專(zhuān)利名稱(chēng)：參附組合物、制劑及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及參附組合物、含有該組合物的制劑及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
人參為五加科植物人參(Panax ginseng C.A.Meyer)的干燥根及根莖，具有大補(bǔ)元?dú)?，?fù)脈固脫，益氣攝血的功效，用于體虛欲脫，肢冷脈微，氣不攝血，崩漏下血，心力衰竭，心源性休克。附子為毛莨科植物烏頭(Aconitum carmichaeli Debx.)的子根的加工品，具有回陽(yáng)救逆，補(bǔ)火助陽(yáng)，逐風(fēng)寒濕邪，用于亡陽(yáng)虛脫，肢冷脈微，陽(yáng)痿，宮冷，心腹冷痛，虛寒吐瀉，陰寒水腫，陽(yáng)虛外感，寒濕痹痛?，F(xiàn)代藥學(xué)及藥理學(xué)研究表明，人參總皂苷是人參中的活性部位，可以興奮心肌，增加心肌收縮力，有與強(qiáng)心苷相似的作用，同時(shí)具有改善微循環(huán)，擴(kuò)張血管，增加心肌血供，降低心肌耗氧量，改善心臟系統(tǒng)功能作用；附子中的烏頭類(lèi)生物堿是附子中的強(qiáng)心作用的有效活性部位，所含的甲烏藥堿、去甲豬毛菜堿對(duì)β受體和α受體均有興奮作用，能明顯升高血壓，降低冠狀動(dòng)脈阻力，增加血流量，適用于血壓偏低的心力衰竭患者。
古驗(yàn)方“參附湯”由人參(Panax ginseng C.A.Meyer)和附子(Aconitum carmichaeli Debx.)兩味藥組合而成，最早見(jiàn)于明代薛已的《正林類(lèi)要》，為竣補(bǔ)陽(yáng)氣之劑，用于陽(yáng)氣暴脫之手足逆冷，汗出脈微等癥?，F(xiàn)代臨床常用于預(yù)防和治療各種休克及心功能衰竭等。“參附注射液”(WS3-B-3427-98)來(lái)源于該方，是在傳統(tǒng)參附湯煎劑口服臨床應(yīng)用的基礎(chǔ)上，制備而成的中藥復(fù)方注射劑，臨床廣泛應(yīng)用于各種原因引起的休克和心臟功能衰竭的急救及恢復(fù)治療，收到很好的效果。但該制劑為傳統(tǒng)中藥注射劑，物質(zhì)基礎(chǔ)不明確，質(zhì)量難以控制，不僅影響藥物的療效，不良反應(yīng)多，而且注射劑的穩(wěn)定性差，不利于藥物的穩(wěn)定及長(zhǎng)期保存。中國(guó)專(zhuān)利CN 96117458公開(kāi)了“一種參附注射液及其制備方法”，在該專(zhuān)利中，人參用乙醇回流提取，附子用水沉淀提取，然后合并人參、附子提取液，配制成注射液。該工藝采用的是常用的中藥成分提取方法，沒(méi)有明確人參和附子的有效成分和部位，有效物質(zhì)不集中，使得制劑質(zhì)量無(wú)法控制，從而影響了臨床使用過(guò)程中的安全性和有效性。中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)CN 1557361、CN1488338、CN1488334、CN1488335、CN1488341、CN1488336、CN1488339、CN1488333、CN1493338、CN1493337、CN1500518等公開(kāi)了不同參附制劑的制備方法及用途，其中在某些專(zhuān)利申請(qǐng)中人參和附子的提取物制備過(guò)程中采用了大孔樹(shù)脂除雜，現(xiàn)研究表明，采用該方法附子有效部位生物堿不能完全吸附，收率低，除雜不完全，不可能實(shí)現(xiàn)有效部位的完全純化，因此，這些制劑物質(zhì)基礎(chǔ)不明確，質(zhì)量難以保證。
本發(fā)明人通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)明一種新的參附組合物，該組合物質(zhì)量可控，穩(wěn)定性好，在同生藥量的劑量下，藥理效應(yīng)明顯優(yōu)于同生藥量劑量的參附注射液。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種新的參附組合物，由人參提取物和附子提取物組成，其中人參提取物中100％＞人參總皂苷含量≥50％，附子提取物中100％＞附子總生物堿含量≥50％；優(yōu)選為人參提取物中100％＞人參總皂苷含量≥80％，附子提取物中100％＞附子總生物堿含量≥80％。
