專利名稱：金銀花、黃芩、其提取物及含其提取物的制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種原藥材、其提取物及包含提取物的制劑的質(zhì)量控制方法，更具體地說是涉及一種金銀花藥材、黃芩藥材、其提取物及包含金銀花提取物和黃芩提取物的制劑的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.、紅花腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、山銀花Lonicera confusa DC.或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.的干燥花蕾或帶初開的花，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效，主要用于癰腫、疔瘡、喉痹、丹毒、熱血毒痢、溫病發(fā)熱等；黃芩為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效，主要用于肺熱咳嗽、高熱煩渴、癰腫瘡毒等。二味配伍而成的銀黃制劑是現(xiàn)代臨床用于治療風(fēng)熱犯肺而致發(fā)熱、咳嗽、咽痛等癥的優(yōu)選藥物。
目前對銀黃制劑及其所用初始原料金銀花和黃芩來說，大多是以綠原酸或黃芩苷的有無或多少來判定其質(zhì)量優(yōu)劣，而金銀花、黃芩的品種，產(chǎn)地、采收季節(jié)等均會影響藥材及其提取物的各成分含量，進(jìn)而影響到制劑的質(zhì)量，此種方法不能更加準(zhǔn)確地反映藥材或其提取物、制劑的整體質(zhì)量狀況，因此存在很大的缺陷。如《中國藥典》及衛(wèi)生部版標(biāo)準(zhǔn)記載的金銀花、黃芩及其提取物和制劑的質(zhì)量控制方法均采用鑒別和一種或兩種物質(zhì)含量測定的方法來控制其質(zhì)量是否合格，而對其它的成分未做規(guī)定。
中藥指紋圖譜是指某種中藥材及其制劑中所共有的、具有特征性的某類或數(shù)類成分的色譜或光譜的圖譜。在現(xiàn)階段中藥有效成分絕大多數(shù)沒有十分明確的情況下，指紋圖譜的建立對于有效控制中藥材及其提取物和制劑的質(zhì)量具有重要的意義。目前，有關(guān)金銀花、黃芩指紋圖譜的研究已有報道，而包含金銀花提取物和黃芩提取物的制劑的指紋圖譜尚未見報道，其相關(guān)性研究也尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種通過建立金銀花藥材、黃芩藥材，金銀花提取物、黃芩提取物、包含金銀花提取物和黃芩提取物的制劑的一系列指紋圖譜來進(jìn)行質(zhì)量控制的方法，該質(zhì)量控制方法對原材料、中間體和最終的制劑都適用，因此是一種可以進(jìn)行全面質(zhì)量控制的方法。
本發(fā)明涉及一種金銀花藥材、黃芩藥材，其提取物及包含金銀花提取物和黃芩提取物的制劑的質(zhì)量控制方法，該方法包括(1)對照品指紋圖譜的建立對照品溶液的制備綠原酸對照品溶液的制備稱取綠原酸對照品適量，加甲醇溶解并稀釋至所需刻度，即得；黃芩苷對照品溶液的制備稱取黃芩苷對照品適量，加甲醇溶解并稀釋至所需濃度，即得；對照品指紋圖譜的測定吸取上述對照品溶液注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測定，得到對照品的指紋圖譜；色譜條件
色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；采用梯度洗脫，流速0.5-1.2ml/分，流動相組成A乙腈，B0.05-0.5％磷酸；檢測波長300-345nm；分析時間30-60分；理論板數(shù)以綠原酸計應(yīng)不低于2000；(2)供試品指紋圖譜的測定供試品溶液的制備精密稱取金銀花藥材適量，加水回流提取，提取液放冷至室溫后過濾，取適量濾液加水稀釋至所需濃度，即得；精密稱取金銀花提取物適量，加水溶解并稀釋至所需濃度，即得；精密稱取黃芩藥材適量，加水回流提取，提取液放冷至室溫后過濾，取適量濾液加水稀釋至所需濃度，即得；精密稱取黃芩提取物適量，加甲醇溶解并稀釋至所需濃度，即得；稱取注射用銀黃粉末適量或取銀黃注射液適量，加水溶解并稀釋至所需濃度，即得；分別吸取上述五種供試品溶液注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測定，得到供試品的指紋圖譜；色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；采用梯度洗脫，流速0.5-1.2ml/分，流動相組成A乙腈，B0.05-0.5％磷酸；檢測波長300-345nm；分析時間30-60分；理論板數(shù)以綠原酸計應(yīng)不低于2000；(3)將對照品的峰設(shè)定為參照峰，將其它物質(zhì)的峰和參照物的峰相比，以其它物質(zhì)的保留時間和峰面積與參照峰的保留時間和峰面積比較，計算其相對峰面積和相對保留時間，以此進(jìn)行從原料到制劑的質(zhì)量控制。
本發(fā)明所述色譜條件的所述梯度洗脫條件進(jìn)一步如下0分鐘時，流動相A為0-5％的乙腈，流動相B為100-95％的0.05-0.5％磷酸；
5分鐘時，流動相A為0-5％的乙腈，流動相B為100-95％的0.05-0.5％磷酸；25分鐘時，流動相A為30-45％的乙腈，流動相B為70-55％的0.05-0.5％磷酸；30分鐘時，流動相A為0-5％的乙腈，流動相B為100-95％的0.05-0.5％磷酸。
本發(fā)明所選的波長為327nm。
本發(fā)明中，其中當(dāng)供試品溶液為金銀花藥材時，以綠原酸峰的保留時間進(jìn)行計算，相對保留時間為0.844的峰為5-O-咖啡?？鼘幩幔鄬ΡＡ魰r間為1.024的峰為4-O-咖啡?？鼘幩?，相對保留時間為1.099的峰為咖啡酸，相對保留時間為1.372的峰為4，5-O-咖啡?？鼘幩幔鄬ΡＡ魰r間為1.422的峰為3，5-O-咖啡酰奎寧酸，相對保留時間為1.467的峰為3，4-O-咖啡酰奎寧酸；以綠原酸峰的峰面積進(jìn)行計算，供試品中所含3，5-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.395-0.593，所含3，4-O-咖啡酰奎寧酸的峰的相對峰面積為0.145-0.241。
