專利名稱：：用于口服給藥蛋白質(zhì)的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供包含蛋白質(zhì)和CO-3脂肪酸的組合物及其給藥方法。技術(shù)背景由于生物技術(shù)的改進，生物活性肽進入醫(yī)藥工業(yè)的可行性已大大增加。但是，在開發(fā)肽類藥物中的一個限制性因素是口服給藥時的相對無效性。幾乎所有的肽類藥物都是經(jīng)腸胃外給藥，但是胃腸外給藥肽類藥物通常與患者低依從性相聯(lián)。胰島素是一種用于治療患有糖尿病的患者的藥物，是胰島素依賴型糖尿病的唯一治療。糖尿病的特征是絕對或相對胰島素缺乏的病理狀態(tài)，導(dǎo)致高血糖，是21世紀(jì)人類健康的主要威脅之一。全球糖尿病人口數(shù)預(yù)計在2010年達到2.2億，2025年達到3億。I型糖尿病主要是由于胰腺不能產(chǎn)生胰島素引起。II型糖尿病涉及機體對胰島素的作用不產(chǎn)生反應(yīng)。所有糖尿病人中約20%-30%每日使用胰島素注射劑以維持血糖水平。所有糖尿病人中估計10%完全依賴胰島素注射劑。目前，胰島素的唯一給藥途徑是注射。每日注射胰島素引起患者相當(dāng)痛苦。已知發(fā)生副作用，例如注射部位的脂肪營養(yǎng)不良、皮下脂肪蔞縮(lipatrophy)、皮下脂肪過度增生(lilpohypertrophy)以及偶發(fā)性低血糖。此夕卜，皮下給藥胰島素通常不提供由從胰腺分泌的經(jīng)肝門靜脈直接進入肝臟的胰島素通常所提供的精細、連續(xù)的代謝調(diào)節(jié)。本發(fā)明解決用于胰島素給藥的替代方案的需要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供包含蛋白質(zhì)和co-3脂肪酸的組合物以及用于治療糖尿病的方法，其包括給藥所述組合物，本發(fā)明還提供用于口服給藥具有酶活性的蛋白質(zhì)的方法，其包括口服給藥所述具有酶活性的蛋白質(zhì)。在一個實施方案中，本發(fā)明提供包含胰島素蛋白質(zhì)和co-3脂肪酸的組合物。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供用于向個體口服給藥具有酶活性的蛋白質(zhì)的方法，其中大部分(substantialfraction)蛋白質(zhì)在通過個體的腸道粘膜屏障吸收后仍保持酶活性，所述方法包括向所述個體口服給藥包含所述所述蛋白質(zhì)和co-3脂肪酸的藥物組合物，從而將具有酶活性的蛋白質(zhì)給藥于個體。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供用于治療個體中糖尿病的方法，其包括向所述個體口服給藥包含胰島素和o-3脂肪酸的藥物組合物，從而治療糖尿病。具體實施方式本發(fā)明提供包含蛋白質(zhì)和(o-3脂肪酸的組合物和方法。在一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)的分子量為至多200000道爾頓。在優(yōu)選的實施方案中，所述蛋白質(zhì)的分子量為至多100000道爾頓。在一個實施方案中，本發(fā)明提供增強腸道吸收的增強劑。在一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是酶，在一些實施方案中，所述蛋白質(zhì)是受體配體、轉(zhuǎn)運蛋白或貯存蛋白。在一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是結(jié)構(gòu)蛋白。在一些實施方案中，所述酶是氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、裂解酶、異構(gòu)酶或連接酶。在一些實施方案中，氧化還原酶作用于供體的醛或氧代基團，作用于供體的CH-CH基團，作用于供體的CH-NH(2)基團，作用于供體的CH-NH基團，作用于NADH或NADPH，作用于供體的CH-OH基團，作用于作為供體的含氮化合物，作用于供體的硫基團，作用于供體的血紅素基團，作用于作為供體的二元酚及相關(guān)物質(zhì)，作用于作為受體的過氧化物，作用于作為供體的氫，作用于引入分子氧的單一供體，作用于配對的供體，作用于作為受體的超氧化物，氧化金屬離子，作用于CH或CH(2)基團，作用于作為供體的鐵硫蛋白，作用于作為供體的還原的黃素氧還蛋白，作用于供體中的磷或砷，或者作用于x-H和y-H以形成x-y鍵。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)移酶是?；D(zhuǎn)移酶或糖基轉(zhuǎn)移酶。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)移醛或酮殘基。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)移除甲基之外的烷基或芳基。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)移含氮、磷、硫或硒的基團。在一些實施方案中，水解酶或轉(zhuǎn)葡糖基酶作用于醚鍵、肽鍵、除肽鍵之外的碳氮鍵、酸酐、碳碳鍵、鹵素鍵(halidebond)、磷氮鍵、硫氮鍵、碳磷鍵、硫硫鍵或碳硫鍵。在一些實施方案中，裂解酶是碳碳裂解酶、碳氧裂解酶、碳氮裂解酶、碳硫裂解酶、碳卣素裂解酶、磷氧裂解酶或其它裂解酶。在一些實施方案中，異構(gòu)酶是消旋酶或差向異構(gòu)酶、順反異構(gòu)酶、分子內(nèi)氧化還原酶、分子內(nèi)轉(zhuǎn)移酶、分子內(nèi)裂解酶或其它異構(gòu)酶。在一些實施方案中，連接酶形成碳硫鍵、碳氮鍵、碳碳鍵、磷酯鍵或氮金屬鍵。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)運蛋白是膜聯(lián)蛋白、ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白、血紅蛋白、ATP酶、鈣通道、鉀通道、鈉通道或溶質(zhì)載體。在一些實施方案中，貯存蛋白包括白蛋白、乳球蛋白、酪蛋白、卵粘蛋白、鐵蛋白、卵黃高磷蛋白、乳鐵蛋白或卵黃原蛋白。在一個實施方案中，白蛋白包括抗生物素蛋白、卵清蛋白、血清白蛋白、小清蛋白、C反應(yīng)蛋白、前白蛋白、伴白蛋白、蓖麻蛋白、乳白蛋白、變性清蛋白或轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白。在一些實施方案中，結(jié)構(gòu)蛋白包括淀粉樣蛋白、膠原彈性蛋白或微纖維蛋白。在一些實施方案中，所述蛋白質(zhì)是病毒蛋白、細菌蛋白、無脊椎動物蛋白或脊椎動物蛋白。在一些實施方案中，所述蛋白質(zhì)是重組蛋白。在一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是重組蛋白。在一個實施方案中，所述重組蛋白是重組人蛋白。在一個實施方案中，本發(fā)明提供包含胰島素蛋白質(zhì)和co-3脂肪酸的組合物。如本文所提供的(實施例)，這些組合物用于口服給藥胰島素，其中胰島素通過腸道吸收以活性形式進入血流。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供包含具有酶活性的蛋白質(zhì)和①-3脂肪酸的組合物。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物中的胰島素是人胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是重組胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是重組人胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是牛胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是豬胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是鯨胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是胰島素金屬復(fù)合物(例如胰島素鋅復(fù)合物、魚精蛋白鋅胰島素或球蛋白鋅)。