專利名稱：P2X₇受體拮抗劑及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及作為P2X7受體拮抗劑式(I)的化合物及其用于治療疼痛、 神經(jīng)性疼痛、炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)變性、抑郁癥和用于促進(jìn)神 經(jīng)再生的用途。
背景技術(shù)：
P2X受體為由ATP活化的親離子受體。P2X受體在傷害感受中的重
在七種P2X'受體口中，P2X7 :其在延長(zhǎng)或:重復(fù)激動(dòng)劑刺激時(shí)形成大孔的 能力為特征。其被飽和濃度的ATP部分活化，而其被合成性ATP類似 物苯甲?；綍跛酇TP(BzATP)完全活化(Bianchi等人，Eur. J. Pharmacol.,第376巻,第127-138頁(yè)，1999)。所述P2X7受體被中樞和 周圍神經(jīng)系統(tǒng)的突觸前末梢、包括巨噬細(xì)胞的抗原呈遞細(xì)胞、人表皮郎 格罕氏細(xì)胞(Langerhans' cells)、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和大量不同來(lái)源的肺瘤 細(xì)胞系表達(dá)(Jacobson KA等人,"Adenosine and Adenine Nucleotides: From Molecular Biology to Integrative Physiology". L. Belardinelli和A. Pelleg(eds.), Kluwer, Boston,第149-166頁(yè)，1995)。
最新研究證實(shí)P2X7受體參與調(diào)節(jié)電刺激和ATP-誘發(fā)的GABA和谷 氨酸/人小鼠海馬切片中釋放(Papp等人，Neuropharmacology and Neurotoxicologv,第15巻，第2387-2391頁(yè),2004))。在中樞神經(jīng)系統(tǒng) 中，P2X7受體主要由小膠質(zhì)細(xì)胞、腦的固有巨噬細(xì)胞表達(dá)。在膠質(zhì)細(xì)胞 上，已經(jīng)表明P2X7受體顯示出介導(dǎo)谷氨酸的釋放(AndersonC.等人，Drug Dev. Res.第50巻，第92頁(yè)，2000)。當(dāng)活化小膠質(zhì)細(xì)胞時(shí)很可能上調(diào) P2X7受體，報(bào)道其與大鼠大腦的大腦中動(dòng)脈阻塞誘導(dǎo)的缺血性損傷和壞 死有關(guān)(Collo G.等人，Neuropharmacology.,第36巻,第1277-1283頁(yè)， 1997)。最新研究顯示了 P2X7受體在小膠質(zhì)細(xì)胞中過氧化物生成中的作 用，并且在用于阿爾茨海默病的轉(zhuǎn)基因小鼠模型(Parvathenani等人，L Biol. Chemistry,第278巻,第13300-13317頁(yè)，2003)和在來(lái)自尸體解 剖大腦切片的多發(fā)性硬化癥損傷(Narcisse等人，Oiia，第49巻，第245-258頁(yè)(2005)中P-淀粉樣蛋白斑周圍的P2X7受體上調(diào)。
在免疫系統(tǒng)細(xì)胞(巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞和淋巴細(xì)胞)上的P2X 受體的 活化導(dǎo)致釋放白細(xì)胞介素-1 P (IL-1 P )、巨細(xì)胞形成、脫粒和L-選擇蛋白 脫落(shedding)。 ATP已經(jīng)顯示出在大鼠中腹膜內(nèi)注射脂質(zhì)體S(LPS)后 通過P2X7受體介導(dǎo)的機(jī)理增加IL-1 P的局部釋放和處理(Griffiths等 人，J. hnmunologv第154巻,第2821-2828頁(yè)(1995); Solle等人，J. Biol. Chemistry.第276巻，第125-132頁(yè),(2001))。
最近報(bào)道氧化的ATP(oATP), —種非選擇性的和不可逆的P2X7拮 抗劑，在發(fā)炎大鼠中具有外周介導(dǎo)抗傷害性的性質(zhì)(Dell'Antomo等人， Neuroscience Lett.第327巻，第87-卯頁(yè)，(2002))。集中在中樞和周圍 神經(jīng)系統(tǒng)突觸前末梢的P2X7受體的活化(Deuchars等人，J. Neuroscience. 第21巻，第7143-7152頁(yè)，(2001))誘導(dǎo)興奮性氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸的 釋放。來(lái)自缺乏P2X7受體的小鼠的研究不會(huì)引起炎癥和神經(jīng)性過敏至 機(jī)械性和熱刺激，表明P2X7噤呤受體基因和炎癥和神經(jīng)性疼痛之間有 聯(lián)系(Chessell等人，Pain.第114巻,第386-396頁(yè)，(2005))。
用P2X7受體不足的小鼠的研究表明對(duì)單克隆抗膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎， 一種炎癥關(guān)節(jié)病得模型的敏感性降低，表明P2X7受體活化參與促炎癥 反應(yīng)機(jī)理(Labasi等人，J of Immunology第168巻,第6436-6445頁(yè)， (2002))。
在脊髓損傷(SCI)動(dòng)物模型中，P2X7受體的拮抗劑顯著地改善機(jī)能 恢復(fù)和降低細(xì)胞死亡。給藥具有SCI的大鼠P2X7受體不可逆拮抗劑 oATP和PPADS,產(chǎn)生組織學(xué)損傷減少和損害后運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的改善 (Wang等人，Nature Medicine第10巻，第B21-B27頁(yè),(2004))。
將這些發(fā)現(xiàn)聯(lián)系在一起，表明P2X7受體的配體化合物可能在治療 下述病癥中有用疼痛、炎性過程和與疾病狀態(tài)相關(guān)的變性病癥比如類 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、銀屑病、過敏性皮炎、哮喘、慢性阻塞性肺 病、氣道高應(yīng)答性、敗血癥性休克、腎小球腎炎、過敏性腸病、克隆氏 病、潰瘍性結(jié)腸炎、動(dòng)脈粥樣硬化、惡性細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移、成肌細(xì)胞 的白血病、糖尿病、阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化癥、腦膜炎、骨質(zhì)疏爭(zhēng)〉 癥、燒傷損傷、缺血性心臟病、中風(fēng)和靜脈曲張。
筌于上述事實(shí)，需要可以有效地用于預(yù)防、治療或改善下述病癥的 選擇性P2X7拮抗劑化合物如神經(jīng)性疼痛、慢性炎性痛、炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抑郁癥和與某些進(jìn)行性CNS病癥相關(guān)的神經(jīng)變性病癥， 包括，但不限于阿爾茨海默病、帕金森癥、抑郁癥、肌萎縮性側(cè)索硬化
癥、亨廷頓氏疾病、具有Lewy體的癡呆、多發(fā)性硬化癥和由外傷性腦 損傷引起的CNS功能降低。
發(fā)明概述
本發(fā)明涉及選擇性P2X7拮抗劑化合物和包含這些化合物的組合物 及其使用方法。本發(fā)明的化合物具有下式
或其可藥用鹽、前藥、前藥的鹽或其組合，其中R4為氫或-CN,和 R2為氬；或
R4和R2與它們連接的碳原子一起形成由5、 6或7個(gè)碳原子組成的 單環(huán)飽和環(huán)，且環(huán)碳原子之一任選地被選自下述的雜原子取代S、 N、 NH、 O、 SO和S02;和所述環(huán)任選地一皮1個(gè)或個(gè)選自下述的取代基取 代烷基、鹵素、鹵烷基、-(3(0)烷基和-3(0)2烷基；113為鹵素、-CN、 鹵烷基、烷氧基或卣烷氧基；R4為烷基、卣素、-CN、卣烷基、烷氧基 或卣烷氧基；Rs為氫、烷基、鹵素、-CN、鹵烷基、烷氧基或鹵烷氧基；
R6為-N(H)-W或國(guó)N(H)-C(Rx)(H)-W！;其中 Rx為氫、烷基或卣烷基；
<formula>formula see original document page 11</formula>A為選自環(huán)烷基和雜環(huán)的五元或六元單環(huán)，且任選地一皮1、 2 或3個(gè)選自烷基、卣素和卣烷基的取代基取代；
B為苯基或單環(huán)雜芳基，任選地被1、 2或3個(gè)選自下述的取代基取代鹵素、烷基、-CN、 -0RA、 -SRa、 -N(Ra)(Rb)和鹵烷基； q為0或1; Ry為X或-L-X;
Wi為苯基或單環(huán)雜芳基，其中各個(gè)Wi任選地與單環(huán)、選自下述的 五元或六元環(huán)稠合苯基、雜芳基、雜環(huán)、環(huán)烷基和環(huán)鏈烯基；其中用 Wi表示的各個(gè)環(huán)獨(dú)立地為未取代的，被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)R7取代的， 或^L零個(gè)、 一個(gè)或兩個(gè)R7取代的，且一個(gè)取代基選自X和-L-X;
L在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為O、 N(H)、 N(烷基)、S、 S(O)、 S(0)2、 S(0)2N(H)、 S02N(烷基)、N(H)S(0)2、 N(烷基)S(0)2、 CON(H)、 CON(烷 基)、N(H)CO或N(烷基)CO);
X在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為芳基、雜芳基、環(huán)烷基、環(huán)鏈烯基或雜環(huán)； 其中每個(gè)獨(dú)立地為未取代的或^皮一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)R 取代的；
R7在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為烷基、鏈烯基、CN、 N〇2、鹵素、=0、 -ORA、 -SRa、 -S(O)Ra、 -S(〇)2Ra、 -S(0)2N(Ra)(Rb)、 -N(Ra)(RB)、 -C(0)Ra、 -C(O)ORa、 -C(0)N(Ra)(Rb)、鹵烷基、-烷基-ora、-烷基-SIU、-烷基 -S(0)RA、-烷基-S(o:bRA、.烷基-S(0)2N(RA)(RB)、-烷基-N(RA)(RB)、-烷 基-C(O)Ra、-烷基-C(O)ORA或-烷基-C(O)N(ra)(rb);
RA在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為氫、烷基、鏈烯基或卣烷基；和
RB在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為氫、烷基或囟烷基。
發(fā)明詳述 '比
a)術(shù)語(yǔ)的定義
如本文使用的術(shù)語(yǔ)"烷氧基，，指通過氧原子附加到母體分子部分上 如本文定義的烷基。烷氧基的代表性的實(shí)例包括，但不限于曱氧基、乙
氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、敘丁氧基、戊氧基和己氧基。
如本文使用的術(shù)語(yǔ)"烷基"指包含1至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈 烴。烷基的代表性的實(shí)例包括，但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、 正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基、 3-甲基己基、2,2-二曱基戊基，2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基。
如本文使用的術(shù)語(yǔ)"芳基"指苯基或二環(huán)芳基。所述二環(huán)芳基為萘 基，或稠合至單環(huán)環(huán)烷基的苯基，或稠合至單環(huán)環(huán)鏈烯基的苯基。本發(fā) 明的苯基和二環(huán)芳基為未取代的或取代的。所述二環(huán)芳基通過包含在二 環(huán)芳基內(nèi)的任何碳原子連接到母體分子部分。芳基的代表性的實(shí)例包
括，但不限于二氫茚基、2,3-二氫-lH-茚-l-基、萘基、二氫萘基和1,2,3,4-四氫萘-l-基。
如本文使用的術(shù)語(yǔ)"環(huán)烷基"或"環(huán)烷"指單環(huán)或二環(huán)環(huán)烷基。所 述單環(huán)環(huán)烷基是由在環(huán)內(nèi)的三至八個(gè)碳原子、零個(gè)雜原子和碳-碳單鍵組