本發(fā)明提供了上述藥物組合物在制備治療或預(yù)防感染性休克、失血性休克、心源性休克的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的藥物組合物含有活性成分5mg～160mg，優(yōu)選為5mg～100mg。
本發(fā)明提供的新的參附組合物采有藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。
本發(fā)明提供的參附組合物中，附子提取物是通過(guò)將附子進(jìn)行特殊處理，水解附子中的雙酯類(lèi)烏頭堿，使其轉(zhuǎn)化為毒性很低的醇胺基類(lèi)生物堿，并經(jīng)柱層析提取總生物堿，使得總生物堿的含量大于等于50％。
本發(fā)明參附組合物中人參提取物和附子提取物之間比例范圍可以采用現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道的有關(guān)參附制劑原藥材比例。
本發(fā)明提供的參附組合物可以以各種劑型存在，優(yōu)選為注射劑型。
本發(fā)明提供的參附組合物中，人參提取物可以采用文獻(xiàn)報(bào)道的方法制備，優(yōu)選采用如下方法制備將人參粉碎，加2～10水浸泡，超聲提取2～3次，合并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度1.05～1.1，加入乙醇溶液使醇濃度達(dá)70％，充分?jǐn)嚢?，沉淀過(guò)夜；過(guò)濾，濾液減壓濃縮除醇；濃縮液上樣于處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱，上樣量與樹(shù)脂用量的比例為1～5∶1，先用1-30％乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用50-60％乙醇洗脫至皂苷濃度明顯減少為止，收集50-60％乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得人參提取物。如得純度較高的人參總皂苷，可將大孔吸附樹(shù)脂分離獲得的提取物，繼續(xù)上處理好的聚酰胺樹(shù)脂上，先用10％左右的乙醇洗除雜質(zhì)，再用30～40％的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，獲得含量大于80％的人參總皂苷。其中所用大孔吸附樹(shù)脂為非極性至弱極性。
本發(fā)明提供的參附組合物中，附子提取物優(yōu)選采用如下方法制備將生附子藥材粉碎，用PH值9～13的堿水溶液室溫下浸泡藥材24～72小時(shí)，堿水溶液與藥材的體積重量比為3～10∶1(V/W)，薄層鑒別無(wú)烏頭堿及次烏頭堿為止，濾過(guò)；殘?jiān)孟←}酸溶液滲漉提取生物堿，生物堿沉淀反應(yīng)檢測(cè)至提取完全止；合并濾液及滲漉液，用稀鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值至1～3，過(guò)濾至澄清，上樣于已處理好的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，氨水溶液置換，有機(jī)溶劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得總生物堿；或?qū)⑻崛∫荷蠘佑谔幚砗玫姆菢O性或弱極性大孔吸附樹(shù)脂上，，先用水洗脫至無(wú)色澄清，再用30％左右的乙醇洗脫至無(wú)生物堿發(fā)應(yīng)止，收集醇洗液，減壓濃縮至一定的體積，用氨水調(diào)節(jié)至pH值9左右，靜置沉淀，收集沉淀物，水反復(fù)洗滌，減壓真空干燥，得附子總生物堿。
本發(fā)明提供的參附組合物中，附子生物堿采用堿性溶液不可逆水解附子中的劇毒雙酯類(lèi)生物堿，使其轉(zhuǎn)化為毒性很低的醇胺類(lèi)生物堿，即保持了附子的強(qiáng)心活性成分生物堿，并經(jīng)分離純化，使附子生物堿在附子提取物中的質(zhì)量百分含量大于等于50％；采用此有效部位制備成合適的臨床用劑型，克服了原有制劑物質(zhì)基礎(chǔ)不明確的缺點(diǎn)，有效控制其質(zhì)量，確保了臨床用藥的安全性。
本發(fā)明通過(guò)下列試驗(yàn)來(lái)證實(shí)了本發(fā)明提供的參附組合物在制備治療或預(yù)防感染性休克、失血性休克、心源性休克的藥物中的應(yīng)用，同時(shí)也證明了本發(fā)明提供的參附組合物其藥效明顯優(yōu)于已上市的參附注射液。