在另一個實施方案中，所述胰島素是常規(guī)胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是速效胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是慢胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是半慢胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是特慢胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是NPH胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是甘精胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是賴脯胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是門冬胰島素。在另一個實施方案中，所述胰島素是上述類型胰島素任何的兩種或多種的組合。在另一個實施方案中，所述胰島素是本領(lǐng)域已知的任何其它類型的胰島素。每種可能都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物中使用的胰島素的量在人中是0.5-3單位(u)/kg。在一個實施方案中，用于度量本發(fā)明的方法和組合物中的胰島素的單位是USP胰島素單位。在一個實施方案中，用于度量胰島素的單位是毫克。在另一個實施方案中，一個USP胰島素單位相當(dāng)于45.5mg胰島素。在另一個實施方案中，胰島素的量為0.1-1u/kg。在另一個實施方案中，其量為0.2-1u/kg。在另一個實施方案中，其量為0.3-1u/kg。在另一個實施方案中，其量為0.5-1u/kg。在另一個實施方案中，其量為0.1-2u/kg。在另一個實施方案中，其量為0.2-2u/kg。在另一個實施方案中，其量為0.3-2u/kg。在另一個實施方案中，其量為0.5-2u/kg。在另一個實施方案中，其量為0.7-2u/kg。在另一個實施方案中，其量為l-2u/kg。在另一個實施方案中，其量為1.2-2u/kg。在另一個實施方案中，其量為1-1.2u/kg。在另一個實施方案中，其量為1-1.5u/kg。在另一個實施方案中，其量為1-2.5u/kg。在另一個實施方案中，其量為l-3u/kg。在另一個實施方案中，其量為2-3u/kg。在另一個實施方案中，其量為l-5u/kg。在另一個實施方案中，其量9為2-5u/kg。在另一個實施方案中，其量為3-5u/kg。在另一個實施方案中，胰島素的量為0.1u/kg。在另一個實施方案中，其量為0.2u/kg。在另一個實施方案中，其量為03u/kg。在另一個實施方案中，其量為o.4u/kg。在另一個實施方案中，其量為0.5u/kg。在另一個實施方案中，其量為0.6u/kg。在另一個實施方案中，其量為0.8u/kg。在另一個實施方案中，其量為lu/kg。在另一個實施方案中，其量為1.2u/kg。在另一個實施方案中，其量為1.4u/kg。在另一個實施方案中，其量為1.6u/kg。在另一個實施方案中，其量為1.8u/kg。在另一個實施方案中，其量為2u/kg。在另一個實施方案中，其量為2.2u/kg。在另一個實施方案中，其量為2.5u/kg。在另一個實施方案中，其量為3u/kg。在另一個實施方案中，胰島素的量為1-10u。在另一個實施方案中，其量為2-10u。在另一個實施方案中，其量為3-10u。在另一個實施方案中，其量為5-10u。在另一個實施方案中，其量為1-20u。在另一個實施方案中，其量為2-20u。在另一個實施方案中，其量為3-20u。在另一個實施方案中，其量為5-20u。在另一實施方案中，其量為7-20u。在另一個實施方案中，其量為10-20u。在另一個實施方案中，其量為12-20u。在另一個實施方案中，其量為10-12u。在另一個實施方案中，其量為10-15u。在另一個實施方案中，其量為10-25u。在另一個實施方案中，其量為10-30u。在另一個實施方案中，其量為20-30u。在另一個實施方案中，其量為10-50u。在另一個實施方案中，其量為20-50u。在另一個實施方案中，其量為30-50u。在另一個實施方案中，其量為20-100u。在另一個實施方案中，其量為30-100u。在另一個實施方案中，其量為100-150u。在另一個實施方案中，其量為100-250u。在另一個實施方案中，其量為100-300u。在另一個實施方案中，其量為200-300u。在另一個實施方案中，其量為100-500u。在另一個實施方案中，其量為200-500u。在另一個實施方案中，其量為300-500u。在另一個實施方案中，其量為200-1000u。在另一個實施方案中，其量為300-1000u。在另一個實施方案中，胰島素的量為lu。在另一個實施方案中，其量為2u。在另一個實施方案中，其量為3u。在另一個實施方案中，其量為4u。在另一個實施方案中，其量為5u。在另一個實施方案中，其量為6u。在另一個實施方案中，其量為8u。在另一個實施方案中，其量為10u。在另一個實施方案中，其量為12u。在另一個實施方案中，其量為14u。在另一個實施方案中，其量為16u。在另一個實施方案中，其量為18u。在另一個實施方案中，其量為20u。在另一個實施方案中，其量為22u。在另一個實施方案中，其量為25u。在另一個實施方案中，其量為30u。在另一個實施方案中，其量為50u。在另一個實施方案中，其量為80u。在另一個實施方案中，其量為100u。在另一個實施方案中，其量為120u。在另一個實施方案中，其量為140u。在另一個實施方案中，其量為160u。在另一個實施方案中，其量為180u。在另一個實施方案中，其量為200u。在另一個實施方案中，其量為300u。在另一個實施方案中，其量為500u。在另一個實施方案中，使用緩釋劑型(例如緩釋微囊)使治療頻率減少至每日一次或兩次。在另一個實施方案中，胰島素劑量隨給藥頻率的減少而相應(yīng)地增加。胰島素的每種量都代表本發(fā)明的單獨實施方案。測量胰島素水平的方法在本領(lǐng)域是熟知的。在一個實施方案中，使用人胰島素放射免疫測定(RIA)試劑盒，例如LincoResearchInc，(圣査理，密蘇里州(St.Charles,Missouri))生產(chǎn)的試劑盒測量重組胰島素的水平。在另一個實施方案中，還測量C肽水平以確定內(nèi)源性胰島素和外源性胰島素對觀察到的胰島素水平的升高的相對貢獻。在另一個實施方案中，使用胰島素ELISA試劑盒。在另一個實施方案中，使用本領(lǐng)域已知的任何其它方法測量胰島素水平。每種可能都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在一些實施方案中，co-3脂肪酸可在植物源例如野鼠尾草、紫蘇、亞麻、胡桃、馬齒莧、越橘、沙棘和大麻的種子中找到。在一些實施方案中，0)-3脂肪酸還可在愛莎伊(acai)棕櫚果中找到。在另一個實施方案中，co-3脂肪酸以合成(D-3脂肪酸的形式提供。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物中的(D-3脂肪酸以魚油的形式提供在組合物中。在另一個實施方案中，co-3脂肪酸以低芥酸菜子油(canolaoil)的形式提供。在另一個實施方案中，co-3脂肪酸以亞麻油的形式提供。在另一個實施方案中，①-3脂肪酸以本領(lǐng)域己知的任何其它富含。-3脂肪酸的來源的形式提供。在另一個實施方案中，co-3脂肪酸以合成co-3脂肪酸的形式提供。每種0>-3脂肪酸形式都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物中的co-3脂肪酸是co-3多不飽和脂肪酸。在另一個實施方案中，co-3脂肪酸是DHA，為co-3多不飽和22碳脂肪酸，也稱為4,7，10，13,16,19-二十二碳六烯酸。在另一個實施方案中，①-3脂肪酸是(x-亞麻酸(9,12，15-十八碳三烯酸)。在另一個實施方案中，co-3脂肪酸是硬脂艾杜糖酸(stearidonicacid)(6，9，12,15-十八碳四烯酸)。在另一個實施方案中，co-3脂肪酸是二十碳三烯酸(ETA;11，14，17-二十碳三烯酸)。在另一個實施方案中，co-3脂肪酸是二十碳四烯酸(8，11,14,17-二十碳四烯酸)。