的原子連接到母體分子部分。單環(huán)環(huán)烷基的實(shí)例包括，但不限于，環(huán)丙 基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。所述二環(huán)環(huán)烷基為稠 合至單環(huán)環(huán)烷基的單環(huán)環(huán)烷基。所述二環(huán)環(huán)烷基可以通過包含在二環(huán)環(huán) 烷基內(nèi)的任何可取代的原子連接到母體分子部分。本發(fā)明的單環(huán)和二環(huán) 環(huán)烷基可以是未取代的或取代的。如本文使用的術(shù)語(yǔ)"環(huán)鏈烯基"或"環(huán) 烯"指單環(huán)或二環(huán)烴環(huán)系統(tǒng)。所述單環(huán)環(huán)鏈烯基具有在環(huán)內(nèi)的四、五、 六、七或八個(gè)碳原子和零個(gè)雜原子。所述四元環(huán)系統(tǒng)具有一個(gè)雙鍵，所 述五元或六元環(huán)系統(tǒng)具有一個(gè)或兩個(gè)雙4建，所述七元或八元環(huán)系統(tǒng)具有 一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)雙4建。所述單環(huán)環(huán)鏈烯基可以通過包含在單環(huán)環(huán)《連烯 基內(nèi)的任何可取代的原子連接到母體分子部分。單環(huán)環(huán)烯基的代表性的 實(shí)例包括，但不限于環(huán)丁烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)庚烯基和環(huán)辛 烯基。所述二環(huán)環(huán)鏈烯基為稠合至單環(huán)環(huán)烷基的單環(huán)環(huán)鏈烯基，或稠合 至單環(huán)環(huán)烯基的單環(huán)環(huán)鏈烯基。所述二環(huán)環(huán)鏈烯基可以通過包含在二環(huán) 環(huán)鏈烯基內(nèi)的任何可取代的原子連接到母體分子部分。所述二環(huán)環(huán)烯基 的代表性的實(shí)例包括，但不限于4,5,6,7-四氫-3aH-茚、八氫化萘基 (octahydronaphthalenyl)和1,6-二氫-并環(huán)戊二埽。本發(fā)明的單環(huán)和二環(huán)環(huán) 烯基可以是未取代的或取代的。
如本文使用的術(shù)語(yǔ)"囟"或"卣素"指-Cl、 -Br、 -I或-F。如本文使 用的術(shù)語(yǔ)"鹵烷氧基"指其中一、二、三、四、五或六個(gè)氳原子被卣素 取代的如本文定義的烷氧基。卣烷氧基的代表性的實(shí)例包括，但不限于 氯甲氧基、2-氟乙氧基、三氟曱氧基、2-氯-3-氟戊氧基和五氟乙氧基。
如本文使用的術(shù)語(yǔ)"卣烷基，，指其中一、二、三、四、五或六個(gè)氫原子被卣素取代的如本文定義的烷基。卣烷基的代表性的實(shí)例包括，但
不限于氯曱基、2-氟乙基、三氟曱基、二氟甲基、五氟乙基和2-氯-3-氟 戊基和三氟乙基。
如本文使用的術(shù)語(yǔ)"雜環(huán)，，指單環(huán)雜環(huán)或二環(huán)雜環(huán)。所述單環(huán)雜環(huán) 為包含至少一個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、 N、 N(H)和S的雜原子的三、四、五、 六或七元環(huán)。所述三元或四元環(huán)包含零或一個(gè)雙4建和一個(gè)選自O(shè)、 N、 N(H)和S的雜原子。所述五元環(huán)包含零或一個(gè)雙4建，和一個(gè)、兩個(gè)或三 個(gè)選自O(shè)、 N、 N(H)和S的雜原子。所述六元環(huán)包含零、 一個(gè)或兩個(gè)雙 4建，和一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自O(shè)、 N、 N(H)和S的雜原子。所述七元環(huán) 包含零、 一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)雙鍵，和一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自O(shè)、 N、 N(H) 和S的雜原子。所述單環(huán)雜環(huán)可以是未取代的或取代的，并通過單環(huán)雜
子部分。單環(huán)P雜P環(huán)的代表性的^例包。括，但^ 艮于氮雜環(huán)丁烷基 (azetidinyl) 、 azepanyl、 氮丙咬基、diazepanyl 、 [1,4]diazepan-l-基、1,3-二哺烷基、1,3-二氧戊環(huán)基、1,3-dithiolanyl、 1，3-dithmnyl、高嗎啉基 (homomorpholinyl)、高。底。秦基、咪唑啉基、。米峻烷基、異p塞唑啉基、異 噻唑烷基、異^唑啉基、異喁唑烷基、嗎啉基、喁二唑啉基、喁二唑烷 基、嗜唑啉基、嗜唑烷基、哌。秦基、哌啶基、吡喃基、吡唑啉基、吡唑 烷基、吡咯淋基、吡咯烷基、四氬吹喃基、四氫吡喃基、四氫謹(jǐn)>分基、 噻二唑啉基、噻二唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、硫代嗎啉基、1,1-二 氧硫代嗎啉基(硫代嗎啉砜)、噻喃基和trithianyl。所述二環(huán)雜環(huán)為稠合 至苯基的單環(huán)雜環(huán)、或稠合單環(huán)環(huán)烷基的單環(huán)雜環(huán)、或稠合至單環(huán)環(huán)鏈 烯基的單環(huán)雜環(huán)、稠合至單環(huán)雜環(huán)的單環(huán)雜環(huán)、或稠合至單環(huán)雜芳基的 單環(huán)雜環(huán)。所述二環(huán)雜環(huán)通過二環(huán)雜環(huán)內(nèi)包含的任何可取代的碳原子或 任何可取代的氮原子連接到母體分子部分，其可以是未取代的或取代 的。二環(huán)雜環(huán)的代表性的實(shí)例包括，但不限于苯并二喁烯基 (benzodioxinyl)、苯并吡喃基、硫代苯并吹喃基，2,3-二氫吲哚基、吲嗪 基、吡喃并吡咬基、1,2,3,4-四氬異查啉基、1,2,3,4-四氬喹啉基、硫代吡 喃并吡啶基、2-氧-l,3-苯并^唑基、3-氧-苯丙嚅嗪基、3-氮雜二環(huán)[3.2.0] 庚基、3,6-二氮雜二環(huán)[3.2.0]庚基、八氫環(huán)戊基[c]吡咯基、六氳-lH-呋喃 并[3,4-c]吡咯基、八氫吡咯并[3,4-c]吡咯基、2,3-二氫苯并呋喃-7-基、2,3-二氫苯并呋喃-3-基和3,4-二氫-2H-色烯-4-基。如本文定義的單環(huán)或二環(huán)雜環(huán)可具有兩個(gè)通過選自N、 N(H)、 0或S的雜原子連接的非相鄰石友原 子或在一個(gè)和三個(gè)另外的碳原子之間的亞烷基橋。包含在兩個(gè)非相鄰碳 原子之間的這種連接的單環(huán)或二環(huán)雜環(huán)的代表性的實(shí)例包括，但不限于
2- 氮雜二環(huán)[2.2.2]辛基、2-氧雜-5-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛基、2,5-二氮雜二環(huán) [2.2.2]辛基、2-氮雜二環(huán)[2.2.1]庚基、2-氧雜-5-氮雜二環(huán)[2.2.1]庚基、2,5-二氮雜二環(huán)[2.2.1]庚基、2-氮雜二環(huán)[2丄l]己基、5-氮雜二環(huán)[2丄l]己基、
3- 氮雜二環(huán)[3.1.1]庚基、6-氧雜-3-氮雜二環(huán)[3丄1]庚基、8-氮雜二環(huán)[3.2.1] 辛基、3-氧雜-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛基、1,4-二氮雜二環(huán)[3.2.2]壬基、1,4-二氮雜三環(huán)[4.3.1.13'8]十一烷基、3,10-二氮雜二環(huán)[4.3.1]癸基或8-氧雜 -3-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛基、八氬-lH-4,7-亞甲基異吲哚基和八氫-lH-4,7-環(huán) 氧異吲哚基。所述氮雜原子可以或不可以季銨化，并可以或不可以氧化 成N-氧化物。而且，所述含氮雜環(huán)可以或不可以是N-保護(hù)的。如本文 使用的術(shù)語(yǔ)"雜芳基"指單環(huán)雜芳基或二環(huán)雜芳基。所述單環(huán)雜芳基為 五元或六元環(huán)。所述五元環(huán)包括兩個(gè)雙鍵和一個(gè)發(fā)u、氮或氧原子?？蛇x 地，所述五元環(huán)具有兩個(gè)雙《建和一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或四個(gè)氮原子和^壬選 地一個(gè)選自氧或硫及其它碳原子的附加雜原子。所述六元環(huán)包括三個(gè)雙 鍵和一、二、三或四個(gè)氮原子及其它碳原子。所述二環(huán)雜芳基包括稠合 至苯基的單環(huán)雜芳基、或稠合單環(huán)環(huán)烷基的單環(huán)雜芳基、或稠合至單環(huán) 環(huán)鏈烯基的單環(huán)雜芳基、或稠合至單環(huán)雜芳基的單環(huán)雜芳基。所述單環(huán) 和二環(huán)雜芳基通過包含在單環(huán)或二環(huán)雜芳基內(nèi)的任何可取代的原子連 接到母體分子部分。本發(fā)明的單環(huán)和二環(huán)雜芳基可以是取代的或未取代
的。而且，所述氮雜原子可以或不可以季銨4t,并可以或不可以氧4匕成 N-氧化物。而且，所述含氮環(huán)可以或不可以是N-保護(hù)的。單環(huán)雜芳基的 代表性的實(shí)例包括、但不限于呋喃基、咪唑基、異喁唑基、異噻唑基、 噹二唑基、"惡唑基、吡啶基、吡啶-N-氧化物、噠溱基、嘧啶基、吡。秦 基、p比哇基、吡咯基、四唑基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基和 三溱基。二環(huán)雜芳基的代表性的實(shí)例包括，但不限于苯并噻吩基、苯并 喁唑基、苯并咪唑基、苯并嚅二唑基、6,7-二氫-1,3-苯并噻唑基、咪唑 并[l,2-a]吡啶基、。引哇基、1H吲唑-3-基、。引哚基、異氮茚基、異喹啉基、 二氮雜萘基、吡啶并咪唑基、喹啉基、喹啉-8-基和5,6,7,8-四氫壹啉基-5-基。b)本發(fā)明的化合物、方法和組合物
本發(fā)明的化合物具有如上所述的式(I)。更特別地，式(I)的化合物可
以包括，但不限于其中Ri為氫或-CN; R2為氫；且R6為-N(H)-C(Rx)(H)-W！ 的化合物。優(yōu)選的化合物是下屬那些其中Rx為氫；Wi為苯基或單環(huán) 雜芳基，其為獨(dú)立地未取代的，被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)R7取代的，或被 零個(gè)、 一個(gè)或兩個(gè)R7取代的，且一個(gè)取代基選自X和-L-X。更優(yōu)選的 化合物包括下述那些其中&為氫；W!為取代的苯基；R3和R4為卣 素；R5為氳，和R7為烷基。
本發(fā)明的其它化合物包括下述那些其中R4為CN; R3和R4為鹵 素；Rs為氫和Wi為未取代的苯基的那些；也包括其中Ri為CN; R3和 R4為卣素；Rs為氳；和為未取代的單環(huán)雜芳基。本發(fā)明也包括下述 化合物其中Ri為-CN; 113和114為鹵素；W！為被R7取代的單環(huán)雜芳
基，且R7為烷基。
本發(fā)明的其它化合物為下述那些其中&和R2與它們連接的碳原 子一起形成由5、 6或7個(gè)碳原子組成的單環(huán)飽和環(huán)，且環(huán)碳原子之一 任選地纟皮下述的雜原子取代S、 N、 NH、 O、 SO和S02;且所述環(huán)任 選地被1或2個(gè)選自下述的取代基取代烷基、囟素、卣烷基、-C(O) 烷基和-S(0)2烷基；R6為-N(H)-C(Rx)(H)-W！。優(yōu)選的化合物包括下述那 些其中R!和R2與它們連接的^友原子一起形成5碳單環(huán)飽和環(huán)；Rx為 氫；R3為卣素；R4為鹵素；和Wi為苯基或單環(huán)雜芳基。最優(yōu)選的化合 物為下述那些其中Wi為被R7取代的苯基，且R7為烷基。其它的優(yōu) 選的化合物包括下述那些其中Wi為被L-X取代的苯基，其中L為O, X為芳基，優(yōu)選苯基。其它優(yōu)選的化合物為其中Wi為未取代的單環(huán)雜 芳基的那些。其它化合物包括下述那些其中Wi為被R7取代的單環(huán)雜 芳基，且R7為烷基，或其中Wi為被L-X取代的單環(huán)雜芳基，其中L為 0,和X為芳基。本發(fā)明還包括如上所述的式(I)的化合物，其中&和 R2與它們連接的碳原子一起形成5碳單環(huán)飽和環(huán)，且環(huán)碳原子之一被S、 SO或S02;優(yōu)選S取代。優(yōu)選的化合物為下述那些其中113為鹵素； R4為鹵素；R6為-N(H)-C(Rx)(H)-Wi; Rx為氳；和W:為苯基或單環(huán)雜芳
