專利名稱：貫葉連翹中金絲桃苷和金絲桃素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物活性成分的制備技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及金絲桃苷和金絲桃素藥用活性成分的制備方法。
背景技術(shù)：
研究表明用于清熱解毒、收斂止血、利尿和抑郁治療等藥物中的主要活性成分，是金絲桃素和金絲桃苷。實(shí)踐證明金絲桃苷具有抗過敏、抗炎、解痙、利尿、顯著止咳、降血壓和膽固醇及腫瘤等作用，特別具有鎮(zhèn)痛及保護(hù)心臟的功能，對(duì)預(yù)防糖尿病性白內(nèi)障有促進(jìn)作用等；金絲桃素具有調(diào)節(jié)人體晝夜節(jié)律、改善睡眠、松弛中樞神經(jīng)等功能，對(duì)愛滋病毒、單純皰疹病毒、副流感病毒、牛痘病毒等有抑制作用，有消炎鎮(zhèn)痛作用，還可用于治療C型肝炎及失憶癥、預(yù)防和治療癡呆癥等。因此，制備金絲桃苷和金絲桃素對(duì)預(yù)防和治療人類疾病、保障人體健康有非常重要的作用。
貫葉連翹中的金絲桃苷含量高達(dá)1.257％，金絲桃素的含量為0.03～0.38％，是提取金絲桃苷和金絲桃素的主要原料。我國貫葉連翹主要產(chǎn)于四川、陜西、河北、山東、江西、江蘇等地，分布廣泛、資源豐富，有利于金絲桃苷和金絲桃素的制備。
現(xiàn)有制備金絲桃苷的方法，如2002年10月29日申請的公開號(hào)為CN1493578的中國專利，以干燥的黃蜀葵花粉為原料，經(jīng)親水溶劑提取、柱層析、真空干燥等工藝制成；又如2003年9月3日申請的公開號(hào)為CN123032的中國專利，以吳茱萸藥材為原料，經(jīng)繁雜的工藝制成?，F(xiàn)有制備金絲桃苷的方法，均未利用我國資源豐富的貫葉連翹，金絲桃苷提取率低，產(chǎn)品中金絲桃苷含量較低，生產(chǎn)成本高，在生產(chǎn)中有大量廢液排放，既未綜合利用資源又污染環(huán)境。
現(xiàn)有采用植物貫葉連翹為原料制備金絲桃素的方法有如1998年9月9日申請的公開號(hào)CN1247071的中國專利采用的是加堿溶液煮沸、過濾、乙醇洗脫等工藝；如2002年6月7日申請的公開號(hào)為CN1385412的中國專利采用堿溶液浸泡、煮沸、過濾、干燥、水醇法精制等工藝；如2002年7月18日申請的公開號(hào)為1392128中國專利采用極性有機(jī)溶劑提取、兩相萃取、酸沉等工藝；如2003年7月16日申請的公開號(hào)為CN1473812的中國專利采用機(jī)械榨汁、堿溶液提取等工藝。現(xiàn)有采用植物貫葉連翹制備金絲桃素的方法，只是制備單一的金絲桃素，沒有同時(shí)制備金絲桃苷，未能充分利用我國豐富的貫葉連翹資源，在生產(chǎn)過程中還有大量的廢液排放，污染環(huán)境。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有金絲桃苷和金絲桃素制備方法的不足之處，提供一種貫葉連翹中金絲桃苷和金絲桃素的制備方法。本發(fā)明的特點(diǎn)是用貫葉連翹的果實(shí)為原料，同時(shí)制備金絲桃苷和金絲桃素。因此，本發(fā)明具有充分利用我國豐富的貫葉連翹資源，在生產(chǎn)過程中，重復(fù)利用萃取介質(zhì)、樹脂及溶劑等，產(chǎn)品純度高，可用作深加工的原料，產(chǎn)品收得率高，生產(chǎn)成本較低，廢液排放大為減少，有利于環(huán)境保護(hù)等特點(diǎn)。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種貫葉連翹中金絲桃苷和金絲桃素的制備方法，其特點(diǎn)是用貫葉連翹果實(shí)為原料，同時(shí)制備金絲桃苷和金絲桃素。其制備原理是金絲桃苷又名槲皮素-3-O-β-D毗喃半乳糖苷，田基黃甙，海棠因，槲皮素-3-半乳糖甙，為淡黃色針狀晶體，熔點(diǎn)227℃-230℃，分子式為C21H20O12，分子量為464.37，其結(jié)構(gòu)如下 金絲桃苷是黃酮醇苷化合物，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑中，因此可用這些有機(jī)溶劑提??；溶解于有機(jī)溶劑中的金絲桃苷，可被吸附樹脂吸附，與其它雜質(zhì)實(shí)現(xiàn)部分分離，實(shí)現(xiàn)金絲桃苷的部分純化；在堿性條件下，金絲桃苷帶負(fù)電荷。帶負(fù)電荷的金絲桃苷可與帶正電荷、由表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)和微量水構(gòu)成的反膠束形成靜電相互作用，因而被萃取“增溶”進(jìn)入反膠束中，與其它未帶電荷的雜質(zhì)分離；以水溶液作反萃取劑，破壞反膠束，使“增溶”的金絲桃苷反萃取進(jìn)入水相；將反萃取液真空濃縮及冷凍干燥，即獲得金絲桃苷產(chǎn)品。
金絲桃素，又名金絲桃蒽酮，海帕里辛，化學(xué)名為4，4，5，5，7，7-六羥基-2，2-二甲基-中位-萘并二蒽酮，分子式為C30H16O6；分子量504.43。其結(jié)構(gòu)式如下 二蒽酮類化合物溶于乙醇、甲醇、氯仿、乙醚、苯、石油醚、吡啶、丙酮、硫酸溶液、鹽酸溶液及氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化銨等溶液?？捎眠@些溶劑提取。
使用反膠束分離金絲桃苷時(shí)，由于金絲桃素分子不帶電荷且分子體積大，不能與反膠束形成靜電相互作用，因此，與金絲桃苷分離。用特種吸附樹脂對(duì)金絲桃素進(jìn)行選擇性吸附，然后洗脫，可進(jìn)一步純化金絲桃素。
一種貫葉連翹中金絲桃苷和金絲桃素的制備方法，其具體的方法步驟如下(1)連翹浸膏的制備將貫葉連翹果實(shí)粉碎成連翹粉后，按連翹粉重量與85～95％的乙醇體積的比為1∶10～20的比例，在連翹粉中加85～95％的乙醇，在70～85℃溫度下，回流提取4～6小時(shí)，再進(jìn)行過濾，收集濾液，對(duì)濾渣，按濾渣重量與70～80％的乙醇體積的比為1∶5～10的比例，用70～80％的乙醇再進(jìn)行回流提取2～3小時(shí)后，再過濾并收集濾液，棄濾渣。然后，將兩次收集的濾液放置于蒸發(fā)器中，在-0.08～-0.05MPa真空下濃縮成貫葉連翹浸膏并回收的乙醇。對(duì)回收蒸餾的乙醇用酒精度計(jì)測定其中乙醇濃度，再用無水乙醇調(diào)節(jié)成乙醇濃度為85～90％的溶液，再次用于制備連翹浸膏。
(2)金絲桃苷濃縮液的制備①洗滌在第(1)步制備的連翹浸膏中，加入乙醚攪拌洗滌，溶解連翹浸膏中的脂類物質(zhì)，再進(jìn)行離心分離；分別收集脫脂連翹浸膏和乙醚洗滌液。對(duì)脫脂連翹浸膏再次進(jìn)行乙醚攪拌洗滌及再分離，如此反復(fù)進(jìn)行2～4次，制備出脫脂連翹浸膏。每次加入的乙醚洗滌液，按連翹浸膏的重量與乙醚的體積的比例為1∶3～5。對(duì)每次收集的乙醚洗滌液，合并后用于制備金絲桃素，對(duì)制備出脫脂連翹浸膏，用于下一步提取吸附金絲桃苷。
②吸附對(duì)第(2)-①步制備的脫脂連翹浸膏，在帶攪拌器的液體回流裝置中，用沸騰蒸餾水重復(fù)進(jìn)行2～4次攪拌提取，每次提取時(shí)間為15～30分鐘，收集金絲桃苷提取液。然后，將每次收集的金絲桃苷提取液合并后，待其溫度降至40～50℃時(shí)，按吸附樹脂重量與金絲桃苷提取液體積比為1∶15～25的比例，在金絲桃苷提取液中，加入吸附樹脂如HPD600或HZ-841，攪拌吸附30～60分鐘，棄濾液后制備出吸附有金絲桃苷的HPD600或HZ-841吸附樹脂。