在一個實施方案中，①-3脂肪酸是二十碳五烯酸(EPA;5，8,11,14,17-二十碳五烯酸)。在另一個實施方案中，co-3脂肪酸是二十碳六烯酸(也稱為"EPA";5，7,9，11，14，17-二十碳六烯酸)。在另一個實施方案中，co-3脂肪酸是二十二碳五烯酸(DPA;7,10，13，16，19-二十二碳五烯酸)。在另一個實施方案中，①-3脂肪酸是二十四碳六烯酸(6,9,12，15，18，21-二十四碳六烯酸)。在另一個實施方案中，co-3脂肪酸是本領(lǐng)域已知的任何其它co-3脂肪酸。每種co-3脂肪酸都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，本發(fā)明的組合物進一步包含蛋白酶抑制劑。如本文所提供，蛋白酶抑制劑增強(o-3脂肪酸保護胰島素的能力并促進其在腸道中的吸收。在一些實施方案中，蛋白酶抑制劑抑制肽酶功能。在一個實施方案中，蛋白酶抑制劑增強co-3脂肪酸保護本發(fā)明的蛋白質(zhì)的能力并促進其在腸道中的吸收。在一些實施方案中，本發(fā)明的蛋白酶抑制劑是蛋白質(zhì)。在一些實施方案中，蛋白酶抑制劑包含半胱氨酸蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑(Serpins)、胰蛋白酶抑制劑、蘇氨酸蛋白酶抑制劑、天冬氨酸蛋白酶抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑。在一些實施方案中，蛋白酶抑制劑包含自殺抑制劑、過渡態(tài)抑制劑或螯合劑。在一個實施方案中，蛋白酶抑制劑是大豆胰蛋白酶抑制劑(SBTI)。在另一個實施方案中，蛋白酶抑制劑是AEBSF-HC1。在另一個實施方案中，抑制劑是(e)-氨基己酸。在另一個實施方案中，抑制劑是(a)1-抗胰凝乳蛋白酶((alpha)l-antichymotypsin)。在另一個實施方案中，抑制劑是抗蛋白酶。在另一個實施方案中，抑制劑是抗凝血酶m。在另一個實施方案中，抑制劑是(a)l-抗胰蛋白酶([a]l-蛋白酶抑制劑)。在另一個實施方案中，抑制劑是APMSF-HC1(4-脒基苯基-甲磺酰氟)。在另一個實施方案中，抑制劑是sprotinin。在另一個實施方案中，抑制劑是苯甲脒-HCl。在另一個實施方案中，抑制劑是胰凝乳蛋白酶抑制劑。在另一個實施方案中，抑制劑是DFP(氟磷酸二異丙酯)。在另一個實施方案中，抑制劑是亮抑蛋白酶肽。在另一個實施方案中，抑制劑是PEFABLOCSC(4-(2-氨基乙基)-苯磺酰氟鹽酸鹽)。在另一個實施方案中，抑制劑是PMSF(苯基甲磺酰氟)。在另一個實施方案中，抑制劑是TLCK(1-氯-3-甲苯磺酰氨基-7-氨基-2-庚酮HCl)。在另一個實施方案中，抑制劑是TPCK(l-氯-3-甲苯磺酰氨基-4-苯基-2-丁酮)。在另一個實施方案中，抑制劑是來自卵清的胰蛋白酶抑制劑(卵類粘蛋白)。在另一個實施方案中，抑制劑是來自大豆的胰蛋白酶抑制劑。在另一個實施方案中，抑制劑是抑酶肽。在另一個實施方案中，抑制劑是羥乙磺酸噴他脒。在另一個實施方案中，抑制劑是胃蛋白酶抑制劑。在另一個實施方案中，抑制劑是胍鎿(guanidium)。在另一個實施方案中，抑制劑是a2-巨球蛋白。在另一個實施方案中，抑制劑是鋅螯合劑。在另一個實施方案中，抑制劑是碘乙酸鹽(iodoacetate)。在另一個實施方案中，抑制劑是鋅。每種可能都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物中使用的蛋白酶抑制劑的量為O.lmg/劑量單位。在另一個實施方案中，蛋白酶抑制劑的量為0.2mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.3mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.4mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.6mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.8mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為1mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為1.5mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為2mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為2.5mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為3mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為5mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為7mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為10mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為12mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為15mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為20mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為30mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為1350mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為70mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為100mg/劑量單位。在另一個實施方案中，蛋白酶抑制劑的量為0.1-1mg/劑量單位。在另一個實施方案中，蛋白酶抑制劑的量為0.2-1mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.3-1mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.5-1mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.1-2mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.2-2mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.3-2mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.5-2mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為l-2mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為1-10mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為2-10mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為3-10mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為5-10mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為l-20mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為2-20mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為3-20mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為5-20mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為10-20mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為10-100mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為20-100mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為30-100mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為50-100mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為10-200mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為20-200mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為30-200mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為50-200mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為100-200mg/劑量單位。