專利名稱：用ctla4抗體和激素療法治療前列腺癌的制作方法
用CTLA4抗體和激素療法治療前列腺癌技術(shù)領(lǐng)域 背景技術(shù)由于缺少有效的治療方法，前列腺癌目前是男性癌癥死亡的第二 大主要原因。為臨床局限性前列腺癌而接受根治性前列腺切除術(shù)的男 性在5年內(nèi)有大約三分之一將需要治療復(fù)發(fā)性前列腺癌(Syed等人， ￡/ra/.0wcof. 21:235-243 (2003))。生化復(fù)發(fā)的患者(即，手術(shù)后或放射治 療后其前列腺特異抗原[PSA水平升高的患者)越來(lái)越多地接受激素療 法(HT，在此也稱為"雄激素抑制療法"、"雄激素阻斷療法"、和"抗 雄激素療法")?？蛇x的方案是，激素療法可延緩至轉(zhuǎn)移性疾病的臨床 證據(jù)出現(xiàn)時(shí)。最后，大多數(shù)患者會(huì)對(duì)激素療法產(chǎn)生耐受，許多患者將 由于癌癥的進(jìn)展而死亡。因此，盡管有一些進(jìn)展，包括激素療法，但 對(duì)于前列腺癌治療的新方法長(zhǎng)期以來(lái)一直存在著需求或存在著無(wú)法滿 足的需求。目前的抗腫瘤藥通過(guò)多種機(jī)制作用來(lái)抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂， 最終破壞惡性細(xì)胞。但，因?yàn)檫@些細(xì)胞毒性劑通常對(duì)腫瘤細(xì)胞沒(méi)有選 擇性，因此會(huì)破壞正常細(xì)胞，損害生理功能，并經(jīng)常伴有副作用。癌 癥治療的一 種可選方式是靶向免疫系統(tǒng)("免疫治療")而不是腫瘤本身， 這樣患者的自身免疫系統(tǒng)會(huì)攻擊腫瘤，而不攻擊非胂瘤細(xì)胞。一種癌癥免疫治療方法是靶向細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原 4(CTLA4; CD152),其是一種在活化T細(xì)胞上表達(dá)的細(xì)胞表面受體。 CTLA4與其天然配體，B7.1(C3D80)和B7.2(CD86)的結(jié)合可將負(fù)調(diào)控信 號(hào)傳遞至T細(xì)胞，阻斷該負(fù)信號(hào)可導(dǎo)致動(dòng)物模型中T細(xì)胞免疫功能及 抗腫瘤活性增強(qiáng)(Thompson和Allison Jm附柳維7:445-450(1997); McCoy 和LeGros加附柳ol.在C認(rèn)說(shuō)oZ. 77:1-10(1999))。幾項(xiàng)研究已證明使用抗 體封閉CTLA 4可顯著地增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤殺傷作用并能誘發(fā)抗 腫瘤免疫(Leach等人，Scfe"ce 271:1734-1736(1996); Kwon等人，
JcGdl 94:8099-8103(1997); Kwon等人，Sci.確鄰:15074畫面9(1卿))。雖然抗CTLA4抗體在癌癥治療中很有希望，但是長(zhǎng)期以來(lái)大家都 希望開(kāi)發(fā)新的免疫療法來(lái)治療，使用這種抗體來(lái)治療腫瘤并可減少現(xiàn) 有化學(xué)療法的細(xì)胞毒副作用。本發(fā)明可滿足這種該需要。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明包括一種治療霈要此治療的患者的前列腺癌的方法。該方 法包括給予所述患者a)—定量的激素治療劑和b)—定量的結(jié)合人 CTLA4的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中該抗體或其部分在給予該激素 治療劑后首次給藥一天以上且不超過(guò)28天，和其中所述用量能有效地 組合用于所述的治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其部分在給予激素治療劑后兩天以上 時(shí)給予。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其部分在給予激素治療劑后不超過(guò) 2!天時(shí)給予。在進(jìn)一歩的實(shí)施方案中，激素治療劑的給藥在抗體或其部分的首 次給藥之前終止。還是在另一個(gè)實(shí)施方案中，激素治療劑選自抗雄激素、促性腺瀲 素-釋放激素(GnRH)拮抗劑、和促黃體生成激素-釋放激素(LH-RH)促效 劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，癌癥選自激素依賴性癌癥和非激素依賴性 癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，癌癥是非激素依賴性的，激素療法的給藥在 抗體或其部分的首次給藥之前終止。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體根據(jù)選自每28天給予大約Ktog/Icg和每三個(gè)月給予大約15mg^g中的一個(gè)方案進(jìn)行給藥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗CTLA4抗體或其抗原結(jié)合部分為選自以 下的至少一種抗體(a)對(duì)CTLA4具有大約1(^或更大的結(jié)合親合力的人抗體，且 其能抑制CTLA4與B7-l之間的結(jié)合以及CTLA4與B7-2之間的(b) 具有包括至少一種人CDR序列的氮基酸序列的人抗體，該 人CDR序列與選自4丄k 4.8.1、 4.10.2、 4.13.1、 4.固、6丄1、 ticmmumab、 li.6.1、 il.7.1、 12.3.U、 12.SU.I和ipilimu咖b的抗 體的CDR序列相對(duì)應(yīng)；(c) 具有選自4丄1、 4.8.1、 4.10.2、 4.13.1、 4.14.3、 6.1.1、 ticim加mab、 H.6.1, 11.7.1、 12.3.1.K和12.9丄1的抗體的重鏈和 輕鏈氮基酸序列的人抗休；(d) 具有選自4丄"4.8.1、 4.10.2、 4.13.K 4.14.3、 6丄" tidlii加mab、 11.6.1、 11.7.1、 12.9.1.1、和ipilh加mab的 抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列的人抗體；(e) 抗體,或其抗原結(jié)合部分，其與具有選自4丄1、4.8.1、4.10.2、 4.m、4!43、6丄！、鍾m隨b、固.l、 U.7.K 12.3丄K 12.9丄K 和ipHimumab的抗體的重鏈及輕鏈氨基酸序列的至少一種抗體競(jìng) 爭(zhēng)與CTLA4的結(jié)合；和(f) 抗體,或其抗原結(jié)合部分，其與具有選自4丄K4.8.1 、4.10.2、 4J3.K 4.143、 6.U、ticUimumab、 U.6.1、 U.7.1、 12.3.1.1、 12.9.1." 和ipilimumab的抗體的寬鏈及輕鏈氨基酸序列的至少一種抗體交 叉竟?fàn)幣cCTLA4的結(jié)合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是具有抗體ticm咖鵬b的重鏈和輕鏈 氨基酸序列的人抗體。