具體實(shí)施例方式
制備例1制備人參提取物取人參5kg，粉碎，加5倍量的水浸泡，超聲提取2次，合并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度1.1，加入乙醇溶液使醇濃度達(dá)70％，充分?jǐn)嚢?，沉淀過(guò)夜；過(guò)濾，濾液減壓濃縮除醇；濃縮液上樣于處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱，上樣量與樹(shù)脂用量的比例為5∶1，先用30％乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用60％乙醇洗脫至皂苷濃度明顯減少為止，收集60％乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，獲得人參提取物320g，收率約7％，人參總皂苷含量為62％。
制備例2制備人參提取物取人參3kg，粉碎，加10倍量的水浸泡，超聲提取2次，合并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度1.05，加入乙醇溶液使醇濃度達(dá)70％，充分?jǐn)嚢瑁恋磉^(guò)夜；過(guò)濾，濾液減壓濃縮除醇；濃縮液上樣于處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱，上樣量與樹(shù)脂用量的比例為5∶1，先用30％乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用60％乙醇洗脫至皂苷濃度明顯減少為止，收集60％乙醇洗脫液，減壓濃縮至無(wú)醇味，上樣于處理好的聚酰胺層析柱，先用水洗去無(wú)吸收的雜質(zhì)，10％乙醇洗脫2個(gè)柱體積，棄去，后改用30％乙醇洗脫5個(gè)柱體積，收集30％乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥。獲得灰白色人參提取物82.6g，收率約3％，人參皂苷含量82.7％。
制備例3制備附子提取物取附子藥材1000g，加8000ml水，用1N氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至12，室溫下浸泡24小時(shí)，薄層鑒別無(wú)烏頭堿及次烏頭堿為止。殘?jiān)孟←}酸溶液滲漉提取生物堿，生物堿沉淀反應(yīng)檢測(cè)至提取完全止；合并濾液及滲漉液，用稀鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值至2；上樣于已處理好的732強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，氨水溶液置換，有機(jī)溶劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得附子總生物堿3.1g，收率約0.3％。酸性染料比色法測(cè)定總生物堿的含量為58％。
制備例4制備附子提取物取附子藥材1000g，加8000ml水，用1N氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至12，室溫下浸泡40小時(shí)，薄層鑒別無(wú)烏頭堿及次烏頭堿為止。殘?jiān)孟←}酸溶液滲漉提取生物堿，生物堿沉淀反應(yīng)檢測(cè)至提取完全止；合并濾液及滲漉液，用稀鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值至1～3；上樣于處理好的DM-130大孔吸附樹(shù)脂層析柱上，水洗脫至無(wú)色，然后用30％乙醇洗脫3個(gè)柱體積，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮除去乙醇并至一定的體積，用氨水調(diào)節(jié)pH值至9左右，靜置沉淀，水洗滌沉淀物多次，減壓濃縮得附子總生物堿2.3g，收率約0.2％。酸性染料比色法測(cè)定總生物堿的含量為87％。
制備例5制備參附口含片取含人參總皂苷40g和附子總生物堿20g的人參提取物和附子提取物，混合后粉碎，另取糊精240g、糖粉80g、甘露醇180ml、蛋白糖20g和藥粉混合均勻，加入75％乙醇作為潤(rùn)濕劑制粒，按照潤(rùn)濕劑用量為125ml/kg，將薄荷腦溶于的潤(rùn)濕劑中，14目篩制粒；再在60℃下減壓干燥120分鐘，16目篩整粒；均勻加入顆粒量1％的硬酯酸鎂作為潤(rùn)滑劑，制成半成品；將半成品用壓片機(jī)壓1000片。
