值。最有效的化合物具有最低的ICs。值。3.微管蛋白聚合的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實驗方法進(jìn)行了該方法的兩種不同實驗，一種使用富含MAP的微管蛋白而另一種使用純的微管蛋白。將富含MAP微管蛋白以1.3mg/mL的濃度溶于含lmMGTP(GPEM緩沖液)的水冷的PEM中。在使用前立即在4。C將該溶液以最高轉(zhuǎn)速在Eppendorf型5415C微量離心機(jī)(布林克曼儀器公司(BrinkmannInstruments),Westbury，NY)中離心10分鐘。將微管蛋白溶液加入到含有目的化合物的1/2面積的96孔板(CostarNo.3696，科寧公司(Corning,Inc.),Corning,NY)的孔中。每個化合物在0.3pM終濃度下以每孔llO^L的體積、一式兩份進(jìn)行檢測。所有孔中最終的DMSO濃度是0.3%。僅接受化合物溶劑的對照反應(yīng)以一式四份來進(jìn)行。將板子放入在24。C恒溫的SpectraMaxPlus讀板器(分子設(shè)備公司(MolecularDevicesCorp.),Sunnyvale,CA)中，在340nm下每分鐘對每孔的吸光度(測量由于形成微管蛋白聚合物所出現(xiàn)的渾濁)進(jìn)行測定，共測量60分鐘。從各孔隨后的吸光度讀數(shù)減去各孔在O時的吸光度，然后將兩次重復(fù)實驗的數(shù)據(jù)平均。除以下改變之外，使用純微管蛋白的實驗方法與上述方法類似。將純的微管蛋白以1.5-1.8mg/mL(15-18pM)的濃度溶于含10%甘油且不加GTP的冰冷的PEM緩沖液中。將離心后的上清分配到含有化合物的96孔板中。每個化合物從24.3pM開始以六個系列的3倍稀釋液進(jìn)行檢測，一式兩份。將讀板器在35。C下恒溫。4.竟?fàn)幮越Y(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實驗方法通過竟?fàn)幮砸种品椒▉硌芯勘景l(fā)明實施例與高純度的微管蛋白的結(jié)合。aP-微管蛋白的異源二聚體包含三個主要類型的微管活性藥物(紫杉烷、長春花生物堿/肽-位點藥物和秋水仙素-位點藥物)的結(jié)合位點。由于長春堿和秋水仙素優(yōu)選與非聚合的異源二聚體結(jié)合，因此為了研究長春花生物^肽和秋水仙素位點的可能的竟?fàn)?，在不適于聚合的條件下進(jìn)行孵育。在另一方面，由于紫杉醇優(yōu)選與微管結(jié)合，因此為了研究紫杉烷位點的可能的竟?fàn)?，使用聚合的微管蛋?微管)進(jìn)行實驗。將高純度的微管蛋白溶于不含GTP的PEM緩沖液中，以1.0-1.3mg/ml(10-13jaM)的終濃度使用。將最高濃度為100iuM的不同濃度的本發(fā)明實施例和終濃度為100nM或50nM的卩司長春堿或卩H秋水仙素分別加入所述微管蛋白溶液中。將這些溶液在24。C孵育1小時后加入MicroSpinG-50柱中，將其在Eppendorf5415C微量離心機(jī)中以3000rpm離心2分鐘。將各柱的流出液(包含微管蛋白和結(jié)合的放射性配體)的等分試樣與閃爍液混合，并在液體閃爍分光光度計中計數(shù)。對照包括不含竟?fàn)巹┑臉悠泛秃形礃?biāo)記的長春新堿、秋水仙素或紫杉醇的樣品。竟?fàn)巹┮种品派湫耘潴w結(jié)合的能力以不含任何竟?fàn)巹┑膶φ盏慕Y(jié)合作用的百分比表示。對于與卩H紫杉醇竟?fàn)?，將高純度的微管蛋白溶于?.75M谷氨酸鹽和25pM雙脫氧-GTP的PEM緩沖液中；蛋白終濃度為0.25-0.35mg/mL(2.5-3.5nM)。這些條件造成短的穩(wěn)定的微管聚合物快速形成(Hamel，E.，delCampo,A.A.和Lin，C.M.Stabilityoftubulinpolymersformedwithdideoxyguanosinenucleotidesinthepresenceandabsenceofmicrotubule誦associatedproteins.J.Biol.Chem.