還是在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包括重鏈和輕鏈，其中重鏈的重 鏈可變區(qū)和輕鏈的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列選自(a) SEQIDNO: 3的氨基酸序列和SEQ ID NO: 9的氨基酸序 列(b) SEQ ED NO- 15的氨基酸序列和SEQ ID NO: 21的氨基酸 序列(c) SEQ ID NO: 27的氨基酸序列和SEQ ID NO: 33的氨基酸 序列；(d) 由SEQ ID NO: 1的核酸序列編碼的氨基酸序列和由SEQ ID NO: 7的核酸序列編碼的氨基酸序列 (e) 由SEQ ID NO: B的核酸序列編碼的氨基酸序列和由SEQ ID NO: 19的核酸序列編碼的氨基酸序列；(f) 由SEQ ID NO: 25的核酸序列編碼的氮基酸序列和由SJEQ ID NO: 31的核酸序列編碼的氨基酸序列；(g) 抗體ipnimumab的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗休或其抗原結(jié)合部分為選自以下的抗體-(a) 具有包括SEQIDNO: 4、 SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 6 所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)，且另外具有包括SEQDNO: 10、 SEQ ID NO: 11和SEQ ID NO- 12所示的氨基酸序列的輕鏈可變 區(qū)的抗體；(b) 具有包括SEQIDNO: !6、 SEQIDNO: H和SEQIDNO: 18所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)，且另外具有包括SEQ ID NO: 22、 SEQ ID NO: 23和SEQ ID NO: 24所示的氮基酸序列的較鏈 可變區(qū)的抗體；(c) 具有包括SEQIDNO: 28、 SEQ!DNO: 29和SEQ ID NO: 30所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)，且另外具有包括SEQ !D NO-34、 SEQ ID NO: 35和SEQ ID NO: 36所示的氮基酸序列的輕鏈 可變區(qū)的抗體；(d) 具有包括抗體ipmmumab的重鏈CDRl、 CDR2，和CDR3 的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)，且另外具有包括抗體ipilimumab的輕 鏈CDR1、 CDR2、和CDR3的氮基酸序列的輕鏈可變區(qū)的抗體。本發(fā)明包括一種治療需要此治療的患者的非激素依賴性前列腺癌 的方法。該方法包括給予所述患者一定量的結(jié)合人CTLA4的抗休或其 抗原結(jié)合部分，以及一定量的激素治療劑，其中該激素治療劑以多次 劑量給藥一個(gè)月以上，其中該抗體或其部分在該激素治療劑的給藥期 間進(jìn)行給藥，和其中所述用量能有效地組合用于所述的治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，激素治療劑的給藥周期超過(guò)兩個(gè)月以上。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括給予多次劑量的抗體或 其部分超過(guò)一個(gè)月的周期，與激素治療劑的給藥周期相重疊。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其部分的給藥周期與激素治療劑的 給藥周期重疊超過(guò)兩個(gè)月。
還是在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其部分的多次劑量與激素治療 劑的給藥周期重疊超過(guò)六個(gè)月。本發(fā)明包括一種治療需要此治療的患者的激素依賴性前列腺癌的方法。該方法包括對(duì)該患者共同給予治療有效量的抗CTLA4抗體或其 抗原結(jié)合部分，以及治療有效量的至少兩種激素治療劑，其中該藥劑 選自抗雄激素、促性腺激素釋放激素(GnRH)拮抗劑、和促黃休生成激 素-釋放激素(LH-RH)促效劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，擾雄激素為比卡魯胺(bicalutamWe),促效劑為 亮丙瑞林(teupralide)。本發(fā)明包括一種用于治療前列腺癌的藥學(xué)組合物。該組合物包括 治療有效量的抗CTLA4 t亢體或其抗原結(jié)合部分，以及治療有效量的至 少兩種激素治療劑，其中該激素治療劑選自抗雄激素、促性腺激素一 釋放激素(GnRH)拮抗劑,和促黃體生成激素-釋放激素(LH-RH)促效劑。


當(dāng)結(jié)合附圖進(jìn)行閱讀時(shí)，將更好地理解前述的發(fā)明內(nèi)容以及下面 的具體實(shí)施方式
。為了闡明本發(fā)明，圖示的(多個(gè))實(shí)施方案中所顯示的 是現(xiàn)在優(yōu)選的實(shí)施方式。但應(yīng)該理解的是，本發(fā)明并不限于圖中所示 的具體排列形式及方式。在附圖中-圖l,其包含圖1A至！D,顯示了抗CTLA4抗體4丄1的核苷酸 和氨基酸序列。圖iA顯示了 4丄1重鏈的全長(zhǎng)核苷酸序列(SEQIDNO-1)。圖1B顯示了 4丄1重鏈的全長(zhǎng)氨基酸序列(SEQ ID NO- 2)， 4丄l 重鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQIDNO: 3)標(biāo)注在方括號(hào)"[]"之間，和 信號(hào)肽序列標(biāo)注在該"["括號(hào)外側(cè)的氨基末端。每個(gè)4丄1重鏈CDR 的氨基酸序列標(biāo)有下劃線。該CDR序列如下CDR1: GFTFSSHG固(SEQIDNO: 4); CDR2: VIWYDGRNKYYADSV(SEQ ID NO: 5);和CDR3: GGHFGPFDY(SEQ H> NO: 6)。圖1C顯示了 4丄1輕鏈的核苷酸序列(SEQIDNO: 7)。圖ID顯示了 4丄1輕鏈全長(zhǎng) 的氮基酸序列(SEQIDNO- 8)，可變區(qū)標(biāo)注在方括號(hào)"fl"之間(SEQID NO: 9),和信號(hào)肽序列標(biāo)注在""括號(hào)外側(cè)的氨基酸末端。每個(gè)CDR
的氨基酸序列標(biāo)示如下CDRl: RASQSISSSFLA(SEQ ID NO: 10); CDR2: GASSRAT(SEQI謹(jǐn)O: 11);和C簡(jiǎn)QQYGTSFWT(SEQ ID 跳12)。圖2，其包括圖2A至2D,顯示了抗CTLA4抗體4.13.1的核苷酸 和氨基酸序列。圖2A顯示了 4.13.1重鏈的全長(zhǎng)核苷酸序列(SEQ ID NO- !3)。圖2B顯示了 4.13.1重鏈的全長(zhǎng)氨基酸序列(SEQ ID NO: 14)， 4.13.1重鏈可變區(qū)的氨基酸序列標(biāo)注在方括號(hào)"[〗"之間(SEQ!DNO-5)。每個(gè)4.13.1重鏈CDR的氨基酸序列都標(biāo)有下劃線。這些CDR序 列如下- CDR1 : GFTFSSHGIH(SEQ ID NO : !6) ; CDR2 : VIWYDGRNKDYADSV(SEQ ID NO: 17);和CDR3: VAPLGPLDY (SEQ !DNO:18)。圖2C顯示了 4.13.！輕鏈的核苷酸序列(SEQ ID NO: 19)。 圖2D顯示了全長(zhǎng)4.13.r輕鏈的氨基酸序列(SEQIDNO: 9)，可變區(qū)標(biāo) 注在方括號(hào)"0"之間(SEQ1DNO: 21)。每個(gè)CDR的氨基酸序列標(biāo)示 如下CDRJ: RASQSVSSYLA(SEQIDNO: 22); CDR2: GASSRAT (SEQ ID NO: 23);和CDR3: QQYGRSPFT(SEQ l匪O: 24)。圖3,其包括圖3A至3D,顯示了抗CTLA4抗體11.2.1(現(xiàn)在稱為 tidlkiuraab)的核苷酸和氨基酸序列。圖3A顯示了 1L2.1重鏈的全長(zhǎng)核 甘酸序列(SEQ !D NO: 25)。圖犯顯示了 i !.2.1重鏈的全長(zhǎng)氨基酸序 列(SEQIDNO: 26), 11.2.1重鏈可變區(qū)的氨基酸序列標(biāo)注在方掛號(hào)"[]" 之間(SEQ ID NO: 27)。每個(gè)11.2.1重鏈CDR的氨基酸序列都標(biāo)有下 劃線。這些CDR序列如下CDRI: GFTFSSYGMH(SEQIDNO: 28); CDR2: VIWYDGSNKYYADSV(SBQ ID NQ: 29);和CDR3: DPRGATLYYYYYGMDV (SEQ ID NO:30)。圖3C顯示了 U.2.1輕鏈的 核苷酸序列(SEQIDNO:31)。圖3D顯示了全長(zhǎng)11,2.1輕鏈的氨基酸序 列(SEQIDNO: 32),可變區(qū)標(biāo)注在方括號(hào)"[]"之間(SEQIDNO: 33)。 