專利名稱：：經(jīng)由Mitsunobu反應(yīng)制備VLA-4拮抗劑的聚乙二醇化共軛物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及制備治療用、農(nóng)業(yè)用和食品添加劑化合物的聚合共軛物的方法。更具體來說，本發(fā)明涉及采用Mitsimobu反應(yīng)條件來制備用于治療各種哺乳動(dòng)物、尤其是人類的疾病和功能紊亂以及用于農(nóng)業(yè)和用作食品添加劑的共軛物的方法。在某些方面，本發(fā)明涉及使用Mitsunobu條件與醇(尤其是含醇聚合物)以及胺一起形成所需的共軛物。
背景技術(shù)：
：生物學(xué)活性化合物與聚合物的結(jié)合已經(jīng)受到了極大地關(guān)注，并已經(jīng)成為了控制多種特性的通用方法，例如，這些化合物的生物分布、藥代動(dòng)力學(xué)、和毒性。經(jīng)常選擇用于制備生物學(xué)活性化合物的聚合共軛物的聚合物是聚乙二醇(PEG)。小和大的生物學(xué)活性分子都廣泛地用作共價(jià)修飾劑。對(duì)于這些共軛物的討論，參見Eur.Polym.J.i^，No.12:第1177-1183頁(Zaplinsky等人，1983)等，JournalofControlledRelease10(1989)145-154(Veronese等人，1989)，和AdvancedDrugDeliveryReviews,157-182(Zaplinsky,1995)。近來已經(jīng)發(fā)現(xiàn)例如(VLA-4)拮抗劑的聚合共軛物已經(jīng)極大地提高了血清半衰期。這些聚合化合物可使用多種合成方法來制備，包括通過將活性分子的酯與聚合物胺反應(yīng)形成羧酰胺、活性分子的胺與聚合物氯甲酸酯之間形成氨基甲酸酯、或活性分子的異氰酸酯與聚合物醇之間形成氨基甲酸酯。這些方法的總產(chǎn)率一般不能滿足需要，經(jīng)常涉及多個(gè)步驟和純化手段。因此需要設(shè)計(jì)一種方法，該方法能以定量或接近定量的產(chǎn)率分離VLA-4抑制劑的共軛物。這些聚合共軛物的重要性表明需要方便和有效地合成這些物質(zhì)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了農(nóng)業(yè)用、治療用和食品添加劑化合物的聚合共軛物13的改進(jìn)合成方法。本發(fā)明的方法以優(yōu)異的產(chǎn)率產(chǎn)生最終的共軛產(chǎn)物。在一個(gè)優(yōu)選的方面，本發(fā)明提供了通過使用Mitsunobu反應(yīng)條件縮合聚合醇與胺而制備共軛物的方法。在另一個(gè)優(yōu)選的方面，本發(fā)明提供了通過使用Mitsimobu反應(yīng)條件縮合聚合胺與醇而制備共軛物的方法。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種用于制備活性化合物的共軛物的方法，該方法包括a)將聚合醇與親核試劑在三價(jià)膦和合適的偶氮二甲酰化合物，例如偶氮二羧酸二乙酯或偶氮二甲酰二哌啶的存在下反應(yīng)形成共軛物；和b)分離該共軛物。在一個(gè)具體的方面，活性化合物和生成的共軛物顯示VLA-4拮抗劑特性。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于制備下面式I的共軛物的方法B是生物相容性聚合物部分；q為從大約1至大約100;在每種情況下A都獨(dú)立地是具有生物學(xué)或農(nóng)業(yè)活性的化合物或A是食品添加劑化合物。該方法包括a)將式Ia的聚合醇CS>~0H|a在三價(jià)膦和適當(dāng)取代的偶氮二甲?；衔锏拇嬖谙?，與式H-Nu的親核試劑反應(yīng)以形成式I的化合物，其中Nu是對(duì)應(yīng)于上述式A的基團(tuán)，且H是Nu上的酸性氫；和b)分離式I的化合物。具體實(shí)施例方式如上所述，本發(fā)明提供了用于制備農(nóng)業(yè)用、治療用和食品添加劑化合物(以后稱為"活性化合物")的共軛物的方法。該共軛物包括與一個(gè)或多個(gè)活性化合物共價(jià)連接的一個(gè)或多個(gè)聚合物部分，其中生成的共軛物與該活性化合物具有相同類型的活性。在一個(gè)方面，該活性化合物和生成的共軛物是能抑制白細(xì)胞粘附、尤其是至少部分由0U整合素所介導(dǎo)的白細(xì)胞粘附的化合物。在一個(gè)優(yōu)選的方面，式I的共軛物中的A基團(tuán)可由式II代表其中R31是與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分連接的共價(jià)鍵，或者R3'是-H、R3I'、-NH2、-NHR31^-N(R31')2、-NC3-C6環(huán)基、-OR31'、-SR31'，其中每個(gè)W獨(dú)立地是任選取代的直鏈或支鏈的C,-C6烷基、任選取代的C3-C6環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基，且R32是與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分連接的共價(jià)鍵，或者R"是-H、-N02、鹵代烷基或基團(tuán)-N(MR")R42，其中M是共價(jià)鍵、-C(0)-或-S02-，R"是R"'、N(R"')2或-OR"'，其中每個(gè)R"'獨(dú)立地是氫、任選取代的直鏈或支鏈的C,-C6烷基、任選取代的環(huán)垸基、任選取代的芳基、任選取代的雜環(huán)或任選取代的雜芳基，其中任選的取代基是鹵化物、C,-C6烷基、或-OC,-C6烷基，且R^是氫或R"';和b)式(b)的基團(tuán)其中J選自:a)式(a)的基團(tuán):其中R選自與聚合物部分連接的共價(jià)鍵、氨基、取代的氮基、烷基和取代的烷基，其中每個(gè)氨基、取代的氨基、烷基和取代的烷基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中，在每種情況下，聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)與聚合物部分共價(jià)連接；A—選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與Ar'共價(jià)連接；A一選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中所述聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與A一共價(jià)連接；X選自-NR1-、-O-、-S-、-SO-、-S02和任選取代的-CH2-，其中R'選自氫和垸基；T選自；a)式(c)的基團(tuán)o義其中Y選自-0-和-NR1-，其中R'選自氫和烷基；W選自與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分連接的共價(jià)鍵、和-NR2R3，其中Fe和R獨(dú)立地選自氫、烷基、取代的烷基、以及其中W和RS與其結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)，其中每個(gè)垸基、取代的烷基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)任選地與聚合物部分共價(jià)結(jié)合，所述聚合物部分進(jìn)一步任選地包括連接基團(tuán)；m是等于0、l或2的整數(shù)；n是等于0、l或2的整數(shù)；和b)式(d)的基團(tuán)其中G是任選取代的芳基或任選取代的含有0至3個(gè)氮的雜芳基5或6元環(huán)，其中所述的芳基或雜芳基任選地進(jìn)一步包括與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分連接的共價(jià)鍵；W是與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分連接的共價(jià)鍵，或者R6是-H;R"選自垸氧基、取代的垸氧基、環(huán)烷氧基、取代的環(huán)垸氧基、芳氧基和取代的芳氧基、和-OH;A.J、Ar1、A一和T的至少一個(gè)含有與聚合物部分連接的共價(jià)鍵；B.當(dāng)J與聚合物部分共價(jià)連接時(shí)，n是1且X不是-O-、-S-、-SO-或-SOr;禾口C.當(dāng)X是-O時(shí)，則m是2。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，僅J、Ar1、A一和T中的一個(gè)含有與聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵。在共軛反應(yīng)中使用的化合物H-Nu是含有與Nu共價(jià)連接的酸性氫的化合物。式H-Nu的優(yōu)選化合物可以由式II.l代表?xiàng)l件是:其中J和Ar2的定義與式II的定義相同;T是帶有酸性氫的基團(tuán)；且17R"是酸性保護(hù)基團(tuán)。合適的T基團(tuán)包括雜環(huán)基團(tuán)、酰亞胺、苯酚、磷酸單酯和-羧酸、異羥肟酸酯、硫醇、硫代酰胺、(3-酮酯和1,3-二酮。優(yōu)選的T基團(tuán)是式(c)的基團(tuán)o十,、W(C)其中Y選自-O-和-NR'-，其中R'選自氫和烷基；W是含有酸性氫的基團(tuán)，氫優(yōu)選在鄰近羰基的氮原子上，其中W基團(tuán)任選地與Y(CO)通過連接基團(tuán)連接。另一個(gè)優(yōu)選的T基團(tuán)是式(d)的基團(tuán)Vnyn、r6丫o(d)其中G是任選取代的芳基或任選取代的含有0至3個(gè)氮的雜芳基5或6元環(huán)；且R6是氫。應(yīng)該理解的是，q的數(shù)值是根據(jù)聚合物部分的數(shù)目與A-部分的數(shù)目的比例計(jì)算而來的。換句話說，當(dāng)q是1.5時(shí)，則預(yù)計(jì)是例如下式I':優(yōu)選的由本發(fā)明制備的式I的共軛物包括下式Ia的那些化合il3和其藥學(xué)上可接受的鹽類，其中B是任選地與載體共價(jià)結(jié)合的聚合物部分；q為從大約1至大約100;在每種情況下A都獨(dú)立地是式IIa的化合物、及其藥學(xué)上可接受的鹽;(R)nIIa其沖R選自與聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵、氨基、取代的氨基、烷基和取代的烷基，其中每個(gè)氨基、取代的氨基、烷基和取代的烷基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中，在每種情況下，聚合物部分任選地包括與聚合物部分共價(jià)連接的連接基團(tuán)；Ar'選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與Ar"共價(jià)連接；A一選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中所述聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與A—共價(jià)連接；X選自-NR1-、-O-、-S-、-SO-、-S02和任選取代的-CH2-，其中W選自氫禾口烷基；Y選自-0-和-NR1-，其中R'選自氫和垸基；W選自與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分連接的共價(jià)鍵、和-NR2113，其中W和R獨(dú)立地選自氫、烷基、取代的烷基、以及其中W和R3與其結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)，其中每個(gè)烷基、取代的烷基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)任選地與聚合物部分共價(jià)結(jié)合，所述聚合物部分進(jìn)一步任選地包括連接基團(tuán)；m是等于0、l或2的整數(shù)；n是等于0、l或2的整數(shù)；19條件是A.R、Ar1、Ar2、W和-NR2113的至少一個(gè)含有與聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵；B.當(dāng)R與聚合物部分共價(jià)連接時(shí)，n是1且X不是-O-、-S-、-SO-或-S02-;C.當(dāng)X是-0-或-NR'-時(shí)，則m是2;和D.式Ia的共軛物的分子量不超過100,000。優(yōu)選的由本發(fā)明制備的式I的共軛物包括下面式Ib的那些化合物:^)一(A)qlb其中每個(gè)A獨(dú)立地是下面式IIb的化合物Ar1、Slib且其中q為大約1至大約100;B是任選地與載體共價(jià)結(jié)合的聚合物部分；Ar'選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中PEG部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將PEG部分與Ar'共價(jià)連接；A一選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中所述聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與A一共價(jià)連接；Y選自-O-和-NR'-，其中R'選自氫和烷基；W選自與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分連接的共價(jià)鍵、和-NR2R3，其中112和RS獨(dú)立地選自氫、烷基、取代的烷基、以及其中F^和Fe與其結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán),其中每個(gè)烷基、取代的垸基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)任選地與聚合物部分共價(jià)結(jié)合，所述聚合物部分進(jìn)一步任選地包括連接基團(tuán)；條件是Ar1、Ar2、W和-NR2113的至少一個(gè)與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分共價(jià)結(jié)合；且進(jìn)一步的條件是式Ib的共軛物的分子量不超過100,000。優(yōu)選的由本發(fā)明的方法制備的式I的共軛物包括下面式Ic的那些化合物(^^)一(A)qIc其中每個(gè)A獨(dú)立地是下面式lie的化合物、及其藥學(xué)上可接受的鹽類An、'nc(R)n且其中q為大約l至大約100;B是任選地與載體共價(jià)結(jié)合的聚合物部分；R選自與聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵、氨基、取代的氨基、烷基和取代的垸基，其中每個(gè)氨基、取代的氨基、垸基和取代的垸基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中，在每種情況下，聚合物部分任選地包括與聚合物部分共價(jià)連接的連接基團(tuán)；Ar'選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與Ar'共價(jià)連接；A一選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中所述聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與A一共價(jià)連接；Y選自-0-和-NR1-，其中R'選自氫和垸基；W選自與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分連接的共價(jià)鍵、以及-NR2R3，其中W和R與其結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)，其中每個(gè)垸基、取代的垸基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)任選地與聚合物部分共價(jià)結(jié)合，所述聚合物部分進(jìn)一步任選地包括連接基團(tuán)；n是等于0、l或2的整數(shù)；條件是R、Ar1、Ar2、W和-NR2113的至少一個(gè)與聚合物部分共價(jià)結(jié)合，該聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)；且進(jìn)一步的條件是式Ic的共軛物的分子量不超過100,000。優(yōu)選的式I的共軛物包括下面式Id的那些化合物。其中每個(gè)A獨(dú)立地是下面式lid化合物、及其藥學(xué)上可接受的鹽且其中q為大約l至大約100;B是任選地與載體共價(jià)結(jié)合的聚合物部分；R選自與聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵、氨基、取代的氨基、烷基和取代的烷基，其中每個(gè)氨基、取代的氨基、垸基和取代的垸基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中，在每種情況下，聚合物部分任選地包括與聚合物部分共價(jià)連接的連接基團(tuán)；A一選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與Ar'共價(jià)連接；A一選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中所述聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與A一共價(jià)連接；!^和RS獨(dú)立地選自氫、烷基、取代的垸基、以及其中W和W與其結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)，其中每個(gè)烷基、取代的烷基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)任選地與聚合物部分共價(jià)結(jié)合，所述聚合物部分進(jìn)一步任選地包括連接基團(tuán)；n是等于0、l或2的整數(shù)；條件是R、Ar1、Ar2、和-NR2113的至少一個(gè)與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物共價(jià)結(jié)合；且進(jìn)一步的條件是式Id的共軛物的分子量不超過100,000。優(yōu)選的式I的共軛物包括下面式Ie的那些化合物其中每個(gè)A獨(dú)立地是下面式IIe的化合物、及其藥學(xué)上可接受的鹽且其中q為大約l至大約100;B是任選地與載體共價(jià)結(jié)合的聚合物部分；Ar'選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中所述聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與Al^共價(jià)連接；A一選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中所述聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與Al^共價(jià)連接；Fe和R獨(dú)立地選自氫、垸基、取代的烷基、以及其中112和尺3與其結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)，其中每個(gè)烷基、取代的垸基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)任選地與聚合物部分共價(jià)結(jié)合，所述聚合物部分進(jìn)一步任選地包括連接基團(tuán)；條件是Ar1、A和-NWl^的至少一個(gè)與聚合物部分共價(jià)結(jié)合，該聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)；且進(jìn)一步的條件是式Ie的共軛物的分子量不超過100,000。優(yōu)選的式I共軛物包括下面式If的那些化合物其中每個(gè)A獨(dú)立地是下面式IIf的化合物、及其藥學(xué)上可接受的鹽類:(R5)n且其中q為大約1至大約100;B是任選地與載體共價(jià)結(jié)合的聚合物部分；114與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分共價(jià)連接；RS選自烷基和取代的烷基；Al^選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基；X選自-NR1-、-O-、-S-、-SO-、-S02和任選取代的-CH2-，其中R選自氫和烷基；m是等于0、l或2的整數(shù)；n是等于0、l或2的整數(shù)；條件是A.當(dāng)R與聚合物部分共價(jià)連接時(shí)，n是1且X不是-O-、-S-、-SO-B.當(dāng)X是-O-或-NR'-時(shí)，則m是2;和C.式If的共軛物的分子量不超過100,000。優(yōu)選的式I的共軛物包括下面式Ig的那些化合物:其中每個(gè)A獨(dú)立地是下面式IIg的化合物、及其藥學(xué)上可接受的和其中q為大約1至大約100;B是任選地與載體共價(jià)結(jié)合的聚合物部分；R4與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分共價(jià)連接；RS選自垸基和取代的垸基；A一選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基;n是等于0、1或2的整數(shù)；條件是式Ig的共軛物的分子量不超過100,000。優(yōu)選的式I的共軛物包括下面式Ih的那些化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>或-SO:其中每個(gè)A獨(dú)立地是下面式IIh化合物、及其藥學(xué)上可接受的鹽類且其中q為大約l至大約100;W與聚合物部分共價(jià)連接，該聚合物部分任選地包括連接基團(tuán);A一選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基；條件是式Ih的共軛物的分子量不超過100,000。優(yōu)選的式I的共軛物包括下面式Ii的那些化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，且條件是式Ii的共軛物的分子量不超過100,000。優(yōu)選地，當(dāng)Ar'不與聚合物部分結(jié)合時(shí)，式IIa-IIe中的A—和式IIf-IIh中的Ar3選自苯基，4-甲基苯基，4-叔丁基苯基，其中每個(gè)a獨(dú)立地是下面式m化合2,4,6-三甲基苯基，2-氟苯基，3-氟苯基，4-氟苯基，2,4-二氟苯基，3，4-二氟苯基，3，5-二氟苯基，2-氯苯基，3-氯苯基，4-氯苯基，3,4-二氯苯基，3，5-二氯苯基，3-氯-4-氟苯基，4-溴苯基，2-甲氧基苯基，3-甲氧基苯基，4-甲氧基苯基，3,4-二甲氧基苯基，4-叔丁氧基苯基，4-(3'-二甲基氨基-正丙氧基)-苯基，2-羧基苯基，2-(甲氧基羰基)苯基，4陽(H2NC(0)-)苯基，4-(H2NC(S)-)苯基，4-氰基苯基，4-三氟甲基苯基，4-三氟甲氧基苯基，3，5-二-(三氟甲基)苯基，4-硝基苯基，4-氨基苯基，4-(CH3C(0)NH-)苯基，274-(苯基NHC(O)NH-)苯基，4-脒基苯基，4-甲基脒基苯基，4-[CH3SQ^NH)-]苯基，4陽氯-3-[H2NS(0)2-]苯基，1-萘基，2-萘基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，嘧啶-2-基，喹啉-8-基，2-(三氟乙?；?-l，2，3,4-四氫異喹啉-7-基，2-噻吩基，5-氯-2-噻吩基，2,5-二氯-4-噻吩基，l-N-甲基咪唑—4-基，1—N—甲基吡唑_3_基，1_N—甲基吡唑-4-基，l一N-丁基吡唑-4-基，1-N-甲基-3-甲基-5-氯吡唑-4-基，1_N_甲基-5-甲基-3-氯吡唑-4-基，2-噻唑基和5-甲基-l,3，4-噻二唑-2-基。優(yōu)選地，當(dāng)A是式IIa、IIb、IIc、IId和IIe，且A一與聚合物部分結(jié)合時(shí)，則Ar'具有下式-Ar'-ZKCHsCHR^pR8射Ar'選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，Z選自共價(jià)鍵、從1至40個(gè)原子的連接基團(tuán)、-0-和-NR9-，其中W選自氫和烷基，R"選自氫和甲基；RS選自A、-(LXv-聚合物載體、氫、垸基、取代的烷基、芳基、取代的芳基和-CH2CH^NR、11，其中W如上所定義，R'g和R"獨(dú)立地選自氫和烷基，A由上面的式IIa至IIh的任意一個(gè)所表示，L是l至40個(gè)原子的連接基團(tuán)，且w是O或l;且p是從大約100至2200的整數(shù)，優(yōu)選大約200-1360。當(dāng)A是式IIa或IIf，且R不與聚合物部分結(jié)合時(shí)，具有下式的取代基其中R5、X、m和n如上所定義，優(yōu)選地選自氮雜環(huán)丁烷基、噻唑烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉代、硫代嗎啉基、批咯烷基、4-羥基吡咯垸基、4-氧代吡咯烷基、4-氟代吡咯垸基、4,4-二氟代吡咯烷基、4-(硫代嗎啉-4—基C(O)O-)吡咯烷基、4-[CH3S(0)20-]吡咯垸基、3-苯基吡咯垸基、3-硫代苯基吡咯垸基、4-氨基-吡咯烷基、3-甲氧基吡咯烷基、4,4-二甲基吡咯烷基、4-N-Cbz-哌嗪基、4-[CH3S(0)2-]哌嗪基、5,5-二甲基噻唑垸_4_基、l，l-二氧代-噻唑垸基、1，1-二氧代-5,5-二甲基噻唑垸-2-基和1,1-二氧硫代嗎啉基。