專利名稱：風(fēng)熱清制劑及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種風(fēng)熱清制劑及其制備方法和質(zhì)量控制方法，屬于中藥的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
中醫(yī)外感發(fā)熱證(風(fēng)熱型)與西醫(yī)的急性上呼吸道感染相似，是臨床常見病、多發(fā)病。由于感受風(fēng)熱邪毒，其病邪為陽邪，故發(fā)熱重，惡寒輕；風(fēng)熱上受故頭痛、咽痛、鼻塞；風(fēng)熱犯肺，肺失清肅，則咳嗽咯痰；舌紅苔薄黃或薄白，脈浮數(shù)為風(fēng)熱之象。如病情蔓延可繼發(fā)或并發(fā)急性中耳炎、鼻炎、鼻竇炎、喉炎、氣管炎、支氣管炎，甚至肺炎，嚴(yán)重危害人們的健康。根據(jù)外感發(fā)熱證(風(fēng)熱型)的病因病機(jī)和發(fā)病特點(diǎn)，治法為清熱解毒，宣肺達(dá)表，利咽化痰。目前，市售治療該類疾病的中西藥雖然繁多，但具有確切療效的甚少。為了更有效地防治該類疾病，本申請(qǐng)人研制出一種安全、有效的新藥。
此外，為了全面有效地控制藥品質(zhì)量，以確保其臨床療效，必須制定科學(xué)合理的質(zhì)量控制方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種風(fēng)熱清制劑及其制備方法和質(zhì)量控制方法，所提供的制劑用于外感風(fēng)熱所致的發(fā)熱、微惡風(fēng)寒、頭痛、咳嗽、流涕、口渴、咽痛，以及急性上呼吸道感染見上述癥狀者，其療效確切，無毒副作用，而且制備方法合理，產(chǎn)品質(zhì)量易控。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的按照重量組分計(jì)算它是由金銀花425-1700份、熊膽粉2.5-10份、青黛25-100份、桔梗250-1000份、瓜蔞皮200-800份和甘草100-400份制成的。
具體的說，按照重量組分計(jì)算它是由金銀花850份、熊膽粉5份、青黛50份、桔梗500份、瓜蔞皮400份和甘草200份制成的。
所述的制劑為口服液、片劑或膠囊劑。
本發(fā)明風(fēng)熱清制劑的制備方法為青黛用50％-90％乙醇浸漬12-48小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水100-600ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡0.2-2小時(shí)，煎煮0.5-2小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮1-3次，每次20-90分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.05-1.35，加乙醇使含醇量達(dá)50-90％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇，加入芳香水及熊膽粉，然后按常規(guī)方法制成不同的制劑。
優(yōu)選的制備方法為青黛用80％乙醇浸漬24小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水300ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡0.5小時(shí)，煎煮1小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮2次，每次40分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.10，加乙醇使含醇量達(dá)80％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇，加入芳香水及熊膽粉，然后按常規(guī)方法制成不同的制劑。
所述的口服液這樣制備青黛用80％乙醇浸漬24小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水300ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡0.5小時(shí)，煎煮1小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮2次，每次40分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.10，加乙醇使含醇量達(dá)80％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇，加入芳香水及熊膽粉，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至6.0-6.5，靜置，濾過；濾液加適量甜菊甙、尼泊金乙酯和香蕉香精，加水至1000mL，滅菌，灌封，即得。
所述的片劑這樣制備青黛用80％乙醇浸漬24小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水300ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡0.5小時(shí)，煎煮1小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮2次，每次40分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.10，加乙醇使含醇量達(dá)80％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏，加入熊膽粉，混勻，干燥，粉碎，過篩，加入芳香水及適當(dāng)輔料，制粒，干燥，壓片，包衣，即得。
所述的膠囊劑這樣制備青黛用80％乙醇浸漬24小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水300ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡0.5小時(shí)，煎煮1小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮2次，每次40分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.10，加乙醇使含醇量達(dá)80％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏，加入熊膽粉，混勻，干燥，粉碎，過篩，加入芳香水及適當(dāng)輔料，制粒，裝入膠囊，即得。
本發(fā)明風(fēng)熱清制劑(口服液)的質(zhì)量控制方法為所述質(zhì)量控制方法主要包括性狀、鑒別、檢查以及含量測(cè)定項(xiàng)目中的部分或全部；其中鑒別包括對(duì)制劑中青黛、熊膽粉和甘草的薄層色譜鑒別，含量測(cè)定是對(duì)制劑中金銀花和熊膽粉的含量測(cè)定。
所述質(zhì)量控制方法包括
性狀產(chǎn)品為深棕色液體，久貯有極少量振搖即分散的沉淀；氣微腥，味苦。
鑒別(1)取本制劑20ml，用氯仿提取二次，每次20ml，合并氯仿液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取靛玉紅對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯∶氯仿∶丙酮＝5∶4∶1為展開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色斑點(diǎn)。
(2)取本制劑20ml，水浴蒸干，加甲醇10ml使溶解，濾過，濾液置硬質(zhì)試管中，水浴蒸至近干，加5％氫氧化鈉溶液5ml，水浴加熱6-8小時(shí)，隨時(shí)補(bǔ)充失去的水分，放冷，加鹽酸調(diào)節(jié)PH至1-2，用醋酸乙酯提取二次，每次5ml，合并醋酸乙酯液，濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取熊去氧膽酸對(duì)照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2-3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷∶乙醚∶冰乙酸∶正丁醇∶水＝10∶5∶5∶3∶1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，于105℃烘5分鐘，取出，10分鐘后置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(3)取本制劑20ml，加鹽酸1ml與氯仿20ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，分取氯仿液，蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以30-60℃石油醚∶苯∶醋酸乙酯∶冰醋酸＝10∶20∶7∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，于105℃烘5分鐘；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
檢查相對(duì)密度 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIA檢測(cè)，應(yīng)不低于1.04；pH值照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIG檢測(cè)，應(yīng)為4.0～6.0；其他 應(yīng)符合中國(guó)藥典2005年版一部附錄IJ合劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。
含量測(cè)定(1)金銀花 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.2％三乙胺∶甲醇∶磷酸＝800∶200∶1為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為328nm，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.03mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備 精密量取本制劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，加流動(dòng)相稀釋成10ml，作為供試品溶液；測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本制劑每1ml含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計(jì)，不得少于2.5mg。
(2)熊膽粉 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填料；甲醇∶0.03mol/L磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.4)＝65∶35為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；理論板數(shù)按牛磺熊去氧膽酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2500；對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷容器中減壓干燥至恒重的?；切苋パ跄懰釋?duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋至每1ml含1mg的溶液，即得；供試品溶液的制備 精密量取本制劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，加流動(dòng)相稀釋成10ml，作為供試品溶液；測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本制劑每1ml含熊膽粉以?；切苋パ跄懰?C26H45NO8S)計(jì)，不得少于1.2mg。
本發(fā)明的方解本方由金銀花、青黛、瓜蔞皮、桔梗及熊膽粉六味藥物組成。方中金銀花“既有辛涼透邪清熱之效，又具芳香辟穢解毒之功”，于清熱解毒中寓輕宣疏散，清宣并用，透邪出表，無冰伏邪氣之弊，針對(duì)風(fēng)熱毒邪引起的主癥及病機(jī)，為君藥。再輔以熊膽粉與青黛二藥為臣藥。熊膽粉苦寒無毒，清熱解毒。青黛清熱解毒，涼血，定驚。甘草長(zhǎng)于清熱解毒，配桔梗有宣肺祛痰之效。瓜蔞皮善清熱寬胸，滌痰散結(jié)，均為祛痰要藥，共為方中佐使，如此配伍，君臣佐使配合精當(dāng)，清熱解毒，宣肺達(dá)表，利咽化痰功效皆具，藥味少而療效好。
本發(fā)明制劑的功能主治清熱解毒，宣肺透表，利咽化痰。用于外感風(fēng)熱所致的發(fā)熱、微惡風(fēng)寒、頭痛、咳嗽、流涕、口渴、咽痛，以及急性上呼吸道感染見上述癥狀者。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明制劑清宣并用，組方嚴(yán)謹(jǐn)，具有清熱解毒、宣肺、透表、利咽、化痰之效，對(duì)感冒風(fēng)熱證及上呼吸道感染的療效確切，無毒副作用，且其制備工藝和質(zhì)量控制方法科學(xué)合理，可有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，從而確保其臨床療效。
為了驗(yàn)證本發(fā)明制劑具有良好的治療效果，申請(qǐng)人進(jìn)行了一系列試驗(yàn)研究，具體如下一、制劑處方篩選金銀花，青黛，瓜蔞皮，甘草四味藥材組成“青黛飲”，來源于清代劉奎《松峰說疫》；桔梗、甘草二味組成“桔梗湯”，出自張仲景《傷寒論》。故本方為“青黛飲”與“桔梗湯”二方相合加熊膽粉及輔料組成。
(一)材料1、受試藥物風(fēng)熱清口服液(簡(jiǎn)稱風(fēng)熱清，金銀花850g、熊膽粉5g、青黛50g、桔梗500g、瓜蔞皮400g、甘草200g制備而成)，由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科制備，批號(hào)911228。相當(dāng)于生藥2g/ml。
青黛飲(青黛50g、甘草200g、金銀花850g、瓜蔞皮400g)，由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科制備，相當(dāng)于生藥1.5g/ml。
桔梗湯(桔梗500g、甘草200g)，由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科制備，相當(dāng)于生藥0.7g/ml。
青黛飲+桔梗湯(青黛50g、甘草200g、金銀花850g、瓜蔞皮400g、桔梗500g)，由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科制備，相當(dāng)于生藥2g/ml。
2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，NIH小鼠(體重18～22g)，SD大鼠，由華西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心、四川省醫(yī)科院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，均符合健康一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。日本大耳白兔由農(nóng)業(yè)部成都生物藥品廠提供。
(二)方法與結(jié)果1、解熱作用1.1對(duì)菌苗致家兔發(fā)熱的影響 家兔，雌雄均有，體重2.5±0.2kg，實(shí)驗(yàn)前禁水15h。用溫度指示儀間隔1h測(cè)量正常體溫(肛溫)2次，選取2次溫差不超過0.3℃，平均體溫在38.4～39.6℃的家兔，自耳緣靜脈注入傷寒副傷寒甲乙三聯(lián)菌苗0.5ml/kg，1h后再測(cè)量體溫，取升溫0.8℃以上的發(fā)熱家兔，按升溫高低均勻分為6組，風(fēng)熱清組灌服風(fēng)熱清20ml/kg(相當(dāng)于40g/kg)；青黛飲組灌服青黛飲20ml/kg(相當(dāng)于生藥30g/kg)；桔梗湯組灌服桔梗湯20ml/kg(相當(dāng)于生藥14g/kg)；青黛飲+桔梗湯組灌服青黛飲+桔梗湯20ml/kg(相當(dāng)于生藥40g/kg)；陽性對(duì)照組灌服0.75％阿司匹林20ml/kg(0.15g/kg)，空白對(duì)照灌服等容積生理鹽水，給藥后每隔1h同法測(cè)量體溫1次，共測(cè)5次，計(jì)算其體溫變化，結(jié)果見表1。
表1對(duì)家兔菌苗發(fā)熱的影響(X±S)