，259:2501-2508,1984)。將該溶液在37。C孵育30分鐘以使微管形成。然后將卩H]紫杉醇(終濃度2.1inM，1.2Ci/mmol)和竟?fàn)巹?除未標(biāo)記的紫杉醇為5pM以外，終濃度為20|iiM)加入到聚合的微管蛋白溶液的小份試樣中，并在37。C繼續(xù)孵育30分鐘。對照包括不含竟?fàn)巹┑臉悠泛秃形礃?biāo)記的長春新堿、秋水仙素或紫杉醇的樣品。然后將反應(yīng)物于室溫下在Eppendorf5415C微量離心機(jī)中用最高轉(zhuǎn)速離心20分鐘以沉淀微管蛋白。將各上清的一式三份的等分試樣與閃爍液混合并在液體閃爍分光光度計中計數(shù)。通過上清的放射性強(qiáng)度以及所測定的總起始放射性強(qiáng)度的數(shù)值，計算出與沉淀的微管蛋白結(jié)合的卩H1紫杉醇的量。各竟?fàn)巹┮种品派湫耘潴w與沉淀蛋白結(jié)合的能力以不含任何竟?fàn)巹┑膶φ战Y(jié)合作用的百分比來表示。5.細(xì)胞周期分析的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實驗方法通過胰蛋白酶消化來收集HeLa細(xì)胞，洗滌，計數(shù)并以每孔2mL培養(yǎng)基中125,000個細(xì)胞分配在12孔板的孔中。將細(xì)胞培養(yǎng)過夜。在DMSO中制備化合物的稀釋液，并以10pL的等分試樣加入每個孔中，從而產(chǎn)生所需終濃度。加入化合物后將細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)18小時，然后收集每孔的細(xì)胞(注意回收貼壁和未貼壁的細(xì)胞)并用CycleTESTPLUS試劑盒(BectonDickinsonImmunocytometrySystems,SanJose,CA)處理。用FACSortTM儀器(BD公司(BectonDickinson))進(jìn)行流式細(xì)胞計量。6.在具有人類腫瘤異種移植物的無胸腺小鼠中抗腫瘤活性的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實驗方法在無胸腺小鼠的異種移植的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實驗中研究本發(fā)明化合物抑制動物腫瘤生長的活性。具有白化病背景遠(yuǎn)親后代的雌性棵鼠來自查爾斯河實驗室7>司(CharlesRiverLaboratories)(Wilmington,MA)。在動物側(cè)腹部皮下注射目的腫瘤細(xì)胞的混懸液。幾天后，從那些注射過的(已分期的)小鼠中選出腫瘤體積約150mmS的小鼠，并隨機(jī)分成5-10組。將分期的當(dāng)天稱為第0天。將通常在鹽水中配制(例外情況在表中注明)的本發(fā)明化合物以多種方案從第0或1天開始通過靜脈注射或管祠口服給藥，如表中所示。每個實驗中的對照組按照相同方案用溶劑進(jìn)行給藥。每3-7天用測徑器在兩個正交的維度上測量肺瘤大小，并通過公式來計算腫瘤體積體積=[(長度x寬度2)/2。通過將各測量日的治療組的平均腫瘤體積除以對照組的平均腫瘤體積來獲得腫瘤/對照比(T/C)。如果產(chǎn)生了統(tǒng)計學(xué)上顯著的0.50或更低的T/C值，則將該治療劑量定義為有效劑量。經(jīng)單側(cè)的學(xué)生t檢驗確定p值￡0.05，是達(dá)到統(tǒng)計學(xué)意義所必需的。如果超過10%的動物死于與化合物相關(guān)的毒性，則將該治療劑量定義為中毒劑量。結(jié)果1.細(xì)胞毒性的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實驗方法1.1使用COLO205細(xì)胞COLO205是人類結(jié)腸癌細(xì)胞系，其用于本發(fā)明實施例與幾種參照化合物的比較試驗。該細(xì)胞系對紫杉醇和長春新堿敏感。例如，在兩次獨立測定中各自發(fā)現(xiàn)式(Ia)的化合物具有1.9pM的ICs。