優(yōu)選地，當(dāng)A是式IIa，且下式的取代基與PEG部分結(jié)合時(shí)，則優(yōu)選取代基是下式:Z-(CH2CHR70)PR8m是等于0、l或2的整數(shù)；Z選自共價(jià)鍵、1至40個(gè)原子的連接基團(tuán)、-0-和-NR9-，其中R9選自氫和垸基，R"選自氫和甲基；rs選自A、-(LXv-聚合物載體、氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基和-CH2CHR7nrWr11，其中R"如上所定義，R'G和rh獨(dú)立地選自氫和垸基，A由上面的式IIa至IIh的任意一個(gè)所表示，L是l至40個(gè)原子的連接基團(tuán)，且w是0或l;且p是從大約100至2200的整數(shù)，優(yōu)選大約200-1360。當(dāng)A是式IIa、IIb、IIc、IId、IIe，且Ar2不與聚合物部分結(jié)合時(shí)，則優(yōu)選A一選自苯基、取代的苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和4-吡啶-2-酮基。當(dāng)A是式IIa、IIb、IIc、IId、IIe，且當(dāng)A一與聚合物部分結(jié)合時(shí)，則ArM尤選由下式所示I~Ar2~f"'I'Z-(CH2CHR70)pR8其中A一選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基；Z選自共價(jià)鍵、1至40個(gè)原子的連接基團(tuán)、-0-和-NR9-，其中R9選自氫和烷基，W選自氫和甲基；rs選自A、-(LXv-聚合物載體、氫、垸基、取代的垸基、芳基、取代的芳基和-CH2CHE7nrWR11，其中W如上所定義，r"和r"獨(dú)立地選自氫和烷基，A由上面的式IIa至IIh的任意一個(gè)所表示，L是l至40個(gè)原子的連接基團(tuán)，且w是0或l;且p是從大約100至2200的整數(shù)，優(yōu)選大約200-1360。在由本發(fā)明的方法制備的共軛物的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，-YC(O)W是-OC(0)NR2r3。當(dāng)a是式IIa、IIb或IIc，-丫0;0)\￥是-0(:(0^112113，且r2和r3都不與聚合物部分結(jié)合時(shí)，則優(yōu)選-OC(0)NR2113選自:CH3)2NC(0)0-，:哌啶-i-基)-c(o)o-，:哌啶-4-基)-C(0)0-,:1-甲基哌啶-4-基)-C(O)O-，:4-羥基哌啶-1-基)-C(O)O-，:4-甲酰氧基哌啶-1-基)-C(O)O-，:4-乙氧基羰基哌啶-1-基)-C(O)O-，:4-羧基哌啶-l-基)-C(0)0-，:3-羥基甲基哌啶-1-基)-C(O)O-，:4-羥基甲基哌啶-l-基)-C(O)O-，:4-苯基-l-Boc-哌啶-4-基)-C(0)0-，:4-哌啶酮-1-基乙二醇縮酮)-C(O)O-，:哌嗪-4-基)-C(0)0-，:1-800哌嗪-4-基)-C(O)O-，:4-甲基哌嗪-l-基)-C(0)0-，:4-甲基高哌嗪-1-基)-C(O)O-，:4-(2-羥基乙基)哌嗪-1-基)-C(O)O-，:4-苯基哌嗪-l-基)-C(0)0，:4-(吡啶-2-基)哌嗉-l]-基)-C(0)0-，:4-(4-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-l-基)-C(0)0-,:4-(嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-C(O)O-，:4-乙酰基哌嗪-1-基)-C(O)O-，:4-(苯基-<:(0)-)哌嗪-1-基)-c(o)o-，:4-(吡啶-4'-基-C(0)-)哌嗪-l-基)-C(0)0-，:4-(苯基-^^(0)-)哌嗪-1-基)-C(O)O-，:4-(苯基-NHC(S)-)哌嗪-l-基)-C(0)0-，:4-甲磺?；哙?1-基)-C(O)O-，:4-三氟甲磺?；哙?1-基)-C(O)O-，:嗎啉-4-基)-C(0)0-，:硫代嗎啉-4-基)-C(0)0-，硫代嗎啉—4'-基砜)-C(0)0-，(吡咯垸-l-基)-C(O)O-，(2-甲基吡咯烷-1-基)-C(O)O-，(2-(甲氧基羰基)吡咯烷-1-基)-C(O)O-，(2-(羥基甲基)吡咯垸-1-基)-C(O)O-,(2-(N,N-二甲基氨基)乙基)(CH3)NC(0)0-，(2-(N-甲基-N-甲苯-4-磺?；被?乙基)(CH3)N-C(0)0-，(2-(嗎啉-4-基)乙基)(CH3)NC(0)0-，(2-(羥基)乙基)(CH3)NC(0)0-，雙(2-(羥基)乙基)NC(0)0-，(2-(甲酰氧基)乙基)(CH3)NC(0)0，(CH3OC(0)CH2)HNC(0)0-，和2-(苯基NHC(O)O-)乙基-]HNC(O)O-。當(dāng)A是式IIa、IIb或IIc，-YC(O)W是-OC(0)NR2R3，且R2和/或R3與PEG部分結(jié)合時(shí)，則PEG部分優(yōu)選由下式表示Z'選自共價(jià)鍵和1至40個(gè)原子的連接基團(tuán)；117選自氫和甲基；RS選自A、-(LXv-聚合物載體、氫、烷基、取代的垸基、芳基、取代的芳基和-CH2CHI^NR,11，其中W如上所定義，R^和R"獨(dú)立地選自氫和垸基，A由上面的式II所表示，L是1至40個(gè)原子的連接基團(tuán)，且w是0或1;且p是從大約100至2200的整數(shù)。優(yōu)選式II.l中的T基團(tuán)具有下面的式(d)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>其中W是氫。優(yōu)選(d)基團(tuán)包括下面表D中所示的那些基團(tuán)。表D<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>其中R"是與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵，或R"是氫或直鏈或支鏈的C,-CV烷基；R"是與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵，或R"是氫、鹵素或直鏈或支鏈的C,-C6垸氧基；且R88是氫。用于本發(fā)明中的其他(d)基團(tuán)包括表Dl中所示的那些基團(tuán)。用于本發(fā)明的方法中的其它優(yōu)選的式IU化合物具有式IU-a:II.l-a和其藥學(xué)上可接受的鹽類，其中R"是酸保護(hù)基團(tuán)，優(yōu)選CrC6烷氧基，更優(yōu)選CVC4烷氧基；Ar'選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、環(huán)垸基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、雜芳基和取代的雜芳基；且R6是氫。式ll.l-a的優(yōu)選化合物包括下面的那些化合物其中Ar1是苯基或具有至少一個(gè)氮原子的5-或6-元雜芳基，每個(gè)都任選地用鹵素、羥基、C廣Qi烷氧基、C廣C6烷基、硝基、三氟甲基、氨基、單或二(C廣C6)烷基氨基、氨基(Q-C6)烷基、C2-C6酰基、CVC6?；被?、或氨基(C廣C6)酰基取代。Ar'是任選地用鹵素、羥基、C,-CV烷基、C,-C6烷氧基，硝基、三氟甲基、氨基、單或二(C,-C6)烷基氨基、氨基(C,-C6)烷基、c2-c6?；VC6?；被?、或氨基(C,-QO?；〈倪拎せＪ絣l.l-a的特別優(yōu)選的化合物包括下面的那些化合物其中Ar'是任選地用C,-C6烷基、鹵素、羥基、C,-C6垸氧基，硝基、三氟甲基、氨基、或單或二(C,-C6)烷基氨基取代的吡啶基。式11.1的其他優(yōu)選的化合物也是式11.2-a的那些化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽類，其中R"是酸保護(hù)基團(tuán)，優(yōu)選C,-CV烷氧基，更優(yōu)選C2-C4垸氧基；R6是氫。式11.2-a的優(yōu)選化合物包括下列的那些化合物其中R31是氨基或單或二(C,-C6)烷基氨基；且R"是-H、->^02或鹵代垸基，更優(yōu)選三氟甲基甲基。式11.2-a的其他優(yōu)選的化合物是下面的那些化合物，其中R"是氨基或單或二(C,-C6)烷基氨基；且R32是-N(MR")R42;其中M是-S02-或-CO-;R41是任選地用下列基團(tuán)取代的d-C6烷基鹵素、羥基、d-C6垸氧基、氨基、或單或二(C,-C6)烷基氨基；或苯基或含有至少一個(gè)氮的5-或6-元雜芳基，每個(gè)都任選地用鹵素、羥基、C,-C6垸基、C,-C6烷氧基、C3-C7環(huán)垸基、氨基、硝基、三氟甲基、或單或二(C廣C6)烷基氨基取代；且R"是氫、C,-C6垸基或C3-C7環(huán)垸基。式11.2-a的進(jìn)一步優(yōu)選的化合物包括下列的那些化合物，其中在式11.2-a中的R41基團(tuán)是任選地用下列基團(tuán)取代的d-C4垸基鹵素、羥基、C,-C6烷氧基、氨基、或單或二(C,-Q)烷基氨基；或吡啶基或嘧啶基，每個(gè)都任選地用鹵素、羥基、C,-CV烷基、C,-C3烷氧基、氨基、或單或二(C,-Q)烷基氨基取代；且R"是氫、C,-C4烷基或C3-C7環(huán)垸基。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的共軛物是二價(jià)的且由式m所示其中每個(gè)A獨(dú)立地如上所規(guī)定，且B^-Z'-(CH2CHR70)P-Z'-，其中每個(gè)Z'獨(dú)立地是共價(jià)鍵或連接基團(tuán)，W是氫或甲基，且p為大約100至1360的整數(shù)。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的共軛物是三價(jià)至十價(jià)的，且優(yōu)選由式IV所示其中每個(gè)A獨(dú)立地如上所規(guī)定，且t為3至10的整數(shù)。本發(fā)明的方法采用了Mitsimobu反應(yīng)，即在三芳基膦或三烷基膦和合適的偶氮二羧酸酯存在下的醇縮合反應(yīng)。在優(yōu)選的反應(yīng)中，聚合醇，例如聚乙二醇，與親核試劑在三芳基-或三垸基膦和重氮化試劑的存在下反應(yīng)生成共軛物。親核試劑是具有酸性氫(即，適合貢獻(xiàn)電子的部分)的化合物。通過聚合醇與親核試劑反應(yīng)形成的鍵可以是各種各樣的，例如，碳-氧鍵形成、碳-氮鍵形成、碳-硫鍵形成，碳-鹵素鍵形成和碳-碳鍵形成。因此，非衍生的活性化合物可具有各種能與聚合醇反應(yīng)的官能團(tuán)。實(shí)例包括羧酸、醇、(3-酮酯、胺、硫醇、鹵代烷、酰鹵、(3-二酮和類似物?？稍诒景l(fā)明的方法中使用的親核試劑的其他實(shí)例可見Orgam'ci^c"wM,1992，42，335-656，該文全部引入本文作為參考。關(guān)于三芳基-或三烷基膦的實(shí)例的描述見，^涵ei，2003，3,317-334;r"raW腦1998,39,7787;C/zew.C薩漏.1997,759;禾卩MWecw/^sM/c/eo"cfey,1999，18,727，所有文獻(xiàn)都引入本文作為參考，且包括三苯基膦、三甲基膦、三乙基膦、三丁基膦和1,2-雙-(二苯基膦基)乙烷。膦類也可以是聚合物負(fù)載的或水溶性的。優(yōu)選的三芳基膦是三苯基膦。重氮化試劑通常是偶氮二羧酸的酯類或酰胺類，且包括6>"Am&2003，3，317-334;r"ra/7edra1999，40,7359;禾卩5w〃.C7^m.j5^1.，1984,57,2675中提到的那些化合物。這些重氮化合物的具體實(shí)例是偶氮二羧酸二乙酯、偶氮二羧酸二異丙酯、4-甲基-1,2,4-三唑垸-3,5-二酮、N,N,N',N'-四甲基偶氮二羧酰胺、偶氮二羧酸二哌啶、雙(N-4-甲基哌嗪-l-基)偶氮二羧酰胺、二嗎啉代偶氮二羧酰胺和偶氮二羧酸二叔丁酯。由本發(fā)明的方法制備的代表性共軛物，包括其藥學(xué)上可接受的鹽類，顯示在下表中<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>其中，每個(gè)結(jié)構(gòu)中，所有p'的總和為100-2200，優(yōu)選大約200-1360。定義如在此所使用的"烷基"是指具有1至5個(gè)碳原子，更優(yōu)選1至3個(gè)碳原子的單價(jià)飽和脂肪族烴基。該術(shù)語的實(shí)例基團(tuán)如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、正戊基和類似物。"取代的烷基"是指具有1至3個(gè)，優(yōu)選1至2個(gè)取代基的垸基，上述的取代基選自烷氧基、取代的垸氧基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、羧基、羧基酯、環(huán)垸基、取代的環(huán)烷基、螺環(huán)烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)。"亞烷基"是指優(yōu)選具有1至5個(gè)，更優(yōu)選1至3個(gè)碳原子的二價(jià)飽和脂肪族烴基，其是直鏈或支鏈的基團(tuán)。該術(shù)語的實(shí)例基團(tuán)如亞甲基(-CH2-)、亞乙基(-CH2CHr)、亞正丙基(-CH2CH2CH2-)、亞異丙基(-CH2CH(CH3)-)和類似基團(tuán)。"垸氧基"是指"烷基-O-"基團(tuán)，該基團(tuán)的實(shí)例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基和類似基團(tuán)。"取代的垸氧基"是指"取代的烷基-O-"基團(tuán)。"?；?是指基團(tuán)H-C(O)-、烷基-C(O)-、取代的垸基-C(O)-、烯基-C(O)-、取代的烯基-C(O)-、炔基-C(O)-、取代的炔基-C(O)-、環(huán)烷基-c(o)-、取代的環(huán)烷基-c(o)-、芳基-c(o)-、取代的芳基-c(o)-、雜芳基-c(o)-、取代的雜芳基-c(o)-、雜環(huán)-c(o)-和取代的雜環(huán)-c(o)-、其中垸基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)垸基、取代的環(huán)垸基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)如本文所定義。"氨基酰基"是指基團(tuán)-C(O)NR'OR10，其中每個(gè)R'o均單獨(dú)選自氫、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、環(huán)垸基、取代的環(huán)垸基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)，以及其中每個(gè)RW與氮原子連接在一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)垸基、取代的環(huán)垸基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)如本文所定義。39"酰氧基"是指基團(tuán)烷基-C(O)O-、取代的烷基-C(O)O-、烯基-c(o)o-、取代的烯基-c(o)o-、炔基-c(o)o-、取代的炔基-c(o)o-、芳基-c(o)o、取代的芳基-c(o)o-、環(huán)烷基-c(o)o-、取代的環(huán)烷基-c(o)o-、雜芳基-c(o)o-、取代的雜芳基-c(o)o-、雜環(huán)-c(o)o-和取代的雜環(huán)-c(o)o-，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)如本文所定義。"烯基"是指具有2至6個(gè)碳原子、優(yōu)選2至4個(gè)碳原子，具有至少1個(gè)、優(yōu)選1至2個(gè)烯基不飽和位點(diǎn)的烯基基團(tuán)。這些基團(tuán)的實(shí)例是乙烯基、烯丙基、丁-3-烯-l-基和類似基團(tuán)。"取代的烯基"是指具有1至3個(gè)取代基、優(yōu)選1至2個(gè)取代基的烯基，上述取代基選自烷氧基、取代的垸氧基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；⒎蓟?、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、羧基、羧基酯、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)，其條件是任何羥基取代不與乙烯基(不飽和)碳原子連接。"炔基"是指具有2至6個(gè)碳原子、優(yōu)選2至3個(gè)碳原子，并具有至少1個(gè)、優(yōu)選1至2個(gè)炔基不飽和位點(diǎn)的炔基。"取代的炔基"是指具有1至3個(gè)取代基、優(yōu)選1至2個(gè)取代基的炔基，上述的取代基選自垸氧基、取代的烷氧基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、羧基、羧基酯、環(huán)烷基、取代的環(huán)垸基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)。"氨基"是指-NH2基團(tuán)。"氰基"是指-CN基團(tuán)。"取代的氨基"是指-NR'R"基團(tuán)，其中R'和R"均獨(dú)立地選自氫、烷基、取代的垸基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)，以及其中R'和R"與它們連接的氮連接在一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)，條件是R鄰R"都不是氫。當(dāng)R'是氫，R"是垸基時(shí)，本文中取代的氨基有時(shí)是指烷基氨基。當(dāng)R'和R"是烷基時(shí)，本文中取代的氨基有時(shí)是指垸基氨基。當(dāng)提到單取代的氨基時(shí)，它是指R'或R"是氫但不同時(shí)是氫。當(dāng)提到雙取代的氨基時(shí)，它是指R'或R"都不是氫。"氨基?；?是指基團(tuán)-NR"C(0)烷基、-NR"C(0)取代的垸基、-NR"C(0)環(huán)垸基、-NR"C(0)取代的環(huán)垸基、-NR"'C(0)烯基、-NR"C(O)取代的烯基、-NR"C(0)炔基、-服110;0)取代的炔基、^1^(:(0)芳基、^1^(:(0)取代的芳基、^1^(:(0)雜芳基、-NRUc(o)取代的雜芳基、-NR11C(0)雜環(huán)和-NR^C(0)取代的雜環(huán)，其中R"是氫或垸基，且其中垸基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)垸基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)如本文所定義。"硝基"是指-N02基團(tuán)。"芳基"或"Ar"是指單價(jià)的具有6至14個(gè)碳原子的芳香族碳環(huán)基團(tuán)，其具有單環(huán)(例如，苯基)或多元稠環(huán)(例如，萘基或蒽基)，稠環(huán)可以是或不是芳香族的(例如，2-苯并噁唑啉酮、2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮-7-基和類似物)，條件是連接處在一個(gè)芳香族碳原子處。優(yōu)選的芳基包括苯基和萘基。"取代的芳基"是指具有1至3個(gè)取代基、優(yōu)選1至2個(gè)取代基的芳基，上述的取代基選自羥基、?；?、酰氨基、酰氧基、垸基、取代的烷基、烷氧基、取代的垸氧基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、氨基、取代的氨基、氨基?；⒎蓟?、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、羧基、羧基酯、氰基、硫醇、硫代烷基、取代的硫代烷基、硫代芳基、取代的硫代芳基、硫代雜芳基、取代的硫代雜芳基、硫代環(huán)垸基、取代的硫代環(huán)垸基、硫代雜環(huán)、取代的硫代雜環(huán)、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、鹵素、硝基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、雜芳氧基、取代的雜芳氧基、雜環(huán)氧基、取代的雜環(huán)氧基、氨基磺?；?NH2-S02-)和取代的氨基磺?；?芳氧基"是指芳基-O-基團(tuán)，其實(shí)例包括苯氧基、萘氧基和類似基團(tuán)。"取代的芳氧基"是指取代的芳基-O-基團(tuán)。"羧基"是指-COOH或其鹽類。"羧基酯"是指基團(tuán)-c(o)o-垸基、-C(O)O-取代的烷基、-C(O)-芳基和-C(O)O-取代的芳基，其中烷基、取代的垸基、芳基和取代的芳基如本文所定義。"環(huán)烷基"是指3至IO個(gè)碳原子的具有單環(huán)或多環(huán)的環(huán)狀烷基，其實(shí)例包括金剛烷基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)辛基和類似基團(tuán)。"環(huán)烯基"是指4至IO個(gè)碳原子的具有單環(huán)或多環(huán)，并進(jìn)一步具有至少1個(gè)、優(yōu)選1至2個(gè)烯鍵或乙烯基(>C=C<)不飽和內(nèi)部位點(diǎn)的環(huán)狀烯基。"取代的環(huán)垸基"和"取代的環(huán)烯基"是指具有1至5個(gè)取代基的環(huán)烷基或環(huán)烯基，上述取代基選自氧基(-0)、硫代(=S)、烷氧基、取代的垸氧基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；⒎蓟?、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、羧基、羧基酯、環(huán)烷基、取代的環(huán)垸基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)。"環(huán)烷氧基"是指-O-環(huán)垸基基團(tuán)。"取代的環(huán)垸氧基"是指-O-取代的環(huán)烷基基團(tuán)。"卣代"或"鹵素"是指氟、氯、溴和碘，優(yōu)選氟或氯。"羥基"是指-OH基團(tuán)。"雜芳基"是指在環(huán)內(nèi)由1至10個(gè)碳原子和l至4個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子組成的芳香基團(tuán)。這種雜芳基可具有單環(huán)(例如，吡啶基或呋喃基)或多元稠環(huán)(例如，吲嗪基或苯并噻吩基)，其中稠環(huán)可以是或不是芳香族的和/或含有雜原子的，條件是連接點(diǎn)在芳香族雜芳基基團(tuán)的原子上。優(yōu)選的雜芳基包括吡啶基、吡咯基、吲哚基、苯硫基和呋喃基。"取代的雜芳基"是指被1至3個(gè)取代基取代的雜芳基，上述的取代基選自與取代的芳基所定義的取代基相同的基團(tuán)。"雜芳氧基"是指-O-雜芳基基團(tuán)，"取代的雜芳氧基"是指-0-取代的雜芳基基團(tuán)。"雜環(huán)"或"雜環(huán)的"或"雜環(huán)烷基"或"雜環(huán)基"是指具有單環(huán)或多元稠環(huán)的飽和或不飽和基團(tuán)，在環(huán)中具有1至IO個(gè)碳原子和1至4個(gè)選自氮、硫或氧的雜原子，其中在稠環(huán)系中，一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以是環(huán)垸基、芳基或雜芳基，條件是連接點(diǎn)在雜環(huán)上。"取代的雜環(huán)"或"取代的雜環(huán)烷基"或"取代的雜環(huán)基"是指被1至3個(gè)與取代的環(huán)垸基所定義的相同取代基取代的雜環(huán)基基團(tuán)。雜環(huán)基和雜芳基的實(shí)例包括但不限于，氮雜環(huán)丁垸、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、吲嗪、異吲哚、吲哚、二氫剛哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、異喹啉、喹啉、酞嗪、萘基吡啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、氮蒽、菲咯啉、異噻唑、吩嗪、異噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪、n引哚啉、鄰苯二甲酰亞胺、1，2，3,4-四氫-異喹啉、4，5,6,7-四氫苯并[b]噻吩、噻唑、噻唑垸、噻吩、苯并[b]噻吩、嗎啉基、硫代嗎啉基(也稱為硫嗎啉基(thiamorpholinyl))、哌啶基、吡咯烷、四氫呋喃基和類似物。"硫醇"是指-SH基團(tuán)。"硫代垸基"或"垸基硫醚"或"硫代烷氧基"是指-S-烷基基團(tuán)。"取代的硫代垸基"或"取代的垸基硫醚"或"取代的硫代烷氧基"是指-S-取代的烷基基團(tuán)。"硫代芳基"是指-S-芳基基團(tuán)，其中芳基如上所定義。"取代的硫代芳基"是指-S-取代的芳基基團(tuán)，其中取代的芳基如上所定義。"硫代雜芳基"是指-S-雜芳基基團(tuán)，其中雜芳基如上所定義。"取代的硫代雜芳基"是指-S-取代的雜芳基基團(tuán)，其中取代的硫代雜芳基如上所定義。"硫代雜環(huán)"是指-S-雜環(huán)基團(tuán)，"取代的硫代雜環(huán)"是指-S-取代的雜環(huán)基團(tuán)，其中雜環(huán)和取代的雜環(huán)如上所定義。"