制備例6制備參附軟膠囊取含人參總皂苷50g和附子總生物堿25g的人參提取物和附子提取物，過(guò)80目，加大豆油和蜂蠟200g(其中蜂蠟16g，大豆油184)，混勻，經(jīng)膠體磨均化，得囊心物；取明膠1.0kg，加入不銹鋼溶膠罐中，再加入水1.2g，密閉，70℃保溫3小時(shí)，再加入甘油0.4kg，攪拌，抽真空脫氣2小時(shí)，放入明膠保溫桶中70℃保溫靜置過(guò)夜，第二天壓膠丸，共制成膠丸1000粒，每粒囊心物重300mg，每粒含活性成分100mg。
制備例7制備參附滴丸分別取聚乙二醇4000和單硬脂酸酯(S-40)各20g，置于75℃恒溫水浴中加熱熔融，在攪拌下分別加入含人參總皂苷10g和附子總生物堿5g的人參提取物和附子提取物，攪拌使分散均勻，藥液轉(zhuǎn)移至滴丸機(jī)75℃恒溫儲(chǔ)料罐中，在滴頭口徑為5.0/6.0mm，滴速60滴/分鐘，冷卻劑為二甲基硅油，冷卻液溫度10℃條件下，調(diào)節(jié)滴丸丸重為60mg，滴制成丸1000粒，除去滴丸表面上的冷卻液，即得，每丸含活性成分20mg。
制備例8制備參附注射液精密稱(chēng)取含人參總皂苷66.5g的人參提取物和含附子總生物堿33.5g的附子提取物，加注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，?.1Mol/L的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值4.5，補(bǔ)加注射用水至全量，活性炭處理，微孔濾膜過(guò)濾，分裝于安瓿瓶中，熔封，115℃滅菌30分鐘，燈檢，包裝，即得。
制備例9制備注射用參附精密稱(chēng)取含人參總皂苷66.5g的人參提取物和含附子總生物堿33.5g的附子提取物，加注射用水100ml攪拌使溶解，用0.1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH值5，加入針用活性炭1g，60℃水浴加熱攪拌30分鐘，0.25μm微孔濾膜濾過(guò)，測(cè)定中間體中人參皂苷和附子生物堿的含量，補(bǔ)足水量，活性炭處理，微孔濾膜過(guò)濾，分裝入1000支西林瓶，每支裝量2.0ml，冷凍干燥即得。
試驗(yàn)例1人參附子組合物對(duì)內(nèi)毒素致大鼠休克的影響1.1材料人參附子組合物人參按制備例2制備、附子按制備例4制備，按(生藥紅參∶附片＝1∶2)要求的比例配制。人參附子組合物16mg/kg生藥量相當(dāng)于999參附注射液5ml/kg生藥量。999參附注射液(每ml注射液相當(dāng)于生藥紅參0.1g，附片0.2g；靜脈滴注，50～100ml，每日1-2次。三九企業(yè)集團(tuán)雅安三九藥業(yè)有限公司，規(guī)格10ml/支，批號(hào)050123)PowerLab多導(dǎo)生理記錄儀(澳大利亞ADI-Instrument公司生產(chǎn))壓力傳感器(YP200型，河北高碑店新航機(jī)電設(shè)備有限公司，規(guī)格50g)內(nèi)毒素(上海第二軍醫(yī)大學(xué)微生物教研室，批號(hào)020412)地塞米松注射液(武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司，10mg/支，批號(hào)040521)Wistar大鼠，雌雄各半，體重180-220g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證魯動(dòng)質(zhì)字200106005號(hào)1.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果大鼠隨機(jī)分為9組正常對(duì)照組、NS組、地塞米松組、人參附子組合物5mg/kg組、人參附子組合物16mg/kg組、人參附子組合物48mg/kg組、人參附子組合物100mg/kg組、人參附子組合物160mg/kg組、999參附注射液5mL/kg組，每組10只，雌雄各半，動(dòng)物稱(chēng)重后以3.5％戊巴比妥鈉1.0ml/kg腹腔注射麻醉。分離一側(cè)頸總動(dòng)脈，作動(dòng)脈插管，將動(dòng)脈插管的另一端連接到裝有三通閥的壓力傳感器上，壓力信號(hào)經(jīng)傳感器輸入PowerLab多導(dǎo)生理記錄儀，記錄正常的血壓，隨即靜脈注射內(nèi)毒素5mg/kg，10分鐘后靜脈注射各藥，NS組給予同體積的NS，正常組不給予內(nèi)毒素，觀察各組給內(nèi)毒素240min內(nèi)的血壓變化，組間T檢驗(yàn)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