在另一個實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物中使用的蛋白酶抑制劑的量是1000k丄u.(激肽釋放酶滅活單位)/丸。在另一個實施方案中，其量為10k丄u7劑量單位，在另一個實施方案中，其量為12k.i.u./劑量單位，在另一個實施方案中，其量為15k丄u.Z劑量單位。在另一個實施方案中，其量為20k.i.u./劑量單位。在另一個實施方案中，其量為30k.i.u./劑量單位，在另一個實施方案中，其量為40k丄u,/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為50k丄u./劑量單位。在另一個實施方案中，其量為70k丄uV劑量單位。在另一個實施方案中，其量為100k丄uV劑量單位。在另一個實施方案中，其量為150k丄u,/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為200k丄u,/劑量單14位。在另一個實施方案中，其量為300k丄iL/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為500k.i.u./劑量單位，在另一個實施方案中，其量為700k丄u./劑量單位，在另一個實施方案中，其量為1500k丄uV劑量單位。在另一個實施方案中，其量為3000k丄u/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為4000k丄u/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為5000k.i.u./劑量單位。蛋白酶抑制劑的每種量都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物中的蛋白酶抑制劑的靶向蛋白酶是絲氨酸蛋白酶。在另一個實施方案中，所述蛋白酶是胰蛋白酶。在另一個實施方案中，所述蛋白酶是胰凝乳蛋白酶。在另一個實施方案中，所述蛋白酶是羧肽酶。在另一個實施方案中，所述蛋白酶是氨基肽酶。在另一個實施方案中，所述蛋白酶是在十二指腸或小腸中發(fā)揮功能的任何其它蛋白酶。每種可能都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，本發(fā)明的組合物進一步包含增強胰島素通過腸粘膜屏障吸收的物質(zhì)。該物質(zhì)在本文被稱作"增強劑"。如本文所提供，當(dāng)增強劑與co-3脂肪酸一起使用時增強胰島素在腸道中吸收的能力。在一個實施方案中，所述增強劑是十二酰磷脂酰膽堿(DDPC)。在一個實施方案中，所述增強劑是螯合劑例如乙二胺四乙酸(EDTA)或依他酸EGTA。在優(yōu)選的實施方案中，EDTA是EDTA鈉。在一些實施方案中，所述增強劑是NO供體。在一些實施方案中，所述增強劑是膽汁酸、膽汁酸的甘氨酸結(jié)合形式或堿金屬鹽。在一個實施方案中，通過使用a-半乳糖苷酶和P-甘露聚糖酶來實現(xiàn)吸收增強。在一些實施方案中，所述增強劑是脂肪酸例如癸酸鈉。在一個實施方案中，所述增強劑是甘氨膽酸鈉。在一個實施方案中，所述增強劑是水楊酸鈉。在一個實施方案中，所述增強劑是正十二烷基-卩-D-麥芽糖吡喃糖苷。在一些實施方案中，表面活性劑作為吸收增強劑。在一個實施方案中，所述增強劑是殼聚糖(chitisan)例如N,N，N-三甲基殼聚糖鹽酸鹽(TMC)。在一個實施方案中，本發(fā)明的NO供體包含3-(2-羥基-l-(l-甲基乙萄-2-亞硝基肼基)-l-丙胺、N-乙基-2-(l-乙基-羥基-2-亞硝基肼基)-乙胺或S-亞硝基-N-乙酰青霉胺。在另一個實施方案中，所述膽汁酸是膽酸，在另一個實施方案中，所述膽汁酸是鵝脫氧膽酸，在另一個實施方案中，所述膽汁酸是?；悄懰?。在另一個實施方案中，所述膽汁酸是牛磺鵝脫氧膽酸。在另一個實施方案中，所述膽汁酸是甘氨膽酸，在另一個實施方案中，所述膽汁酸是甘氨鵝膽酸(glycochenocholicacid)。在另一個實施方案中，所述膽汁酸是3|3-—羥基膽酸(3.beta,monohydroxychloricacid)。在另一個實施方案中，所述膽汁酸是石膽酸。在另一個實施方案中，所述膽汁酸是5p-膽垸酸。在另一個實施方案中，所述膽汁酸是3,12-二醇-7-酮-5|3-膽垸酸。在另一個實施方案中，所述膽汁酸是3a-羥基-12-酮膽酸。在另一個實施方案中，所述膽汁酸是3(3-羥基-12-酮膽酸。在另一個實施方案中，所述膽汁酸是12(x-3(3-二氫膽酸。在另一個實施方案中，所述膽汁酸是熊脫氧膽酸。在一個實施方案中，所述增強劑是非離子型表面活性劑。在一個實施方案中，所述增強劑是非離子型聚氧乙烯醚表面活性劑(例如HLB值為6至19的表面活性劑，其中聚氧乙烯單元的平均數(shù)目是4至30)。在另一個實施方案中，所述增強劑是陰離子型表面活性劑。在另一個實施方案中，所述增強劑是陽離子型表面活性劑。在另一個實施方案中，所述增強劑是兩性表面活性劑。在一個實施方案中，兩性離子型表面活性劑例如?；鈮A作為吸收增強劑。在另一個實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物中使用的增強劑的量為O.lmg/劑量單位。在另一個實施方案中，增強劑的量為0.2mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為0.3mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為0.4mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為0.6mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.8mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為1mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為1.5mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為2mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為2.5mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為3mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為5mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為7mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為10mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為12mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為15mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為20mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為30mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為50mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為70mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為100mg/劑量單位。