雜環(huán)氧基"是指雜環(huán)基-O-基團(tuán)，"取代的雜環(huán)基-O-"是指取代的雜環(huán)基-O-基團(tuán)，其中雜環(huán)基和取代的雜環(huán)基如上所規(guī)定。"硫代環(huán)垸基"是指-S-環(huán)垸基基團(tuán)，"取代的硫代環(huán)烷基"是指-S-取代的環(huán)烷基基團(tuán)，其中環(huán)烷基和取代的環(huán)烷基如上所定義。術(shù)語"化合物"和"活性化合物"用來指本發(fā)明的共軛物的VLA-4拮抗劑部分或在與聚合物結(jié)合之前存在的VLA-4拮抗劑。術(shù)語"連接基"、"連接基團(tuán)"或"1至40個(gè)原子的連接基"是指如下基團(tuán)(1)將聚合物與活性化合物共價(jià)連接和/或(2)將聚合物的聚垸撐氧部分彼此共價(jià)連接。在任何特定的共軛物內(nèi)，將聚合物的聚烷撐氧部分連接在一起的連接基團(tuán)，和將聚合物與活性化合物鍵合的連接基團(tuán)可以是相同或不同的(即，可具有相同或不同的化學(xué)結(jié)構(gòu))。代表性的官能基連接(其中可具有一個(gè)或多個(gè)連接基團(tuán))是酰胺、醚、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、脲、硫脲、氨基基團(tuán)、羰基基團(tuán)、烷氧基基團(tuán)等。連接基團(tuán)在其原子內(nèi)容方面可以是同源的或異源的(例如，僅含有碳原子的連接基團(tuán)或含有碳原子以及在連接基團(tuán)上存在的一個(gè)或多個(gè)雜原子的連接基團(tuán))。優(yōu)選地，連接基團(tuán)含有1至25個(gè)碳原子和0至15個(gè)選自氧、NR22、硫、-S(0)-和-S(0)2-的雜原子，其中R"如上所定義。連接基團(tuán)也可以是手性的或無手性的、線性的、分支的或環(huán)狀的。為了插入進(jìn)連接基團(tuán)內(nèi)的官能基連接或鍵之間，連接基團(tuán)可進(jìn)一步包含間隔基團(tuán)，該基團(tuán)包括但不限于，選自垸基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、環(huán)烷基、取代的環(huán)垸基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、和其組合的間隔基。間隔基在其原子內(nèi)容方面可以是同源的或異源的(例如，間隔基僅含有碳原子或間隔基含有碳原子以及在間隔基上存在的一個(gè)或多個(gè)雜原子)。優(yōu)選地，間隔基含有1至25個(gè)碳原子和0至15個(gè)選自氧、NR22、硫、-S(O)-和-S(O)r的雜原子，其中R"如上所定義。間隔基也可以是手性的或無手性的、線性的、分支的或環(huán)狀的。間隔基的非限制性實(shí)例是直鏈或支鏈的亞垸基鏈、苯撐、聯(lián)苯撐等、環(huán)，它們都能攜帶一個(gè)或一個(gè)以上的能與活性化合物和一個(gè)或多個(gè)聚垸撐氧部分形成連接的官能基。多官能性連接基團(tuán)-間隔基的一個(gè)特殊實(shí)例是賴氨酸，它可經(jīng)Q亞烷基鏈上取代的兩個(gè)氨基將任何活性化合物與兩個(gè)聚合物部分連接。其他的非限制性實(shí)例包括對(duì)氨基苯甲酸和3,5-二氨基苯甲酸，它們分別具有2和3個(gè)用于形成連接的官能基。本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員很容易想到其他這樣的多官能性連接加間隔基。術(shù)語"聚合物"是指生物相容的、水溶性的、基本上無免疫原性的聚合物，該聚合物能與一個(gè)以上的具有式II的VLA-4拮抗劑偶聯(lián)。優(yōu)選聚合物是非離子的和生物相容的，在所使用的劑量下?lián)y定是沒有毒性的。這些聚合物也包括多個(gè)拷貝的與載體連接的聚合物。合適的聚合物的實(shí)例包括但不限于聚氧化烯聚合物，如聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯酮(PVP)、聚丙烯酰胺(PAAm)、聚二甲基丙烯酰胺(PDAAm)、聚乙烯醇(PVA)、右旋糖、聚(L-谷氨酸)(PGA)、苯乙烯馬來酸酐(SMA)、聚-N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)、聚二乙烯醚馬來酸酐(DIVEMA)(Kameda,Y.等人，Biomaterials25:3259-3266,2004;Thanou，M.等人，CurrentOpinioninInvestigationalDrugs4(6):701-709,2003;Veronese,F.M.等人，IIFarmaco54:497-516,1999)。優(yōu)選的聚合物是聚氧化烯。"聚氧化烯"是指包括至少一個(gè)聚烷撐氧部分的大分子，該聚烷撐氧部分任選地與另外一個(gè)或多個(gè)聚垸撐氧共價(jià)連接，其中聚烷撐氧是相同或不同的。非限制性實(shí)例包括聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)、聚異丙二醇(PIPG)、PEG-PEG、PEG-PPG、PPG-PIPG和類似物。也包括在聚氧化烯定義中的聚合物是其中聚烷撐氧部分任選地通過連接基團(tuán)相互連接的大分子。說明性的實(shí)例是PEG-連接基團(tuán)-PEG、PEG-連接基團(tuán)-PIPG和類似物。更具體的實(shí)例包括巿售的聚[二(乙二醇)己二酸酯、聚[二(乙二醇)鄰苯二甲酸酯二醇和類似物。其他實(shí)例是氧化烯、聚乙二醇、聚丙二醇和聚氧乙烯化多元醇單元的嵌段共聚物。通過其至少一個(gè)末端，聚合物與非聚合物取代的式II化合物任選地通過連接基團(tuán)采用本發(fā)明的方法進(jìn)行共價(jià)連接，為聚合物與非聚合物取代的式II化合物提供了共價(jià)連接。當(dāng)采用連接基團(tuán)時(shí)，連接基團(tuán)與至少一個(gè)聚合物末端共價(jià)連接，要不然該末端則共價(jià)連接于非聚合物取代的式II化合物。當(dāng)然要理解的是，如果在非聚合物取代的式II化合物上發(fā)現(xiàn)有合適的取代基，則可不需要任選的連接基團(tuán)，因?yàn)榫酆衔锟膳c非聚合物取代的式II化合物直接連接。連接基團(tuán)的優(yōu)選實(shí)例包括下列的-O-、-NR22-、-NR22C(0)0-、-OC(0)NR22-、-NR22C(0)-、-C(0)NR22-、-NR22C(0)NR22-、-亞烷基-NR22C(0)0-、-亞烷基-NR22C(0)NR22-、-亞烷基-0(:(0^1122-、-亞烷基-NR22-、-亞烷基-O-、-亞垸基-忖11220(0)-、-亞垸基-C(0)NR22-、-NR3c(0)0-亞烷基-、-NR22c(0)NR22-亞烷基-、-0(3(0)服22-亞烷基、-NR22-亞烷基-、-O-亞烷基-、-NR22c(0)-亞烷基-、-(:(0^1122-亞烷基-、-亞垸基-NR^C(0)0-亞垸基-、-亞垸基-NRC(0)NR^亞烷基-、-亞烷基-OC(0)NR"-亞烷基-、-亞烷基-NR22-亞烷基-、亞烷基-O-亞烷基-、-亞烷基-NR22c(0)-亞垸基-、-C(0)NR22-亞烷基-、禾口其中^^選自芳基、取代的芳基、環(huán)垸基、取代的環(huán)烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)，且D和E獨(dú)立地選自化學(xué)鍵、-O-、CO、擺22-、-NR22C(0)0-、-OC(0)NR22-、-NR22C(0)-、-C(0)NR22-、-NR22C(0)NR22-、-亞烷基^1122(:(0)0-、-亞烷基-NR22c(0)NR22-、-亞烷基-OC(0)NR22-、-亞烷基-NR22-、-亞烷基-O-、-亞烷基-NR22C(0)-、亞垸基-C(0)NR22-、-NR22C(0)0-亞垸基-、-NR22c(0)NR22-亞烷基-、-OC(0)NR22-亞烷基-、^1122-亞烷基-、-O-亞烷基-、-NR22c(0)-亞烷基-、-C(0)NR22-亞垸基-、-亞垸基-NR22C(0)0-亞烷基-、-亞烷基-NR22c(0)NR22-亞烷基-、-亞烷基-OC(0)NR22-亞烷基-、-亞烷基-NR22-亞烷基-、亞烷基-O-亞烷基-、-亞烷基-順22€(0)-亞烷基-、和-C(0)NR22-亞烷基-，其中R"如上所定義。在上述連接基團(tuán)中優(yōu)選的亞垸基基團(tuán)包括C,-C,5亞垸基，更優(yōu)選CpQ亞烷基，且最優(yōu)選d-C3亞烷基。優(yōu)選的雜環(huán)基團(tuán)包括哌嗪基、哌啶基、高哌嗪基、高哌啶基、吡咯垸基和咪唑烷基。本發(fā)明的共軛物可被加入至載體中，該載體上可結(jié)合1-19個(gè)額外的共軛物。術(shù)語"載體"是指一種任選的成分或支架，多個(gè)共軛物可結(jié)合于其上，且當(dāng)加入至本發(fā)明的共軛物中時(shí)不會(huì)影響基本的免疫原性或毒性。這種載體優(yōu)選是含有用于連接聚合物的多官能團(tuán)的單至十價(jià)物質(zhì)。這些官能團(tuán)可以是同種的或異種的；但優(yōu)選同種的官能團(tuán)。包括同種官能團(tuán)的市售載體的實(shí)例包括，僅作為實(shí)例的鄰苯二酚、間苯二酚、1,2-苯二胺、1，3-苯二胺、1，4-苯二胺；鄰苯二甲酸、間苯二甲酸、1,3-丙二醇、甘油、1,2，4-苯三酚、季戊四醇、葡萄糖(以其吡喃糖形式)、二異氰酸1,3-苯酯、二異氰酸1,4-苯酯、間苯二甲醛、苯二甲醛、1,3-環(huán)戊二醇、乙二胺、乙二胺四乙酸和類似物。用作載體或支架的代表性結(jié)構(gòu)包括下列的結(jié)構(gòu)(其中PEG僅用于H(OCH2CH2)n'0—廠O—(CH2CH20)nH"0—(CH2CH20)nH三-PEG-甘油H(OCH2CH2)n-、JH(OCH2CH2)n、(CH2CH20)nH、(CH2CH20)nH四-PEG-季戊四醇<CH2CH20)nH(CH2CH20)H二-PEG間苯二酚包括異種官能團(tuán)的市售載體的實(shí)例包括，僅作為實(shí)例的6-羥基己酸、氨基酸、水楊酸、3-或4-氨基水楊酸、1,3-二氨基-2-羥基丙烷、2-氨基乙醇、3-氨基丙醇、葡糖胺、唾液酸、氨基酸和類似物。使用這些載體或支架通過結(jié)合聚合物產(chǎn)生的代表性結(jié)構(gòu)包括下列結(jié)構(gòu)(其中PEG僅用于舉例的目的)H<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>三-PEG-l,3-二氨基-2-羥基丙烷<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>二-PEG3-氨基苯酚載體可任選地含有任選地通過連接基團(tuán)與載體連接的一個(gè)或多個(gè)A的拷貝，條件是至少還有一個(gè)官能基可與另外一個(gè)A的拷貝結(jié)合。例如，下面的每個(gè)結(jié)構(gòu)都被認(rèn)為是載體或支架，因?yàn)檫€有至少一個(gè)額外的官能基來結(jié)合額外的A取代基H(OCH2CH2)-Q—-0—(CH2CH20)n(L)wA-0—(CH2CH20)(L)wA乂O、H(OCH2CH2>n-q廣、(CH2CH20)(L)AH(OCH2CH2)n'00、(CH2CH2。)H■(CH2CH2Q)nH、一(CH2CH20)(L)wA其中L、W和A如上所定義。術(shù)語"氧化烯"是指-OCH2CHRd-，其中Rd是烷基。聚合的氧化烯是指聚氧化烯、聚垸撐氧或聚垸撐二醇，其非限制性的實(shí)例包括PEG、聚丙二醇、聚丁二醇、聚異丙二醇和類似物。這些聚合物任選地用取代基單封端，該取代基優(yōu)選選自垸基、芳基、取代的垸基、取代的芳基和如上所述的載體。包括在這些聚合物中的還有二氨基封端的聚氧化烯聚合物，這些聚合物在本領(lǐng)域已知為Jeffamine^。這些聚合物仍然進(jìn)一步可任選地含有一個(gè)或多個(gè)非氧化烯單元，如市售的聚[二(乙二醇)己二酸酯、聚[二(乙二醇)鄰苯二甲酸酯二醇和類似物。也包括氧化烯、聚乙二醇、聚丙二醇和聚氧乙烯化多元醇單元的嵌段共聚物。聚氧化烯，如PEG，通常以水溶性的蠟狀固體提供。一般當(dāng)聚合物的分子量增加時(shí)，其粘度和凝固點(diǎn)也增加。市售的制劑通常以聚合物組分的"平均分子量"來表征。來自本發(fā)明共軛物中的單一或多個(gè)聚合物部分的聚合物總量的平均分子量一般在大約100至100,000之間；優(yōu)選大約10,000至80,000;更優(yōu)選大約20,000至大約70,000。同樣，其他合適的聚合物，如聚乙烯吡咯酮(PVP)、聚丙烯酰胺(PAAm)、聚二甲基丙烯酰胺(PDAAm)、聚乙烯醇(PVA)、右旋糖、聚(L-谷氨酸)(PGA)、苯乙烯馬來酸酐(SMA)、聚-N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)、聚二乙烯醚馬來酸酐(DIVEMA)在本領(lǐng)域中是公知的，其分子量為大約100至100,000;優(yōu)選從大約10,000至80,000;更優(yōu)選從大約20，000至大約70，000。"藥學(xué)可接受的鹽"是指保留了本發(fā)明化合物的生物學(xué)作用和特性，且沒有生物學(xué)或其他方面不希望出現(xiàn)的特性的鹽類。在許多情況下，本發(fā)明的化合物由于存在氨基和/或羧基或與其類似的基團(tuán)，能形成酸性和/或堿性鹽。藥學(xué)可接受的堿性加成鹽可從無機(jī)堿和有機(jī)堿制備。來自無機(jī)堿的鹽類包括(僅作為實(shí)例)鈉、鉀、鋰、銨、鈣和鎂鹽。來自有機(jī)堿的鹽類包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺的鹽，如烷基胺、二烷基胺、三垸基胺、取代的垸基胺、二(取代的垸基)胺、三(取代的烷基)胺、烯基胺、二烯基胺、三烯基胺、取代的烯基胺、二(取代的烯基)胺、三(取代的烯基)胺、環(huán)垸基胺、二(環(huán)烷基)胺、三(環(huán)垸基)胺、取代的環(huán)烷基胺、雙取代的環(huán)烷基胺、三取代的環(huán)垸基胺、環(huán)烯基胺、二(環(huán)烯基)胺、三(環(huán)烯基)胺、取代的環(huán)烯基胺、雙取代的環(huán)烯基胺、三取代的環(huán)烯基胺、芳基胺、二芳基胺、三芳基胺、雜芳基胺、二雜芳基胺、三雜芳基胺、雜環(huán)胺、二雜環(huán)胺、三雜環(huán)胺、混合的二和三胺，其中胺上的取代基中至少兩個(gè)是不同的，所述取代基選自垸基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、環(huán)垸基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜環(huán)和類似物。也包括其中兩個(gè)或三個(gè)取代基與氨基氮一起形成雜環(huán)或雜芳基的胺。合適的胺的實(shí)例包括(僅作為實(shí)例)，異丙胺、三甲胺、二乙胺、三(異丙基)胺、三(正丙基)胺、乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、氨基丁三醇、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、哈胺(hydrabamine)、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡萄糖胺、N-垸基葡萄糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、嗎啉、N-乙基哌啶和類似物。還要理解的是在實(shí)施本發(fā)明過程中也可使用其他的羧酸衍生物，例如羧酸酰胺類，包括羧酰胺、低級(jí)烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺和類似物。藥學(xué)可接受的酸性加成鹽可從無機(jī)酸和有機(jī)酸制備。來自無機(jī)酸的鹽包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸和類似物。來自有機(jī)酸的鹽包括乙酸、丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、延胡索酸、酒石酸、擰檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸和類似物。術(shù)語"藥學(xué)可接受的陽離子"是指藥學(xué)可接受的鹽的陽離子。要理解的是在本文所定義的所有取代基中，本文并不要包括用本身進(jìn)一步取代的取代基定義的取代基(例如，用具有取代的芳基基團(tuán)的取代芳基作為取代基，即其本身用取代的芳基取代，等等)獲得的聚合物。在這種情況下，這種取代基的最大數(shù)目為3。g卩，上述的每個(gè)定義都受一定的限制，例如，取代的芳基被限定為-取代的芳基-(取代的芳基)-(取代的芳基)。同樣要理解的是，上述的定義并不要包括不允許的取代方式(例如，甲基用5個(gè)氟基取代或羥基(X連接烯屬或炔屬不飽和烴)。這種不允許的取代方式對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的?；衔镏苽洳捎霉牟襟E和很容易獲得的起始原料可從很容易獲得的初始原料制備本發(fā)明的方法中所使用的起始活性化合物，或當(dāng)起始原料不是公知或不能從商業(yè)渠道獲得時(shí)，這些原料可使用文獻(xiàn)中所述的步驟很容易地制備而成。要理解的是，其中指定了典型或優(yōu)選工藝條件(即，反應(yīng)溫度、時(shí)間、反應(yīng)物的摩爾比例、溶劑、壓力等)時(shí)，除非另外說明，也可使用其他的工藝條件。最佳的反應(yīng)條件可根據(jù)所使用的特殊反應(yīng)物或溶劑進(jìn)行變化，但這些條件可由本領(lǐng)域的技術(shù)人員通過常規(guī)的優(yōu)化步驟來確定。另外，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，可能需要一些常規(guī)的保護(hù)基團(tuán)以保護(hù)某些官能基以免發(fā)生不希望的反應(yīng)。對(duì)于多種官能基的合適保護(hù)基團(tuán)以及對(duì)特殊官能基保護(hù)和去保護(hù)的合適條件，在本領(lǐng)域中是公知的。例如，大量的保護(hù)基團(tuán)描述在T.W.Greene和G.M.Wuts，有教合成W游保P基歷f尸ra歸."gGra，Og腳.ci)，第二版，Wiley,NewYork,1991和本文所引用的參考文獻(xiàn)中。而且，本發(fā)明的化合物典型地含有一個(gè)或多個(gè)手性中心。因此，如果需要，這些化合物可制備或分離為純的立體異構(gòu)體，g卩，單獨(dú)的對(duì)映體或非對(duì)映體，或富集立體異構(gòu)體的混合物。除非另外說明，所50有這些立體異構(gòu)體(和富集的混合物)都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。純的立體異構(gòu)體(或富集的混合物)可采用，例如本領(lǐng)域公知的光學(xué)活性起始原料或立體選擇性試劑進(jìn)行制備。或者，這些化合物的消旋混合物可采用，例如手性柱色譜、手性溶解溶劑和類似物進(jìn)行分離。根據(jù)本發(fā)明制備的共軛物優(yōu)選包括含有大約1至大約100個(gè)式II取代基的聚合物部分/任選的載體<formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula>具體來說，聚合物部分可通過共價(jià)鍵與Ar'取代基、R取代基、Ar2取代基連接和/或連接在T取代基內(nèi)，其中該聚合物部分可直接連接或經(jīng)連接基團(tuán)連接。依次，聚合物部分可任選地與其上連接有多個(gè)聚合物拷貝的載體結(jié)合。式II化合物可首先用適當(dāng)?shù)姆蓟酋Ｂ冗B接雜環(huán)氨基酸1_來進(jìn)行制備，如下面的示意圖l所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula>示意圖l其中R、Ar1、X、m和w如上所規(guī)定。具體來說，在上面的示意圖1中，雜環(huán)氨基酸L與化學(xué)量等量或過量(優(yōu)選大約1.1至大約2當(dāng)量)的芳基磺酰鹵2，在合適的惰性稀釋劑(如二氯甲烷和類似物)中進(jìn)行混合。通常反應(yīng)是在大約-7(TC至大約40°C的范圍內(nèi)進(jìn)行，直至反應(yīng)基本上完成，一般在1至24小時(shí)內(nèi)。優(yōu)選地，在合適的堿存在下進(jìn)行反應(yīng)以清除反應(yīng)中產(chǎn)生的酸。合適的堿包括作為實(shí)例的叔胺，如三乙胺、二異丙基乙胺、N-甲基-嗎啉和類似物?；蛘?，反應(yīng)在Schotten-Baumann-型條件下使用堿性水溶液(如氫氧化鈉水溶液、緩沖至pH7.4的磷酸鹽水溶液和類似物)進(jìn)行。得到的產(chǎn)物^可通過常規(guī)的方法回收，如色譜、過濾、蒸發(fā)、結(jié)晶和類似方法或，另外可選的是不純化和/或分離就用于下一步驟中。在上面的反應(yīng)中使用的雜環(huán)氨基酸丄，是己知的化合物或是可通過常規(guī)的合成步驟從已知化合物制備而成的化合物。用于此反應(yīng)中的合適的氨基酸的實(shí)例包括但不限于，L-脯氨酸、反式-4-羥基-L-脯氨酸、順式-4-羥基-L-脯氨酸、反式-3-苯基-L-脯氨酸、順式-3-苯基-L-脯氨酸、L-(2-甲基)脯氨酸、L-哌啶酸、L-氮雜環(huán)丁垸-2-羧酸、L-噻唑垸-4-羧酸、L-(5，5-二甲基)噻唑烷-4-羧酸、L-硫嗎啉-3-羧酸。如果需要，氨基酸丄的相應(yīng)羧酸酯，例如甲基酯、乙基酯、叔丁基酯和類似物，可與芳基磺酰氯用于上述的反應(yīng)中。隨后使用常規(guī)的試劑和條件將酯基水解為羧酸，即用堿金屬氫氧化物在惰性稀釋劑(如甲醇/水)中進(jìn)行處理，然后得到N-磺酰氨基酸2。同樣，在上述反應(yīng)中使用的芳基磺酰氯L是已知的化合物或可通過常規(guī)合成步驟從已知化合物制備而成的化合物。這種化合物一般是從相應(yīng)的磺酸，即從具有結(jié)構(gòu)式Ar'S03H的化合物(其中Ar'如上所定義)使用三氯化磷和五氯化磷制備而成的。該反應(yīng)一般是通過將磺酸與大約2至5摩爾當(dāng)量的三氯化磷和五氯化磷，在無溶劑或惰性溶劑(如二氯甲烷)中，在大約(TC至大約80°C的范圍內(nèi)接觸大約1至大約48小時(shí)而得到磺酰氯?；蛘?，芳基磺酰氯2_可從相應(yīng)的硫醇化合物，即Ar'-SH化合物(其中Ar'如在此所定義)通過用氯(Cl2)和水在常規(guī)反應(yīng)條件下處理硫醇而制備而成的?；蛘?，在上述反應(yīng)中使用的芳基磺酰氯2，可通過使用C1-S03H將取代的苯或雜環(huán)烷基氯磺酰化制備而成。適合用于本發(fā)明中的芳基磺酰氯的實(shí)例包括但不限于，苯磺酰氯、1-萘磺酰氯、2-萘磺酰氯、對(duì)甲苯磺酰氯、鄰甲苯磺酰氯、4-乙酰氨基苯磺酰氯、4-叔丁基苯磺酰氯、4-溴苯磺酰氯、2-羧基苯磺酰氯、4-氰基苯磺酰氯、3,4-二氯苯磺酰氯、3,5-二氯苯磺酰氯、3,4-二甲氧基苯磺酰氯、3,5-二三氟甲基苯磺酰氯、4-氟苯磺酰氯、4-甲氧基苯磺酰氯、2-甲氧羰基苯磺酰氯、4-甲氨基-苯磺酰氯、4-硝基苯磺酰氯、4-三氟甲52基-苯磺酰氯、4-三氟甲氧基苯磺酰氯、2，4,6-三甲基苯磺酰氯、2-噻吩磺酰氯、5-氯-2-噻吩磺酰氯、2,5-二氯-4-噻吩磺酰氯、2-噻唑磺酰氯、2_甲基-4-噻唑磺酰氯、l-甲基-4-咪唑磺酰氯、l-甲基-4-吡唑磺酰氯、5-氯-l，3-二甲基-4-吡唑磺酰氯、3-吡啶磺酰氯、2-嘧啶磺酰氯和類似物。如果需要，磺酰氟、磺酰溴或磺酸酐可替代磺酰氯用于上面的反應(yīng)中以形成N-磺酰氮基酸2。然后如下面的示意圖2所示，N-芳基磺酰氨基酸L與市售的酪氨酸酯偶聯(lián)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula>示意圖2其中R、Ar1、X、m和n如上所定義，Ra是氫或烷基，但優(yōu)選例如叔丁基的垸基，Z代表芳環(huán)上的任選取代基，o是0、l或2。這種偶聯(lián)反應(yīng)一般采用公知的偶聯(lián)劑進(jìn)行，所述的偶聯(lián)劑如碳化二亞胺、BOP試齊U(苯并三唑-l-基氧基-三(二甲氨基)-膦六氟膦酸酯)和類似物。合適的碳化二亞胺的實(shí)例包括二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、l-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)和類似物。如果需要，也可使用碳化二亞胺偶聯(lián)劑的聚合物負(fù)載形式，例如包括在r"m/ze^w7丄e"巾，34(48),7685(1993)中所描述的那些。另外，可使用公知的偶聯(lián)助催化劑，如N-羥基琥珀酰亞胺、1-羥基苯并三唑和類似物，來加速偶聯(lián)反應(yīng)。這種偶聯(lián)反應(yīng)一般是通過將N-磺酰氨基酸i與大約1至大約2當(dāng)量的偶聯(lián)劑和至少1當(dāng)量、優(yōu)選大約1至大約1.2當(dāng)量的酪氨酸衍生物4，在惰性稀釋劑(如二氯甲烷、氯仿、乙腈、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺和類似物)中接觸而進(jìn)行的。一般，這種反應(yīng)是在大約0°C至大約37"C的范圍內(nèi)進(jìn)行大約12至大約24小時(shí)。在反應(yīng)完成后，通過常規(guī)的方法，包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾和類似方法回收化合物i?；蛘?