各個(gè)CDR的氮基酸序列標(biāo)示如下CDR1: RASQSINSYLD(SEQ ID NO: 34); CDR2: AASSLQS (SEQ ID NO: 35);和CDR3 QQYYSTPFT(SEQIDNO: 36)。圖4顯示的照片證明了抗體和激素療法聯(lián)合應(yīng)用的新輔助療法對(duì) 前列腺組織的作用。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明涉及抗CTLA4抗體與至少一種激素治療劑聯(lián)合治療需要此 治療的患者的前列腺癌的用途的各種實(shí)施方案。除非在此另外定義，關(guān)于本發(fā)明所使用的科學(xué)及技術(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)具有 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員普遍理解的含義。此外，除非本文另有需要，單 數(shù)的術(shù)語(yǔ)應(yīng)包括復(fù)數(shù)，而復(fù)數(shù)的術(shù)語(yǔ)應(yīng)包括單數(shù)。通常，關(guān)于本文中 所述的細(xì)胞及組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)和 蛋白和核酸化學(xué)和雜交所使用的術(shù)語(yǔ),術(shù)在本領(lǐng)域中是公知的并普 遍使用的。除非另有指定，本發(fā)明的方法及技術(shù)通常根據(jù)本領(lǐng)域所公知的方 法來(lái)實(shí)施，如本說(shuō)明書中所引用和討論的一般及更特定的參考文獻(xiàn)屮 所述。這些參考文獻(xiàn)包括,例如Sambrook和Russdl，M ifecw/cw C/ow,'唯， ^ ￡a6orato/y J/ /wood Co服d Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY (2001)， A咖be!等人,Cwrre"f P/iotoco/s/ M /ecw/flr胸/ogj;, Mm Wiky & Sons, NY (2002),以及Hariow和Lane J"http://6o￡//ct:』 丄。kw愉o/Cold Spring Harbor Laboratoiy Press, CoW Spring Harbor, NY(19卯)，它們?cè)诖艘氡景缸鳛閰⒖嘉墨I(xiàn)。酶促反應(yīng)和純 化技術(shù)根據(jù)制造商的說(shuō)明書實(shí)施，如本領(lǐng)域中所普遍使用的或如在此 所述的那樣。關(guān)于在此所述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)，以及醫(yī)學(xué)和 藥物化學(xué)所使用的術(shù)語(yǔ)以及實(shí)驗(yàn)室操作和技術(shù)在本領(lǐng)域中是公知的并 普遍使用的。使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥學(xué)制劑、劑 型、和遞送，和患者的治療。如在此所使用的，以下的每個(gè)術(shù)語(yǔ)在本章節(jié)中具有與其有關(guān)的含義。在此所使用的冠詞"一(a和an)"是指該冠詞的一個(gè)或一個(gè)以上(即 至少一個(gè))語(yǔ)法賓語(yǔ)。作為實(shí)例，"一組件"是指一個(gè)組件或一個(gè)以上的 組件。如在此所使用的20種常規(guī)氨基酸及其縮寫遵循習(xí)慣用法。見(jiàn) /附附u舶/o,"多"決es&(第二版,E.S.Golub和D.R. Gren主編，Sinauer Associates, Sunderfand, Mass. (1991)),其在此引入本案作為參考文獻(xiàn)。 "保守氨基酸置換"是其中一個(gè)氨基酸殘基被具有相似化學(xué)性質(zhì)(例如電荷或疏水性)的側(cè)鏈R基的另一氨基酸殘基取代的作用》 —般而 言，保守氨基酸置換并不會(huì)實(shí)質(zhì)上改變蛋白質(zhì)的功能性質(zhì)。若兩條或 多條氨基酸序列經(jīng)保守置換而相互不同，則可向上調(diào)整序列一致性百 分比或相似性程度以改正該置換作用的保守性。迸行該調(diào)整的方法是 本領(lǐng)域所公知的。見(jiàn)，例如Pearson, A^/w血Mo/. 5/o/ 243: 307-31(1994)。帶有具有類似化學(xué)性質(zhì)的側(cè)鏈的氨基酸的實(shí)例包括l)脂肪族側(cè) 鏈甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸，和異亮氨酸；2)脂肪族-羥基 側(cè)鏈絲氨酸和蘇氮酸；3)含酰胺的側(cè)鏈天冬酰胺和谷氣酰胺4) 芳香族側(cè)鏈苯丙氨酸、酩氨酸，和色氨酸；5)堿性惻鏈賴氨酸、糟 氨酸，和組氨酸；6)酸性側(cè)鏈天冬氮酸及谷氨酸和7)含硫側(cè)鏈 半胱氨酸和甲硫氮酸。優(yōu)選的保守氨基酸置換組為纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯丙氮酸-酪弒酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸、谷氨 酸鹽-天冬氨酸鹽，和天冬酰胺-谷氨酰胺。可選的是，保守置換是Gomiet等人，Scfence 256:1443-45(1992)中 所公開(kāi)的PAM250對(duì)數(shù)-似然矩陣中具有正值的任何改變，該文獻(xiàn)在此 并入本案作為參考文獻(xiàn)。"中度保守"置換是在該P(yáng)AM250對(duì)數(shù)-似然 矩陣中具有非負(fù)值的任何改變。優(yōu)選的氨基酸置換是(l)減少對(duì)蛋白水解的易感性，(2)減少對(duì)氧 化的易感性，(3)改變形成蛋白質(zhì)復(fù)合體的結(jié)合親和性，和(4)賦予或修 飾這些類似物的其他物理化學(xué)或功能特性。包括置換、刪除，和域插 入的類似物可包括除特定肽序列之外的序列的各種突變蛋白。例如單 個(gè)或多個(gè)氨基酸置換(優(yōu)選為保守氨基酸置換)可以在特定序列(優(yōu)選在 形成分子內(nèi)接觸點(diǎn)的(多個(gè))結(jié)構(gòu)域之外的多肽部分內(nèi)，例如，CDR的 外側(cè))中進(jìn)行。保守氨基酸置換應(yīng)該不會(huì)實(shí)質(zhì)上改變母序列的結(jié)構(gòu)特征 (例如，置換氨基酸不應(yīng)該有破壞發(fā)生于該母序列中的螺旋，或破壞表 征該母序列的其他類型的二級(jí)結(jié)構(gòu)的傾向。本領(lǐng)域公認(rèn)的多肽二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的實(shí)例描述在以下資料中戶ratei附，arMcte^a/tt/Mofera/or W腦) /es (Creighton 主編,W.H. Freeman and Company, New York(1984));加ftt cto/o" to Sn rfwre (C. Branden和J. Tooze主 編，Garland Publishing, New York, N. Y. (1991));和Thonitoii等人， iVG加m354: 105(1991)，每篇資料在ii七都引入本案作為參考文獻(xiàn)。多肽的序列相似度一般使用序列分析軟件來(lái)測(cè)定。麥白分析軟件 使用指定與各種置換、刪除和其它修飾，包括保守氮基酸置換的相似 度測(cè)定來(lái)對(duì)相似的序列進(jìn)行匹配。例如，Genetic Computer Gra叩(得自 Genetic Computer Group, lnc.的GCG),也稱為Wisconsin Package,是 用于存取、分析和處理核苷酸及蛋白質(zhì)序列的超過(guò)130種程序的集成 軟件包。GCG含有諸如"G邵"和"Bestfit"等程序，其可使用缺省參 數(shù)來(lái)測(cè)定密切相關(guān)的多肽，如來(lái)自不同有機(jī)體物種的同源多肽之間或 野生型蛋白質(zhì)及其突變蛋白之間的序列相似性、同源性和域序列一致 性。