專利名稱：：一種含有g(shù)tf活性提取物的藥物組合物及其制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藥物組合物和制備工藝及其作用新用途，特別涉及一種含有GTF活性提取物(葡萄糖耐量因子活性提取物)的藥物組合物及其制備工藝。
背景技術(shù)：
：GTF活性提取物是一種從特種啤酒酵母中分離制得的具有促進(jìn)機體葡萄糖利用的活性組分。截至目前為止的大量研究表明，GTF活性提取物在調(diào)節(jié)機體的糖和脂肪代謝方面有重要的作用，對于糖尿病和高脂血癥的治療具有潛在的臨床價值。本研究是在這些研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步改進(jìn)GTF活性提取物的提取工藝，并采用了其它高分子活性物質(zhì)組合形成性的GTF活性提取物組合物，用于糖耐量低下(IGT)、糖尿病和高脂血癥的防治。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的在于公開一種含有GTF活性提取物藥物組合物；本發(fā)明的另一個目的在于公開一種GTF活性提取物的提取方法；本發(fā)明的第三個目的在于公開該藥物組合物的制備工藝；本發(fā)明的第四個目的是公開該藥物組合物新用途。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的-本發(fā)明藥物組合物的原料組成為:GTF活性提取物10—50重量份、甲殼素30—60重量份、糊精20—35重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料組成優(yōu)選為GTF活性提取物30—47重量份、甲殼素33—43重量份、糊精20—27重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選為GTF活性提取物47重量份、甲殼素33重量份、糊精20重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料組成優(yōu)選為GTF活性提取物24—34重量份、甲殼素41一47重量份、糊精25—29重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選為GTF活性提取物35重量份、甲殼素40重量份、糊精25重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料組成優(yōu)選為GTF活性提取物12—17重量份、甲殼素53—55重量份、糊精30—33重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料組成優(yōu)選為GTF活性提取物17重量份、甲殼素53重量份、糊精30重量份。取上述藥物組合物原料，按照常規(guī)工藝，制成臨床接受的但并不限于片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液體制劑、滴丸、注射劑等制劑。其中所述GTF活性提取物可以按照如下工藝方法制備稱取20-40重量份弱堿性離子交換樹脂(可用DEAE-ll、DEAE-22、DEAE_23、DEAE-32或DEAE51-53型號替換)干粉，先加入到130-170體積份的0.2-lNNaOH溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.5-1.0小時后，用蒸餾水洗脫，洗至中性，再加入到130-170體積份的0.2-2NHCL溶液中，同樣方法洗至中性；取強酸性陽離子樹脂(可用Dowex50W-X2、X4、X8或X12型號替換)干粉20-40重量份，處理方法同弱堿性離子交換樹脂干粉；稱取20-40重量份的富鉻酵母粉，配制體積比為0.5-1.5:0.5-1.5的正丁醇-水混合液400-800體積份，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌2-4小時，靜置12-20小時，取水相中的上清液在50。C-60。C下真空濃縮；將濃縮液加入2-4倍體積份的蒸餾水進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將濃縮后的透析液加入弱堿性離子交換樹脂層析柱中過柱分離，并用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262mn處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過強酸性陽離子樹脂柱分離，用0.25MNH》H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至剩余10—30體積份，冷凍干燥，得到GTF活性提取物。上述所述的弱堿性離子交換樹脂是指DEAE纖維素-23(二乙基氨基乙基纖維素)，還可選擇DEAE-11、DEAE-22、DEAE-23、DEAE-32或DEAE51-53型號替換；其中強酸性陽離子樹脂是指Dowex50WX8(732強酸性陽離子樹脂)，還可選擇Dowex50W-X2、X4、X8或X12型號替換。上述所述的冷凍干燥的冷凍條件為條件為-4(TC到-35"C、12-15Pa、28—32h。