，N-磺酰氨基酸1_可轉(zhuǎn)變?yōu)樗嵝札X化物，其然后與化合物4偶聯(lián)得到化合物1。酸性鹵化物可通過將化合物i與無機(jī)酸性鹵化物，如亞硫酰氯、三氯化磷、三溴化磷或五氯化磷，或優(yōu)選與草酰氯，在常規(guī)條件下接觸制備而成。這種反應(yīng)一般是使用大約1至5摩爾當(dāng)量的無機(jī)酸性鹵化物或草酰氯在無溶劑或在惰性溶劑(如二氯甲垸或四氯化碳)中，在大約(TC至大約8(TC的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行大約1至大約48小時(shí)。在該反應(yīng)中也可使用催化劑，如DMF。然后N-磺酰氨基酸U勺酸性鹵化物與至少1當(dāng)量、優(yōu)選大約1.1至大約1.5當(dāng)量的酪氨酸衍生物4，在惰性稀釋劑(如二氯甲垸)中，在大約-7(TC至大約40°C的溫度范圍內(nèi)接觸大約1至大約24小時(shí)。優(yōu)選地，該反應(yīng)在合適的堿的存在下進(jìn)行以清除反應(yīng)過程中產(chǎn)生的酸。合適的堿的實(shí)例包括叔胺，如三乙胺、二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉和類似物?；蛘撸磻?yīng)可在Schotten-Baumann型條件下使用堿性水溶液(如氫氧化鈉和類似物)進(jìn)行。在反應(yīng)完成后，通過常規(guī)的方法，包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾和類似方法回收化合物i?；蛘?，可通過首先形成二氨基酸衍生物，然后將二氨基酸與芳基磺酰鹵化物1偶聯(lián)制備化合物5如下面示意圖3所示；示意圖3其中R、Ra、Ar1、X、Z、m、n和o如上所定義。二氨基酸^很容易通過將氨基酸L與氨基酸￡使用如上所述的常規(guī)氨基酸偶聯(lián)技術(shù)和試劑(如碳化二亞胺、BOP試劑和類似物)偶聯(lián)制備而成。然后可使用磺酰氯1磺化二氨基酸^，并采用上述的合成步驟得到化合物2。在上述反應(yīng)中使用的酪氨酸衍生物1是已知的化合物或可通過常規(guī)的合成步驟從己知化合物制備而成的化合物。例如，適合用于上述反應(yīng)中的酪氨酸衍生物1_包括但不限于，L-酪氨酸甲酯、L-酪氨酸叔丁酯、L-3,5-二碘酪氨酸甲酯、L-3-碘酪氨酸甲酯、(3-(4-羥基-萘-l-基)-L-丙氨酸甲酯、p-(6-羥基-萘-2-基)-L-丙氨酸甲酯和類似物。如果需要，當(dāng)然也可使用上述化合物的其他酯或酰胺。N-芳基磺?；?雜環(huán)氨基酸-酪氨酸衍生物l可用作起始點(diǎn)，通過使用本發(fā)明的方法將聚合物部分連接在A一基團(tuán)上。能夠以上述的方式使用位于分子其他部分上的胺部分來將聚合物基團(tuán)與分子共價(jià)連接。例如，位于A一上、雜環(huán)氨基酸上或A一上的胺，同樣可被衍生用于使用本發(fā)明的方法進(jìn)行PEG取代。在合成中胺部分可包含在這些取代基中，如需要適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行保護(hù)?；蛘撸墒褂冒非绑w。此外，氨基取代基可被加入進(jìn)雜環(huán)氨基酸官能團(tuán)中，然后被衍生以包含聚合物部分。例如，在美國專利第6,489,300中描述了雜環(huán)氨基酸官能團(tuán)可以是2-羧基哌嗪?；蛘?，市售的3-或4-羥脯氨酸可被氧化為相應(yīng)的酮，然后在氰基硼氫化鈉的存在下用氨水還原氨化形成相應(yīng)的胺部分。仍更進(jìn)一步地，4-氰基脯氨酸可被還原得到結(jié)構(gòu)式-CH2NEb的取代垸基，它可通過胺被衍生。仍進(jìn)一步地，胺部分可被加入進(jìn)A一官能團(tuán)中。優(yōu)選地，胺部分以胺前體存在，如與A一連接的硝基或氰基。式IIa-IIh的非衍生化合物隨后通過使用本發(fā)明的方法與聚合物偶聯(lián)。示意圖4描繪了本發(fā)明的實(shí)施方式示意圖4在示意圖9中，在膦(在此是PPh3)和偶氮二羧酸酯(例如偶氮二羧酸二異丙酯)的存在下，PEG醇100用親核試劑105處理以形成受保護(hù)的酯丄m。然后該酯被水解以形成所需的共軛物m。該反應(yīng)在緩和且基本上中性的條件下發(fā)生。該反應(yīng)優(yōu)選在至少一種合適的溶劑中進(jìn)行。實(shí)例包括例如二氯甲垸的鹵化溶劑、例如苯或甲苯的芳烴溶劑、或例如四氫呋喃和二乙醚的醚溶劑。其他合適的溶劑包括乙酸乙酯、乙腈和DMF。最優(yōu)選使用氯化溶劑或醚溶劑。在最優(yōu)選的實(shí)施方式中，該溶劑是二氯甲垸或四氫呋喃。反應(yīng)溫度一般在大約-100至IO(TC的范圍內(nèi)，優(yōu)選在大約-20至5(TC的范圍內(nèi)，甚至更優(yōu)選從大約(T至大約室溫的范圍內(nèi)。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，反應(yīng)溫度在大約-10至l(TC之間。56反應(yīng)時(shí)間的范圍是大約5分鐘至大約100小時(shí)，優(yōu)選大約30分鐘至大約50小時(shí)之間。更優(yōu)選該反應(yīng)在大約45分鐘至大約10小時(shí)之間進(jìn)行至反應(yīng)完成。如上所述，三芳基-或三院基膦的實(shí)例包括三苯基膦、三甲基膦、三乙基膦、三丁基膦和1，2-雙-(二苯基膦基)乙烷。膦也可以是聚合物負(fù)載的或水溶性的。優(yōu)選的三芳基膦是三苯基膦。偶氮化合物的實(shí)例是偶氮二羧酸二乙酯、偶氮二羧酸二異丙酯、4-甲基-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮、N,N,N',N'-四甲基偶氮二羧酰胺、偶氮二羧酸二哌啶、雙(N-4-甲基哌嗪-l-基)偶氮二羧酰胺、二嗎啉代偶氮二羧酰胺和偶氮二羧酸二叔丁酯。要理解的是其他合適的聚合醇可用來代替PEG，且本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將能夠很容易地修改下面的反應(yīng)示意圖以加入這些其他的聚合物。在一些情況下，PEG部分可直接引入至A一基團(tuán)上，且在其他情況下，PEG部分可通過連接基團(tuán)部分的連接被引入。適合與式II化合物共軛的其他聚合物包括但不限于，聚乙烯吡咯垸酮(PVP)、聚丙烯酰胺(PAAm)、聚二甲基丙烯酰胺(PDAAm)、聚乙烯醇(PVA)、右旋糖、聚(L-谷氨酸)(PGA)、苯乙烯馬來酸酐(SMA)、聚-N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)、聚二乙烯醚馬來酸酐(DIVEMA)。作為實(shí)例，在自由基聚合過程中，通過引入共聚單體，PVP、PAAm和PDAAm可被官能化。PVA和右旋糖都含有適合共軛的一級(jí)羥基(OH)。這些生物聚合物的合成方法和將其與生物物質(zhì)共軛的方法在本領(lǐng)域中是公知的(參見，例如己公開的美國專利申請(qǐng)第20040043030號(hào)；美國專利第5,177,059號(hào)；美國專利第6,716,821號(hào)；美國專利第5,824,701號(hào)；美國專利第6,664,331號(hào)；美國專利第5,880,131號(hào)；Kameda，Y.等人，Biomaterials25:3259-3266，2004;Thanou,M.等人，CurrentOpinioninInvestigationalDrugs4(6):701-709，2003;Veronese,F.M.等人，IIFarmaco54:497-516,1999，所有文獻(xiàn)均全部引入本文作為參考)。適合用于本發(fā)明中的代表性聚合物包括:HO(亞烷基-O)ppRbb單封端的單羥基PEG(mPEG)H2N(亞垸基-0)ppRbb單封端的單氨基PEG57HO(亞烷基-O)ppR-OH不封端的二羥基PEGH2N(亞垸基-0)ppR-OH不封端的單氨基PEGHO(亞烷基-0)ppRbb分支的單羥基PEGHO(亞烷基-O)ppRbb樹枝狀的單羥基PEG其中PP和亞垸基如本文中的定義，Rbb優(yōu)選選自烷基、取代的烷基-芳基和取代的芳基。其他合適的聚合物顯示如下HOO、pOCA'單封端的單羥基PEG(mPEG)O、，OCH3單封端的單氨基PEGHOO、"OH不封端的二羥基PEG分支的PEG:購自NOF的PEG試劑(20kDa4-臂)MH220kDa4-臂PEG四胺購自Nektar的PEG試劑(40kDa8-臂)40kDa8-臂PEG六甘油核心Cat#0J000T08樹枝狀PEG:購自NOF的PEG試劑(40kDa4-臂)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula>季戊四醇核心cat.#SunbrightPTE-40000<formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula>40kDa4-臂PEG四胺季戊四醇核心cat.#SunbrightPTE-400PA自NOF的PEG試劑(40kDa3-臂)40kDa3-臂PEG40kDa3-臂PEG三胺甘油核心甘油核心cat#SunbrightGL-40000cat#SunbrightGL-400PA購自SunBio的PEG試劑(40和20kDa)Y-PEG系列(天冬氨酸核心)GmEP-HNNH-mPEGY-PEG胺(40kDa)Cat#PYAM-40GmEP扁HMY-PEG硝基苯基醇氨基甲酸酯(40kDa)Cat#PYNPC-40CH20'(CH2CH2OVHH-(OH2GH2C)n-0HH'6-臂系列(山梨醇核心)在山梨醇6-臂系列中可得到的較低分子量包括10、15禾ll20kDa。醇之外的衍生物包括6-臂胺。例如，10kDa6-臂胺(cat#P6AM-10)可轉(zhuǎn)化為40kDa6-臂六胺(具有Nektars5kDaBocNH-PEG-NHS酯)，然后與小分子進(jìn)行共軛。40kDa6-臂PEG定制產(chǎn)叩這些PEG聚合物可進(jìn)一步被修飾，用PEG二胺通過適當(dāng)?shù)倪B接基團(tuán)，例如氨基甲酸酯(氨基甲酸乙酯)或脲將鏈延伸。■0-(CH2CH20>-H■H■Cr(CH2CH20>-H0-(CH2CH20)-HCH20-<CH2CH20)n-HH2N0NH2n"'PEG二胺H3COH3CO-各種具有酸性氫的親核化合物可用于本發(fā)明的方法中。這些化合物可以是生物學(xué)活性的化合物，即，治療用化合物(藥物)和農(nóng)業(yè)用化學(xué)品(殺蟲劑、除草劑、和植物生長刺激劑，如肥料)或食物添加劑化合物?？杉尤胫吝@些化合物中的具有酸性氮的基團(tuán)的實(shí)例顯示在上面；見表D和D1中所列的結(jié)構(gòu)。藥學(xué)制劑當(dāng)用作藥物時(shí)，本發(fā)明的共軛物通常以藥學(xué)組合物的形式給藥。這些共軛物可通過多種途徑給藥，包括經(jīng)口、經(jīng)直腸、透皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、舌下、經(jīng)眼或吸入(包括通過鼻或口吸入給藥)。優(yōu)選的給藥途徑包括皮下、靜脈內(nèi)和吸入。這些組合物可以以制藥領(lǐng)域中公知的方式進(jìn)行制備，并包括至少一種共軛物。本發(fā)明也提供了包括根據(jù)本發(fā)明的共軛物，例如式I的共軛物，與作為C(4卩7抑制劑的單獨(dú)的化合物組合在一起的藥學(xué)組合物。這些組合物也包括藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，且可如本文其他地方所描述給藥。本發(fā)明也包括含有一種或多種式I的共軛物作為活性成分以及藥學(xué)上可接受的載體的藥學(xué)組合物。在制備本發(fā)明的組合物的過程中，活性成分通常與賦形劑混合，用賦形劑稀釋或包封在載體內(nèi)，該載體可以是無菌注射溶液和無菌包裝的粉末的形式。對(duì)于皮下給藥，簡單的載體可包括水、Na2HP04、NaH2P04和NaCl的無菌溶液，其比例可提供等滲的和生理學(xué)可接受的pH，己知的有PBS或磷酸鹽緩沖鹽水。其他選擇對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的，包括混合的溶劑系統(tǒng)，它可影響吸收速率和接觸總量。這些選擇包括含有甘油、聚乙二醇400和棉籽油的混合溶劑系統(tǒng)。有可能使用的還有乙醇、N，N'-二甲基乙酰胺、丙二醇和苯甲醇，它們都可被用來操縱通透性的提高和高滲性。在制備制劑過程中，可能需要將活性化合物磨碎以便在與其他成分混合之前得到合適的粒度。如果活性化合物基本上是不溶的，通常被磨碎至小于200目的粒度。如果活性化合物基本上是水溶性的，一般通過磨碎將粒度調(diào)節(jié)至例如大約40目，使其在制劑中基本上均勻分布。61合適的賦形劑的一些實(shí)例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿和甲基纖維素。制劑可另外包括潤滑劑，如滑石、硬脂酸鎂和礦物油；濕潤劑；乳化劑及懸浮劑；防腐劑，如甲基-和丙基羥基-苯甲酸酯；甜味劑；和調(diào)味劑。本發(fā)明的組合物可被制成為采用本領(lǐng)域己知的方法給予患者后，活性成分能快速、持久或延遲釋放的劑型。通過皮下或靜脈內(nèi)制劑給予治療藥物在制藥工業(yè)中是公知的。皮下或靜脈內(nèi)制劑除了組合物中的治療藥物可溶以外，還應(yīng)該具有某些特性。例如，該劑型應(yīng)該能促進(jìn)活性成分的總體穩(wěn)定性，制劑的制造還應(yīng)該在成本上是經(jīng)濟(jì)的。所有這些因素最終決定了靜脈制劑總體上的成功和實(shí)用性?？砂诒景l(fā)明化合物的藥學(xué)制劑中的其他輔助添加劑如下溶劑乙醇、甘油、丙二醇；穩(wěn)定劑EDTA(乙二胺四乙酸)、檸檬酸；抗菌性防腐劑苯甲醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯；緩沖劑檸檬酸/檸檬酸鈉、酒石酸氫鉀、酒石酸氫鈉、乙酸/乙酸鈉、馬來酸/馬來酸鈉、磷苯二甲酸氫鈉、磷酸/磷酸二氫鉀、磷酸/磷酸氫二鈉；和張力調(diào)節(jié)劑氯化鈉、甘露醇、右旋糖。需要緩沖液的存在以保持水溶液pH在大約4至大約8的范圍內(nèi)，更優(yōu)選在大約4至大約6的范圍內(nèi)。緩沖系統(tǒng)通常是弱酸及其可溶性鹽的混合物，例如擰檬酸鈉/擰檬酸；或二元酸的單陽離子或雙陽離子鹽，例如，酒石酸氫鉀；酒石酸氫鈉、磷酸/磷酸二氫鉀、和磷酸/磷酸氫二鈉。所使用的緩沖系統(tǒng)的量取決于(1)所需的pH;和(2)藥物的量。通常使用的緩沖液量為制劑中緩沖液:阿倫膦酸鹽(其中緩沖液的摩爾數(shù)取自緩沖液成分的合并摩爾數(shù)，例如檸檬酸鈉和檸檬酸)0.5:1至50:1的摩爾比例，以保持pH在4至8的范圍內(nèi)，通常使用緩沖液(合并的)與存在的藥物的摩爾比例為1:1至10:1。在本發(fā)明中一種有用的緩沖液是檸檬酸鈉/擰檬酸，其范圍為每ml5至50mg檸檬酸比每ml1至15mg檸檬酸，足以將組合物水溶液的pH保持在4-6。62也可存在緩沖劑以防止藥物通過與溶解的金屬離子(例如Ca、Mg、Fe、Al、Ba)形成可溶性金屬復(fù)合體而發(fā)生沉淀，這些離子可能是從玻璃容器中或橡皮塞中析出來的或存在于普通的自來水中。這種試劑的作用可以是藥物的競爭性絡(luò)合劑，并產(chǎn)生可溶性金屬復(fù)合體，生成不需要的微粒。另外，可能需要試劑(例如，大約l-8mg/ml的氯化鈉)的存在來將張力調(diào)整至與人血液相同的數(shù)值，以避免在靜脈制劑給藥過程中發(fā)生紅細(xì)胞腫脹或收縮所產(chǎn)生的不良副反應(yīng)，如惡心或腹瀉以及可能的相關(guān)血液疾病。通常，制劑的張力要與人血液相匹配，其范圍是282至288mOsm/kg，通常為285mOsm/kg，其相當(dāng)于0.9%氯化鈉溶液的滲透壓。靜脈制劑可通過直接靜脈內(nèi)注射、靜脈快速滴注給藥，或可通過加入合適的輸注溶液(如0.9%氯化鈉注射液或其他相容的輸注溶液)中輸注給藥。組合物優(yōu)選以單位劑量的形式進(jìn)行配制，每劑量含有大約5至大約100mg，更普遍的是大約10至大約30mg活性成分。術(shù)語"單位劑量形式"是指適合用作人類受試者和其他哺乳動(dòng)物的單位劑量的物理獨(dú)立單位，每單位含有預(yù)定數(shù)量的計(jì)算能產(chǎn)生所需治療效應(yīng)的活性原料以及合適的藥學(xué)賦形劑。共軛物在很寬的劑量范圍內(nèi)都是有效的，通常以藥學(xué)有效量給藥。然而要理解的是，實(shí)際給予的共軛物的數(shù)量將由醫(yī)生根據(jù)有關(guān)的情況進(jìn)行確定，這些情況包括被治療的病情、選擇的給藥途徑、給予的實(shí)際化合物、每個(gè)患者的年齡、重量和反應(yīng)、患者癥狀的嚴(yán)重性和類似情況。為了制備固體組合物，如片劑，主要的活性成分與藥學(xué)賦形劑混合形成固體預(yù)制劑組合物，該組合物含有本發(fā)明化合物的均質(zhì)混合物。當(dāng)提到這些預(yù)制劑組合物是均質(zhì)時(shí)，其含義是活性成分均勻地分散在組合物中，這樣組合物很容易被再分為同樣有效的單位劑量形式，如片劑、丸劑和膠囊。然后該固體預(yù)制劑被再分成上面所述類型的單位劑量形式，該劑型含有，例如O.l至大約500mg的本發(fā)明的活性成分。本發(fā)明的片劑或丸劑可被覆以包衣或制成復(fù)方藥物以提供長效優(yōu)勢的劑型。例如，片劑或丸劑可包括內(nèi)用劑型和外用劑型組分，后者的形式是在前者上有包衣。兩種組分可由腸溶層(entericlayer)分隔，該腸溶層的作用是抵抗胃內(nèi)的崩解，使內(nèi)組分不受損害的進(jìn)入十二指腸或延緩釋放。多種材料可用作這種腸溶層或包衣，這些材料包括許多類聚合酸，以及聚合酸與例如蟲膠、鯨蠟醇和乙酸纖維素的材料的混合物?？杉尤氡景l(fā)明的新組合物用于口服給藥或注射給藥的液體劑型包括，具有合適口味的糖槳水溶液、水性或油性懸液、和具有食用油(如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)的調(diào)味乳劑、以及酏劑和類似的藥學(xué)載體。用于吸入或吹入的組合物包括在藥學(xué)可接受的水性或有機(jī)溶劑、或其混合物中的溶液和懸液，和粉末。液體或固體組合物可含有如前所述的合適的藥學(xué)可接受的賦形劑。優(yōu)選的，組合物經(jīng)口或鼻吸入途徑給藥以發(fā)揮局部或全身效應(yīng)。在優(yōu)選的藥學(xué)可接受的溶劑中的組合物可通過使用惰性氣體噴霧給藥。噴霧的溶液可從噴霧裝置直接吸入，或噴霧裝置可被接在面罩通氣口或間歇正壓呼吸機(jī)上。溶液、懸液或粉末組合物可從裝置給藥，優(yōu)選經(jīng)口或經(jīng)鼻，所述裝置以適當(dāng)?shù)姆绞綄?duì)制劑進(jìn)行遞送。對(duì)于吸入或吹入給藥，優(yōu)選共軛物的總分子量在大約10,000道爾頓至70,000道爾頓之間，更優(yōu)選大約20,000道爾頓至45,000道爾頓之間。聚合物共軛物如上配制和給藥的本發(fā)明化合物是聚合物共軛物。聚合物共軛物預(yù)計(jì)相對(duì)非共軛的聚合物可提供許多益處，如溶解性和體內(nèi)穩(wěn)定性提咼。正是如此，可使用單個(gè)聚合物分子與本發(fā)明的化合物共軛，盡管也考慮到也可以連接一個(gè)以上的聚合物分子，一般是通過載體。本發(fā)明的共軛化合物發(fā)現(xiàn)可在體內(nèi)以及非體內(nèi)應(yīng)用中都具有可應(yīng)用性。另外，要認(rèn)識(shí)到共軛聚合物可根據(jù)最終的應(yīng)用使用其他的基團(tuán)、部分或其他共軛物種。其實(shí)例是，在一些應(yīng)用中使聚合物官能化使其具有反應(yīng)性，且使其能夠與式n的化合物共軛，以增強(qiáng)總共軛物質(zhì)的各種特64性或特征，這樣是有益處的。因此，聚合物可含有任何官能基、重復(fù)基團(tuán)、連接或其他組成性結(jié)構(gòu)，它們不會(huì)妨礙本發(fā)明的共軛化合物的目的用途。用于達(dá)到這些所需特征的說明性聚合物如前所述，以及PCTWO01/54690(Zheng等人)中所述，該申請(qǐng)全部引入本文作為參考。聚合物可與本發(fā)明的化合物連接(優(yōu)選經(jīng)連接基團(tuán)部分)形成穩(wěn)定的鍵，該鍵不會(huì)被人類的酶顯著切斷。通過本領(lǐng)域中標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)測定，通常對(duì)于不被"顯著"切斷的鍵需要連接聚合物和與聚合物連接的本發(fā)明化合物的鍵在24小時(shí)內(nèi)被切斷的比例不超過20%，這些技術(shù)包括但不限于高壓液相色譜(HPLC)。通常，本發(fā)明的化合物含有至少大約兩種與聚合物連接的式II的化合物。最終的用量是在反應(yīng)程度最大、而產(chǎn)物的非特異性修飾最小之間達(dá)到平衡，同時(shí)規(guī)定化學(xué)實(shí)體要保持最佳的活性，而同時(shí)優(yōu)化了本發(fā)明的化合物的半衰期。優(yōu)選地，保留了本發(fā)明化合物至少大約50%的生物學(xué)活性，更優(yōu)選保留100%。如上所述在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)踐中，在目標(biāo)聚合物系統(tǒng)中有利地加入C2-C4垸基聚烷撐二醇的聚烷撐二醇?xì)埢?，?yōu)選聚乙二醇(PEG)或這些乙二醇的聚(氧)垸撐二醇?xì)埢?。因此，與本發(fā)明化合物連接的聚合物可以是聚乙二醇(PEG)的均聚物或是聚氧乙烯化的多元醇，條件是在所有情況下聚合物在室溫下都可溶解在水中。這些聚合物的非限制性實(shí)例包括聚烷撐氧均聚物，如PEG或聚丙二醇、聚氧乙烯化的乙二醇、其共聚物和其嵌段共聚物，條件是要保留嵌段共聚物的水溶性。聚氧乙烯化的多元醇的實(shí)例包括但不限于，聚氧乙烯化的丙三醇、聚氧乙烯化的山梨醇、聚氧乙烯化的葡萄糖或類似物。聚氧乙烯化的丙三醇的丙三醇主鏈與天然的主鏈?zhǔn)窍嗤模鐒?dòng)物和人類甘油單-、雙-和三酯中的主鏈。因此，這種分支在體內(nèi)不一定會(huì)被認(rèn)為是外源物質(zhì)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員要理解的是，前面的列舉僅是說明性的，可考慮具有本文所述性質(zhì)的所有聚合物材料。聚合物不需要具有特殊的分子量，但優(yōu)選分子量在大約100至IOO，OOO之間，優(yōu)選大約10,000至80，000;更優(yōu)選大約20,000至大約70，000。尤其是大小為20,000或更大的聚合物能最有效地防止由于腎臟過濾引起的產(chǎn)物丟失。PEG衍生物是指其中在聚乙二醇本身上的一個(gè)或兩個(gè)末端羥基已經(jīng)被修飾的聚乙二醇聚合物。合適的修飾作用實(shí)例包括用另外的官能基替換一個(gè)或兩個(gè)羥基，該官能基可用低分子量的配基或其他大分子或聚合物保護(hù)或不保護(hù)。通過將聚乙二醇與包括互補(bǔ)反應(yīng)性官能基的化合物反應(yīng)可完成聚乙二醇末端羥基的修飾作用，所述互補(bǔ)反應(yīng)性官能基包括能與聚乙二醇中的羥基發(fā)生反應(yīng)的官能基。本發(fā)明化合物的PEG衍生物可含有通過連接基團(tuán)與其共價(jià)連接的一個(gè)或多個(gè)聚乙二醇(PEG)取代基。下面的制劑實(shí)施例舉例說明了本發(fā)明的藥學(xué)組合物。制劑實(shí)施例1制備含有下列成分的硬明膠膠囊成分(mg/膠囊)活性成分30.0淀粉305.0硬脂酸鎂5.0上述成分混合在一起，以340mg的質(zhì)量裝入硬明膠膠囊中。制劑實(shí)施例2使用下面的成分制備片劑質(zhì)量成分(mg/片)活性成分25.0纖維素、微晶200.0膠體二氧化硅10.0硬脂酸5.0這些成分混合、壓片成為片劑，每片重240mg。制劑實(shí)施例3.制備含有下列成分的干粉吸入制劑成分重量％活性成分5每l糖寸95將活性成分與乳糖混合，混合物加入至干粉吸入裝置中。制劑實(shí)施例4如下制備每片含有30mg活性成分的片劑質(zhì)量成分活性成分淀粉微晶纖維素聚乙烯吡咯烷酮(在無菌水中的10%溶液)羧甲基淀粉鈉(mg/片)30.0mg45.0mg35.0mg4.0mg4.5mg硬脂酸鎂0.5mg滑石1.0mg總計(jì)120mg活性成分、淀粉和纖維素通過20目U.S.篩并充分混合。聚乙烯吡咯垸酮的溶液與得到的粉末混合，然后通過16目U.S.篩。得到的顆粒在50°C至60°C進(jìn)行干燥，并通過16目U.S.篩。然后前面已通過30目U.S.篩的羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石加入至顆粒中，混合后，在壓片機(jī)上進(jìn)行壓片得到每片重120mg的片劑。制劑實(shí)施例5如下制備每粒含有40mg藥物的膠囊質(zhì)量成分(mg/膠囊)活性成分40.0mg淀粉109.0mg硬脂酸鎂1.0mg總計(jì)150.0mg將活性成分、淀粉和硬脂酸鎂混合，通過20目U.S.篩，以150mg的質(zhì)量裝入硬明膠膠囊中。制劑實(shí)施例6如下制備每粒含25mg活性成分的栓劑成分用量活性成分25mg飽和的脂肪酸甘油酯達(dá)到2,000mg活性成分通過60目U.S.篩，懸浮在飽和的脂肪酸甘油酯(之前需要少量的熱量將其融化)中。然后混合物倒入至標(biāo)稱2.0g容量的栓劑模中，并進(jìn)行冷卻。制劑實(shí)施例7如下制備每劑含有50mg藥物/5.0ml劑量的懸液成分活性成分黃原膠羧甲基纖維素鈉(11%)微晶纖維素(89%)蔗糖苯甲酸鈉調(diào)味劑和顏料純水達(dá)到用量50.0mg4.0mg50.0mg1.75g10.0mg適量(q.v.)5.0ml將活性成分、蔗糖和黃原膠混合，通過10目u.s.篩，然后與之前在水中制備的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉的溶液混合。