基，最優(yōu)選被R7取代的苯基，且R 為烷基，或被R7取代的單環(huán)雜芳基， 且R7為烷基。
其它優(yōu)選的化合物包括下述那些其中Wi為一皮L-X取代的單環(huán)雜芳基，其中L為O,且X為芳基。本發(fā)明還包括下述式(I)的化合物，其 中Ri和R2與它們連接的碳原子一起形成6碳單環(huán)飽和環(huán)；Rs為卣素； R4為鹵素；R6為-N(H)-C(Rx)(H)-W^ Rx為氫；且W!為苯基或單環(huán)雜芳 基。優(yōu)選的化合物包括下述那些其中Wi為被R7取代的單環(huán)雜芳基， 且R7為烷基。本發(fā)明也包括其中R^為氫或-CN; R2為氫；R6為-N(H)-W 的式(I)的化合物，其中
;A可以為選自環(huán)烷基和雜環(huán)的五元或六 元單環(huán)，且任選地被l、 2或3個(gè)選自烷基、卣素和卣烷基的取代基取 代；B為苯基或單環(huán)雜芳基，任選地被1、 2或3個(gè)選自下述的取代基取 代鹵素、烷基、-CN、 -ORA、 -SRa、 -N(Ra)(Rb)和鹵烷基；q為0或l; 和Ry為X或-L-X。本發(fā)明的其它化合物為下述式(I)的化合物其中R4 和R2與它們連接的碳原子一起形成由5、 6或7個(gè)碳原子組成的單環(huán)飽 和環(huán)，且環(huán)碳原子之一任選地;故下述的雜原子取代S、 N、 NH、 O、 SO和S02; R6為-N(H)-W,其中
'(Ry)q
W為<formula>formula see original document page 17</formula> 且A為選自環(huán)烷基和雜環(huán)的五元或六元
單環(huán)，且任選地被l、 2或3個(gè)選自烷基、面素和卣烷基的取代基取代； B為苯基或單環(huán)雜芳基，任選地被l、 2或3個(gè)選自下述的取代基取代 卣素、烷基、-CN、 -ORA、 -SRa、 -N(RA)(RB)和鹵烷基；q為0或l;和 Ry為X或-L-X。本發(fā)明還提供包括治療有效量的一種或多種式(I)的化合 物與可藥用載體組合的藥物組合物。所述組合物包括制備的本發(fā)明的化 合物與一種或多種無(wú)毒的可藥用載體?？梢詫⑺鏊幬锝M合物制劑用于 以固體或液體形式口服給藥、用于非腸道注射劑或用于直腸給藥。
如本文使用的術(shù)語(yǔ)"可藥用載體"指無(wú)毒、惰性固體、半固體或液 體填充劑、稀釋劑、膠嚢化物質(zhì)或任意類型的制劑助劑?？梢猿洚?dāng)可藥用載體的物質(zhì)的某些實(shí)例為糖、纖維素及其衍生物、粉狀西黃蓍膠、麥 芽、明膠、滑石、可可脂和栓劑蠟、油、二醇、酯、瓊脂、緩沖劑比如 氫氧化鎂和氫氧化鋁、海藻酸、無(wú)熱源水、等滲鹽水、林格溶液、乙醇 和磷酸鹽緩沖液，以及其它非毒性相容性潤(rùn)滑劑，和著色劑、釋放劑、 包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑和芳香劑。根據(jù)制劑領(lǐng)域技術(shù)人員的判斷，防 腐劑和抗氧劑也可以存在于所述組合物中。
本發(fā)明的化合物可以以可藥用鹽的形式使用。術(shù)語(yǔ)"可藥用鹽"指
式(I)化合物的鹽，其在合理藥物判斷(sound medical judgment)范圍內(nèi)， 適用于接觸人和低等動(dòng)物的組織，而沒有異常毒性、刺激、變態(tài)反應(yīng)等， 且具有合理的利益/風(fēng)險(xiǎn)比例?？伤幱名}為本領(lǐng)域熟知的。
如本文使用的術(shù)語(yǔ)"可藥用前藥"指本發(fā)明的化合物的前藥，其在 合理藥物判斷的范圍內(nèi)，其適用于接觸人和低等動(dòng)物的組織，而沒有異 常毒性、刺激、變態(tài)反應(yīng)等，且具有合理的利益/風(fēng)險(xiǎn)比例，并且對(duì)于它 們的用途有效。本發(fā)明的前藥可以在體內(nèi)快速轉(zhuǎn)化成式(I)的母體化合 物，例如通過在血液中水解。詳細(xì)的討論在T. Higuchi和V Stella, Prodrugs as Novel Delivery Systems, V 14 of the A.C.S. Symposium Series, and in Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press(1987)中提供。
本發(fā)明涉及化學(xué)合成或通過體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化形成式(I)的化合物的藥 學(xué)活性化合物。
本發(fā)明的化合物和組合物具有調(diào)節(jié)P2X7受體的作用。特別地，本 發(fā)明的化合物和組合物可用于治療和預(yù)防P2X7受體調(diào)節(jié)的病癥。典型 地，這類病癥可以通過選擇性調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中的P2X7受體來(lái)改善，優(yōu) 選地通過給藥本發(fā)明的化合物或組合物，單獨(dú)給藥或與另 一種活性劑組 合給藥，例如作為治療方案的部分。
本發(fā)明的化合物，包括但不限于在實(shí)施例中指出的那些，具有對(duì) P2X7受體的親合力，且顯示出對(duì)P2X7受體的拮抗劑活性。因此,本發(fā)明 的化合物可用于治療和預(yù)防許多P2X7受體介導(dǎo)的疾病或病癥。例如， P2X7受體已經(jīng)在大鼠大腦的大腦中動(dòng)脈阻塞誘導(dǎo)的缺血性損傷和壞死 中顯示出重要的作用(Collo G.等人，Neuropharmacology,第36巻,第 1277-1283頁(yè)，1997),因此，本發(fā)明的化合物，其為P2X7受體拮抗劑， 可用于預(yù)防或治療神經(jīng)變性疾病。在用于阿爾茨海默病的轉(zhuǎn)基因小鼠模型中(Parvathenani等人，J. Biol. Chemistrv，第278巻，第13300-13317 頁(yè)，2003),和在如尸體解剖大腦切片所顯示的多發(fā)性硬化癥損害中 (Narcisse等人，Glia，第49巻，第245-258頁(yè)(2005)), P2X7受體也參與 形成P -淀粉樣蛋白斑。因此，本發(fā)明的化合物，其為P2X7受體拮抗劑， 可以用于預(yù)防或治療與一些進(jìn)行性CNS病癥相關(guān)的神經(jīng)變性病癥，包 括，但不限于阿爾茨海默病、帕金森癥、抑郁癥、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、 亨廷頓氏疾病、具有Lewy體的癡呆、多發(fā)性硬化癥和由外傷性腦損傷 引起的CNS功能降低。
在發(fā)炎的大鼠中，用氧化的ATP(—種非選"^性的和不可逆的拮抗劑) 阻斷P2X7受體誘導(dǎo)外周介導(dǎo)的抗傷害感受性質(zhì)(Dell'Antomo等人， Neuroscience Lett.,第327巻,第87-90頁(yè)，(2002))。類似地，用缺乏 P2X7受體的小鼠的研究表明P2X7嘌呤受體基因和炎癥和神經(jīng)性疼痛之 間有聯(lián)系(Chessell等人，Pain,第114巻,第386-396頁(yè)，(2005)),并且 P2X7受體的活化參與促炎癥反應(yīng)機(jī)理(Labasi等人，J. of Immunology, 第168巻,第6436-6445頁(yè),(2002))。因此，為P2X7受體拮抗劑的本發(fā) 明的化合物可用于預(yù)防或治療病癥如神經(jīng)性疼痛、慢性炎性痛、炎癥和 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
在脊髓損傷(SCI)動(dòng)物模型中，P2X7受體的拮抗劑顯著地改善機(jī)能 恢復(fù)和降低細(xì)胞死亡。給藥具有SCI的大鼠P2X7受體不可逆拮抗劑 oATP和PPADS,產(chǎn)生組織學(xué)損傷減少和損害后運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的改善 (Wang等人，Nature Medicine ,第10巻,第B21-B27頁(yè)，(2004))。
筌于這些結(jié)果，本發(fā)明的P2X7受體拮抗劑可以證實(shí)對(duì)預(yù)防、治療 或改善下述病癥有效如抑郁癥、與某些進(jìn)4亍性CNS病癥相關(guān)的神經(jīng) 變性病癥，包括，但不限于阿爾茨海默病、帕金森癥、抑郁癥、肌萎縮 性側(cè)索硬化癥、亨廷頓氏疾病、具有Lewy體的癡呆、多發(fā)性硬化癥和 由外傷性腦損傷引起的CNS功能降低。
c)本發(fā)明的化合物的制備
參照下述合成方案，其闡述了制備本發(fā)明的化合物的方法，將更好 地理解本發(fā)明的化合物和方法。起始原料可以從市售獲得，或由本領(lǐng)域 普通技術(shù)人員按熟知的文獻(xiàn)方法制備。<formula>formula see original document page 20</formula>
其中Ri、 R2、 R3、 R4、 R5和Wi為如在式(I)中定義的式(3)的化合物 可以由式(I)的氨基吡唑制備，如方案1所示。
當(dāng)在偶合試劑比如但不限于0-(7-氮雜苯并三唑-l-基)-N,N,N',N'-四 甲基脲鏡六氟磷酸酯(HATU)和堿比如但不限于三乙胺或二異丙基乙胺 的存在下，用式Wi-COOH的取代羧酸處理式(l)的氨基吡唑時(shí)，其為購(gòu) 買的或使用已知的方法制備的，得到式(2)的酰胺。該反應(yīng)通常在大約室 溫下，在溶劑中進(jìn)行，所述溶劑比如，但不限于N,N-二曱基甲酰胺、二 氯曱烷、四氬呋喃或其混合物?？蛇x地，可以在石成比如^f旦不限于三乙胺 或吡啶存在下，通過式(l)的氨基吡唑與式WfOCl(購(gòu)買或使用已知的方 法由相應(yīng)的酸與亞碌u酰二氯制備)反應(yīng)制備式(2)的酰胺。該反應(yīng)通常在 約0。C至約50。C的溫度下和在溶劑中進(jìn)行，所述溶劑比如但不限于二氯 曱烷、四氬呋喃或乙醚。可以用還原劑處理式(2)的酰胺，所述還原劑比 如，但不限于硼烷、氳化鋁鋰、氪化鋁，得到式(3)的化合物。
也可以將式(1)的氨基吡唑轉(zhuǎn)化成式(5)的化合物，其中G為W或 -C(Rx)(H)-Wp W、 W!、 R^、 R2、 R3、 R4和R5為在式(I)中定義的。可以 通過在高溫下，用三溴曱烷和叔丁腈處理將式(1)氨基吡唑轉(zhuǎn)化成式(4) 的相應(yīng)溴化物。當(dāng)在約IO(TC至約20(TC的溫度下，用式G-NH2的胺處 理式(4)的溴化物時(shí)，得到式(5)的化合物。所述反應(yīng)可以直接(neat)進(jìn)行， 或在溶劑比如，但不限于曱苯、二曱苯、二氯苯、二喁烷、二苯酯或 N，N-二曱基曱酰胺中進(jìn)行。式G-NH2的胺為市售獲得的或可以使用已知的方法制備。概述式 G-NH2的胺合成的參考文獻(xiàn)包括，但不限于Kaluza等人，Chem. Ber. 1955,88,597; Bennett等人，J. Chem. Soc. 1931; 1692, Sagorewskii等 人，J. Gen. Chem. USSR 1964; 34, 2294, Pratap等人，Indian J. Chem. Sect. B1981; 20; 1063, WO2005/42533,第121頁(yè)；Braun等人，Chem. Ber. 1929， 62, 2420; Tikk等人，Acta CMm. Hung. 1986， 121, 255;和Bernabeu 等人，Synth. Commun. 2004， 34, 137。
方案2<formula>formula see original document page 21</formula>可以使用在方案2中列出的化學(xué)法制備其中R3、 R4和R5為在式(1) 中定義的式(7)和(8)的氨基吡唑。式(6)的取代的芳基肼的鹽酸鹽可以在 堿比如氬氧化鈉或乙醇鈉的存在下與乙氧基乙烯丙二腈反應(yīng)，得到式(7) 的化合物。該反應(yīng)通常在溶劑比如乙醇和在所用溶劑的回流溫度下進(jìn) 行。當(dāng)用濃鹽酸回流式(7)的氨基吡唑時(shí)，得到式(8)的化合物。
方案3<formula>formula see original document page 21</formula>可以使用在方案3中列出的化學(xué)法制備如下式(l)的氨基吡唑其中 R3、 R4和R5為如在式(I)中定義的，且R!和R2為氫，或R!和R2與它們 連接的碳原子形成如在式(I)中定義的環(huán)。在溶劑比如乙醇等中，在所用 溶劑的回流溫度下，式(6)的取代的芳基肼的鹽酸鹽可以與式(9)的適當(dāng)取代的氰基酮(cyanoketones)反應(yīng)，得到式(l)的氨基吡唑。
方案4
<formula>formula see original document page 22</formula>
(13)
(14)
其中W!和Rx刀杜^(l)Y疋又日3八(W)曰3欣巧"l^遼個(gè)鄰.