表1試驗(yàn)結(jié)果表明人參附子組合物5mg/kg組能升高由內(nèi)毒素所致休克大鼠的血壓的降低(與NS組比較，P＜0.05)；人參附子組合物16mg/kg組、人參附子組合物48mg/kg組、人參附子組合物100mg/kg組、人參附子組合物160mg/kg組能顯著升高由內(nèi)毒素所致休克大鼠的血壓的降低(與NS組比較，P＜0.01)，999參附注射液5mL/kg組能升高由內(nèi)毒素所致休克大鼠的血壓的降低(與NS組比較，P＜0.05)；人參附子組合物16mg/kg組與999參附注射液5mL/kg組對(duì)升高休克大鼠的血壓降低比較，有明顯差異(P＜0.05)；人參附子組合物160mg/kg組與人參附子組合物100mg/kg對(duì)升高休克大鼠的血壓降低比較，無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
表1人參附子組合物對(duì)內(nèi)毒素休克大鼠血壓的影響(n＝10)

與NS組比較，ΔP＜0.05；ΔΔP＜0.01；與999參附注射液比較，*P＜0.05試驗(yàn)例2人參附子組合物對(duì)慢性心衰大鼠的影響2.1材料人參附子組合物人參按制備例2制備、附子按制備例4制備，按(生藥紅參∶附片＝1∶2)要求的比例配制。人參附子組合物16mg/kg生藥量相當(dāng)于999參附注射液5ml/kg生藥量。999參附注射液(每ml注射液相當(dāng)于生藥紅參0.1g，附片0.2g；靜脈滴注，50～100ml，每日1-2次。三九企業(yè)集團(tuán)雅安三九藥業(yè)有限公司，規(guī)格10ml/支，批號(hào)050123)鹽酸阿霉素(針劑，10mg/瓶，上海華聯(lián)制藥廠，批號(hào)040712)卡托普利片(25mg/片，天津飛鷹制藥有限公司，批號(hào)040213)美國(guó)BIC 16導(dǎo)生理記錄儀(美國(guó)BIC公司生產(chǎn))；Wistar大鼠，雌雄各半，體重180-220g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證魯動(dòng)質(zhì)字200106005號(hào)
2.2試驗(yàn)方法與結(jié)果大鼠90只，隨機(jī)分為9組，即正常對(duì)照組、NS組、卡托普利12.5mg/kg組、人參附子組合物5mg/kg組、16mg/kg組、48mg/kg組、100mg/kg組、160mg/kg組、999參附注射液5mL/kg組，雌雄各半，除正常對(duì)照組外，其余各組腹腔注射鹽酸阿霉素2mg/kg，每周1次，共6周，第6周起每日靜脈給予各藥物，給藥7天。20％烏拉坦1.1g/kg腹腔注射麻醉，手術(shù)剝離氣管并插管，同時(shí)游離出右側(cè)頸總動(dòng)脈，經(jīng)其插入自制的心室插管(直徑1mm，充滿1％肝素)，描記血壓曲線；再繼續(xù)插入，使其通過(guò)左側(cè)動(dòng)脈瓣進(jìn)入左心室，描記室內(nèi)壓曲線，自動(dòng)分析處理左室收縮壓(LVSP)，心室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dtmax)，心室內(nèi)壓最大下降速率(-dp/dtmax)和實(shí)測(cè)心肌最大收縮速度(Vpm)等數(shù)據(jù)。另取10只大鼠作為正常對(duì)照組，不給予鹽酸阿霉素，其余操作同上述，組間T檢驗(yàn)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