GTF活性提取物的制備工藝優(yōu)選為稱取30重量份DEAE-23纖維素樹脂干粉，加入到約150體積份的0.2NNaOH溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.6小時后，用蒸餾水洗脫，直到洗到中性為止，再加入到150體積份的0.2NHCL溶液中，同樣方法洗至中性；取Dowex50WX8強酸性陽離子樹脂干粉20重量份，處理方法同DEAE-23纖維素樹脂干粉；稱取30重量份的富鉻酵母粉，配制體積比為l:1的正丁醇-水混合物600體積份，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌3小時，靜置20h，取水相中的上清液在55"C下真空濃縮;將濃縮液分別加入2倍體積份的蒸餾水進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將透析液加入DEAE-23纖維素樹脂層析柱中過柱分離，用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過Dowex50WX8陽離子樹脂柱分離，用0.25MNH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至剩余20體積份，放入真空冷凍干燥儀中冷凍干燥，條件為-4(TC到-35°C、12-15Pa、28-32h，得到黃褐色稍有粘性的GTF活性提取物。本發(fā)明所述的GTF活性提取物是指葡萄糖耐量因子，其中活性鉻含量不小于1360mg/Kg.本發(fā)明所述的重量份與體積份的比例為g/ml。本發(fā)明藥物組合物用于制備治療糖耐量低下(IGT)、糖尿病或高脂血癥的藥物。圖1:DEAE-23纖維素柱水洗脫圖(隨著洗脫瓶數(shù)的增加，吸光值隨之下降)圖2:Dowex50WX8樹脂氨水洗脫圖(隨著洗脫瓶數(shù)的增加，吸光值隨之下降)圖3:GTF活性提取物的紅外光譜圖本發(fā)明藥物組合物經(jīng)臨床實驗論證，具有促進(jìn)酵母細(xì)胞的葡萄糖利用；調(diào)節(jié)血糖血脂；上調(diào)實驗型糖尿病大鼠胰島素受體基因表達(dá)，提高糖耐量；有效預(yù)防高脂肪飲食誘導(dǎo)的肥胖；調(diào)節(jié)由高脂飲食誘導(dǎo)的瘦素水平及其瘦素受體基因表達(dá)的功效。下述實驗和實施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。實驗例1葡萄糖耐量因子生物活性的測定本實驗采用啤酒酵母培養(yǎng)法對按本發(fā)明技術(shù)方案提取所得GTF活性提取物(本發(fā)明實施例7所制得)及GTF活性提取物的藥物組合物組(本發(fā)明實施例1膠囊劑內(nèi)容物)的活性進(jìn)行測定，現(xiàn)報告如下-l菌種的培養(yǎng):配置培養(yǎng)基葡萄糖60g、酵母粉10g、(NH4)2SCU0g、MgS04lg、KH2P042g、K異2g。分裝各200ml，高壓滅菌20min，將啤酒酵母接種于液體培養(yǎng)基中，置培養(yǎng)箱中搖床培養(yǎng)48h(3(TC)2制備酵母靜息細(xì)胞將培養(yǎng)所得液體離心U000r/min，15min)，棄去上清液，用滅菌水沖洗一遍，再次離心，得到酵母菌體。分別接種于滅菌水中置搖床中培養(yǎng)48h(3(TC)，離心，棄去上清液，用滅菌水沖洗，離心。再重復(fù)這一步驟，得到酵母靜息細(xì)胞。3加樣取500ml錐形瓶，每只分裝200ml蒸餾水，分別加入6g葡萄糖，高壓滅菌20min。每支錐形瓶中接種5g酵母靜息細(xì)胞。將上述錐形瓶分為四組對照組(不加任何樣品)、富鉻酵母粉組、GTF活性提取物組及GTF活性提取物的藥物組合物組均含鉻離子濃度為70pg/ml)，均置于搖床中培養(yǎng)(30。C)。4取樣測定分別于培養(yǎng)4h、6h、7h、8h、9h、10h、11h取樣5ml，離心(4000r/min，15min)，取上清液，用葡萄糖氧化酶法測其中殘余葡萄糖濃度，用來反應(yīng)不同組之間葡萄糖代謝的程度。(見表l)表l不同時間反應(yīng)體系中殘余葡萄糖濃度的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與空白組比較*P〈0.Q5，林P〈0.01，***P〈0.001，與富鉻酵母粉組比較AP〈0.05，AAP〈0.01，△△AP<0.001，組合物與GTF組比較ttP〈0.05實驗結(jié)果表明，由本實驗制得的GTF活性提取物的藥物組合物與GTF活性提取物均具有顯著的促進(jìn)酵母細(xì)胞葡萄糖利用的作用，與空白組、富鉻酵母粉組比較，在第六小時之后，反應(yīng)體系中殘余葡萄糖濃度均有顯著性差異(P〈0.001)。GTF活性提取物的藥物組合物組與GTF活性提取物組比較有差異(P〈0.05)。實驗例2GTF活性提取物的藥物組合物組對實驗性小鼠空腹血糖及糖耐量的影響將四氧嘧啶糖尿病小鼠分為模型組，模型加GTF活性提取物組(本發(fā)明實施例8所制得)，模型加甲殼素組，模型加含有GTF活性提取物的藥物組合物組(本發(fā)明實施例2所制得)小、中、大劑量(相當(dāng)于臨床劑量的5、10、20倍)，模型加優(yōu)降糖組(優(yōu)降糖5mg/kg)，正常對照組和模型對照組灌胃給予等體積蒸餾水，每日1次，連續(xù)10天。分別進(jìn)行血糖和糖耐量的測定表2GTF活性提取物的藥物組合物對四氧嘧啶小鼠空腹血糖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表3GTF活性提取物的藥物組合物對四氧嘧啶小鼠糖耐量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>與正常對照組比較***P<0.001;與模型組比較AA厶P〈0.001，AAP<0.01，AP〈0.05實驗發(fā)現(xiàn)含有GTF活性提取物的藥物組合物組、GTF活性提取物組、甲殼素組均能降低四氧嘧啶小鼠空腹血糖含量，與模型組比較有顯著性差異(P〈0.01或P<0.001)。