本發(fā)明中，其中當(dāng)供試品溶液為金銀花提取物時，以綠原酸峰的保留時間進(jìn)行計算，相對保留時間為0.854的峰為5-O-咖啡?？鼘幩?，相對保留時間為1.034的峰為4-O-咖啡?？鼘幩?，相對保留時間為1.111的峰為咖啡酸，相對保留時間為1.382的峰為4，5-O-咖啡酰奎寧酸，相對保留時間為1.427的峰為3，5-O-咖啡?？鼘幩?，相對保留時間為1.466的峰為3，4-O-咖啡酰奎寧酸。
進(jìn)一步以綠原酸峰的峰面積進(jìn)行計算，供試品中所含5-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.347-0.645，所含4-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.352-0.653，所含咖啡酸的峰的相對峰面積為1.529-2.294，所含4，5-O-咖啡酰奎寧酸的峰的相對峰面積為0.583-0.972，所含3，5-O-咖啡酰奎寧酸的峰的相對峰面積為0.410-0.762，所含3，4-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.847-1.412。
本發(fā)明中，其中當(dāng)供試品溶液為黃芩藥材時，標(biāo)定了3個峰，以黃芩苷峰的保留時間進(jìn)行計算，其余兩個峰的相對保留時間分別為0.808和1.081。
本發(fā)明中，其中當(dāng)供試品溶液為黃芩提取物時，標(biāo)定了2個峰，以黃芩苷峰的保留時間進(jìn)行計算，另一個峰的相對保留時間為0.837。
本發(fā)明中，其中當(dāng)供試品溶液為含金銀花提取物和黃芩提取物的制劑時，以綠原酸峰的保留時間進(jìn)行計算，相對保留時間為0.858的峰為5-O-咖啡?？鼘幩幔鄬ΡＡ魰r間為1.032的峰為4-O-啡?？鼘幩幔鄬ΡＡ魰r間為1.111的峰為咖啡酸，相對保留時間為1.380的峰為4，5-O-咖啡?？鼘幩幔鄬ΡＡ魰r間為1.426的峰為3，5-O-咖啡?？鼘幩?，相對保留時間為1.467的峰為3，4-O-咖啡?？鼘幩幔幌鄬ΡＡ魰r間為1.592的峰為黃芩苷。
進(jìn)一步以綠原酸峰的峰面積進(jìn)行計算，供試品中所含5-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.645-1.198，所含4-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.596-1.108，所含咖啡酸的峰的相對峰面積為1.754-2.923，所含4，5-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.843-1.567，所含3，4-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓那蚁鄬Ψ迕娣e為0.985-1.930，所含黃芩苷的峰的相對峰面積為6.307-9.461。
本發(fā)明中，還對金銀花藥材和提取物、黃芩藥材和黃芩提取物及其制劑指紋圖譜的相關(guān)性進(jìn)行了研究分別將金銀花藥材和提取物及制劑、黃芩藥材和黃芩提取物及制劑指紋圖譜相比較，通過各指紋圖譜中共有峰的數(shù)目以及各共有峰間彼此對應(yīng)關(guān)系情況來考察金銀花、黃芩及其提取物和制劑指紋圖譜的相關(guān)性。制劑中前七個峰來自金銀花，金銀花藥材和提取物中峰為一一對應(yīng)，在處理過程中各峰之間相互轉(zhuǎn)換使藥材、提取物和制劑中各峰面積比不同。制劑中8號峰(黃芩苷)來自于黃芩。4個指紋圖譜均與制劑之間對應(yīng)關(guān)系良好。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)1.本發(fā)明在建立含有金銀花和黃芩的指紋圖譜的過程中，確證了各共有峰的化學(xué)成分，分別為5-O-咖啡?？鼘幩帷⒕G原酸、4-O-咖啡?？鼘幩?、咖啡酸、4，5-O-咖啡?？鼘幩帷?，5-O-咖啡?？鼘幩?、3，4-O-咖啡?？鼘幩?、黃芩苷，并對其峰面積比進(jìn)行了研究，保證了制劑的化學(xué)組成穩(wěn)定性和使用安全性，而現(xiàn)有技術(shù)中，在采用指紋圖譜進(jìn)行質(zhì)量控制的過程中并沒有對所有共有峰的化學(xué)成分進(jìn)行測定。
2.本發(fā)明應(yīng)用指紋圖譜技術(shù)不僅監(jiān)測和控制了反映包含金銀花提取物和黃芩提取物的制劑的整體質(zhì)量狀況，同時進(jìn)一步控制了原料質(zhì)量及整個生產(chǎn)工藝流程的穩(wěn)定性，從而提供了一種從原料到成品的全面質(zhì)量控制方法，確保了制劑療效的一致性，彌補(bǔ)了以往技術(shù)中只涉及某一方面的缺點(diǎn)。
3.本發(fā)明采用高效液相色譜方法進(jìn)行檢測，方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好，較之于其他檢測方法如氣相色譜法、高效毛細(xì)管電泳法等更為實(shí)用，大大節(jié)約了成本和時間，其檢測波長選擇327nm，也是因為在該波長出峰較多，反應(yīng)的信息較完全。
4.本發(fā)明采用高效液相色譜對金銀花、黃芩藥材及其提取物和制劑進(jìn)行指紋圖譜及其相關(guān)性研究，與以往只通過綠原酸或黃芩苷的有無或多少來判定藥材或其提取物、制劑的質(zhì)量優(yōu)劣相比較，更為科學(xué)準(zhǔn)確。
5.本發(fā)明包括了以金銀花和黃芩組方的制劑指紋圖譜研究，通過制劑中共有峰的數(shù)目、相對保留時間以及相對峰面積比值來控制制劑的質(zhì)量，確保制劑質(zhì)量的均一性、穩(wěn)定性，使中藥制劑在應(yīng)用過程中更加安全、可控，減少因中藥制劑成分復(fù)雜不清而引起的各種潛在危險。
6.本發(fā)明在對金銀花、黃芩藥材指紋圖譜的建立中，供試品溶液的制備所采用的提取溶劑為水，較之于其他提取溶劑如甲醇、乙醇、無水乙醇等更為貼近生產(chǎn)實(shí)際，使藥材、中間體和成品之間的相關(guān)性得到更好的體現(xiàn)，工藝過程的控制更簡單、易行。
7.本發(fā)明通過對金銀花及其提取物、黃芩藥材及黃芩苷和制劑指紋圖譜的相關(guān)性考察，結(jié)果表明金銀花、黃芩藥材及其提取物和制劑指紋圖譜相關(guān)性很好，應(yīng)用其相關(guān)性考察可有效控制金銀花、黃芩藥材及其提取物和制劑的質(zhì)量狀況。