員熟知的各種方法制備。這種制劑的一個(gè)實(shí)例為在方案4中列出的。在
大約室溫下，在有或者沒有溶劑下，式(ll)的為醇可以與純亞石克酰二氯
反應(yīng)，得到其中X'為Cl的式(12)的氯化物。所用溶劑的實(shí)例為，但不限 于二氯甲烷和氯仿?？蛇x地，其中X'為磺酸甲酯(曱磺酸鹽)的式(12)的 化合物可以在堿比如但不限于三乙胺存在下，由式(ll)的醇與甲石黃酰氯制備。
在溶劑比如，但不限于N,N-二甲基甲酰胺或丙酮中，用疊氮化鈉取 代式(12)的氯化物或曱磺酸鹽，得到式(13)的疊氮化物，可以在還原劑比 如但不限于鈀/碳或PtCV碳的存在下，將其還原成式(14)的胺。該反應(yīng)可 以在大約室溫下，在溶劑比如，但不限于乙醇、甲醇或乙酸乙酯中進(jìn)行。
方案
其中Wi為如在式(I)中定義的式(14a)的胺可以由式(15)的相應(yīng)的醛 制備，如方案5所示。式(15)的醛與鹽酸羥胺在醇溶劑比如但不限于乙 醇中反應(yīng)，得到式(16)的肟。在乙酸酐和石咸比如^f旦不限于氫氧化鉀或氳 氧化鈉的存在下，可以將式(16)的肟轉(zhuǎn)化成式(17)的腈。用Raney/鎳和氨還原式(17)的腈，得到式(14a)的胺。該換原可以在醇溶劑比如但不限 于曱醇中進(jìn)行。
式(17)的某些腈可以為購(gòu)買的(例如2-氨基煙腈)或使用在文獻(xiàn)參考 中描述的步驟制備，所述文獻(xiàn)參考比如，但不限于Aimed等人，Indian Chem. Soc, 1996, 73, 141。
式(i7)的腈也可以在鈀催化劑比如但不限于二(三苯基膦)鈀(n)氯化
物的存在下，在溶劑比如N,N-二曱基曱酰胺中由相應(yīng)的溴化物與氰化鋅 反應(yīng)制備。
方案6
N^~W「X" + X"'——X ~~n^"W「L-X ——^ H2NH2C-W廣L-X
(18) (19) (20) (21)
其中L為O、 N(H)、 N(烷基)或S,且W!和X為如在式(I)中定義的 式(20)的化合物可以通過在堿比如但不限于氳化鈉或碳酸鉀的存在下， 由其中X"為OH、 NH2、 N(H)(烷基)或SH的式(18)的腈與其中X"'為氟或 氯的式(19)的卣化物反應(yīng)制備。該反應(yīng)可以在溶劑比如四氫呋喃、二甲 基曱酰胺或二嚅烷中，在從約室溫至約150。C的溫度下進(jìn)行。相反，其 中L為O、 N(H)、 N(烷基)或S,且Wi和X為如在式(I)中定義的式(20) 的化合物還可以通過在上述條件下，由其中X"為氟或氯的腈(18)與其中 X'"為-NH2、 N(H)(烷基)、OH或SH的式(19)的化合物反應(yīng)制備。
式(21)的胺可以使用如在方案5中列出的用于將式(17)的化合物轉(zhuǎn) 化成(14a)的轉(zhuǎn)化條件從式(20)的腈制備。
方案7
N^"W「X" + X"'——X ~^ N=_Wi—x ^h2NH2C—W廣X
(18) (19) (22) (23)
其中W!和X為如在式(I)中定義的式(22)的腈可以在鈀催化劑比如
但不限于二(三苯基膦)釔(n)氯化物和石成比如三乙胺或》友酸鈉的存在下，由其中X"為Cl、 Br、 I或triflate的式(18)的腈與硼酸或其中X'"為 B(OR1Q1)2，且R皿為氫或烷基的式(19)的酯反應(yīng)制備。該反應(yīng)可能受到 在溶劑比如異丙醇、乙醇、二甲氧基乙烷、水或二"惡烷中從50-90。C加 熱的影響。可選地，該轉(zhuǎn)化可以通過其中X"為Cl、 Br、 I或triflate的式 (18)的腈與其中X"'為-Sn(烷基)3的式(19)錫試劑，與鈀催化劑比如但不限 于四(三苯基膦)釔(O)和氟化銫反應(yīng)，并在溶劑比如二噹烷中加熱來(lái)完 成。這些轉(zhuǎn)化也可能受到在微波反應(yīng)器中加熱的影響。
該轉(zhuǎn)化也可以通過使用上述的反應(yīng)條件，由其中X"'為Cl、 Br、 I 或triflate的式(19)的化合物與其中X"為-Sn(烷基)3或-B(OR皿)2且R101 為氬或烷基的式(l 8)的化合物反應(yīng)完成。
式(23)的胺可以使用如在方案5中列出的用于將式(17)的化合物轉(zhuǎn) 化成(14a)的轉(zhuǎn)化條件從式(22)的腈獲得。
方案8
o'
TBDMS、
Br
_Br l)NaBH4
TB'DMS
2) t-Bu(Me)2SiCl
(24)
Br
S、
N (25)
BuLi
0'
—Br
Br
(26)
HO'
HO'
X'
or
(27)
X一
(28)
式(ll)的醇可以通過本領(lǐng)域已知的多種方法制備。 一種這樣的方法 顯示在方案8中。
可以用硼氪化鈉還原式(24)的醛，然后保護(hù)成叔-丁基二甲基曱硅烷 基乙醚，隨后用正丁基鋰單脫溴，得到式(26)的單溴噻唑。因此，可以 使用在方案7中列出的反應(yīng)條件，使式(26)的單溴噻唑與其中X'"為 -311(烷基)3或-8(0111()1)2且R1()1為氫或烷基的式(19)的化合物反應(yīng)，得到 其中X為如在式(I)中定義的式(27)的化合物。也可以使用在方案6中列 出的反應(yīng)條件，使式(26)的單溴噻唑與其中X"'為-NH2、 -N(H)(烷基)或OH或SH的式(19)的化合物反應(yīng)，得到其中L為0、 N(H)、 N(烷基)或S 和X為如式(I)中定義的式(28)的化合物。
方案9
式W-NH2的胺的一個(gè)特別的實(shí)例可以從其相應(yīng)的酮制備，如方案9所示。
可以通過在溶劑比如吡啶中，在室溫下使呋喃并[2,3-b]吡啶-3(2H)-酉同Cf吏用3口在Morita, Hiroyuki; Shiotani, Shunsaku; J. HeterocyCl. Chem.; 23; 1986; 1465-1469中描述的步驟制備)和甲氧基胺的鹽酸鹽反應(yīng)24 小時(shí)，將其轉(zhuǎn)化成曱基肟?？梢酝ㄟ^在室溫下，在氨水存在下和在醇溶 劑比如曱醇或乙醇中，在4個(gè)大氣下6小時(shí)，依次通過Raney Nickel催 化氫化將該中間體曱基肟還原成相應(yīng)胺。
d)參照實(shí)施例
下述實(shí)施例是用作說(shuō)明，而不限制如在附加權(quán)利要求書中定義的本 發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1
]^-「2-〖2,3-二氯-苯基)211-吡唑-3-基)2-甲基-苯甲酰胺
實(shí)施例1A 5-氨基-l-(2,3-二氯-苯基)-lH-吡唑-4-腈 用乙醇鈉(在乙醇中21%)(1.8 mL, 4.9 mmol)處理在乙醇(30mL)中的 (2,3-二氯-苯基)-肼氯化氬(1.0 g, 4.9 mmol)。向該混合中滴加2-乙氧基亞 曱基-丙二腈(570 mg, 4.9 mmol)?；亓髟摶旌衔镞^夜。將反應(yīng)混合物傾 入水中，并用乙酸乙酯(2X)萃取。除去溶劑，用硅膠色譜分析得到的殘余物，用CH2Cl2洗脫，得到標(biāo)題化合物(850 mg, 69%)。 MS(DCI/NH3)m/z 253(M)+。
實(shí)施例1B 2-(2,3-二氯-苯基)-2H-吡唑-3-基胺 用濃鹽酸(15 mL)處理來(lái)自實(shí)施例1A的產(chǎn)物(850 mg, 3.36 mmol)。 回流該混合物12小時(shí)，在真空中除去溶劑，用濃氬氧化銨調(diào)節(jié)該混合 物的pH至ll,并用乙酸乙酯(2X)萃取該混合物。真空除去溶劑，用石圭 膠色譜分析得到的殘余物，用CH2Cl2洗脫，得到標(biāo)題化合物(550 mg, 72%)。
MS(DCI/NH3)m/z 228(M)+, 230(M+2)+。
& NMR(400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 5.19(s, 2H)5.38(d,J=I.84 Hz, lH)7.28(d,J=I.84 Hz, lH)7.42(dd, J=7.98, 1.84 Hz, lH)7.49(t,J=7.98 Hz, 1H)7.76(dd， J=7.98, 1.53 Hz, IH)。
實(shí)施例1C
N-r2-(2,3-二氯-苯基V2H-吡唑-3-基l-2-曱基-苯曱酰胺 在0。C,滴加甲基苯甲?；然?556 mg, 3.6 mmol)來(lái)處理在吡啶 (10 mL)中的來(lái)自實(shí)施例IB的產(chǎn)物(550 mg, 2.4 mmol)。加熱反應(yīng)混合 物至室溫過夜，真空除去溶劑，用硅膠色譜分析得到的殘余物，用己烷 /乙酸乙酯(從6:1至4: 1梯度洗脫)洗脫，得到標(biāo)題化合物(526 mg, 63%)。 MS(DCI/NH3)m/z 346(M)+, 348(M+2)+。力NMR(400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2.18(s, 3 H)6.57(s, 1H)7.24(m, 3 H)7.33(td,J=7.36, 1.53 Hz, 1H)7.50(s, lH)7.51(s, lH)7.70(d,J=I.84 Hz, lH)7.79(t,J=4.60 Hz, I H)10.40(brs， IH)。
實(shí)施例2
「2-(2,3-二氯-苯基)-2H-吡唑-3-基l-(2-甲基-芐基)-胺 在室溫下，用BH3(在四氫呋喃中1.0M)(4.05 mL, 4.05 mmol)處理在 四氫吹喃(30 mL)中的來(lái)自實(shí)施例1C的產(chǎn)物(280 mg, 0.81 mmol)。在65 °C加熱該反應(yīng)混合物過^復(fù)，用MeOH終止，真空濃縮，并在室溫下，向 殘余物中加入MeOH(4 mL)和濃HCl(l mL)。在60。C加熱該混合物6小 時(shí)，然后在室溫下攪拌過^復(fù)。用5 NNaOH調(diào)節(jié)該混合物的pH = 7,并 用乙酸乙酯(2X)萃取。真空濃縮有才幾層，通過Waters對(duì)稱C18柱(40 mmX 100 mm, 7ym粒徑)的制備高壓液相色鐠純化得到的殘余物，使用 10%: 85%: 5%(乙腈H20:乙酸銨)至95%: 4%: 1%(乙腈H20: 乙酸銨)的梯度洗脫，流速40mL/分鐘，得到標(biāo)題化合物(56.9mg， 21%)。 MS(DCI/NH3)m/z 332(M)+, 334(M+2)+。 & NMR(500 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2.26(s, 3 H)4.14(d,J=5.80 Hz, 2H)5.34(d,J=1.83 Hz, lH)5.91(t,J=5.49 Hz, 1H)7.13(m, 3 H)7.26(t,J=4.58 Hz, lH)7.32(d,J=1.83 Hz, 1H)7.46(dd, J=7.93, 1.53 Hz, lH)7.51(t,J=7.93 Hz, 1H)7.78(dd, J=7.93, 1.53 Hz, IH)。
實(shí)施例3
『2-(2,3-二氯-苯基)-2.4,5力-四氳-環(huán)戊吡唑-3-基l-吡啶-3-基曱基-胺
實(shí)施例3A