③洗脫對(duì)第(2)-②步制備出的吸附有金絲桃苷的HPD600或HZ-841吸附樹脂，用4～6倍重量的蒸餾水進(jìn)行洗滌后，再按吸附有金絲桃苷的HPD600或HZ-841吸附樹脂重量與70～80％乙醇的體積比為1∶10～15的比例，用70～80％的乙醇進(jìn)行攪拌洗脫，攪拌洗脫時(shí)間為30～45分鐘，再進(jìn)行過濾，并分別收集濾液和濾渣，其濾渣為洗脫金絲桃苷后的HPD600或HZ-841吸附樹脂。對(duì)吸附樹脂，再按吸附樹脂重量與70～80％乙醇的體積比為1∶10～15的比例，用70～80％的乙醇再次進(jìn)行攪拌洗脫，再次進(jìn)行過濾，再次分別收集濾液和濾渣，如此重復(fù)2～4次。最后對(duì)進(jìn)行了2～4次攪拌洗滌后的吸附樹脂濾渣進(jìn)行再生。每次收集的濾液均為金絲桃苷溶液，對(duì)每次收集的金絲桃苷溶液合并后進(jìn)行下一步的真空濃縮。
④濃縮對(duì)第(2)-③步收集并合并的金絲桃苷溶液，在真空濃縮器中、在-0.08～-0.05MPa下進(jìn)行真空濃縮，待濃縮成膏狀后，再用pH值為8.50～9.0的蒸餾水溶解，然后進(jìn)行過濾除去雜質(zhì)，制備出金絲桃苷濃度為2.31～2.80％的金絲桃苷濃縮液。
⑤吸附樹脂再生將第(2)-③步收集的洗脫金絲桃苷后的HPD600或HZ-841吸附樹脂，先用重量為10～15倍的、pH值為5～6的水溶液攪拌洗滌再生，攪拌洗滌時(shí)間為30～60分鐘，后進(jìn)行過濾，棄濾液，收集再生吸附樹脂濾渣，可再次用于處理金絲桃苷提取液。
(3)萃取劑的制備按十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)陽離子表面活性劑重量∶正辛烷體積∶正庚烷體積∶蒸餾水體積為1∶27～54∶3～6∶0.3～0.6的比例，在CTAB陽離子表面活性劑中，先加入正辛烷和正庚烷，加熱攪拌，其加熱溫度為40～60℃，后加入蒸餾水，繼續(xù)攪拌至透明狀，就制備出CTAB濃度為0.05～0.1mol/L的CTAB反膠束萃取劑。
(4)萃取分離①萃取分離在第(2)-④步制備的金絲桃苷濃縮液中，加入第(3)步制備的CTAB反膠束萃取劑，其金絲桃苷濃縮液∶CTAB反膠束萃取劑的體積比為1∶3～5，混合后，在轉(zhuǎn)速為200～300轉(zhuǎn)/分的低轉(zhuǎn)速下攪拌萃取1～1.5小時(shí)，然后用離心機(jī)在6500～8000轉(zhuǎn)/分的高轉(zhuǎn)速下，離心分離10～20分鐘，混合液分離為明顯的上、下兩相，分別收集上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液及下相金絲桃苷第一次萃余溶液。
②再萃取分離在第(4)-①步收集的下相金絲桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制備的CTAB反膠束萃取劑，其金絲桃苷第一次萃余溶液體積∶CTAB反膠束萃取劑的體積比為1∶1～3，混合后，在轉(zhuǎn)速為200～300轉(zhuǎn)/分的低轉(zhuǎn)速下，再次攪拌萃取1～1.5小時(shí)，然后再用離心機(jī)在6500～8000轉(zhuǎn)/分的高速下，再次離心分離10～20分鐘，混合液分離為明顯的上、下兩相，再次收集上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液及下相金絲桃苷第二次萃余溶液。下相金絲桃苷第二次萃余溶液用于制備金絲桃素。
(5)金絲桃苷凍干粉的制備①水反萃取分離在第(4)-①和②步兩次收集的上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液中，按水與萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液的體積比為1∶1～3，加入水溶液反萃取劑并混合，先在轉(zhuǎn)速為200～300轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行攪拌反萃取15～30分鐘，后用離心機(jī)在6500～8000轉(zhuǎn)/分的高速下，離心分離30～60分鐘，混合液明顯分為上、下兩相，分別收集上相反萃取后的反膠束萃取液及下相反萃取后的金絲桃苷溶液，對(duì)上相反萃取后的反膠束萃取液進(jìn)行再生。
②濃縮凍干對(duì)第(5)-①步收集的下相反萃取后的金絲桃苷溶液，先用蒸發(fā)器在-0.08～-0.05MPa真空進(jìn)行濃縮，后用凍干機(jī)在-50～-60℃低溫下，凍成金絲桃苷含量為83.6～87.3％、水份≤7.26～8.76％、灰分≤0.44～8.94％的金絲桃苷凍干粉。
③反膠束萃取液再生對(duì)第(5)-①步收集的上相反萃取后的反膠束萃取液，按0.2～0.5mol/L碘化鉀(KI)溶液與反膠束萃取液的體積比為1∶100～150的比例加入0.2～0.5mol/LKI溶液混合，在轉(zhuǎn)速為200～300轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，進(jìn)行攪拌處理30～60分鐘，然后在4000～6000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速下，離心分離15～30分鐘，分別收集上、下層溶液，收集的上層反膠束萃取液，可再次用于萃取金絲桃苷溶液，節(jié)約反膠束資源；收集的下層的KI溶液，補(bǔ)充適量的KI，使其濃度為0.2～0.5mol/L，可再次用作反膠束萃取液再生。
(6)金絲桃素凍干粉的制備①吸附洗滌對(duì)第(2)-①步收集合并的乙醚洗滌液，用溫度為50～65℃的水蒸汽蒸餾回收乙醚后，制備出金絲桃素浸膏。然后用0.5～1％NaHCO3水溶液溶解金絲桃素浸膏，制備出含金絲桃素的NaHCO3水溶液，金絲桃素浸膏重量與0.5～1％NaHCO3水溶液體積的比例為1∶15～25。將制備出的含金絲桃素的NaHCO3水溶液與第(4)-②步收集的下相金絲桃苷第二次萃余溶液合并為金絲桃素溶液，然后在金絲桃素溶液中加入非極性吸附樹脂(如HPD100或HPD200等)，在轉(zhuǎn)速為200～300轉(zhuǎn)/分的速度下，進(jìn)行攪拌吸附，攪拌吸附的時(shí)間為1～2小時(shí)，非極性吸附樹脂重量與金絲桃素溶液的體積比例為1∶10～15。然后過濾除去濾液后，收集吸附有金絲桃素的吸附樹脂，再用pH值為8.50～9.50、濃度為90～95％的乙醇，在200～300轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢杷俣认逻M(jìn)行攪拌洗脫，攪拌洗脫時(shí)間為30～60分鐘，過濾，分別收集洗脫液濾液和吸附樹脂濾渣，對(duì)收集的吸附樹脂濾渣，再次用90～95％的乙醇進(jìn)行攪拌洗脫，吸附樹脂重量與乙醇體積的比例均為1∶10～15，再次過濾并分別收集濾液和濾渣，如此反復(fù)進(jìn)行2～4次。各次收集的洗脫液濾液合并后稱為金絲桃素純化溶液，對(duì)金絲桃素純化溶液進(jìn)行下一步濃縮凍干；對(duì)進(jìn)行了2～4次洗脫金絲桃素后的吸附樹脂濾渣，進(jìn)行再生處理。
②濃縮凍干對(duì)第(6)-①步收集的金絲桃素純化溶液，先用蒸發(fā)器在-0.08～-0.05Mpa的真空下，回收乙醇，濃縮成膏狀金絲桃素，然后用0.5～1％的NaHCO3水溶液對(duì)膏狀金絲桃素進(jìn)行溶解，溶解成為金絲桃素NaHCO3水溶液，膏狀金絲桃素重量與0.5～1％NaHCO3水溶液體積的比例為1∶20～30。對(duì)金絲桃素的NaHCO3水溶液，再進(jìn)行過濾除去雜質(zhì)，對(duì)其濾液用凍干機(jī)，在-50～-60℃的低溫下凍成金絲桃素含量為22.82～26.35％的金絲桃素凍干粉。
③吸附樹脂再生對(duì)第(6)-①步收集的洗脫金絲桃素的HPD100或HPD200吸附樹脂，用pH值為5～6的水溶液攪拌洗滌，再進(jìn)行過濾分離。棄濾液，收集吸附樹脂濾渣，對(duì)收集的吸附樹脂再次用pH值為5～6的水溶液攪拌洗滌，再次過濾并收集吸附樹脂，如此反復(fù)進(jìn)行2～4次，吸附樹脂重量與pH值為5～6的水溶液體積的比例每次均為1∶10～20，每次攪拌洗滌的時(shí)間為30～60分鐘。對(duì)經(jīng)過2～4次攪拌洗滌后的吸附樹脂濾渣，可再次使用。