圖1顯示了本發(fā)明的金銀花藥材的指紋圖譜，其中從左到右分別是共有峰1至7號峰。分別為5-O-咖啡酰奎寧酸、綠原酸、4-O-咖啡酰奎寧酸、咖啡酸、4，5-O-咖啡酰奎寧酸、3，5-O-咖啡?？鼘幩?、3，4-O-咖啡?？鼘幩?。
圖2顯示了本發(fā)明的黃芩藥材的指紋圖譜，其中從左到右分別是共有峰1至3號峰。
圖3顯示了本發(fā)明的金銀花提取物的指紋圖譜，其中從左到右分別是共有峰1至7號峰。分別為5-O-咖啡酰奎寧酸、綠原酸、4-O-咖啡?？鼘幩?、咖啡酸、4，5-O-咖啡?？鼘幩帷?，5-O-咖啡?？鼘幩?、3，4-O-咖啡?？鼘幩?。
圖4顯示了本發(fā)明的黃芩提取物(黃芩苷)的指紋圖譜，其中從左到右分別是共有峰1至2號峰。
圖5顯示了本發(fā)明的制劑的指紋圖譜，其中從左到右分別是共有峰1至8號峰。分別為5-O-咖啡?？鼘幩帷⒕G原酸、4-O-咖啡酰奎寧酸、咖啡酸、4，5-O-咖啡?？鼘幩帷?，5-O-咖啡酰奎寧酸、3，4-O-咖啡酰奎寧酸、黃芩苷。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一、金銀花藥材指紋圖譜1、色譜條件laballiance高效液相色譜儀；seriesIII二元泵；UV6000LP檢測器；Ezchrom Elite工作站。
綠原酸對照品(中國藥品生物制品鑒定所提供，批號11075-200212)；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。
色譜柱KromasilC18(Ф4.6×250mm，5um)；流動相A乙腈，流動相B0.1％磷酸；采用梯度洗脫，洗脫程序見下表；檢測波長327nm；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量10ul。