同時能顯著提高糖尿病小鼠的糖耐量水平，與模型組比較有顯著性差異(P〈0.01或P<0.001)，GTF活性提取物的藥物組合物組的血糖值顯著低于GTF活性提取物組、甲殼素組(P〈0.05，P〈0.01)。實驗例3GTF活性提取物的藥物組合物組對實驗性小鼠肝臟胰島素受體基因表達(dá)的影響將四氧嘧啶糖尿病小鼠分為模型組，模型加含有GTF活性提取物的藥物組合物組((本發(fā)明實施例5所制得，相當(dāng)于臨床劑量20倍)，模型加GTF活性提取物組((本發(fā)明實施例9所制得)相當(dāng)于臨床劑量20倍)，模型加甲殼素組(相當(dāng)于臨床劑量20倍)，模型加優(yōu)降糖組(相當(dāng)于臨床劑量20倍)，正常對照組和模型對照組灌胃給予等體積蒸餾水，每日l次，連續(xù)io天后，迅速取出動物肝臟組織，采用RT-PCR方法檢測胰島素受體基因表達(dá)的情況。表4GTF活性提取物的藥物組合物組對實驗性小鼠肝臟胰島素受體基因表達(dá)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表4顯示，經(jīng)PT-PCR,GDS-8000光密度掃描后與對照組比較，含有GTF活性提取物的藥物組合組與GTF活性提取物組有明顯提高糖尿病動物受損的胰島素受體基因mRNA水平,而且含有GTF活性提取物的藥物組合組優(yōu)于GTF活性提取物組與優(yōu)降糖組。實驗例4GTF活性提取物的藥物組合物組對肥胖大鼠體重、血脂及胰島素、瘦素水平的影響動物購置后適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，其中12只采用普通飼料，另外84只采用高脂飼料，制造肥胖大鼠模型。造模成功(正常組體重為283.75±23.37，肥胖模型組體重為377.17土21.52)肥胖大鼠體重平均為正常組大鼠體重1.3-1.4倍)后，將實驗性肥胖大鼠隨機分為7組，每組12只模型組、陽性藥(血脂康)組、GTF活性提取物的藥物組合物組(本發(fā)明實施例3所制得)小劑量組、中劑量組、大劑量組(分別相當(dāng)于成人臨床劑量的5倍、10倍、20倍)、GTF活性提取物組(相當(dāng)于成人臨床劑量IO倍)、甲殼素組(相當(dāng)于成人臨床劑量10倍)開始灌胃給藥，正常組和模型組灌胃給以生理鹽水。同時除正常組喂以普通飼料外，其余組仍喂養(yǎng)高脂飼料，連續(xù)4周，每周測體重，于末次給藥后禁食12h，次日上午，乙醚麻醉下開胸心臟取血，靜置分離血清，一2(TC保存待測，酶法測定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C，放射免疫法測定血清胰島素、瘦素的含量。迅速開顱分離出下丘腦，置于Trizol中，一2(TC保存待測。用熒光定量PCR方法檢測下丘腦瘦素受體基因表達(dá)的情況。(1)GTF活性提取物的藥物組合物組對飲食誘導(dǎo)肥胖模型大鼠體重的影響(見表5)表5飲食誘導(dǎo)肥胖模型大鼠體重的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>與肥胖模型組比較*P<0.05**P<0.01表5可見，肥胖組和8個實驗組的大鼠體重在治療前沒有差異，隨著時間的推移，各組大鼠的體重增加,但實驗組大鼠的增長趨勢較肥胖組與甲殼素組緩慢。在第4周時，GTF活性提取物的藥物組合物組小劑量組與大劑量組的體重顯著低于肥胖組(P〈005)，治療后GTF活性提取物的藥物組合物各劑量組與GTF活性提取物組體重的增長值與肥胖組有顯著差異(P〈005)。(2)GTF活性提取物的藥物組合物組對血脂的影響(見表6)表6GTF活性提取物的藥物組合物組對血脂的影響(X±SD,mmol/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與正常組比較*P<0.05，**P〈0.01，***P<0.001，與肥胖模型組相比厶P〈0.05，AAP〈0.01，AAAP<0.00見表6，GTF活性提取物的藥物組合物組各劑量組、GTF活性提取物組、甲殼素組均能顯著降低TG水平，與模型組比較有顯著性差異(P〈0.01，P〈0.001)，GTF活性提取物的藥物組合物組小劑量組與GTF活性提取物組可以降低TC水平，與模型組比較有差異(P〈0.05)，中大劑量組有降低趨勢。GTF活性提取物的藥物組合物組各劑量組與GTF活性提取物組對HDL-C有明顯的提高作用，與模型組比較均有差異(P〈0.05，P〈0.001)。各組之間LDL-C水平無明顯差異。GTF活性提取物的藥物組合物組各劑量組在降脂方面均優(yōu)于GTF活性提取物組、甲殼素組。(3)GTF活性提取物的藥物組合物組對血清胰島素、瘦素含量的影響(見表7)表7GTF活性提取物的藥物組合物對血清胰島素、瘦素含量的影響(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與正常組比較*P〈0.05，**P〈0.01'***P〈0.001'與肥胖模型組相比AP<0.05，△AP〈0.01，AAAP<0.001高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠血清胰島素、瘦素水平與正常組比較均有差異。表7顯示，GTF活性提取物的藥物組合物可以改善肥胖大鼠高胰島素血癥及高瘦素血癥。