2-(Z3-二氯苯基)-2A5,6-四氫環(huán)戊「cl吡唑-3基-3-胺 向(2,3-二氯苯基)-肼氯化氳(3 g, 10 mmol)在40 mL乙醇的懸浮液中 加入2-氧-環(huán)戊腈(購(gòu)自Apollo Scientific)(l g, 9.2 mmol)。加熱回流該反 應(yīng)4小時(shí)，冷卻并真空除去溶劑。將原料收集在乙酸乙酉旨/水(20/5)中， 并用2M的NaOH(lx20mL)和水(lx20mL)洗滌。用乙酸乙酯(2x20mL)萃 取混合的水層，用鹽水(lx40mL)洗滌混合的有機(jī)層并濃縮，得到2.1 g(85。/。)的粗固體，其不需要進(jìn)一步純化。MS(ESI/NH3)m/z 269(M+H)+;
實(shí)施例3B
N-r2-(2J-二氯苯基)-2,4,5,6-四氬環(huán)戊「cl吡唑-3-基l煙酰胺 向?qū)嵤├? A(0.3 g, 1.19 mmol)和三乙胺(0.2 g, 2 mmol)在10 mL四 氳呋喃的溶液中加入煙酰氯(0.48g， 2.68)。將該反應(yīng)保持在室溫下18小 時(shí)，然后用乙酸乙酯(30mL)稀釋。用飽和的NaHCO3(lx20mL)、水 (lx20mL)、鹽水(lxl5mL)洗滌有機(jī)層，干燥(MgS04),過濾并濃縮，得 到0.35 g(79。/。)的黃色固體。MS(ESI/NH3)m/z 372(M+H)+;力NMR( 5 , DMSO-d6)2.25-2.4(m, 2H), 2.65-2.78(m, 4H), 7.4-7.6(m, 3H), 7.72-7.8(dd, 1H), 8.05-8.12(dd, 1H), 8.7-8.75(d, 1H), 8.85(s, 1H), 10.42(s, 1H)。
實(shí)施例3C
「2-(2,3-二氯-苯基)-2,4，5,6-四氫-環(huán)戊吡唑-3-基1-吡啶-3-基曱基-胺使用如在實(shí)施例2中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí)施
例3B的產(chǎn)物代替實(shí)施例1C。 MS(DCI/NH3)m/z 359(M)+, 361(M+2)+。 & NMR(400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2.19(qt,J=7.36 Hz, 2H)2.38(t,J=6.75 Hz, 2H)2.45(t,J=7.67 Hz, 2H)4.26(d,J=6.14 Hz, 2H)5.85(t, J-6.14 Hz, 1H)7.33(dd, J=7.67, 4.60 Hz, 1H)7.43(dd, J=7.98, 1.53 Hz, lH)7.48(t,J=7.98 Hz， lH)7.66(d,J=7.67 Hz, 1H)7.75(dd, J=7.67, 1.53 Hz, lH)8.43(dd, J=4.91, 1.53 Hz, lH)8.49(d,J=I.53 Hz, IH)。
實(shí)施例4
「2-(2,3-二氯-苯基)-2,4,5,6-四氳-環(huán)戊吡唑-3-基1-(2-曱基-芐基)-胺
步驟A
根據(jù)實(shí)施例IC的方法處理實(shí)施例3 A,不同在于用實(shí)施例3A的產(chǎn) 物代替實(shí)施例IB的。 步驟B
使用如在實(shí)施例2中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用步驟 A的中間體代替實(shí)施例1C。 MS(DOTNH3)m/z 372(M)+, 374(M+2)+。H NMR(400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2.20(qt，J=7.36 Hz, 2H)2.26(s, 3 H)2.34(t,J=7.36, 6.75 Hz, 2H)2.49(t,J=7.67, 7.06 Hz, 2H)4.23(d,J=5.83 Hz5 2H)5.69(t,J=5.83 Hz, 1H)7.16(m, 3 H)7.28(m， 1H)7.50(m, 2H)7.77(dd, J=7.06，2.15Hz， 1H)。
實(shí)施例5
「2-(2,3-二氯-苯基)-2,4,5,6-四氫環(huán)戊吡唑-3-基l -(2-甲基-處啶-3 -基曱基)-胺
實(shí)施例5A
N-r2-(2,3-二氯-苯基)-2A5,6-四氫-環(huán)戊吡唑-3-基l-2-曱基-煙酰胺 在室溫下，攪拌實(shí)施例3A(268 mg, l.Ommol)、 2-甲基-煙酸(137 mg, 1.0 mmol)、 0-(7-氮雜苯并三唑-l-基)-N,N,N,'N'-四曱基脲六氟磷酸酯(570 mg, 1.5 mmol)和三乙胺(836 |u L, 6.0 mmol)在N,N-二曱基曱酰胺(IO mL) 中的混合物過夜。將反應(yīng)混合物傾入水中，并用乙酸乙酯(2X)萃取。真 空濃縮有機(jī)層，用硅膠色譜分析得到的殘余物，先用己烷/乙酸乙酯(6:l)洗脫，然后用乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物(195mg， 50%)。 MS(DCI/NH3)m/z 387(M)+， 389(M+2)+。
實(shí)施例5B
「2-(2,3-二氯-苯基)-2,4,5,6-四氫-環(huán)戊吡唑-3-基1 -(2-甲基-吡啶-3-基曱基)-胺 使用如在實(shí)施例2中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí)施 例5 A的產(chǎn)物代替實(shí)施例1C。 MS(DCI/NH3)m/z 373(M)+, 375(M+2)+。 & NMR(400 MHz, DMSOd6) 5 ppm 2.16(qt,J=7.06 Hz, 2H)2.26(t,J=7.06, 6.14 Hz, 2H)2.41(s, 3 H)2.45(t,J=7.06 Hz, 2H)4.21(d,/-5.83 Hz, 2H)5.79(t,J=5.83 Hz, 1H)7.17(dd, J=7.67, 4.60 Hz, 1H)7.47(s, 1H)7.48(dd, J=10.13, 7.98 Hz, lH)7.56(d,J=I.67 Hz, 1H)7.75(dd, J=5.83, 3.68 Hz， lH)8.29(dd, J=4.60, 1.23 Hz, IH)。
實(shí)施例6
『2-(2,3-二氯-苯基V2.6-二氫-4H-噻吩并『3,4-cl吡唑-3-基l
甲基-吡啶-3-基甲基)-胺
實(shí)施例6A
2-(2,3-二氯-苯基)-2,6-二氫-4H-噻吩并「3，4-cl吡唑-3-基胺 回流(2,3-二氯-苯基)-肼氯化氬(1.0 g, 4.9 mmol)和4-氧代四氫噻吩 畫3畫腈(購(gòu)自TCI America)(622 mg, 4.9 mmol)在乙醇(30 mL)中的混合物過 夜。在除去溶劑后，用Na2C03(飽和的)堿化得到的殘余物，并用乙酸乙 酯(2X)萃取。除去溶劑，色譜分析得到的殘余物，用己烷/乙酸乙酯(4:l) 洗脫，得到標(biāo)題化合物(1.19 g, 85%)。 MS(DCI/NH3)m/z 286(M)+, 288(M+2)+。
實(shí)施例6B
N-r2-(2.3-二氯-苯基)2.6-二氫-4H-噻吩并 『3.4-(:1吡唑-3-基1-2-曱基-煙酰胺
使用如在實(shí)施例5A中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí) 施例6A的產(chǎn)物代替實(shí)施例3A。 MS(DCI/NH3)m/z 405(M)+, 407(M+2)+。實(shí)施例6CH NMR(400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm2.54(s,3H)4.52(d,J=6.75Hz，2H)7.30(m,6 H)7.55(s,lH)7.57(d,J=1.53 Hz, 1H)7.83(s, 1H)7.87(dd, J=5.52, 3.99 Hz, 1H)。
實(shí)施例8
「2-(2,3-二氯-苯基)2,6-二氫-4H-噻吩并r3.4-cl吡唑-3-基l
-(2-甲基-芐基)-胺
實(shí)施例8A
N-「2-(Z3-二氯-苯基V2，6-二氫-4H-噻吩并 「3,4-cl吡唑-3-基l-2-甲基-苯曱酰胺
使用如在實(shí)施例1C中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí) 施例6A的產(chǎn)物代替實(shí)施例1B。 MS(DCI/NH3)m/z 404(M)+, 406(M+2)+。
實(shí)施例8B 「2-(2,3-二氯-苯基-2,6-二氫-4H-噻吩并 「3.4-cl吡唑-3-基l-(2-曱基-爺基)-胺 使用如在實(shí)施例2中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí)施 例8A的產(chǎn)物代替實(shí)施例1C的產(chǎn)物。MS(DCI/NH3)m/z 390(M)+, 392(M+2)+。
& NMR(500 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2.23(s, 3 H)3.53(s, 2H)3.75(s, 2H)4.22(d,J=6.10 Hz, 2H)5.98(t,J=5.80 Hz, 1H)7.14(m, 3 H)7.24(d,J=6.71 Hz， 1H)7.50(s, 1H)7.52(s, lH)7.79(t,J=4.88 Hz, 1H)
實(shí)施例9
l-(2,3-二氯-苯基V5-「(吡啶-3-基曱基V氨基l-m-吡唑-4-腈 使用如在實(shí)施例7B中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用C-吡咬-3-基-曱胺代替千胺。MS(DCI/NH3)m/z 344(M)+, 346(M+2)+。 & NMR(500 MHz, DMSOd6) 5 ppm 4.56(t,J=5.49 Hz, 2H)7.37(d,J=4.88 Hz, lH)7.39(d,J=4.58 Hz, lH)7.58(d,J=8.85 Hz, lH)7.59(d,J=3.36 Hz, 1 '0 H)7.69(dt,J=7.93, 1.83 Hz, 1H)7.85(s, 1H)7.89(dd, J=7.63, 2.14 Hz, 1H)8.47(dd, J=4.58, 1.53 Hz, lH)8.52(d,J=1.83 Hz, IH)。
實(shí)施例10
「2-(2,3-二氯-苯基)-4,5,6,7-四氫-2H-吲唑-3-基曱基l-(2-甲基-吡啶-3-基曱基)-胺 實(shí)施例10A
2-(2,3-二氯-苯基V4丄6,7-四氫-2H-吲唑-3-基胺 使用如在實(shí)施例6A中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用2-氧代-環(huán)己腈(購(gòu)自Matrix Scientific)代替4-氧代四氫噻吩-3-腈。 (DCI/NH3)m/z 282(M)+, 284(M+2)+。
實(shí)施例10B
N-「2-(2，3-二氯苯基)-4,5、6,7-四氫-2H-吲唑-3-基1-2-曱基-煙酰胺 使用如在實(shí)施例5A中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí) 施例10A的產(chǎn)物代替實(shí)施例3A。MS(DCITNH3)m/z 401(M)+，403(M+2)+。