在另一個實施方案中，增強劑的量為0.1-1mg/劑量單位。在另一個實施方案中，增強劑的量為0.2-1mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為03-lmg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.5-1mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.1-2mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.2-2mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為0.3-2mg/劑量單^位。在另一個實施方案中，其量為0.5-2mg,/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為l-2mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為l-10mg/劑量單位，在另一個實施方案中，其量為2-10mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為3-10mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為5-10mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為1-20mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為2_20mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為3-20mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為5-20mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為10-20mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為10-100mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為20-100mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為30-100mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為50-100mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為10-200mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為20-200mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為30-200mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為50-200mg/劑量單位。在另一個實施方案中，其量為100-200mg/劑量單位。增強劑的每種類型和量都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，本發(fā)明的組合物進一步包含抑制所述組合物在個體的胃中消化的包衣。在一個實施方案中，包衣抑制所述組合物在個體的胃中消化。在一個實施方案中，本發(fā)明的包衣劑型在pH移向堿性范圍時釋放藥物。在一個實施方案中，包衣是單層包衣，其中在其它實施方案中，是多層施用的包衣。在一個實施方案中，包衣是與腸粘膜選擇性結(jié)合并因此能夠在附著部位釋放藥物的生物粘附性聚合物。在一個實施方案中，腸溶衣是腸溶薄膜包衣。在一些實施方案中，包衣包含可生物降解的多糖、殼聚糖、含水腸溶衣(aquatericaqueous)、乙基纖維素水分散體(aquacoatECD)、偶氮聚合物、醋酸鄰苯二甲酸纖維素、醋酸偏苯三酸纖維素、羥丙基甲基鄰苯二甲酸纖維素、明膠、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯、水凝膠、脈沖塞膠囊(pulsincap)或它們的組合。在一個實施方案中，如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，將根據(jù)期望的釋放部位和/或特征來使用pH敏感性包衣。在一個實施方案中，所述包衣是腸溶衣。關(guān)于腸溶衣的方法是本領(lǐng)域熟矢口的，例如在SiepmannF，SiepmannJ等,Blendsofaqueouspolymerdispersionsusedforpelletcoating:importanceoftheparticlesize.JControlRelease2005;105(3):226-39;禾口HuyghebaertN,Ve薩ireA，RemonJRInvitroevaluationofcoatingpolymersforentericcoatingandhumanilealtargeting.IntJPharm2005;298(1):26-37中己描述。每種方法都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，使用丙烯酸聚合物Eudragit⑧作為腸溶衣。使用丙烯酸聚合物用于藥物制劑的包衣是本領(lǐng)域中熟知的。已表明Eudragit丙烯酸聚合物安全，既不被機體吸收，也不被機體代謝，而是被清除。在另一個實施方案中，所述包衣是明膠包衣。在另一個實施方案中，使用微囊保護胰島素不在胃中分解。施用明膠包衣以及用于微囊包囊的方法在本領(lǐng)域是已知的。每種方法都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，所述包衣是薄膜包衣。在另一個實施方案中，所述包衣是乙基纖維素。在另一個實施方案中，所述包衣是乙基纖維素的水系分散體，例如羥丙基甲基纖維素(HPMC)E15。在另一個實施方案中，所述包衣是在胃耐性包衣，例如包含羧酸基團作為官能團的聚合物。在另一個實施方案中，包衣是整體基質(zhì)(monolkhicmatrix)。在另一個實施方案中，所述包衣是纖維素醚(例如羥丙甲纖維素(HPMC)。每種類型的包衣都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，使用多顆粒劑型抑制組合物在胃中的消化。抑制組合物在胃中消化的每種類型的包衣、劑型等都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供將具有酶活性的蛋白質(zhì)口服給藥于個體的方法，由此所述蛋白質(zhì)的大部分在通過所述個體的腸道粘膜屏障吸18收后仍保持所述酶活性，所述方法包括向所述個體口服給藥包含蛋白質(zhì)和co-3脂肪酸的藥物組合物，從而將具有酶活性的蛋白質(zhì)口服給藥于個體。在一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是重組蛋白。在一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是胰島素。在另一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是胰高血糖素，在另一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是干擾素Y。在另一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是胰島素ct。