表2試驗(yàn)結(jié)果表明人參附子組合物5mg/kg組能升高由鹽酸阿霉素導(dǎo)致的心衰大鼠的LVSP，+dp/dtmax，-dp/dtmax，和Vpm的降低(與NS組比較，P＜0.05)；人參附子組合物16mg/kg組、人參附子組合物48mg/kg組、人參附子組合物100mg/kg組、人參附子組合物160mg/kg組能顯著升高由鹽酸阿霉素導(dǎo)致的心衰大鼠的LVSP，+dp/dtmax，-dp/dtmax和Vpm的降低(與NS組比較，P＜0.01)，999參附注射液5mL/kg組能升高由鹽酸阿霉素導(dǎo)致的心衰大鼠的LVSP，+dp/dtmax，-dp/dtmax和Vpm的降低(與NS組比較，P＜0.05或P＜0.01)；人參附子組合物16mg/kg組與999參附注射液5mL/kg組對(duì)心衰大鼠的LVSP，+dp/dtmax，-dp/dtmax和Vpm升高比較，有明顯差異(P＜0.05)；人參附子組合物160mg/kg組與人參附子組合物160mg/kg對(duì)心衰大鼠的LVSP，+dp/dtmax，-dp/dtmax和Vpm升高比較，無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
表2人參附子組合物對(duì)慢性心衰大鼠心功能的影響(n＝10)

與NS組比較，ΔP＜0.05；ΔΔP＜0.01；與999參附注射液比較，*P＜0.05
試驗(yàn)例3人參附子組合物對(duì)失血性休克大鼠的影響3.1材料人參附子組合物人參按制備例2制備、附子按制備例4制備，按(生藥紅參∶附片＝1∶2)要求的比例配制。人參附子組合物16mg/kg生藥量相當(dāng)于999參附注射液5ml/kg生藥量。999參附注射液(每ml注射液相當(dāng)于生藥紅參0.1g，附片0.2g；靜脈滴注，50～100ml，每日1-2次。三九企業(yè)集團(tuán)雅安三九藥業(yè)有限公司，規(guī)格10ml/支，批號(hào)050123)鹽酸腎上腺素注射液(規(guī)格1ml/1mg，上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)040719)PowerLab多導(dǎo)生理記錄儀(澳大利亞ADI-Instrument公司生產(chǎn))壓力傳感器(YP200型，河北高碑店新航機(jī)電設(shè)備有限公司，規(guī)格50g)Wistar大鼠，雌雄各半，體重180-220g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證魯動(dòng)質(zhì)字200106005號(hào)3.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果大鼠90只，隨機(jī)分為9組，雌雄各半，即正常對(duì)照組、NS組、鹽酸腎上腺素0.1mg/kg組、人參附子組合物5mg/kg組、人參附子組合物16mg/kg組、人參附子組合物48mg/kg組、人參附子組合物100mg/kg組、人參附子組合物160mg/kg組、999參附注射液5mL/kg組，大鼠腹腔注射20％烏拉坦(1.1g/kg)麻醉，背位固定，剪頸部毛后，切開(kāi)頸部皮膚，分離雙側(cè)頸動(dòng)脈，一側(cè)頸動(dòng)脈插管連接壓力換能器，記錄血壓連接肢體導(dǎo)聯(lián)，另一側(cè)頸動(dòng)脈放血至平均動(dòng)脈壓血壓降至40mmHg左右，并維持血壓10min，確定休克模型成立。休克模型成立后10分鐘，靜脈注射不同劑量的藥物或生理鹽水，鹽酸腎上腺素組皮下注射，給藥完畢后，觀察240min內(nèi)平均動(dòng)脈壓變化。正常對(duì)照組大鼠頸動(dòng)脈不放血，其余操作同上述，組間T檢驗(yàn)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
表3試驗(yàn)結(jié)果表明人參附子組合物5/kg組能升高失血性休克大鼠的血壓(與NS組比較，P＜0.05)；人參附子組合物16mg/kg組、人參附子組合物48mg/kg組、人參附子組合物100mg/kg組、人參附子組合物160mg/kg組能顯著升高失血性休克大鼠的血壓(與NS組比較，P＜0.01)，999參附注射液5mL/kg組能升高失血性休克大鼠的血壓(與NS組比較，P＜0.05)；人參附子組合物16mg/kg組與999參附注射液5mL/kg組對(duì)失血性休克大鼠的血壓升高比較，有明顯差異(P＜0.05)；人參附子組合物160mg/kg組與人參附子組合物100mg/kg對(duì)失血性休克大鼠的血壓升高比較，無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
表3人參附子組合物對(duì)失血性休克大鼠血壓的影響(n＝10)

與Ns組比較，ΔP＜0.05；ΔΔP＜0.01；與999參附注射液比較，*P＜0.0權(quán)利要求