2、對照品溶液的制備取綠原酸對照品5mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
3、供試品溶液的制備精密稱取金銀花藥材適量，加水回流提取，提取液放冷至室溫后過濾，取1ml續(xù)濾液置于50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。
4、測定法分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。
5、結(jié)果結(jié)合指紋圖譜的技術(shù)要求進(jìn)行分析。共標(biāo)定出7個共有峰；以2號峰(綠原酸峰)為參照物峰(S)，各共有峰的相對保留時間分別為0.844(1)，1.000(2)，1.024(3)，1.09 9(4)，1.372(5)，1.422(6)，1.464(7)。并規(guī)定相對保留時間為1.422和1.464的峰的相對峰面積比值為0.395～0.593(6)，0.145～0.241(7)。金銀花藥材各共有峰相對保留時間、相對峰面積比值結(jié)果分別見下表。
金銀花藥材各共有峰相對保留時間

金銀花藥材各共有峰相對峰面積比值

6、指紋圖譜精密度考察按照指紋圖譜精密度考察要求，以第1批金銀花藥材為供試品，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別計算共有峰的相對保留時間及相對峰面積比值，RSD(％)不超過3％。
7、指紋圖譜重現(xiàn)性考察以第1批金銀花藥材為供試品，按照指紋圖譜重現(xiàn)性規(guī)定方法進(jìn)行操作，分別計算共有峰的相對保留時間及相對峰面積比值，RSD(％)不超過3％。
8、指紋圖譜穩(wěn)定性試驗按照指紋圖譜穩(wěn)定性測定方法操作，以第1批金銀花藥材為供試品，考察24小時溶液的穩(wěn)定性，分別計算共有峰相對保留時間及相對峰面積比值，RSD(％)不超過3％，供試品溶液24小時內(nèi)穩(wěn)定。
以上試驗表明，該測定方法穩(wěn)定、可靠，指紋圖譜相對穩(wěn)定。
實(shí)施例二、金銀花提取物指紋圖譜1、色譜條件laballiance高效液相色譜儀；seriesIII二元泵；UV6000LP檢測器；Ezchrom Elite工作站。
綠原酸對照品(中國藥品生物制品鑒定所提供，批號11075-200212)；金銀花提取物(自制)；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。
色譜柱Kromasil C18(Ф4.6×250mm，5um)；流動相A乙腈，流動相B0.1％磷酸；采用梯度洗脫，洗脫程序見下表；檢測波長327nm；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量10ul。