表1結(jié)果表明，家兔注射菌苗后1h體溫已明顯升高，3h(給藥后1h)達(dá)高峰。風(fēng)熱清40g/kg組在致熱后各時(shí)間體溫升高均顯著低于對(duì)照組、青黛飲組、桔梗湯組和青黛飲+桔梗湯。
1.2對(duì)角叉菜膠致大鼠發(fā)熱的影響 雄性大鼠，體重164±20g，實(shí)驗(yàn)前禁水15h，用溫度指示間隔1h測(cè)量正常體溫(肛溫)3次，選擇平均體溫38～39℃，溫差不超過0.2℃的大鼠32只，按正常體溫隨機(jī)分為6組。于每鼠兩后肢足跖部皮下分別注入1％角叉菜膠0.1ml致熱，隨后按表2所示劑量灌胃給藥，于致熱后4～8h，每隔1h同法測(cè)量各鼠體溫1次，共測(cè)5次。
表2對(duì)大鼠角叉菜膠發(fā)熱的影響(X±S)

結(jié)論由上述試驗(yàn)結(jié)果可知，風(fēng)熱清處方較其他組方更具明顯的退熱效果。
二、穩(wěn)定性考察本發(fā)明質(zhì)量控制中增加了?；切苋パ跄懰岷繙y(cè)定，為了考察風(fēng)熱清口服液中的?；切苋パ跄懰岬暮孔兓闆r，依據(jù)本發(fā)明的風(fēng)熱清口服液質(zhì)量控制方法，我們做了如下的穩(wěn)定性試驗(yàn)(一)室溫穩(wěn)定性試驗(yàn)將2003年本申請(qǐng)人生產(chǎn)包裝(藥用PVC/PE瓶，10ml×6支/盒)的三批(批號(hào)為031001、031002、031003)產(chǎn)品室溫穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)收錄如下(試驗(yàn)條件室溫留樣觀察；考察項(xiàng)目性狀、鑒別、相對(duì)密度、PH值、裝量差異、微生物限度、含量；試驗(yàn)原則于0個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月、18個(gè)月分別取樣一次進(jìn)行考察，然后每年取樣一次進(jìn)行考察)。結(jié)果見表3～表7。
表3長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)(0個(gè)月)試驗(yàn)日期2003年10月20日

表4長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)(3個(gè)月)試驗(yàn)日期2004年1月22日

表5長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)(6個(gè)月)試驗(yàn)日期2004年04月20日


表6長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)(12個(gè)月)試驗(yàn)日期2004年10月22日


表7長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)(18個(gè)月)試驗(yàn)日期2005年04月21日


(二)加速穩(wěn)定性試驗(yàn)將2003年本申請(qǐng)人生產(chǎn)包裝(藥用PVC/PE瓶，10ml×6支/盒)的三批(批號(hào)為031001、031002、031003)產(chǎn)品加速穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)收錄如下(試驗(yàn)條件溫度37℃～40℃、相對(duì)濕度75％；考察項(xiàng)目性狀、鑒別、相對(duì)密度、PH值、裝量差異、微生物限度、含量；試驗(yàn)原則于0個(gè)月、1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月分別取樣一次進(jìn)行考察)。結(jié)果見表8～表11。
表8加速穩(wěn)定性試驗(yàn)(0個(gè)月)試驗(yàn)日期2003年10月20日


表9加速穩(wěn)定性試驗(yàn)(1個(gè)月)試驗(yàn)日期2003年11月21日


表10加速穩(wěn)定性試驗(yàn)(2個(gè)月)試驗(yàn)日期2003年12月20日


表11加速穩(wěn)定性試驗(yàn)(3個(gè)月)試驗(yàn)日期2004年01月22日


結(jié)論本品2003年三批(批號(hào)為031001、031002、031003)產(chǎn)品的室溫長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)18月與加速穩(wěn)定性試驗(yàn)3月結(jié)果表明三批樣品各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)未見大幅度改變，各項(xiàng)考核項(xiàng)目均符合規(guī)定。證明本發(fā)明制劑的生產(chǎn)工藝能有效保證藥品的質(zhì)量，故將本品的有效期定為一年半是合理、可行的。
三、主要藥效學(xué)研究根據(jù)該方功能主治，申請(qǐng)人研究了風(fēng)熱清口服液的藥理活性，現(xiàn)總結(jié)如下(一)材料1、受試藥物風(fēng)熱清口服液(簡(jiǎn)稱風(fēng)熱清)，由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科制備，批號(hào)911228，相當(dāng)于生藥2g/ml(文中所列劑量均為生藥量)。
2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，NIH小鼠(體重18～22g)，SD大鼠，由華西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心、四川省醫(yī)科院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，均符合健康一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。日本大耳白兔由農(nóng)業(yè)部成都生物藥品廠提供(二)方法與結(jié)果1、解熱作用1.1對(duì)菌苗致家兔發(fā)熱的影響 家兔，雌雄均有，體重2.5±0.2kg，實(shí)驗(yàn)前禁水15h。用溫度指示儀間隔1h測(cè)量正常體溫(肛溫)2次，選取2次溫差不超過0.3℃，平均體溫在38.4～39.6℃的家兔，自耳緣靜脈注入傷寒副傷寒甲乙三聯(lián)菌苗0.5ml/kg，1h后再測(cè)量體溫，取升溫0.8℃以上的發(fā)熱家兔，按升溫高低均勻分為4組，兩給藥組分別灌服200％與50％的風(fēng)熱清20ml/kg(相當(dāng)于生藥40g/kg與10g/kg)，陽性對(duì)照組灌服0.75％阿司匹林20ml/kg(0.15g/kg)，空白對(duì)照灌服等容積生理鹽水，給藥后每隔1h同法測(cè)量體溫1次，共測(cè)5次，計(jì)算其體溫變化，結(jié)果見表12。
表12對(duì)家兔菌苗發(fā)熱的影響(X±S)