苯甲酸鈉、調(diào)味劑和顏料用一些水稀釋，加入并進(jìn)行攪拌。然后加入足夠的水得到需要的容]成分活性成分淀粉硬脂酸鎂總計(jì)制劑實(shí)施例8質(zhì)量(mg/膠囊)15.0mg407.0mg3.0mg425.0mg將活性成分、淀粉和硬脂酸鎂混合，通過20目U.S.篩，以425.0mg68的質(zhì)量裝入硬明膠膠囊中如下制備皮下制劑成分活性成分磷酸鹽緩沖鹽水制劑實(shí)施例9質(zhì)量50mg.mLmg1.0ml制劑實(shí)施例10如下制備局部制劑成分活性成分乳化蠟液體石蠟白凡士林達(dá)到質(zhì)量1-10g30g20g100g將白凡士林加熱至熔化。加入液體石蠟和乳化蠟，攪拌至溶解。加入活性成分并繼續(xù)攪拌直至分散。然后混合物冷卻至成為固體。制劑實(shí)施例11如下制備靜脈內(nèi)制劑成分質(zhì)量活性成分250mg等滲鹽水100ml在本發(fā)明的方法中使用的另一種優(yōu)選制劑采用了透皮給藥裝置("貼片")。這種透皮貼片可用來以可控的用量連續(xù)或非連續(xù)的輸注本發(fā)明的化合物。用于遞送藥劑的透皮貼片的構(gòu)造和應(yīng)用在本領(lǐng)域中是公知的。參見，例如于1991年6月11日授權(quán)的美國專利第5,023,252號(hào)，該專利引入本文作為參考。這種貼片可被制成連續(xù)、脈沖式或根據(jù)需要的遞送藥劑。經(jīng)常需要或必須將藥物組合物直接或間接地導(dǎo)入進(jìn)腦中。直接技術(shù)通常涉及將藥物遞送導(dǎo)管放置進(jìn)宿主的心室系統(tǒng)中以繞過血腦屏障。一種用于將生物學(xué)因子運(yùn)輸至機(jī)體的特殊解剖部位的這種可植入遞送系統(tǒng)，在美國專利第5，011，472號(hào)中描述，該專利引入本文作為參考。69間接技術(shù)，通常是優(yōu)選的，其經(jīng)常涉及通過將親水性藥物轉(zhuǎn)化為脂溶性藥物對(duì)組合物進(jìn)行配制從而提供藥物潛伏化。潛伏化通常是通過下面的方法來達(dá)到的封閉藥物上存在的羥基、羰基、硫酸根和伯胺基團(tuán)，從而使藥物具有更大的脂溶性，使其能夠通過血腦屏障進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)?；蛘撸赏ㄟ^動(dòng)脈內(nèi)輸注高滲溶液來增強(qiáng)親水性藥物的遞送，這種方法可暫時(shí)地使血腦屏障開放。適合用于本發(fā)明中的其他劑型可見"雷明頓藥物科學(xué)(Remington'sPharmaceuticalSciences)"，MacePublishingCompany,Philadelphia,PA，第17版(1985)。如上所述，本文所述的化合物適合用于上述的各種藥物遞送系統(tǒng)中。另外，為了增強(qiáng)給藥的化合物在體內(nèi)的血清半衰期，化合物可被包封，導(dǎo)入進(jìn)脂質(zhì)體腔內(nèi)，制備成為膠體，或可使用其他的常規(guī)技術(shù)，使化合物的血清半衰期延長。有多種方法可以制備脂質(zhì)體，如Szoka等人的美國專利第4,235,871號(hào)、第4,501,728號(hào)和第4,837,028號(hào)中所述，這些專利的每一篇都引入本文作為參考。應(yīng)用本發(fā)明的共軛物是VLA-4拮抗劑。一些共軛物也至少對(duì)Ot卩7整合素具有部分親和性。與非共軛的化合物相比，該共軛物在體內(nèi)的滯留時(shí)間延長。共軛物在體內(nèi)滯留時(shí)間的延長使需要的藥物用量降低，因此導(dǎo)致不良反應(yīng)更少，發(fā)生毒性的可能性更小。另外，藥物制劑可以以較少的次數(shù)對(duì)患者給藥，而達(dá)到相似或更大的治療效應(yīng)。通過抑制(X4卩,或(X4卩7與細(xì)胞受體(如VCAM-1、纖維連接蛋白和MadCAM)的結(jié)合的介導(dǎo)，本發(fā)明的共軛物能增強(qiáng)對(duì)體內(nèi)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附的抑制。優(yōu)選地，本發(fā)明的共軛物可，例如通過輸注或通過皮下注射或口服用藥，用于治療由(X4(3,禾口/或CX4P7(通常稱為白細(xì)胞粘附)介導(dǎo)的疾病。本發(fā)明的共軛物可用來治療多種炎性腦疾病，尤其是其中內(nèi)皮細(xì)胞/白細(xì)胞粘附機(jī)制引起健康腦組織破壞的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。因此，本發(fā)明的共軛物可用于，例如治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)、多發(fā)性硬化癥(MS)、腦膜炎和腦炎。本發(fā)明的共軛物也可用于治療其他器官系統(tǒng)中組織損傷引起的功能障礙和疾病，即，其中組織損傷也是經(jīng)粘附機(jī)制導(dǎo)致白細(xì)胞遷移或活化而發(fā)生的。在哺乳動(dòng)物患者中，這些疾病的實(shí)例是炎性疾病，如哮喘、阿耳茨海姆氏病、動(dòng)脈粥樣硬化、AIDS癡呆癥、糖尿病(包括急性青少年型糖尿病)、炎性腸病(包括潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、組織移植排斥、腫瘤轉(zhuǎn)移、中風(fēng)、和其他腦外傷、腎炎、視網(wǎng)膜炎、異位性皮炎、銀屑病、心肌缺血和白細(xì)胞介導(dǎo)的急性肺損傷，如發(fā)生在成人呼吸窘迫綜合征中的急性肺損傷。使用本發(fā)明的共軛物可治療的其他疾病還包括結(jié)節(jié)性紅斑、變應(yīng)性結(jié)膜炎、視神經(jīng)炎、眼葡萄膜炎、變應(yīng)性鼻炎、強(qiáng)制性脊柱炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、血管炎、萊特爾綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、進(jìn)行性全身性硬化癥、多發(fā)性肌炎、皮肌炎、韋格內(nèi)氏肉芽腫、主動(dòng)脈炎、類肉瘤病、淋巴細(xì)胞減少癥、顳動(dòng)脈炎、心包炎、心肌炎、充血性心力衰竭、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、高敏反應(yīng)綜合征、變態(tài)反應(yīng)、嗜酸細(xì)胞過多綜合征、變應(yīng)性肉芽腫性血管炎(Churg-Strausssyndrome)、慢性阻塞性肺病、過敏性肺炎、慢性活動(dòng)性肝炎、間質(zhì)性膀胱炎、自身免疫性內(nèi)分泌功能障礙、原發(fā)性膽汁性肝硬化、自身免疫性再生障礙性貧血、慢性遷延性肝炎和甲狀腺炎。本發(fā)明也提供了治療患者至少部分由CC4整合素介導(dǎo)的白細(xì)胞結(jié)合引起或加重的疾病的方法，該方法包括共同給予有效量的本發(fā)明的共軛物，例如式I的共軛物，和有效量的作為(14(37抑制劑的單獨(dú)化合物。共同給藥可同時(shí)進(jìn)行或依次進(jìn)行。例如，本發(fā)明共軛物的給藥可提前(X4卩7抑制劑的給藥幾分鐘或幾小時(shí)?；蛘撸?14(37抑制劑可在本發(fā)明的共軛物之前給藥。證明治療炎性反應(yīng)功效的合適體內(nèi)模型包括，EAE(實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎)小鼠、大鼠、豚鼠或靈長類動(dòng)物、以及其他依賴于(X4整合素的炎癥模型。炎性腸病是兩種稱為克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎的類似疾病的總稱?？肆_恩氏病是一種原發(fā)性、慢性潰瘍性炎性疾病，其特征是邊界非常明確，一般累及腸壁所有層次的透壁肉芽腫性炎性反應(yīng)。從口至肛門的胃腸道的任何節(jié)段都可被累及，盡管該病最常見的是影響回腸和/或結(jié)腸的末端。潰瘍性結(jié)腸炎是主要局限在結(jié)腸粘膜和粘膜下層的71炎性反應(yīng)。在炎性腸病病變內(nèi)有大量的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，這些細(xì)胞可引起炎性損傷。哮喘的特征是氣管支氣管樹對(duì)多種刺激物的反應(yīng)性增加，引起支氣管氣道的發(fā)作性收縮。剌激物引起多種炎癥介質(zhì)從IgE包被的肥大細(xì)胞中釋放，這些介質(zhì)包括組胺、嗜曙紅的和嗜中性的趨化因子、白三烯、前列腺素和血小板活化因子。這些因子的釋放募集了嗜堿性粒細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞，引起炎性損傷。動(dòng)脈粥樣硬化是一種動(dòng)脈疾病(例如，冠狀動(dòng)脈、頸動(dòng)脈、主動(dòng)脈和髂動(dòng)脈)。其基本病變是粥樣斑，由內(nèi)膜內(nèi)隆起的局灶斑塊(focalplaque)組成，該斑塊具有脂質(zhì)核心和外被的纖維帽。粥樣斑會(huì)補(bǔ)償動(dòng)脈血流，使受累的動(dòng)脈變?nèi)?。心肌和腦梗塞是這種疾病的主要結(jié)局。巨噬細(xì)胞和白細(xì)胞被募集至粥樣斑，并引起炎性損傷。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種慢性、復(fù)發(fā)性炎性疾病，主要引起關(guān)節(jié)損害和關(guān)節(jié)破壞。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎通常首先影響四肢的小關(guān)節(jié)，但然后可累及腕、肘、踝和膝。關(guān)節(jié)炎是由滑膜細(xì)胞與從循環(huán)中浸潤至關(guān)節(jié)滑膜襯里(synoviallining)中的白細(xì)胞相互作用引起的。參見，例如Paul,"免疫學(xué)(Immunology)"(3ded"RavenPress,1993)。本發(fā)明的共軛物的另一適應(yīng)癥是治療由VLA-4介導(dǎo)的器官或移植物排斥反應(yīng)。最近幾年，對(duì)于組織和器官(如皮膚、腎臟、肝臟、心臟、肺、胰腺和骨髓)移植的外科技術(shù)的效率已經(jīng)得到了相當(dāng)大的提高?？赡苤饕耐怀鰡栴}是缺少滿意的藥物以誘導(dǎo)受者對(duì)移植的同種異體移植物或器官的免疫耐受性。當(dāng)同種異體細(xì)胞或器官被移植進(jìn)宿主體內(nèi)(即，供體和受體是相同種屬的不同個(gè)體)時(shí)，宿主免疫系統(tǒng)可能會(huì)對(duì)移植物中的外來抗原發(fā)動(dòng)免疫反應(yīng)(宿主抗移植物病)，從而引起移植組織的破壞。CD8+細(xì)胞、CD4細(xì)胞和單核細(xì)胞都參與了移植組織的排斥反應(yīng)。本發(fā)明的共軛物能與(X4整合素結(jié)合，尤其可用于阻斷同種異體抗原誘發(fā)的受體體內(nèi)的免疫反應(yīng)，因而阻止了這些細(xì)胞參與破壞移植組織或器官。參見，例如Paul等人，TransplantInternational9，420-425(1996);Georczynski等人，Immunology87，573-580(1996);Georcyznski等人，Transplant.Immunol.3，55-61(1995);Yang等人，Transplantation60,71-76(1995);Anderson等人，APMIS102,23-27(1994)。本發(fā)明的可與VLA-4結(jié)合的共軛物的一種相關(guān)用途是調(diào)節(jié)參與"移植物抗宿主"病(GVHD)的免疫反應(yīng)。參見，例如Schlegel等人，J.Immunol.155，3856-3865(1995)。GVHD是一種當(dāng)免疫活性細(xì)胞轉(zhuǎn)移至同種異體的受體體內(nèi)時(shí)發(fā)生的有可能致死的疾病。在這種情況下，供體的免疫活性細(xì)胞可攻擊受體內(nèi)的組織。皮膚、腸上皮和肝臟的組織都是經(jīng)常的靶標(biāo)，在GVHD過程中可被破壞。當(dāng)免疫組織被移植時(shí)，如骨髓移植中，該疾病表現(xiàn)出尤其嚴(yán)重的問題；但也有報(bào)道在其他情況下，包括心臟和肝臟移植物中，GVHD不太嚴(yán)重。本發(fā)明的治療藥物尤其可用于阻斷供體T細(xì)胞的活化，因而干擾了它們?nèi)芙馑拗黧w內(nèi)革巴細(xì)胞的能力。本發(fā)明的制劑尤其可用于治療多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和哮喘。本發(fā)明的共軛物的進(jìn)一步用途是抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。已有報(bào)道幾種腫瘤細(xì)胞表達(dá)VLA-4，與VLA-4結(jié)合的化合物可阻斷這些細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附。Steinback等人，Urol.Res.23，175-83(1995);Orosz等人，Int.J.Cancer60，867-71(1995);Freedman等人，Leuk.Lymphoma13,47-52(1994);Okahara等人，CancerRes.54，3233-6(1994)。具有所需生物學(xué)活性的化合物可根據(jù)需要被修飾以提供所需的特性，如藥理學(xué)特性(例如，體內(nèi)穩(wěn)定性、生物利用度)提高，或在診斷學(xué)應(yīng)用中被檢測到的能力。穩(wěn)定性可以以多種方式進(jìn)行測定，如通過測定在與肽酶或人血漿或血清孵育過程中蛋白的半衰期。許多這種蛋白穩(wěn)定性測定法都已有描述(參見，例如Verhoef等人，Eur.J,DrugMetab.Pharmacokinet，1990，15(2):83-93)。本發(fā)明的共軛物的進(jìn)一步用途是治療多發(fā)性硬化癥。多發(fā)性硬化癥是一種進(jìn)行性的神經(jīng)自身免疫性疾病，估計(jì)在美國有250,000至350，000個(gè)患者。多發(fā)性硬化癥被認(rèn)為是特異性自身免疫反應(yīng)的結(jié)果，其中某些白細(xì)胞攻擊和引起髓鞘質(zhì)(覆蓋神經(jīng)纖維的絕緣鞘)的破壞。在多發(fā)性硬化癥的動(dòng)物模型中，針對(duì)VLA-4的鼠單克隆抗體已經(jīng)顯示能阻斷白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，并因此阻止中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥和隨后動(dòng)物的癱瘓16。本發(fā)明的藥學(xué)組合物適合用于多種藥物遞送系統(tǒng)中。用于本發(fā)明中的合適劑型可見"雷明頓藥物科學(xué)(Remington'sPharmaceuticalSciences)",MacePublishingCompany,Philadelphia,PA，第17版，(1985)。給予患者的用量將取決于給藥的物質(zhì)、給藥的目的(如預(yù)防或治療)、患者的狀態(tài)、給藥的方式和類似情況。在治療性應(yīng)用中，組合物可以以如下量給予已經(jīng)患有疾病的患者，其量足以治愈或至少部分解除疾病及其并發(fā)癥的癥狀。足以達(dá)到此目的的用量稱為"治療有效劑量"。有效用于此用途的用量取決于被治療的病情以及主治醫(yī)生根據(jù)一些因素所做的判斷，這些因素如炎癥的嚴(yán)重性、患者的年齡、體重和一般狀況、和類似因素。給予患者的組合物可以為上述的藥學(xué)組合物的形式。這些組合物可通過常規(guī)的滅菌技術(shù)進(jìn)行滅菌，或可被無菌過濾。得到的水溶液可被包裝備用，或被凍干，在給藥之前該凍干制劑與無菌水性載體混合。本發(fā)明的共軛物的治療劑量將根據(jù)，例如進(jìn)行治療的特殊用途、共軛物的給藥方式、患者的健康狀況和病情、以及處方醫(yī)生的判斷進(jìn)行變化。例如，對(duì)于靜脈內(nèi)給藥，劑量的范圍一般在大約20嗎至大約2000嗎/kg體重，優(yōu)選大約20嗎至大約500嗎，更優(yōu)選大約100嗎至大約300|ig/kg體重。鼻內(nèi)給藥的合適劑量范圍通常在大約0.1pg至1mg/kg體重。有效劑量可從來自體外或動(dòng)物模型檢測系統(tǒng)的劑量反應(yīng)曲線中推知。本發(fā)明的共軛物也能結(jié)合或拮抗CX6卩,、(X9卩,、(X4卩7、(Xd卩2、(Xe(37整合素的作用(盡管(X4P,和(X9P,在本發(fā)明中是優(yōu)選的)。因此，本發(fā)明的共軛物也可用于預(yù)防或逆轉(zhuǎn)由這些整合素與其各自配體結(jié)合所誘發(fā)的癥狀、功能紊亂或疾病。例如，于1998年12月3日公開的國際申請(qǐng)WO98/53817(該申請(qǐng)的公幵內(nèi)容全部引入本文作為參考)和其引用的參考文獻(xiàn)描述了由014(37介導(dǎo)的疾病。該參考文獻(xiàn)也描述了測定拮抗OC4(37依賴性結(jié)合VCAM-Ig融合蛋白的化驗(yàn)。另外，與0td卩2和(Xe(37整合素結(jié)合的化合物可特別用于治療哮喘和相關(guān)的肺部疾病。參見，例如M.H.Grayson等人，J！Met/.1998，747^(11)2187-2191。與Cte卩7整合素結(jié)合的化合物也可用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡(參見，例如，M.Pang等人，爿W/7〃'^A/7ew/".1998，4/(8)，1456-1463);克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎和炎性腸病(IBD)(參見，例如，D.Elewaut等人，Sca"dJ.GaWroe"&ra/1998，33(7)743-748);干燥綜合征(Sjogren'ssyndrome)(參見，例如U.Kroneld等人，6ta""1998，27(3),215-218);和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(參見，例如Scflw/J.(7aWrae"fera/1996,(3)，293-298)。并且與o^,結(jié)合的化合物可用于防止受精(參見，例如H.Chen等人，C7/渭.腺.1999，6，1-10)。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，在例如多發(fā)性硬化癥的情況下，本文所述的共軛物和組合物可用于抑制免疫細(xì)胞從血流中遷移至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，或遷移至引起炎癥誘發(fā)的破壞髓鞘質(zhì)的區(qū)域。優(yōu)選這些試劑抑制免疫細(xì)胞遷移的方式是抑制脫髓鞘作用，并可進(jìn)一步促進(jìn)髓鞘再生。對(duì)于先天性代謝疾病，這些試劑也可防止中樞祌經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘和促進(jìn)髓鞘再生，在這些疾病中，浸潤的免疫細(xì)胞主要在CNS中影響髓鞘質(zhì)的發(fā)展。當(dāng)這些試劑給予由脫髓鞘疾病或病癥誘發(fā)麻痹的受試者時(shí)，還優(yōu)選減少麻痹。包括在由本文所公開的組合物、共軛物和方法所治療的炎性疾病，通常包括與脫髓鞘相關(guān)的疾病。在組織學(xué)上，髓鞘質(zhì)異常是脫髓鞘或髓鞘形成障礙。脫髓鞘表示髓鞘質(zhì)的破壞。髓鞘形成障礙是指由于少突膠質(zhì)細(xì)胞功能障礙引起的髓鞘質(zhì)的形成或維持缺陷。優(yōu)選本文公開的組合物和方法被考慮用來治療與脫髓鞘有關(guān)的疾病和病癥，并輔助髓鞘再生。考慮治療的其他疾病或病癥包括腦膜炎、腦炎和脊髓損傷、以及通常由于炎性反應(yīng)誘發(fā)脫髓鞘的病癥。本文公開的共軛物、組合物和方法并不針對(duì)如下疾病和病癥，其中，例如是遺傳缺陷引起的不正常的髓鞘質(zhì)形成，例如髓鞘形成障礙。本文公開的組合物、共軛物和混合物(cocktail)可考慮用于治療與脫髓鞘有關(guān)的病癥和疾病。涉及脫髓鞘的疾病和病癥包括但不限于，多發(fā)性硬化癥、先天性代謝性疾病(例如，苯丙酮尿癥、泰-薩二氏病(Tay-Sachsdisease)、尼-匹二氏病(Niemann-Pickdisease)、高歇氏病(Gaucher'sdisease)、赫爾勒氏綜合征(Hurler'ssyndrome)、克臘比氏病(Kmbbe'sdisease)和其他的腦白質(zhì)營養(yǎng)不良)、具有異常髓鞘形成75的神經(jīng)病變(例如，格林-巴利綜合征(GuillainBarr6)、慢性免疫性脫髓鞘性多神經(jīng)病(CIDP)、多灶性CIDP、抗-MAG綜合征、GALOP綜合征、抗硫脂抗體綜合征、抗-GM2抗體綜合征、POEMS綜合征、神經(jīng)束膜炎、IgM抗-GDlb抗體綜合征)、藥物相關(guān)性脫髓鞘(例如，由氯喹、FK506、哌克昔林、普魯卡因胺和齊美定(zimeldine)給藥引起的)、其他遺傳性脫髓鞘疾病(例如，糖類缺陷性糖蛋白、科凱恩綜合征(Cockayne'ssyndrome)、先天性髓鞘發(fā)育不良、先天性肌營養(yǎng)不良癥、法勃氏病(Farber'sdisease)、Marinesco-Sj6gren綜合征、異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、佩利措伊斯-梅茨巴赫病(Pelizaeus-Merzbacherdisease)、雷夫敘姆病(Refsumdisease)、朊病毒相關(guān)疾病和Salla病)和其他的脫髓鞘病癥(例如，腦膜炎、腦炎或脊髓損傷)或疾病。有許多疾病模型可用來在體內(nèi)研究這些疾病。例如，動(dòng)物模型包括但不限于表in<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>多發(fā)性硬化癥最常見的脫髓鞘疾病是多發(fā)性硬化癥，但許多其他的代謝性和炎性疾病能引起缺陷性或異常的髓鞘形成。MS是一種慢性神經(jīng)疾病，出現(xiàn)在早期成年期，大多數(shù)病例會(huì)進(jìn)展成為明顯的殘疾。單在美國就有大約350,000個(gè)MS病例。除了創(chuàng)傷以外，MS是成人早期至中期神經(jīng)殘疾的最常見病因。MS的原因仍然需要進(jìn)一步確定。MS的特征是慢性炎癥、脫髓鞘和神經(jīng)膠質(zhì)增生(瘢痕形成)。脫髓鞘可引起軸突傳導(dǎo)的負(fù)性或正性作用。正性傳導(dǎo)異常包括軸突傳導(dǎo)延緩、可變的傳導(dǎo)阻滯(在有高頻但非低頻沖動(dòng)序列(trainsofimpulses)存在時(shí)出現(xiàn))或完全傳導(dǎo)阻滯。正性傳導(dǎo)異常包括自發(fā)性或在機(jī)械應(yīng)激后產(chǎn)生異位性沖動(dòng)和在脫髓鞘的凸瘤(e麗)之間產(chǎn)生異常的"干擾(cross-talk)"。已經(jīng)觀察到T細(xì)胞對(duì)髓鞘質(zhì)蛋白(髓鞘質(zhì)堿性蛋白(MBP)或髓鞘質(zhì)蛋白脂蛋白(PLP))的反應(yīng)性介導(dǎo)了實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦脊髓炎中的CNS炎癥。也已經(jīng)觀察到患者CNS免疫球蛋白(Ig)的水平升高。在MS中觀察到的一些組織損傷還有可能是由活化T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)物介導(dǎo)的。目前，診斷有MS的患者80%在疾病發(fā)作后可生存20年。MS的治療包括(1)針對(duì)疾病病程的變化進(jìn)行治療，包括治療急性惡化和針對(duì)疾病的長期抑制；(2)治療MS的癥狀；(3)預(yù)防和治療醫(yī)學(xué)并發(fā)癥；和(4)處理繼發(fā)的人際和社會(huì)問題，MS的發(fā)作可能很劇烈或很緩和以至于不引起患者注意去看醫(yī)生。最常見的癥狀包括一個(gè)或多個(gè)肢體虛弱、由于視神經(jīng)炎引起的視力模糊、感覺障礙、復(fù)視和共濟(jì)失調(diào)。疾病的病程可分成三大類(1)復(fù)發(fā)性MS、(2)慢性進(jìn)行性MS、和(3)不活動(dòng)性MS。復(fù)發(fā)性MS的特征是神經(jīng)功能障礙反復(fù)發(fā)作。MS的發(fā)作通常進(jìn)行幾天至幾周，緊接著可能完全、部分或不復(fù)原。發(fā)作后從癥狀的高峰期復(fù)原通常在幾周至幾月內(nèi)發(fā)生，盡管持續(xù)2年或2年以上的復(fù)原很少見。慢性進(jìn)行性MS可引起逐漸地進(jìn)行性惡化，沒有穩(wěn)定期或緩解期。這種形式發(fā)生在有復(fù)發(fā)性MS既往史的患者中，盡管20%的患者回憶沒有復(fù)發(fā)。在進(jìn)行性過程中也可發(fā)生急性復(fù)發(fā)。第三種形式是不活動(dòng)性MS。不活動(dòng)性MS的特征是不同程度的固定的神經(jīng)缺陷。大多數(shù)不活動(dòng)性MS患者都有較早的復(fù)發(fā)性MS既往史。疾病的病程也取決于患者的年齡。例如，較佳的預(yù)后因素包括早發(fā)(兒童期除外)、復(fù)發(fā)和發(fā)作后5年很少的殘疾。相反，不良預(yù)后與發(fā)作年齡較晚(即40歲的年齡或更老)和進(jìn)行性病程有關(guān)。這些變量是相互依賴的，因?yàn)槁赃M(jìn)行性MS開始的年齡有比復(fù)發(fā)性MS晚的趨勢?；颊咧新赃M(jìn)行性MS的殘疾通常是進(jìn)行性截癱或四肢癱瘓(癱瘓)引起的。