2、對照品溶液的制備取綠原酸對照品5mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
3、供試品溶液的制備精密稱取金銀花提取物10mg，置于100ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。
4、測定法分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。
5、結(jié)果結(jié)合指紋圖譜的技術(shù)要求進(jìn)行分析。標(biāo)定出7個共有峰；以2號峰(綠原酸峰)為參照物峰(S)，各共有峰的相對保留時間分別為0.854(1)，1.000(2)，1.034(3)，1.111(4)，1.382(5)，1.427(6)，1.466(7)。各共有峰的相對峰面積比值為0.347～0.645(1)，0.352～0.653(3)，1.529～2.294(4)，0.583～0.972(5)，0.410～0.762(6)，0.847～1.412(7)。金銀花提取物各共有峰相對保留時間、相對峰面積比值分別見下表。
金銀花提取物各共有峰相對保留時間統(tǒng)計結(jié)果

金銀花提取物各共有峰相對峰面積比值統(tǒng)計結(jié)果

該方法的精密度、重現(xiàn)性均符合指紋圖譜技術(shù)要求，樣品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。
實(shí)施例三、黃芩藥材指紋圖譜
1、色譜條件高效液相色譜儀lab alliance seriesIII二元泵；UV6000LP檢測器；Ezchrom Elite工作站。
黃芩苷(中國藥品生物制品鑒定所提供，批號11015-200212)；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。
色譜柱Kromasil C18(Ф4.6×250mm，5um)；流動相A乙腈，流動相B0.1％磷酸；采用梯度洗脫，洗脫程序見下表；檢測波長327nm；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量10ul。

2、對照品溶液的制備取黃芩苷對照品6mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
3、供試品溶液的制備精密稱取黃芩藥材適量，加水回流提取，提取液放冷至室溫后過濾，取1ml續(xù)濾液置于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。
4、測定法分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，5.結(jié)果結(jié)合指紋圖譜的技術(shù)要求進(jìn)行分析。標(biāo)定出3個共有峰；以2號峰(黃芩苷峰)為參照物峰(S)，各共有峰的相對保留時間分別為0.808(1)，1.000(2)，1.081(3)。除黃芩苷峰外，各共有峰占總峰面積均小于10％，故對相對峰面積比值不作規(guī)定。黃芩藥材各共有峰相對保留時間、相對峰面積比值結(jié)果分別見下表黃芩藥材各共有峰相對保留時間

黃芩藥材各共有峰相對峰面積比值

該方法的精密度、重現(xiàn)性均符合指紋圖譜技術(shù)要求，樣品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。
實(shí)施例四、黃芩提取物指紋圖譜1、色譜條件高效液相色譜儀lab alliance seriesIII二元泵；UV6000LP檢測器；Ezchrom Elite工作站。
黃芩苷對照品(中國藥品生物制品鑒定所提供，批號11015-200212)；黃芩苷(自制)；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。
色譜柱Kromasil C18(Ф4.6×250mm，5um)；流動相A乙腈，流動相B0.1％磷酸；采用梯度洗脫，洗脫程序見下表；檢測波長327nm；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量10ul。

2、對照品溶液的制備取黃芩苷對照品6mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
3、供試品溶液的制備精密稱取黃芩苷7mg，置于100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
4、測定法分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。
5、結(jié)果結(jié)合指紋圖譜的技術(shù)要求進(jìn)行分析。標(biāo)定出2個共有峰；以2號峰(黃芩苷峰)為參照物峰(S)，各共有峰的相對保留時間分別為0.837(1)，1.000(2)。1號峰峰面積小于5％，故對其相對峰面積比值不做要求。黃芩苷各共有峰相對保留時間、相對峰面積比值分別見下表。
黃芩苷各共有峰相對保留時間統(tǒng)計結(jié)果