見(jiàn)，例如GCG6J舨、9.1版，及10.0版。也可使用缺省或推薦參數(shù)的FASTA(其是GCG 6.1版中的一個(gè)程序) 來(lái)比較多肽序列。FASTA(例如FAST2及FASTA 3)可提供査詢及檢索 序列間的比對(duì)和最佳重疊區(qū)的序列一致性百分比(Pearsom il^/to血 五股j/wo/. 183:63-訴(19卯)；Peareon,似e幼o(hù)^ Afo/.及W. U2:l85-2，9 (2000))。當(dāng)將本發(fā)明的序列與含有大量來(lái)自不同生物體的序列的數(shù)據(jù) 庫(kù)進(jìn)行比較時(shí)，另一優(yōu)選算法為使用缺省參數(shù)的計(jì)算機(jī)程序BLAST, 尤其是blastp或tbiastn。見(jiàn)，例如Aitechul等人，M /.所o/. 215: 403410(19卯)；Ateehul等人，Wwc/e,'c』c她勘s. 2S: 3389-402(1997); 這些文獻(xiàn)在此均并入本案作為參考文獻(xiàn)。完整的"抗體"包括由二硫鍵相互連接的至少兩條重(H)鏈及兩條 輕(L)鏈。通常見(jiàn)，i^w/a柳ewto〃附/附併o/ogy， Ch.7 (Paul, W.主編，第 二版Raven Press, N, Y. (1989))(其全文并入本案作為參考文獻(xiàn))。每 條重鏈由重鏈可變區(qū)(HCVR或VH)和重鏈恒定區(qū)(C,d組成。該重鏈恒 定區(qū)由3個(gè)結(jié)構(gòu)域CH1、 CH2和CH3組成。每條輕鏈由輕鏈可變區(qū) (LCVR或VO及輕鏈恒定區(qū)組成。該輕鏈恒定區(qū)由一個(gè)結(jié)構(gòu)域CL組成。 該VH及Vt區(qū)可進(jìn)一歩細(xì)分成超變區(qū)，稱為互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR),其散 布以更具保守性稱為框架區(qū)(FR)的區(qū)域。每個(gè)Vh及V,都由3個(gè)CDR 和4個(gè)FR組成，其按以下序列自氨基末端排列至羧基末端FR1、 CDR1、 FR2、 CDR2、 FR3、 CDR3、 FR4。將氨基酸分配至各結(jié)構(gòu)域根 據(jù)Kabat的定義S甲ewces < i^e/徹< /欲附am /og/ca/ /她msf (National Institutes of Health, Bethes麵MD (1987和1991)或Chothia & Lesk, J, MoZ.祝oZ. 196:901-917(1987); Chothia等人，Wflft卵342:878-883如在此所使用的術(shù)語(yǔ)抗體的"抗原結(jié)合部分"(或簡(jiǎn)稱為"抗體部 分")是指保留了與抗原(例如CTLA4)特異結(jié)合的抗體的一或多個(gè)片段。 已證明抗體的抗原-結(jié)合功能可由全長(zhǎng)抗體的各個(gè)片段來(lái)實(shí)施。包括在 術(shù)語(yǔ)抗體的"抗原結(jié)合部分"內(nèi)的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i) Fab片段， 是由V^ V,,、 C^和CHl結(jié)構(gòu)域所組成的單價(jià)片段；(ii)F(ab')2片段， 是包括在鉸鏈區(qū)通過(guò)二硫鍵連接的兩個(gè)Fab片段的雙價(jià)片段；(iii)由 Vu及CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iv)由抗體單臂的^及VH結(jié)構(gòu)域 組成的Fv片段；(v)由VH結(jié)構(gòu)域組成的c!Ab片段(Ward等人，(1989) iV濾微341:544—546);和(vi)分離的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)。而且，盡管 Fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，Vt,和VH由各自的基因編碼，但是可使用重組 方法，通過(guò)合成連接子將其連接在一起使其成為單條蛋白鏈，其中^ 及V，,區(qū)配對(duì)形成單價(jià)分子(稱為單鏈Fv(scFv));見(jiàn)，例如Bkd等人， Sc/e"ce 242:423-426 (1998)和Huston等人，Ptoc. Ato/.&/ 85:5879-5883(1998)。這種單鏈抗體也要包括在術(shù)語(yǔ)抗體的"抗原結(jié)合 部分"內(nèi)。也包括其他形式的單鏈抗體，雙特異抗體(dkbody)。雙特 異抗生為雙價(jià)、雙特異性的抗體，其中VH及Vt結(jié)構(gòu)域在單條多肽鏈 上表達(dá)，但使用的連接子太短不能在相同鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間進(jìn)行 配對(duì)，因此迫使這些結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)性結(jié)構(gòu)域配對(duì)并產(chǎn)生了 兩抗原結(jié)合為點(diǎn)(見(jiàn)，例如Hoiliger等人，層.^cc^ 編90: 6444-6448(1993); Poijak等人，55frwcftire 2:112"U23(1994))。仍進(jìn)一歩，抗體或其抗原結(jié)合部分可以是較大的兔疫粘附分子的 一部分，其通過(guò)該抗體或抗體部分與一種或多種其它蛋白質(zhì)或肽發(fā)生 共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合而形成。這種免疫粘附分子的實(shí)例包括使用抗生物 素蛋白鏈菌素(streptavidin)核心區(qū)域來(lái)制造四聚體scFv分子 (Kipriy肌ov等人，他鵬"乂"勵(lì)c^幼朋d場(chǎng)6W鵬做6:93—101(1995)) 和使用半胱氨酸殘基、標(biāo)記肽及C-末端的多組氨酸標(biāo)記來(lái)制造雙價(jià)及 生物素化 scFv 分子(Kipriyanov 等人，ifoZ. iiwHwnoZ. 31:1047-1058(1994)。其它實(shí)例包括將來(lái)自一個(gè)抗體的一個(gè)或多個(gè)CDR 以共價(jià)或非共價(jià)方式并入分子內(nèi)以將其制成能特異結(jié)合目的抗原如ctla4的免疫粘附素。在這些實(shí)施方案中，(多個(gè))cdr可被并入作為 較大多肽鏈的一部分，可以與另一多肽鏈共價(jià)連接或以非共價(jià)方式并 入?？贵w部分，如Fab和(FaV )2可使用常規(guī)技術(shù)，從全抗體制備而成, 如分別用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化整個(gè)抗體。而且，可以使用在此 所述的標(biāo)準(zhǔn)重組dna技術(shù)來(lái)獲得抗體、抗體部分和免疫粘附分子。就本發(fā)明而言，當(dāng)在此提到"抗體"時(shí)，應(yīng)理解的是也可使用其 抗原結(jié)合部分?？乖Y(jié)合部分與完整抗體競(jìng)爭(zhēng)特異性結(jié)合。通常，見(jiàn) Fundamental f加mmologv Ch. 7 (Paul, W .主編，第二版，Raven Press, N. Y. (i989))(其全文在此并入本案作為參考文獻(xiàn))?？乖Y(jié)合部分可通過(guò)重 組DNA技術(shù)或通過(guò)完整抗體的酶促或化學(xué)裂解而制得。在某些實(shí)施方 案中，抗原結(jié)合部分包括Fab、 Fab'、 F(ab，)z、 Fd、 Fv、 dAb、及互補(bǔ) 性決定區(qū)(CDR)片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、雙特異性抗體和含 有足以賦予該多肽以特異抗原結(jié)合性的抗體的至少一部分的多肽。在 具有一個(gè)或多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的實(shí)施方案中，結(jié)合位點(diǎn)可彼此柑同或可不 同。