本發(fā)明采用上述技術(shù)方案后，主要具有以下特點(diǎn)1.從貫葉連翹果實(shí)中，同時(shí)提制備出金絲桃苷和金絲桃素兩種藥用活性成分；綜合利用了我國豐富的貫葉連翹資源；2.制備出產(chǎn)品的總收得率和產(chǎn)品純度均高，分別是金絲桃苷產(chǎn)品的總收得率為90.1～93.6％，產(chǎn)品純度83.6～87.3％；金絲桃素產(chǎn)品的總收得率為85.7～91.5％產(chǎn)品純度22.83％～29.63％，生產(chǎn)成本低；3.在生產(chǎn)過程中，實(shí)現(xiàn)了多種溶劑如乙醇、乙醚的回收和再次反復(fù)使用；實(shí)現(xiàn)反膠束萃取劑及吸附樹脂的再生和反復(fù)使用，充分利用資源，減少廢液排放，有利于環(huán)境保護(hù)。
采用本發(fā)明方法制備出的藥用活性產(chǎn)品，為自然植物的綠色產(chǎn)品，可廣泛應(yīng)用于清熱解毒、收斂止血、利尿和抑郁治療等藥物中，對(duì)預(yù)防和治療人類疾病，保障人體健康有非常重要的作用。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
，進(jìn)一步說明本發(fā)明。
實(shí)施例1一種貫葉連翹中金絲桃苷和金絲桃素的制備方法，其具體的方法步驟如下(1)連翹浸膏的制備將貫葉連翹果實(shí)粉碎成連翹粉后，按連翹粉重量與85％的乙醇體積的比為1∶10的比例，在連翹粉中加85％的乙醇，在70℃溫度下，回流提取4小時(shí)，再進(jìn)行過濾，收集濾液。對(duì)濾渣，按濾渣重量與70％的乙醇體積的比為1∶5的比例，用70％的乙醇再進(jìn)行回流提取2小時(shí)后，再過濾并收集濾液，棄濾渣，然后，將兩次收集的濾液放置于蒸發(fā)器中，在-0.08MPa真空下濃縮成貫葉連翹浸膏并回收的乙醇。對(duì)回收蒸餾的乙醇用酒精度計(jì)測定其中乙醇濃度，再用無水乙醇調(diào)節(jié)成乙醇濃度為85％的溶液，再次用于制備連翹浸膏。
(2)金絲桃苷濃縮液的制備①洗滌在第(1)步制備的連翹浸膏中，加入乙醚攪拌洗滌，溶解連翹浸膏中的脂類物質(zhì)，再進(jìn)行離心分離；分別收集脫脂連翹浸膏和乙醚洗滌液。對(duì)脫脂連翹浸膏再次進(jìn)行乙醚攪拌洗滌及再分離，如此反復(fù)進(jìn)行2次，制備出脫脂連翹浸膏。每次加入的乙醚洗滌液，按連翹浸膏的重量與乙醚的體積的比例為1∶3。對(duì)每次收集的乙醚洗滌液，合并后用于制備金絲桃素，對(duì)制備出脫脂連翹浸膏，用于下一步提取吸附金絲桃苷。
②吸附對(duì)第(2)-①步制備的脫脂連翹浸膏，在帶攪拌器的液體回流裝置中，用沸騰蒸餾水重復(fù)進(jìn)行2次攪拌提取，每次提取時(shí)間為15分鐘，收集金絲桃苷提取液。然后，將每次收集的金絲桃苷提取液合并后，待其溫度降至40℃時(shí)，按吸附樹脂重量與金絲桃苷提取液體積比為1∶15的比例，在金絲桃苷提取液中，加入吸附樹脂如HPD600，攪拌吸附30分鐘，棄濾液后制備出吸附有金絲桃苷的HPD600吸附樹脂。
③洗脫對(duì)第(2)-②步制備出的吸附有金絲桃苷的HPD600吸附樹脂，用4倍重量的蒸餾水進(jìn)行洗滌后，再按吸附有金絲桃苷的HPD600吸附樹脂重量與70％乙醇的體積比為1∶10的比例，用70％的乙醇進(jìn)行攪拌洗脫，攪拌洗脫時(shí)間為30分鐘，再進(jìn)行過濾，并分別收集濾液和濾渣，其濾渣為洗脫金絲桃苷后的HPD600吸附樹脂。對(duì)吸附樹脂，再按吸附樹脂重量與70％乙醇的體積比為1∶10的比例，用70％的乙醇再次進(jìn)行攪拌洗脫，再次進(jìn)行過濾，再次分別收集濾液和濾渣。最后對(duì)進(jìn)行了2次攪拌洗滌后的吸附樹脂濾渣進(jìn)行再生。2次收集的濾液均為金絲桃苷溶液，對(duì)2次收集的金絲桃苷溶液合并后進(jìn)行下一步的真空濃縮。
④濃縮對(duì)第(2)-③步收集并合并的金絲桃苷溶液，在真空濃縮器中、在-0.08MPa下進(jìn)行真空濃縮，待濃縮成膏狀后，再用pH值為8.50的蒸餾水溶解，然后進(jìn)行過濾除去雜質(zhì)，制備出金絲桃苷濃度為2.31％的金絲桃苷濃縮液。
⑤吸附樹脂再生將第(2)-③步收集的洗脫金絲桃苷后的HPD600吸附樹脂，先用重量為10倍的、pH值為5的水溶液攪拌洗滌再生，攪拌洗滌時(shí)間為30分鐘，后進(jìn)行過濾，棄濾液，收集再生吸附樹脂濾渣，可再次用于處理金絲桃苷提取液。
(3)萃取劑的制備按十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)陽離子表面活性劑重量∶正辛烷體積∶正庚烷體積∶蒸餾水體積為1∶54∶6∶0.6的比例，在CTAB陽離子表面活性劑中，先加入正辛烷和正庚烷，加熱攪拌，其加熱溫度為40℃，后加入蒸餾水，繼續(xù)攪拌至透明狀，就制備出CTAB濃度為0.05mol/L的CTAB反膠束萃取劑。
(4)萃取分離①萃取分離在第(2)-④步制備的金絲桃苷濃縮液中，加入第(3)步制備的CTAB反膠束萃取劑，其金絲桃苷濃縮液∶CTAB反膠束萃取劑的體積比為1∶3，混合后，在轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下攪拌萃取1小時(shí)，然后用離心機(jī)在6500轉(zhuǎn)/分的高轉(zhuǎn)速下，離心分離10分鐘，混合液分離為明顯的上、下兩相，分別收集上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液及下相金絲桃苷第一次萃余溶液；②再萃取分離在第(4)-①步收集的下相金絲桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制備的CTAB反膠束萃取劑，其金絲桃苷第一次萃余溶液體積∶CTAB反膠束萃取劑的體積比為1∶1，混合后，在轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分的低轉(zhuǎn)速下，再次攪拌萃取1小時(shí)，然后再用離心機(jī)在6500轉(zhuǎn)/分的高速下，再次離心分離10分鐘，混合液分離為明顯的上、下兩相，再次收集上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液及下相金絲桃苷第二次萃余溶液。下相金絲桃苷第二次萃余溶液用于制備金絲桃素。
(5)金絲桃苷凍干粉的制備①水反萃取分離在第(4)-①和②步兩次收集的上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液中，按水與萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液的體積比為1∶1，加入水溶液反萃取劑并混合，先在轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分的低速下進(jìn)行攪拌反萃取15分鐘，后用離心機(jī)在6500轉(zhuǎn)/分的高速下，離心分離30分鐘，混合液明顯分為上、下兩相，分別收集上相反萃取后的反膠束萃取液及下相反萃取后的金絲桃苷溶液，對(duì)上相反萃取后的反膠束萃取液進(jìn)行再生。
②濃縮凍干對(duì)第(5)-①步收集的下相反萃取后的金絲桃苷溶液，先用蒸發(fā)器在-0.08MPa真空進(jìn)行濃縮，后用凍干機(jī)在-50℃低溫下，凍成金絲桃苷含量為83.6％、水份≤7.26％、灰分≤0.44％的金絲桃苷凍干粉；
③反膠束萃取液再生對(duì)第(5)-①步收集的上相反萃取后的反膠束萃取液，按0.2mol/L碘化鉀(KI)溶液與反膠束萃取液的體積比為1∶100的比例加入0.2mol/L KI溶液混合，在轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，進(jìn)行攪拌處理30分鐘，然后在4000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速下，離心分離15分鐘，分別收集上、下層溶液，收集的上層反膠束萃取液，可再次用于萃取金絲桃苷溶液，節(jié)約反膠束資源；收集的下層的KI溶液，補(bǔ)充適量的KI，使其濃度為0.2mol/L，可再次用作反膠束萃取液再生。