值。以相同的實驗方法，在20次獨立試驗中發(fā)現(xiàn)5-氯-6-{2，6-二氟-4-[3-(甲基氨基)丙氧基苯基卜N-[(15)-2，2，2-三氟-l-曱基乙基I[l,2，4]三唑并[l，5-al嘧啶-7-胺的琥珀酸鹽具有l(wèi)7.5nM的ICso值，紫杉醇具有3.3土1.0nM(平均值土SD)的ICso值，其與文獻(xiàn)的數(shù)值符合良好。1.2使用KB、KB-8-5和KB-VI細(xì)胞KB細(xì)胞系表達(dá)不同量的P-糖蛋白(MDR1)膜泵，其造成對許多細(xì)胞毒藥物包括紫杉醇和長春新堿的作用產(chǎn)生抵抗。親代的KB細(xì)胞系不表達(dá)P-糖蛋白，KB-8-5表達(dá)中等水平的該蛋白，以及KB-V1表達(dá)極高水平的該蛋白。P糖蛋白識別并輸出有效的細(xì)胞毒藥物的能力可以通過對這些細(xì)胞系ICso值的改變來推斷(Loganzo，F(xiàn).，Discafani，C.M.，Annable，T.，Beyer,C"Musto，S"Hari，M"Tan,X.，Hardy,C"Hernandez,R"Baxter,M"Singanallore，T.，Khafizova，G.，Poruchynsky，M.S.，F(xiàn)ojo，T.，Nieman,J.A.，Ayral-Kaloustian,S.，Zask，A.，Andersen,R.J.，andGreenberger，L.M.HTI-286,asyntheticanalogueofthetripeptidehemiasterlin,isapotentantimicrotubuleagentthatcircumventsP畫glycoprotein-mediatedresistance/"W/roandv/v仏CancerRes.，63:1838-1845，2003)。力口果4匕合物被P糖蛋白識別，從KB到KB-8-5再到KB-Vl，其ICso值將實質(zhì)性地提高(數(shù)百倍)；如果化合物未被識別，全部三種細(xì)胞系將具有類似的IC5。值(三倍或更少的差異)。例如，如表2所示，KB-8-5細(xì)胞對紫杉醇(19倍)、長春新堿(ll倍)、秋水仙素(3.4倍)和多柔比星(3.0倍)中度抗藥。本發(fā)明的代表性實施例(編號1、2a、4a、20、25、30、32)顯示出低于2倍的ICS0值變化。即使化合物與P糖蛋白微量的相互作用也可以用KB-V1細(xì)胞系來檢測，該細(xì)胞系對此種蛋白的表達(dá)水平高于通常在來自多種腫瘤的臨床樣品中所發(fā)現(xiàn)的表達(dá)水平(Goldstein,L.J.，Galski，H"Fojo，T.，Willingham，M.，Lai，S丄.，Gazdar，A.，Pirker，R.，Green,A.，Crist,W.，Brodeur，G.M.，Lieber,M.，Cossman，J.，Gottesman，M.M.和Pastan，I.Expressionofamultidrugresistancegeneinhumancells.J.Natl.CancerInst.(Bethesda)，81:116-124,1989)。KB-V1細(xì)胞對紫杉醇(>345倍)、長春新堿(>156倍)、秋水仙素(116倍)、米托蒽醌(77倍)和多柔比星(>130倍)高度抵抗。本發(fā)明的代表性實施例顯示出與親代KB細(xì)胞系相比少于3倍的ICso值變化。這表明這些化合物未被P糖蛋白識別，因此這些化合物完全克服了由P糖蛋白介導(dǎo)的對于殺細(xì)胞的抵抗作用。1.3(使用HL-60和HL-60/ADR細(xì)胞)HL-60/ADR細(xì)胞過表達(dá)多藥抗藥蛋白MRP1，該蛋白介導(dǎo)了對一些化療藥物的4氐抗(Gottesman，M.M.，F(xiàn)ojo，T.和Bates,S.E.Multidrugresistanceincancer:roleofATP畫dependenttransporters.NatureRev.Cancer,2:48-58,2002)。將本發(fā)明的代表性實施例以及參照化合物對HL-60/ADR的ICs。