術(shù)語(yǔ)"人抗體"或"人序列抗體"在此可柑互交換，包括具有來(lái) 源于人生殖細(xì)胞免疫球蛋白序列的可變和恒定區(qū)(若存在)的抗體。本發(fā) 明的人序列抗體可包括非人生殖細(xì)胞免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘 基(例如通過(guò)體外的隨機(jī)或定向特異誘變弓f入或通過(guò)體內(nèi)體細(xì)胞突變弓I 入的突變)。但如在此所使用的術(shù)語(yǔ)"人抗體"并不包括其中來(lái)源于另 —種晡乳動(dòng)物(如鼠辦系的cdr序列被移植至人框架序列上的"嵌合"抗體(即，"人源化"或primatizedtm抗體)。如在此所使用的術(shù)語(yǔ)"嵌合抗體"是措包括來(lái)源于兩種或多種不 同抗體的區(qū)域的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)cdr來(lái)源于人 抗ctla4抗體。在另一實(shí)施方案中，來(lái)自一種以上的人抗ctla4抗 體的cdr合并在嵌合人抗體中。例如，嵌合抗體可包括來(lái)源于第一個(gè) 人抗cd鄰抗體的輕鏈的cdr1、來(lái)自第二個(gè)人抗ctla4抗體的輕鏈 的CDR2和來(lái)音第三個(gè)人抗CTLA4抗體的輕鏈的CDR3，且來(lái)自重鏈 的cdr可來(lái)源于一種或多種其它的抗cd40抗體。此外，框架區(qū)可來(lái) 源于相同的抗-ctla4抗體之一 或來(lái)源于一個(gè)或多個(gè)不同的人。而且，如前所述，嵌合抗體包括的抗體包括來(lái)源于一種以上物種
的種系序列的部分。如在此使用的術(shù)語(yǔ)"有效量"或"治療有效量"是措當(dāng)給予哺乳 動(dòng)物，優(yōu)選人吋，與不使用該化合物時(shí)檢測(cè)到的反應(yīng)相比，該用量能 介導(dǎo)可檢測(cè)到的治療反應(yīng)。如但不限于，抑制和/或減小腫瘤生長(zhǎng)、腫 瘤大小、轉(zhuǎn)移和類似行為的治療反應(yīng)，很容易逝過(guò)本領(lǐng)域所公認(rèn)的的 許多方法，例如，在此所公開(kāi)的這些方法來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。專業(yè)技術(shù)人員要理解的是，可改變?cè)诖怂o予的化合物或組合物 的有效量，且可根據(jù)許多因素，如要治療的疾病或不良狀況、疾病的 階段、要治療的晡乳動(dòng)物的年齡、徤康及身體狀況、疾病的嚴(yán)重性、 要給予的特殊化合物和類似因素很容易地來(lái)進(jìn)行確定。術(shù)語(yǔ)"共同給藥"是指激素療法和抗體療法基本上同時(shí)給予患者。 即，在同一天實(shí)施激素療法和抗休療法，或在該治療周期中激素療法的最后--'次用藥和該抗體的給藥之間不超過(guò)4個(gè)月(例如，用作儲(chǔ)存懸 液的高劑量亮丙瑞林一lit每4個(gè)月給藥一次，Jtt羊可持續(xù)接受瀲素療 法)，或抗體劑量的給藥與激素療法的給藥之間不超過(guò)3個(gè)月。就抗體而言，如在此所使用的術(shù)語(yǔ)"竟?fàn)?是第--種抗體或其抗 原結(jié)合部分與第二種抗體或其抗原結(jié)合部分競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，其中與無(wú)第二 種抗體存在的情況相比，在該第二種抗體的存在下，第一種抗體與其 同源的抗原表位的結(jié)合，可檢測(cè)到有所降低?？蛇x的方案是，在第一 中抗體存在時(shí)，第二種抗體與其抗原表位的結(jié)合也可檢測(cè)到有所降低, 但是事實(shí)并非如此。即，第一種抗體可抑制第二種抗體與其表位的結(jié) 合，而第二利憤體不會(huì)抑制第一種抗體與其各自表位的結(jié)合。但，當(dāng) 可檢測(cè)到每種抗體都能抑制其它抗體與其同源抗原表位或配體結(jié)合 時(shí)，不論抑制程度相同、更太或更小，這些抗體被稱為與各自(多個(gè)) 表位的結(jié)合發(fā)生了互相"交叉競(jìng)爭(zhēng)"。例如交叉競(jìng)爭(zhēng)抗體可以與本發(fā)明 所使用的抗體結(jié)合的表位，或部分表位結(jié)合。競(jìng)爭(zhēng)及交叉競(jìng)爭(zhēng)抗體的 應(yīng)用包括在本發(fā)明中。不管這種競(jìng)爭(zhēng)或交叉競(jìng)爭(zhēng)發(fā)生的機(jī)制(例如立體 阻礙、構(gòu)象改變或與共同抗原表位或其部分結(jié)合等)如何，專業(yè)技術(shù)人 員要理解的是，根據(jù)在此提供的教授內(nèi)容，這種竟?fàn)幒?或交叉競(jìng)爭(zhēng)抗 體包括并可用于本發(fā)明公開(kāi)的方法中。術(shù)語(yǔ)"抗原表位"包括能夠與免疫球蛋白或T細(xì)胞受體特異結(jié)合
的任何蛋白質(zhì)決定簇?？乖砦粵Q定簇通常由分子的化學(xué)活性表面基 團(tuán)組成，如氮基酸或糖側(cè)鏈，且通常具有特定的三維結(jié)構(gòu)特性以及特 定的電荷特性。構(gòu)象表位與非構(gòu)象表位的區(qū)別在于變性溶劑存在時(shí)前 者而非后者的結(jié)合性會(huì)喪失。如在此交替使用的術(shù)語(yǔ)"激素療法"或"雄激素抑制"包括給予 藥劑或化合物的任何方法，從而使雄激素灘性類固醉激素，如但不限 于睪丸酮和二氫睪酮)水平與不給予該藥劑或化合物或在給藥之前的雄激素水平相比，有可檢測(cè)到的降低。激素療法包括，但不限于使用 抗雄激素、促性腺激素-釋放激素拮抗劑、和促黃體生成激素-釋放激素 促效劑，及其組合。如在此所使用的術(shù)語(yǔ)"抗雄激素"是指任何藥劑或化合物，其能 可檢測(cè)到地阻斷前列腺細(xì)胞上的雄激素受體，從而與給予該藥劑或化 合物之前的晡乳動(dòng)物雄激素水平相比或與不給予該藥劑或化合物的相 同哺乳動(dòng)物中的雄激素水平相比，能降低哺乳動(dòng)物的雄激素水平。優(yōu)選晡乳動(dòng)物是人a抗雄激素可以"非類固醇的"或"類固醇的"，因?yàn)檫@些術(shù)語(yǔ)在本 領(lǐng)域中是能被理解的，并用于本說(shuō)明書中。即，非類固醇抗雄激素(例如比卡魯胺(CASODEX)、尼魯米特(NILANDRON)、氟他胺(EUUEX1N、 DROGEML),和類似物)可竟?fàn)幮缘嘏c前列腺細(xì)胞上的雄瀲素受體結(jié) 合，抑制雄激素對(duì)前列腺的刺激作用。類圃醇抗雄激素(例如甲地孕酮 (MEGACJE),和去乙酰環(huán)丙氯地孕酮(ANDROCUR))不僅可抑制在細(xì)胞 受體的雄激素結(jié)合，還可延緩LH從腦下垂體腺的釋放。如在此所使用的"促性腺激素-釋放激素(GnRH)抬抗劑"是措可以 與腦下垂體腺中的GnRH(也稱為L(zhǎng)H-RH)受體結(jié)合,從而阻斷該受體而 不會(huì)導(dǎo)致促性腺激素釋放的藥劑。GnRH拮抗劑包括，例如軻巴瑞克 (PLENAXIS)和組氮瑞林(SUPPRELIN)。不像LH-RH促效劑，GnRH 拮抗劑不會(huì)導(dǎo)致可檢測(cè)到的睪丸酮大幅升高。術(shù)語(yǔ)"促黃體生成激素-釋放激素(LH-RH)促效劑"是與不給予 LH-RH促效劑或在給予LH-RH促效劑之前的該激素的腦下垂體產(chǎn)生 量相比，能夠可檢測(cè)到地減少可刺激睪丸酮產(chǎn)生的至少一種激素的腦 下垂體腺產(chǎn)生量的藥劑或化合物。鄭在此所使用的術(shù)語(yǔ)"LH-RH促效劑"是可引起LH-RH受體的連續(xù)過(guò)量刺激并將LH-RH受體復(fù)合體內(nèi) 在化，從而使腦下垂體細(xì)胞由于該細(xì)胞上存在的受體減少對(duì)進(jìn)一歩刺 激耐受的藥劑。其依次會(huì)導(dǎo)致LH的減少和隨后的睪丸酮的分泌。 LH-RH促效劑包括，但不限于亮丙瑞林(leuproreHn)(亮丙瑞林 (leuprolide); LUPRON、 EL1GARD)、戈舍瑞林(ZOLADEX)、布舍瑞林 (SUPREFACT)、曲普瑞林(tryptorelto)(DECAPEPTYL)等。