在另一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是生長激素。在另一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是促紅細胞生成素。在另一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是粒細胞集落刺激因子(G-CSF)。在另一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是本領(lǐng)域已知的任何其它蛋白質(zhì)。在另一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)是生長激素。在一個實施方案中，所述生長激素是生長素。在另一個實施方案中，所述生長激素是胰島素生長因子-I(IGF-I)。在另一個實施方案中，所述生長激素是本領(lǐng)域已知的任何其它生長激素。在另一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)的分子量(MW)為1-50千道爾頓(kDa)。在另一個實施方案中，MW是1-45kDa。在另一個實施方案中，MW是l-40kDa。在另一個實施方案中，MW是1-35kDa。在另一個實施方案中，MW是l-30kDa。在另一個實施方案中，MW是l-25kDa。在另一個實施方案中，MW是1-20kDa。在另一個實施方案中，MW是10-50kDa。在另一個實施方案中，MW是15-50kDa。在另一個實施方案中，MW是20-50kDa。在另一個實施方案中，MW是25-50kDa。在另一個實施方案中，MW是30-50kDa。在另一個實施方案中，MW是35-50kDa。在另一個實施方案中，MW是1-100kDa。在另一個實施方案中，MW是1-90kDa。在另一個實施方案中，MW是1-80kDa。在另一個實施方案中，MW是1-70kDa。在另一個實施方案中，MW是l-60kDa。在另一個實施方案中，MW是10-100kDa。在另一個實施方案中，MW是15-100kDa。在另一個實施方案中，MW是20-100kDa。在另一個實施方案中，MW是25-100kDa。在另一個實施方案中，MW是30-100kDa。在另一個實施方案中，MW是10-80kDa。在另一個實施方案中，MW是15-80kDa。在另一個實施方案中，MW是20-80kDa。在另一個實施方案中，MW是25-80kDa。在另一個實施方案中，MW是30-80kDa。每種可能都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，MW小于20kDa。在另一個實施方案中，MW小于25kDa。在另一個實施方案中，MW小于30kDa。在另一個實施方案中，MW小于35kDa。在另一個實施方案中，MW小于40kDa。在另一個實施方案中，MW小于45kDa。在另一個實施方案中，MW小于50kDa。在另一個實施方案中，MW小于55kDa。在另一個實施方案中，MW小于60kDa。在另一個實施方案中，MW小于65kDa。在另一個實施方案中，MW小于70kDa。在另一個實施方案中，MW小于75kDa。在另一個實施方案中，MW小于80kDa。在另一個實施方案中，MW小于85kDa。在另一個實施方案中，MW小于90kDa。在另一個實施方案中，MW小于95kDa。在另一個實施方案中，MW小于100kDa。上述蛋白質(zhì)中的一些的分子量如下胰島素-6千道爾頓(kDa);胰高血糖素-3.5kDa;干擾素-28kDa;生長激素-21.5-47kDa;人血清白蛋白-69kDa;促紅細胞生成素-34kDa;G-CSF-30-34kDa。因此，在一個實施方案中，這些蛋白質(zhì)的分子量適合于通過本發(fā)明的方法給藥。在另一個實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物用于給藥人血清白蛋白。在一個實施方案中，人血清白蛋白不被認(rèn)為是藥學(xué)活性組分；但是，在本發(fā)明中它可以用作用于活性組分的治療有益的載體。每種類型的蛋白質(zhì)都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供治療個體中糖尿病的方法，其包括向所述個體給藥包含胰島素和co-3脂肪酸的藥物組合物，從而治療糖尿病。在一個實施方案中，所述糖尿病是I型糖尿病，在另一個實施方案中，所述糖尿病是II型糖尿病。在另一個實施方案中，所述糖尿病是胰島素依賴型糖尿病。在另一個實施方案中，所述糖尿病是非胰島素依賴型糖尿病。在另一個實施方案中，所述糖尿病是本領(lǐng)域已知的任何類型的糖尿病。每種可能都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在一個實施方案中，每日給藥胰島素組合物三次。在另一個實施方案中，每日給藥兩次。在另一個實施方案中，每日給藥四次。在另一個實施方案中，每日給藥一次。在另一個實施方案中，每日給藥多于四次。每種可能都代表本發(fā)明的單獨實施方案。本發(fā)明的任何方法都可以在各種實施方案中使用本發(fā)明的任何組合20物。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供用于口服給藥胰島素的組合物，其包含胰島素蛋白質(zhì)和co-3脂肪酸，由此所述胰島素的大部分在通過所述個體腸道粘膜屏障吸收后仍保持所述酶活性。在一個實施方案中，本發(fā)明提供用于口服給藥蛋白質(zhì)的組合物，其包含蛋白質(zhì)和co-3脂肪酸，由此所述蛋白質(zhì)的大部分在通過所述個體腸道粘膜屏障吸收后仍保持所述酶活性。在一個實施方案中，本發(fā)明提供蛋白質(zhì)和co-3脂肪酸在生產(chǎn)用于向個體口服給藥具有酶活性的蛋白質(zhì)的藥物中的應(yīng)用，由此所述蛋白質(zhì)的大部分在通過所述個體的腸道粘膜屏障吸收后仍保持所述酶活性。在一個實施方案中，本發(fā)明提供胰島素蛋白質(zhì)和co-3脂肪酸在制備用于治療個體中糖尿病的藥物中的應(yīng)用。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物具有更近似地模擬胰腺對胰島素的生理分泌作用。當(dāng)胰島素被分泌入門靜脈時，肝臟比外周組織接觸更高濃度的胰島素。與此相似，根據(jù)本發(fā)明給藥的胰島素到達腸道，被機體通過腸道吸收，并通過門靜脈系統(tǒng)進入肝臟。因此該吸收路線與胰腺對胰島素的生理分泌相似，在該實施方案中，能夠精細地控制血糖水平以及由胰島素控制的肝臟和外周器官的代謝活動。與此相反，當(dāng)胰島素通過外周靜脈系統(tǒng)給藥于缺乏胰島素的糖尿病患者時，門靜脈中胰島素的濃度與外周循環(huán)中的濃度相似，導(dǎo)致門靜脈和肝臟中低血胰島素血癥和外周靜脈系統(tǒng)中高胰島素血癥。在一個實施方案中，這導(dǎo)致異常的葡萄糖處置模式。在另一個實施方案中，本發(fā)明的組合物的不同組分以不同的速率從腸腔被吸收入血流。在一個實施方案中，膽汁酸的吸收顯著快于胰島素的吸收。因此，在另一個實施方案中，給藥方案包括間隔一段時間攝入一對丸齊廿，例如，第一丸劑后在確定的時間間隔(例如30分鐘)攝入含有較高濃度增強劑的第二丸劑。在另一個實施方案中，將某些組分微囊化以增強胰島素吸收入系統(tǒng)。在一個實施方案中，本發(fā)明的處理方案是治療性的。在另一個實施方案中，所述方案是預(yù)防性的。每種可能都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在另一個實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物中使用的固體載體/稀釋劑包括但不限于樹膠、淀粉(例如玉米淀粉、預(yù)膠化淀粉)、糖(例如乳糖、甘露糖醇、蔗糖、葡萄糖)、纖維素材料(例如微晶纖維素)、丙烯酸酯(例如聚甲基丙烯酸酯)、碳酸鈣、氧化鎂、滑石或它們的混合。