黃芩苷各共有峰相對峰面積比值統(tǒng)計結(jié)果

該方法的精密度、重現(xiàn)性均符合指紋圖譜技術(shù)要求，樣品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。
實(shí)施例五、含有金銀花提取物和黃芩提取物的制劑的指紋圖譜1、色譜條件高效液相色譜儀lab alliance seriesIII二元泵；UV6000LP檢測器；Ezchrom Elite工作站。
綠原酸、黃芩苷、咖啡酸對照品為中國藥品生物制品鑒定所提供；4-O-咖啡?？鼘幩?、5-O-咖啡?？鼘幩帷?，4-O-咖啡酰奎寧酸、3，5-O-咖啡?？鼘幩?、4，5-O-咖啡?？鼘幩釋φ掌窞樽灾?，純度均在98％以上；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。
色譜柱Kromasil C18(Ф4.6×250mm，5um)；流動相A乙腈，流動相B0.1％磷酸；采用梯度洗脫，洗脫程序見下表；檢測波長327nm；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量10ul。

2、對照品溶液的制備取各個對照品5mg，精密稱定，分別置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
3、供試品溶液的制備取注射用銀黃粉末(自制)10mg置于100ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。
取銀黃注射液(自制)0.5ml于200ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。
4、測定法分別精密吸取供試品溶液及參照物溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。
5、結(jié)果結(jié)合指紋圖譜的技術(shù)要求進(jìn)行分析。標(biāo)定出8個共有峰。確定1號峰為5-O-咖啡?？鼘幩幔?號峰為綠原酸；3號峰為4-O-咖啡酰奎寧酸；4號峰為咖啡酸；5號峰為4，5-O-咖啡?？鼘幩?；6號峰為3，5-O-咖啡?？鼘幩?；7號峰為3，4-O-咖啡?？鼘幩幔?號峰為黃芩苷。以2號峰(綠原酸峰)為參照物峰(S)，各共有峰的相對保留時間分別為0.858(1)，1.000(2)，1.032(3)，1.111(4)，1.380(5)，1.426(6)，1.467(7)，1.592(8)；各共有峰的相對峰面積比值為0.645～1.198(1)，0.596～1.108(3)，1.754～2.923(4)，0.843～0.1.567(5)，0.985～1.930(7)，6.307～9.461(8)。
注射用銀黃(凍干)各共有峰相對保留時間、相對峰面積比值分別見下表。
制劑各共有峰相對保留時間