術(shù)語(yǔ)"最大雄激素阻斷"是指至少一種抗雄激素與至少一種LH-RH 促效劑或阻斷雄激素的舉丸切除術(shù)的組合。該術(shù)語(yǔ)包括這些方法和化 合物(包括多種抗雄激素、多種LH-RH促效劑)，以及其任何排列的任 何組合。如在此使用的術(shù)語(yǔ)"指導(dǎo)性材料"包括可用以交流試劑盒中的本 發(fā)明的化合物、組合，和/或組合物用于影響、緩解或治療在此所列舉 的各種疾病或不良狀況的用途的出版物、記錄、簡(jiǎn)表或任何其它表達(dá) 媒體。該指導(dǎo)性材料可在選地或可另外選擇地描述一種或多種緩解細(xì) 胞、組織或哺乳動(dòng)物(包括在此其它i也方所公開(kāi)的)的疾病或不良狀況的 方法。試劑盒的指導(dǎo)性材料，例如可附加在包含本發(fā)明的化合物和/或組 合物的容器中或與含該化合物和域組合物的容器一起裝運(yùn)。可選地是， 該指導(dǎo)性材料可與該容器分別裝運(yùn)以便使接受者能協(xié)作地使用該指導(dǎo) 性材料和該化合物。應(yīng)注意，術(shù)語(yǔ)"患者(patient)"或"受試者(subject)"除了可互換 使用外，是微喃乳動(dòng)物，如人類患者，和非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物以及獸醫(yī)的 受試者，如兔、大鼠、和小鼠、以及其它動(dòng)物。優(yōu)選患者是人。在此所使用習(xí)慣表示法來(lái)描述多肽序列多肽序列的左手端為氨 基末端；多肽序列的右手端為羧基未端。如在此所使用的術(shù)語(yǔ)"特異性結(jié)合"是指可識(shí)別和結(jié)合特定分子， 但實(shí)質(zhì)上并不會(huì)識(shí)別或結(jié)合樣品中的其它分子的化合物，例如蛋白質(zhì)、 核酸v抗體和類似物。例如可識(shí)別并結(jié)合樣品中的同源配體但是實(shí)質(zhì) 上不識(shí)別或結(jié)合該樣品中的其它分子的抗體或肽抑制劑(例如可以與其 同源抗原CTXA4結(jié)合的抗CTLA4抗體)。因此，在指定的測(cè)定條件下， 該特異結(jié)合部分(例如抗體或其抗原結(jié)合部分)可優(yōu)先與特殊耙分子結(jié) 合且并不會(huì)與存在于試驗(yàn)樣品中的其它組分顯著地結(jié)合?？墒褂酶鞣N測(cè)定方式來(lái)選擇能與目標(biāo)分子特異結(jié)合的抗體。例如使用國(guó)相.ELISA 免疫測(cè)定法、兔狡沉淀法、BlAcore及Western印跡分析來(lái)鑒定可與 CTLA4特異性反應(yīng)的抗體。 一般特異性或選擇性反應(yīng)為背景信號(hào)或噪 聲的至少兩倍，更典型地超過(guò)10倍背景信號(hào)，甚至更具體地，當(dāng)平衡 解離常數(shù)(Ku):S10HM,優(yōu)選S100nM,蕺優(yōu)選SlOnM時(shí)，抗體被稱為 能與抗原"特異結(jié)合"。術(shù)語(yǔ)"KD"是指特殊抗體-抗原相互作用的平衡解離常數(shù)。如在此所使用的"實(shí)質(zhì)上純的"是指一目標(biāo)物種為存在的主要物 種(即，以靡爾濃度計(jì)算其含量大于組合物內(nèi)的任何其它單個(gè)物種)，且 實(shí)質(zhì)上純的餾份優(yōu)選為一組合物，其中該目標(biāo)物種(例如，抗CTAL4 抗體)包括存在的所有大分子物種的至少大約S0% (基于摩爾濃度)。通 常，實(shí)質(zhì)上純的組合物可包含該組合物中存在的所有大分子物種的大 約80%以上，更優(yōu)選地超過(guò)大約85%、 90%、 95%、和99%。更優(yōu)選 該目標(biāo)物種被純化至主要是均質(zhì)的(通過(guò)常規(guī)的檢測(cè)方法在組合物中不 能檢測(cè)到污染物種)，其中該組合物基本上由單一的大分子物種組成。如在此所使用的"治療"是指減少患者所體驗(yàn)的疾病癥狀(即，腫 瘤生長(zhǎng)和/或轉(zhuǎn)移或由免疫細(xì)胞的數(shù)量和/或活性而介導(dǎo)的其它作用)發(fā) 作的頻率。該術(shù)語(yǔ)包括給予本發(fā)明的化合物或藥劑以預(yù)防或延緩疾病 癥狀、并發(fā)癥或生化指標(biāo)(例如，PSA水平的升高)的發(fā)作，緩解癥狀或 阻止或抑制該疾病、不良狀況或功能障礙的進(jìn)一歩進(jìn)展。治療可以是 預(yù)防性(預(yù)防或延緩疾病的發(fā)作，或預(yù)防臨床表現(xiàn)或其亞臨床癥狀的出 現(xiàn))或治療性抑制或緩解該疾病出現(xiàn)后的癥狀。I.聯(lián)合治療本發(fā)明涉及下面所述的能結(jié)合人CTLA4的抗體或該抗體的抗原-結(jié)合部分的給藥與激素療法聯(lián)合治療前列腺癌的方法。不管該前列腺 癌為激素依賴性或非依賴性的，根據(jù)本發(fā)明的方法阻斷CTLA4和減少 患者雄激素水平的組合可提供協(xié)同的有益治療效果，下面將詳細(xì)地進(jìn) 行討論。盡管本發(fā)明包括許多聯(lián)合療法，其中該抗體與至少一種前列腺腫 瘤激素治療劑一起給予患者，但本發(fā)明決不限于這些例證的藥劑，在
此提出的這些藥劑僅用于說(shuō)明。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，抗CTJLA4抗體或其抗原一結(jié)合部分 在給予激素治療劑之后一天以上且不超過(guò)28天時(shí)給予。該激素治療劑 和該抗體的用量能有效地聯(lián)合治療前列腺癌。不管腫瘤的激素依賴性 狀態(tài)如何，在抗體療法實(shí)施前都可給予激素療法。例如，當(dāng)胂瘤是激 素依賴型，沒(méi)有評(píng)估激素依賴性狀態(tài)但之前也沒(méi)有給予激素療法，或 腫瘤已知是非激素依賴型(也稱為"激素抵抗型")，結(jié)合人CTLA4的 抗體或該抗休的扭原結(jié)合部分在給予激素治療劑后一天以上且不超過(guò) 28天時(shí)給予。該藥劑包括，但不限于抗雄激素、促性腺激素-釋放激 素(GnRH)拮抗劑、和促黃體生成激索-釋放激素(LH-RH)促效劑，及其 組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)在給予至少一種激素治療劑后一天以上 時(shí)給予抗CTLA4抗體介導(dǎo)了協(xié)同或累積作用。不想受限于本發(fā)明的任 何特定理論，激素療法可增加(可能通過(guò)前列腺的凋亡或其它結(jié)構(gòu)改 變)(多種)前列腺腫瘤特異性抗原與免疫系統(tǒng)的接觸，這樣對(duì)腫瘤細(xì)胞 的兔疫應(yīng)答增強(qiáng)了 。即激素療法可通過(guò)腫瘤細(xì)胞的死亡介導(dǎo)在宿主中 建立或增加腫瘤特異性抗原的來(lái)源，其接著可將腫瘤抗原提呈給宿主 抗原遞呈途徑?？笴TLA4抗體可介導(dǎo)對(duì)該抗原遞呈途徑中腫瘤-特異 性抗原水平增加而增強(qiáng)的兔疫應(yīng)答，從而提供協(xié)同效應(yīng)。在可以與通 過(guò)細(xì)胞死亡釋放胂瘤-特異性抗原而增強(qiáng)免疫應(yīng)答的抗CTLA4協(xié)同的 其它聯(lián)合治療方法中有放射、手術(shù)和激素療法。此外，雄激素水平下降可增強(qiáng)或延長(zhǎng)患者的免疫應(yīng)答，其可經(jīng)非 腫瘤特異性作用而介導(dǎo)，例如降低雄激素水平可經(jīng)與攻擊該腫瘤無(wú)關(guān) 的浙L制介導(dǎo)增強(qiáng)的免疫應(yīng)答。在此公開(kāi)的數(shù)據(jù)表明在雄激素阻斷和本 發(fā)明的抗CTLA4抗體之間可能有一種顯而易見(jiàn)的生物相互作用，其會(huì) 引起更為嚴(yán)重的腹瀉，這種腹瀉在僅使用該抗體時(shí)可觀察到，表明該 聯(lián)合治療的有效性提高。以前的研究認(rèn)為雄激素在免疫系統(tǒng)中有重要 作用。一般可見(jiàn)Grassman， &fe ce 227:257-261(1985)(討論性腺類固 醇對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)控)；CMsen和Kovacs, J附m鵬o/og/c及幼.23:281-288 (2001)(討論雄激素對(duì)T及B淋巴細(xì)胞發(fā)育的影響)Sutherland等人， iiw附鵬oZ. 175:2741-2753(2005)(提到在雄激素阻斷后的胸腺再生)；