在另一個實施方案中，所述組合物進一步包含粘合劑(例如阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠、卡波姆、乙基纖維素、瓜耳膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚維酮)、崩解劑(例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、褐藻酸、二氧化硅、交聯(lián)甲羧纖維素鈉、交聚維酮、瓜耳膠、羥基乙酸淀粉鈉)、各種pH和離子強度的緩沖劑(例如Tris-HCL、醋酸鹽、磷酸鹽)、防止表面吸附的添加劑例如白蛋白或明膠、洗滌劑(例如吐溫20、吐溫80、PluronicF68、膽汁酸鹽)、蛋白酶抑制劑、表面活性劑(例如月桂基硫酸鈉)、滲透增強劑、助溶劑(例如甘油、聚乙二醇)、抗氧化劑(例如抗壞血酸、焦亞硫酸鈉、丁基化羥基苯甲醚)、穩(wěn)定劑(例如羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素)、增粘劑(例如卡波姆、膠態(tài)二氧化硅、乙基纖維素、瓜耳膠)、甜味劑(例如阿司帕坦、檸檬酸)、防腐劑(例如乙基汞硫代水楊酸鈉、芐醇、對羥基苯甲酸酯類)、潤滑劑(例如硬脂酸、硬脂酸鎂、聚乙二醇、月桂基硫酸鈉)、助流劑(例如膠態(tài)二氧化硅)、增塑劑(例如鄰苯二甲酸二乙酯、檸檬酸三乙酯)、乳化劑(例如卡波姆、羥丙基纖維素、月桂基硫酸鈉)、聚合物包衣劑(例如泊洛沙姆或泊洛沙胺)、包衣劑或成膜劑(例如乙基纖維素、丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯)和/或輔劑。以上每種輔劑都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在一些實施方案中，配制本發(fā)明的劑型以獲得速釋特征、緩釋特征或延時釋放特征。在一些實施方案中，通過使用特定的賦形劑來決定組合物的釋放特征，所述賦形劑例如作為粘合劑、崩解劑、填充劑或包衣材料。在一個實施方案中，將配制所述組合物以獲得本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的特定釋放特征。在一個實施方案中，配制所述組合物為口服劑型。在一個實施方案中，所述組合物為固體口服劑型，包括片劑、咀嚼片劑或膠囊劑。在一個實施方案中，所述膠囊劑是軟明膠膠囊。在其它實施方案中，本發(fā)明的方法和組合物中使用的控釋包衣或緩釋包衣包括在親脂性貯存單元(例如脂肪酸、蠟、油)中的制劑。在另一個實施方案中，所述組合物還包含將活性物質(zhì)引入或引至聚合物例如聚乳酸、聚乙醇酸、水凝膠等的顆粒制劑中或其上，或者引至脂質(zhì)體、微乳、微囊、單層或多層囊泡、紅細胞影或球形體上。這些組合物將影響物理狀態(tài)、溶解度、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放速率和體內(nèi)清除速率。在另一個實施方案中，活性成分的顆粒組合物用聚合物(例如泊洛沙姆或泊洛沙胺)包衣。在另一個實施方案中，包含胰島素和CO-3脂肪酸的組合物在囊泡例如脂質(zhì)體中遞送(參見Langer，Science249:1527-1533(1990);Treat等，LiposomesintheTherapyofInfectiousDiseaseandCancer,Lopez-BeresteinandFidler(eds.)，Liss,NewYork,pp.353-365(1989);Lopez-Berestein,ibid"pp.317-327;—般內(nèi)容參見同前)。例如通過混合、制粒或壓片方法對含有活性組分的藥物組合物的制備是本領(lǐng)域中熟知的。通常將治療活性成分與藥學(xué)可接受的、與活性成分相容的賦形劑混合。對于口服給藥，本發(fā)明的組合物的活性成分與通常用于該目的的添加劑例如載體、穩(wěn)定劑或惰性稀釋劑混合，并通過常規(guī)方法轉(zhuǎn)化為合適的給藥形式，例如片劑、包衣片劑、硬或軟明膠膠囊、水溶液、醇或油溶、液。上述每種添加劑、賦形劑、制劑和給藥方法都代表本發(fā)明的單獨實施方案。在一個實施方案中，術(shù)語"治療"是指治愈疾病。在另一個實施方案中，"治療"是指預(yù)防疾病。在另一個實施方案中，"治療"是指降低疾病的發(fā)病率。在另一個實施方案中，"治療"是指改善疾病的癥狀。在另一個實施方案中，"治療"指包括緩解。在另一個實施方案中，"治療"是指減緩疾病的進展。實驗詳述部分實施例1在狗中保護胰島素不被蛋白酶降解并經(jīng)十二指腸成功給藥材料和實驗方法制劑23給藥當(dāng)日，制備含有100毫克(mg)EDTA(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)、100mg大豆胰蛋白酶抑制劑(SBTI;Sigma)、溶于2毫升(ml)魚油中的5mg胰島素(重組結(jié)晶胰島素)的制劑并裝入透明的明膠膠囊中。驢為測試是否胰島素能被保護不被蛋白酶降解并經(jīng)十二指腸吸收，將包含胰島素、SBTI、EDTA和魚油的組合物直接給藥于8.8kg比格犬的十二指腸。給藥后每10分鐘測量血葡萄糖水平。如以下表l中所述，對胰島素反應(yīng)血葡萄糖水平顯著下降。因此，包含(o-3脂肪酸的組合物能夠保護胰島素在小腸中不被蛋白酶降解并能夠使口服給藥的胰島素直接吸收。表l實驗#1中向十二指腸給藥胰島素后血中葡萄糖濃度時間(分鐘)葡萄糖(毫克/分升，mg/dL)一567071107720623042402650416036753590511056412075實施例2材料和實驗方法制劑給藥前4日，制備包含125mgEDTA、100mgSBTI、溶于2ml魚油中的5mg胰島素的于明膠膠囊中的制劑。將該制劑儲存于冰箱(4'C)中直至給藥。結(jié)果在下一個實驗中，給藥前4天，制備SBTI、EDTA和魚油的制劑，并將其直接給藥于9.0kg比格犬的十二指腸。如以下表2所述，對胰島素反應(yīng)血葡萄糖水平顯著下降。這些結(jié)果證實了實施例1的結(jié)果，表明含有co-3脂肪酸的組合物可保護胰島素在小腸中不被蛋白酶降解，并能夠使口服給藥的胰島素直接吸收。此外，這些結(jié)果表明本發(fā)明的組合物可在復(fù)制(constitution)后儲存而不喪失效力。表2實驗2中向十二指腸給藥胰島素后血葡萄糖濃度<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>實施例3口服給藥包含胰島素和co-3脂肪酸的丸劑片芯的制備使用本領(lǐng)域熟知的方法制備包含胰島素和①-3脂肪酸的片芯。例如，片芯可以如實施例1所述制備。包衣包衣劑可以是本領(lǐng)域已知的任何延時釋放的包衣劑。例如，包衣劑可以是包含以下成分的聚合物-4mgEudragitL-100(丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯聚合物)-4mgTalcNF-0.4mg聚乙二醇6000NF。在一個實施方案中，通過將聚合物溶于二氯甲烷+異丙醇混合物中來制備腸溶衣聚合物的溶液。在持續(xù)攪拌下，在微溫的廣口瓶中噴霧溶液將片劑包衣。不斷地吸入溶劑蒸汽。測量個體血漿中重組胰島素的水平和活性使用人胰島素放射性免疫測定(RIA)試劑盒(LincoResearchInc，St.Charles,Missouri)測量重組胰島素的水平。也測量了C肽水平以確定內(nèi)源性和外源性胰島素對觀察到的胰島素水平升高的相對貢獻。結(jié)果將EDTA、SBTI和溶于魚油中的胰島素制備為片芯或膠囊芯，包以腸溶衣或明膠包衣，并給藥于人個體。如之前實施例所述，定期測量個體血葡萄糖水平。此外，還測量個體血漿重組胰島素水平及其活性。顯示包衣丸劑將功能性胰島素遞送至個體，并且該胰島素顯著降低個體血葡萄糖水平，表明活性胰島素可以通過口服給藥遞送至血流中。測試了不同類型的可商購獲得的延時釋放包衣劑，以確定哪種包衣劑提供胰島素最好地遞送，并在之后的實施例中使用該包衣劑。實施例4w-3脂肪酸源的最優(yōu)化比較各種-3脂肪酸或co-3脂肪酸源(例如說明書中以上列出的那些)在本發(fā)明的方法和組合物中口服給藥后保護胰島素的能力。如以上實施例所述配制胰島素片劑或膠囊劑，只是將胰島素溶解于替代的Q)-3脂肪酸源而不是魚油中。在之后的實施例中使用最有效的co-3脂肪酸源。實施例5蛋白酶抑制劑的最優(yōu)化比較各種蛋白酶抑制劑(無毒或具有可接受的毒性特征；例如說明書中以上列出的那些蛋白酶抑制劑)在本發(fā)明的方法和組合物中口服給藥后保護胰島素的能力。如以上實施例所述配制胰島素片劑或膠囊劑，只是使用替代的蛋白酶抑制劑代替SBTI。還改變蛋白酶抑制劑的量以確定最適用量。在之后的實施例中使用最有效的蛋白酶抑制劑/量。