1.一種參附組合物，由人參提取物和附子提取物組成，其中人參提取物中100％＞人參總皂苷含量≥50％，附子提取物中100％＞附子總生物堿含量≥50％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中人參提取物中100％＞人參總皂苷含量≥80％，附子提取物中100％＞附子總生物堿含量≥80％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，人參提取物采用如下方法制備將人參粉碎，加2～10水浸泡，超聲提取2～3次，合并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度1.05～1.1，加入乙醇溶液使醇濃度達(dá)70％，充分?jǐn)嚢?，沉淀過(guò)夜；過(guò)濾，濾液減壓濃縮除醇；濃縮液上樣于處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱，上樣量與樹(shù)脂用量的比例為1～5∶1，先用1-30％乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用50-60％乙醇洗脫至皂苷濃度明顯減少為止，收集50-60％乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得人參提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，獲得的人參提取物進(jìn)一步上聚酰胺樹(shù)脂，先用10％乙醇洗除雜質(zhì)，再用30-40％的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，附子提取物的制備方法如下將生附子藥材粉碎，用PH值9～13的堿水溶液室溫下浸泡藥材24～72小時(shí)，堿水溶液與藥材的體積重量比為3～10∶1(V/W)，薄層鑒別無(wú)烏頭堿及次烏頭堿為止，濾過(guò)；殘?jiān)孟←}酸溶液滲漉提取生物堿，生物堿沉淀反應(yīng)檢測(cè)至提取完全止；合并濾液及滲漉液，用稀鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值至1～3，過(guò)濾至澄清；上樣于已處理好的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，氨水溶液置換，有機(jī)溶劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得；或上樣于處理好的非極性或弱極性大孔吸附樹(shù)脂上，先用水洗脫至無(wú)色，再用30％乙醇洗脫至無(wú)生物堿反應(yīng)止，收集醇溶液，減壓濃縮，用氨水調(diào)PH值至9，沉淀，收集沉淀物，水反復(fù)洗滌，減壓真空干燥，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其含活性成分5mg～160mg。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其含活性成分為5mg～100mg。
8.權(quán)利要求1-7任一所述組合物在制備治療或預(yù)防感染性休克的藥物中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1-7任一所述組合物在制備治療或預(yù)防失血性休克的藥物中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求1-7任一所述組合物在制備治療或預(yù)防心源性休克的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新的參附組合物，該組合物中附子總生物堿的含量大于等于50％，本發(fā)明中提供的參附組合物質(zhì)量可控，穩(wěn)定性好，藥理作用明顯優(yōu)于已上市的參附注射液。其中附子生物堿提取物是將附子進(jìn)行特殊處理，水解附子中的雙酯類(lèi)烏頭堿，使其轉(zhuǎn)化為毒性很低的醇氨類(lèi)生物堿。本發(fā)明提供了參附組合物在制備治療感染性休克、失血性休克、心源性休克方面的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1951432SQ20061015357
公開(kāi)日2007年4月25日 申請(qǐng)日期2006年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月13日
發(fā)明者馬成俊, 蔣王林, 劉廣 申請(qǐng)人:山東綠葉天然藥物研究開(kāi)發(fā)有限公司