(4)GTF活性提取物的藥物組合物組對飲食誘導(dǎo)肥胖模型大鼠下丘腦OB-R基因表達(dá)的影響(見表8)表8實驗各組下丘腦OB-R基因表達(dá)水平的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表8可見，肥胖模型組下丘腦OB-R基因表達(dá)相對定量值減少，與正常組比P〈001，差異有非常顯著性意義，GTF活性提取物的藥物組合物組小劑量組下丘腦OB-R基因表達(dá)相對定量值增加，與對照組比P〈005，差異亦有顯著性意義。下述實施例均能實現(xiàn)上述試驗例的效果具體實施方式實施例1:膠囊劑的制備取GTF活性提取物47g分別與甲殼素33g、糊精20g混合，即得到100g含有GTF活性提取物活性成分的干藥粉，將制得的藥粉按照常規(guī)方法制成膠囊每粒0.2g，每日一次，每次一粒；其中所述GTF活性提取物的制備工藝為稱取30gDEAE-23纖維素樹脂(二乙基氨基乙基纖維素)干粉，加入到約150ml的0.2NNaOH溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.6小時后，用蒸餾水洗脫，直到洗到中性為止，再加入到150體積份的0.2NHCL溶液中用同樣方法洗到中性；取Dowex50WX8樹脂(732強酸性陽離子樹脂)的處理同DEAE-23纖維素樹脂；稱取30g的富鉻酵母粉，配制體積比為l:1的正丁醇-水混合物600ml，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌3小時，靜置20h，取水相中的上清液在55'C下真空濃縮；將濃縮液分別加入2倍體積份的蒸餾水中進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮;將透析液加入DEAE-23纖維素層析柱中過柱分離，用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過Dowex50WX8樹脂柱分離，用0.25MNH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至粘稠狀(剩余20體積份)，放入真空冷凍干燥儀中冷凍干燥，條件為-40。C到-35。C、12-15Pa、28-32h，得到黃褐色稍有粘性的物質(zhì)GTF活性提取物。實施例2:片劑的制備取GTF活性提取物17g分別與甲殼素53g、糊精30g混合，即得到100g含GTF活性提取物活性成分的干藥粉，將制得的藥粉按照常規(guī)方法制成片劑。每片0.5g，每日一次，每次一片；其中所述GTF活性提取物的制備工藝為稱取30gDEAE-23纖維素樹脂(二乙基氨基乙基纖維素)干粉，加入到約160ml的0.2NNa0H溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.6小時后，用蒸餾水洗脫，直到洗到中性為止，再加入到160體積份的0.2NHCL溶液中，用同樣方法洗到中性；取Dowex50WX8樹脂(732強酸性陽離子樹脂)的處理同DEAE-23纖維素樹脂；稱取20g的富鉻酵母粉，配制體積比為1.:1的正丁醇-水混合物400ml,將酵母粉加入上述混合液中，攪拌3小時，靜置20h，取水相中的上清液在6(TC下真空濃縮；將濃縮液分別加入2倍體積份的蒸餾水中進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將透析液加入DEAE-23纖維素層析柱中過柱分離，用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過Dowex50WX8樹脂柱分離，用0.25MNH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至粘稠狀(剩余10體積份)，放入真空冷凍干燥儀中冷凍干燥，條件為-4(TC到-35°C、12-15Pa、28-32h，得到黃褐色稍有粘性的物質(zhì)GTF活性提取物。實施例3:口服液的制備取GTF活性提取物0.9g，溶解在91ml純凈水中，按照常規(guī)方法制成口服液，每支10ml,每日一次，每次一支；其中所述GTF活性提取物的制備工藝為稱取30gDEAE-23纖維素樹脂(二乙基氨基乙基纖維素)干粉，加入到約140ml的0.2麗aOH和0.2NHCL溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.5小時后，用蒸餾水洗脫，直到洗到中性為止，再加入到140體積份的0.2NHCL溶液中，用同樣方法洗到中性；取Dowex50WX8樹脂(732強酸性陽離子樹脂)的處理同DEAE-23纖維素樹脂;稱取40g的富鉻酵母粉，配制體積比為l:1的正丁醇-水混合物800ml，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌4小時，靜置20h，取水相中的上清液在50'C下真空濃縮；將濃縮液分別加入2倍體積份的蒸餾水中進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將透析液加入DEAE-23纖維素層析柱中過柱分離，用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液;將濃縮液經(jīng)過Dowex50WX8樹脂柱分離，用0.25MNH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至粘稠狀(剩余30體積份)，放入真空冷凍干燥儀中冷凍干燥，條件為-40'C到-35°C、12-15Pa、28-32h，得到黃褐色稍有粘性的物質(zhì)GTF活性提取物。