與同期對(duì)照組比較aP＜0.05；bP＜0.01；cP＜0.001(下表同)。
表12結(jié)果表明，家兔注射菌苗后1h體溫已明顯升高，3h(給藥后1h)達(dá)高峰。風(fēng)熱清40g/kg組在致熱后各時(shí)間體溫升高均顯著低于對(duì)照組，10g/kg組的體溫增高僅在給藥后2h與對(duì)照組比較有顯著性差異。
1.2對(duì)角叉菜膠致大鼠發(fā)熱的影響 雄性大鼠，體重164±20g，實(shí)驗(yàn)前禁水15h，用溫度指示間隔1h測(cè)量正常體溫(肛溫)3次，選擇平均體溫38～39℃，溫差不超過0.2℃的大鼠32只，按正常體溫隨機(jī)分為4組。于每鼠兩后肢足跖部皮下分別注入1％角叉菜膠0.1ml致熱，隨后按表13所示劑量灌胃給藥，于致熱后4～8h，每隔1h同法測(cè)量各鼠體溫1次，共測(cè)5次。
表13對(duì)大鼠角叉菜膠發(fā)熱的影響(X±S)

表13結(jié)果表明，大鼠注射角叉菜膠后4h體溫已升高，6h達(dá)高峰，風(fēng)熱清給藥組在發(fā)熱各時(shí)期體溫升高均低于對(duì)照組，具有退熱趨勢(shì)。
2、抗炎作用2.1對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響 雄性大鼠60只，體重(178±20)g，按體重隨機(jī)分為5組，于每鼠右后足踝關(guān)節(jié)上方劃一線作為標(biāo)志，用毛細(xì)管放大法測(cè)量該足爪體積(排水毫升數(shù))，然后每鼠右后肢足跖部皮下注射1％角叉菜膠0.1ml致炎，致炎后0.5h與4h按表14所示劑量各灌胃給藥1次，同法測(cè)量給藥后1、2、3、4、6、7、24h該足爪體積，以其體積的改變(給藥前后排水量之差)表示炎癥腫脹程度，結(jié)果見表14。
表14對(duì)角叉菜膠大鼠足腫脹的影響(X±S)

注()內(nèi)為腫脹抑制百分率。
表14結(jié)果表明，風(fēng)熱清40、20與10g/kg對(duì)角叉菜膠引起的大鼠足炎性水腫均具有明顯抑制作用，尤其是大劑量，在致炎后24h抑制作用仍然顯著。
2.2對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響 雄性小鼠75只，隨機(jī)分為5組，連續(xù)灌胃給藥3d，以二甲苯為致炎劑測(cè)定各組耳腫脹度。結(jié)果對(duì)照組，風(fēng)熱清高(40g/kg)、中(20g/kg)、低(10g/kg)劑量組，潑尼松20mg/kg給藥(陽性對(duì)照)耳腫脹度分別為(11.2±1.7)，(9.3±2.6)，(8.6±2.5)，(10.7±1.9)，(7.6±2.4)mg。風(fēng)熱清高、中劑量與20mg/kg潑尼松具有顯著抗炎作用，與對(duì)照組比較分別為P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001。
2.3對(duì)小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增高的影響 雄性小鼠75只，隨機(jī)分為5組，連續(xù)灌胃給藥3d，末次給藥后1h，每鼠尾靜脈注射1％伊文思蘭0.1ml/10g，立即于下腹部皮內(nèi)注入0.1％磷酸組胺0.1ml，上腹部脫毛區(qū)滴二甲苯20μl，20min后處死小鼠，剪下二甲苯致炎部位蘭斑皮膚，剪碎后浸入2.5ml丙酮生理鹽水中，室溫放置24h，離心，取上清液置721分光光度計(jì)610nm比色，直接以O(shè)D值進(jìn)行比較；剝離并翻轉(zhuǎn)下腹部皮膚，分級(jí)法比較各鼠組胺皮丘周圍蘭染程度(蘭染程度分為4級(jí))。結(jié)果見表15。
表15對(duì)小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增高的影響(X±S)

由表15可知，對(duì)于二甲苯所引起的小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增高，風(fēng)熱清大、中、小劑量均具有顯著抑制作用，對(duì)于組胺所致皮膚毛細(xì)血管通透性增高，僅大劑量有明顯抑制效果。
3、抗菌作用3.1體外抗菌試驗(yàn) 采用“試管二倍稀釋法”測(cè)定風(fēng)熱清對(duì)8種常見致病菌的最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果表明，風(fēng)熱清對(duì)金葡菌、甲型與乙型鏈球菌、肺炎球菌、大腸桿菌、福氏痢疾桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌均具有一定抑菌作用，MIC分別為0.062，0.062，0.031，0.062，0.500，0.5000，0.125，0.25g/ml。
3.2對(duì)小鼠金葡菌感染的保護(hù)作用 小鼠100只，雌雄各半，按性別、體重隨機(jī)分為5組，連續(xù)灌胃給藥3d。金葡菌接種于肉湯培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15h，用無菌肉湯作1∶4稀釋(預(yù)試對(duì)小鼠的死亡率為90％)。于末次給藥后1h，每鼠腹腔注射上述金葡菌懸液0.5ml，染菌后2h再給藥1次(劑量減半)，觀察24h內(nèi)各組小鼠死亡情況。結(jié)果對(duì)照組，風(fēng)熱清40，20，10g/kg組，乙酰螺旋霉素1g/kg組(陽性對(duì)照)動(dòng)物死亡數(shù)分別為19/20，14/20，18/20，18/20，4/20，提示風(fēng)熱清可以降低小鼠感染金葡菌的死亡率，但保護(hù)作用不顯著(與對(duì)照組比較P＞0.05)。
3.3小鼠肺炎球菌感染的保護(hù)作用動(dòng)物、分組及給藥同“3.2”。肺炎球菌接種于含10％小牛血清的肉湯培養(yǎng)基中，置培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)18h，用無菌肉湯作1∶7稀釋(預(yù)試時(shí)對(duì)感染小鼠的死亡率為100％)，于末次給藥后1h，每鼠腹腔注射上述菌液0.5ml，觀察24h內(nèi)小鼠死亡情況。結(jié)果對(duì)照組，風(fēng)熱清40，20，10g/kg組，乙酰螺旋霉素組動(dòng)物死亡數(shù)分別為20/20，14/20，16/20，19/20，6/20，表明風(fēng)熱清能夠提高小鼠對(duì)肺炎球菌的抵抗能力，以高劑量組為顯著，感染小鼠死亡數(shù)與對(duì)照組比較P＜0.05。
4、抗病毒作用 流感病毒甲1型、甲3型，腺病毒3型、7型均作10-1與10-2稀釋，分別與不同濃度的藥液等量混合，接種于人胚腎細(xì)胞中(各兩管)吸附40min，加入2％小牛血清乳白蛋白細(xì)胞維持液，置37℃培養(yǎng)1周，逐日觀察細(xì)胞病變，流感病毒7d后作豚鼠血球吸附試驗(yàn)，以吸附試驗(yàn)陰性(一)為滅活指標(biāo)。腺病毒以細(xì)胞不出現(xiàn)腺病毒變(一)為滅活指標(biāo)。結(jié)果見表16、17。
表16對(duì)腺病毒的滅活作用