(6)金絲桃素凍干粉的制備①吸附洗滌對(duì)第(2)-①步收集合并的乙醚洗滌液，用溫度為50℃的水蒸汽蒸餾回收乙醚后，制備出金絲桃素浸膏。然后用0.5％NaHCO3水溶液溶解金絲桃素浸膏，制備出含金絲桃素的NaHCO3水溶液，金絲桃素浸膏重量與0.5％NaHCO3水溶液體積的比例為1∶15。將制備出的含金絲桃素的NaHCO3水溶液與第(4)-②步收集的下相金絲桃苷第二次萃余溶液合并為金絲桃素溶液，然后在金絲桃素溶液中加入非極性吸附樹脂HPD100，在轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分速度下，進(jìn)行攪拌吸附，攪拌吸附的時(shí)間為1小時(shí)，非極性吸附樹脂重量與金絲桃素溶液的體積比例為1∶10。然后過濾除去濾液后，收集吸附有金絲桃素的吸附樹脂，再用pH值為8.50、濃度為90％的乙醇，在200轉(zhuǎn)/分的攪拌速度下進(jìn)行攪拌洗脫，攪拌洗脫時(shí)間為30分鐘，過濾，分別收集洗脫液濾液和吸附樹脂濾渣，對(duì)收集的吸附樹脂濾渣，再次用90％的乙醇進(jìn)行攪拌洗脫，吸附樹脂重量與乙醇體積的比例均為1∶10，再次過濾并分別收集濾液和濾渣。2次收集的洗脫液濾液合并后稱為金絲桃素純化溶液，對(duì)金絲桃素純化溶液進(jìn)行下一步濃縮凍干；對(duì)進(jìn)行了2次洗脫金絲桃素后的吸附樹脂濾渣，進(jìn)行再生處理。
②濃縮凍干對(duì)第(6)-①步收集的金絲桃素純化溶液，先用蒸發(fā)器在-0.08Mpa的真空下，回收乙醇，濃縮成膏狀金絲桃素，然后用0.5％的NaHCO3水溶液對(duì)膏狀金絲桃素進(jìn)行溶解，溶解成為金絲桃素NaHCO3水溶液，膏狀金絲桃素重量與0.5％NaHCO3水溶液體積的比例為1∶20。對(duì)金絲桃素的NaHCO3水溶液，再進(jìn)行過濾除去雜質(zhì)，對(duì)其濾液用凍干機(jī)，在-50℃的低溫下凍成金絲桃素含量為22.82％的金絲桃素凍干粉。
③吸附樹脂再生對(duì)第(6)-①步收集的洗脫金絲桃素的HPD100吸附樹脂，用pH值為5的水溶液攪拌洗滌，再進(jìn)行過濾分離。棄濾液，收集吸附樹脂濾渣，對(duì)收集的吸附樹脂再次用pH值為5的水溶液攪拌洗滌，再次過濾并收集吸附樹脂，如此反復(fù)進(jìn)行2次，吸附樹脂重量與pH值為5的水溶液體積的比例每次均為1∶10，每次攪拌洗滌的時(shí)間為30分鐘。對(duì)經(jīng)過2次攪拌洗滌后的吸附樹脂濾渣，可再次使用。
實(shí)施例2一種貫葉連翹中金絲桃苷和金絲桃素的制備方法，其具體的方法步驟如下(1)連翹浸膏的制備將貫葉連翹果實(shí)粉碎成連翹粉后，按連翹粉重量與95％的乙醇體積的比為1∶20的比例，在連翹粉中加95％的乙醇，在85℃溫度下，回流提取6小時(shí)，再進(jìn)行過濾，收集濾液。對(duì)濾渣，按濾渣重量與80％的乙醇體積的比為1∶10的比例，用80％的乙醇再進(jìn)行回流提取3小時(shí)后，再過濾并收集濾液，棄濾渣。然后，將兩次收集的濾液放置于蒸發(fā)器中，在-0.05MPa真空下濃縮成貫葉連翹浸膏并回收的乙醇。對(duì)回收蒸餾的乙醇用酒精度計(jì)測定其中乙醇濃度，再用無水乙醇調(diào)節(jié)成乙醇濃度為90％的溶液，再次用于制備連翹浸膏。
(2)金絲桃苷濃縮液的制備①洗滌在第(1)步制備的連翹浸膏中，加入乙醚攪拌洗滌，溶解連翹浸膏中的脂類物質(zhì)，再進(jìn)行離心分離；分別收集脫脂連翹浸膏和乙醚洗滌液。對(duì)脫脂連翹浸膏再次進(jìn)行乙醚攪拌洗滌及再分離，如此反復(fù)進(jìn)行4次，制備出脫脂連翹浸膏。每次加入的乙醚洗滌液，按連翹浸膏的重量與乙醚的體積的比例為1∶5。對(duì)每次收集的乙醚洗滌液，合并后用于制備金絲桃素，對(duì)制備出脫脂連翹浸膏，用于下一步提取吸附金絲桃苷。
②吸附對(duì)第(2)-①步制備的脫脂連翹浸膏，在帶攪拌器的液體回流裝置中，用沸騰蒸餾水重復(fù)進(jìn)行4次攪拌提取，每次提取時(shí)間為30分鐘，收集金絲桃苷提取液。然后，將每次收集的金絲桃苷提取液合并后，待其溫度降至50℃時(shí)，按吸附樹脂重量與金絲桃苷提取液體積比為1∶25的比例，在金絲桃苷提取液中，加入吸附樹脂如HZ-841，攪拌吸附60分鐘，棄濾液后制備出吸附有金絲桃苷的HZ-841吸附樹脂。
③洗脫對(duì)第(2)-②步制備出的吸附有金絲桃苷的HZ-841吸附樹脂，用6倍重量的蒸餾水進(jìn)行洗滌后，再按吸附有金絲桃苷的HZ-841吸附樹脂重量與80％乙醇的體積比為1∶15的比例，用80％的乙醇進(jìn)行攪拌洗脫，攪拌洗脫時(shí)間為45分鐘，再進(jìn)行過濾，并分別收集濾液和濾渣，其濾渣為洗脫金絲桃苷后的HZ-841吸附樹脂。對(duì)吸附樹脂，再按吸附樹脂重量與80％乙醇的體積比為1∶15的比例，用80％的乙醇再次進(jìn)行攪拌洗脫，再次進(jìn)行過濾，再次分別收集濾液和濾渣，如此重復(fù)4次。最后對(duì)進(jìn)行了4次攪拌洗滌后的吸附樹脂濾渣進(jìn)行再生。4次收集的濾液均為金絲桃苷溶液，對(duì)4次收集的金絲桃苷溶液合并后進(jìn)行下一步的真空濃縮。
④濃縮對(duì)第(2)-③步收集并合并的金絲桃苷溶液，在真空濃縮器中、在-0.05MPa下進(jìn)行真空濃縮，待濃縮成膏狀后，再用pH值為9.0的蒸餾水溶解，然后進(jìn)行過濾除去雜質(zhì)，制備出金絲桃苷濃度為2.80％的金絲桃苷濃縮液。
⑤吸附樹脂再生將第(2)-③步收集的洗脫金絲桃苷后的HZ-841吸附樹脂，先用重量為15倍的、pH值為6的水溶液攪拌洗滌再生，攪拌洗滌時(shí)間為60分鐘，后進(jìn)行過濾，棄濾液，收集再生吸附樹脂濾渣，可再次用于處理金絲桃苷提取液。
(3)萃取劑的制備按十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)陽離子表面活性劑重量∶正辛烷體積∶正庚烷體積∶蒸餾水體積為1∶27∶3∶0.6的比例，在CTAB陽離子表面活性劑中，先加入正辛烷和正庚烷，加熱攪拌，其加熱溫度為60℃，后加入蒸餾水，繼續(xù)攪拌至透明狀，就制備出CTAB濃度為0.1mol/L的CTAB反膠束萃取劑。
(4)萃取分離①萃取分離在第(2)-④步制備的金絲桃苷濃縮液中，加入第(3)步制備的CTAB反膠束萃取劑，其金絲桃苷濃縮液∶CTAB反膠束萃取劑的體積比為1∶5，混合后，在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下攪拌萃取1.5小時(shí)，然后用離心機(jī)在8000轉(zhuǎn)/分的高轉(zhuǎn)速下，離心分離20分鐘，混合液分離為明顯的上、下兩相，分別收集上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液及下相金絲桃苷第一次萃余溶液；②再萃取分離在第(4)-①步收集的下相金絲桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制備的CTAB反膠束萃取劑，其金絲桃苷第一次萃余溶液體積∶CTAB反膠束萃取劑的體積比為1∶3，混合后，在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分的低轉(zhuǎn)速下，再次攪拌萃取1.5小時(shí)，然后再用離心機(jī)在8000轉(zhuǎn)/分的高速下，再次離心分離20分鐘，混合液分離為明顯的上、下兩相，再次收集上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液及下相金絲桃苷第二次萃余溶液。下相金絲桃苷第二次萃余溶液用于制備金絲桃素。