Tanriverdi等人，< //".五;《/0"/"0/.176:293-304(2003)(討論免疫系統(tǒng)和 CnRH及性甾體之間的潛在相互作用);及Mercader等人,戶raeMrf/血W &/ C/S4 98: 1456544570(2001)(提到在雄激素去勢(shì)后前列腺的T細(xì)胞 浸潤(rùn)增加)；Arien等人，/C/ro/H4: 539-546(2005)(討論使用袞達(dá)前列 腺抗原PSA的痘病毒載體的疫苗接種和激素療法聯(lián)合使用)。不想受限于本發(fā)明的任何理論，雄激素阻斷及抗CTLA4抗體的聯(lián) 合可以在前列腺內(nèi)誘發(fā)高于預(yù)期的更強(qiáng)的免疫應(yīng)答。因此，尤其使用 亮丙瑞林及比卡魯胺的組合的雄激素阻斷與抗CTLA4抗體的聯(lián)合使用 可產(chǎn)生潛在的協(xié)同作用，從而提供了重要的治療前列腺癌的新方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體療法是對(duì)之前尚未接受激素療法的患者 給予激素療法后不超過(guò)28天時(shí)實(shí)施的。其可以在，例如腫瘤的激素依 賴狀態(tài)尚未經(jīng)評(píng)估的時(shí)候進(jìn)行。抗體療法是在給予激素療法后的至少 —天且不超過(guò)28天時(shí)給予。優(yōu)選激素療法在抗體療法的整個(gè)過(guò)程中持 續(xù)進(jìn)行。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其部分是在給予激素治療劑后的不 到21天時(shí)給予。此外，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié) 合部分在給予激素治療劑后兩天以上時(shí)給予。還是在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體在給予激素治療劑后-一天以上且 不超過(guò)28天時(shí)給予，其中激素療法的給藥在給予抗體前終止。即一旦 給予該抗體，患者并未接受額外的激素療法；然而，根據(jù)需要可給予 多次劑量的抗體，而不進(jìn)一歩給予激素療法。同樣，在另一個(gè)實(shí)施方 案中，抗體在給予激素治療劑后兩天以上且不超過(guò)21天時(shí)給予，該激 素療法的給藥在抗體給藥之前終止。在一個(gè)實(shí)施方案中，前列腺癌為激素依賴型，而在另一個(gè)實(shí)施方 案中，該癌為非激素依賴型。因此，當(dāng)抗體在給予激素治療劑后一天 以上且不超過(guò)28天時(shí)給予時(shí)，則該前列腺癌可以是激素依賴型或非激 素依賴型。不管腫瘤的激素狀態(tài)如何，這種給藥方式可提供協(xié)同的有 .益治療效應(yīng)。當(dāng)腫瘤為激素依賴型時(shí)，可給予激素治療劑。在給予激素療法的 用藥劑量后至少一天且不超過(guò)28天后對(duì)該患者實(shí)施抗體療法，在給予 抗體后激素療法可持續(xù)進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)理論，這種治療對(duì)患
者提供的好處在于其增加了(多種)腫瘤特異性抗原的暴露和/或減少了 雄激素的任何免疫下調(diào)作用，因此可激發(fā)和/或延長(zhǎng)了對(duì)該腫瘤的免疫 應(yīng)答，從而對(duì)該患者提供有益的治療。激素療法的終止與腫瘤反應(yīng)有關(guān)，例如腫瘤消退、PSA水平的穩(wěn)定或下降、減輕骨疼痛和類似狀況, 表明激素療法的停止與腫瘤生-長(zhǎng)的控制中相對(duì)立的變化有關(guān)，當(dāng)與后 續(xù)的CTLA4抗體療法聯(lián)合使用可具有協(xié)同效應(yīng),從而產(chǎn)生治療的益處。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)腫瘤為激素依賴型時(shí)，包括至少一種激 素治療劑的激素療法與抗CTLA4抗體共同給予。即使當(dāng)腫癇為非激素 依賴型時(shí)，減少雄激紫的治療與抗體療法共同實(shí)施可提供協(xié)同或累加 效應(yīng)。如先前更詳細(xì)地討論，不想受限于本發(fā)明的任何特定理論，降 低雄激素水平的激素療法可能可以介導(dǎo)腫瘤抗原對(duì)兔疫系統(tǒng)的暴露增 加和/或減少雄激素可能介導(dǎo)的任何免疫抑制作用。可選的是，降低i軀 激素水平的激素療法可介導(dǎo)對(duì)胸腺的作用，增強(qiáng)免疫系統(tǒng)進(jìn)行獲得性 免疫應(yīng)答的能力[見(jiàn)Sutherland等人,乂 /冊(cè)ra"o/. !75:2741-2753(2005)。 《旦本發(fā)明包括通過(guò)給予這種聯(lián)合治療通過(guò)任何機(jī)制來(lái)為患者提供有益 的治療效果。在另--個(gè)實(shí)施方案中，抗體療法在給予激素療法前實(shí)施。即為了 達(dá)到最大益處(例如胂瘤消退、緩解骨疼痛、降低或穩(wěn)定PSA水平等)， 抗體療法可每月給予一次或每2個(gè)或3個(gè)月給予一次，然后除了抗體 療法外又進(jìn)行瀲素療法或停止抗體療法，然后給予激素療法。這是因 為由于抗體的半衰期長(zhǎng)且受之前給予的抗體療法影響的T細(xì)胞的持續(xù) 存在，之后額外的HT或用HT替代抗體療法，可改變抗體引發(fā)的免疫 應(yīng)答的性質(zhì)和/或增強(qiáng)該兔疫應(yīng)答。因此，本發(fā)明包括首先給予抗體療 法，優(yōu)選較長(zhǎng)的時(shí)間(例如l個(gè)月，更優(yōu)選2個(gè)月，甚至更優(yōu)選3個(gè)月， 還更優(yōu)選4個(gè)月的抗體療法)，然后共同給予激素療法或以激素療法替 代抗體療法。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體療法在手術(shù)之前給予的新輔助治療。手 術(shù)后，給予激素療法，替代連續(xù)抗體療法或與連續(xù)抗體療法一起實(shí)施。 這是因?yàn)槿缜八?，在激素療法之前給予抗體療法，然后在不進(jìn)行連 續(xù)抗體療法的情況下給予激素療法，或在前列腺切除術(shù)后除了抗體療 法外又給予激素療法，可對(duì)患者提供協(xié)同的治療效應(yīng)。
如前所述，許多激素治療劑在本領(lǐng)域中是公知的，因此本發(fā)明包括，但不限于例證的抗雄激素、GnRH拮抗劑，LH-RH促效劑的應(yīng) 用?？剐奂に匕?，例如非類固醇抗雄激素，諸如，但不限于比卡 魯胺(CASODEX)、尼魯米特(NILANDRON)、氟他胺(EULEXIN、 .DROGEML),和類固醇抗雄激素，包括甲地孕酮(MEGACTB),和去乙 酰環(huán)丙氯地孕酮(ANDROCUR))。 GnRH拮抗劑尤其包括阿巴瑞克 (PLJENAXIS)和組氨瑞林(SUPJPREUN)。 LH-RH促效劑包括，例如亮丙 瑞林(亮丙瑞林；LUPRON、 ELIGARD)、戈舍瑞林(ZOLADEX)、布舍 瑞林(SUPREFACT)、曲普瑞林(tiyptore!in)(DECAPEPTYL)等。在另一個(gè)實(shí)施方案中，非瀲素依賴型前列腺癌的治療包括給予患 者抗體或其抗原結(jié)合部分，及激素治療劑，其中激素療、法以多次劑量 給藥，時(shí)間超過(guò)一個(gè)月，而該抗體或其抗原結(jié)合部分在激素療法給藥 期間給予。此外，這些用量能有效地聯(lián)合治療前列腺癌。如前所述， 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)理論，甚至當(dāng)前列腺癌為非激素依賴型時(shí)，激紫療 法與抗體療法的聯(lián)合使用可介導(dǎo)腫瘤抗原的暴露和/^或減少雄激素的任 何兔疫抑制作用，因此激素療法與CTLA4阻斷的聯(lián)合可提供與僅使用 任一種治療相比更強(qiáng)的和/或更長(zhǎng)時(shí)間的兔疫應(yīng)答。