在本發(fā)明的一個(gè)方面，優(yōu)選當(dāng)患者在緩解期時(shí)而不是在疾病的復(fù)發(fā)階段進(jìn)行治療。短期使用促腎上腺皮質(zhì)激素或口服皮質(zhì)類固醇(例如，口服的強(qiáng)的松或靜脈給藥的甲基強(qiáng)的松龍)是僅有的治療MS急性惡化患者的特殊治療措施。對(duì)于MS較新的治療方法包括用干擾素(3-lb、干擾素(3-la和Copaxone(以前稱為共聚物1)對(duì)患者進(jìn)行治療。這三種藥物已經(jīng)顯示能顯著地降低疾病的復(fù)發(fā)率。這些藥物可經(jīng)肌肉內(nèi)或皮下自行給藥。但目前沒有一種治療方式能抑制脫髓鞘，能單獨(dú)促進(jìn)或使自發(fā)髓鞘再生發(fā)生或減少癱瘓。本發(fā)明的一個(gè)方面考慮了用本文公開的藥劑單獨(dú)或與其他標(biāo)準(zhǔn)的治療方式聯(lián)合治療MS。先天性代謝性疾病先天性代謝性疾病包括苯丙酮尿癥和其他的氨基酸尿癥、泰-薩二氏病、尼-匹二氏病、高歇氏病、赫爾勒氏綜合征、克臘比氏病和其他的腦白質(zhì)營養(yǎng)不良，這些疾病可影響髓鞘的發(fā)育，下面將詳細(xì)進(jìn)行描述。PKU是由苯丙氨酸羥化酶缺陷引起的一種遺傳性代謝錯(cuò)誤。該酶的缺失引起智力遲鈍、器官損害、不正常的姿勢，在孕婦發(fā)生PKU時(shí)，嚴(yán)重者可危及妊娠。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了研究PKU的小鼠模型。被鑒定有PKU的嬰兒優(yōu)選要保持無或低苯丙氨酸飲食。本發(fā)明的一個(gè)方面將這種飲食與本文公開的共軛物和組合物結(jié)合在一起應(yīng)用，以防止脫髓鞘和由于PKU而損害髓鞘再生細(xì)胞。典型的泰-薩二氏病出現(xiàn)在大約6月齡的受試者中，最后將引起受試者在5歲前死亡。該疾病是由于缺少己糖胺酶A(hexoaminidaseA，hexA)，該酶是在腦和神經(jīng)細(xì)胞中降解某種脂肪物質(zhì)所必需的。在缺少該酶時(shí)，這些物質(zhì)積累，引起神經(jīng)細(xì)胞破壞。另一種形式的hexA酶缺陷在生命中發(fā)生的較晚，被稱為青少年、慢性和成人發(fā)作型hexA缺陷。癥狀類似于典型的泰-薩二氏病的特征。也有酶缺陷的成人發(fā)作形式。目前對(duì)于該疾病/缺陷沒有治愈的病例或治療方法，僅有檢測胎兒疾病的子宮內(nèi)預(yù)防性檢測。因此，本文公開的共軛物和組合物可用于改善或阻止這種患者中神經(jīng)細(xì)胞的破壞。尼-匹二氏病分為三種類型急性嬰兒型、B型是一種較少見的慢性、非神經(jīng)型，C型是該疾病的一種生物化學(xué)和遺傳獨(dú)特型。在正常的個(gè)體中，細(xì)胞膽固醇輸送至溶酶體進(jìn)行加工，之后被釋放。從患尼-78匹二氏病受試者采集的細(xì)胞顯示在從溶酶體中釋放膽固醇的過程是有缺陷的。這引起膽固醇在溶酶體內(nèi)部的過量積聚，引起加工障礙。NPC1發(fā)現(xiàn)具有與其他蛋白中類似的已知的甾醇敏感區(qū)，該區(qū)被認(rèn)為在調(diào)節(jié)膽固醇運(yùn)輸中具有重要地位。對(duì)于尼-匹二氏病的A型和C型還沒有建立成功的治療方法。對(duì)于C型，推薦患者進(jìn)低膽固醇飲食。因此，本文公開的共軛物和組合物可用于改善或防止細(xì)胞的破壞。高歇氏病是一種由于基因突變引起的遺傳性疾病。通常，該基因是負(fù)責(zé)一種稱為葡萄糖腦苷脂酶的酶，機(jī)體需要該酶來分解脂肪、葡萄糖腦苷脂。在患有高歇氏病的患者中，身體不能正常地產(chǎn)生該酶，脂肪不能被分解。象泰-薩二氏病一樣，高歇氏病在來自東歐猶太人(德系猶太人)的后代中非常常見，盡管任何種屬的個(gè)體均可能被累及。在德系猶太人群體中，高歇氏病是最常見的遺傳病，發(fā)生率大約為1/450人。在公眾當(dāng)中，高歇氏病影響大約1/100,000人。1991年，酶替代治療成為高歇氏病的首種有效治療方法。該治療方法包括靜脈給予葡萄糖腦苷脂酶的修飾形式。要理解的是，本文公開的組合物和共軛物可單獨(dú)使用或更優(yōu)選地與葡萄糖腦苷脂酶聯(lián)合使用以治療患病的受試者。赫爾勒氏綜合征也稱為I型粘多糖增多癥，是一種重疊性疾病。這些遺傳疾病的共同點(diǎn)是在粘多糖細(xì)胞積聚在成纖維細(xì)胞中。這些疾病從遺傳學(xué)上是可區(qū)分的。成纖維細(xì)胞和骨髓移植似乎沒有什么幫助，因此需要可用于改善疾病嚴(yán)重程度和進(jìn)展的共軛物和組合物。在此公開的共軛物和組合物可給予受試者以改善疾病的進(jìn)展和/或嚴(yán)重性?？伺D比氏病(也稱為球形細(xì)胞腦白質(zhì)不良)是一種由半乳糖神經(jīng)酰胺酶(或半乳糖腦苷脂酶)缺陷引起的常染色體隱性疾病，該溶酶體酶能分解代謝髓鞘質(zhì)的主要脂質(zhì)成分。在法國的發(fā)病率估計(jì)為1:150,000出生兒。該病引起中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘。通常該病在出生的第一年內(nèi)就可發(fā)生，并迅速進(jìn)展，但也有報(bào)道少年、青年或成人發(fā)作型，其進(jìn)展的速度變化更大。從酶化驗(yàn)(半乳糖神經(jīng)酰胺酶缺陷)來建立診斷。有幾種天然的動(dòng)物模型(鼠、狗、猴)。克臘比氏病，象所有腦白質(zhì)營養(yǎng)不良一樣，尚沒有治愈的病例或有效的治療方法。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式是使用本文公開的組合物和共軛物來治療79或改善克臘比氏病和其他的腦白質(zhì)營養(yǎng)不良。腦白質(zhì)營養(yǎng)不良是一組遺傳上確定的進(jìn)行性疾病，其累及腦、脊髓和外周神經(jīng)。這些疾病包括腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥(ALD)、腎上腺髓質(zhì)神經(jīng)病變(AMN)、Aicardi-Goutiers綜合征、亞歷山大病(Alexander'sdisease).CACH(即，伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘質(zhì)形成減少或白質(zhì)消失疾病的嬰幼兒共濟(jì)失調(diào))、CADASIL(即，伴皮質(zhì)下梗死及腦白質(zhì)病的常染色體顯性腦動(dòng)脈病)、Canavan病(海綿狀退行性變)、腦腱性黃瘤病(CTX)、克臘比氏病(如上所述)、異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(MLD)、新生兒腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥、卵巢腦白質(zhì)營養(yǎng)不良綜合征(ovarioleukodystrophysyndrome)、佩-梅病(Pelizaeus-Merzbacherdisease)(X-連鎖的痙攣性截癱)、雷夫敘姆病(Refsumdisease)、vanderKnaap綜合征(伴皮層下囊腫的空泡腦白質(zhì)營養(yǎng)不良)和澤爾韋格氏綜合征(Zellwegersyndrome)。這些疾病沒有有效的治療方法，更不用說治愈的病例了。因此，需要治療或改善這些疾病癥狀的方法，如通過使用本文公開的組合物和共軛物。伴有異常髓鞘形成的神經(jīng)病有多種慢性免疫多發(fā)性神經(jīng)病變可引起患者的脫髓鞘。這些疾病的發(fā)作年齡根據(jù)病情而變化。這些疾病有標(biāo)準(zhǔn)的治療方法，且可與本文公開的組合物和共軛物聯(lián)合使用?；蛘撸疚墓_的組合物和共軛物可單獨(dú)使用?，F(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)治療方法包括下列方法表IV<table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage81</column></row><table>藥物和放射線誘發(fā)的脫髓鞘某些藥物和放射線可誘發(fā)受試者發(fā)生脫髓鞘作用。引起脫髓鞘的藥物包括但不限于氯喹、FK506、哌克西林、普魯卡因胺和齊美定。放射線也可誘發(fā)脫髓鞘。由放射線引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)毒性被認(rèn)為是由下列原因引起的(l)對(duì)血管結(jié)構(gòu)的損害，(2)去除了少突膠質(zhì)細(xì)胞-2星形膠質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞和成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞，(3)去除了海馬、小腦和皮質(zhì)中的神經(jīng)干細(xì)胞群，廣泛地改變細(xì)胞因子的表達(dá)。大多數(shù)放射線損害是由在治療某些癌癥中進(jìn)行的放療所引起的。參見Belka等人的綜述，2001&乂Ca證85:1233-9。但對(duì)于航天員，接觸放射線可能也是病因之一(Hopewell,1994Jt/v.>S/ace14:433-42)，在接觸放射性物質(zhì)的情況下也是如此。對(duì)于已經(jīng)接受了藥物或偶爾接觸或有意接觸放射線的患者，通過給予本文公開的共軛物或組合物之一可能對(duì)于防止脫髓鞘或促進(jìn)髓鞘再生是有益處的。涉及脫髓鞘的疾病其他引起脫髓鞘的遺傳性綜合征/疾病包括科凱恩綜合征(Cockayne'ssyndrome)、先天性髓鞘發(fā)育不良、法勃氏病(Farber'sdisease)、異染性腦白質(zhì)不良、佩利措伊斯-梅茨巴赫病(Peliszaeus-Merzbacherdisease)、雷夫余又姆病(Refsum)、阮病毒相關(guān)疾病和Salla病。科凱恩綜合征(CS)是一種很少見的遺傳性疾病，此病癥者對(duì)陽光很敏感，身材矮小，外表過早衰老。在典型形式的科凱恩綜合征(I型)中，癥狀是進(jìn)行性的，通常在1歲后出現(xiàn)明顯的癥狀?？苿P恩綜合征的早期發(fā)作型或先天型(II型)在出生時(shí)就很明顯。有意思的是，不象其他DNA修復(fù)疾病，科凱恩綜合征與癌癥沒有關(guān)系。CS是一種多系統(tǒng)的疾病，該病引起軀體和腦深刻的生長障礙，以及進(jìn)行性的惡病質(zhì)，視網(wǎng)膜、耳蝸和神經(jīng)變性，伴有腦白質(zhì)營養(yǎng)不良和脫髓鞘性祌經(jīng)病，但不增加癌癥發(fā)生率。在與UV(例如，陽光)接觸后，科凱恩綜合征患者不再發(fā)生轉(zhuǎn)錄耦合修復(fù)?，F(xiàn)在已經(jīng)鑒定出來在科凱恩綜合征中有兩種基因缺陷，CSA和CSB。CSA基因在第5號(hào)染色體上發(fā)現(xiàn)。兩種基因都編碼與轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)組件和DNA修復(fù)蛋白相互作用的蛋白。目前，還沒有發(fā)現(xiàn)治愈病例或?qū)υ摬“Y者的有效治療方法。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面是用本文公開的共軛物和組合物治療該病。先天性髓鞘發(fā)育不良有幾種名稱，包括先天性髓鞘形成障礙性神經(jīng)病、先天性髓鞘發(fā)育不良性多發(fā)性神經(jīng)病、先天性髓鞘發(fā)育不良(洋蔥球樣)多發(fā)性神經(jīng)病、先天性髓鞘發(fā)育不良神經(jīng)病、由髓鞘發(fā)育不良引起的先天性神經(jīng)病、髓鞘發(fā)育不良神經(jīng)病和CHN。在人類最常見的遺傳性疾病中，遺傳性外周神經(jīng)病是一組復(fù)雜的、臨床上和遺傳學(xué)上不同類的疾病，可產(chǎn)生外周神經(jīng)的進(jìn)行性惡化。先天性髓鞘發(fā)育不良是該組疾病中之一。該組疾病包括易發(fā)生壓迫性麻痹的遺傳性神經(jīng)病、夏科-馬里-圖思病(Charcot-Marie-Toothdisease)、代-索二氏綜合征(Dejerine-Sottassyndrome)和先天性髓鞘發(fā)育不良性神經(jīng)病。對(duì)于這些疾病還沒有已知的治愈病例或有效的治療方法。法勃氏病有幾種名稱，包括法勃脂肪肉芽腫病、神經(jīng)酰胺酶缺陷、酸性神經(jīng)酰胺酶缺陷、AC缺陷、N-月桂基鞘氨醇脫?；溉毕?、和N-酰基鞘氨醇氨基水解酶。如某些名稱所揭示的那樣，該疾病是由于酸性神經(jīng)酰胺酶(也稱為N-?；拾贝及被饷?，ASAH)缺陷引起的。酶缺乏引起未磺化的酸性粘多糖在神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中積聚?；加性摷膊〉幕颊咄ǔＴ?歲之前死亡。異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(MLD)是由芳基硫酸脂酶A缺陷引起的遺傳性疾病。它是影響髓鞘生長的稱為腦白質(zhì)營養(yǎng)不良的一組遺傳性疾病中的一種。MLD有三種形式晚期嬰兒型、青少年型、和成人型。在最常見的晚期嬰兒型中，在6個(gè)月至2年之間癥狀開始發(fā)作。嬰兒通常在出生時(shí)是正常的，但最終喪失以前獲得的能力。癥狀包括張力減退(肌緊張性低)、說話異常、心智能力喪失、失明、強(qiáng)直(即，不受控制的肌緊張)、痙攣、吞咽損害、癱瘓和癡呆。青少年型的癥狀從4至14歲之間開始出現(xiàn)，包括學(xué)校表現(xiàn)不佳、精神頹廢、共濟(jì)失調(diào)、癲癇發(fā)作(seizure)和癡呆。在成人型中，癥狀在16歲以后開始發(fā)生，癥狀可包括注意力不集中、抑郁、精神病學(xué)紊亂、共濟(jì)失調(diào)、震顫和癡呆。癲癇發(fā)作可出現(xiàn)在成人型中，但不如其他型多見。在所有三種形式中，精神頹廢通常是首先出現(xiàn)的體征。佩利措伊斯-梅茨巴赫病(也稱為圍產(chǎn)期嗜蘇丹性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良)是一種引起蛋白脂質(zhì)蛋白異常的X連鎖遺傳疾病。該異常通常在1歲前引起嬰兒死亡。對(duì)該疾病尚沒有已知的治療方法或治愈病例。雷夫敘姆病(也稱為植烷酸氧化酶缺陷、多神經(jīng)炎型遺傳性運(yùn)動(dòng)失調(diào)或IV型遺傳性運(yùn)動(dòng)與感覺神經(jīng)病，HMSNIV)是由于基因突變引起的，該基因編碼植垸酰輔酶A羥化酶(PAHX或PHYH)。主要的臨床表現(xiàn)是色素性視網(wǎng)膜炎、慢性多發(fā)性神經(jīng)病和小腦體征。植烷酸，一種罕見的支鏈脂肪酸(3,7,11，15-四甲基-十六垸酸)，積累在該種疾病患者的組織液和體液中，由于缺乏PAHX不能被代謝。每月進(jìn)行一次或兩次血漿除去法能有效地從體內(nèi)將該酸去除，并允許放寬對(duì)限制植烷酸攝取的飲食限制。朊病毒相關(guān)疾病包括Gerstmann-Straussler病(GSD)、克洛伊茨費(fèi)爾特-雅各布病(Creutzfeldt-Jakobdisease,CJD)、家族性致命性失眠，朊病毒蛋白異常亞型在這些疾病以及庫魯病和綿羊瘙癢病(在綿羊中發(fā)現(xiàn)的疾病)可作為傳染原。術(shù)語朊病毒來自"蛋白傳染原"(Pmsiner,^SWewce216:136-44，1982)。朊病毒相關(guān)蛋白(PRP)的蛋白水解裂解生成淀粉樣肽(amyloidogenicpeptide),該肽聚合成為不溶解的纖維。Salla病和其他類型的唾液酸尿癥(sialurias)是涉及唾液酸t(yī)'存問題的疾病。它們是常染色體隱性的神經(jīng)變性疾病，可以以嚴(yán)重的嬰兒型(g卩，ISSD)或緩慢進(jìn)行性的成人型(在芬蘭較常見)存在(即，Salla病)。主要的癥狀是張力減退、小腦性共濟(jì)失調(diào)和智力遲鈍。這些病癥和疾病也要考慮姑息性或改善性治療方法。引起脫髓鞘的其他病癥包括傳染后腦炎(也稱為急性播散性腦脊髓炎，ADEM)、腦膜炎和對(duì)脊髓的損傷。本文公開的組合物和共軛物也考慮用于治療這些其他的脫髓鞘疾患。下面提供了合成和生物學(xué)實(shí)施例來說明本發(fā)明，但這些實(shí)施例并不能被解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。除非另外說明，所有溫度均是攝氏度。實(shí)施例在下面的實(shí)施例中，下面的縮寫具有下面的含義。如果縮寫沒有定義，則它具有普遍接受的含義。ACN=乙腈bs=寬單峰d=雙重峰dd=雙組雙重峰Et3N=三乙胺g=克h和hr=小時(shí)HPLC=高效(或壓)液相色ilkg=千克kDa=千道爾頓L=升m=多重峰M=摩爾mg=毫克min=A牽中mL=毫升mm=暈米mM=毫摩爾mmol=毫摩爾s=單峰sat.=飽和的t=三重峰TFA=三氟乙酸TLC或tic=薄層色譜Ts=甲苯磺?；?微升|ig=微克(im=微米一般方法使用Gemini2000或BrukerAvance300光譜儀獲得質(zhì)子("H)和碳(13C)核磁共振譜(NMR)。通過在3.6ppm處大的、寬單峰可檢測到聚乙二醇(PEG)的存在。該信號(hào)的積分可根據(jù)PEG部分的大小而變化。共軛VLA-4拮抗劑的存在也可在共軛物的&NMR譜上檢測到。在二氧化硅60F254(EMD15341-1)預(yù)包被板或預(yù)包被的MKC18F二氧化硅60A(Whatman4803-110)上進(jìn)行薄層色譜。在Agilent質(zhì)譜儀(LC/MSDVL)上以陽離子單四級(jí)模式(singlequadmode)進(jìn)行質(zhì)譜。PEG產(chǎn)物和PEG共軛物的HPLC方法使用帶有VarianUV檢測器的VarianPrepStar(SD-1型)組件設(shè)定在210nm進(jìn)行制備性反相HPLC。方法A:在VydacC18，300A孔徑柱(250mmx21.2mm)上使用反相HPLC純化PEG產(chǎn)物和PEG共85軛物的樣品，一般使用35-50%ACN+0.1%TFA的梯度，在100min內(nèi)以20mL/min的速度進(jìn)行。方法B:在VydacC18，300A孔徑柱(250mmx50mm)上使用反相HPLC純化PEG產(chǎn)物和PEG共軛物的樣品，一般使用35-50%ACN+0.1%TFA的梯度，在100min內(nèi)以60mL/min的速度進(jìn)行。方法C:經(jīng)反相分析性HPLC確認(rèn)PEG產(chǎn)物和共軛物的純度，使用裝有WatersSymmetry300A孔徑，3.5(iC18柱(150mmx4.6mm)的AgilentSeries1100四元系統(tǒng)，使用40-50%ACNw/0.1%TFA的梯度，以1.5mL/min的流速進(jìn)行，該系統(tǒng)與設(shè)定在210nm的Agilent1100可變波長檢測器和Sedex75蒸發(fā)光散射檢測器(40°C，增益=5)連接。PEG試齊廿通過NOFCorporation(YebisuGardenPlaceTower，20-3Ebisu4-chome,Shibuya-ku，Tokyo150-6019)或NektarTherapeutics(150IndustrialRoad，SanCarlos,CA94070)獲得如下的PEG起始物質(zhì)40kDa4-臂PEG醇(N〇FCat.SunbrightPTE-40000);40kDa3-臂PEG醇(NOFCat.SunbrightGL-400)。實(shí)施例1氫氧化鈉(10g，0.25m)溶解在水中(300ml)。向此溶液中加入4-硝基苯丙氨酸(50.3g，0.22m)，攪拌至完全溶解。向得到的溶液中加入碳酸鈉(28.8g，0.26m)，在冰浴中將攪拌的懸液冷卻至+8。C。逐滴加入氯甲酸芐基酯(44.7g，0.26m),劇烈攪拌，將內(nèi)部溫度保持在+6T至+9T的范圍內(nèi)?；旌衔镌?6T另外攪拌lhr，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗，用醚沖洗(2x150ml)。水相置于大的錐形瓶(2L)中，小心地用稀釋的HCl水溶液酸化至pf^2，用乙酸乙酯萃取(4x500ml)。合并的萃取物用水沖洗，用MgS04干燥。過濾溶液，蒸發(fā)濾液，殘?jiān)芙庠谝宜嵋阴?150ml)中，并用己垸稀釋(500ml)。濾出晶體物質(zhì)，用冷的溶劑漂洗，空氣中干燥得到Cbz-4-硝基苯丙氨酸，75g(99.5。/。產(chǎn)率)。'H-NMR，86DMSO-d6,(5):12.85(bs,1H)，8.12(d，2H，J=9Hz)，7.52(d,2H,J=9Hz),7.30(m，5H),4.95(s，2H)，4.28(m，1H),3.32(bs,1H)，3.10(m,2H).13C-NMR(5):173.1，156.3，146.6,137.3,130.8,128.5,128,0，127.8,123.5，65.6,55.1，36.6.MS(m/z):367.1[M+23].Cbz-4-硝基苯丙氨斷75g，0.22m)溶解在二噁院(300ml)中。得到的攪拌溶液在干冰浴中冷卻至-2(TC(內(nèi)部)。加入液化的異丁烯(大約290ml)，然后分別間隔30min加入三等分的濃硫酸(35ml)。酸的加入是一個(gè)很強(qiáng)烈的放熱過程，伴隨著主要的聚合作用。在此階段有效的機(jī)械攪拌是很重要的。得到的混合物攪拌20hr，然后升溫至室溫，小心地倒入進(jìn)飽和的碳酸鈉水溶液(2L)中，并用乙酸乙酯(600ml)稀釋。分離有機(jī)層，用乙酸乙酯萃取水層(2x200ml)。合并的萃取物用水沖洗，用硫酸鈉干燥。過濾溶液，蒸發(fā)至干燥。殘?jiān)度脒M(jìn)乙酸乙酯/己垸混合物(500ml;1:1)中，通過硅膠填料(ca.2x2in)進(jìn)行過濾。另外用一定量的相同溶劑(總計(jì)2L)漂洗二氧化硅，蒸發(fā)濾液得到粘稠油狀的完全保護(hù)的4-硝基苯丙氨酸，73g(兩步后為83%)。'H-NMR,CDC13,(5):8.12(d，2H，J=8.4Hz),7.36(m,7H),5.35(m,1H)，5,10(m,2H)，4.57(m,1H)，3.31(m,2H),1,43(s,9H).'3C-NMR,CDC13，(5):169.7，155,3，146.9,143.9,136.0,130.2，128.4,128.2，128.0,123.3,82.9，66.9，54.7，38.2，31.4,27.8，13.9.MS(m/z):423.1[M+23].保護(hù)的4-硝基苯丙氨酸(73g，0.18m)溶解在乙醇(500ml)中，加入氧化鉑催化劑(1.5g)。得到的溶液在氫氣(50-60psi)中在室溫下劇烈攪拌直至氫吸附停止(3hr)。將催化劑過濾出，濾液蒸發(fā)至干燥，殘?jiān)度脒M(jìn)乙酸乙酯(200ml)中，通過硅膠填料(2x2in)過濾，使用乙酸乙酯-己烷混合物(3:2，2L)漂洗二氧化硅。濾液濃縮至大約200ml，加入己烷(500ml)。過濾出結(jié)晶產(chǎn)物，用冷溶劑漂洗，并風(fēng)干。產(chǎn)量-56g，84%。'H-NMR，CDC13,(5):7.30(bs,5H),6.92(d,2H,J=8.1Hz),6.58(d,2H，J=8.1Hz),5.21(m，1H)，5.10(d,2H，J=2.1Hz),4.46(m,1H)，3.59(bs,2H),2.97(s,2H，J=5.4Hz)，1.42(s,9H).13C-NMR,CDC13，(5):170.6,145.1,136.3，130.2，128.3，127.9，125.6，115.0,81.9,66.6，55.2,37.4,27.8MS(m/z):393.1[M+23].87實(shí)施例2實(shí)施例1產(chǎn)物，4-氨基苯丙氨酸(20g，0.054m)溶解在乙醇(200ml)中，用Himig堿(21g，0.162m,3當(dāng)量)和2-氯-3-硝基吡啶(10.3g，0.65m,1.2當(dāng)量)處理。得到的溶液在氮?dú)鈿夥罩袛嚢?，并加熱回?4hr。LC分析表明有小量未反應(yīng)的胺存在。另外加入小量的氯硝基吡啶(l.lg，0.13當(dāng)量)并繼續(xù)回流24hr。冷卻反應(yīng)混合物，并蒸發(fā)至干燥。殘?jiān)芙庠谝宜嵋阴?600ml)中，獲得的溶液用水(lx200ml)、稀釋的檸檬酸水溶液(0.2N,2x200ml)、鹽水(lx200ml)沖洗，用硫酸鈉干燥。濾出固體，蒸發(fā)濾液得到37g深紅色油狀、含有預(yù)期產(chǎn)物，該產(chǎn)物中含有過量的氯硝基吡啶。不純的產(chǎn)物通過快速色譜(Biotage75L系統(tǒng))純化，用乙酸乙酯:己垸(3:17)混合物洗脫。合并含有純產(chǎn)物的餾分，蒸發(fā)得到深紅色，粘稠油狀的產(chǎn)物，26g(99。/。)。'H-NMR，CDC13,(5):10.10(s,1H),8.49(m,2H),7.57(d，2H，J=9Hz)，7.35(bs，5H)，7.19(d,2H，J=9Hz),6,84(m,1H),5.30(m，1H),5.13(d,2H，J=3Hz),4.57(m，1H)，3.11(m,2H),1.45(s,9H).13C-NMR，CDC13,(5):170.4,155.5，155.1，150.0,136.7，136.3，135.4，132.4，129.9,128.5，128.3,128.0,127.9，122.2,113.7,82.2,66.7，55.1，37.7，27.8,20.9.MS(m/z):493.1[M+l]，515.1[M+23].紅色的硝基化合物(26g，0.054m)溶解在THF(350ml)中，加入氧化鉑催化劑(1.35g)。得到的混合物在氫氣氣氛(50-60psi)下劇烈攪拌直至氫吸附停止(2hr)。濾出催化劑，濾液蒸發(fā)至干燥。殘?jiān)芙庠谝宜嵋阴?100ml)中，用己烷(50ml)稀釋直至開始結(jié)晶?；旌衔镞M(jìn)一步用乙酸乙酯/己烷(l:l)混合物(300ml)稀釋，在冰箱中靜置3hr。濾出結(jié)晶固體，用冷的溶劑漂洗，風(fēng)干得到產(chǎn)物，23g，94%。'