實(shí)施例10C
「2-a、3-二氯笨基V4,5,6.7-四氫-2H-吲唑-3-基l -(2-甲基-吡啶-3-基曱基)-胺 使用如在實(shí)施例2中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí)施 例10B的產(chǎn)物代替實(shí)施例1C。 MS(DCl/NHA)m/z 387(M)+, 389(M+2)+。 !H NMR(400 MHz, DMSOd6) 5 ppm 1.57(m, 2H)1.65(m， 2H)2.31(t,J=6.14 Hz,2H)2.32(s,3H)2.45(t,J=6.14Hz,2H)4.14(d,J=6.44 Hz， 2H)5.40(t,J=6.44 Hz, 1H)7.14(dd, J=7.67, 4.91 Hz, 1H)7.37(dd, J=7.98， 1.53 Hz, lH)7.43(t,J=7.98 Hz, lH)7.51(d,J=7.36 Hz, 1H)7.71(dd, J=7.98, 1.84 Hz, lH)8.26(dd, J=4.60, 1.53 Hz, IH)。
實(shí)施例11
l-(2，3-二氯-苯基V5-f(2-甲基-吡啶-3-基曱基V氨基l-lH-吡唑-4-腈 使用如在實(shí)施例7B中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用 C-(2-甲基-吡啶-3-基)-甲胺代替芐胺。MS(DC]TNH3)m/z 358(M)+， 360(M+2)+。 ^NMR(400 MHz, DMSOd6) 5 ppm 2.43(s, 3 H)4.51(d,J=6.14 Hz, 2H)7.20(dd, J=7.67, 4.60 Hz, lH)7.33(t,J=6.14 Hz, lH)7.54(d,J=8.90 Hz, 1H)7.58(t， J-7.98 Hz, 1H)7.64(dd, J=7.98, 1.53 Hz, 1H)7.84(m, 1H)7.88(dd, J=7.98, 1.53 Hz, 1H)8.32(dd, J=4.60, 1.23 Hz, IH)。實(shí)施例12
r2-(2,3-二氯-苯基)-2,6-二氬-4H-噻吩并 「3,4-cl吡唑-3-基l-(2-苯氧基-吡啶-3-基甲基)-胺
實(shí)施例12A N-「2-(2,3-二氯-苯基)-2,6-二氳-4H-噻吩并 「3，4-cl吡唑-3-基l-2-苯氧基-煙酰胺 用草酰氯(250 m L)處理在CH2C12(20 mL)中的2-苯氧基煙酸 (Lancaster Synthesis)(512 mg， 2.38 mmol)。向該混合物中加入2滴N,N-二甲基甲酰胺，并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí)。真空除去溶劑， 將得到的殘余物加入到實(shí)施例6A的產(chǎn)物(300 mg, 1.05mmo1)、 4-二甲基 氨基吡啶(50 mg)和三乙胺(2 mL)在四氳呋喃(30 mL)中的混合物中。在室 溫下攪拌該混合物過夜。除去溶劑，用硅膠色譜分析殘余物，用己烷/ 乙酸乙酯(2:1)洗脫，得到標(biāo)題化合物(220 mg, 43%)。 MS(DCI/NH3)m/z 483(M)+, 485(M+2)+。
實(shí)施例12B 「2-(2,3-二氯-苯基)-2,6-二氫-4H-噻吩并 「3,4-cl吡唑-3-基l-(2-苯氧基-吡啶-3-基甲基V胺 使用如在實(shí)施例2中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí)施 例12A的產(chǎn)物代替實(shí)施例1C。通過Waters Symmetry柱(40mm X 100mm, 7 ju m粒徑)的制備HPLC純化原料，使用10%至100%的乙腈:0.1% TFA 7jC溶液梯度洗脫，流速為70mL/分鐘，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽。 MS(DCI/NH3)m/z 469(M)+， 471(M+2)+。H NMR(400 MHz, CD3OD) 5 ppm 3.76(s, 2H)3.84(s, 2H)4.45(s, 2H)7.02(m, 2H)7.10(dd, J=7.36, 5.22 Hz, lH)7.19(t,J=7.36 Hz, 1H)7.38(m, 2H)7.46(m, 2H)7.72(t,J=5.22 Hz, lH)7.78(d,J=7.36 Hz, lH)7,97(d,J=4.91 Hz, IH)。
實(shí)施例13
『2-(2，3-二氯-苯基)-2.4,5,6-四氫-環(huán)戊吡唑-3-基l -(2-苯氧基-吡啶-3-基曱基V胺實(shí)施例13A
N-r2-(2,3-二氯-苯基)-2.4,5，6-四氫-環(huán)戊吡唑-3-基l -2-苯氧基-煙酰胺 使用如在實(shí)施例12A中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí) 施例3A的產(chǎn)物代替實(shí)施例6A。 MS(DCI/NH3)m/z465(M)+, 467(M+2)+。
實(shí)施例13B
『2-(7,3-二氯-苯基l-2,4.，5,6-四氫-環(huán)戊吡唑-3-基l -(2-苯氧基-吡啶-3-基甲基-胺 使用如在實(shí)施例2中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí)施 例13A的產(chǎn)物代替實(shí)施例1C。通過Waters Symmetry C8柱(40mm X 100mm, 7jum粒徑)的制備HPLC純化原料，使用10%至100%的乙腈 0.1 % TFA水溶液梯度洗脫，流速70mL/分鐘，得到標(biāo)題化合物的三氟乙 酸鹽。MS(DCI/NH3)m/z 451(M)+， 453(M+2)+。
& NMR(400固z, DMSO-d6) 5 ppm 2.20(qt,J=7.06 Hz, 2H)2.37(t,J=7.36, 6.75 Hz, 2H)2.49(t,J=7.98 Hz, 2H)4.34(brs, 2H)5.95(brs, 1H)7.07(m, 2H)7.11(dd, J=7.36, 4.91 Hz, lH)7.20(tt,J=7.36, 0.92 Hz, 1H)7.40(m, 2H)7.50(d,J=2.15 Hz, lH)7.51(s, lH)7.73(dd, J=7.36， 1.53 Hz, 1H)7.78(dd, J=5.83, 3.68 Hz, lH)7.98(dd, J-4.91, 1.84 Hz, IH)。
實(shí)施例14
『2-(2,3-二氯-苯基)-2,4，5,6-四氫-環(huán)戊吡唑-3-基l -(2-苯氧基-爺基)-胺
實(shí)施例14A
N-r2-(2,3-二氯-苯基)-2.4.5,6-四氪-環(huán)戊吡唑-3-基l -2-苯氧基-苯甲酰胺 使用如在實(shí)施例12A中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí) 施例3A的產(chǎn)物代替6A，且用2-苯氧基苯甲酸(Aldrich)代替2-苯氧基煙 酸。MS(DCI/NH3) m/z 464(M)+， 466(M+2)+。實(shí)施例14B
「2-(2,3-二氯苯基2，4,5,6-四氬-環(huán)戊吡唑-3-基1 -(2-苯氧基-卡基)-胺 使用如在實(shí)施例2中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí)施 例14A的產(chǎn)物代替實(shí)施例1C。 MS(DCI/NH3)m/z450(M)+, 452(M+2)+。 & 麗R(500 MHz, CD3OD) 5 ppm 2.28(qt,J=7.63, 7.02 Hz, 2H)2.47(t,J=7.63, 6.41 Hz, 2H)2.55(t,J=7.63, 6.71 Hz, 2H)4.33(s, 2H)6.84(m, 3 H)7.07(t,J=7.63 Hz, 1H)7.10(t,J=7.32 Hz, lH)7.22(td,J=7.93, 1.53 Hz, 1H)7.31(m, 2H)7.34(dd, J=7.93, 1.53 Hz, 1H)7.39(m, 2H)7.66(dd, J=7.93, 1.53 Hz, IH)。
實(shí)施例15
「2-(3-二氯苯氧基)-吡啶-3-基甲基1-2-〖2,3-二氯-苯基) -2，4,5,6-四氫-環(huán)戊吡唑-3-基1-胺
實(shí)施例15A 2-(3-氯-苯氣基)^-「2-(2，3-二氯-苯基)-2丄5,6-四氫-環(huán)戊吡唑-3-基l-煙酰胺 使用如在實(shí)施例12A中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí) 施例3A的產(chǎn)物代替實(shí)施例6A,并且用2-(3-氯-苯氧基)-煙酸(使用如在 Fujiwara, Hidetoshi; Okabayashi, Ichizo; Chem. Pharm. Bull. 1993, 41 1163 中描述的方法制備)代替2-苯氧基煙酸。MS(DCI/NH3)m/z 500(M)+, 502(M+2)+。
實(shí)施例15B
「2-(3-氯-苯氧基)-吡啶-3-基甲基l-「2-(2,3-二氯-苯基) -2,4,5,6-四氫-環(huán)戊吡唑3-基l -胺 使用如在實(shí)施例2中描述的步驟制備標(biāo)題化合物，不同在于用實(shí)施 例15A的產(chǎn)物代替實(shí)施例1C。通過Waters Symmetry C8柱(40mm X 100mm, 7jum粒徑)的制備HPLC純化，使用10%至100%的乙腈0.1% TFA水溶液梯度洗脫，流速為70mL/分鐘，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸 鹽。MS(DCI/NH3)m/z 486(M)+, 488(M+2)+。 ！H NMR(500 MHz, CD3OD)5 ppm 2.32(qt,J=7.32 Hz, 2H)2.51(m, 2H)2.59(t,J=7.32 Hz, 2H)4.42(s, 2H)6.98(dd, J=8.24, 1.53 Hz, lH)7.06(t,J=1.83 Hz, 1H)7.12(dd, J=7.32, 4.88 Hz, lH)7.21(dd, J=7.93, 1.83 Hz, lH)7.37(t,J=8.24 Hz, 1H)7.43(m, 2H)7.69(dd, J=7.32, 2.44 Hz, lH)7.79(d,J=7.32 Hz, 1H)7.99(dd, J=4.88, 1.83 Hz, IH)。
(e)生物學(xué)數(shù)據(jù) 體外測(cè)定