(5)金絲桃苷凍干粉的制備①水反萃取分離在第(4)-①和②步兩次收集的上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液中，按水與萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液的體積比為1∶3，加入水溶液反萃取劑并混合，先在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分的低速下進(jìn)行攪拌反萃取30分鐘，后用離心機(jī)在8000轉(zhuǎn)/分的高速下，離心分離60分鐘，混合液明顯分為上、下兩相，分別收集上相反萃取后的反膠束萃取液及下相反萃取后的金絲桃苷溶液，對(duì)上相反萃取后的反膠束萃取液進(jìn)行再生。
②濃縮凍干對(duì)第(5)-①步收集的下相反萃取后的金絲桃苷溶液，先用蒸發(fā)器在-0.05MPa真空進(jìn)行濃縮，后用凍干機(jī)在-60℃低溫下，凍成金絲桃苷含量為87.3％、水份≤7.26％、灰分≤0.44％的金絲桃苷凍干粉；③反膠束萃取液再生對(duì)第(5)-①步收集的上相反萃取后的反膠束萃取液，按0.5mol/L碘化鉀(KI)溶液與反膠束萃取液的體積比為1∶150的比例加入0.5mol/L KI溶液混合，在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，進(jìn)行攪拌處理60分鐘，然后在6000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速下，離心分離30分鐘，分別收集上、下層溶液，收集的上層反膠束萃取液，可再次用于萃取金絲桃苷溶液，節(jié)約反膠束資源；收集的下層的KI溶液，補(bǔ)充適量的KI，使其濃度為0.5mol/L，可再次用作反膠束萃取液再生。
(6)金絲桃素凍干粉的制備①吸附洗滌對(duì)第(2)-①步收集合并的乙醚洗滌液，用溫度為65℃的水蒸汽蒸餾回收乙醚后，制備出金絲桃素浸膏。然后用1％NaHCO3水溶液溶解金絲桃素浸膏，制備出含金絲桃素的NaHCO3水溶液，金絲桃素浸膏重量與1％NaHCO3水溶液體積的比例為1∶25。將制備出的含金絲桃素的NaHCO3水溶液與第(4)-②步收集的下相金絲桃苷第二次萃余溶液合并為金絲桃素溶液，然后在金絲桃素溶液中加入非極性吸附樹脂HPD200等，在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分速度下，進(jìn)行攪拌吸附，攪拌吸附的時(shí)間為2小時(shí)，非極性吸附樹脂重量與金絲桃素溶液的體積比例為1∶15。然后過濾除去濾液后，收集吸附有金絲桃素的吸附樹脂，再用pH值為9.50、濃度為95％的乙醇，在300轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢杷俣认逻M(jìn)行攪拌洗脫，攪拌洗脫時(shí)間為60分鐘，過濾，分別收集洗脫液濾液和吸附樹脂濾渣，對(duì)收集的吸附樹脂濾渣，再次用95％的乙醇進(jìn)行攪拌洗脫，吸附樹脂重量與乙醇體積的比例均為1∶15，再次過濾并分別收集濾液和濾渣，如此反復(fù)進(jìn)行4次。各次收集的洗脫液濾液合并后稱為金絲桃素純化溶液，對(duì)金絲桃素純化溶液進(jìn)行下一步濃縮凍干；對(duì)進(jìn)行了4次洗脫金絲桃素后的吸附樹脂濾渣，進(jìn)行再生處理。
②濃縮凍干對(duì)第(6)-①步收集的金絲桃素純化溶液，先用蒸發(fā)器在-0.05Mpa的真空下，回收乙醇，濃縮成膏狀金絲桃素，然后用1％的NaHCO3水溶液對(duì)膏狀金絲桃素進(jìn)行溶解，溶解成為金絲桃素NaHCO3水溶液，膏狀金絲桃素重量與0.5～1％NaHCO3水溶液體積的比例為1∶30。對(duì)金絲桃素的NaHCO3水溶液，再進(jìn)行過濾除去雜質(zhì)，對(duì)其濾液用凍干機(jī)，在-60℃的低溫下凍成金絲桃素含量為26.35％的金絲桃素凍干粉。
③吸附樹脂再生對(duì)第(6)-①步收集的洗脫金絲桃素的HPD200吸附樹脂，用pH值為6的水溶液攪拌洗滌，再進(jìn)行過濾分離。棄濾液，收集吸附樹脂濾渣，對(duì)收集的吸附樹脂再次用pH值為6的水溶液攪拌洗滌，再次過濾并收集吸附樹脂，如此反復(fù)進(jìn)行4次，吸附樹脂重量與pH值為6的水溶液體積的比例每次均為1∶20，每次攪拌洗滌的時(shí)間為60分鐘。對(duì)經(jīng)過4次攪拌洗滌后的吸附樹脂濾渣，可再次使用。


附圖是本發(fā)明的工藝流程圖。
權(quán)利要求
1.一種貫葉連翹中金絲桃苷和金絲桃素的制備方法，其特征在于具體的方法步驟如下(1)連翹浸膏的制備將貫葉連翹果實(shí)粉碎成連翹粉后，按連翹粉重量與85～95％的乙醇體積的比為1∶10～20的比例，在連翹粉中加85～95％的乙醇，在70～85℃溫度下，回流提取4～6小時(shí)，再進(jìn)行過濾，收集濾液。對(duì)濾渣，按濾渣重量與70～80％的乙醇體積的比為1∶5～10的比例，用70～80％的乙醇再進(jìn)行回流提取2～3小時(shí)后，再過濾并收集濾液，棄濾渣，然后，將兩次收集的濾液放置于蒸發(fā)器中，在-0.08～-0.05MPa真空下濃縮成貫葉連翹浸膏并回收的乙醇，對(duì)回收蒸餾的乙醇用酒精度計(jì)測定其中乙醇濃度，再用無水乙醇調(diào)節(jié)成乙醇濃度為85～90％的溶液；(2)金絲桃苷濃縮液的制備①洗滌在第(1)步制備的連翹浸膏中，加入乙醚攪拌洗滌，再進(jìn)行離心分離；分別收集脫脂連翹浸膏和乙醚洗滌液，對(duì)脫脂連翹浸膏再次進(jìn)行乙醚攪拌洗滌及再分離，如此反復(fù)進(jìn)行2～4次，每次加入的乙醚洗滌液，按連翹浸膏的重量與乙醚的體積的比例為1∶3～5；②吸附對(duì)第(2)-①步制備的脫脂連翹浸膏，在帶攪拌器的液體回流裝置中，用沸騰蒸餾水重復(fù)進(jìn)行2～4次攪拌提取，每次提取時(shí)間為15～30分鐘，收集金絲桃苷提取液，然后，將每次收集的金絲桃苷提取液合并后，待其溫度降至40～50℃時(shí)，按吸附樹脂重量與金絲桃苷提取液體積比為1∶15～25的比例，在金絲桃苷提取液中，加入HPD600或HZ-841吸附樹脂，攪拌吸附30～60分鐘，棄濾液；③洗脫對(duì)第(2)-②步制備出的吸附有金絲桃苷的HPD600或HZ-841吸附樹脂，用4～6倍重量的蒸餾水進(jìn)行洗滌后，再按吸附有金絲桃苷的HPD600或HZ-841吸附樹脂重量與70～80％乙醇的體積比為1∶10～15的比例，用70～80％的乙醇進(jìn)行攪拌洗脫，攪拌洗脫時(shí)間為30～45分鐘，再進(jìn)行過濾，并分別收集濾液和濾渣，對(duì)收集的洗脫金絲桃苷后的HPD600或HZ-841吸附樹脂濾渣，再按吸附樹脂重量與70～80％乙醇的體積比為1∶10～15的比例，用70～80％的乙醇再次進(jìn)行攪拌洗脫，再次進(jìn)行過濾，再次分別收集濾液和濾渣，如此重復(fù)2～4次；④濃縮對(duì)第(2)-③步收集并合并的金絲桃苷溶液，在真空濃縮器中、在-0.08～-0.05MPa下進(jìn)行真空濃縮，待濃縮成膏狀后，再用pH值為8.50～9.0的蒸餾水溶解，然后進(jìn)行過濾除去雜質(zhì)，制備出金絲桃苷濃度為2.31～2.80％的金絲桃苷濃縮液；⑤吸附樹脂再生將第(2)-③步收集的洗脫金絲桃苷后的HPD600或HZ-841吸附樹脂，先用重量為10～15倍的、pH值為5～6的水溶液攪拌洗滌再生，攪拌洗滌時(shí)間為30～60分鐘，后進(jìn)行過濾，棄濾液，收集再生吸附樹脂濾渣；(3)萃取劑的制備按十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)陽離子表面活性劑重量∶正辛烷體積∶正庚烷體積∶蒸餾水體積為1∶27～54∶3～6∶0.3～0.6的比例，在CTAB陽離子表面活性劑中，先加入正辛烷和正庚烷，加熱攪拌，其加熱溫度為40～60℃，后