“-”表示細(xì)胞無病變，“+++”表示典型腺病毒病變。
表17對(duì)流感病毒的滅活作用

“-”表示血球吸附陰性，“+++”表示血球吸附陽性。
以上結(jié)果表明，風(fēng)熱清1∶10濃度對(duì)上述各型腺病毒及流感病毒均具有滅活作用，1∶20濃度對(duì)腺病毒3型、7型與流感病毒甲1型可滅活；1∶40濃度僅對(duì)較低濃度(10-2)腺病毒7型具有滅活作用。以相同藥物稀釋濃度比較，風(fēng)熱清對(duì)腺病毒與流感病毒甲1型的滅活作用強(qiáng)于抗病毒口服液，對(duì)流感病毒3型的滅活作用不如抗病毒口服液。
5、對(duì)免疫功能的影響5.1對(duì)小鼠單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬功能的影響 雄性小鼠40只，隨機(jī)分為4組，連續(xù)灌胃給藥7d。末次給藥后24h，尾靜脈注射墨汁(西德產(chǎn)，chroma)0.1ml/10g，于注射后30s與5min分別自眼眶血管叢取血25μl，加入0.1％Na2CO32ml中，置721分光光度計(jì)675nm比色測(cè)定OD值，計(jì)算吞噬指數(shù)K。結(jié)果對(duì)照組，風(fēng)熱清40，20g/kg組，左旋咪唑15mg/kg組的吞噬指數(shù)分別為0.033±0.008，0.042±0.009，0.036±0.007，0.046±0.011，其中高劑量組吞噬指數(shù)較對(duì)照組明顯增大(P＜0.05)，表明該藥物具有促進(jìn)小鼠單核巨噬細(xì)胞非特異性吞噬功能的作用，與15mg/kg左旋咪唑無顯著性差異。
5.2對(duì)小鼠遲發(fā)型皮膚超敏反應(yīng)(DCH)的影響 雄性NIH小鼠50只，隨機(jī)分為5組，連續(xù)灌胃給藥10d，用二硝基氯苯(DNCB)對(duì)小鼠進(jìn)行致敏與攻擊，測(cè)定各組小鼠的DCH反應(yīng)程度，以腹部蘭染皮伊文思蘭浸出液的OD值表示。結(jié)果對(duì)照組為0.073±0.017；風(fēng)熱清40g/kg組與20g/kg組分別為0.099±0.014(P＜0.01)與0.100±0.015(P＜0.01)；環(huán)磷酰胺20mg/kg(ip)組為0.044±0.019(P＜0.01)，環(huán)磷酰胺+風(fēng)熱清40g/kg組0.086±0.016(與環(huán)磷酰胺組比較P＜0.001)。表明風(fēng)熱清可以提高DNCB誘導(dǎo)的正常小鼠的DCH反應(yīng)與免疫低下(被環(huán)磷酰胺所抑制)的小鼠的細(xì)胞免疫功能。
6、止咳作用 雄性小鼠60只，隨機(jī)分為4組，采用氨水引咳法小鼠灌胃給藥后1h進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，接受氨水刺激1min后取出，觀察記錄2min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。結(jié)果對(duì)照組，風(fēng)熱清40，20g/kg組和可待因30mg/kg組小鼠的平均咳嗽次數(shù)分別為45.1±21.5，32.5±21.0，40.5±24.4和20.6±21.0(P＜0.01)，表明風(fēng)熱清對(duì)氨水刺激引起的小鼠咳嗽無明顯止咳作用。
7、祛痰作用 小鼠60只，雌雄均有，隨機(jī)分為4組，灌胃給藥后40min，用酚紅法測(cè)定各組小鼠呼吸道灌洗液的酚紅濃度(以O(shè)D值表示)。結(jié)果對(duì)照組為0.037±0.019；風(fēng)熱清40g/kg組與20g/kg組分別為0.064±0.019(P＜0.01)與0.051±0.014(P＜0.05)；氯化銨1g/kg組為0.060±0.021(P＜0.01)，表明風(fēng)熱清能使小鼠呼吸道粘膜的分泌量明顯增加，具有祛痰作用，40g/kg風(fēng)熱清的作用與1g/kg氯化銨接近(P＜0.05)。
討論以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，風(fēng)熱清口服液對(duì)傷寒副傷寒菌苗所引起的家兔發(fā)熱有顯著退熱作用，對(duì)角叉菜膠引起的大鼠發(fā)熱具有一定退熱作用，可以明顯抑制角叉菜膠所致大鼠足腫脹，二甲苯所致小鼠耳腫脹，降低組胺或二甲苯引起的小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增高，即通過多種途徑抑制以滲出水腫為主的急性炎癥。另外，酚紅試驗(yàn)顯示本制劑可以增加呼吸道粘膜的分泌，發(fā)揮祛痰作用。這些作用是臨床治療外感發(fā)熱癥(急性上呼吸道感染)的藥理學(xué)基礎(chǔ)之一。它可顯著增強(qiáng)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)對(duì)血中惰性碳粒的廓清能力，刺激正常與免疫功能低下小鼠的細(xì)胞免疫功能；本制劑對(duì)肺炎雙球菌及金葡菌感染小鼠引起的死亡具有一定保護(hù)作用，體外較高濃度能滅活流感病毒與腺病毒，抑制金葡菌、鏈球菌、肺炎雙球菌等G+球菌及部分G-桿菌的生長(zhǎng)，提示本制劑臨床療效與其提高機(jī)體免疫功能及直接殺抑病原微生物有關(guān)。
四、毒理學(xué)研究3.1急性毒性試驗(yàn)3.1.1材料風(fēng)熱清口服液成都中醫(yī)學(xué)院附院藥劑科制備，批號(hào)911228，濃度200％(每毫升相當(dāng)于原生藥2g)，PH4.5。濃縮至最大濃度供最大劑量組用(濃縮方法減壓蒸餾，收集約10％芳香水，重蒸餾的約2％芳香水，余藥液繼續(xù)濃縮為較稠的藥液，合并芳香水與濃縮藥液，計(jì)算其濃縮藥液濃度。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小白鼠，雌雄各半，體重20±2g，華西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，符合健康一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)合格證川醫(yī)動(dòng)管第007號(hào)。
3.1.2實(shí)驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)過程種，動(dòng)物自由飲水，進(jìn)食，觀察室室溫保持18～21℃，相對(duì)濕度70～80℃，自然光照明，換氣風(fēng)扇通風(fēng)，飼料為小鼠顆粒料，四川省醫(yī)科院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
3.1.3方法與結(jié)果取小鼠60只，按性別、體重隨機(jī)分成六組，每組10只，最高劑量組灌服上述濃縮藥液，其余各組用藥采用低比稀釋法稀釋，劑量比值為1∶0.85，灌胃體積為0.4ml/10g，給藥一次，觀察一周內(nèi)動(dòng)物的毒性反應(yīng)與死亡情況。給藥后小鼠活動(dòng)減少或匐伏不動(dòng)，上瞼下垂，部分小鼠豎毛，呼吸困難，隨劑量增加毒性反應(yīng)加重，嚴(yán)重者痙厥死亡，死亡時(shí)間在給藥后4～20小時(shí)內(nèi)，死亡小鼠立即尸檢，肉眼觀察主要臟器，未見異常，存活小鼠7日后處死觀察主要臟器，亦未見異常。
簡(jiǎn)化機(jī)率單位法 計(jì)算風(fēng)熱清口服液對(duì)小鼠口服給藥的LD50及95％可信限，結(jié)果見表18表18急性毒性研究結(jié)果

結(jié)論風(fēng)熱清口服液對(duì)小鼠口服給藥的LD50為422.16±28.69g生藥/kg(為臨床一日用量的211倍)。
3.2長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)3.2.1材料風(fēng)熱清口服液，濃度200％(每毫升相當(dāng)原生藥2g)，PH4.5，濃縮為800％與400％分別供大，中劑量組用(濃縮方法先蒸餾搜集約5％的芳香水，余藥液繼續(xù)水浴濃縮至一定體積，使?jié)饪s藥液與芳香水合并后達(dá)到所需濃度)，用蒸餾水稀釋為80％的濃度供小劑量組用。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康SD大白鼠，雌雄各半，體重150±20g，符合健康一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。
飼料大鼠顆粒料。
3.2.2方法取大鼠104只，按體重、性別分為四組，各給藥組分別灌服不同劑量的風(fēng)熱清口服液，對(duì)照組灌服容積飲用水(見表19)，每日給藥一次，連續(xù)給藥60天(根據(jù)體重變換每周調(diào)整給藥劑量一次)，停藥后繼續(xù)觀察20天，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，各組大鼠均自由進(jìn)食、飲水，飼養(yǎng)室室溫保持17～23℃，相對(duì)溫度70～80％，自然光照明，換氣風(fēng)扇通風(fēng)。
觀察指標(biāo)及檢測(cè)時(shí)間見表20，于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)全部大鼠自眼瞼血管叢取血作血常規(guī)與肝腎功能檢測(cè)，各組抽殺15只大鼠作病理檢查；停藥20天，對(duì)照組與大劑量組各余下的15只大鼠，同樣取血，處死作血常規(guī)、肝腎功能及病理檢查。
血液學(xué)和血液生化學(xué)檢測(cè)指標(biāo)及方法紅細(xì)胞計(jì)數(shù)器(R.B.C.)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)器(W.B.C.)及血紅蛋白(Hb)日本東亞公司CC-180型電子血球儀測(cè)定。
白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)常規(guī)方法。
血小板計(jì)數(shù)尿素法。
血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)賴氏法。
血清鹼性磷酸酶(AKP)對(duì)硝基苯磷酸二鈉法。
血清肌酐(Cr)鹼性苦味酸法。
血清尿素氨(uN)二乙酰一月虧法。
病理觀察內(nèi)容解剖肉眼觀察主要臟器，取腦、心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、胃、十二指腸、睪丸或卵巢、子宮等臟器，石蠟包埋切片，HE染色，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。
表19實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與處理