組織培養(yǎng):根據(jù)熟知的方法，使THP-1單核細(xì)胞細(xì)胞系(American Type Culture Collection, Rockville, MD)的細(xì)胞在RPMI培養(yǎng)基中保持在 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中，所述RPMI培養(yǎng)基包含高葡萄糖和10。/o胎牛血清(BRL, Grand Island, NY)(Humphrey禾口 Dubyak, J. Immunol. 第 275巻，第 26792-26798頁(yè)，1996)。每八周引發(fā)新小瓶中的冷凍THP-1細(xì)胞生長(zhǎng)。 為了區(qū)別THP-1細(xì)胞與巨噬細(xì)胞表型，對(duì)于IL-1 P釋放測(cè)定，將最終濃 度25 ng/ml的LPS和10 ng/ml的IFN Y加入到細(xì)胞(Humphrey和Dubyak 1996)中3小時(shí)，或者對(duì)于孔形成研究為過夜(16小時(shí))。使用之前公開的 試-驗(yàn)設(shè)計(jì)生長(zhǎng)和使用穩(wěn)定表達(dá)重組體人P2X7受體的1321N1細(xì)胞 (Bianchi等人，Eur. J. Pharmacol.第376巻，第127-138頁(yè)，1999; Lynch 等人，Mol. Pharmacol.第56巻，第1171-1181頁(yè),1999)。對(duì)于孔形成 和IL-1 P釋放測(cè)定，通常地在各個(gè)試驗(yàn)之前用錐蟲藍(lán)染料排除來(lái)評(píng)價(jià)細(xì) 胞密度和生存力，-〖人為細(xì)胞在分化后〉90%有活力。
P2X7介導(dǎo)的孔形成。P2X7受體活化誘導(dǎo)非特異性孔形成和最終的 細(xì)胞溶解(Verhoef等人，The Journal of Immunology,第70巻，第 5728-5738頁(yè)，2003)。因此，可以通過使用焚光染料YO-PRO(MW = 629) 和熒光成像板閱讀器(FLIPR, Molecular Devices, Sunnydale, CA)測(cè)定本 發(fā)明的拮抗劑抑制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的孔形成的容量來(lái)確定其的抑制活性。在 YO-PRO染料加入之前，在不含Mg2+或Ca2+離子的PBS中洗滌細(xì)胞一 次，所述Mg"或Ca"離子已經(jīng)顯示出抑制孔形成(Michel等人，N-S Arch Pharmacol 359:102-109, 1999)。將所述YO-PRO碘化物染料(在DMSO中 lmM)在磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，不含Mg"或Ca")中稀釋至最終濃度為2 |uM,然后方文置在細(xì)月包上，之后加入激動(dòng)劑BzATP。因?yàn)門HP-1細(xì)J包為 非粘附細(xì)胞系，所以在PBS中洗滌細(xì)胞，并將其與染料一起裝載在錐形管中，之后將所述細(xì)胞在聚賴氨酸涂層的黑色壁96孔平皿上旋轉(zhuǎn)，使
用所述平皿是為了減少光散射。在加入激動(dòng)劑BzATP(50 ju M,激動(dòng)劑活 化EC70值)后，在裝有氬激光器(波長(zhǎng)488nm)和CCD攝像機(jī)FLIPR裝 置中觀察YO-PRO的上染率。對(duì)亍激動(dòng)劑暴露的第一個(gè)IO分鐘，每15 秒用CCD攝像機(jī)俘獲熒光強(qiáng)度，然后，對(duì)于另外50分鐘，每20秒俘 獲，將計(jì)數(shù)的數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)移到連接的PC。照相機(jī)的曝光設(shè)置為0.25秒，光 圈數(shù)設(shè)置為2。通過將10 mM的拮抗劑的DMSO溶液連續(xù)稀l奪在含有 YO-PRO染料的緩沖溶液中制備拮抗劑化合物的溶液。試-驗(yàn)拮抗劑化合 物的活性的濃度范圍為0.003至IOOjuM。在室溫下，用THP-1細(xì)月包培 養(yǎng)試驗(yàn)化合物10分鐘，之后，用BzATP刺激該細(xì)胞，在不存在拮抗劑 下如上所述測(cè)定熒光。為了拮抗劑的活性測(cè)定，用50juM的BzATP誘 導(dǎo)來(lái)標(biāo)準(zhǔn)化最大百分比強(qiáng)度，并對(duì)各個(gè)濃度的化合物繪制曲線圖以計(jì)算 IC50值并解釋板間的變異性。
IL-1 |3釋放:將THP-1細(xì)胞放置在24孔平皿上，密度為lxl()6細(xì) 胞/孔/ml。在試驗(yàn)當(dāng)天，在37°C ,用25 ng/ml的LPS和10 ng/ml最終濃 度的y 1FN分化細(xì)胞。通過將10 mM的拮抗劑的DMSO溶液連續(xù)稀釋 在PBS溶液中制備拮抗劑化合物的溶液。在分化培養(yǎng)基的存在下，在 37。C,用本發(fā)明的拮抗劑培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘，然后在37。C,用1 mMBzATP 再培養(yǎng)30分鐘。在microfuge管中離心5分鐘后，收集樣品上清液，使 用R&D系統(tǒng)Human IL-1 P ELISA測(cè)定或者Endogen Human IL-1 (3 ELISA,按照生產(chǎn)商的說(shuō)明，沉淀細(xì)胞和碎片并試驗(yàn)釋放進(jìn)入上清液的 成熟IL-1 (3 。單獨(dú)用BzATP誘導(dǎo)來(lái)標(biāo)準(zhǔn)化各個(gè)濃度的試-驗(yàn)化合物的最大 IL-1(3釋放，以測(cè)定試驗(yàn)化合物的活性。拮抗劑效價(jià)表示為產(chǎn)生IL-1 P 釋放減少50%的濃度或IC50。
前述體外測(cè)定可用于證實(shí)本發(fā)明的化合物作為P2X7拮抗劑的活性。 體內(nèi)測(cè)定
抗傷害感受作用
動(dòng)物處理和試驗(yàn)設(shè)計(jì)經(jīng)Abbott Laboratories的Institutional Animal Care and Use Committee(IACUC)批準(zhǔn)。對(duì)于所有的外科手術(shù)過程，動(dòng)物 保持在氟烷麻醉下(4%用于誘導(dǎo)，2%用于維持)，在外科手術(shù)之前和之后， <吏用10%聚維酮》典溶液對(duì)切口部位殺菌。
CFA模型:使用完全弗氏佐劑(CFA)模型評(píng)價(jià)所述拮抗劑降低炎癥痛覺過敏的能力。在這些試驗(yàn)中，在給藥P2X7拮抗劑之前48小時(shí)，動(dòng) 物經(jīng)受跖肌內(nèi)(intraplantar)注射CFA。在給藥拮抗劑后30分鐘，通過觀
Chiml模型:可:;使用大鼠的L5/L6脊神經(jīng)緊結(jié)扎(Chung)模型評(píng)價(jià) 在神經(jīng)性疼痛降低中功效。在這些試驗(yàn)中，在測(cè)定前進(jìn)行脊神經(jīng)結(jié)扎 7-14天。在給藥拮抗劑后30分鐘，通過應(yīng)用von Frey毛發(fā)誘導(dǎo)觸覺異 常性疼痛。通過測(cè)定爪退縮閾值和與對(duì)側(cè)爪比較來(lái)測(cè)定觸覺異常性疼痛 的降低。(Jarvis等人，Proc. Natl. Acad. USA ,第99巻，第17179-17184 頁(yè)，2002)。
酵母聚糖方法:在注射酵母聚糖前30分鐘，口服或皮下地給藥小 鼠試驗(yàn)化合物。然后，給小鼠腹膜內(nèi)注射2 mg/動(dòng)物的懸浮在生理鹽水 中的酵母聚糖。四小時(shí)后，通過C02吸入處死動(dòng)物，并用2X1.5mL的 冰冷的磷酸鹽緩沖鹽水灌洗腹腔，所述磷酸鹽緩沖鹽水包含10單位的 肝素/ml。為了 IL-1 P測(cè)定，將樣品在冷凍的microfuge(4。C)中以10,000 x g旋轉(zhuǎn)，除去上清液并冷凍直到進(jìn)行ELISAs(Enzyme Linked Immuno-Assay)。根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明進(jìn)行ELISAs。相對(duì)于賦形劑對(duì)照測(cè) 定IL-1 P (Perretti M.等人，Agents Actions第35巻(l-2),第71-78頁(yè) (1992); TorokK等人，InflammRes.,第44巻(6),第248-252頁(yè)(1995))。
前述體內(nèi)測(cè)定可用于證實(shí)本發(fā)明的化合物改善炎性痛、神經(jīng)性疼痛 和炎癥的活性。
權(quán)利要求
1. 具有式(I)的化合物或其可藥用鹽、前藥、前藥的鹽或其組合id="icf0001" file="S2006800416735C00011.gif" wi="42" he="43" top= "53" left = "87" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中R1為氫或-CN，且R2為氫；或R1和R2與它們連接的碳原子一起形成由5、6或7個(gè)碳原子組成的單環(huán)飽和環(huán)，且環(huán)碳原子之一任選地被選自S、N、NH、O、SO和SO2的雜原子取代；所述環(huán)任選地被1或2個(gè)選自下述的取代基取代烷基、鹵素、鹵烷基、-C(O)烷基和-S(O)2烷基；R3為鹵素、-CN、鹵烷基、烷氧基或鹵烷氧基；R4為烷基、鹵素、-CN、鹵烷基、烷氧基或鹵烷氧基；R5為氫、烷基、鹵素、-CN、鹵烷基、烷氧基或鹵烷氧基；R6為-N(H)-W或-N(H)-C(Rx)(H)-W1；其中Rx為氫、烷基或鹵烷基；W為id="icf0002" file="S2006800416735C00012.gif" wi="44" he="16" top= "191" left = "62" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中A為選自環(huán)烷基和雜環(huán)的五元或六元單環(huán)，且任選地被1、2或3個(gè)選自烷基、鹵素和鹵烷基的取代基取代；B為苯基或單環(huán)雜芳基，任選地被1、2或3個(gè)選自下述的取代基取代鹵素、烷基、-CN、-ORA、-SRA、-N(RA)(RB)和鹵烷基；q為0或1；Ry為X或-L-X；W1為苯基或單環(huán)雜芳基，其中各個(gè)W1任選地與單環(huán)、選自下述的五元或六元環(huán)稠合苯基、雜芳基、雜環(huán)、環(huán)烷基和環(huán)鏈烯基；其中用W1表示的各個(gè)環(huán)獨(dú)立地為未取代的、被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)R7取代的，或被零個(gè)、一個(gè)或兩個(gè)R7取代的，且一個(gè)取代基選自X和-L-X；L在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為O、N(H)、N(烷基)、S、S(O)、S(O)2、S(O)2N(H)、SO2N(烷基)、N(H)S(O)2、N(烷基)S(O)2、CON(H)、CON(烷基)、N(H)CO或N(烷基)CO)；X在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為芳基、雜芳基、環(huán)烷基、環(huán)鏈烯基或雜環(huán)；其中每個(gè)獨(dú)立地為未取代的或被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)R7取代的；R7在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為烷基、鏈烯基、CN、NO2、鹵素、＝O、-ORA、-SRA、-S(O)RA、-S(O)2RA、-S(O)2N(RA)(RB)、-N(RA)(RB)、-C(O)RA、-C(O)ORA、-C(O)N(RA)(RB)、鹵烷基、-烷基-ORA、-烷基-SRA、-烷基-S(O)RA、-烷基-S(O)2RA、-烷基-S(O)2N(RA)(RB)、-烷基-N(RA)(RB)、-烷基-C(O)RA、-烷基-C(O)ORA或-烷基-C(O)N(RA)(RB)；RA在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為氫、烷基、鏈烯基或鹵烷基；和RB在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為氫、烷基或鹵烷基。