H-NMR,CDC13,(5):7.81(dd，1H，Jl=1.5Hz，J2=4.8Hz)，7.33(bs，5H),7.17(d，2H,J=8.4Hz)，7.03(d,2H,J=8.4Hz),6.96(dd,1H,JH.5Hz，J2=7.5Hz),6.75(dd,1H，Jl=5.0Hz,J2=7.7Hz)，6.22(s，1H)，5.31(m,1H)，5.09(bs，2H)，4.50(m,1H)，3.41(bs,2H)，3.02(m,2H),1.43(s，9H).13C-NMR，CDC13，(5):170.6，155.6,145.5,140.21，138.8,136.3,130.8,129.9，128.5,128.3,127.9,123.4,118.2,117.0，82,0,66.6,55.2,37.4，27.9.MS(m/z):407.1[M-56],463.1[M+l],485.1[M+23].氨基吡啶(19g，0.041m)懸浮在二氯甲垸(200ml)中并加入CDI(12g,0.074m，1.8當(dāng)量)。得到的混合物在室溫下攪拌20hr。反應(yīng)混合物用飽和的碳酸氫鹽水溶液(2x100ml)、鹽水(lx100ml)沖洗，用硫酸鈉干燥。濾出固體，濾液蒸發(fā)至干燥。殘?jiān)芙庠谝宜嵋阴?熱，300ml)中，并進(jìn)行結(jié)晶。濾出結(jié)晶產(chǎn)物，用冷的乙酸乙酯漂洗，風(fēng)干得到19.9g，81。/。的咪唑酮。'H扁NMR,CDC13,(5):10.63(s,1H),8.06(d,1H,J=3Hz),7.66(d，2H，J=9Hz),7.32(m,8H)，7.05(m,1H)，5.36(m，1H),5.13(s,2H)，4.59(m，1H),3.17(m，2H),1.45(s,9H).13C-NMR，CDC13,(5):170.4，155.6，154.3,143.8,141.0，136.2，135.8，131.8，130.2,128.3,128.0,125.9，122.2，118.3,116.0,82.4，66.8，55.0,37.7，27.8.MS(m/z):433.1[M-56],489.2[M+l],511.2[M+23].實(shí)施例、3HPCI5/POCI3oH2N\CH20、K^。H-—HS-、吡啶-3-磺酸(125g,0.78m)置于1L裝有機(jī)械攪拌器、回流冷凝器、溫度計(jì)和氮?dú)膺M(jìn)氣口的3頸燒瓶中。下一步，加入五氯化磷(250g，1.19m，1.5當(dāng)量)，然后立即加入三氯氧磷(330ml，3.8m，4.5當(dāng)量)。開始燒瓶的內(nèi)容物在室溫下攪拌30min，然后將其緩慢地進(jìn)行溫和回流(內(nèi)部溫度大約為110°C)1小時(shí)，在此溫度保持大約3.5hr,然后在后面的12hr冷卻至室溫。在此期間觀察到有氣體放出。在減壓條件(12mmHg/4(TC)下脫除揮發(fā)物，黃色的半固體殘?jiān)肈CM(1L)稀釋。漿料緩慢地倒入攪拌的冰冷卻的飽和碳酸氫鹽水溶液中，保持pHN7。觀察到有氣體放出。分離有機(jī)層，水層用DCM反萃取。合并的萃取物用89冷的飽和碳酸氫鹽水溶液、鹽水沖洗，用硫酸鎂干燥。濾出固體，蒸發(fā)濾液，得到淡黃色油狀液體，吡啶-3-磺酰氯，123g(93。/。純度；理論值88%)。'H-NMR,CDC13,(5):9.26(d,1H)，8.98(dd,1H)，8.34(m,1H)，7.62(m,1H).13C-NMR,CDC13,(5):155.3,147.4,140.9,134.6,124.2.MS(m/z):178.0[M+l].L-青霉胺(150g，1.0m)溶解在DI水(1500ml)中并攪拌，在冰浴中冷卻至+8。C，用福爾馬林(150ml,37。/。水溶液)處理。反應(yīng)混合物在+8。C攪拌2hr，然后去掉冷卻浴，繼續(xù)攪拌12hr。在減壓條件(14mmHg/5(T)下將清亮的溶液濃縮得到白色的殘?jiān)Ｖ匦聭腋」腆w，然后溶解在熱的MeOH(2500ml)中，并在室溫下靜置12hr。濾出白色的蓬松沉淀物，用冷的甲醇漂洗。濃縮濾液，再次進(jìn)行結(jié)晶。收集的沉淀物與首次收獲的產(chǎn)物合并，在真空箱中在55。C，45mmHg下干燥24hr。(R)-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸的產(chǎn)量為138g(>99%純度；理論值86%)。'H-窗R，DMS0-d6，(5):4.25(d,1H)，4,05(d，1H)，3.33(s，1H),1.57(s，3H)，1.19(s,3H).13C-NMR，DMSO-d6,(5):170.8,74.4，57.6，51.8,28.9,27.9.MS(m/z):162.3[M+l].在裝有機(jī)械攪拌器和溫度計(jì)的4L反應(yīng)器中，用磷酸二氫鉀(43g，0.31m)和磷酸氫二鉀(188.7g,1.08m)在DI水(2L)中制備緩沖溶液。加入(R)-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸(107g，0.675m)，攪拌至完全溶解。在冰浴中溶液冷卻至+8°C。單獨(dú)制備的吡啶-3-磺酰氯(124g，0.695m)/DCM(125ml)溶液逐滴加入至反應(yīng)器中，劇烈攪拌1hr。監(jiān)測反應(yīng)混合物的pH，4hr后發(fā)現(xiàn)pH:5，加入固體碳酸氫鹽調(diào)整至pEN6?；旌衔锝?jīng)過18hr升溫至室溫。用稀釋的硫酸水溶液將pH調(diào)整至2，攪拌lhr，將沉淀的黃色固體濾出，用水漂洗至中性。固體濾餅轉(zhuǎn)移至2L錐形瓶中，懸浮在DCM(500ml)中，偶爾回蕩5min，再次過濾。濾餅用DCM沖洗并風(fēng)干。標(biāo)題化合物(R)-5，5-二甲基-3-(吡啶-3-基磺酰基)噻唑烷-4-羧酸的產(chǎn)量為148.9g(98%純度；理論值73%)。'H-NMR，DMSO-d6，(5):9.05(d,1H)，8.89(m，1H)，8.32(m，1H)，7.69(m，1H)，4.68(q，2H),4.14(s,1H)，1.35(s，3H),1.29(s，3H).13C-NMR，DMSO-d6,(5):170,0，154.3，147.9，135.8，134.1，124.8，72.6,54.3,50.2,29.4,25.0.MS(m/z):303.2[M+l].實(shí)施例4實(shí)施例2產(chǎn)物(52g,0.106m)在MeOH(450ml)中混合成漿，加入氫化催化劑(8.7g，5%Pd/C，Degussa)，混合物在氫氣(60psi)中攪拌直至不再進(jìn)一步吸附(大約2hr)。加入THF(150ml)溶解沉淀的固體，溶液通過Celite填料過濾，使用DCM清洗濾器。濾液蒸發(fā)至干燥，再次溶解在DCM(300ml)中，并再次汽提(stripped)。該操作重復(fù)2次。泡沫狀的固體在高度真空中保持3hr。標(biāo)題化合物的產(chǎn)量為38.3g(理論值101%)。'H-固R，CDC13,(5):8.08(m,1H),7.56(ABq,4H),7.37(m,1H),7.06(m,1H),3.68(m，1H)，2.03(m,2H),1.49(s,9H),13C-NMR，CDC13，(5):173.8,154.6,143.9，141.0，137.4，131.5，130.2，126.1,122.3,118.0,116.1，81.4,56.0，40.6，27.9.MS(m/z):299.3[M-56],355.4[M+l],377.4[M+23].實(shí)施例4產(chǎn)物(38.3g,假設(shè)0.106m)溶解在DCM(500ml)中，并依次用下列的化合物處理N-甲基嗎啉(27g，30ml,0.266m;2.5當(dāng)量)、HOBt(17.3g，0.128m;1.2當(dāng)量)、和實(shí)施例3的產(chǎn)物(33.8g，0.11291m;1.06當(dāng)量)。得到的不均勻溶液在冰浴中冷卻至+4T，一次性加入EDC(22.5g，0.117m;1.1當(dāng)量)進(jìn)行處理。攪拌反應(yīng)混合物，使其在其后的4hr內(nèi)升溫至室溫，然后繼續(xù)保持18hr。將溶劑汽提，殘?jiān)芙庠谝宜嵋阴?1.2L)中，用飽和的碳酸氫鹽水溶液(2x250ml)、水(250ml)、鹽水(300ml)沖洗，用硫酸鎂干燥。溶液過濾，蒸發(fā)至干燥，得到淡橙黃色、粘稠油狀產(chǎn)物，76g(>>100%)。粗產(chǎn)物通過快速色譜在硅膠(Biotage75L，在乙酸乙酯/甲醇(3%)混合物中)上進(jìn)行純化。含有純產(chǎn)物的餾分合并，蒸發(fā)得到54g標(biāo)題化合物(產(chǎn)率83%)。'H-NMR,CDC13,(S):10.37(s，1H),9.11(s,1H)，8.87(m,1H),8.19(m，1H),8.05(m:1H),7.56(ABq,4H),7.52(m,1H),7.36(m,1H),7.06(m,2H)，4.83(m，1H),4.58(ABa,2H),3.96(s,1H),3.19(m，2H),1.49(s,9H)，1.22(s,3H),1.18(s，3H).13C-NMR，CDC13,(5):169,7,167.6，153.9，148.4,143.8，140.9,135.8,135.6,132.9，131.9,130.2，125.9,123.8,122.1，118.0，115.9,82.8，73.6，60.3,54.8,53.7,50.6,37.8，29.1，27.8,23,9,14.1.MS(m/z):583.3[M-56],639.4[M+l],661.3[M+23].向冰冷卻的三氟丁酸乙酯(15g，89mmol)和甲酸乙酯(36mL，444mmol)的THF(200mL)溶液中，在N2中在25分鐘內(nèi)加入1MKOtBu/THF(107mmo1,107mL)。15分鐘后，去除冰浴，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。然后另外加入甲酸乙酯(18mL，222mmol)，反應(yīng)混合物攪拌過夜。濃縮反應(yīng)混合物，殘?jiān)诶湟颐?100mL)和冷水(300mL)之間萃取。水相的pH用濃HCl調(diào)整至2。產(chǎn)物用二氯甲烷(lx100mL,45x75mL)萃取，合并的有機(jī)萃取物用鹽水(lx100mL)沖洗，干燥(MgS04)，過濾，濃縮得到稠厚的油狀標(biāo)題化合物，靜置固化，10.2g(58.5%)。MS(m/z)=198(M+H)+。實(shí)施例6實(shí)施例7AN向?qū)嵤├?產(chǎn)物(IOg，51mmol)和二乙基胍硫酸鹽(8.3g，25.2mmol)的EtOH(60mL)溶液中，在N2中在10分鐘內(nèi)加入NaOEt的21%EtOH(20.7mL，55.5mmol)溶液。然后反應(yīng)混合物加熱回流5小時(shí)。將不均勻的溶液冷卻，倒入冷水(100mL)中得到均勻的溶液。溶液的pH用濃HC1和1NHC1調(diào)整至大約3.5。從溶液中沉淀的固體通過過濾收集。淡褐色固體用水沖洗，風(fēng)干，得到2.9g，(23%)標(biāo)題化合物。MS(m/z)=250(M+H)+,'H畫R(300MHz，CD3OD)S7.65(brs，1H)，3.55(q,4H),3.30(q，2H)，1.25(t，6H).實(shí)施例7的產(chǎn)物(2.0g，8.02mmol)、DIEA(1,5mL，8.83mmol)、DMAP(.98g，0.8mmol)和二氯甲烷(30mL)投入燒瓶中。混合物冷卻至0。C，加入三氟乙酸酐(1.5mL，8.83mmo1)。反應(yīng)變成均相，在0°C攪拌3小時(shí)。混合物用飽和的NaHC03淬滅，用二氯甲烷萃取。有機(jī)相用0.2N檸檬酸沖洗，經(jīng)Na2S04干燥，過濾，真空濃縮得到2.87g(94%)褐色固體的標(biāo)題化合物。NMR(300MHz,CDC13)58.28(s,1H)，3.65-3.52(m，4H),3.29-3.19(q,2H),1.22-1.17(t，6H).實(shí)施例8實(shí)施例8的產(chǎn)物(1.3g，3.5mmol)、H-Phe(p-N02)OtBu(1.1g，4.2mmol)和DIEA(0.9mL,5.3mmol)的CH3CN(14mL)溶液在N2中加熱回流過夜。第二天另外加入H-Phe(p-NO2)OtBu(0.8g，3mmo1)，繼續(xù)回流3天。然后反應(yīng)混合物冷卻和濃縮。殘?jiān)度胫罞tOAc(50mL)中，有機(jī)部分用0.5NKHS04(3x50mL)、水(lx50mL)、鹽水(lx10mL)沖洗，干燥(MgS04)，過濾，濃縮為褐色的膠。粗物質(zhì)通過快速色譜(5:1己烷/EtOAc)純化得到640mg(38%)金色膠狀的標(biāo)題化合物。TLC:3:1己烷/EtOAc，Rf=0.30，MS(m/z)=498(M+H)+，'HNMR,(300MHz，CDC13)58.19(d，2H)，7.80(s，1H),7.25(d,2H)，5.19(brd,1H),4.95(q，1H)，3.70-3.50(m，4H),3.45-3.25(m，2H),3.10(q，2H)，1.40(s，9H)，1.05(t,6H).實(shí)施例10實(shí)施例9的產(chǎn)物(635mg，1.27mmol)溶解在純EtOH(5mL)中，向其中加入35mgPd/C，10wt%。反應(yīng)氫化(45psiH2)2.5小時(shí)，期間加入50mgPd/C，10wt%，反應(yīng)混合物再次氫化(45psiH2)過夜。反應(yīng)混合物通過硅藻土墊過濾，濃縮濾液得到452mg(76。/。)標(biāo)題化合物。MS(m/z)=468(M+H)+，'HNMR(300MHz，CDC13)57.75(s，1H)，6.90(d,2H)，6.60(d，2H)，5.05(brd，1H)，4.80(q，1H)，3.70—3.45(m，6H),3.10—2.90(m，4H)，1.40(s，9H),1,15(t，6H).94實(shí)施例11實(shí)施例10產(chǎn)物(59Smg,1.28mmol)、2-氯-3-硝基吡啶(243mg,1.53mmol)和DIEA(0.67mL，3.83mmol)的EtOH(5mL)溶液在N2中加熱回流。第二天，反應(yīng)冷卻，另外加入2-氯-3-硝基吡啶(40mg，0.25mmol)禾口DIEA(O.llmL,0.60mmo1)，反應(yīng)加熱回流1天。然后濃縮反應(yīng)混合物，殘?jiān)度胫罞tOAc(20mL)中。有機(jī)相用水(2x20mL)沖洗。合并的洗滌水溶液用EtOAc(2x10mL)反萃取。合并的有機(jī)萃取物用0.2N檸檬酸(3x20mL)、水(lxlOmL)、飽和的NaHC03(3x20mL)、鹽水(lxlOmL)沖洗，干燥(MgS04)，過濾，汽提為橙黃色的膠。粗產(chǎn)物通過快速色譜純化，用4:1己烷/EtOAc(Rf=0.14)洗脫得到610mg(81%)紅色油狀的標(biāo)題化合物。MS(m/z)=590(M+H)+，'HNMR(300MHz，CDC13)510.10(s,1H),8.55(d,1H),8.50(m，1H),7.79(s，1H),7.75(d,2H)，7,15(d，2H),6.80(q，1H)，5.10(brd，1H)，4.卯(m，1H)，3.70-3.45(m，4H)，3.25(m,2H)，3.10(q，2H),1.40(s,9H),U0(t，6H).實(shí)施例12向?qū)嵤├?1產(chǎn)物(610mg,1.03mmol)/純EtOH(5mL)溶液中加入60mgPd/C，10wt%?；旌衔餁浠?45psiH2)過夜。第二天，反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，濾液濃縮得到500mg(87。/。)標(biāo)題化合物。MS(m/z)=560(M+H)+,'HNMR(300MHz,CDC13)57.85(d,2H)，7.80(s，1H)，7.20(d，2H)，7.05(d,2H),7.00(d,1H),7.75(m,1H),6.20(brs1H),5.15(brs,1H),4.85(m，1H),3.75—3.45(m,4H)，3.40(brs,2H)，3.15(m:2H)，3.05(q,2H),1.40(s,9H),1.15(t，6H).實(shí)施例13實(shí)施例12產(chǎn)物(141mg，0.250mmol)和CDI(62mg，0.378mmol)的CH2C12(3mL)溶液攪拌過夜。第二天，另外加入CDI(30mg,0.185mmol),反應(yīng)另外攪拌1天。然后將反應(yīng)混合物濃縮，投入至EtOAc(10mL)中，有機(jī)部分用0.2N檸檬酸(3x5mL)、水(lx5mL)、飽和NaHC03(3x5mL)、鹽水(lx5mL)沖洗，干燥(MgS04)，過濾，濃縮得到69mg(47n/。)泡沫狀的標(biāo)題化合物，該化合物不需進(jìn)一歩純化就可使用。MS(m/z)=586(M+H)+，'HNMR(300MHz,CDC13)58.20(brs，1H),8.05(d,1H),7.80(s,1H)，7.65(d,2H),7.90(m,3H),7.05(m，1H),5.15(brd,1H)，4.95(m，1H),3.70—3.45(m，4H)，3.25(appd，2H),3.10(q,2H),1.40(s，9H)，1.15(t,6H).實(shí)施例14N々N向4,6-二氯-5-氨基嘧啶(5.0g，30.7mmol)/DMSO(30mL)溶液中加入Na2S'9H20(7.4g，30.8mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜。然后向混合物中加入水(40mL)，溶液減壓蒸發(fā)至大約6mL。向此溶液中加入濃HCl(0.5mL)和水以沉淀產(chǎn)物。過濾溶液，用水沖洗橙黃色固體，干燥得到4.3g(86%)標(biāo)題化合物。'HNMR(300MHz,DMSO-d6)55.84(2H,s)，7.79(1H,s),14.37(1H，brs);MS(m/z):MH+=162.實(shí)施例15向溶解在濃NH4OH(4mL)中的實(shí)施例14產(chǎn)物(4.3g,26mmol)中加入EtOH(40mL)。向此溶液中分批加入雷內(nèi)鎳(過量)。反應(yīng)在室溫下攪拌過夜，然后在8(TC加熱2hr。混合物通過硅藻土過濾，濃縮濾液。粗產(chǎn)物通過快速色譜在二氧化硅上使用EtOAc/己烷進(jìn)行純化，得到1.6g(47%)的黃色固體標(biāo)題化合物。'HNMR(300MHz,DMSO-d6)S5.90(2H,s),8.20(2H，s);MS(m/z)MH+=130.實(shí)施例16向MeOH(20mL)和HOAc(0.5mL)中的實(shí)施例15產(chǎn)物(0.51g，3.9mmol)中加入CH3CHO(0.52mL,9.2mmol)。然后一次性加入NaBH3CN(5卯mg，9.2mmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌過夜，另外加入HOAc、CH3CHO和NaBH3CN。反應(yīng)攪拌過夜，濃縮，殘?jiān)度脒M(jìn)EtOAc和飽和NaHC03中。分離的水層用EtOAc反萃取。合并的有機(jī)層干燥，濃縮成殘?jiān)?。殘?jiān)芙庠贛eOH中，如上所述用HOAc、CH3CHO和NaBH3CN處理。在上述處理步驟之后，粗產(chǎn)物通過快速色譜在二氧化硅上使用EtOAc/己烷進(jìn)行純化，得到0.35g(57%)黃色油狀的標(biāo)題化合物。'H麗R(300MHz，CDC3)51.35(3H，q，12Hz),3.29(2H,m)，4.21(1H，bs),8.04(1H，s),8.36(1H,s);MS(m/z):MH+=158,實(shí)施例17向溶解在DMF(1mL)中的實(shí)施例16產(chǎn)物(70mg，0.45mmol)中加入TEA(93^L)和異煙酰氯(0.12g,0.67mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2天，然后在EtOAc和飽和的NaHC03之間萃取。分離的水層用EtOAc反萃取。合并的有機(jī)層干燥，濃縮得到67mg(57n/。)的標(biāo)題化合物，該化合物不需進(jìn)一步純化就可使用。'HNMR(300MHz,CDC13)S1.26(3H)，3.65-3,69(1H),4.21(1H)，7.17(2H),8.43(1H),8.54(2H)，8.86(1H)注意'HNMR顯示，所有峰都很寬大證明有旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體存在；MS(m/z):MH+=263。實(shí)施例18向含有實(shí)施例17產(chǎn)物(O.llg,0.42mmol)和實(shí)施例8產(chǎn)物(0.135g，0.38mmol)的IPA(2.5ml)溶液中加入DIEA(0.35ml,1.9mmol)。反應(yīng)混合物在密封管中在13CTC下攪拌2天。粗混合物濃縮，油通過快速柱色譜使用0-10。/。MeOH/CH2Cl2溶劑梯度進(jìn)行純化，得到油狀的標(biāo)題化合物。'HNMR(300MHz,CDC13)51.16(1.2H,m)，1.26-1.31(1.8H,m):1.50-1.53(9H,d,J=9Hz),3.0(1H,m),3.2(0.8H,m)，3.36(1.2H,m)，4.12-4.18(1.2H，m)，4.96-5.10(.8H，m),5.80-5.95(1H，m),6.93-6.96(1H,m),7.07(1H,m),7.31-7.45(5H,m)，7,66-7.75(3H,m),8.06(1H,m):8.44-8.51(2H，m);HPLC/MS:1.29min的單峰，MH^581.實(shí)施例19,NN人NOMeN〇2在0°C下在N2中向2，4-二氯-5-石肖基嘧啶(2.0g，10.3mmol)/MeOH(7mL)中逐滴加入NaOMe(0.5M，于MeOH中，25mL)。添加結(jié)束后，反應(yīng)混合物在0°C攪拌15min。然后加入二乙胺(5mL)，混合物在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物濃縮，殘?jiān)贓tOAc和H20之間萃取。干燥有機(jī)層，并濃縮成殘?jiān)ㄟ^快速色譜在二氧化硅上使用EtOAc/己烷純化，得到米白色固體的標(biāo)題化合物(l.lg，4.9mmo1，47%產(chǎn)率)。NMR(300MHz，CDC13)51.26(6H，t,J=6.6Hz),3.70(4H,m)，4.08(3H，s),9.01(1H，s);HPLC/MS:MH+=227.實(shí)施例20,N、N人NOMeNH2實(shí)施例19產(chǎn)物(1.1g，4.9mmol)于MeOH/EtOAc(l:l，20mL)中用Pd/C(5%degussa，0.5g)和H2(50psi)在Parr振蕩器中還原過夜。過濾反應(yīng)混合物，濾液減壓濃縮得到固體的標(biāo)題化合物(0.85g，4.3mmol，88.5%產(chǎn)率)。'HNMR(300MHz，CDC13)5U8(6H,t，6.9Hz),3.03(2H,br)，3.57(6H,t，6.9Hz),3.96(3H,s)，7.71(1H,s);HPLC/MS:固+=197.99實(shí)施例21向含有實(shí)施例20產(chǎn)物(0.85g,4.3mmol)的CH2C12(15mL)和TEA(1.4mL，10mmol)中加入異煙酰氯鹽酸鹽(1.13g，6.3mmol)。15min后，TLC顯示沒有初始原料?；旌衔镌贓tOAc和飽和的NaHC03之間進(jìn)行萃取。水層用EtOAc沖洗兩次。合并的有機(jī)層用飽和NaHC03和鹽水沖洗。在MgS04上干燥并過濾。濾液濃縮得到褐色固體的標(biāo)題化合物(1.3g,4.3mmol，100%產(chǎn)率)。'H應(yīng)R(300MHz,CDC13)51.20(6H，t,J=6.9Hz)，3.60(4H，q，6.9Hz)，3.96(3H，s)，7.72(2H,d,/=6.0Hz),7.75(m，bs),8.80(2H，d,J=6.0Hz)，8.89(1H，s);HPLC/MS:MH+=302.實(shí)施例22向?qū)嵤├?1產(chǎn)物(100mg,0.33mmol)/THF(1mL)中加入KOtBu(1M，在THF中，0.5mL)，然后緩慢地加入Etl(40pL，0.5mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。TLC顯示初始原料消失。混合物在EtOAc和H20之間進(jìn)行萃取。水層用EtOAc沖洗。合并的有機(jī)層用飽和NaHC03和鹽水沖洗。干燥濃縮得到標(biāo)題化合物(90mg，0.27mmol，83%)，該化合物不需進(jìn)一步純化就可使用。"HNMR(300MHz，CDCl3)51.10(9H,m),3.47(5H，m),3.92實(shí)施例23向?qū)嵤├?2產(chǎn)物(200mg，0.61mmol)/DMF(4mL)中加入EtSNa(66mg，0.79mmol)，反應(yīng)混合物在100°C加熱1hr。LC/MS顯示仍有初始原料存在。加入另一部分NaSEt(66mg，0.79mmo1)，反應(yīng)另外加熱2hr。LC/MS顯示僅有產(chǎn)物。減壓去除DMF，加入水(10mL)，然后加入濃HC1(0.132mL)。蒸發(fā)溶劑得到殘?jiān)?。該殘?jiān)芙庠贓tOH中，并過濾。濃縮濾液得到標(biāo)題化合物(190mg，100%)，該化合物不需進(jìn)—步純化就可使用。'HNMR(300MHz,CD3OD)51.24(9H,m)，3.60(4H,m),3.60-4.00(2H，br)，8.12(3H，d，5.7Hz),8.92(2H，d，5.7Hz);HPLC/MS:MH+=316.實(shí)施例24向?qū)嵤├?3產(chǎn)物(70mg，0.22mmol)/POCl3(3mL)中在室溫下加入二乙基苯胺(30pL)。反應(yīng)混合物加熱至10(TC30min。