加入蒸餾水，繼續(xù)攪拌至透明狀，就制備出CTAB濃度為0.05～0.1mol/L的CTAB反膠束萃取劑；(4)萃取分離①萃取分離在第(2)-④步制備的金絲桃苷濃縮液中，加入第(3)步制備的CTAB反膠束萃取劑，其金絲桃苷濃縮液∶CTAB反膠束萃取劑的體積比為1∶3～5，混合后，在轉(zhuǎn)速為200～300轉(zhuǎn)/分的低轉(zhuǎn)速下攪拌萃取1～1.5小時(shí)，然后用離心機(jī)在6500～8000轉(zhuǎn)/分的高轉(zhuǎn)速下，離心分離10～20分鐘，混合液分離為明顯的上、下兩相，分別收集上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液及下相金絲桃苷第一次萃余溶液；②再萃取分離在第(4)-①步收集的下相金絲桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制備的CTAB反膠束萃取劑，其金絲桃苷第一次萃余溶液體積∶CTAB反膠束萃取劑的體積比為1∶1～3，混合后，在轉(zhuǎn)速為200～300轉(zhuǎn)/分的低轉(zhuǎn)速下，再次攪拌萃取1～1.5小時(shí)，然后再用離心機(jī)在6500～8000轉(zhuǎn)/分的高速下，再次離心分離10～20分鐘，混合液分離為明顯的上、下兩相，再次收集上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液及下相金絲桃苷第二次萃余溶液；(5)金絲桃苷凍干粉的制備①水反萃取分離在第(4)-①和②步兩次收集的上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液中，按水與萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液的體積比為1∶1～3，加入水溶液反萃取劑并混合，先在轉(zhuǎn)速為200～300轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行攪拌反萃取15～30分鐘，后用離心機(jī)在6500～8000轉(zhuǎn)/分的高速下，離心分離30～60分鐘，混合液明顯分為上、下兩相，分別收集上相反萃取后的反膠束萃取液及下相反萃取后的金絲桃苷溶液；②濃縮凍干對(duì)第(5)-①步收集的下相反萃取后的金絲桃苷溶液，先用蒸發(fā)器在-0.08～-0.05MPa真空進(jìn)行濃縮，后用凍干機(jī)在-50～-60℃低溫下，凍成金絲桃苷含量為83.6～87.3％、水份≤7.26～8.76％、灰分≤0.44～8.94％的金絲桃苷凍干粉；③反膠束萃取液再生對(duì)第(5)-①步收集的上相反萃取后的反膠束萃取液，按0.2～0.5mol/L碘化鉀溶液與反膠束萃取液的體積比為1∶100～150的比例加入0.2～0.5mol/L KI溶液混合，在轉(zhuǎn)速為200～300轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，進(jìn)行攪拌處理30～60分鐘，然后在4000～6000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速下，離心分離15～30分鐘，分別收集上層反膠束萃取液及下層KI溶液，對(duì)KI溶液，補(bǔ)充適量的KI，使其濃度為0.2～0.5mol/L；(6)金絲桃素凍干粉的制備①吸附洗滌對(duì)第(2)-①步收集合并的乙醚洗滌液，用溫度為50～65℃的水蒸汽蒸餾回收乙醚，然后用0.5～1％NaHCO3水溶液溶解金絲桃素浸膏，金絲桃素浸膏重量與0.5～1％NaHCO3水溶液體積的比例為1∶15～25，將制備出的含金絲桃素的NaHCO3水溶液與第(4)-②步收集的下相金絲桃苷第二次萃余溶液合并為金絲桃素溶液，然后在金絲桃素溶液中加入HPD100或HPD200非極性吸附樹脂，在轉(zhuǎn)速為200～300轉(zhuǎn)/分的速度下，進(jìn)行攪拌吸附，攪拌吸附的時(shí)間為1～2小時(shí)，非極性吸附樹脂重量與金絲桃素溶液的體積比例為1∶10～15，然后過濾除去濾液后，收集吸附有金絲桃素的吸附樹脂，再用pH值為8.50～9.50、濃度為90～95％的乙醇，在200～300轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢杷俣认逻M(jìn)行攪拌洗脫，攪拌洗脫時(shí)間為30～60分鐘，過濾，分別收集洗脫液濾液和吸附樹脂濾渣，對(duì)收集的吸附樹脂濾渣，再次用90～95％的乙醇進(jìn)行攪拌洗脫，吸附樹脂重量與乙醇體積的比例均為1∶10～15，再次過濾并分別收集濾液和濾渣，如此反復(fù)進(jìn)行2～4次；②濃縮凍干對(duì)第(6)-①步收集的金絲桃素純化溶液，先用蒸發(fā)器在-0.08～-0.05Mpa的真空下，回收乙醇，濃縮成膏狀金絲桃素，然后用0.5～1％的NaHCO3水溶液對(duì)膏狀金絲桃素進(jìn)行溶解，溶解成為金絲桃素NaHCO3水溶液，膏狀金絲桃素重量與0.5～1％NaHCO3水溶液體積的比例為1∶20～30，對(duì)金絲桃素的NaHCO3水溶液，再進(jìn)行過濾除去雜質(zhì)，對(duì)其濾液用凍干機(jī)，在-50～-60℃的低溫下凍成金絲桃素含量為22.82～26.35％的金絲桃素凍干粉；③吸附樹脂再生對(duì)第(6)-①步收集的洗脫金絲桃素的HPD100或HPD200吸附樹脂，用pH值為5～6的水溶液攪拌洗滌，再進(jìn)行過濾分離，棄濾液，收集吸附樹脂濾渣，對(duì)收集的吸附樹脂再次用pH值為5～6的水溶液攪拌洗滌，再次過濾并收集吸附樹脂，如此反復(fù)進(jìn)行2～4次，吸附樹脂重量與pH值為5～6的水溶液體積的比例每次均為1∶10～20，每次攪拌洗滌的時(shí)間為30～60分鐘。
2.按照權(quán)利要求1.所述的貫葉連翹中金絲桃苷和金絲桃素的制備方法，其特征在于一種貫葉連翹中金絲桃苷和金絲桃素的制備方法，其具體的方法步驟如下(1)連翹浸膏的制備將貫葉連翹果實(shí)粉碎成連翹粉后，按連翹粉重量與85％的乙醇體積的比為1∶10的比例，在連翹粉中加85％的乙醇，在70℃溫度下，回流提取4小時(shí)，再進(jìn)行過濾，收集濾液，對(duì)濾渣，按濾渣重量與70％的乙醇體積的比為1∶5的比例，用70％的乙醇再進(jìn)行回流提取2小時(shí)后，再過濾并收集濾液，棄濾渣，然后，將兩次收集的濾液放置于蒸發(fā)器中，在-0.08MPa真空下濃縮成貫葉連翹浸膏并回收的乙醇，對(duì)回收蒸餾的乙醇用酒精度計(jì)測定其中乙醇濃度，再用無水乙醇調(diào)節(jié)成乙醇濃度為85％的溶液；(2)金絲桃苷濃縮液的制備①洗滌在第(1)步制備的連翹浸膏中，加入乙醚攪拌洗滌，再進(jìn)行離心分離，分別收集脫脂連翹浸膏和乙醚洗滌液，對(duì)脫脂連翹浸膏再次進(jìn)行乙醚攪拌洗滌及再分離，如此反復(fù)進(jìn)行2次，每次加入的乙醚洗滌液，按連翹浸膏的重量與乙醚的體積的比例為1∶3；②吸附對(duì)第(2)-①步制備的脫脂連翹浸膏，在帶攪拌器的液體回流裝置中，用沸騰蒸餾水重復(fù)進(jìn)行2次攪拌提取，每次提取時(shí)間為15分鐘，收集金絲桃苷提取液，然后，將每次收集的金絲桃苷提取液合并后，待其溫度降至40℃時(shí)，按吸附樹脂重量與金絲桃苷提取液體積比為1∶15的比例，在金絲桃苷提取液中，加入HPD600吸附樹脂，攪拌吸附30分鐘，棄濾液；③洗脫對(duì)第(2)-②步制備出的吸附有金絲桃苷的HPD600吸附樹脂，用4倍重量的蒸餾水進(jìn)行洗滌后，再按吸附有金絲桃苷的HPD600吸附樹脂重量與70％乙醇的體積比為1∶10的比例，用70％的乙醇進(jìn)行攪拌洗脫，攪拌洗脫時(shí)間為30分鐘，再進(jìn)行過濾，并分別收集濾液和濾渣，對(duì)收集的洗脫金絲桃苷后的HPD600吸附樹脂濾渣，再按吸附樹脂重量與70％乙醇的體積比為1∶10的比例，用70％的乙醇再次進(jìn)行攪拌洗脫，再次