制劑各共有峰相對峰面積比值

該方法的精密度、重現(xiàn)性均符合指紋圖譜技術(shù)要求，樣品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。
實(shí)施例六、金銀花、黃芩藥材及其提取物和制劑指紋圖譜相關(guān)性考察1、金銀花藥材及其提取物和制劑指紋圖譜相關(guān)性考察通過對金銀花藥材及其提取物和制劑指紋圖譜相關(guān)性考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)金銀花藥材指紋圖譜中的1號峰、2號峰(綠原酸峰)、3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰分別與金銀花提取物指紋圖譜中的1號峰、2號峰(綠原酸峰)、3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰相對應(yīng)；金銀花藥材指紋圖譜中的1號峰、2號峰(綠原酸峰)、3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰分別與金銀花制劑指紋圖譜中的1號峰、2號峰(綠原酸峰)、3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰相對應(yīng)；金銀花提取物指紋圖譜中的1號峰、2號峰(綠原酸峰)、3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰分別與金銀花制劑指紋圖譜中1號峰、2號峰(綠原酸峰)、3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰相對應(yīng)。結(jié)果表明金銀花藥材及其提取物和制劑指紋圖譜相關(guān)性很好。
2、黃芩藥材及黃芩苷和制劑指紋圖譜相關(guān)性考察通過對黃芩藥材及其提取物和制劑指紋圖譜相關(guān)性考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芩藥材指紋圖譜中的1號峰、2號峰(黃芩苷峰)分別與黃芩苷指紋圖譜中1號峰、2號峰(黃芩苷峰)相對應(yīng)；黃芩藥材指紋圖譜中的2號峰(黃芩苷峰)與制劑指紋圖譜中的8號峰(黃芩苷峰)相對應(yīng)；黃芩苷指紋圖譜中的2號峰(黃芩苷峰)與制劑指紋圖譜中的2號峰(黃芩苷峰)相對應(yīng)。結(jié)果表明黃芩藥材及黃芩苷和制劑指紋圖譜相關(guān)性很好。
上述指紋圖譜及其相關(guān)性考察均可用于控制藥材及其提取物和制劑的質(zhì)量。
實(shí)施例七取金銀花/或黃芩，按“發(fā)明內(nèi)容”中“金銀花藥材指紋圖譜、黃芩藥材指紋圖譜”中的方法進(jìn)行檢測，符合該指紋圖譜中的規(guī)定。
實(shí)施例八取金銀花提取物/或黃芩苷，按“發(fā)明內(nèi)容”中“金銀花提取物指紋圖譜、黃芩提取物指紋圖譜”中的方法進(jìn)行檢測，符合該指紋圖譜中的規(guī)定。
實(shí)施例九取含有金銀花和/或黃芩的制劑指紋圖譜，按“發(fā)明內(nèi)容”中“含有金銀花和/或黃芩的制劑指紋圖譜”中的方法進(jìn)行檢測，符合該指紋圖譜中的規(guī)定。
取實(shí)施例七、八中的指紋圖譜和制劑指紋圖譜照實(shí)施例6進(jìn)行分析，相關(guān)性良好。
權(quán)利要求
1.一種金銀花藥材、黃芩藥材，其提取物以及包含金銀花提取物和黃芩提取物的制劑的質(zhì)量控制方法，該方法包括(1)對照品指紋圖譜的建立對照品溶液的制備綠原酸對照品溶液的制備稱取綠原酸對照品適量，加甲醇溶解并稀釋至所需刻度，即得；黃芩苷對照品溶液的制備稱取黃芩苷對照品適量，加甲醇溶解并稀釋至所需濃度，即得；對照品指紋圖譜的測定吸取上述對照品溶液注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測定，得到對照品的指紋圖譜；色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；采用梯度洗脫，流速0.5-1.2ml/分，流動相組成A乙腈，B0.05-0.5％磷酸；檢測波長300-345nm；分析時間30-60分；理論板數(shù)以綠原酸計應(yīng)不低于2000；(2)供試品指紋圖譜的測定供試品溶液的制備精密稱取金銀花藥材適量，加水回流提取，提取液放冷至室溫后過濾，取適量濾液加水稀釋至所需濃度，即得；精密稱取金銀花提取物適量，加水溶解并稀釋至所需濃度，即得；精密稱取黃芩藥材適量，加水回流提取，提取液放冷至室溫后過濾，取適量濾液加水稀釋至所需濃度，即得；精密稱取黃芩提取物適量，加甲醇溶解并稀釋至所需濃度，即得；稱取注射用銀黃粉末適量或取銀黃注射液適量，加水溶解并稀釋至所需濃度，即得；分別吸取上述五種供試品溶液注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測定，得到供試品的指紋圖譜；色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；采用梯度洗脫，流速0.5-1.2ml/分，流動相組成A乙腈，B0.05-0.5％磷酸；檢測波長300-345nm；分析時間30-60分；理論板數(shù)以綠原酸計應(yīng)不低于2000；(3)將對照品的峰設(shè)定為參照峰，將其它物質(zhì)的峰和參照物的峰相比，以其它物質(zhì)的保留時間和峰面積與參照峰的保留時間和峰面積比較，計算其相對峰面積和相對保留時間，以此進(jìn)行從原料到制劑的質(zhì)量控制。
2.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其中色譜條件中的所述梯度洗脫條件如下0分鐘時，流動相A為0-5％的乙腈，流動相B為100-95％的0.05-0.5％磷酸；5分鐘時，流動相A為0-5％的乙腈，流動相B為100-95％的0.05-0.5％磷酸；25分鐘時，流動相A為30-45％的乙腈，流動相B為70-55％的0.05-0.5％磷酸；30分鐘時，流動相A為0-5％的乙腈，流動相B為100-95％的0.05-0.5％磷酸。