實施例4:滴丸的制備取GTF活性提取物47g分別與甲殼素33g、糊精20g混合，即得到100g含有GTF活性提取物活性成分的干藥粉，將制得的藥粉按照常規(guī)方法制成滴丸；其中所述GTF活性提取物的制備工藝為稱取30gDEAE-23纖維素樹脂(二乙基氨基乙基纖維素，可用DEAE-11、DEAE-22、DEAE-23、DEAE-32、DEAE51-53型號替換)干粉，加入到約150ml的0.2NNaOH溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.6小時后，用蒸餾水洗脫，直到洗到中性為止，再加入到150體積份的0.2NHCL溶液中，用同樣方法洗到中性；取Dowex50WX8樹脂(732強酸性陽離子樹脂，可用Dowex50W-X2、X4、X8、X12型號替換)的處理同DEAE-23纖維素樹脂；稱取30g的富鉻酵母粉，配制體積比為1:1的正丁醇-水混合物600ml，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌3小時，靜置20h，取水相中的上清液在55t:下真空濃縮；將濃縮液分別加入2倍體積份的蒸餾水中進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將透析液加入DEAE-23纖維素層析柱中過柱分離，用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過Dowex50WX8樹脂柱分離，用0.25匪40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至粘稠狀(剩余20體積份)，放入真空冷凍干燥儀中冷凍干燥，條件為-4(TC至U-35°C、12-15Pa、28-32h，得到黃褐色稍有粘性的物質(zhì)GTF活性提取物。實施例5:顆粒劑的制備取GTF活性提取物25g分別與甲殼素45g、糊精25g混合，即得到95g含GTF活性提取物活性成分的干藥粉，將制得的藥粉按照常規(guī)方法制成顆粒劑；其中所述GTF活性提取物的制備工藝為稱取30gDEAE-23纖維素樹脂(二乙基氨基乙基纖維素，可用DEAE-11、DEAE-22、DEAE-23、DEAE-32、DEAE51-53型號替換)干粉，加入到約140ml的0.2NNaOH溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.8小時后，用蒸餾水洗脫，直到洗到中性為止，再加入到140體積份的0.2NHCL溶液中，用同樣方法洗到中性；取Dowex50WX8樹脂(732強酸性陽離子樹脂，可用D隨50W-X2、X4、X8、X12型號替換)的處理同DEAE-23纖維素樹脂；稱取20g的富鉻酵母粉，配制體積比為1:1的正丁醇-水混合物400ml，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌3小時，靜置20h，取水相中的上清液在6(TC下真空濃縮；將濃縮液分別加入2倍體積份的蒸餾水中進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將透析液加入DEAE-23纖維素層析柱中過柱分離，用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262mn處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過Dowex50WX8樹脂柱分離，用0.25MNH》H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至粘稠狀(剩余10體積份)，放入真空冷凍干燥儀中冷凍干燥，條件為-4(TC到-35°C、12-15Pa、28-32h，得到黃褐色稍有粘性的物質(zhì)GTF活性提取物。實施例6:注射劑的制備取GTF活性提取物0.9g，溶解在91ml純凈水中，將制得的藥粉按照常規(guī)方法制成注射劑；其中所述GTF活性提取物的制備工藝為稱取30gDEAE-23纖維素樹脂(二乙基氨基乙基纖維素)干粉，加入到約160ml的0.2NNa0H溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.5小時后，用蒸餾水洗脫，直到洗到中性為止，再加入到160體積份的0.2NHCL溶液中，用同樣方法洗到中性；取Dowex50WX8樹脂(732強酸性陽離子樹脂)的處理同DEAE-23纖維素樹脂；稱取40g的富鉻酵母粉，配制體積比為l:1的正丁醇-水混合物800ml,將酵母粉加入上述混合液中，攪拌4小時，靜置20h，取水相中的上清液在50'C下真空濃縮；將濃縮液分別加入2倍體積份的蒸餾水中透析，合并透析液，真空濃縮；將透析液加入DEAE-23纖維素層析柱中過柱分離，用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過Dowex50WX8樹脂柱分離，用0.25MNH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至粘稠狀(剩余30體積份)，放入真空冷凍干燥儀中冷凍干燥，條件為-4(TC到-35。C、12-15Pa、28-32h，得到黃褐色稍有粘性的物質(zhì)GTF活性提取物。