值與敏感的親代HL-60細(xì)胞系進(jìn)行比較。結(jié)果表明本發(fā)明化合物未被MRP1識別，因此克服了由該轉(zhuǎn)運蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞抗藥性。1.44吏用SI和S1-M1細(xì)胞S1-M1細(xì)胞過表達(dá)MXR轉(zhuǎn)運蛋白，該蛋白介導(dǎo)對一些化療藥物的抵抗(Gottesman，M.M.，F(xiàn)ojo,T.和Bates,S.E.Miltidmgresistanceincancer:roleofATP-dependenttransporters.NatureRev.Cancer,2:48-58，2002》將本發(fā)明的代表性化合物以及參照化合物對S1-M1的ICso值與敏感的親代Sl細(xì)胞系進(jìn)行比較。如果細(xì)胞未顯示抵抗，這就表明化合物未被MXR識別，由此克服了由該轉(zhuǎn)運蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞抗藥性。2.體外實驗中化合物對富含MAP的微管蛋白和純的微管蛋白聚合的作用在該實驗中，與富含MAP的微管蛋白的對照反應(yīng)顯示S形吸收曲線，其特征在于三個時相第一，停滯期，其間未發(fā)生吸光度變化；第二，聚合期，其間吸光度升高；第三，平臺期，其間吸光度到達(dá)最大并發(fā)生少量變化或不再變化。聚合促進(jìn)劑如紫杉醇和多西紫杉醇縮短或去除了停滯期，增加聚合期的速率，并且通常升高平臺期的高度。聚合抑制劑如長春新堿或秋水仙素減少或阻止吸光度的升高。本發(fā)明化合物對聚合反應(yīng)具有紫杉烷樣的作用。不加GTP的純微管蛋白在對照反應(yīng)中不顯示聚合。多西紫杉醇，以及在更小的范圍內(nèi)而言，紫杉醇可以在這些條件下誘導(dǎo)純微管蛋白聚合。本發(fā)明的幾個實施例也以類似于多西紫杉醇的方式誘導(dǎo)不含GTP的純微管蛋白的聚合。3.化合物與微管蛋白的結(jié)合通過與放射性配體卩H長春堿、卩H1秋水仙素和卩H紫杉醇的竟?fàn)幮砸种蒲芯縼頊y定本發(fā)明化合物在高純度牛腦微管蛋白中的結(jié)合位點。如果待測化合物抑制卩H長春堿與微管蛋白異源二聚體的結(jié)合，但不抑制卩H]秋水仙素與微管蛋白異源二聚體的結(jié)合或者[311]紫杉醇與微管的結(jié)合，則有力地證明這些化合物結(jié)合在微管蛋白的長春花生物堿/肽位點上，而不是結(jié)合秋水仙素或紫杉烷位點。如果待測化合物增強(qiáng)fH秋水仙素的結(jié)合高于對照水平，說明這些化合物與長春花生物堿/肽位點的結(jié)合可以誘導(dǎo)蛋白分子構(gòu)象變化從而導(dǎo)致秋水仙素結(jié)合的增強(qiáng)。這種變化并不是由長春新堿自身所誘導(dǎo)。如果待測化合物沒有減少卩H1紫杉醇與微管的結(jié)合，這說明它們既不與[3印紫杉醇竟?fàn)幗Y(jié)合位點也不對3司紫杉醇所結(jié)合的微管進(jìn)行解聚。4.化合物對細(xì)胞周期進(jìn)展的作用本方法測定了細(xì)胞群體在細(xì)胞周期的Gl、S和G2/M相中的細(xì)胞百分比。其使用碘化丙啶對細(xì)胞核染色并用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。該方法還提供了通過測量出現(xiàn)具有亞-Gl期DNA數(shù)量的微粒數(shù)來估計由藥物治療引起的細(xì)胞凋亡的方法。在高濃度下(即高于約5xlCso濃度)，樣t管活性化合物特征性地捕捉細(xì)胞周期中G2/M相的細(xì)胞，原因在于其對構(gòu)成有絲分裂紡錘體的微管的中斷作用。然而，在較低濃度(接近ICso值)下、在一些細(xì)胞系如HeLa細(xì)胞系中，觀察到紫杉烷類(例如紫杉醇和多西紫杉醇)在G2/M阻斷前誘導(dǎo)大量細(xì)胞凋亡(Jordan，M.A.,Wendell,K.，Gardiner,S.，Derry，W.B.，Copp，H.