實施例6增強劑的最優(yōu)化比較各種增強劑(例如說明書中以上列出的增強劑)在本發(fā)明的方法和組合物中口服給藥后促進胰島素吸收的能力。如以上實施例所述配制胰島素片劑或膠囊劑，只是使用替代的增強劑代替EDTA。還改變增強劑的量以確定最適用量。在之后的實施例中使用最有效的增強劑/量。實施例7胰島素類型和量的最優(yōu)化比較各種類型和量的胰島素(例如說明書中以上列出的胰島素)在本發(fā)明的方法和組合物中調(diào)節(jié)血糖的能力。如以上實施例所述配制胰島素片劑或膠囊劑，只是改變胰島素的類型和量。在臨床實驗中使用最有效的類型/量的胰島素。2權(quán)利要求1.一種組合物，其包含分子量至多100000道爾頓的蛋白質(zhì)和ω-3脂肪酸。2.權(quán)利要求l的組合物，其中所述蛋白質(zhì)是胰島素。3.權(quán)利要求l的組合物，其中所述Q)-3脂肪酸源于魚油。4.權(quán)利要求l的組合物，其進一步包含蛋白酶抑制劑。5.權(quán)利要求4的組合物，其中所述抑制劑是大豆胰蛋白酶抑制劑(SBTI)。6.權(quán)利要求4的組合物，其中所述抑制劑是AEBSF-HC1;(s)-氨基己酸；(a)l-抗胰凝乳蛋白酶；抗蛋白酶；抗凝血酶III;(a)1-抗胰蛋白酶([a]1-蛋白酶抑制劑)；APMSF-HC1(4-脒基苯基-甲磺酰氟)；sprotinin;苯甲脒-HCl;胰凝乳蛋白酶抑制劑；DFP(氟磷酸二異丙酯)；亮抑蛋白酶肽；PEFABLOCSC(4-(2-氮基乙基)-苯磺酰氟鹽酸鹽)；PMSF(苯基甲磺酰氟)；TLCK(l-氯-3-甲苯磺酰氨基-7-氨基-2-庚酮HC1);TPCK(l-氯-3-甲苯磺酰氨基-4-苯基-2-丁酮)；來自卵清的胰蛋白酶抑制劑(卵類粘蛋白)；來自大豆的胰蛋白酶抑制劑；抑酶肽；羥乙磺酸噴他脒；胃蛋白酶抑制劑；胍鐵；a2-巨球蛋白；鋅螯合劑；碘乙酸鹽；或鋅。7.權(quán)利要求4的組合物，其中所述蛋白酶是絲氨酸蛋白酶。8.權(quán)利要求4的組合物，其中所述蛋白酶是胰蛋白酶。9.權(quán)利要求l的組合物，其進一步包含增強所述胰島素蛋白質(zhì)通過腸道粘膜屏障吸收的物質(zhì)。10.權(quán)利要求9的組合物，其中所述物質(zhì)是EDTA。11.權(quán)利要求9的組合物，其中所述物質(zhì)是膽汁酸或其堿金屬鹽。12.權(quán)利要求ll的組合物，其中所述膽汁酸是膽酸、鵝脫氧膽酸、?；悄懰帷⑴；蛆Z脫氧膽酸、甘氨膽酸、甘氨鵝膽酸、3|3-—羥基膽酸、石膽酸、3a-羥基-12-酮膽酸、3P-羥基-12-酮膽酸、12a-3p-二氫膽酸或熊脫氧膽13.權(quán)利要求1的組合物，其進一步包含抑制所述組合物在個體的胃中消化的包衣劑。14.權(quán)利要求13的組合物，其中所述包衣劑是腸溶衣或明膠包衣劑。15.用于將分子量至多100000道爾頓的蛋白質(zhì)口服給藥于個體的方法，從而所述蛋白質(zhì)的大部分在通過所述個體的腸道粘膜屏障吸收后仍保持其活性，所述方法包括向所述個體口服給藥包含所述蛋白質(zhì)和co-3脂肪酸的藥物組合物。16.權(quán)利要求15的方法，其中所述蛋白質(zhì)是酶。17.權(quán)利要求15的方法，其中所述蛋白質(zhì)是胰島素。18.權(quán)利要求15的方法，其中所述蛋白質(zhì)是胰高血糖素、干擾素Y、干擾素cu生長激素、促紅細胞生成素或粒細胞集落刺激因子(G-CSF)。19.權(quán)利要求15的方法，其中所述蛋白質(zhì)的分子量為l-50千道爾頓。20.權(quán)利要求15的方法，其中所述蛋白質(zhì)是受體配體、轉(zhuǎn)運蛋白、貯存蛋白或它們的組合。21.權(quán)利要求15的方法，其中所述組合物進一步包含源于魚油的co-3脂肪酸。22.權(quán)利要求15的方法，其中所述藥物組合物進一步包含蛋白酶抑制劑。23.權(quán)利要求22的方法，其中所述抑制劑是大豆胰蛋白酶抑制劑(SBTI)。24.權(quán)利要求22的方法，其中所述抑制劑是AEBSF-HC1;(s)-氨基己酸；(a)l-抗胰凝乳蛋白酶；抗蛋白酶；抗凝血酶III;(a)l-抗胰蛋白酶([a]1-蛋白酶抑制劑)；APMSF-HC1(4-脒基苯基-甲磺酰氟)；sprotinin;苯甲脒-HCl;胰凝乳蛋白酶抑制劑；DFP(氟磷酸二異丙酯)；亮抑蛋白酶肽；PEFABLOCSC(4-(2-氨基乙基)-苯磺酰氟鹽酸鹽)；PMSF(苯基甲磺酰氟)；TLCK(l-氯-3-甲苯磺酰氨基-7-氨基-2-庚酮《0);TPCK(l-氯-3-甲苯磺酰氨基-4-苯基-2-丁酮)；來自卵清的胰蛋白酶抑制劑(卵類粘蛋白)；來自大豆的胰蛋白酶抑制劑；抑酶肽；羥乙磺酸噴他脒；胃蛋白酶抑制劑；胍鐵；a2-巨球蛋白；鋅螯合劑；碘乙酸鹽；或鋅。25.權(quán)利要求22的方法，其中所述蛋白酶是絲氨酸蛋白酶。26.權(quán)利要求22的方法，其中所述蛋白酶是胰蛋白酶。27.權(quán)利要求15的方法，其中所述藥物組合物進一步包含增強所述蛋白質(zhì)通過腸道粘膜屏障吸收的物質(zhì)。28.權(quán)利要求27的方法，其中所述物質(zhì)是EDTA。29.權(quán)利要求27的方法，其中所述物質(zhì)是膽汁酸或其堿金屬鹽。30.權(quán)利要求29的方法，其中所述膽汁酸是膽酸、鵝脫氧膽酸、?；悄懰?、?；蛆Z脫氧膽酸、甘氨膽酸、甘氨鵝膽酸、3卩-一羥基膽酸、石膽酸、3a-羥基-12-酮膽酸、3p-羥基-12-酮膽酸、12a-3p-二氫膽酸或熊脫氧膽酸。31.權(quán)利要求15的方法，其中所述藥物組合物進一步包含抑制所述組合物在個體的胃中消化的包衣劑。32.權(quán)利要求31的方法，其中所述包衣劑是腸溶衣或明膠包衣劑。33.用于治療個體中的糖尿病的方法，其包括向所述個體口服給藥包含胰島素和co-3脂肪酸的藥物組合物，從而治療糖尿病。34.權(quán)利要求33的方法，其中所述組合物進一步包含源于魚油的co-3脂肪酸。35.權(quán)利要求33的方法，其中所述藥物組合物進一步包含蛋白酶抑制劑。36.權(quán)利要求35的方法，其中所述抑制劑是大豆胰蛋白酶抑制劑(SBTI)。37.權(quán)利要求35的方法，其中所述抑制劑是AEBSF-HC1;(e)-氨基己酸；((X)l-抗胰凝乳蛋白酶；抗蛋白酶；抗凝血酶III;((X)l-抗胰蛋白酶([(X]1-蛋白酶抑制劑)；APMSF-HC1(4-脒基苯基-甲磺酰氟)；sprotinin;苯甲脒-HCl;胰凝乳蛋白酶抑制劑；DFP(氟磷酸二異丙酯)；亮抑蛋白酶肽；PEFABLOCSC(4-(2-氨基乙基)-苯磺酰氟鹽酸鹽)；PMSF(苯基甲磺酰氟)；TLCK(l-氯-3-甲苯磺酰氨基-7-氨基-2-庚酮HC1);TPCK(l-氯-3-甲苯磺酰氨基-4-苯基-2-丁酮)；來自卵清的胰蛋白酶抑制劑(卵類粘蛋白)；來自大豆的胰蛋白酶抑制劑；抑酶肽；羥乙磺酸噴他脒；胃蛋白酶抑制劑；胍鎿；ct2-巨球蛋白；鋅螯合劑；碘乙酸鹽；或鋅。38.權(quán)利要求35的方法，其中所述蛋白酶是絲氨酸蛋白酶。39.權(quán)利要求35的方法，其中所述蛋白酶是胰蛋白酶。40.權(quán)利要求33的方法，其中所述藥物組合物進一步包含增強所述胰島素蛋白質(zhì)通過腸道粘膜屏障吸收的物質(zhì)。41.權(quán)利要求40的方法，其中所述物質(zhì)是EDTA。42.權(quán)利要求40的方法，其中所述物質(zhì)是膽汁酸或其堿金屬鹽。43.權(quán)利要求42的方法，其中所述膽汁酸是膽酸、鵝脫氧膽酸、?；悄懰?、?；蛆Z脫氧膽酸、甘氨膽酸、甘氨鵝膽酸、3卩-一羥基膽酸、石膽酸、3a-羥基-12-酮膽酸、3P-羥基-12-酮膽酸、12a-3p-二氫膽酸或熊脫氧膽酸。44.權(quán)利要求33的方法，其中所述藥物組合物進一步包含抑制所述組合物在個體的胃中消化的包衣劑。45.權(quán)利要求41的方法，其中所述包衣劑是腸溶衣或明膠包衣劑。全文摘要本發(fā)明提供包含蛋白質(zhì)和ω-3脂肪酸的組合物以及用于治療糖尿病的方法，其包括給藥所述組合物，本發(fā)明還提供用于口服給藥具有酶活性的蛋白質(zhì)的方法，其包括口服給藥所述具有酶活性的蛋白質(zhì)。文檔編號A61K38/00GK101547702SQ200680041231公開日2009年9月30日申請日期2006年8月31日優(yōu)先權(quán)日2005年9月6日發(fā)明者M·基德隆申請人:奧拉姆德醫(yī)藥公司