實施例7:GTF活性提取物的制備GTF活性提取物的制備工藝為稱取30gDEAE-23纖維素樹脂(二乙基氨基乙基纖維素)干粉，加入到約150ml的0.2NNaOH溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0,6小時后，用蒸餾水洗脫，直到洗到中性為止，再加入到150體積份的0.2NHCL溶液中，用同樣方法洗到中性；取Dowex50WX8樹脂(732強酸性陽離子樹脂)的處理同DEAE-23纖維素樹脂；稱取30g的富鉻酵母粉，配制體積比為1:1的正丁醇-水混合物600ral，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌3小時，靜置20h,取水相中的上清液在55'C下真空濃縮；將濃縮液分別加入2倍體積份的蒸餾水中進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將透析液加入DEAE-23纖維素層析柱中過柱分離，用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過Dowex50WX8樹脂柱分離，用0.25MNH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至粘稠狀(剩余20體積份)，放入真空冷凍干燥儀中冷凍干燥，條件為-4(TC到-35°C、12-15Pa、28-32h，得到黃褐色稍有粘性的物質(zhì)GTF活性提取物。實施例8:GTF活性提取物的制備稱取30gDEAE-23纖維素樹脂(二乙基氨基乙基纖維素)干粉，加入到約160ml的0.2麗a0H溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.6小時后，用蒸餾水洗脫，直到洗到中性為止，再加入到160體積份的0.2NHCL溶液中，用同樣方法洗到中性;取Dowex50WX8樹脂(732強酸性陽離子樹脂)的處理同DEAE-23纖維素樹脂；稱取20g的富鉻酵母粉，配制體積比為1:1的正丁醇-水混合物400ml,將酵母粉加入上述混合液中，攪拌3小時，靜置20h，取水相中的上清液在6(TC下真空濃縮;將濃縮液分別加入2倍體積份的蒸餾水中進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將透析液加入DEAE-23纖維素層析柱中過柱分離，用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過Dowex50WX8樹脂柱分離，用0.25MNH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至粘稠狀(剩余10體積份)，放入真空冷凍干燥儀中冷凍干燥，條件為-40"C到-35°C、12-15Pa、28-32h，得到黃褐色稍有粘性的物質(zhì)GTF活性提取物。實施例9:GTF活性提取物的制備GTF活性提取物的制備工藝為稱取30gDEAE-23纖維素樹脂(二乙基氨基乙基纖維素)干粉，加入到約140ml的0.2NNaOH溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.5小時后，用蒸餾水洗脫，直到洗到中性為止，再加入到140體積份的0.2NHCL溶液中，用同樣方法洗到中性;取Dowex50WX8樹脂(732強酸性陽離子樹脂)的處理同DEAE纖維素-23;稱取40g的富鉻酵母粉，配制體積比為l:1的正丁醇-水混合物800ml，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌4小時，靜置20h，取水相中的上清液在5(TC下真空濃縮；將濃縮液分別加入2倍體積份的蒸餾水中進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將透析液加入DEAE-23纖維素層析柱中過柱分離，用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過Dowex50WX8樹脂柱分離，用0.25MNH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至粘稠狀(剩余30體積份)，放入真空冷凍干燥儀中冷凍干燥，條件為-4(TC到-35t:、12-15Pa、28-32h，得到黃褐色稍有粘性的物質(zhì)GTF活性提取物。實施例10:膠囊劑的制備取GTF活性提取物47g分別與甲殼素33g、糊精20g混合，即得到100g含有GTF活性提取物活性成分的干藥粉，將制得的藥粉按照常規(guī)方法制成膠囊每粒0.2g，每日一次，每次一粒。實施例11:片劑的制備取GTF活性提取物17g分別與甲殼素53g、糊精30g混合，即得到lOOg含GTF活性提取物活性成分的干藥粉，將制得的藥粉按照常規(guī)方法制成片劑。每片0.5g，每日一次，每次一片。實施例12:口服液的制備取GTF活性提取物0.9g，溶解在91ml純凈水中，按照常規(guī)方法制成口服液，每支10ml，每日一次，每次一支。實施例13:滴丸的制備取GTF活性提取物47g分別與甲殼素33g、糊精20g混合，即得到100g含有GTF活性提取物活性成分的干藥粉，將制得的藥粉按照常規(guī)方法制成滴丸權(quán)利要求1、一種含有GTF活性提取物的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料組成為GTF活性提取物10—50重量份、甲殼素30—60重量份、糊精20—35重量份。2、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，組成為GTF活性提取物30—47重量份、_27重量份。其特征在于該藥物組合物的原料甲殼素33—43重量份、糊精203、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，組成為GTF活性提取物24—34重量份、_29重量份。