表20觀察指標(biāo)及檢測(cè)時(shí)間(√)

3.2.3結(jié)果見表21～表24。
(1)體重增長(zhǎng)及行為活動(dòng)表21風(fēng)熱清口服液對(duì)大鼠體重增長(zhǎng)的影響(gx±SD)

注()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)。
由上表可見，風(fēng)熱清口服液大、中、小劑量組給藥期間及停藥后20天，體重增長(zhǎng)正常，與對(duì)照組比較無顯著性差異(P＞0.05)，其中小劑量組于給藥20天后，體重增長(zhǎng)略大于對(duì)照組，各組動(dòng)物進(jìn)食，排便及行為活動(dòng)正常。
(2)血液學(xué)指標(biāo)表22風(fēng)熱清口服液對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(x±SD)


注()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)由上表可見，風(fēng)熱清口服液大、中、小劑量組在給藥60天后，紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)及血紅蛋白含量與對(duì)照組相比，均無顯著性差異(P＞0.05)，停藥20天，大劑量組的以上指標(biāo)與對(duì)照組比較無明顯差異(P＞0.05)。
表23風(fēng)熱清口服液對(duì)大鼠白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的影響(x±SD)

注()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)由上表可見，風(fēng)熱清口服液中、小劑量組在給藥60天，大劑量組在給藥60天與停藥后20天，白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)與對(duì)照組相比均無顯著性差異(P＞0.05)。
(3)肝、腎功能表24風(fēng)熱清口服液對(duì)大鼠肝、腎功能的影響(x±SD)


注()內(nèi)為動(dòng)物數(shù)上表結(jié)果表明風(fēng)熱清口服液中、小劑量組在給藥60天，大劑量組在給藥60天與停藥后20天血中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、尿素氮、肌酐濃度與對(duì)照組比較，均無顯著性差異(P＞0.05)。
(4)肉眼尸檢可見各組均有少數(shù)動(dòng)物的肺有不同程度的瘀血(片狀)，病理切片檢查，各給藥組與對(duì)照組比較，未見明顯病理改變；胃腸粘膜完整，無充血水腫及損傷；肝小葉結(jié)構(gòu)清楚，肝細(xì)胞無濁腫變性；腎皮質(zhì)內(nèi)腎小球與腎小管也無濁腫變性；腦膜完整，無充血水腫，各類細(xì)胞的排列及細(xì)胞形態(tài)正常；腎上腺、脾臟、睪丸與卵巢均未發(fā)現(xiàn)異常；各組均有個(gè)別動(dòng)物的肺有沉積瘀血及炎細(xì)胞團(tuán)快，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是灌胃時(shí)藥物嗆入肺所致3.2.4結(jié)論風(fēng)熱清口服液以每日100g生藥/Kg，50g生藥/Kg及10g生藥/Kg(相當(dāng)臨床成人日用量的50倍、25倍及5倍)給大鼠連續(xù)灌服60天，對(duì)體重增長(zhǎng)，行為活動(dòng)，血常規(guī)及肝腎功能均無明顯影響，主要臟器亦無明顯組織病理損傷，停藥后20天無遲緩性毒性反應(yīng)，說明該藥物臨床試驗(yàn)用劑量安全。
五、臨床資料本發(fā)明制劑經(jīng)中國(guó)中醫(yī)研究院西苑醫(yī)院衛(wèi)生部臨床藥理基地組織4家醫(yī)院進(jìn)行了臨床研究，與感冒口服液作對(duì)照觀察，結(jié)果如下(一)一般資料1.病例來源根據(jù)風(fēng)熱清口服液II期臨床試驗(yàn)計(jì)劃的要求，分別選擇了住院和門診患者，在452例患者中，住院病人316例，占病人總數(shù)的69.9％；門診病人135例，占30.1％。
2.性別452例病人中男性222人，女性230人，男∶女＝0.97∶1。兩組患者性別構(gòu)成比較如表25所示表25兩組患者性別構(gòu)成比較


兩組患者性別比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＞0.05，無顯著性差異，具有可比性。
3.年齡年齡分布如表26所示表26兩組患者年齡分布比較

兩組患者年齡比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＞0.05，無顯著性差異，說明組間年齡相似，具有可比性。
4.病情病情分級(jí)(輕、中、重)如表27所示表27兩組患者病情比較

兩組患者病情比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＞0.05，無顯著性差異，說明組間病情相似，具有可比性。
5.病程本病程是指此次上呼吸道感染的發(fā)病天數(shù)，如表28所示表28兩組患者病程比較

兩組患者病程比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＞0.05，無顯著性差異，具有可比性。
6.兩組病人中醫(yī)癥狀比較，如表29所示表29兩組病人中醫(yī)癥狀比較


治療前兩組病人中醫(yī)癥狀比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＞0.05，無顯著性差異，具有可比性。
7.兩組病人體征的比較，如表30所示表30兩組病人體征比較

治療前兩組病人的體征比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＞0.05，無顯著性差異，具有可比性。
8.兩組病人理化檢查咽拭培養(yǎng)、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(NAP)活性測(cè)定，白細(xì)胞總數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞(N)的比較，如表31所示表31兩組病人理化檢查比較


9.病原學(xué)比較，如表32所示(病原學(xué)的判斷系根據(jù)各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)綜合判斷)表32兩組病人病原學(xué)比較

(二)治療結(jié)果1.兩組總療效，如表33所示表33兩組總療效比較

兩組顯效率比較X2＝27.28，P＜0.01。
兩組總療效比較治療組總有效率為94.1％，顯效率為79.19％，明顯高于對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.01，有非常顯著性差異。
2.兩組癥狀療效比較，如表34所示表34兩組癥狀療效比較


從表34中看出風(fēng)熱清口服液對(duì)發(fā)熱惡寒、流涕、鼻塞、咳嗽、咯痰、頭痛、全身不適、汗出、口干渴、精神差、舍脈象等癥狀療效較好，與對(duì)照組相比，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＜0.01，有非常顯著性差異。對(duì)食減癥狀的療效，與對(duì)照組相比，p＞0.05，有顯著性差異。兩組病人治療后的證候積分和的均值相比，t＝6.81，P＜0.01，說明風(fēng)熱清口服液對(duì)癥狀的療效明顯優(yōu)于對(duì)照組。
3.兩組體征療效的比較，如表35所示表35兩組體征療效的比較

從表35中看出風(fēng)熱清口服液對(duì)扁桃體腫大，咽、扁桃體滲出物，咽腔皰疹潰瘍等體征療效較好，與對(duì)照組相比，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異有顯著性或極顯著性(P＜0.05或P＜0.01)。
4.兩組平均退熱時(shí)間的比較，如表36所示表36兩組平均退熱時(shí)間的比較

兩組病例平均退熱時(shí)間的比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.01，有非常顯著性差異，說明風(fēng)熱清口服液的退熱效果明顯優(yōu)于對(duì)照組。
5.兩組患者治療前后白細(xì)胞的變化，如表37所示表37兩組患者治療前后白細(xì)胞變化比較