和Wilson,LMitoticblockinducedinHeLacellsbylowconcentrationsofpaclitaxel(Taxol)resultsinabnormalmitoticexitandapoptoticcelldeath.CancerRes.，56:816-825，1996);這與微管解聚劑如長春新堿和秋水仙素不同。細(xì)胞在多種濃度下培養(yǎng)18小時后，將本發(fā)明的代表性實施例在本方法中進(jìn)行試驗，觀察它們是否符合"穩(wěn)定劑"(紫杉烷)或"去穩(wěn)定劑"(長春新堿、秋水仙素)的曲線特征。本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物符合"穩(wěn)定劑"的曲線特征。5.化合物在體內(nèi)試驗中的抗腫瘤活性進(jìn)行了大量無胸腺小鼠的人類腫瘤異種移植物實驗，以評價本發(fā)明化合物在體內(nèi)試驗中抑制腫瘤生長的能力。本發(fā)明化合物可以通過對抗LOX黑素瘤異種移植物、DLD1結(jié)腸癌、U-87MG膠質(zhì)母細(xì)胞瘤異種移植物、A549肺癌和LoVo人結(jié)腸癌異種移植物來進(jìn)行檢測。本發(fā)明化合物顯示出對多種培養(yǎng)的人類癌細(xì)胞系(包括由于藥物轉(zhuǎn)運蛋白過表達(dá)而對紫杉醇和長春新堿抗藥的細(xì)胞系)有效的細(xì)胞毒活性。本發(fā)明化合物以類似紫杉烷的方式提高富含MAP微管蛋白聚合的起始速率，并且不同于解聚劑如長春花生物堿和秋水仙素的抑制作用。本發(fā)明化合物還誘導(dǎo)不含GTP的純微管蛋白的聚合。作為紫杉烷類而非長春花生物堿或秋水仙素的特征，本發(fā)明化合物的另一特性是其在低濃度(大約為細(xì)胞毒的ICs。值)下進(jìn)一步誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡，而沒有細(xì)胞周期阻斷。本發(fā)明的代表性化合物在無胸腺小鼠中抑制一些人類胂瘤異種移植物(包括抗紫杉烷類和長春花生物堿類的肺瘤)的生長。實施例下述實施例用來制備本發(fā)明化合物的代表性的非限定性實例，其用作微管聚合促進(jìn)劑和抗癌藥物。實施例1S-N-(3-(4-[5-氯-7-(2，2，2-三氟-l-甲基-乙基氨基Hl，2，4三唑并[l，5-a嘧啶-6-基-3，5-二氟-苯氧基}-丙基)-N-曱基-琥珀酰胺酸(化合物1)將5-氯-6-{2，6-二氟—4-3-(甲基氨基)丙氧基苯基HV-[(LS)-2，2，2-三氟國l-甲基乙基l[l，2，4三唑并[l，5畫a嘧啶-7腸胺(10.0g，21.5mmol)和琥珀酸酐(2.58g，25.8mmol)在THF(50mL)中的混合物攪拌1小時。通過蒸餾去除溶劑，并將殘余物溶于NaOH(lN，100mL)中。溶液通過一層CELITE545過濾。將濾液冷卻至10-15。C，并逐滴加入HC1(3N，約32mL)，直至pH達(dá)3-4。在0-5。C攪拌該混合物30分鐘。濾出固體，用冷水洗滌(2x20mL)并在氣流下干燥，得到固體產(chǎn)物的化合物1(ll.lg,92%)。權(quán)利要求1.式(I)的化合物或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體其中R1是或任選地被R8取代的-(C6-C8)-環(huán)烷基；X是-Cl、-F或-Br；Y是-O-、-S-、-CH2-或-NR4-；L1和L2各自獨立地是-H、-F、-Cl、-Br或-CF3；R3是-CF3或-C2F5；R4、R5和R6各自獨立地是-H或-(C1-C3)-烷基；R7是-ZR9，其中Z是-CO-、-NO-、-SO2-或-PO2H-；并且R9是-H、-OH、-(C1-C5)-烷基或-(C2-C5)-鏈烯基，所述烷基或鏈烯基任選地被一個或多個下述基團(tuán)所取代-O-、鹵素、-OH、-NH2或者五或六元飽和、部分飽和或不飽和的環(huán)烷基，其中1-3個環(huán)碳原子任選地獨立地被N、O或S原子所代替并且所述環(huán)烷基任選地被-CH3、-OH或鹵素所取代；且R8是(C1-C3)-烷基。