然后濃縮。殘?jiān)贓tOAc和H20之間進(jìn)行萃取。有機(jī)層用H20沖洗兩次。然后干燥，濃縮得到標(biāo)題化合物(50mg，0.15mmol，68%)，該化合物不需進(jìn)一步純化就可用于下一反應(yīng)中。HPLC/MS:MH+=334。實(shí)施例25<formula>formulaseeoriginaldocumentpage102</formula>向含有實(shí)施例24產(chǎn)物(50mg,0.15mmol)和實(shí)施例8產(chǎn)物(60mg，0.17mmol)的IPA(0.75mL)溶液中加入D正A(0.15mL，0.8mmol)。反應(yīng)混合物在密封管中在130度攪拌7天。粗混合物濃縮，殘?jiān)ㄟ^制備性HPLC和硅膠快速色譜進(jìn)行純化，得到米白色的固體(10mg)。1H麗R(300MHz,CDC13)S1.10-1.30(9H,m)，1.48(4.5H，s),1.51(4.5H,s)，2.80-3.38(3H,m),3.53(4H，m),4.05-4.30(1H，m)，4.83(0.5H，m)，4.96(0.5H,m),5.15-5.50(1H，m),6.95-7.10(2H,m),7.25-7.50(5H,m)，7.69(0.5H,d,J=8.4Hz),7.76(0.5H,d,J=8.4Hz),8.08(1H，d，J=5.1Hz),8.51(2H，m)，8.83(0.5H,br),8.95(0.5H,br);HPLC/MS:MH+=652.實(shí)施例26步驟AHQoHO'。力'nbH40kDa3-臂PEG醇NOF公司&oN—oVN、.No實(shí)施例26B實(shí)施例26A40kDa3-臂PEG醇(0.25g,0.00625mmol)、實(shí)〗的產(chǎn)物(0.04g,實(shí)施例實(shí)施例26Ao,一一t0.056mmol)和三苯基膦(0.025g，0.094mmol)通過共沸蒸餾從甲苯(5mL)中進(jìn)行干燥。一半的體積被蒸餾掉(2.5mL)，混合物冷卻至室溫。加入CH2Cl2(0.5mL)使反應(yīng)物成為均相。逐滴加入偶氮二羧酸二乙酯(0.015mL,0.094mmol)，反應(yīng)攪拌48小時(shí)。HPLC方法C顯示初始的PEG醇完全消失。反應(yīng)物真空濃縮得到白色固體的實(shí)施例26A的叔丁酯。實(shí)施例26B實(shí)施例26A(0,2g，0.005mmol)溶解在甲酸(3mL)中，在40°C加熱24小時(shí)。反應(yīng)物真空濃縮，根據(jù)HPLC方法A純化得到0.1g(48。/。)白色固體的實(shí)施例26B。HPLC方法C測定共軛物>99°/。純度(滯留時(shí)間=8.1分鐘)。'HNMR(CDC13)59.08(bs,3H)，8.84(bs，3H),8.18-8.16(d,3H),8.02-8.00(d,3H)，7.67-7.61(m,6H)，7.47-7.38(m，9H),7.08-7.04(m，3H),6.91(m,3H),4.88(m，3H),4.62-4.49(dd,6H)，4.13(m,6H)，3.64(bs，5919HPEG),3.23(m，6H),1.25-1.24(d,18H).步驟BGL400SunbrightPEG(50.0g,NOFlot#M4N594)、實(shí)施例5的產(chǎn)物(7.19g，與GL400相比9當(dāng)量，3當(dāng)量/羥基)和三苯基膦(2.95g，9當(dāng)量)的混合物投入至甲苯(300mL)中，并共沸蒸餾去除水?；旌衔锢鋮s至室溫，并經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)另外去除一定量的剩余甲苯?；旌衔镌俅稳芙庠跓o水二氯甲垸(180mL)中，并在冰浴中冷卻。經(jīng)注射驅(qū)動(dòng)裝置經(jīng)1小時(shí)加入偶氮二羧酸二異丙酯(DIAD,2.27g，2.17mL，9當(dāng)量)。混合物在冰浴中攪拌1.5h，期間HPLC分析指示完全轉(zhuǎn)變?yōu)閷?shí)施例26A。粘性反應(yīng)混合物緩慢并同時(shí)攪拌地經(jīng)細(xì)頸漏斗加入至75:25MTBE/IPA(4.0L)混合物中，并攪拌1小時(shí)。經(jīng)真空過濾收集沉淀物，用MTBE(200mL)洗滌，真空干燥得到純化的實(shí)施例26A(51.5g)。實(shí)施例26A(51.4g)投入至甲酸(250mL)中，并加熱接近回流1.0h，期間HPLC分析指示完成了去保護(hù)?；旌衔锢鋮s至室溫，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除一部分甲酸(100mL)?；旌衔镉枚燃淄?50mL)稀釋。然后粘性反應(yīng)混合物加入至75:25MTBE/IPA(4.0L)的混合物中并同時(shí)攪拌，104且攪拌45min(Note4)。經(jīng)真空過濾收集沉淀物，用MTBE(300ml)洗滌，并真空干燥(<1Torr，24h)得到實(shí)施例26B(50.0g)。該物質(zhì)投入至二氯甲垸(400mL)中，并經(jīng)燒結(jié)玻璃布氏漏斗("拋光過濾(polishfiltration)")過濾。濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至200mL的體積，緩慢地并同時(shí)攪拌地加入至MTBE/IPA(4.0L)的75:25混合物中。經(jīng)真空過濾收集沉淀物，用MTBE(300ml)洗滌，并真空干燥(<1Torr,3天)，得到實(shí)施例26B(48.8g,94%)。使用類似的方法合成下列共軛物:實(shí)施例27實(shí)施例2740kDa4-臂PEG醇與實(shí)施例5的產(chǎn)物偶聯(lián)，并使用與實(shí)施例26類似的方法去保護(hù)成為終產(chǎn)物。根據(jù)HPLC方法A純化該產(chǎn)物。HPLC方法(3測定共軛物〉95%純度(滯留時(shí)間=7.5-8.1分鐘)。'HNMR(CDC13)59.08(bs,4H)，8,84(bs，4H)，8.18-8.16(d,4H)，8.02-8.00(d,4H),7.67-7.61(m,8H),7.47-7.38(m,12H),7.08-7.04(m,4H)，6.91(m，4H)，4.88(m，4H),4.62-4.49(dd，8H)，4.13(m，8H),3.64(bs,10101HPEG),3,23(m,8H)，1.25-1.24(d，24H).實(shí)施例28、,實(shí)施例2840kDa3-臂PEG醇與來自實(shí)施例18的叔丁酯產(chǎn)物偶聯(lián)(下面顯示)，使用與實(shí)施例26類似的方法去保護(hù)成為終產(chǎn)物。根據(jù)HPLC方法A純化產(chǎn)物。HPLC方法C測定共軛物〉95%純度(滯留時(shí)間=7.3分鐘)。'HNMR(CDC13)58.66(bs,3H),8.44(bs，3H),8.04-8.02(d,3H),7.75-7.30(m,24H)，7.10-7.06(m,3H),6.93(s,3H)，5.60-5.50(m，3H),4.15(m,6H),3.66(bs,4270HPEG),3.00(m,3H),3.40-3.20(m,6H),1.27(d,9H).<formula>formulaseeoriginaldocumentpage107</formula>實(shí)施例29實(shí)施例29A40kDa3-臂PEG醇(0.00625mmol)、來自實(shí)施例13的產(chǎn)物(0.056mmol)和三苯基膦(0.094mmol)通過共沸蒸餾從甲苯(5mL)中干燥。一半的體積被蒸餾掉(2.5mL)，該混合物冷卻至室溫。加入CH2C12(0.5mL)使反應(yīng)物成為均相。逐滴加入偶氮二羧酸二乙酯(0.094mmo1)，反應(yīng)攪拌48小時(shí)。反應(yīng)物真空濃縮得到實(shí)施例29A的叔丁酯。實(shí)施例29B實(shí)施例29A(0.005mmol)溶解在甲酸(3mL)中，在40°C加熱24小時(shí)。反應(yīng)物真空濃縮，根據(jù)HPLC方法A純化得到實(shí)施例29B。實(shí)施例30實(shí)施例3040kDa3-臂PEG醇與來自實(shí)施例25的叔丁酯產(chǎn)物偶聯(lián)，使用與實(shí)施例26類似的方法去保護(hù)形成終產(chǎn)物。根據(jù)HPLC方法A純化該產(chǎn)物。參考文獻(xiàn)下面的出版物、專利和專利申請(qǐng)以上標(biāo)數(shù)字在本申請(qǐng)中引用1Hemler和Takada，歐洲專利申請(qǐng)公開第330,506號(hào)，于1989年8月30日公開2Elices等人，Cell,60:577-584(1990)3Springer,Nature,346:425-434(1990)4Osborn,Cell,62:3-6(1990)5Vedder等人，Surgery，106:509(1989)6Pretolani等人，J.Exp.Med.,180:795(1994)7Abraham等人，J.Clin.Invest"93:776(1994)8Mulligan等人，J.Immunology,150:2407(1993)9Cybulsky等人，Science,251:788(1991)10Li等人，Arterioscler.Thromb.,13:197(1993)11Sasseville等人，Am.J.Path.,144:27(1994)12Yang等人，Proc.Nat.Acad.Science(USA)，90:10494(1993)13Burkly等人，Diabetes,43:529(1994)14Baron等人，J.Clin.Invest"93:1700(1994)15Hai碰n等人，J.Immunology,152:3238(1994)16Yednock等人，Nature,356:63(1992)17Baron等人，J.Exp.Med.,177:57(1993)18vanDinther-Janssen等人，J.Immunology,147:4207(1991)19vanDinther-Janssen等人，Annals.RheumaticDis.,52:672(1993)20Elices等人，J.Clin.Invest.,93:405(1994)21Postigo等人，J.Clin.Invest"89:1445(1991)22Paul等人，Transpl.Proceed"25:813(1993)23Okarhara等人，Can.Res.，54:3233(1994)24Paa雨en等人，Int.J.Can.,58:298(1994)25Schadendorf等人，J,Path.,170:429(1993)26Bao等人，Diff.,52:239(1993)27L雄-i等人，BritishJ.Cancer,68:862(1993)28Kawaguchi等人，JapaneseJ.CancerRes"83:1304(1992)29Kogan等人，美國專利第5,510,332號(hào)，于1996年4月23日授權(quán)30國際專利申請(qǐng)公開WO96/0164431Thorsett等人，美國專利第6,489,300號(hào)，于2002年12月3日授權(quán)和Kom'adi等人，美國專利第66，492，372號(hào)，于2002年12月10曰授權(quán)。上面的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)以其全部內(nèi)容作為參考引入本文，引用的程度與各個(gè)獨(dú)立的出版物、專利或?qū)＠暾?qǐng)具體地和個(gè)別地指出以其全部內(nèi)容作為參考引入的程度相同。權(quán)利要求1.一種制備活性化合物的共軛物的方法，其包括a)將聚合醇與具有酸性氫的親核活性化合物在Mitsunobu條件下反應(yīng)；和b)分離共軛物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的條件包括三價(jià)膦和偶氮二甲酰化合物。3.—種制備式I的共軛物的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>B是任選地共價(jià)結(jié)合于有分支臂的主干分子的生物相容性聚合物部分;q為大約1至大約100;在每種情況下A都獨(dú)立地是式II化合物其中R"是與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵，或R"是-H、R31'、-NH2、-NHR31M-N(R31')2、-NC3-C6環(huán)基、-OR31'、-SR31'，其中每個(gè)R"'獨(dú)立地是任選取代的直鏈或支鏈的CrC6或其藥學(xué)上可接受的鹽J選自a)式(a)的基團(tuán)烷基、任選取代的C3-C6環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基，且R"是與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵，或R32是-H、-N02、卣代垸基或基團(tuán)-N(MR")R42，其中M是共價(jià)鍵、-C(0)-或-S02-，R"是R"'、N(R"')2或陽OR41,，其中每個(gè)R"'獨(dú)立地是氫、任選取代的直鏈或支鏈的C,-C6烷基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜環(huán)或任選取代的雜芳基，其中任選的取代基是鹵素、d-C6烷基、或-OCi-C6烷基，且R42是氫或R"';禾口b)式(b)的基團(tuán)其中R選自與聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵、氨基、羥基、取代的氨基、烷基、烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、雜環(huán)氧基、硫醇、芳硫基、-K方訓(xùn)L巫、水^T別li泰不w，1、口、」>兀泰，升丫^:'r安、簽、Ml、tTJ安、基、垸基和取代的烷基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中，在每種情況下，聚合物部分任選地包括與聚合物部分共價(jià)連接的連接基團(tuán)；Ar'選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與Ar1共價(jià)連接；A一選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中所述聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與A一共價(jià)連接；X選自-NR'-、-O-、-S-、-SO-、-802和任選取代的-0^2-，其中R1選自氫和烷基;T選自;a)式(c)的基團(tuán)人其中Y選自-O-和-NR'-，其中R'選自氫和垸基；W選自與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分連接的共價(jià)鍵、和-NR2R3，其中W和P獨(dú)立地選自氫、烷基、取代的烷基、以及其中W和R3與其結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)，其中每個(gè)垸基、取代的垸基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)任選地與聚合物部分共價(jià)結(jié)合，所述聚合物部分任選地進(jìn)一步包括連接基團(tuán)；m是等于0、l或2的整數(shù)；n是等于0、l或2的整數(shù)；和b)式(d)的基團(tuán)其中G是任選取代的芳基或任選取代的含有0至3個(gè)氮的雜芳基5或6元環(huán)，其中所述的芳基或雜芳基任選地進(jìn)一步包括與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵；W是與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵，或W是-H、垸基、取代的烷基或-CH2C(0)R17，其中R'7是-OH、-OR'8或-NHR18，其中R"是烷基、取代的垸基、芳基或取代的芳基;R"選自氨基、取代的氨基、垸氧基、取代的烷氧基、環(huán)烷氧基、取代的環(huán)垸氧基、芳氧基和取代的芳氧基、和-OH;A.R、Ar1、A一和T的至少一個(gè)含有與聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵;B.當(dāng)R與聚合物部分共價(jià)連接時(shí)，n是1且X不是-O-、-S-、-SO-條件是:C.當(dāng)X是-O-或-NR'-時(shí)，則m是2;且D.式I的共軛物的分子量不超過100,000;所述方法包括下列的步驟c)將式Ia的聚合醇其中B如上所述，在式PR3的三價(jià)膦和偶氮二羧酸二垸基酯的存在下加入至式H-Nu的親核試劑，以形成式I的化合物，其中Nu是上述式A的基團(tuán)；并分離式I的化合物。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中J、A一和T中只有一個(gè)含有與聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中q是從1至大約20的整數(shù)。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中q是從1至大約8的整數(shù)。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在每種情況下A獨(dú)立地是式IIa的化合物8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在每種情況下A獨(dú)立地是式lib的化合物9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在每種情況下A獨(dú)立地是式IIc的化合物10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的親核活性化合物是下式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中J選自a)式(a)的基團(tuán)其中R"是與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵，或R3'是-H、R31'、-NH2、->^1131'或->1(1131')2、-NC3-C6環(huán)基、-OR<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>SR31'，其中每個(gè)R"'獨(dú)立地是任選取代的直鏈或支鏈的C,-Q垸基、任選取代的C3-C6環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基，且R"是與任選地包括連接基團(tuán)的聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵，或R32是-H、-N02、鹵代垸基或基團(tuán)-N(MR")R42，其中M是共價(jià)鍵、-C(0)-或-S02-，R"是R"'、N(R"')2或-OR"'，其中每個(gè)R"'獨(dú)立地是氫、任選取代的直鏈或支鏈的C,-Q烷基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜環(huán)或任選取代的雜芳基，其中任選的取代基是鹵素、C,-C6垸基、或-OC,-C6院基，且R"是氫或R41、和b)式(b)的基團(tuán)其中R選自與聚合物部分結(jié)合的共價(jià)鍵、氨基、羥基、取代的氨基、烷基、烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、雜環(huán)氧基、硫醇、芳硫基、雜芳硫基、雜環(huán)硫基和取代的烷基，其中每個(gè)氨基、取代的氨基、烷基和取代的烷基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中，在每種情況下，聚合物部分任選地包括與聚合物部分共價(jià)連接的連接基團(tuán)；Ar'選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與Ar1共價(jià)連接；A—選自芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基，其中每個(gè)芳基、取代的芳基、雜芳基和取代的雜芳基任選地與聚合物部分共價(jià)連接，其中所述聚合物部分任選地包括連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)將聚合物部分與A一共價(jià)連接；X選自-NR'-、-O-、-S-、-SO-、-S02和任選取代的-CHr，其中R1選自氫和烷基；T是帶有酸性氫的基團(tuán)；且R"是酸保護(hù)基團(tuán)。11.根據(jù)權(quán)利要求io所述的方法，其中所述的親核活性化合物具有下式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中R"是酸保護(hù)基團(tuán)。12.根據(jù)權(quán)利要求ll所述的方法，其中R"是C「CV烷氧基。13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中m是l，X是S，且R在每種情況下都獨(dú)立地選自羥基、烷氧基、烷基或與聚合物部分連接的共價(jià)鍵。14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中n是2，且R在兩種情況下都是甲基。15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的親核活性化合物具有下式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中R"是酸保護(hù)基團(tuán)。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中R"是CVC6烷氧基。17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中G是吡啶基，R"是氫或二垸基氨基，且R"是磺酰胺、酰胺或脲。18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的親核活性化合物是19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的聚合醇是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>:共軛物的總Mw為大約41,500)、(共軛物的總Mw為大約42，000)、或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>(共軛物的總Mw為大約41,500》20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的聚合醇選自A列中的基團(tuán)，且親核活性化合物選自B列中的基團(tuán)(共軛物的總Mw為大約42,000)(共軛物的總Mw為大約41,500)21.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的聚合醇在三價(jià)膦和偶氮二羧酸二烷基酯的存在下，在至少一種溶劑中加入至式H-Nu的親核試劑。22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述的偶氮二羧酸二垸基酯選自偶氮二羧酸二乙酯、偶氮二羧酸二異丙酯、4-甲基-l,2，4-三唑烷-3,5-二酮、N，N，N'，N'-四甲基偶氮二羧酰胺、偶氮二羧酸二哌啶、二(N-4-甲基哌嗪-l-基)偶氮二羧酰胺、二嗎啉代偶氮二羧酰胺和偶氮二羧酸二叔丁酯。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述的偶氮二羧酸二烷基酯選自偶氮二羧酸二乙酯、偶氮二羧酸二異丙酯、4-甲基-l,2,4-三唑烷-3,5-二酮、N，N,N',N'-四甲基偶氮二羧酰胺、偶氮二羧酸二哌啶和偶氮二羧酸二叔丁酯。24.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述溶劑是氯化溶劑或醚溶劑。25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述的溶劑是二氯甲烷或四氫呋喃。26.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述的三價(jià)膦選自三苯基膦、三甲基膦、三乙基膦、三丁基膦、1,2-雙-(二苯基膦基)乙垸、聚合物結(jié)合的膦和水溶性膦。27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述的三價(jià)膦是三苯基膦。28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的共軛物是使用聚合醇/親核活性化合物組合1、2或3制備的組合聚合醇親核活性化合物(共軛物的總Mw為大約42,000)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>全文摘要本發(fā)明公開了使用Mitsunobu條件制備農(nóng)業(yè)用、治療用和食品添加劑化合物的聚合共軛物的方法。文檔編號(hào)A61K31/506GK101505800SQ200680031902公開日2009年8月12日申請(qǐng)日期2006年7月7日優(yōu)先權(quán)日2005年7月8日發(fā)明者A·W·康拉迪,C·M·謝姆科,J·L·史密斯,M·S·達(dá)彭申請(qǐng)人:艾倫藥物公司