3.如權(quán)利要求1或2所述的質(zhì)量控制方法，其中所選波長為327nm。
4.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其中當(dāng)供試品溶液為金銀花藥材時，以綠原酸峰的保留時間進(jìn)行計算，相對保留時間為0.844的峰為5-O-咖啡?？鼘幩?，相對保留時間為1.024的峰為4-O-咖啡?？鼘幩?，相對保留時間為1.099的峰為咖啡酸，相對保留時間為1.372的峰為4，5-O-咖啡?？鼘幩幔鄬ΡＡ魰r間為1.422的峰為3，5-O-咖啡酰奎寧酸，相對保留時間為1.467的峰為3，4-O-咖啡酰奎寧酸；以綠原酸峰的峰面積進(jìn)行計算，供試品中所含3，5-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.395-0.593，所含3，4-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.145-0.241。
5.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其中當(dāng)供試品溶液為金銀花提取物時，以綠原酸峰的保留時間進(jìn)行計算，相對保留時間為0.854的峰為5-O-咖啡?？鼘幩?，相對保留時間為1.034的峰為4-O-咖啡?？鼘幩幔鄬ΡＡ魰r間為1.111的峰為咖啡酸，相對保留時間為1.382的峰為4，5-O-咖啡?？鼘幩幔鄬ΡＡ魰r間為1.427的峰為3，5-O-咖啡?？鼘幩?，相對保留時間為1.466的峰為3，4-O-咖啡?？鼘幩?。
6.如權(quán)利要求5所述的質(zhì)量控制方法，其進(jìn)一步以綠原酸峰的峰面積進(jìn)行計算，供試品中所含5-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.347-0.645，所含4-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.352-0.653，所含咖啡酸的峰的相對峰面積為1.529-2.294，所含4，5-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.583-0.972，所含3，5-O-咖啡酰奎寧酸的峰的相對峰面積為0.410-0.762，所含3，4-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.847-1.412。
7.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其中當(dāng)供試品溶液為黃芩藥材時，標(biāo)定了3個峰，以黃芩苷峰的保留時間進(jìn)行計算，其余兩個峰的相對保留時間分別為0.808和1.081。
8.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其中當(dāng)供試品溶液為黃芩提取物時，標(biāo)定了2個峰，以黃芩苷峰的保留時間進(jìn)行計算，另一個峰的相對保留時間為0.837。
9.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其中當(dāng)供試品溶液為含金銀花提取物和黃芩提取物的制劑時，以綠原酸峰的保留時間進(jìn)行計算，相對保留時間為0.858的峰為5-O-咖啡?？鼘幩幔鄬ΡＡ魰r間為1.032的峰為4-O-咖啡?？鼘幩幔鄬ΡＡ魰r間為1.111的峰為咖啡酸，相對保留時間為1.380的峰為4，5-O-咖啡酰奎寧酸，相對保留時間為1.426的峰為3，5-O-咖啡?？鼘幩?，相對保留時間為1.467的峰為3，4-O-咖啡?？鼘幩?；相對保留時間為1.592的峰為黃芩苷。
10.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其進(jìn)一步以綠原酸峰的峰面積進(jìn)行計算，供試品中所含5-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.645-1.198，所含4-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.596-1.108，所含咖啡酸的峰的相對峰面積為1.754-2.923，所含4，5-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓南鄬Ψ迕娣e為0.843-1.567，所含3，4-O-咖啡?？鼘幩岬姆宓那蚁鄬Ψ迕娣e為0.98 5-1.930，所含黃芩苷的峰的相對峰面積為6.307-9.461。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種金銀花藥材、黃芩藥材，其提取物及包含金銀花提取物和黃芩提取物的制劑的質(zhì)量控制方法。通過利用高溫液相色譜法建立了金銀花藥材、金銀花提取物、黃芩藥材、黃芩提取物以及包含金銀花提取物和黃芩提取物的制劑的從原料到最終制劑的一系列的指紋圖譜并對其之間的相關(guān)性進(jìn)行了考察，從而建立了一種采用指紋圖譜對從原材料到中間體直至最終制劑成品的質(zhì)量進(jìn)行控制的方法，確保了產(chǎn)品工藝和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定、均一，同時也提供了一種有效的產(chǎn)品檢測方法。
文檔編號A61P11/14GK1969953SQ200610145989
公開日2007年5月30日 申請日期2006年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月30日
發(fā)明者石秀偉, 孔志云 申請人:天津市軒宏醫(yī)藥技術(shù)有限公司