2.如權(quán)利要求l所述的化合物，其中rg是-(CVC3)烷基。3.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中I^是-CH3。4.如權(quán)利要求1、2或3所述的化合物，其中W是-ZR9，其中Z是-CO-或-NO-;且R9是-C廣Cs烷基，其任選地被一個或多個下述基團(tuán)所取代O、鹵素、-OH、-1^112或者五或六元飽和、部分飽和或不飽和的環(huán)烷基，其中1-3個環(huán)碳原子任選地獨立地被]\、O或S原子所代替并且所述環(huán)烷基任選地被-CH3、-OH或卣素所取代。5.如權(quán)利要求4所述的化合物，其中Z是-CO-。6.如權(quán)利要求5的化合物，其中R9是-(CH2)2COOH或-(CH)2COOH。7.如權(quán)利要求l-6中任意一項所述的化合物，其中W是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>8.如權(quán)利要求7所述的化合物，其中RS是-CF3且RS是-CrC3烷基。9.如權(quán)利要求l-8中任意一項所述的化合物，其中Li和l/各自獨立地是-F、-Cl或-Br。10.如權(quán)利要求9所述的化合物，其中L1和L2各自是-F。11.如權(quán)利要求1-10中任意一項所述的化合物，其中Y是O。12.如權(quán)利要求l-ll中任意一項所述的化合物，其中n是3。13.如權(quán)利要求1-12中任意一項所述的化合物，其中X是-C1。14.如權(quán)利要求l所迷的化合物，其中式(I)化合物是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>15.如權(quán)利要求l所述的化合物，其中式(I)化合物是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>16.如權(quán)利要求l所述的化合物，其中式(I)化合物是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>并且r是0-5的整數(shù)，包括端值。17.式(II)的化合物或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>或者任選地被R8取代的-(C6-Cs)-環(huán)烷基；n是2、3或4的整數(shù)；X是-CI、-F或-Br;Y是國o誦、-S-、CH2-或-NR4-;U和l2各自獨立地是-H、-F、-Cl、-Bi^-CF3;r3是-CF3或-C2Fs;R2、R4、R5、R6和R9各自獨立地是-H或-(d-C3)-烷基；R8是-(C廠C3)-烷基。18.如權(quán)利要求17所述的化合物，其中！^是-d-C3烷基。19.如權(quán)利要求18所述的化合物，其中I^是-CH3。20.如權(quán)利要求17、18或19所述的化合物，其中I^是-H。21.如權(quán)利要求17-20中任意一項所述的化合物，其中RS是-(C廣C3)烷基。22.如權(quán)利要求17-21中任意一項所述的化合物，其中W是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>23.如權(quán)利要求22所述的化合物，其中RS是-CF3且RS是-d-C3烷基。24.如權(quán)利要求17-23中任意一項所述的化合物，其中U和乙2各自獨立地是-F、-Cl或-Br。25.如權(quán)利要求24所述的化合物，其中L1和W是-F。26.如權(quán)利要求17-25中任意一項所述的化合物，其中Y是-o-。27.如權(quán)利要求17-26中任意一項所述的化合物，其中n是3。28.如權(quán)利要求17-27所述的化合物，其中X是-C1。29.如權(quán)利要求17所述的化合物，其中式(II)化合物是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>30.