2. 權(quán)利要求1的化合物，其中 R!為氫或-CN;R2為氫；R6為"N(H)-C(Rx)(H)隱V^ 。
3. 權(quán)利要求2的化合物，其中 Rx為氫；Wi為苯基或單環(huán)雜芳基，其為獨(dú)立地未取代的，被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)R7取代的，或被零個(gè)、 一個(gè)或兩個(gè)R7取代的，且一個(gè)取代基選自X和-L-X。
4. 權(quán)利要求3的化合物，其中 Ri為氬;Wi為取代的苯基； R3和R4為卣素； Rs為氫，和R7為烷基。
5. 權(quán)利要求4的化合物，其為[2-(2,3-二氯-苯基)-211-吡唑-3-基]-(2-曱基-千基)-胺。
6. 權(quán)利要求3的化合物，其中Ri為-CN;Wi為未取代的苯基； R3和R4為囟素；和R5為氫。
7. 權(quán)利要求6的化合物，其為 5-千基氨基-l-(2,3-二氯-苯基)-lH-吡唑-4-腈。
8. 權(quán)利要求3的化合物，其中 R!為-CN;R3和R4為卣素； Rs為氬；和W！為未取代的單環(huán)雜芳基。
9. 權(quán)利要求8的化合物，其為1-(2,3-二氯-苯基)-5-[(吡啶-3-基曱基)-氨基]-lH-吡唑-4-腈。
10. 權(quán)利要求3的化合物，其中 R!為-CN;R3和R4為卣素；W!為取代的單環(huán)雜芳基；和 R 為烷基。
11. 權(quán)利要求10的化合物，其為l-(2,3-二氯-苯基)-5-[(2-曱基-吡啶 -3 -基甲基)-氨基]-1 H-吡唑-4-腈。
12. 權(quán)利要求1的化合物，其中R^和R2與它們連接的碳原子一起形成由5、 6或7個(gè)碳原子組成的 單環(huán)飽和環(huán)，且環(huán)碳原子之一任選地被選自S、 N、 NH、 O、 SO和S02 的雜原子取代；所述環(huán)任選地被1或2個(gè)選自下述的取代基取代烷基、 鹵素、卣烷基、-C(0)烷基和-S(0)2烷基；和R6為-N(H)-C(Rx)(H)-W!。
13. 權(quán)利要求12的化合物，其中Ri和R2與它們連接的碳原子一起形成5碳單環(huán)飽和環(huán)；Rx為氫；R3為卣素；R4為卣素；和W!為苯基或單環(huán)雜芳基。
14. 權(quán)利要求13的化合物，其中 W!為取代的苯基；和R7為烷基。
15. 權(quán)利要求14的化合物，其為[2-(2,3-二氯-苯基)-2,4,5,6-四氫-環(huán) 戊吡唑-3-基]-(2-甲基-節(jié)基)-胺。
16. 權(quán)利要求13的化合物，其中 Wi為被L-X取代的苯基，其中L為O,且X為芳基。
17. 權(quán)利要求16的化合物，其中芳基為苯基。
18. 權(quán)利要求17的化合物，其為[2-(2,3-二氯-苯基)-2,4,5,6-四氫-環(huán) 戊吡唑-3-基]-(2-苯氧基-節(jié)基)-胺。
19. 權(quán)利要求13的化合物，其中 W!為未取代的單環(huán)雜芳基。
20. 權(quán)利要求10的化合物，其為[2-(2,3-二氯-苯基)-2,4,5,6-四氳-環(huán) 戊吡唑-3-基]-吡啶-3-基曱基-胺。
21. 權(quán)利要求13的化合物，其中 Wi為取代的單環(huán)雜芳基；和R7為烷基。
22. 權(quán)利要求21的化合物，其為[2-(2,3-二氯-苯基)-2,4,5，6-四氳-環(huán) 戊吡唑-3-基]-(2-曱基-吡啶-3-基甲基)-胺。
23. 權(quán)利要求13的化合物，其中W!為被L-X取代的單環(huán)雜芳基，其中L為O,且X為芳基。
24. 權(quán)利要求23的化合物，其選自[2-(2,3-二氯-苯基)-2，4,5,6-四氫-環(huán)戊吡唑-3-基]-(2-苯氧基-吡啶-3-基甲基)-胺；和[2-(3-氯-苯氧基)-吡啶-3-基曱基]-[2-(2,3-二氯-苯基)-2,4,5，6-四氫-環(huán) 戊吡唑-3-基]-胺。
25. 權(quán)利要求1的化合物，其中R^和R2與它們連接的碳原子一起形成5碳單環(huán)飽和環(huán)，且環(huán)碳原 子之一凈皮S、 SO或S02取代。
26. 權(quán)利要求25的化合物，其中 R3為鹵素;R4為卣素；R6為-N(H)-C(Rx)(H),; Rx為氫；和Wi為苯基或單環(huán)雜芳基。
27. 權(quán)利要求26的化合物，其中Wi為被R7取代的苯基，且R 為烷基。
28. 權(quán)利要求27的化合物，其中所述化合物為[2-(2,3-二氯-苯 基)-2,6-二氫-4H-噻吩并[3,4-c]吡唑-3-基]-(2-甲基-芐基)-胺。
29. 權(quán)利要求28的化合物，其中Wi為被R7取代的單環(huán)雜芳基，且R7為烷基。
30. 權(quán)利要求29的化合物，其中所述化合物為[2-(2,3-二氯-苯基)國(guó)2,6-二氫-4H-噻吩并[3,4-c]吡唑-3-基H2-曱基-P比 啶-3-基曱基)-胺。
31. 權(quán)利要求26的化合物，其中W!為被L-X取代的單環(huán)雜芳基，其中L為O,且X為芳基。
32. 權(quán)利要求31的化合物，其為[2-(2,3-二氯-苯基)-2,6-二氫-411-噻吩并[3,4-0]吡唑-3-基]-(2-苯氧基-吡啶-3-基甲基)-胺。
33. 權(quán)利要求1的化合物，其中&和R2與它們連接的碳原子一起形成6碳單環(huán)飽和環(huán)；R3為鹵素；R4為鹵素；R6為陽(yáng)卿-C(Rx)(H)國(guó)W!; Rx為氫；和Wi為苯基或單環(huán)雜芳基。
34. 權(quán)利要求33的化合物，其中 Wj為被R7取代的單環(huán)雜芳基，且R7為烷基。
35. 權(quán)利要求34的化合物，其為[2-(2,3-二氯-苯基)-4，5,6,7-四氫-2H-吲唑-3-基]-(2-曱基-p比啶-3-基甲 基)-胺。
36. 權(quán)利要求1的化合物，其中 R^為氫或-CN;R2為氫；R6為-N(H)-W,其中<formula>formula see original document page 7</formula>其中A為選自環(huán)烷基和雜環(huán)的五元或六元單環(huán)，且任選地,皮1、 2或3 個(gè)選自烷基、卣素和卣烷基的取代基取代；B為苯基或單環(huán)雜芳基，任 選地被l、 2或3個(gè)選自下述的取代基取代卣素、烷基、-CN、 -ORA、 -SRA、 -N(Ra)(Rb)和卣烷基；q為0或1;和Ry為X或-L-X。
37.權(quán)利要求1的化合物，其中&和R2與它們連接的碳原子一起 形成由5、 6或7個(gè)碳原子組成的單環(huán)飽和環(huán)，且環(huán)碳原子之一任選地 被選自下述的雜原子取代S、 N、 NH、 O、 SO和S02; R6為-N(H)-W,其中<formula>formula see original document page 7</formula>A為選自環(huán)烷基和雜環(huán)的五元或六元單環(huán)，且任選地被1、 2或3 個(gè)選自烷基、卣素和卣烷基的取代基取代；B為苯基或單環(huán)雜芳基，任 選地被l、 2或3個(gè)選自下述的取代基取代卣素、烷基、-CN、 -ORA、 -SRA、 -N(Ra)(Rb)和卣烷基；q為0或1;和Ry為X或-L-X。
38. —種藥物組合物，其包括治療有效量的如權(quán)利要求1所述的式 (I)的化合物或其治療可接受的鹽、溶劑化物、前藥、前藥的鹽或其組合 和可藥用載體。
39. —種治療或預(yù)防選自下述的病癥或疾病的方法疼痛、神經(jīng)性 疼痛、慢性炎性痛、炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抑郁癥和與某些進(jìn)行性 CNS病癥相關(guān)的神經(jīng)變性病癥，所述神經(jīng)變性病癥包括，但不限于阿爾 茨海默病、帕金森癥、抑郁癥、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、亨廷頓氏疾病、 具有Lewy體的癡呆、多發(fā)性硬化癥和由外傷性腦損傷引起的CNS功能 降低，包括給藥如權(quán)利要求1所述的式(I)的化合物或其治療可接受的鹽、 溶劑化物、前藥、前藥的鹽或其組合和可藥用載體的步驟。
40. 權(quán)利要求39的方法，其中所述病癥為慢性炎性痛或神經(jīng)性疼痛。
41. 權(quán)利要求39的方法，其中所述病癥為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
42. 權(quán)利要求39的方法，其中所述病癥為與CNS病癥相關(guān)的神經(jīng)變性病癥，包括，但不限于阿爾茨海默病、帕金森癥、抑郁癥、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、亨廷頓氏疾病、具有Lewy體的癡呆、多發(fā)性硬化癥以 及由外傷性腦損傷引起的CNS功能降低。
43. 權(quán)利要求39的方法，其中所述病癥為抑郁癥。
44. 一種抑制P2X7活性的方法，其包括給藥需要這種治療的患者治 療有效量的如權(quán)利要求1所述的式(I)的化合物或其治療可接受的鹽、溶 劑化物、前藥、前藥的鹽或其組合。
45. 根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)的化合物用于制備治療或預(yù)防可通過抑 制P2X7受體活性改善的疾病或病癥的藥物。
全文摘要
公開了作為P2X₇拮抗劑的具有式(I)的化合物，其中R₁、R₂、R₃、R₄、R₅和R₆為在說(shuō)明書中的定義。還公開了用于治療由P2X₇調(diào)節(jié)的疾病或病癥的方法和組合物。
文檔編號(hào)A61K31/416GK101304975SQ200680041673
公開日2008年11月12日 申請(qǐng)日期2006年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月9日
發(fā)明者A·佩雷斯-梅德拉諾, W·A·卡羅爾, 李彤梅 申請(qǐng)人:艾博特公司