兩組病人治療前后白細(xì)胞的變化比較，X2＝22.97，P＜0.01。
兩組病人治療前后中性粒細(xì)胞的變化比較，X2＝26.00，P＜0.01，均有非常顯著性差異。說明風(fēng)熱清口服液對(duì)白細(xì)胞總數(shù)升高及中性粒細(xì)胞升高的治療作用明顯優(yōu)于對(duì)照組。
6.總療效比較，結(jié)果如表38所示表38兩組總療效比較

a兩組顯效率比較p＜0.01。
7.病原學(xué)與療效關(guān)系，見表39。
表39病原學(xué)與療效的關(guān)系

a治療組內(nèi)病毒感染與細(xì)菌感染的顯效率比較P＞0.05；b對(duì)照組內(nèi)病毒感染與細(xì)菌感染的顯效率比較P＞0.05；c與對(duì)照組病毒感染的顯效率比較P＜0.01；d與對(duì)照組細(xì)菌感染的顯效率比較P＜0.01。
病原學(xué)與療效的關(guān)系表明風(fēng)熱清口服液對(duì)病毒和細(xì)菌所致的急性上呼吸道感染，均有較好的療效。與對(duì)照組相比，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＜0.01，有非常顯著性差異。說明本發(fā)明制劑對(duì)病毒感染和細(xì)菌感染的效果均優(yōu)于對(duì)照組。
為了保證本發(fā)明質(zhì)量控制方法科學(xué)、合理、可行，申請(qǐng)人還進(jìn)行了以下試驗(yàn)研究一、性狀 風(fēng)熱清口服液為深棕色液體，久貯有極少量振搖即分散的沉淀；氣微腥，味苦。三批風(fēng)熱清口服液的性狀檢查結(jié)果和前述一致。
二、鑒別(1)取本品20ml，用氯仿提取二次，每次20ml，合并氯仿液，濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取靛玉紅對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色斑點(diǎn)。
(2)取本品20ml，水浴蒸干，加甲醇10ml使溶解，濾過，濾液置硬質(zhì)試管中，水浴蒸至近干，加氫氧化鈉溶液(1-5)5ml，水浴加熱6-8小時(shí)，隨時(shí)補(bǔ)充失去的水分，放冷，加鹽酸調(diào)節(jié)PH至1-2，用醋酸乙酯提取二次，每次5ml，合并醋酸乙酯液，濃縮至2ml，作為供試品溶液。另取熊去氧膽酸對(duì)照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2-3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷-乙醚-冰乙酸-正丁醇-水(10∶5∶5∶3∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，于105℃烘5分鐘，取出，10分鐘后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(3)取本品20ml，加鹽酸1ml與氯仿20ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，分取氯仿液，蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30-60℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，于105℃烘5分鐘。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
三批風(fēng)熱清口服液樣品的鑒別結(jié)果見表40表40三批樣品鑒別結(jié)果

三、檢查 相對(duì)密度 應(yīng)不低于1.04(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIA)。
pH 值應(yīng)為4.0～6.0(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIG)。
其他 應(yīng)符合合劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(中國(guó)藥典2005年版一部附錄IJ)。
三批風(fēng)熱清口服液檢查結(jié)果見表41。
表41三批樣品檢查結(jié)果

四、含量測(cè)定1.綠原酸含量測(cè)定金銀花照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。
系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.2％三乙胺-甲醇-磷酸(800∶200∶1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為328nm，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.03mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備 精密量取本品1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，加流動(dòng)相稀釋成10ml，作為供試品溶液。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本制劑每1ml含綠原酸(C16H18O9)不得少于2.5mg。
三批風(fēng)熱清口服液綠原酸(C16H18O9)含量測(cè)定結(jié)果見表42。
表42三批樣品綠原酸含量測(cè)定結(jié)果

2.?；切苋パ跄懰岷繙y(cè)定熊膽粉為方中的臣藥，屬貴重藥材，具清熱、平肝、明目的功效，與成品功能主治密切相關(guān)，熊膽粉含量高低直接影響到藥品的療效。在原標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，參照中國(guó)藥典2005年版，以?；切苋パ跄懰釣橹笜?biāo)，建立了熊膽粉的含量測(cè)定，并作了一系列詳細(xì)的方法學(xué)考察；結(jié)果表明該含量測(cè)定方法是科學(xué)、合理的，從而確定了適宜的含量限度，以達(dá)到更有效保證制劑質(zhì)量的目的。
(1)儀器與試藥Waters-2695-2487高效液相色譜儀系統(tǒng)。流動(dòng)相中的甲醇為色譜純，其他試劑試藥均為分析純。牛黃熊去氧膽酸對(duì)照品購自中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)為110816-200305)。
(2)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)色譜柱選用了鉆石(200*4.6)柱，島津(150*4.6)柱，二者峰形均較佳。
流動(dòng)相選用了甲醇-0.03mol/L磷酸二氫鈉溶液(65∶35)(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.4)；乙腈-0.03mol/L磷酸二氫鈉溶液(65∶35)系統(tǒng)。結(jié)果前者峰形好，保留時(shí)間適中，確定為本方法的流動(dòng)相。
?；切苋パ跄懰嵩谧贤鈪^(qū)為末端吸收，參照中國(guó)藥典2005年版選用210nm為測(cè)定波長(zhǎng)。
理論板數(shù)與分離度牛磺熊去氧膽酸理論板數(shù)在3000以上，主峰周圍沒有其他雜質(zhì)峰，能達(dá)到測(cè)定分離的要求。
(3)對(duì)照品溶液的制備通過對(duì)不同進(jìn)樣量的考察(0.606μg～4.04μg)，結(jié)果?；切苋パ跄懰嵋淮芜M(jìn)樣量2.0μg，峰高適中，柱效高，峰形好。以進(jìn)樣10μl計(jì)，則對(duì)照品溶液濃度為0.2mg/ml。以甲醇作溶劑與樣品溶劑保持一致。
(4)供試品溶液的制備?；切苋パ跄懰崮苋苡谒局品ㄖ袑⑿苣懛壑苯蛹尤?。根據(jù)?；切苋パ跄懰岬男再|(zhì)，取樣品加甲醇稀釋溶解，既可溶出?；切苋パ跄懰?，又可排除大部分水溶性雜質(zhì)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)摸索，取樣品1ml，加甲醇稀釋至10ml，濃度與對(duì)照品溶液濃度匹配。
(5)陰性樣品溶液的制備取缺熊膽粉的陰性樣品1ml，同法制成陰性樣品溶液，測(cè)定。結(jié)果在牛磺熊去氧膽酸色譜峰相應(yīng)的位置上，陰性無干擾。
(6)線性關(guān)系考察精密吸取牛黃熊去氧膽酸對(duì)照品溶液(濃度為0.202mg/ml，)3μl、5μl、10μl、15μl、20μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表43。
表43牛磺熊去氧膽酸標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果表

由方程可知，進(jìn)樣量在0.606μg～4.04μg間，進(jìn)樣量和積分面積間倍數(shù)關(guān)系和線性關(guān)系良好。
(7)供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品(030801)，按照上述方法配制供試品溶液，每隔2小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定一次，考查6小時(shí)，結(jié)果見表44。
表44穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

實(shí)驗(yàn)證明，供試品溶液穩(wěn)定性較好，能滿足測(cè)定要求。
(8)重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批樣品(030802)6份，按本發(fā)明中的測(cè)定方法平行實(shí)驗(yàn)6次，結(jié)果見表45。實(shí)驗(yàn)證明，測(cè)定結(jié)果重現(xiàn)性好。
表45重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

(9)精密度試驗(yàn)對(duì)同一份對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定5次，結(jié)果見表46，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1％，精密度較好。
表46精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

(10)加樣回收試驗(yàn)精密量取已知含量的供試品(批號(hào)030803，含牛黃熊去氧膽酸2.06mg/ml)0.5ml，共9份，置10ml量瓶中，分別精密加入精密配制的牛黃熊去氧膽酸對(duì)照品溶液(濃度為1.026mg/ml)0.8ml、0.8ml、0.8ml、1.0ml、1.0ml、1.0ml、1.2ml、1.2ml、1.2ml，加甲醇稀釋至刻度，按上述方法測(cè)定含量。以下式計(jì)算回收率，結(jié)果見表47。由表可見，本方法具有較好的回收率，測(cè)定方法可靠。

表47牛黃熊去氧膽酸回收率測(cè)定結(jié)果表(n＝2)

(11)樣品的含量測(cè)定取本品3批樣品，按本發(fā)明方法測(cè)定，結(jié)果見表48。
表48三批樣品含量測(cè)定結(jié)果表(n＝2)