如權(quán)利要求17所述的化合物，其中式(II)化合物是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>31.在需要這類治療的哺乳動物中治療或抑制癌性腫瘤細(xì)胞生長和相關(guān)疾病的方法，該方法包括向需要其的哺乳動物施用有效量的如權(quán)利要求1-16中任意一項所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽。32.在包含微管蛋白的系統(tǒng)中促進(jìn)微管蛋白聚合的方法，該方法包括將所述包含^f效管蛋白的系統(tǒng)與有效量的如權(quán)利要求1-16中任意一項所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽接觸。33.在包含微管蛋白的系統(tǒng)中穩(wěn)定微管的方法，該方法包括將所述包含微管蛋白的系統(tǒng)與有效量的如權(quán)利要求1-16中任意一項所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽接觸。34.在需要這類治療的哺乳動物中治療或預(yù)防表現(xiàn)出多藥抗藥性(MDR)或由于MDR而抗藥的胂瘤的方法，該方法包括向所述哺乳動物施用有效量的如權(quán)利要求1-16中任意一項所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽。35.在需要這類治療的哺乳動物中治療、抑制腫瘤生長或根除腫瘤的方法，其中所述腫瘤對至少一種化療藥物抗藥，該方法包括向所述哺乳動物提供有效量的如權(quán)利要求1-16中任意一項所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽。36.包含藥學(xué)上有效量的如權(quán)利要求1-13中任意一項所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體的藥物組合物。37.包含藥學(xué)上有效量的如權(quán)利要求14、15或16中所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體的藥物組合物。38.包含藥學(xué)上有效量的如權(quán)利要求17-28中任意一項所定義的式(II)化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體的藥物組合物。39.包含藥學(xué)上有效量的如權(quán)利要求29中所定義的式(II)化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體的藥物組合物。40.包含藥學(xué)上有效量的如權(quán)利要求30中所定義的式(II)化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體的藥物組合物。41.在需要這類治療的哺乳動物中治療或抑制癌性腫瘤細(xì)胞生長和相關(guān)疾病的方法，該方法包括向需要其的哺乳動物施用有效量的如權(quán)利要求17-30中任意一項所定義的式(II)化合物或其可藥用鹽。42.在包含微管蛋白的系統(tǒng)中促進(jìn)微管蛋白聚合的方法，該方法包括將所述包含微管蛋白的系統(tǒng)與有效量的如權(quán)利要求17-30中任意一項所定義的式(II)化合物或其可藥用鹽接觸。43.在包含^L管蛋白的系統(tǒng)中穩(wěn)定微管的方法，該方法包括將使所述包含微管蛋白的系統(tǒng)與有效量的如權(quán)利要求17-30中任意一項所定義的式(H)化合物或其可藥用鹽接觸。44.在需要這類治療的哺乳動物中治療或預(yù)防表現(xiàn)出多藥抗藥性(MDR)或由于MDR而抗藥的腫瘤的方法，該方法包括向所述哺乳動物施用有效量的如權(quán)利要求17-30中任意一項所定義的式(II)化合物或其可藥用鹽。45.