進(jìn)行過濾，再次分別收集濾液和濾渣；④濃縮對(duì)第(2)-③步收集并合并的金絲桃苷溶液，在真空濃縮器中、在-0.08MPa下進(jìn)行真空濃縮，待濃縮成膏狀后，再用pH值為8.50的蒸餾水溶解，然后進(jìn)行過濾除去雜質(zhì)，制備出金絲桃苷濃度為2.31％的金絲桃苷濃縮液；⑤吸附樹脂再生將第(2)-③步收集的洗脫金絲桃苷后的HPD600吸附樹脂，先用重量為10倍的、pH值為5的水溶液攪拌洗滌再生，攪拌洗滌時(shí)間為30分鐘，后進(jìn)行過濾，棄濾液，收集再生吸附樹脂濾渣；(3)萃取劑的制備按十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)陽離子表面活性劑重量∶正辛烷體積∶正庚烷體積∶蒸餾水體積為1∶54∶6∶0.6的比例，在CTAB陽離子表面活性劑中，先加入正辛烷和正庚烷，加熱攪拌，其加熱溫度為40℃，后加入蒸餾水，繼續(xù)攪拌至透明狀，就制備出CTAB濃度為0.05mol/L的CTAB反膠束萃取劑；(4)萃取分離①萃取分離在第(2)-④步制備的金絲桃苷濃縮液中，加入第(3)步制備的CTAB反膠束萃取劑，其金絲桃苷濃縮液∶CTAB反膠束萃取劑的體積比為1∶3，混合后，在轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下攪拌萃取1小時(shí)，然后用離心機(jī)在6500轉(zhuǎn)/分的高轉(zhuǎn)速下，離心分離10分鐘，混合液分離為明顯的上、下兩相，分別收集上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液及下相金絲桃苷第一次萃余溶液；②再萃取分離在第(4)-①步收集的下相金絲桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制備的CTAB反膠束萃取劑，其金絲桃苷第一次萃余溶液體積∶CTAB反膠束萃取劑的體積比為1∶1，混合后，在轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分的低轉(zhuǎn)速下，再次攪拌萃取1小時(shí)，然后再用離心機(jī)在6500轉(zhuǎn)/分的高速下，再次離心分離10分鐘，混合液分離為明顯的上、下兩相，再次收集上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液及下相金絲桃苷第二次萃余溶液；(5)金絲桃苷凍干粉的制備①水反萃取分離在第(4)-①和②步兩次收集的上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液中，按水與萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液的體積比為1∶1，加入水溶液反萃取劑并混合，先在轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分的低速下進(jìn)行攪拌反萃取15分鐘，后用離心機(jī)在6500轉(zhuǎn)/分的高速下，離心分離30分鐘，混合液明顯分為上、下兩相，分別收集上相反萃取后的反膠束萃取液及下相反萃取后的金絲桃苷溶液；②濃縮凍干對(duì)第(5)-①步收集的下相反萃取后的金絲桃苷溶液，先用蒸發(fā)器在-0.08MPa真空進(jìn)行濃縮，后用凍干機(jī)在-50℃低溫下，凍成金絲桃苷含量為83.6％、水份≤7.26％、灰分≤0.44％的金絲桃苷凍干粉；③反膠束萃取液再生對(duì)第(5)-①步收集的上相反萃取后的反膠束萃取液，按0.2mol/L碘化鉀溶液與反膠束萃取液的體積比為1∶100的比例加入0.2mol/L KI溶液混合，在轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，進(jìn)行攪拌處理30分鐘，然后在4000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心分離15分鐘，分別收集上、下層溶液，分別收集的上層反膠束萃取液及下層KI溶液，對(duì)KI溶液，補(bǔ)充適量的KI，使其濃度為0.2mol/L；(6)金絲桃素凍干粉的制備①吸附洗滌對(duì)第(2)-①步收集合并的乙醚洗滌液，用溫度為50℃的水蒸汽蒸餾回收乙醚后，然后用0.5％NaHCO3水溶液溶解金絲桃素浸膏，金絲桃素浸膏重量與0.5％NaHCO3水溶液體積的比例為1∶15，將制備出的含金絲桃素的NaHCO3水溶液與第(4)-②步收集的下相金絲桃苷第二次萃余溶液合并為金絲桃素溶液，然后在金絲桃素溶液中加入HPD100非極性吸附樹脂，在轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分速度下，進(jìn)行攪拌吸附，攪拌吸附的時(shí)間為1小時(shí)，非極性吸附樹脂重量與金絲桃素溶液的體積比例為1∶10，然后過濾除去濾液后，收集吸附有金絲桃素的吸附樹脂，再用pH值為8.50、濃度為90％的乙醇，在200轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢杷俣认逻M(jìn)行攪拌洗脫，攪拌洗脫時(shí)間為30分鐘，過濾，分別收集洗脫液濾液和吸附樹脂濾渣，對(duì)收集的吸附樹脂濾渣，再次用90％的乙醇進(jìn)行攪拌洗脫，吸附樹脂重量與乙醇體積的比例均為1∶10，再次過濾并分別收集濾液和濾渣；②濃縮凍干對(duì)第(6)-①步收集的金絲桃素純化溶液，先用蒸發(fā)器在-0.08Mpa的真空下，回收乙醇，濃縮成膏狀金絲桃素，然后用0.5％的NaHCO3水溶液對(duì)膏狀金絲桃素進(jìn)行溶解，溶解成為金絲桃素NaHCO3水溶液，膏狀金絲桃素重量與0.5％NaHCO3水溶液體積的比例為1∶20。對(duì)金絲桃素的NaHCO3水溶液，再進(jìn)行過濾除去雜質(zhì)，對(duì)其濾液用凍干機(jī)，在-50℃的低溫下凍成金絲桃素含量為22.82％的金絲桃素凍干粉；③吸附樹脂再生對(duì)第(6)-①步收集的洗脫金絲桃素的HPD100吸附樹脂，用pH值為5的水溶液攪拌洗滌，再進(jìn)行過濾分離。棄濾液，收集吸附樹脂濾渣，對(duì)收集的吸附樹脂再次用pH值為5的水溶液攪拌洗滌，再次過濾并收集吸附樹脂，吸附樹脂重量與pH值為5的水溶液體積的比例每次均為1∶10，每次攪拌洗滌的時(shí)間為30分鐘。
3.按照權(quán)利要求1.所述的貫葉連翹中金絲桃苷和金絲桃素的制備方法，其特征在于一種貫葉連翹中金絲桃苷和金絲桃素的制備方法，其具體的方法步驟如下(1)連翹浸膏的制備將貫葉連翹果實(shí)粉碎成連翹粉后，按連翹粉重量與95％的乙醇體積的比為1∶20的比例，在連翹粉中加95％的乙醇，在85℃溫度下，回流提取6小時(shí)，再進(jìn)行過濾，收集濾液，對(duì)濾渣，按濾渣重量與80％的乙醇體積的比為1∶10的比例，用80％的乙醇再進(jìn)行回流提取3小時(shí)后，再過濾并收集濾液，棄濾渣，然后，將兩次收集的濾液放置于蒸發(fā)器中，在-0.05MPa真空下濃縮成貫葉連翹浸膏并回收的乙醇，對(duì)回收蒸餾的乙醇用酒精度計(jì)測定其中乙醇濃度，再用無水乙醇調(diào)節(jié)成乙醇濃度為90％的溶液；(2)金絲桃苷濃縮液的制備①洗滌在第(1)步制備的連翹浸膏中，加入乙醚攪拌洗滌，再進(jìn)行離心分離，分別收集脫脂連翹浸膏和乙醚洗滌液，對(duì)脫脂連翹浸膏再次進(jìn)行乙醚攪拌洗滌及再分離，如此反復(fù)進(jìn)行4次，每次加入的乙醚洗滌液，按連翹浸膏的重量與乙醚的體積的比例為1∶5；②吸附對(duì)第(2)-①步制備的脫脂連翹浸膏，在帶攪拌器的液體回流裝置中，用沸騰蒸餾水重復(fù)進(jìn)行4次攪拌提取，每次提取時(shí)間為30分鐘，收集金絲桃苷提取液，然后，將每次收集的金絲桃苷提取液合并后，待其溫度降至50℃時(shí)，按吸附樹脂重量與金絲桃苷提取液體積比為1∶25的比例，在金絲桃苷提取液中，加入HZ-841吸附樹脂，攪拌吸附60分鐘