本品三批樣品牛黃熊去氧膽酸含量平均值為2.07mg/ml。工藝研究中熊膽粉以原生藥入藥，由于測(cè)定批數(shù)有限，暫將本制劑熊膽粉含量限度定為本制劑每1ml含熊膽粉以?；切苋パ跄懰?C26H45NO8S)計(jì)，不得少于1.2mg。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的實(shí)施例1金銀花850g、熊膽粉5g、青黛50g、桔梗500g、瓜蔞皮400g、甘草200g
以上六味，青黛用80％乙醇浸漬24小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水300ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡0.5小時(shí)，煎煮1小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮2次，每次40分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.10，加乙醇使含醇量達(dá)80％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇，加入芳香水及熊膽粉，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至6.0-6.5，靜置，濾過；濾液加0.3％甜菊甙、0.1％尼泊金乙酯、0.05％香蕉香精，加水至1000mL，滅菌，灌封，即得口服液。
本發(fā)明的實(shí)施例2金銀花425g、熊膽粉2.5g、青黛25g、桔梗250g、瓜蔞皮200g、甘草100g以上六味，青黛用50％乙醇浸漬48小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水100ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡0.2小時(shí)，煎煮0.5小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮1次，每次90分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.05，加乙醇使含醇量達(dá)50％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏，加入熊膽粉，混勻，干燥，粉碎，過篩，加入芳香水及3％磷酸氫鈣、2％微晶纖維素，制粒，干燥，壓片，包衣，即得片劑。
本發(fā)明的實(shí)施例3金銀花1700g、熊膽粉10g、青黛100g、桔梗1000g、瓜蔞皮800g、甘草400g以上六味，青黛用90％乙醇浸漬12小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水600ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡2小時(shí)，煎煮2小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮3次，每次20分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.35，加乙醇使含醇量達(dá)90％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏，加入熊膽粉，混勻，干燥，粉碎，過篩，加入芳香水及淀粉適量，制粒，裝入膠囊，即得膠囊劑。
本發(fā)明的實(shí)施例4所述質(zhì)量控制方法包括性狀產(chǎn)品為深棕色液體，久貯有極少量振搖即分散的沉淀；氣微腥，味苦。
鑒別(1)取本制劑20ml，用氯仿提取二次，每次20ml，合并氯仿液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取靛玉紅對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯∶氯仿∶丙酮＝5∶4∶1為展開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色斑點(diǎn)。
(2)取本制劑20ml，水浴蒸干，加甲醇10ml使溶解，濾過，濾液置硬質(zhì)試管中，水浴蒸至近干，加5％氫氧化鈉溶液5ml，水浴加熱6-8小時(shí)，隨時(shí)補(bǔ)充失去的水分，放冷，加鹽酸調(diào)節(jié)PH至1-2，用醋酸乙酯提取二次，每次5ml，合并醋酸乙酯液，濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取熊去氧膽酸對(duì)照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2-3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷∶乙醚∶冰乙酸∶正丁醇∶水＝10∶5∶5∶3∶1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，于105℃烘5分鐘，取出，10分鐘后置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(3)取本制劑20ml，加鹽酸1ml與氯仿20ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，分取氯仿液，蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以30-60℃石油醚∶苯∶醋酸乙酯∶冰醋酸＝10∶20∶7∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，于105℃烘5分鐘；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
檢查相對(duì)密度 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIA檢測(cè)，應(yīng)不低于1.04；pH值照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIG檢測(cè)，應(yīng)為4.0～6.0；其他 應(yīng)符合中國(guó)藥典2005年版一部附錄IJ合劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。
含量測(cè)定(1)金銀花 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.2％三乙胺∶甲醇∶磷酸＝800∶200∶1為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為328nm，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.03mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備 精密量取本制劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，加流動(dòng)相稀釋成10ml，作為供試品溶液測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本制劑每1ml含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計(jì)，不得少于2.5mg。
(2)熊膽粉 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填料；甲醇∶0.03mol/L磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.4)＝65∶35為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；理論板數(shù)按?；切苋パ跄懰岱逵?jì)算應(yīng)不低于2500；對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷容器中減壓干燥至恒重的?；切苋パ跄懰釋?duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋至每1ml含1mg的溶液，即得；供試品溶液的制備 精密量取本制劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，加流動(dòng)相稀釋成10ml，作為供試品溶液；測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本制劑每1ml含熊膽粉以?；切苋パ跄懰?C26H45NO8S)計(jì)，不得少于1.2mg。
本發(fā)明的實(shí)施例5所述質(zhì)量控制方法可以包括性狀產(chǎn)品為深棕色液體，久貯有極少量振搖即分散的沉淀；氣微腥，味苦。
鑒別(1)取本制劑20ml，用氯仿提取二次，每次20ml，合并氯仿液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取靛玉紅對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯∶氯仿∶丙酮＝5∶4∶1為展開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色斑點(diǎn)。
(2)取本制劑20ml，加鹽酸1ml與氯仿20ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，分取氯仿液，蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以30-60℃石油醚∶苯∶醋酸乙酯∶冰醋酸＝10∶20∶7∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，于105℃烘5分鐘；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
含量測(cè)定熊膽粉 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填料；甲醇∶0.03mol/L磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.4)＝65∶35為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；理論板數(shù)按牛磺熊去氧膽酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2500；對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷容器中減壓干燥至恒重的?；切苋パ跄懰釋?duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋至每1ml含1mg的溶液，即得；供試品溶液的制備 精密量取本制劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，加流動(dòng)相稀釋成10ml，作為供試品溶液；測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本制劑每1ml含熊膽粉以牛磺熊去氧膽酸(C26H45NO8S)計(jì)，不得少于1.2mg。
本發(fā)明的實(shí)施例6所述質(zhì)量控制方法可以包括性狀產(chǎn)品為深棕色液體，久貯有極少量振搖即分散的沉淀；氣微腥，味苦。
鑒別取本制劑20ml，水浴蒸干，加甲醇10ml使溶解，濾過，濾液置硬質(zhì)試管中，水浴蒸至近干，加5％氫氧化鈉溶液5ml，水浴加熱6-8小時(shí)，隨時(shí)補(bǔ)充失去的水分，放冷，加鹽酸調(diào)節(jié)PH至1-2，用醋酸乙酯提取二次，每次5ml，合并醋酸乙酯液，濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取熊去氧膽酸對(duì)照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2-3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷∶乙醚∶冰乙酸∶正丁醇∶水＝10∶5∶5∶3∶1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，于105℃烘5分鐘，取出，10分鐘后置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
檢查相對(duì)密度 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIA檢測(cè)，應(yīng)不低于1.04；pH值照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIG檢測(cè)，應(yīng)為4.0～6.0；其他 應(yīng)符合中國(guó)藥典2005年版一部附錄IJ合劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。
含量測(cè)定金銀花 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.2％三乙胺∶甲醇∶磷酸＝800∶200∶1為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為328nm，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.03mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備 精密量取本制劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，加流動(dòng)相稀釋成10ml，作為供試品溶液；測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得
本制劑每1ml含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計(jì)，不得少于2.5mg。
本發(fā)明的實(shí)施例7所述質(zhì)量控制方法可以包括性狀產(chǎn)品為深棕色液體，久貯有極少量振搖即分散的沉淀；氣微腥，味苦。
鑒別(1)取本制劑20ml，用氯仿提取二次，每次20ml，合并氯仿液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取靛玉紅對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯∶氯仿∶丙酮＝5∶4∶1為展開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色斑點(diǎn)。
(2)取本制劑20ml，水浴蒸干，加甲醇10ml使溶解，濾過，濾液置硬質(zhì)試管中，水浴蒸至近干，加5％氫氧化鈉溶液5ml，水浴加熱6-8小時(shí)，隨時(shí)補(bǔ)充失去的水分，放冷，加鹽酸調(diào)節(jié)PH至1-2，用醋酸乙酯提取二次，每次5ml，合并醋酸乙酯液，濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取熊去氧膽酸對(duì)照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2-3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷∶乙醚∶冰乙酸∶正丁醇∶水＝10∶5∶5∶3∶1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，于105℃烘5分鐘，取出，10分鐘后置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(3)取本制劑20ml，加鹽酸1ml與氯仿20ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，分取氯仿液，蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以30-60℃石油醚∶苯∶醋酸乙酯∶冰醋酸＝10∶20∶7∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，于105℃烘5分鐘；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