在需要這類治療的哺乳動物中治療、抑制腫瘤生長或根除肺瘤的方法，其中所述肺瘤對至少一種化療藥物抗藥，該方法包括向所述哺乳動物提供有效量的如權(quán)利要求17-30中任意一項所定義的式(II)化合物或其可藥用鹽。46.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述哺乳動物是人。47.如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述哺乳動物是人。48.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述哺乳動物是人。49.如權(quán)利要求41所述的方法，其中所述哺乳動物是人。50.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述哺乳動物是人。51.如權(quán)利要求45所述的方法，其中所述哺乳動物是人。52.如權(quán)利要求1-16或17-30中任意一項所述的化合物在制備治療或抑制哺乳動物中癌性腫瘤細(xì)胞生長和相關(guān)疾病的藥物中的用途。53.如權(quán)利要求37所述的藥物組合物，其進(jìn)一步包含如下的式(II)化合物或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體(CH2)nNR6R2/<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>或者任選地被118取代的-(<:6-<:8)-環(huán)烷基；n是2、3或4的整數(shù)；X是誦C1、-F或-Br;Y是國O畫、-S-、-CH24-NR4-;1^和L2各自獨立地是-H、-F、-Cl、Br或畫CF3;R3是-CF3或-C2Fs;R2、R4、R5、R6和R9各自獨立地是-H或-(C廣C3)-烷基；R8是d-C3烷基。54.在需要這類治療的哺乳動物中治療或抑制癌性肺瘤細(xì)胞生長和相關(guān)疾病的方法，該方法包括向需要其的哺乳動物施用有效量的如權(quán)利要求53中所定義的組合物。55.在包含微管蛋白的系統(tǒng)中促進(jìn)微管蛋白聚合的方法，該方法包括將所述包含微管蛋白的系統(tǒng)與有效量的如權(quán)利要求53中所定義的式(II)化合物接觸。56.在包含^:管蛋白的系統(tǒng)中穩(wěn)定微管的方法，該方法包括將^f吏所述包含微管蛋白的系統(tǒng)與有效量的如權(quán)利要求53中所定義的式(II)化合物接觸。57.在需要這類治療的哺乳動物中治療或預(yù)防表現(xiàn)出多藥抗藥性(MDR)或由于MDR而抗藥的肺瘤的方法，該方法包括向所述哺乳動物施用有效量的如權(quán)利要求53中所定義的式(II)化合物。58.在需要這類治療的哺乳動物中治療、抑制腫瘤生長或根除腫瘤的方法，其中所述腫瘤對至少一種化療藥物抗藥，該方法包括向所述哺乳動物提供有效量的如權(quán)利要求53中所定義的式(II)化合物。59.如權(quán)利要求54、57和58中任意一項所述的方法，其中所述哺乳9動物是人。全文摘要公開了某些6-[(取代的)苯基]三唑并嘧啶化合物的加合物和二聚體或其可藥用鹽，以及包含所述化合物或其可藥用鹽的組合物，其中所述化合物是用于治療哺乳動物癌癥的抗癌藥物。還公開了在需要此種治療的哺乳動物中治療或抑制哺乳動物中癌性腫瘤細(xì)胞生長和相關(guān)疾病的方法以及治療或預(yù)防表現(xiàn)出多藥抗藥性(MDR)或由于MDR而抗藥的癌性腫瘤的方法，該方法包括向所述哺乳動物施用有效量的所述化合物或其可藥用鹽。還公開了在需要此種治療的哺乳動物中通過促進(jìn)微管聚合來治療或抑制癌性腫瘤細(xì)胞生長和相關(guān)疾病的方法，該方法包括向所述哺乳動物施用有效量的所述化合物及其可藥用鹽。文檔編號A61P35/04GK101370813SQ200680052734公開日2009年2月18日申請日期2006年12月15日優(yōu)先權(quán)日2005年12月16日發(fā)明者C·拜爾,D·M·布魯姆,Y·吳申請人:惠氏公司