，棄濾液；③洗脫對(duì)第(2)-②步制備出的吸附有金絲桃苷的HZ-841吸附樹脂，用6倍重量的蒸餾水進(jìn)行洗滌后，再按吸附有金絲桃苷的HZ-841吸附樹脂重量與80％乙醇的體積比為1∶15的比例，用80％的乙醇進(jìn)行攪拌洗脫，攪拌洗脫時(shí)間為45分鐘，再進(jìn)行過濾，并分別收集濾液和濾渣，對(duì)收集的洗脫金絲桃苷后的HZ-841吸附樹脂濾渣，再按吸附樹脂重量與80％乙醇的體積比為1∶15的比例，用80％的乙醇再次進(jìn)行攪拌洗脫，再次進(jìn)行過濾，再次分別收集濾液和濾渣，如此重復(fù)4次；④濃縮對(duì)第(2)-③步收集并合并的金絲桃苷溶液，在真空濃縮器中、在-0.05MPa下進(jìn)行真空濃縮，待濃縮成膏狀后，再用pH值為9.0的蒸餾水溶解，然后進(jìn)行過濾除去雜質(zhì)，制備出金絲桃苷濃度為2.80％的金絲桃苷濃縮液；⑤吸附樹脂再生將第(2)-③步收集的洗脫金絲桃苷后的HZ-841吸附樹脂，先用重量為15倍的、pH值為6的水溶液攪拌洗滌再生，攪拌洗滌時(shí)間為60分鐘，后進(jìn)行過濾，棄濾液，收集再生吸附樹脂濾渣；(3)萃取劑的制備按十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)陽離子表面活性劑重量∶正辛烷體積∶正庚烷體積∶蒸餾水體積為1∶27∶3∶0.6的比例，在CTAB陽離子表面活性劑中，先加入正辛烷和正庚烷，加熱攪拌，其加熱溫度為60℃，后加入蒸餾水，繼續(xù)攪拌至透明狀，就制備出CTAB濃度為0.1mol/L的CTAB反膠束萃取劑；(4)萃取分離①萃取分離在第(2)-④步制備的金絲桃苷濃縮液中，加入第(3)步制備的CTAB反膠束萃取劑，其金絲桃苷濃縮液∶CTAB反膠束萃取劑的體積比為1∶5，混合后，在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下攪拌萃取1.5小時(shí)，然后用離心機(jī)在8000轉(zhuǎn)/分的高轉(zhuǎn)速下，離心分離20分鐘，混合液分離為明顯的上、下兩相，分別收集上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液及下相金絲桃苷第一次萃余溶液；②再萃取分離在第(4)-①步收集的下相金絲桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制備的CTAB反膠束萃取劑，其金絲桃苷第一次萃余溶液體積∶CTAB反膠束萃取劑的體積比為1∶3，混合后，在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分的低轉(zhuǎn)速下，再次攪拌萃取1.5小時(shí)，然后再用離心機(jī)在8000轉(zhuǎn)/分的高速下，再次離心分離20分鐘，混合液分離為明顯的上、下兩相，再次收集上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液及下相金絲桃苷第二次萃余溶液；(5)金絲桃苷凍干粉的制備①水反萃取分離在第(4)-①和②步兩次收集的上相萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液中，按水與萃取有金絲桃苷的反膠束萃取液的體積比為1∶3，加入水溶液反萃取劑并混合，先在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分的低速下進(jìn)行攪拌反萃取30分鐘，后用離心機(jī)在8000轉(zhuǎn)/分的高速下，離心分離60分鐘，混合液明顯分為上、下兩相，分別收集上相反萃取后的反膠束萃取液及下相反萃取后的金絲桃苷溶液；②濃縮凍干對(duì)第(5)-①步收集的下相反萃取后的金絲桃苷溶液，先用蒸發(fā)器在-0.05MPa真空進(jìn)行濃縮，后用凍干機(jī)在-60℃低溫下，凍成金絲桃苷含量為87.3％、水份≤7.26％、灰分≤0.44％的金絲桃苷凍干粉；③反膠束萃取液再生對(duì)第(5)-①步收集的上相反萃取后的反膠束萃取液，按0.5mol/L碘化鉀溶液與反膠束萃取液的體積比為1∶150的比例加入0.5mol/L KI溶液混合，在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，進(jìn)行攪拌處理60分鐘，然后在6000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速下，離心分離30分鐘，分別收集上層反膠束萃取液及下層KI溶液，對(duì)KI溶液，補(bǔ)充適量的KI，使其濃度為0.5mol/L；(6)金絲桃素凍干粉的制備①吸附洗滌對(duì)第(2)-①步收集合并的乙醚洗滌液，用溫度為65℃的水蒸汽蒸餾回收乙醚后，然后用1％NaHCO3水溶液溶解金絲桃素浸膏，金絲桃素浸膏重量與1％NaHCO3水溶液體積的比例為1∶25，將制備出的含金絲桃素的NaHCO3水溶液與第(4)-②步收集的下相金絲桃苷第二次萃余溶液合并為金絲桃素溶液，然后在金絲桃素溶液中加入HPD200非極性吸附樹脂，在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分的速度下，進(jìn)行攪拌吸附，攪拌吸附的時(shí)間為2小時(shí)，非極性吸附樹脂重量與金絲桃素溶液的體積比例為1∶15，然后過濾除去濾液后，收集吸附有金絲桃素的吸附樹脂，再用pH值為9.50、濃度為95％的乙醇，在300轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢杷俣认逻M(jìn)行攪拌洗脫，攪拌洗脫時(shí)間為60分鐘，過濾，分別收集洗脫液濾液和吸附樹脂濾渣，對(duì)收集的吸附樹脂濾渣，再次用95％的乙醇進(jìn)行攪拌洗脫，吸附樹脂重量與乙醇體積的比例均為1∶15，再次過濾并分別收集濾液和濾渣，如此反復(fù)進(jìn)行4次；②濃縮凍干對(duì)第(6)-①步收集的金絲桃素純化溶液，先用蒸發(fā)器在-0.05Mpa的真空下，回收乙醇，濃縮成膏狀金絲桃素，然后用1％的NaHCO3水溶液對(duì)膏狀金絲桃素進(jìn)行溶解，溶解成為金絲桃素NaHCO3水溶液，膏狀金絲桃素重量與0.5～1％NaHCO3水溶液體積的比例為1∶30。對(duì)金絲桃素的NaHCO3水溶液，再進(jìn)行過濾除去雜質(zhì)，對(duì)其濾液用凍干機(jī)，在-60℃的低溫下凍成金絲桃素含量為26.35％的金絲桃素凍干粉；③吸附樹脂再生對(duì)第(6)-①步收集的洗脫金絲桃素的HPD200吸附樹脂，用pH值為6的水溶液攪拌洗滌，再進(jìn)行過濾分離，棄濾液，收集吸附樹脂濾渣，對(duì)收集的吸附樹脂再次用pH值為6的水溶液攪拌洗滌，再次過濾并收集吸附樹脂，如此反復(fù)進(jìn)行4次，吸附樹脂重量與pH值為6的水溶液體積的比例每次均為1∶20，每次攪拌洗滌的時(shí)間為60分鐘。
全文摘要
一種貫葉連翹金絲桃苷和金絲桃素的制備方法，涉及金絲桃苷和金絲桃素藥用活性成分的制備方法本發(fā)明綜合利用我國豐富的貫葉連翹果實(shí)，同時(shí)制備出總收得率和產(chǎn)品純度均高的金絲桃苷和金絲桃素兩種藥用活性成分，生產(chǎn)成本低；在生產(chǎn)過程中，實(shí)現(xiàn)了多種溶劑如乙醇乙醚的回收和再次反復(fù)使用；實(shí)現(xiàn)了反膠束萃取劑及吸附樹脂的再生和反復(fù)使用采用本發(fā)明方法制備出的植物生物活性物質(zhì)，可廣泛應(yīng)用于清熱解毒收斂止血利尿及抑郁治療等藥物中。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK1880328SQ200610054268
公開日2006年12月20日 申請日期2006年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月30日
發(fā)明者周小華, 李端華, 高晶 申請人:重慶大學(xué)