其特征在于該藥物組合物的原料甲殼素41一47重量份、糊精254、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，組成為GTF活性提取物12—17重量份、一33重量份。其特征在于該藥物組合物的原料甲殼素53—55重量份、糊精305、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料組成為GTF活性提取物47重量份、甲殼素33重量份、糊精20重量份。6、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料組成為GTF活性提取物35重量份、甲殼素40重量份、糊精25重量份。7、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料組成為GTF活性提取物17重量份、甲殼素53重量份、糊精30重量份。8、如權(quán)利要求1-7任一所述的藥物組合物，其特征在于該組合物按照常規(guī)工藝，制成臨床接受的片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液體制劑、滴丸或注射劑。9、如權(quán)利要求1-7任一所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物中GTF活性提取物由如下方法制成稱取20-40重量份弱堿性離子交換樹脂干粉，先加入到130-170體積份的0.2-1當(dāng)量NaOH溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.5-1.0小時后，用蒸餾水洗脫，洗至中性，再加入到130—170體積份的0.2-2當(dāng)量HCL溶液中，同樣方法洗至中性；取強酸性陽離子樹脂干粉20-40重量份，處理方法同弱堿性離子交換樹脂干粉；稱取20-40重量份的富鉻酵母粉，配制體積比為0.5-1.5:0.5-1.5的正丁醇-水混合液400-800體積份，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌2-4小時，靜置12-20小時，取水相中的上清液在5(TC-6(TC下真空濃縮；將濃縮液加入2-4倍體積份的蒸餾水進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將濃縮后的透析液加入弱堿性離子交換樹脂層析柱中過柱分離，并用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過強酸性陽離子樹脂柱分離，用0.25摩爾NH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至剩余體積為10-30體積份，冷凍干燥，得到GTF活性提取物。10、如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于其中冷凍干燥的冷凍條件是溫度為-4(TC到-35°C、壓強為12-15Pa、時間為28-32h。11、如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于其中弱堿性離子交換樹脂是指DEAE-23、DEAE-ll、DEAE-22、DEAE-23、DEAE-32或DEAE51-53型號的纖維素樹脂；強酸性陽離子樹脂是指Dowex50W-X8Dowex50W-X2、X4、X8、X12型號的樹脂。12、如權(quán)利要求10或11所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物中GTF活性提取物由如下方法制成稱取30重量份DEAE-23纖維素樹脂干粉，先加入到約150體積份的0.2當(dāng)量NaOH溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.6小時后，用蒸餾水洗脫，直到洗到中性為止，再加入到150體積份的0.2當(dāng)量HCL溶液中，同樣方法洗至中性；取Dowex50W-X8樹脂，其處理方法同DEAE-23纖維素樹脂；稱取30重量份的富鉻酵母粉，配制體積比為l:1的正丁醇-水混合物600體積份，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌3小時，靜置20h，取水相中的上清液在55。C下真空濃縮；將濃縮液分別加入2倍體積份的蒸餾水進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將透析液加入DEAE-23纖維素樹脂層析柱中過柱分離，用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過Dowex50WX8陽離子樹脂柱分離，用0.25摩爾NH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262mn處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至剩余20體積份，放入真空冷凍干燥儀中冷凍干燥，條件為-4(TC到-35°C、12-15Pa、28_32h，得到黃褐色粘性的GTF活性提取物。13、如權(quán)利要求l、2、3、4、5、6、7、10或11所述的藥物組合物，其特征在于其中所述GTF活性提取物中活性鉻含量不小于1360mg/Kg。14、如權(quán)利要求l、2、3、4、5、6、7、10或11所述的藥物組合物在制備治療糖耐量低下、糖尿病或高脂血癥的藥物中的應(yīng)用。15、如權(quán)利要求12所述的藥物組合物在制備治療糖耐量低下、糖尿病或高脂血癥的藥物中的應(yīng)用。