在--個(gè)實(shí)施方案中，激素治療劑以多次劑量給藥，周期超過(guò)--個(gè) 月。而且，在另一個(gè)實(shí)施方案中，在激素療法的超過(guò)2個(gè)月的給藥周 期期間，以多次劑量給予抗體，周期超過(guò)一個(gè)月。超過(guò)一個(gè)月的多次 劑量的抗體給藥可與激素療法的給藥周期重疊。在另一個(gè)實(shí)施方案中， 抗體的給藥周期與激素的給藥周期可重疊超過(guò)兩個(gè)月。此外，還是在 另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體的給藥周期與激素的給藥周期可重疊超過(guò)6 個(gè)月。本領(lǐng)域技術(shù)人員從本文公開(kāi)的內(nèi)容中要理解的是，激素的給藥 周期以及抗體的給藥周期可重疊并根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整以提供有益的治 療效果。在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)由于腫瘤被認(rèn)為是非激素依賴型而中斷 先前的激素療法時(shí)，則激素療法可以與抗CTLA4抗體一起再次給予 (即，使用與先前給予的相同或不同的激素治療劑)。在本實(shí)例中，激素 療法包括給予至少一種激素治療劑，例如抗雄激素和LH-RH促效劑、 抗雄激素和GnRH拮抗劑和抗CTLA4抗體(例如4丄1、 4.3.1、 6.1.1、 tidlimuraab、 ipilimumab)或其抗原結(jié)合部分。更優(yōu)選激素治療劑包括， 但不限于比卡魯胺、氣他胺、尼魯米特，及亮丙瑞林，且與抗體一 起給藥，周期超過(guò)一個(gè)月。在另--個(gè)實(shí)施方案中，給予多次劑量的抗 體和激素治療劑，且抗體的給藥周期與激素療法重疊至少一個(gè)月。還是在另一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)患有激素依賴型腫瘤的患者共同給 予包括至少兩種激素冶療劑的激素療法和抗體療法。即對(duì)患激素依賴 型前列腺癌患者給予包括至少兩種激素治療劑以提供最大雄激素抑制 治療作用的激素療法，其中腫瘤的腫瘤依賴性狀態(tài)已經(jīng)被確定和/或其 中該狀態(tài)并未被確定，但其中該患者尚未接受先前的激素療法。不想 受限于本發(fā)明的任何理論，最大雄激素抑制性激素療法及抗CTLA4抗 體療法的共同給藥對(duì)患者提供有益效果的原因在于這種聯(lián)合應(yīng)用可增 加(多種)腫瘤特異性抗原的暴露和/或減少雄激素的任何免疫抑制作 用，因此可引起和/或延長(zhǎng)對(duì)該腫瘤的免疫應(yīng)答，從而使對(duì)患者提供有 益的治療效果。因此，在本發(fā)明的該實(shí)施方案中，當(dāng)前列腺癌為激素依賴型時(shí)， 則可給予患者有效量的獨(dú)立選自抗雄激素、GnRH拮抗劑、和LH-RH 促效劑的至少兩種激素治療劑，和有效量的抗CTLA4抗體或其抗原結(jié) 合部分。激素治療劑和抗體的給藥可重疊且每種都可在(但未必)重疊的 時(shí)間內(nèi)以多次劑量給藥。根據(jù)需要可調(diào)整治療過(guò)程的時(shí)間長(zhǎng)度且這是 癌癥治療領(lǐng)域中的專業(yè)技術(shù)人員所公知的?？贵w和激素治療劑的給藥，同時(shí)或序貫性地，包括給予同時(shí)包括 抗CTLA4抗體和一種或多種附加的激素治療劑的藥學(xué)組合物，和給予 兩種或多種獨(dú)立的藥學(xué)組合物，其中一種包括抗CTLA4抗體，而另一 種(多種)包括附加的激素治療劑。此外，盡管共同給藥或聯(lián)合(結(jié)合)治 療包括互相同時(shí)給藥，其也包括同時(shí)、連續(xù)或單獨(dú)地給予該治療的但 個(gè)組分。另外，當(dāng)抗體經(jīng)靜脈給藥而(多種)激素治療劑經(jīng)口服給藥(例 如比卡魯胺，和類似藥物)或經(jīng)皮下或肌肉內(nèi)注射(例如亮丙瑞林)，可 以理解的是這種組合可以各自獨(dú)立的藥學(xué)組合物的形式給藥。當(dāng)治療包括共同給予抗CTLA4抗體和至少兩種激素治療劑的組合 時(shí)，則藥劑尤其可以是抗雄激素、促性腺激素-釋放激素(GnRH)拮抗劑、 和促黃體生成激素-釋放激素(LH-RH)促效劑。許多這種激素治療劑在
本領(lǐng)域中是公知的，因此本發(fā)明包括，但不限于前述的每種激素治 療劑種類中的實(shí)例化合物。更具體地，抗雄激素包括，例如非類國(guó)醇 抗雄激素包括比卡魯胺(CASODEX)、尼魯米特(NILANDRON)、氟他 胺(JEULBXIN, DR0GEN1L)、和類似物。類圃醇抗雄激素包括甲地孕 酮(MEGAOB)，和去乙酰環(huán)丙氯地孕酮(ANDROCUR))。促性腺激素-釋放激素GnRH拮抗劑尤其包括阿巴瑞克(PUENAXIS)和組氨瑞林 (SUPPRHLIN)。此外，促黃體生成激素-釋放激素LH-RH促效劑包括， 例如亮丙瑞林(亮丙瑞林；UJPRON、 ELIGARD)、戈舍瑞林 (ZOLADEX)、布舍瑞林(SUPREFACT)、曲普瑞林(DECAPEPTYL)、和 類似物。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗CTLA4抗體與抗雄激素(比卡魯胺)和 LH-RH促效劑(亮丙瑞林沐同給藥，但本發(fā)明包括至少兩種激素治療 劑以及單一激素治療劑，和抗CTLA4抗體的任何組合。如在此他處所述，亮丙瑞林是促黃體生成激素-釋放激素(LH-朋) 促效劑種類中的一個(gè)成員。亮丙瑞林尤其可用以治療男性前列腺癌、 女性子宮內(nèi)胰異位癥和纖維瘤，及兒童中心性性早熟。抗CTLA4抗體 與亮丙瑞林的組合，或進(jìn)一歩與比卡魯胺的組合適用于治療前列腺癌。 本發(fā)明包括聯(lián)合使用抗CTLA4抗體與抗雄瀲素治療，諸如，但不限于 亮丙瑞林和比卡魯胺作為治療非轉(zhuǎn)移性PSA升高(生化復(fù)發(fā))和/或轉(zhuǎn)移 性前列腺癌的新輔助治療、輔助治療，和/或一線治療和二線治療。優(yōu) 選該組合作為前列腺癌的新輔助治療。更具體來(lái)說(shuō)，新輔助治療是在 任何后續(xù)治療之前給予，例如激素療法和抗體療法的組合在前列腺切除術(shù)前給予。另外，如本說(shuō)明書他處所例證，該聯(lián)合治療或抗體療法 作為單一藥劑可以在前列腺切除術(shù)后繼續(xù)進(jìn)行。本發(fā)明的方法可以作為新輔助治療在手術(shù)、放療或任何其它治療-之前進(jìn)行以對(duì)腫瘤細(xì)胞致敏或?qū)颊咛峁┯幸娴闹委熜Ч?。但，本發(fā) 明并不限于該新輔助治療方案。而是可以在整個(gè)疾病及治療連續(xù)過(guò)程 中使用本發(fā)明的方法，例如，但不限于用于前列腺癌的輔助、PSA升 高(在臨床上出現(xiàn)轉(zhuǎn)移證據(jù)之前),和一線、二線和/或蘭線治療。本發(fā)明可進(jìn)一歩與其它藥劑及治療，例如化療、手術(shù)、放療、移 植和類似方法聯(lián)合治療患者。即該患者可接受另外的化療和公知的藥 劑，諸如，但不限于生長(zhǎng)因子抑制劑、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、烷化劑、生素、長(zhǎng)春花生物堿、免疫調(diào)節(jié)劑、紫杉烷、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM),諸如但不限于拉索昔芬(lasofoxifene),和血管 生成抑制劑。有許多治療劑，且已經(jīng)描述在，例如美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)第 2004/0005318、第2003/0086930號(hào)、第2002/0086014號(hào)、及國(guó)際專利
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