檢查相對(duì)密度 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIA檢測(cè)，應(yīng)不低于1.04；pH值照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIG檢測(cè)，應(yīng)為4.0～6.0；其他 應(yīng)符合中國(guó)藥典2005年版一部附錄IJ合劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。
本發(fā)明的實(shí)施例8所述質(zhì)量控制方法可以包括性狀產(chǎn)品為深棕色液體，久貯有極少量振搖即分散的沉淀；氣微腥，味苦。
檢查相對(duì)密度 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIA檢測(cè)，應(yīng)不低于1.04；pH值照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIG檢測(cè)，應(yīng)為4.0～6.0；其他 應(yīng)符合中國(guó)藥典2005年版一部附錄IJ合劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。
含量測(cè)定(1)金銀花 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.2％三乙胺∶甲醇∶磷酸＝800∶200∶1為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為328nm，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.03mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備 精密量取本制劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，加流動(dòng)相稀釋成10ml，作為供試品溶液測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本制劑每1ml含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計(jì)，不得少于2.5mg。
(2)熊膽粉 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填料；甲醇∶0.03mol/L磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.4)＝65∶35為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；理論板數(shù)按?；切苋パ跄懰岱逵?jì)算應(yīng)不低于2500；對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷容器中減壓干燥至恒重的牛磺熊去氧膽酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋至每1ml含1mg的溶液，即得；供試品溶液的制備 精密量取本制劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，加流動(dòng)相稀釋成10ml，作為供試品溶液；測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本制劑每1ml含熊膽粉以?；切苋パ跄懰?C26H45NO8S)計(jì)，不得少于1.2mg。
權(quán)利要求
1.一種風(fēng)熱清制劑，其特征在于按照重量組分計(jì)算它是由金銀花425-1700份、熊膽粉2.5-10份、青黛25-100份、桔梗250-1000份、瓜蔞皮200-800份和甘草100-400份制成的。
2.按照權(quán)利要求1所述的風(fēng)熱清制劑，其特征在于按照重量組分計(jì)算它是由金銀花850份、熊膽粉5份、青黛50份、桔梗500份、瓜蔞皮400份和甘草200份制成的。
3.按照權(quán)利要求1或2所述的風(fēng)熱清制劑，其特征在于所述的制劑為口服液、片劑或膠囊劑。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的風(fēng)熱清制劑的制備方法，其特征在于青黛用50％-90％乙醇浸漬12-48小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水100-600ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡0.2-2小時(shí)，煎煮0.5-2小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮1-3次，每次20-90分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.05-1.35，加乙醇使含醇量達(dá)50-90％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇，加入芳香水及熊膽粉，然后按常規(guī)方法制成不同的制劑。
5.按照權(quán)利要求4所述的風(fēng)熱清制劑的制備方法，其特征在于青黛用80％乙醇浸漬24小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水300ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡0.5小時(shí)，煎煮1小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮2次，每次40分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.10，加乙醇使含醇量達(dá)80％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇，加入芳香水及熊膽粉，然后按常規(guī)方法制成不同的制劑。
6.按照權(quán)利要求4或5所述的風(fēng)熱清制劑的制備方法，其特征在于所述的口服液這樣制備青黛用80％乙醇浸漬24小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水300ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡0.5小時(shí)，煎煮1小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮2次，每次40分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.10，加乙醇使含醇量達(dá)80％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇，加入芳香水及熊膽粉，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至6.0-6.5，靜置，濾過；濾液加適量甜菊甙、尼泊金乙酯和香蕉香精，加水至1000mL，滅菌，灌封，即得。
7.按照權(quán)利要求4或5所述的風(fēng)熱清制劑的制備方法，其特征在于所述的片劑這樣制備青黛用80％乙醇浸漬24小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水300ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡0.5小時(shí)，煎煮1小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮2次，每次40分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.10，加乙醇使含醇量達(dá)80％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏，加入熊膽粉，混勻，干燥，粉碎，過篩，加入芳香水及適當(dāng)輔料，制粒，干燥，壓片，包衣，即得。
8.按照權(quán)利要求4或5所述的風(fēng)熱清制劑的制備方法，其特征在于所述的膠囊劑這樣制備青黛用80％乙醇浸漬24小時(shí)后，滲漉，收集滲漉液，藥渣備用；金銀花重蒸餾，收集濃芳香水300ml，蒸餾后的水溶液另器保存，藥渣備用；桔梗、瓜蔞皮、甘草加水浸泡0.5小時(shí)，煎煮1小時(shí)，濾過，濾液備用；藥渣與上述兩種藥渣合并，煎煮2次，每次40分鐘，濾過，合并各次濾液及蒸餾后的水溶液，濾過，濾液濃縮至90℃相對(duì)密度為1.10，加乙醇使含醇量達(dá)80％，放置，濾過，濾液與滲漉液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏，加入熊膽粉，混勻，干燥，粉碎，過篩，加入芳香水及適當(dāng)輔料，制粒，裝入膠囊，即得。
9.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的風(fēng)熱清制劑的質(zhì)量控制方法，所述制劑為口服液，其特征在于所述質(zhì)量控制方法主要包括性狀、鑒別、檢查以及含量測(cè)定項(xiàng)目中的部分或全部；其中鑒別包括對(duì)制劑中青黛、熊膽粉和甘草的薄層色譜鑒別，含量測(cè)定是對(duì)制劑中金銀花和熊膽粉的含量測(cè)定。
10.按照權(quán)利要求9所述的風(fēng)熱清制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述質(zhì)量控制方法包括以下項(xiàng)目的部分或全部性狀產(chǎn)品為深棕色液體，久貯有極少量振搖即分散的沉淀；氣微腥，味苦；鑒別(1)取本制劑20ml，用氯仿提取二次，每次20ml，合并氯仿液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取靛玉紅對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯∶氯仿∶丙酮＝5∶4∶1為展開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色斑點(diǎn)；(2)取本制劑20ml，水浴蒸干，加甲醇10ml使溶解，濾過，濾液置硬質(zhì)試管中，水浴蒸至近干，加5％氫氧化鈉溶液5ml，水浴加熱6-8小時(shí)，隨時(shí)補(bǔ)充失去的水分，放冷，加鹽酸調(diào)節(jié)PH至1-2，用醋酸乙酯提取二次，每次5ml，合并醋酸乙酯液，濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取熊去氧膽酸對(duì)照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2-3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷∶乙醚∶冰乙酸∶正丁醇∶水＝10∶5∶5∶3∶1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，于105℃烘5分鐘，取出，10分鐘后置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；(3)取本制劑20ml，加鹽酸1ml與氯仿20ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，分取氯仿液，蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以30-60℃石油醚∶苯∶醋酸乙酯∶冰醋酸＝10∶20∶7∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，于105℃烘5分鐘；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；檢查相對(duì)密度照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIA檢測(cè)，應(yīng)不低于1.04；pH值照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIIG檢測(cè)，應(yīng)為4.0～6.0；其他 應(yīng)符合中國(guó)藥典2005年版一部附錄IJ合劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定；含量測(cè)定(1)金銀花照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.2％三乙胺∶甲醇∶磷酸＝800∶200∶1為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為328nm，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.03mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備 精密量取本制劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，加流動(dòng)相稀釋成10ml，作為供試品溶液；測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本制劑每1ml含金銀花以綠原酸C16H18O9計(jì)，不得少于2.5mg；(2)熊膽粉 照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填料；甲醇0.03mol/L、pH為4.4的磷酸二氫鈉溶液＝65∶35為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；理論板數(shù)按牛磺熊去氧膽酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2500；對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷容器中減壓干燥至恒重的牛磺熊去氧膽酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋至每1ml含1mg的溶液，即得；供試品溶液的制備 精密量取本制劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，加流動(dòng)相稀釋成10ml，作為供試品溶液；測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本制劑每1ml含熊膽粉以?；切苋パ跄懰酑26H45NO8S計(jì)，不得少于1.2mg。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種風(fēng)熱清制劑及其制備方法和質(zhì)量控制方法，按照重量組分計(jì)算它是由金銀花425－1700份、熊膽粉2.5－10份、青黛25－100份、桔梗250－1000份、瓜蔞皮200－800份和甘草100－400份制成的。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明制劑清宣并用，組方嚴(yán)謹(jǐn)，具有清熱解毒、宣肺、透表、利咽、化痰之效，對(duì)感冒風(fēng)熱證及上呼吸道感染的療效確切，無毒副作用，且其制備工藝和質(zhì)量控制方法科學(xué)合理，可有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，從而確保其臨床療效。
文檔編號(hào)A61K9/20GK1879688SQ200610200410
公開日2006年12月20日 申請(qǐng)日期2006年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月29日
發(fā)明者夏萬平 申請(qǐng)人:四川省新鹿藥業(yè)有限公司制藥廠