16、一種GTF活性提取物的制備方法，其特征在于該方法為稱取20-40重量份弱堿性離子交換樹脂干粉，先加入到130-170體積份的0.2-1當(dāng)量NaOH溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.5-l.O小時后，用蒸餾水洗脫，洗至中性，再加入到130—170體積份的0.2-2當(dāng)量HCL溶液中，同樣方法洗至中性；取強酸性陽離子樹脂干粉20-40重量份，處理方法同弱堿性離子交換樹脂干粉；稱取20-40重量份的富鉻酵母粉，配制體積比為0.5-1.5:0.5-1.5的正丁醇-水混合液400-800體積份，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌2-4小時，靜置12-20小時，取水相中的上清液在5(TC-6(TC下真空濃縮；將濃縮液加入2-4倍體積份的蒸餾水進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將濃縮后的透析液加入弱堿性離子交換樹脂層析柱中過柱分離，并用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過強酸性陽離子樹脂柱分離，用0.25摩爾NH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至剩余體積為10-30體積份，冷凍干燥，得到GTF活性提取物，GTF活性提取物中活性鉻含量不小于1360mg/Kg。17、如權(quán)利要求16所述的GTF活性提取物的制備方法，其特征在于該方法為稱取20-40重量份弱堿性離子交換樹脂干粉，先加入到130-170體積份的0.2-1當(dāng)量NaOH溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.5-1.0小時后，用蒸餾水洗脫，洗至中性，再加入到130—170體積份的0.2-2當(dāng)量HCL溶液中，同樣方法洗至中性；取強酸性陽離子樹脂千粉20-40重量份，處理方法同弱堿性離子交換樹脂干粉；稱取20-40重量份的富鉻酵母粉，配制體積比為0.5-1.5:0.5-1.5的正丁醇-水混合液400-800體積份，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌2-4小時，靜置12-20小時，取水相中的上清液在5(TC-60℃下真空濃縮；將濃縮液加入2-4倍體積份的蒸餾水進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將濃縮后的透析液加入弱堿性離子交換樹脂層析柱中過柱分離，并用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過強酸性陽離子樹脂柱分離，用0.25摩爾NH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至剩余體積為10-30體積份，冷凍干燥，得到GTF活性提取物，GTF活性提取物中活性鉻含量不小于1360mg/Kg。18、如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物中GTF活性提取物由如下方法制成稱取30重量份DEAE-23纖維素樹脂干粉，先加入到約150體積份的0.2當(dāng)量NaOH溶液中，邊加邊攪拌，放置燒杯中浸泡0.6小時后，用蒸餾水洗脫，直到洗到中性為止，再加入到150體積份的0.2當(dāng)量HCL溶液中，同樣方法洗至中性；取Dowex50W-X8樹脂，其處理方法同DEAE-23纖維素樹脂；稱取30重量份的富鉻酵母粉，配制體積比為1:1的正丁醇-水混合物600體積份，將酵母粉加入上述混合液中，攪拌3小時，靜置20h，取水相中的上清液在55。C下真空濃縮；將濃縮液分別加入2倍體積份的蒸餾水進(jìn)行透析，合并透析液，真空濃縮；將透析液加入DEAE-23纖維素樹脂層析柱中過柱分離，用蒸餾水洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，濃縮洗脫液；將濃縮液經(jīng)過Dowex50WX8陽離子樹脂柱分離，用0.25摩爾NH40H洗脫，收集洗脫液直到紫外吸收峰在262nm處沒有吸收為止，將此洗脫液濃縮至剩余20體積份，放入真空冷凍干燥儀中冷凍干燥，條件為-4(TC到-35°C、12-15Pa、28_32h，得到黃褐色粘性的GTF活性提取物。19、如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于其中所述GTF活性提取物中活性鉻含量不小于1360mg/Kg。20、如權(quán)利要求9所述的藥物組合物在制備治療糖耐量低下、糖尿病或高脂血癥的藥物中的應(yīng)用。21、如權(quán)利要求9所述的藥物組合物在制備治療糖耐量低下、糖尿病或高脂血癥的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種含有GTF活性提取物的藥物組合物和制備工藝及其對瘦素、瘦素受體基因表達(dá)調(diào)節(jié)作用的新用途。本發(fā)明藥物組合物的原料由GTF活性提取物、甲殼素組成。本發(fā)明藥物組合物用于制備治療糖耐量低下(IGT)、糖尿病或高脂血癥的藥物。文檔編號A61K31/722GK101120954SQ20061010427公開日2008年2月13日申請日期2006年8月9日優(yōu)先權(quán)日2006年8月9日發(fā)明者儲建順,馮前進(jìn),劉亞明,劉素芬,張肖洪,津李申請人:太原康強藥業(yè)有限公司;張肖洪